ছোট কিন্তু পরাক্রমশালী—এক্সোসোম, নিউরোডিজেনারেশনে নভেল ইন্টারসেলুলার মেসেঞ্জার পার্ট 1
Jun 05, 2024
সরল সারসংক্ষেপ:
Exosomes হল জৈবিক ন্যানো পার্টিকেল যা সম্প্রতি আন্তঃকোষীয় বার্তাবাহক হিসাবে স্বীকৃত। এগুলিতে লিপিড, প্রোটিন এবং আরএনএর একটি কার্গো রয়েছে। তারা তাদের বিষয়বস্তু আশেপাশের কোষে নয় বরং দূরবর্তী কোষেও স্থানান্তর করতে পারে।
Exosomes হল একটি নতুন আবিষ্কৃত আন্তঃকোষীয় যোগাযোগের সরঞ্জাম যা আশেপাশের কোষগুলিতে ছোট এবং সূক্ষ্ম ভেসিকেলগুলি ছেড়ে দিতে পারে, কিছু প্রোটিন, সংকেতকারী পদার্থ এবং অন্যান্য পদার্থগুলি আশেপাশের কোষগুলিতে সরবরাহ করতে পারে। এই পদার্থগুলি কোষগুলিকে তাদের অবস্থা পরিবর্তন করতে এবং এমনকি অন্যান্য কোষের বৃদ্ধি, বিকাশ, বিপাক এবং অন্যান্য দিকগুলিকেও প্রভাবিত করতে পারে। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, গবেষণায় দেখা গেছে যে এক্সোসোমগুলি মানুষের মস্তিষ্কের ক্রিয়াকলাপে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে, বিশেষ করে স্মৃতিশক্তি রক্ষণাবেক্ষণ এবং উন্নতিতে।
প্রথমত, এক্সোসোমগুলি নিউরনের মধ্যে সংকেত সংক্রমণকে উন্নীত করতে পারে। স্নায়ুতন্ত্রের স্বাভাবিক ক্রিয়াকলাপের জন্য নিউরনের মধ্যে তথ্য প্রেরণ একটি প্রয়োজনীয় শর্ত এবং এক্সোসোমগুলি বার্তাবাহকের ভূমিকা পালন করে, যা নিউরনের মধ্যে তথ্য প্রেরণকে মসৃণ করতে পারে, যার ফলে মস্তিষ্কের জ্ঞান এবং স্মৃতিশক্তি উন্নত হয়।
দ্বিতীয়ত, এক্সোসোমগুলি নিউরনের বিপাককেও নিয়ন্ত্রণ করতে পারে। নিউরনগুলি এক্সোসোম উত্পাদন এবং মুক্তির প্রক্রিয়াতে, প্রচুর পরিমাণে বিপাকীয় প্রক্রিয়া জড়িত থাকে, যা কোষের বিপাকের ভারসাম্য এবং নিয়ন্ত্রণকে প্রচার করে। এই প্রক্রিয়াগুলি শুধুমাত্র নিউরনের ক্ষমতা বাড়াতে পারে না কিন্তু বিপাকীয় বর্জ্য এবং ক্ষতিকারক অণুগুলি অপসারণ করতে এবং মস্তিষ্কের কোষগুলিকে সুস্থ রাখতে সাহায্য করে।
অবশেষে, এক্সোসোমগুলি নিউরনের ক্ষতি মেরামত করতেও সাহায্য করতে পারে। এক্সোসোম দ্বারা বাহিত অনেক প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিড কোষের বৃদ্ধি, মেরামত এবং পুনর্জন্মের জন্য উপকারী এবং নিউরনগুলির মেরামত এবং পুনর্জন্মকে উন্নীত করতে পারে, যার ফলে মস্তিষ্কের কোষগুলির বেঁচে থাকার ক্ষমতা উন্নত হয় এবং স্মৃতিকেন্দ্র এবং জ্ঞানীয় ক্ষমতাকে শক্তিশালী করে।
সংক্ষেপে, এক্সোসোম এবং স্মৃতির মধ্যে একটি ঘনিষ্ঠ সম্পর্ক রয়েছে। আমরা ডায়েট দিয়ে শুরু করে বাচ্চাদের স্মৃতিশক্তি পরিবর্তন করতে পারি। শিশুদের খাদ্যতালিকাগত গঠনকে সক্রিয়ভাবে নির্দেশনা দেওয়া এবং ফ্যাটি অ্যাসিড, প্রোটিন এবং ভিটামিনের মতো উপকারী উপাদান সমৃদ্ধ আরও খাবার খাওয়া এক্সোসোমগুলির উত্পাদন এবং মুক্তিকে উৎসাহিত করতে পারে, যার ফলে শিশুদের তাদের শেখার এবং স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে সহায়তা করে। শিশুদের কিছু মস্তিষ্ক প্রশিক্ষণ গেম এবং ব্যায়াম প্রদান করা যেতে পারে যাতে তারা তাদের চিন্তাভাবনাকে চ্যালেঞ্জ এবং অনুশীলন করতে পারে, এক্সোসোমের সম্ভাবনাকে উদ্দীপিত করতে পারে এবং আরও ভাল ভূমিকা পালন করতে পারে। এটা দেখা যায় যে আমাদের মেমরির উন্নতি করতে হবে, এবং Cistanche উল্লেখযোগ্যভাবে স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে পারে কারণ Cistanche হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধি উপাদান যার অনেকগুলি অনন্য প্রভাব রয়েছে, যার মধ্যে একটি হল স্মৃতিশক্তি উন্নত করা। Cistanche-এর কার্যকারিতা ট্যানিক অ্যাসিড, পলিস্যাকারাইডস, ফ্ল্যাভোনয়েড গ্লাইকোসাইড ইত্যাদি সহ বিভিন্ন সক্রিয় উপাদান থেকে আসে। এই উপাদানগুলি বিভিন্ন উপায়ে মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যের উন্নতি করতে পারে।
স্বল্পমেয়াদী মেমরি উন্নত করতে Know এ ক্লিক করুন
এই অনন্য ক্ষমতা তাদের প্রাপক কোষের শারীরবৃত্তিকে সংশোধন করার ক্ষমতা দেয়। মস্তিষ্কে, এক্সোসোমগুলি নিউরোডিজেনারেটিভ রোগে ভূমিকা পালন করে যেমন আলঝেইমার ডিজিজ পারকিনসন ডিজিজ এবং অ্যামিওট্রফিক ল্যাটারাল স্ক্লেরোসিস।
বিমূর্ত:
এন্ডোসোমাল উৎপত্তির এক্সোসোম হল এক শ্রেণীর বহির্মুখী ভেসিকল যা আন্তঃকোষীয় যোগাযোগে গুরুত্বপূর্ণ। এক্সোসোমগুলি আমাদের শরীরের সমস্ত কোষ দ্বারা নিঃসৃত হয় এবং লিপিড, প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিডের সমন্বয়ে তাদের কার্গোকোনগুলি তাদের পিতামাতার উত্সের প্রতিফলিত করে।
