শারীরবৃত্তীয় হ্রাসের কারণে ত্বকের বার্ধক্য একটি জটিল জৈবিক ঘটনা

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

বিমূর্ত:এই গবেষণার লক্ষ্য ছিল ত্বকের বার্ধক্য-সম্পর্কিত এনজাইমগুলিতে ওয়াশিংটোনিয়া ফিলিফেরা থেকে ফলের নির্যাসের প্রতিরোধমূলক প্রভাব পরীক্ষা করা। সজ্জার নির্যাসগুলি উল্লেখযোগ্য এনজাইম বাধা দেয়নি যখন W.filifera থেকে বীজের নির্যাসগুলি অ্যান্টি-ইলাস্টেস, অ্যান্টি-কোলাজেনেস এবং অ্যান্টি-টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ প্রদর্শন করে। টাইরোসিনেজকে হালকাভাবে বাধা দেওয়া হয়েছিল যখন ইলাস্টেস এবং কোলাজেনেস প্রতিরোধের ক্ষেত্রে একটি শক্তিশালী প্রভাব পরিলক্ষিত হয়েছিল। অ্যালকোহলিক নির্যাস জলীয় নির্যাসের চেয়ে ভাল ফলাফল প্রদান করে। তাদের মধ্যে, মিথানল নির্যাস দেখিয়েছে যে বিশিষ্ট এনজাইম ইনহিবিটরি ক্রিয়াকলাপগুলি ইলাস্টেস এবং কোলাজেনেসের জন্য IC5o মান তুলনীয় এবং রেফারেন্স যৌগের চেয়েও ভাল। লাইনওয়েভার-বার্ক প্লট বিশ্লেষণ দ্বারা সর্বাধিক সক্রিয় নির্যাসগুলির বাধা মোডটি তদন্ত করা হয়েছিল। মনসুর সমীকরণ দ্বারা W.filifera থেকে বীজের নির্যাসগুলি তাদের ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের জন্যও তদন্ত করা হয়েছিল এবং W.filifera নির্যাসের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ অক্সিডেটিভ-স্ট্রেসড কোষগুলিতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। নির্যাসের নিরাপত্তা মূল্যায়ন করার জন্য, মানুষের কেরাটিনোসাইট কোষের কোষের কার্যক্ষমতার উপর প্রভাব বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।হারানো সাম্রাজ্য cistancheমিথানল নির্যাস সেরা ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব উপস্থাপন করে এবং কোনও সাইটোটক্সিক প্রভাব ছাড়াই একটি সেলুলার সিস্টেমে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ প্রয়োগ করে। সামগ্রিক ফলাফলগুলি দেখায় যে W.filifera নির্যাসগুলি বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলির প্রতিশ্রুতিশীল উত্স যা প্রসাধনী এবং ফার্মাসিউটিক্যাল প্রস্তুতিতে ব্যবহার করা যেতে পারে।

কীওয়ার্ড:এনজাইম বাধা; কোলাজেনেস; elastase; টাইরোসিনেজ; উদ্ভিদ নির্যাস; বীজ; চামড়া পক্বতা; ওয়াশিংটোনিয়া ফিলিফেরা