এক্সোসোমাল কার্গোতে দূরত্বে রিলিজিং সেল বা কোষের আশেপাশে প্রাপক কোষের শারীরবৃত্তিকে সংশোধন করার ক্ষমতা রয়েছে। এক্সোসোমের সম্ভাবনাকে কাজে লাগানো এক্সোসোম প্রস্তুতির বিশুদ্ধতার উপর নির্ভর করে।
তাই, বিচ্ছিন্নতার জন্য অনেকগুলি পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছে এবং আমরা বেশ কয়েকটি পদ্ধতির সংক্ষিপ্ত সারসংক্ষেপ প্রদান করি। রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা দ্বারা আরোপিত নির্জনতা সত্ত্বেও, সিএনএস-এর কোষগুলি এক্সোসোমাল অনুপ্রবেশকারী প্রভাব থেকে অনাক্রম্য নয়। উভয় নিউরন এবং গ্লিয়ারলিজ এক্সোসোম, প্রায়শই একটি কার্যকলাপ-নির্ভর পদ্ধতিতে।
মস্তিষ্কের বিভিন্ন কোষ দ্বারা প্রকাশিত এক্সোসোমগুলির একটি সংক্ষিপ্ত বিবরণ এবং CNS হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখতে তাদের ভূমিকা প্রদান করা হয়েছে। বিভিন্ন নিউরোডিজেনারেটিভ রোগের বৈশিষ্ট্য হল প্রোটিন সমষ্টির জমে থাকা। সাম্প্রতিক অধ্যয়নগুলি প্যাথলজির বিস্তারের কথা বলে ভুল ফোল্ড করা প্রোটিনের বিস্তারে এক্সোসোমের আন্তঃকোষীয় যোগাযোগকারীর ভূমিকাকে জড়িত করে।
এই পর্যালোচনাতে, আমরা আলঝাইমার রোগ, পারকিনসন রোগ এবং অ্যামিওট্রফিক ল্যাটারালস্ক্লেরোসিসের অগ্রগতিতে এক্সোসোমগুলির দ্বারা সম্ভাব্য অবদান নিয়ে আলোচনা করি।
নিউরোডিজেনারেশনের প্যাথোজেনেসিসে এক্সোসোমগুলির অবদান বোঝার ফলে মস্তিষ্কে ওষুধ সরবরাহের জন্য এক্সোসোমগুলিকে থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে নিয়োগের ক্ষেত্র উন্মুক্ত করে, যেহেতু এক্সোসোমগুলি রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করে।
মূলশব্দ: exosomes; নিউরন; গ্লিয়াল কোষ; কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র (CNS); নিউরোডিজেনারেটিভ রোগ;আলঝাইমার রোগ; পারকিনসন রোগ; অ্যামিওট্রফিক পাশ্বর্ীয় স্ক্লেরোসিস।
1. ভূমিকা এবং ঐতিহাসিক দৃষ্টিকোণ
আন্তঃকোষীয় যোগাযোগ ভ্রূণের বিকাশ, এপিথেলিয়ার পুনর্জন্ম/প্রতিস্থাপন, গেমটোজেনেসিস এবং হোমিওস্ট্যাসিসের রক্ষণাবেক্ষণের জন্য অত্যন্ত আগ্রহের বিষয়।
কোষ-কোষ যোগাযোগের বেশ কয়েকটি প্রক্রিয়া যেমন এন্ডোসাইটোসিস/এক্সোসাইটোসিস এবং এনগালফিংপ্রোট্রুডিং সাইটোপ্লাজমিক ব্লেবগুলি অতি-স্ট্রাকচারাল এবং বায়োকেমিক্যাল স্টাডিজ ব্যবহার করে চিহ্নিত করা হয়েছিল [1-3]। আরেকটি প্লেয়ার, এক্সট্রা সেলুলার ভেসিকেলস, সনাক্ত করা হয়েছিল কিন্তু আন্তঃকোষীয় যোগাযোগে তাদের ভূমিকা অবিলম্বে প্রশংসা করা হয়নি [4]।
কোষের সংস্কৃতির মাধ্যমে প্লাজমা মেমব্রেন-অ্যাসোসিয়েটেডেনজাইম, ইক্টো-এটিপেস, এবং ইক্টো-50-নিউক্লিওটিডেস প্রকাশের তদন্তের সময় বহির্কোষী ভেসিকেলগুলি নির্বিঘ্নে আবিষ্কৃত হয়েছিল। 1981 সালে, ট্রামস্যান্ড সহকর্মীরা একটি সিরাম-মুক্ত মাধ্যমে মাউস এবং মানুষের উত্সের স্বাভাবিক এবং নিওপ্লাস্টিক সেল লাইনগুলিকে সংস্কৃতি করেছিলেন কারণ সিরামে ATPase এবং50-নিউক্লিওটিডেসের অনুঘটক কার্যকলাপ রয়েছে বলে পরিচিত ছিল।
ভাসমান কোষ এবং ধ্বংসাবশেষ অপসারণের পরে, শর্তযুক্ত মাধ্যমটিকে 310,000× g একটি স্পিনকো টাই-70 রটারে 90 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং ছুরিগুলি ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের নীচে পরীক্ষা করা হয়েছিল। বহির্মুখী ঝিল্লি-খামযুক্ত ভেসিকেলগুলির দুটি জনসংখ্যা আবিষ্কৃত হয়েছে, একটির গড় ব্যাস 500 এবং 1000 এনএম এবং দ্বিতীয়টি, ~ 40 এনএম ব্যাস সহ ছোট জনসংখ্যা।
এই ভেসিকেলগুলি, লেখকদের দ্বারা প্রাথমিকভাবে "এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকল" হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে, এতে উভয়ই রয়েছে 50-50-নিউক্লিওটিডেস এবং ATPase এনজাইমেটিক কার্যকলাপ। এছাড়াও, এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকেলে আরএনএ এবং ফসফোলিপিড থাকে যা যথাক্রমে প্যারেন্ট সেল এবং প্যারেন্ট প্লাজমা মেমব্রেন থেকে আলাদা।
32P-প্রিলেবেলযুক্ত নিউরোব্লাস্টোমাসেলগুলির সাহায্যে C6 গ্লিওমা কোষ থেকে এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকলের ইনকিউবেশন ফ্রি রেডিওলাবেলযুক্ত ফসফরাস (32P) এর সহগামী মুক্তির সাথে নিউরোব্লাস্টোমা প্রোটিনের ডি-ফসফোরিলেশনকে উদ্দীপিত করে।
এই তথ্যগুলি প্রমাণ করেছে যে এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকলগুলি কেবল সেলুলার বর্জ্যের (এনজাইম) বাহক ছিল না তবে তাদের একটি শারীরবৃত্তীয় কাজ ছিল৷ ট্রাম এবং সহকর্মীরা "এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকল" [৫] বর্ণনা করার জন্য এক্সোসোম শব্দটি তৈরি করেছিলেন (এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকল ইতিহাসের জন্য [6] নিবন্ধটি দেখুন 1981 এর আগে)। কিছু বছর পরে, দুটি গবেষণা দল স্বাধীনভাবে রেটিকুলোসাইটসবাই ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপিতে ট্রান্সফারিন রিসেপ্টরের ভাগ্য অধ্যয়ন করে [7-9]।
পরিপক্ক রেটিকুলোসাইটের জন্য ট্রান্সফারিন প্রয়োজন হয় না তাই থেইলোস ট্রান্সফারিন রিসেপ্টর। উভয় গোষ্ঠীই পর্যবেক্ষণ করেছে যে সংস্কৃত রেটিকুলোসাইটগুলি ~50 এনএম ব্যাসের ছোট ভেসিকেলগুলি বহির্মুখী স্থানে ছেড়ে দেয়।
এই ছোট ভেসিকেলগুলিতে ডন-ডিগ্রেড ট্রান্সফারিন রিসেপ্টর থাকে। 1987 সালে, জনস্টন এবং সহকর্মীরা ট্রান্সফারিন রিসেপ্টর [10] ধারণকারী ছোট ভেসিকেল বর্ণনা করতে এক্সোসোম শব্দটি ব্যবহার করেছিলেন। এই প্রারম্ভিক বছরগুলি অনুসরণ করে, এক্সোসোমের সম্ভাব্যতা অভিনব আন্তঃকোষীয় বার্তাবাহক হিসাবে উপলব্ধি করা হয়েছিল যা লক্ষ্য কোষের শারীরবৃত্তিকে সংশোধন করতে পারে।
মজার বিষয় হল, এক্সোসোমগুলির উৎপত্তি কোষে এন্ডোসাইটোসিস (1883 সালে চিহ্নিত একটি প্রক্রিয়া; [3] দ্বারা পর্যালোচনা করা হয়েছে) দিয়ে শুরু করা হয় এবং অন্তঃকোষীয় স্থানের এক্সোসোম রিলিজ এক্সোসাইটোসিস প্রক্রিয়া ব্যবহার করে। তাদের প্রাথমিক আবিষ্কারের পর থেকে, আমরা এখন জানি যে এক্সোসোমগুলি বহির্কোষীয় ভেসিকলগুলির একটি উপপ্রকার। 40-160 nm ব্যাস আকারের পরিসীমা সহ এন্ডোসাইটিক উত্সের [11]।
ট্রেসার গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে ম্যাক্রোমোলিকিউলস ব্রিসটল-কোটেড (অর্থাৎ, ক্ল্যাথ্রিন-কোটেড) ইনভেজিনেশন বা কোষের পৃষ্ঠের গর্তে এন্ডোসাইটোসড হয়। এই আক্রমণগুলি অবশেষে প্লাজমা ঝিল্লি থেকে পৃথক হয় এবং সাইটোপ্লাজমে সনাক্ত করা হয়।
ব্রিসলস (অর্থাৎ, ক্ল্যাথ্রিন) হারানোর পরে, এন্ডোসাইটোসড প্রলিপ্ত ভেসিকেলগুলি মসৃণ হয়ে যায় এবং কোষের পৃষ্ঠে দ্রুত পুনর্ব্যবহার করার জন্য প্রাথমিক এন্ডোসোমের সাথে ফিউজ হয় (চিত্র 1 এ এন্ডোসোমগুলি পুনর্ব্যবহার করা হয়) [12] বা দেরী এন্ডোসোম গঠনের জন্য আন্ডারগোম্যাচুরেশন।
প্রারম্ভিক এবং দেরী এন্ডোসোমগুলি তাদের বিষয়বস্তুকে যথাযথভাবে নির্দেশ করার জন্য "সর্টিং হাব" হিসাবে কাজ করে: (i) ট্রান্স-গোলগি নেটওয়ার্কে (অর্থাৎ, এন্ডোসোম থেকে টিজিএন পুনরুদ্ধার) [13,14]; (ii) কোষের মধ্যে পুনঃব্যবহারের জন্য ম্যাক্রোমোলিকিউলেস্টো সাধারণ পণ্যগুলির অবক্ষয়ের জন্য লাইসোসোমগুলিতে [15,16]; এবং/অথবা (iii) মাল্টিভেসিকুলার বডিগুলির মাধ্যমে কোষের পৃষ্ঠে পুনর্ব্যবহারযোগ্য করার জন্য [17]।
প্রারম্ভিক এন্ডোসোম ইনলেটেড এন্ডোসোমগুলির পরিপক্কতার সময়, অভ্যন্তরীণ এন্ডোসোম ঝিল্লি আক্রমণের মধ্য দিয়ে যায়, যার ফলে ইন্ট্রালুমিনাল ভেসিকেলস (এখন এক্সোসোম হিসাবে মনোনীত) গঠন হয়। সাইটোসোলিক প্রোটিন, নিউক্লিক অ্যাসিড এবং লিপিডের মতো নির্দিষ্ট ম্যাক্রোমোলিকিউলেসগুলি বিকাশমান এক্সোসোমে বাছাই করা হয়।
এক্সোসোম দিয়ে প্যাক করা দেরী এন্ডোসোমগুলিকে মাল্টিভেসিকুলার বডি হিসাবে চিহ্নিত করা হয় যা প্লাজমা ঝিল্লির দিকে স্থানান্তরিত হয়। প্লাজমা মেমব্রেনের সাথে ফিউশনের পরে, মাল্টিভেসিকুলারবডিগুলি এক্সোসাইটোসিস প্রক্রিয়ার মাধ্যমে এক্সোসোমগুলিকে বহির্কোষী স্থানের মধ্যে ছেড়ে দেয় (চিত্র 1) [18,19]। প্রোটিনগুলির একটি বৃহৎ উপসেট যা ক্রমানুসারে নিয়োগ করা হয় তারা প্রাথমিক এন্ডোসোম থেকে এন্ডোসাইটোসিস, লেট এন্ডোসোম থেকে এন্ডোসোম পরিপক্কতা এবং তাদের পরবর্তী আন্তঃকোষীয় ভাগ্য ([17,18,20] দ্বারা পর্যালোচনা করা) প্রক্রিয়ায় একটি সিদ্ধান্তের ভূমিকা পালন করে।
এই প্রোটিনগুলির গুরুত্ব তাদের ক্ষতি এবং/অথবা মিউটেশন(গুলি) দ্বারা হাইলাইট করা হয় যা বিভিন্ন রোগের কারণ হয়। উদাহরণস্বরূপ, স্ট্রম্পেলিন এবং SWIP প্রোটিনগুলি ওয়াশ কমপ্লেক্সের একটি অংশ যা অ্যাক্টিন পলিমারাইজেশনের পাশাপাশি এন্ডোসোম ফিশন এবং বাছাইয়ে অংশগ্রহণ করে। স্ট্রম্পেলিন জিনের মিউটেশন বংশগত স্প্যাস্টিক প্যারাপ্লেজিয়া সৃষ্টি করে, যা মোটর নিউরনের অবক্ষয় দ্বারা চিহ্নিত করা হয় [২১]।