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

1। পরিচিতি

ত্বকের বার্ধক্য একটি জটিল জৈবিক ঘটনা যা ত্বকের কার্যকারিতার শারীরবৃত্তীয় হ্রাস এবং বিভিন্ন বহিরাগত পরিবেশগত কারণ, যেমন UV বিকিরণ, রাসায়নিক পদার্থ এবং প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS)। ত্বক হল শরীরের বৃহত্তম এবং সবচেয়ে উন্মুক্ত অংশ এবং সৌর UV বিকিরণের সংস্পর্শে সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য বাহ্যিক চাপ-প্ররোচিত কারণগুলির মধ্যে একটি প্রতিনিধিত্ব করে: অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সাথে যুক্ত ফটো-প্ররোচিত ত্বকের বার্ধক্য। UV বিকিরণ দ্বারা প্ররোচিত ROS জটিল আণবিক পথের সূচনা করতে পারে, যার মধ্যে রয়েছে এনজাইম সক্রিয়করণ যা ত্বকের অখণ্ডতা পরিবর্তন করে এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) প্রোটিনকে হ্রাস করে। ত্বকের বার্ধক্যের প্রধান বৈশিষ্ট্যগুলির মধ্যে একটি হল প্রকৃতপক্ষে ECM এর গঠনের লস, যা কোলাজেন এবং ইলাস্টিন সহ অসংখ্য প্রোটিন সমন্বিত করে, যার সবকটিই ত্বকের স্থিতিস্থাপকতা ধরে রাখতে প্রধান ভূমিকা পালন করে [২]। ECM এর অবক্ষয় মূলত প্রোটিওলাইটিক এনজাইমের বর্ধিত কার্যকলাপের কারণে হয়, যেমন কোলাজেনেস এবং ইলাস্টেস। প্রাকৃতিক উদ্ভিদ যৌগগুলির দ্বারা এই এনজাইমেটিক ক্রিয়াকলাপগুলিকে বাধা দেওয়া ত্বকের বার্ধক্য রোধ করার জন্য একটি প্রতিশ্রুতিবদ্ধ পদ্ধতি হতে পারে [3]। কোলাজেনেস (EC 3.4.24.3) ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসের পরিবারের অন্তর্গত এবং এটি শারীরবৃত্তীয় অবস্থার অধীনে কোলাজেনের ট্রিপল-হেলিকাল অঞ্চলকে অবনমিত করতে পারে।মাইক্রোনাইজড বিশুদ্ধ ফ্ল্যাভোনয়েড ভগ্নাংশ 1000 মিলিগ্রাম ব্যবহার করেকোলাজেন হল ECM এর তন্তুময় উপাদান এবং মানুষের ত্বকের প্রধান কাঠামোগত প্রোটিন, যা হাড়, টেন্ডন, লিগামেন্ট এবং রক্তনালীগুলির জন্য কাঠামোগত সহায়তা প্রদান করে। ইলাস্টেস (EC3.4.21.36) হল একটি প্রোটিওলাইটিক এনজাইম যা ইলাস্টিনের শারীরবৃত্তীয় অবক্ষয়ের সাথে জড়িত, ত্বকের স্থিতিস্থাপকতার জন্য দায়ী ECM প্রোটিন। ইলাস্টেস কার্যকলাপের বৃদ্ধি বিভিন্ন রোগে পাওয়া গেছে, উদাহরণস্বরূপ, সোরিয়াসিস, ডার্মাটাইটিস, প্রদাহজনক প্রক্রিয়া এবং ত্বকের অকাল বার্ধক্য, যা বলিরেখা তৈরির সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত [৪]।

Cistanche বিরোধী বার্ধক্য করতে পারেন

অধিকন্তু, বয়স্কদের মধ্যে কুঁচকে যাওয়ার সাথে যুক্ত প্রধান পরিবর্তনগুলির মধ্যে একটি হল হাইপারপিগমেন্টেড দাগের উপস্থিতি, যা সেনাইল লেন্টিগো বা বয়সের দাগ নামেও পরিচিত। টাইরোসিনেজ নামক আরেকটি বার্ধক্য-সম্পর্কিত এনজাইমের ক্রিয়াকলাপের কারণে এগুলি সরাসরি অসম পিগমেন্টেশনের সাথে যুক্ত। টাইরোসিনেজ (EC 1.14.18.1) হল মেলানিনের বিপাকের হার-সীমিত এনজাইম। এটি এল-টাইরোসিনের হাইড্রোক্সিলেশনকে 3,4-ডাইহাইড্রোক্সিফেনিল্যালানিন (L-DOPA) অনুঘটক করে, তারপরে L-DOPA থেকে ডোপাকুইননে জারণ হয়। ডোপাকুইনোন ডেরিভেটিভের অক্সিডেটিভ পলিমারাইজেশন মেলানিনের জন্ম দেয় [5]। মেলানিন রঙ্গকগুলির সংশ্লেষণ একটি শারীরবৃত্তীয় প্রক্রিয়া যা অতিবেগুনী সূর্যালোক শোষণ করে UV-প্ররোচিত ত্বকের ক্ষতি প্রতিরোধে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। এর সুবিধা থাকা সত্ত্বেও, মেলানিনের অতিরিক্ত উৎপাদন বা অস্বাভাবিক জমে ত্বকের সমস্যা যেমন সাধারণ বয়সের দাগ সৃষ্টি করে। যেহেতু ত্বক শরীরের সবচেয়ে দৃশ্যমান অঙ্গ, সেহেতু অকালে বলিরেখা এবং হাইপারপিগমেন্টেশন কিছু লোকের জন্য মানসিক কষ্টের কারণ হতে পারে।