SWIP প্রোটিনে একটি একক বিন্দু মিউটেশন (Pro1019Arg) ওয়াশ কমপ্লেক্সকে অস্থিতিশীল করে। অস্থিতিশীল ওয়াশ কমপ্লেক্স এন্ডোলাইসোসোমাল পাচারকে বাধা দেয়, যার ফলে এন্ডোসোম জমাট বাঁধে। ত্রুটিপূর্ণ এন্ডোসোমাল ট্র্যাফিক জ্ঞান এবং মোটরনিউরন ফাংশনকে প্রভাবিত করে, ননসিন্ড্রোমিক মানসিক প্রতিবন্ধকতা [22,23] হিসাবে বর্ণিত লক্ষণগুলির সাথে।
সাইটোপ্লাজমে, এক্সোসোমগুলি পরিবহণের জন্য প্রয়োজনীয় এন্ডোসোমাল সর্টিং কমপ্লেক্স ব্যবহার করে এন্ডোসোম থেকে উদ্ভূত হয় (ESCRT), যা এক্সোসোম বায়োজেনেসিসের ESCRT-নির্ভর প্রক্রিয়া হিসাবেও পরিচিত ([18,20] দ্বারা পর্যালোচনা)।
দুটি গ্রুপ স্বাধীনভাবে এক্সোসোমের লিপিড-মধ্যস্থিত বায়োজেনেসিস রিপোর্ট করেছে, একটি ESCRT-স্বাধীন প্রক্রিয়া। এই গবেষণায় দুটি লিপিড সনাক্ত করা হয়েছিল বিআইএস (মনোঅ্যাসিলগ্লিসেরো) ফসফেট/লাইসোবিসফস ফ্যাটিডিক অ্যাসিড (বিএমপি/এলবিপিএ) এবং সিরামাইড [২৯,৩০]।
Rab31 হল সাইটোপ্লাজমে এক্সোসোম বায়োজেনেসিসের জন্য আরেকটি ESCRT-স্বাধীন প্রক্রিয়া। Rab31 এর সক্রিয়করণ intraluminal vesicles [31] গঠনকে উদ্দীপিত করে। আরেকটি প্রক্রিয়া আছে যা বর্তমানে আলোচিত এবং অধীন-অন্বেষণ করা হয়েছে।
এই প্রক্রিয়াটি 1950 থেকে 1970 এর দশকের শেষের দিকে করা আল্ট্রাস্ট্রাকচারাল পর্যবেক্ষণের উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে যা দেখায় যে কোষের নিউক্লিয়াস ছোট ভেসিকেল দিয়ে ভরা মাল্টিভেসিকুলারবডিগুলির উত্সের জন্য একটি সাইট হতে পারে। এই গবেষণায় বর্ণিত ছোট vesicles সম্ভবত exosomes ছিল কিন্তু exosome শব্দটি সেই সময়ে তৈরি করা হয়নি। কিলারস্কি এবং জেসিনস্কি নিউক্লিওলার্ক্যারিওপ্লাজম [৩২] এর অনুরূপ বিষয়বস্তু সহ পার্চ মাছ, পারকা ফ্লুভিয়েটিলিস এল (চিত্র 2a) [২৪] এর সাঁতারের কোষে পারমাণবিক ব্লিবিং বা পারমাণবিক এক্সট্রুশন নামে একটি প্রক্রিয়া পর্যবেক্ষণ করেছেন।
এই লেখকরা উল্লেখ করেছেন যে পারচ মাছের সাঁতারের মূত্রাশয় থেকে গ্যাস অপসারণের মাধ্যমে পারমাণবিক ব্লিবিংকে উদ্দীপিত করা যেতে পারে [24]। নিউক্লিক অ্যাসিড এবং/অরিবোনিউক্লিওপ্রোটিন সমৃদ্ধ এক্সোসোমের উৎপত্তিস্থল হিসেবে পারমাণবিক ব্লিবিং প্রক্রিয়ার যোগ্যতা আছে বলে মনে হয়।
নিউক্লিয়ার ব্লেবগুলি ছোট ভেসিকেল দিয়ে পূর্ণ ছিল যা নিউক্লিয়ার ব্লেবসের অভ্যন্তরীণ ঝিল্লির একক-ভাঁজ থেকে উদ্ভূত হয়েছিল (চিত্র 2b), একটি প্রক্রিয়া যা এন্ডোসোমে ইন্ট্রালুমিনাল ভেসিকেল গঠনের অনুরূপ। 'ছোট ভেসিকেল' দিয়ে ভরা নিউক্লিয়ার ব্লেবগুলি অবশেষে নিউক্লিয়াস থেকে আলাদা হয়ে সাইটোপ্লাজমের অংশ হয়ে যায় (চিত্র 2c)।
কিলারস্কি এবং জ্যাসিনস্কি তাদের পাণ্ডুলিপিতে পারমাণবিক ব্লেবকে মাল্টিভেসিকুলার বডি হিসেবে উল্লেখ করেছেন ভালো পরিভাষার অভাবের কারণে। অসাবধানতাবশত, এই লেখকরা সঠিক হতে পারে কারণ পরবর্তী গবেষণাগুলি কোষের নিউক্লিয়াসে মাল্টিভেসিকুলার দেহের উপস্থিতি রিপোর্ট করেছে [৩৩]। ছোট ভেসিকেল দিয়ে ভরা নিউক্লিয়ার ব্লেবগুলির একটি আকারবিদ্যা রয়েছে যা সাইটোপ্লাজমের এন্ডোসোম থেকে উদ্ভূত মাল্টিভেসিকুলার বডির মতো (চিত্র 1 এবং 2)।
ভাইরাল নিউক্লিওক্যাপসিডের সাথে পারমাণবিক মাল্টিভেসিকুলার দেহের মিলের কারণে, গবেষকরা তাদের মনোযোগ ভাইরোলজি এবং পারমাণবিক ব্লিবিংয়ের ঘটনা এবং এর সেলুলার ফাংশনকে অন্বেষণ করা হয়নি [৩৪]।
বায়োজেনেসিসের মোড নির্বিশেষে, এক্সোসোমগুলি অ্যালিপিড বাইলেয়ার দিয়ে গঠিত এবং এতে লিপিড, প্রোটিন এবং নিউক্লিক্যাসিড সমন্বিত ম্যাক্রোমোলিকুলার উপাদান থাকে।
কিছু ম্যাক্রোমলিকিউলগুলি সমস্ত কোষ থেকে উদ্ভূত এক্সোসোমগুলির জন্য সাধারণ এবং তাই এক্সোসোম মার্কার হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয় এবং অন্যান্য বহির্কোষীয় ভেসিকেল থেকে এক্সোসোমগুলিকে আলাদা করার জন্য একটি নিশ্চিতকরণ সরঞ্জাম হিসাবে ব্যবহৃত হয়। Exosomesoften-এ উপস্থিত অনন্য ম্যাক্রোমোলিকিউলগুলি তাদের পিতামাতার উত্স প্রতিফলিত করে এবং তাই সম্ভবত বায়োমার্কার(গুলি) হিসাবে মনোনীত হতে পারে।
সমস্ত কোষ এক্সোসোমগুলিকে বহির্কোষী স্থানে ছেড়ে দেয়। বহির্কোষী স্থান থেকে, এক্সোসোমগুলি বিভিন্ন জৈবিক তরলে প্রবেশ করে এবং স্থানীয়ভাবে এবং দূরত্বে কোষগুলিতে পৌঁছায়। ভিট্রোতে সংষ্কৃত কোষগুলি তাদের এক্সোসোমগুলিকে সংস্কৃতি মিডিয়াতে ছেড়ে দেয়। বহির্কোষী স্থানের মধ্যে ক্রমাগত এক্সোসোম প্রকাশ করা সংস্কৃতিকে মাঝারি এবং জৈবিক তরলকে এক্সোসোমগুলির বিচ্ছিন্নতার জন্য সমৃদ্ধ উত্স করে তোলে।
এক্সোসোমগুলিতে যথেষ্ট পরিমাণে কোডিং এবং নন-কোডিং RNA, ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড জিনোমিক ডিএনএ খণ্ড এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিএনএ থাকে। ট্রাম এবং সহকর্মীরাই প্রথম "এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকেল"-এ আরএনএর উপস্থিতি বর্ণনা করেন, যা এক্সোসোম এবং মাইক্রোভেসিকলের মিশ্রণ।
তারা নির্ধারণ করে যে "এক্সফোলিয়েটেড ভেসিকেল বা এক্সোসোম" 5% RNA [5] ধারণ করে। ভালাদি এবং সহকর্মীরা প্রথম পদ্ধতিগতভাবে আরএনএ প্যাকেজ করা ইনক্সোসোম বিশ্লেষণ করেছিলেন। এক্সোসোমাল আরএনএগুলির মধ্যে অনুবাদযোগ্য এমআরএনএ এবং মাইক্রোআরএনএ (এমআইআর) অন্তর্ভুক্ত ছিল [৩৫]।
মাইক্রোআরএনএগুলি নন-কোডিং আরএনএ (এনসিআরএনএ) এর একটি শ্রেণি। এগুলি দৈর্ঘ্যে ~22 নিউক্লিওটাইড এবং তাদের লক্ষ্য বার্তাবাহক RNAs [36]-এর 30-অঅনুবাদিত অঞ্চলগুলির সাথে আবদ্ধ হয়ে পোস্ট-ট্রান্সক্রিপশনাল স্তরে জিনের অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করে। মজার বিষয় হল, এক্সোসোমে সমৃদ্ধ কিছু এমআইআরএনএ প্যারেন্ট কোষে সনাক্ত করা যায় না যা এক্সোসোমের বায়োজেনেসিসের সময় একটি নির্বাচনী আরএনএ বাছাই/প্যাকেজিং সিস্টেমের পরামর্শ দেয় [35,37]।
কোষের বিপরীতে, এক্সোসোমে রাইবোসোমাল আরএনএ কম বা নেই কিন্তু টিআরএনএ টুকরো থাকে [৩৮]। আরএনএ-কে এক্সোসোমে বাছাই করা নির্ভর করে (1) আরএনএ-প্ররোচিত সাইলেন্সিং কমপ্লেক্স (আরআইএসসি)-সম্পর্কিত প্রোটিন, (2) আরএনএ সিকোয়েন্সমোটিফস এবং গাইড প্রোটিন, (3) এমআইআরএনএগুলির 30 প্রান্তে নিউক্লিওটাইড সংযোজন, (4) এমআইআরএনএর সেলুলার প্রাপ্যতা, এবং (5) সিরামাইড [39,40]।
আমরা বিশ্বাস করি যে পারমাণবিক ব্লিবিং হল আরেকটি সেলুলার প্রক্রিয়া যা আরএনএ, আরএনএ-প্রোটিন কমপ্লেক্স এবং জিনোমিক ডিএনএকে এক্সোসোমে ডিফারেনশিয়াল সাজানোর অনুমতি দেয়। এই দৃষ্টিভঙ্গির বেশ কয়েকটি কারণ রয়েছে: (1) 'ইন্ট্রালুমিনাল ভেসিকল'-এর বিষয়বস্তু নিউক্লিওলার ক্যারিওপ্লাজমের [৩২] অনুরূপ ছিল। নিউক্লিয়ার মাল্টিভেসিকুলার বডিতে (MVB II) 'vesicles' RNA, অ্যাসিডিক এবং মৌলিক প্রোটিন দ্বারা সমৃদ্ধ ছিল, এবং তাই লেখকরা বিবেচনা করেছেন ' intraluminal vesicles' tonucleolus ছাড়াও RNA সংশ্লেষণের সাইট হিসাবে [41]।
Proteins present in the vesicles may have been RNA-binding proteins and Dicer1 that were detected in exosomes [42] (unpublished data, Kumari Lab, Kansas State University, Manhattan, KS, USA). (2) Considering the nucleus as a site of exosome biogenesis can explain the presence of RNAs including precursor miRNAs (unpublished data, Kumari Lab) and double-stranded genomic DNA fragments ranging from 100 bp to >10 kbin exosomes [43-47]।
ঘটনাক্রমে, জিনোমিক ডিএনএ শুধুমাত্র ক্যান্সার সেল লাইন থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং স্বাভাবিক কোষে নয় [৪৭]। ক্রোমাটিন পুনর্বিন্যাস/ট্রান্সলোকেশনের কারণে ক্যান্সার কোষে অস্বাভাবিক ক্রোমাটিন থাকে এবং সম্ভবত প্লোইডি [৪৮] যা ক্যান্সার কোষের নিউক্লিয়াসে জিনোমিকডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন ঘটাতে পারে। এই ডিএনএ খণ্ডগুলিকে সহজেই নিউক্লিয়াসে বিকাশমান এমভিবি টাইপ II (এবং এক্সোসোম) তে অন্তর্ভুক্ত করা যেতে পারে। (3) কিলারস্কি এবং জ্যাসিনস্কি [24] দ্বারা বর্ণিত নিউক্লিয়ার ব্লেবগুলিতে 'ছোট ভেসিকল'বায়োজেনেসিস পদ্ধতিটি সাইটোপ্লাজমের দেরী এন্ডোসোমে ইন্ট্রালুমিনাল ভেসিকল গঠনের অনুরূপ।
আমরা দৃঢ়ভাবে বিশ্বাস করি যে এক্সোসোমে জিনোমিক ডিএনএর উপস্থিতি প্যাথলজিকাল এবং তাই এক্সোসোমে এর উপস্থিতি শরীরে অস্বাভাবিক (বা ক্যান্সার) কোষের বিকাশের জন্য একটি ডায়াগনস্টিক টুল হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। (4) কোষ দ্বারা নির্গত এক্সোসোমের সংখ্যার কার্যকলাপ-নির্ভর বৃদ্ধি [49] গ্যাস কোষের সাথে তুলনীয় যা পার্চ মাছের সাঁতারের মূত্রাশয় থেকে গ্যাস অপসারণের পরে পারমাণবিক ব্লিবিং বৃদ্ধি দেখায় [24]।
অতি সম্প্রতি, মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রোটিন এবং ডিএনএ কিছু ক্যান্সার রোগীর প্লাজমা এক্সোসোমে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং তাদের উপস্থিতি ক্যান্সারের আক্রমণাত্মকতার সাথে যুক্ত [50,51]।
মাইটোকন্ড্রিয়াল ব্রেকডাউন প্রায়ই অবক্ষয়কারী কোষগুলিতে পরিলক্ষিত হয় [52,53]। ক্ষয়প্রাপ্ত মাইটোকন্ড্রিয়া থেকে মুক্তি পাওয়া মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্রিস্টা মাল্টিভেসিকুলার বডি দ্বারা অভ্যন্তরীণ করা যেতে পারে এবং অবশেষে প্যাকেজ করা ইনক্সোসোম।
এই ধারণাটি মানুষের লিম্ফোব্লাস্টয়েড কোষের অতি-কাঠামোগত চিত্র এবং বেবুন প্রোস্টেটের অ্যাসিনীর লুমেন দ্বারা সমর্থিত যেটিতে মাইটোকন্ড্রিয়া [54] এর ক্রিস্টের ভাঙ্গন থেকে উদ্ভূত 'মাইক্রোভেসিকেলস' (বা এক্সোসোম) ছিল।
উপরোক্ত আলোচনা এবং সহায়ক পরীক্ষামূলক প্রমাণের উপর ভিত্তি করে, আমরা প্রস্তাব করি যে এক্সোসোমের ভিন্নধর্মী প্রকৃতির উৎপত্তি মাল্টিভেসিকুলার বডি এবং সংশ্লিষ্ট এক্সোসোম্যাট বিভিন্ন উপকোষীয় অবস্থানের বায়োজেনেসিস থেকে এবং আমাদের বর্তমান বিশ্বাস অনুযায়ী সম্পূর্ণ সাইটোপ্লাজমে নয়৷ আমাদের প্রস্তাবটি এক্সোসোমের ভিন্নতা ব্যাখ্যা করতে পারে৷ পাশাপাশি সিরাম [55] থেকে বিশুদ্ধ একটি এক্সোসোমের মধ্যে থাকা ছোট আরএনএ বা প্রোটিন অণুর সংখ্যার তাত্ত্বিক গণনা এবং পরীক্ষামূলক ডেটার মধ্যে একটি অমিল।
গড় এক্সোসোম আকার ব্যবহার করে তাত্ত্বিক গণনার উপর ভিত্তি করে, লি এবং সহকর্মীরা প্রতিটি এক্সোসোম প্রায় 70-25,000 ছোট আরএনএ বা প্রোটিন অণু মিটমাট করার জন্য ভবিষ্যদ্বাণী করেছিলেন।
যাইহোক, তাদের পরীক্ষামূলক তথ্য সিরাম থেকে বিশুদ্ধ হওয়া এক্সোসোম প্রতি একটি আরএনএ অণুর উপস্থিতি দেখিয়েছে [55]। আমাদের অনুমান নিউক্লিয়ার ব্লিবিং, নিউক্লিয়ার মাল্টিভেসিকুলার বডি, এবং আরএনএ/রাইবোনিউক্লিওপ্রোটিন-ধারণকারী এক্সোসোম ইননিউক্লিয়ার মাল্টিভেসিকুলার বডিগুলির বায়োজেনেসিসকে আরও অন্বেষণের প্রয়োজন। লিপিডগুলি এক্সোসোম মেমব্রেনের একটি গুরুত্বপূর্ণ অংশ এবং দুটি এক্সোসোম মেমব্রেন মেমব্রেন মেমব্রেনের মধ্যে অপ্রতিসমভাবে বিতরণ করা হয়। লিপিড কম্পোজিশন প্যারেন্ট সেল মেমব্রেন এবং এক্সোসোম মেমব্রেনের মধ্যে আলাদা।
সাধারণভাবে, এক্সোসোমেমব্রেনে সমৃদ্ধ লিপিডগুলি হল স্ফিংগোমাইলিন, সিরামাইড, কোলেস্টেরল এবং কোলেস্টেরল-সমৃদ্ধ লিপিড রাফ্ট মাইক্রোডোমেন, গ্যাংলিওসাইড GM3, ডিস্যাচুরেটেড লিপিডস, এবং ফসফ্যাটিডিলসারিন [56-58]। এক্সোসোমাল প্রোটিনগুলির মধ্যে বিশেষ বৈশিষ্ট্যযুক্ত বিশেষ প্রোটিনগুলি হল বিশেষ বিশেষ উপাদান হিসাবে। একটি নির্দিষ্ট প্যারেন্ট সেলের কাছে।
সমস্ত এক্সোসোমের প্রোটিন সামগ্রী সাধারণত টার্গেটিং এবং ফিউশন প্রোটিনের জন্য সমৃদ্ধ হয় যেমন টেট্রাস্পানিনস, ইন্টিগ্রিনস, চ্যাপেরোনপ্রোটিন, যেমন, হিট শক প্রোটিন (Hsp60, Hsp70, এবং Hsp90), ছোট HSP মেমব্রেনেট্রাফিকিং প্রোটিন, র্যাব প্রোটিন, ARF GTPins, অ্যান, এবং ALIX এবং TSG101 [59] এর মতো মাল্টিভেসিকুলার বডি গঠনের সাথে জড়িত প্রোটিন।
আরও সাম্প্রতিক গবেষণাগুলি আরএনএ-বাইন্ডিং প্রোটিনের উপস্থিতির পরামর্শ দেয় যা এক্সোসোমে আরএনএ-প্রোটিন কমপ্লেক্স গঠন করে [৩৮]। বেশ কিছু সেলুলার প্রসেস যা এক্সোসোমেয়ারে প্রোটিন আপলোড করা নিশ্চিত করে (1) ইএসসিআরটি প্রক্রিয়া প্রোটিনের জন্য কিছু পোস্ট-ট্রান্সলেশনাল পরিবর্তন যেমন ইউবিকিউটিনেশন, ওয়ান্ট-স্টিমুলেটেড আরজিনাইন মেথিলেশন, অক্সিডেশন, ফসফোরিলেশন, গ্লাইকোসিলেশন এবং সিট্রুলিনেশন; (2) চ্যাপেরোন-মিডিয়াটেড অটোফ্যাজি (CMA) যা হিট শক কগনেট 71 kDa প্রোটিন (HSC70) এবং KFERQmotif সহ প্রোটিনের মধ্যে মিথস্ক্রিয়ার উপর নির্ভর করে।
একটি KFERQ মোটিফ সহ HSC70 কে প্রোটিনের সাথে আবদ্ধ করার পরে, প্রোটিনগুলি বহুমুখী দেহের দিকে লক্ষ্য করা হয়। চ্যাপেরোন-মধ্যস্থ অটোফ্যাজি সাধারণত লাইসোসোমে প্রোটিনের অবক্ষয়ের জন্য কাজ করে। আরও সাম্প্রতিক তথ্য থেকে জানা যায় যে সিএমএ কিছু নিউরোডিজেনারেটিভ রোগে [60-63] প্রোটিন সমষ্টির এক্সোসোম রিলিজ এবং এক্সোসোম-মধ্যস্থিত প্রচারে ভূমিকা পালন করে।
1990 এর দশক থেকে এক্সোসোম গবেষণায় একটি তাত্পর্যপূর্ণ বৃদ্ধি হয়েছে এবং এক্সোসোমাল কার্গোর উপর অনেক ডেটা তৈরি করা হয়েছে। বৃহৎ ডেটা সেটগুলি পরিচালনা করা খুব কঠিন হওয়ার আগে এক্সোসোমাল কার্গোর সংযোজন প্রদানের জন্য ডেটাবেস তৈরি করা হয়েছে।
এক্সোসোমগুলিতে প্রকাশিত ডেটার পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা আরেকটি কারণ কারণ বেশিরভাগ ল্যাব এক্সোসোমগুলিকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য বিভিন্ন পদ্ধতির বিভিন্নতা ব্যবহার করে। উদাহরণস্বরূপ, ভেসিক্লেপিডিয়া হল আণবিক কার্গো (লিপিড, আরএনএ এবং প্রোটিন) এর একটি ম্যানুয়ালি কিউরেটেড সংকলন যা বহির্কোষী ভেসিকেলের বিভিন্ন শ্রেণীর মধ্যে চিহ্নিত করা হয়েছে [64]। Vesiclepedia গবেষকদের জন্য একটি মূল্যবান সম্পদ প্রদান করে।
ডাটাবেস Vesiclepedia সর্বজনীনভাবে উপলব্ধ এবং ব্যবহারকারীদের প্রবেশ করা অনুসন্ধানের মানদণ্ডের উপর ভিত্তি করে ব্যবহারকারীদের অনুসন্ধান এবং এক্সোসোম কার্গো ডেটা ডাউনলোড করার অনুমতি দেয়। EV pedia, Exocarta, ExoRbase এবং EV miRNA হল অতিরিক্ত ডাটাবেস যা এক্সোসোমালপ্রোটিন এবং RNA [64] ক্যাটালগ করে।
ডাটাবেস সম্প্রদায় টীকা দ্বারা চালিত হয়. এই ডাটাবেসে সংগৃহীত তথ্যগুলো বিভিন্ন ধরনের বিভাজন কৌশল ব্যবহার করে এক্সোসোমকে বিচ্ছিন্ন করে প্রাপ্ত করা হয় যা ডাটাবেসে অন্তর্ভুক্ত নয়।
এক্সোসোমাল কার্গো বিষয়বস্তু এইভাবে ব্যবহৃত বিচ্ছিন্নকরণ পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে ভিন্ন হতে পারে, রিপোর্ট করা ফলাফলে কিছুটা অস্পষ্টতার জন্ম দেয়। পরীক্ষামূলক প্রজননযোগ্যতা এবং স্বচ্ছতা উন্নত করতে, একটি ওপেন-সোর্স নলেজবেস EV-TRACK টুলসেট তৈরি করা হয়েছিল। ইভি-ট্র্যাক এক্সোসোম প্রস্তুতি এবং এক্সোসোম চরিত্রায়নের ডেটা অন্তর্ভুক্ত করে [65]।
EV-TRACKis EV-METRIC-এর একটি মূল বৈশিষ্ট্য যা নয়টি [66] তালিকার শতাংশ পূরণকৃত উপাদান হিসাবে পরীক্ষামূলক পরামিতিগুলির প্রতিবেদন উপস্থাপন করে। এই উপাদানগুলি EVTRACK কনসোর্টিয়াম দ্বারা সিদ্ধান্ত নেওয়া হয়েছিল এবং দ্ব্যর্থহীন ডেটা ব্যাখ্যা এবং পরীক্ষামূলক ডেটার পুনরুত্পাদনের জন্য প্রয়োজনীয় বলে মনে করা হয়েছিল। এইভাবে, EV-METRIC ডিজাইন করা হয়েছে গবেষক এবং পর্যালোচকদের ডেটার একটি ব্যাপক ওভারভিউ প্রদানে সহায়তা করার জন্য।
2. এক্সোসোম আইসোলেশনের জন্য বর্তমান পদ্ধতি
এক্সোসোমগুলি বায়োমার্কার আবিষ্কারের জন্য এবং পুনর্জন্মের ওষুধ সহ অভিনব থেরাপিউটিক কৌশলগুলির জন্য একটি সমৃদ্ধ সংস্থান উপস্থাপন করে। এই লক্ষ্যগুলির সাফল্যের সর্বাপেক্ষা হল একটি পুনরুত্পাদনযোগ্য পদ্ধতির মাধ্যমে বিশুদ্ধ এক্সোসোমগুলির বিচ্ছিন্নতা।
সম্ভাব্য থেরাপিউটিক অ্যাপ্লিকেশানগুলির জন্য কার্যকরীভাবে সক্ষমতাযুক্ত এক্সোসোমগুলির বিচ্ছিন্নতা বিশেষভাবে গুরুত্বপূর্ণ। এক্সোসোমগুলি বিভিন্ন জৈবিক তরল যেমন রক্ত, রক্তরস, সেরিব্রোস্পাইনাল তরল, লালা, প্রস্রাব এবং দুধ থেকে বিশুদ্ধ করা হয়েছে। প্রতিটি জৈবিক তরলের বিভিন্ন শারীরিক এবং রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য রয়েছে যা এক্সোসোম বিচ্ছিন্নতার আগে বিবেচনা করা দরকার।
কিছু ক্ষেত্রে, এক্সোসোম আইসোলেশনের জন্য নির্দিষ্ট সতর্কতা প্রয়োজন হতে পারে। বিশুদ্ধ এক্সোসোমের শেষ প্রয়োগ হল আরেকটি নির্ধারক যা এক্সোসোম বিচ্ছিন্নতার পদ্ধতিকে প্রভাবিত করে।
আজ অবধি, বেশ কয়েকটি এক্সোসোম আইসোলেশন পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছে এবং এর মধ্যে কয়েকটি এক্সোসোম বৈশিষ্ট্যের উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে যেমন তাদের আকার, ঘনত্ব, পৃষ্ঠের চার্জ এবং এক্সোসোম পৃষ্ঠের সাথে যুক্ত প্রোটিন (চিত্র 3) [67]।
বর্তমানে নিযুক্ত কিছু এক্সোসোম আইসোলেশন পদ্ধতি সারণি 1 এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে। তাদের বেশিরভাগই একক পদ্ধতি নয় এবং নমুনা-পরবর্তী প্রক্রিয়াকরণের পূর্ববর্তী পদক্ষেপের প্রয়োজন। উল্লেখযোগ্য পদ্ধতিগুলো নিচে সংক্ষেপে আলোচনা করা হলো।
চিত্র 3. এক্সোসোম আইসোলেশন এবং তাদের ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনের জন্য সাধারণভাবে নিযুক্ত পদ্ধতি। এক্সোসোম বিচ্ছিন্নতার জন্য আজ অবধি বিকশিত বেশ কয়েকটি পদ্ধতি তাদের প্রফুল্ল ঘনত্বের উপর ভিত্তি করে, স্কিম 1, 13 এবং 1.19 g/mL, আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউগেশন পদ্ধতি (UC) আরও পরিমার্জিত করা হয়েছিল। আইসোপিকনিক আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউগেশন ওভারসুক্রোজ বা আয়োডিক্সানল ডেনসিটি গ্রেডিয়েন্ট (ডিজি) দ্বারা তাদের প্রফুল্ল ঘনত্বের উপর ভিত্তি করে এক্সোসোমের বিশুদ্ধ প্রস্তুতিগুলিকে আলাদা করুন।
প্রোটিনুরিয়াতে উচ্চ প্রোটিন সামগ্রী অপসারণ করতে, আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউগেশন পদ্ধতিটি আকার-বর্জন ক্রোমাটোগ্রাফি (এসইসি) এর সাথে একত্রিত হয়েছিল। আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউগেশন পদ্ধতির সাথে যুক্ত সময়ের সীমাবদ্ধতা পরিস্রাবণ পদ্ধতির (ইউএফ) বিকাশের দিকে পরিচালিত করে।
ন্যানো- বা মাইক্রো-মেমব্রেন কনসেনট্রেটরের মাধ্যমে পাতলা নমুনা যেমন সংস্কৃতির মাধ্যম এবং প্রস্রাবের মাধ্যমে বহির্মুখী শোধনের অনুমতি দেওয়া হয়। ঝিল্লি আটকানো এবং দুর্বল এক্সোসোমাল প্রোটিন পুনরুদ্ধার এই পদ্ধতিটিকে ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশন যেমন RNA বিচ্ছিন্নতা এবং উচ্চ-থ্রুপুট অ্যাপ্লিকেশনগুলির জন্য অপ্রিয় করে তুলেছে।
সেন্ট্রিফিউগেশনের সংমিশ্রণে খুব পাতলা জৈবিক ফ্লুইডিসিস হাইড্রোস্ট্যাটিক ফিল্টারেশন ডায়ালাইসিস (HFD *) থেকে এক্সোসোমগুলিকে আলাদা করার জন্য আরেকটি পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছে। HFD পদ্ধতিতে, হাইড্রোস্ট্যাটিক চাপের অধীনে 1000 kDa আণবিক ওজনের কাটঅফ সহ একটি ডায়ালাইসিস মেমব্রেনের মাধ্যমে নমুনাটি ডায়ালাইজ করা হয়, যার ফলে নমুনা থেকে অবাঞ্ছিত ম্যাক্রোমলিকুলগুলি সরানো যায় এবং সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে এক্সোসোমগুলি উদ্ধার করা হয়।
দ্রবণীয়তা বা বিচ্ছুরণযোগ্যতা এবং একত্রিতকরণের উপর ভিত্তি করে এক্সোসোম বৃষ্টিপাত পদ্ধতিটি একই সাথে বেশ কয়েকটি নমুনা প্রক্রিয়া করার জন্য তৈরি করা হয়েছিল। এক্সোসোম পরিশোধনের জন্য বাণিজ্যিক কিটগুলি এই কৌশলটির উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে।
এই পদ্ধতিতে, প্রস্রাব ওরাসাইটগুলিকে পলিথিন গ্লাইকল (PEG) 6000 এর সাথে বা প্রোটামিন (প্লাস PEG35,000) এর সাথে মিশ্রিত করা হয় এবং বরফের উপর রাতারাতি বা 1 ঘন্টা সেবন করা হয়।
T ফলে টার্বিড মিশ্রণটি সেন্ট্রিফিউজ করা হয় এক্সোসোমগুলি পুনরুদ্ধার করতে যা ডাউনস্ট্রিম আরএনএ এবং প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়। এক্সোসোম বৃষ্টিপাতের জন্য ব্যবহৃত অন্যান্য রিএজেন্টগুলি হল (1) 0.1M সোডিয়াম অ্যাসিটেট pH 4.75 (সল্টিং আউট পদ্ধতি) (NaAc), (2) একটি4-কোল্ড অ্যাসিটোনের ভাঁজ পরিমাণ (−20 ◦C) ( প্রোটিন জৈব দ্রাবক বৃষ্টিপাত এবং সংক্ষেপে PROSPR নামে পরিচিত, (3) এবং PEG এবং ডেক্সট্রান দ্রবণের মিশ্রণ (1.5% পর্যন্ত) (একটি দ্বি-পর্যায়ের পদ্ধতি যা এক্সোসোম থেকে প্রোটিনকে আলাদা করার অনুমতি দেয়)।
এক্সোসোমাল সারফেস প্রোটিন সনাক্তকরণের ফলে টিম4, অ্যানেক্সিন, ইপিক্যাম, সাধারণ এক্সোসোম সারফেস প্রোটিন, সিডি 63 এবং হিট শক প্রোটিন (অ্যাফিনিটি মিথস্ক্রিয়া) এর মতো এক্সোসোম সারফেস প্রোটিনের অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ইমিউনোঅফিনিটি ক্যাপচার-ভিত্তিক পদ্ধতির বিকাশ ঘটায়। লেকটিন (যা এক্সোসোম পৃষ্ঠের গ্লাইকোপ্রোটিনের সাথে আবদ্ধ হয়) এবং হেপারিন (যা এক্সোসোম পৃষ্ঠের হেপারান সালফেট প্রোটিওগ্লাইকানকে আবদ্ধ করে) এর জন্য এক্সোসোম আইসোলেশন পদ্ধতির বিকাশে শোষিত হয়েছিল।
বেশ কয়েকটি প্ল্যাটফর্ম যেমন চৌম্বক পুঁতি, অত্যন্ত ছিদ্রযুক্ত একশিলা সিলিকা মাইক্রো-টিপস, প্লাস্টিকের প্লেটের পৃষ্ঠ, সেলুলোজ ফিল্টার, মেমব্রেন অ্যাফিনিটি ফিল্টার, একটি অ্যাগ্রোসোরবেন্ট এবং মাইক্রোফ্লুইডিক ডিভাইসগুলি অ্যাফিনিটি-ভিত্তিক এক্সোসোম পরিশোধন পদ্ধতির জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং তারা তাদের বিভিন্ন ক্ষেত্রে ব্যবহার করেছে। ডায়াগনস্টিক, প্রগনোস্টিক, ড্রাগ ডেলিভারি সিস্টেম হিসাবে, এবং ফরেক্সোসোমাল কার্গো সনাক্তকরণ এবং বিশ্লেষণ।
Konoshenko MY, Lekchnov EA,Vlassov AV, Laktionov PP-এর অনুমতি নিয়ে অভিযোজিত। এক্সট্রা সেলুলার ভেসিকলের বিচ্ছিন্নতা: সাধারণ পদ্ধতি এবং সর্বশেষ প্রবণতা। বায়োমেড রেস ইন্টি। 2018 জানুয়ারী 30; 2018:8545347। doi:10.1155/2018/8545347। PMID: 29662902; PMCID:PMC5831698; কপিরাইট © 2022 মারিয়া ইউ। কোনশেঙ্কো এট আল।
এটি ক্রিয়েটিভ কমন্স অ্যাট্রিবিউশন লাইসেন্সের অধীনে বিতরণ করা একটি ওপেন-অ্যাক্সেস নিবন্ধ, যা যেকোনো মাধ্যমের অবাধ ব্যবহার, বিতরণ, এবং পুনরুৎপাদনের অনুমতি দেয়, যদি মূল কাজটি সঠিকভাবে উল্লেখ করা হয় [67]।
For more information:1950477648nn@gmail.com