এইভাবে, উপরে বর্ণিত সমস্ত এনজাইমের ইনহিবিটররা ত্বকের বার্ধক্য রোধ করতে প্রসাধনী এবং ওষুধের ক্রমবর্ধমান গুরুত্বপূর্ণ উপাদানগুলি উপস্থাপন করতে পারে [6]। প্রাকৃতিক উদ্ভিদ পণ্য বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলির একটি প্রতিশ্রুতিশীল উত্স হতে পারে। অ্যান্টি-এজিং অ্যাপ্লিকেশানগুলির জন্য বিশেষ আগ্রহের বিষয়, নির্যাসের একাধিক উপকারী ফাংশন রয়েছে, যেমন বার্ধক্য-সম্পর্কিত এনজাইমগুলির বাধা এবং ফ্রি র‌্যাডিকেলগুলি অপসারণের ক্ষমতা।

আমাদের পূর্ববর্তী কাজে, আমরা ডাব্লু ফিলিফেরা বীজের নির্যাসের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা এবং বেশ কিছু জৈবিক ক্রিয়াকলাপ বর্ণনা করেছি [7]। Washington filifera (Lindl.) H. Wendl., সাধারণত ক্যালিফোর্নিয়া ফ্যান পাম বা মরুভূমির পাখা পাম নামে পরিচিত, একটি চিরহরিৎ পাম গাছ যা দক্ষিণ ক্যালিফোর্নিয়া, অ্যারিজোনা, মেক্সিকো এবং মরুভূমি অঞ্চলে বসবাস করে।otflavonoid15-20 মিটার উচ্চতার এই খেজুর খেজুর উত্পাদন করে না তবে মিষ্টি এবং সুস্বাদু ভোজ্য ফল ধারণ করে। এই বেরিগুলির একটি পাতলা সজ্জা দ্বারা বেষ্টিত একটি খুব বড়, বাদামী বীজ রয়েছে (চিত্র 1)। ডব্লিউ ফিলিফেরা নিয়ে গবেষণা করা হয়েছে, উদাহরণস্বরূপ, নভেল সেলুলোজিক ফাইবারের সম্ভাব্য উৎস হিসেবে এর ব্যবহার [৮] এবং এর ফলের পুষ্টিগুণ [৯]; বায়বীয় অংশগুলির ফেনোলিক রচনা এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপও লিনের রিপোর্ট করেছে [10]। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায়, আমরা W এর ভাল অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ রিপোর্ট করেছি।পিউরিটান ভিটামিন সিফিলিফেরা বীজের নির্যাস, যা ফেনোলিক এবং ফ্ল্যাভোনয়েড অণুর উৎস বলে মনে হয়[7]। একই নির্যাস জ্যান্থাইন অক্সিডেস এবং কোলিনস্টেরেজ এনজাইমগুলির উপর একটি প্রতিরোধমূলক প্রভাব প্রয়োগ করে, যা যথাক্রমে গাউট এবং আল্জ্হেইমের রোগের চিকিত্সার মূল এনজাইমগুলির প্রতিনিধিত্ব করে।

এই কাজের লক্ষ্য ছিল এই উদ্ভিদের বৈশিষ্ট্য প্রসারিত করা এবং অ্যান্টি-এজিং এজেন্ট হিসাবে এর নির্যাসের সম্ভাব্য ব্যবহার মূল্যায়ন করা। তাই, সজ্জা এবং বীজের নির্যাসগুলি ইলাস্টেস, কোলাজেনেস এবং টাইরোসিনেজ কার্যকলাপের প্রতি তাদের বাধামূলক ক্রিয়াকলাপের জন্য তদন্ত করা হয়েছিল, যেহেতু তারা ত্বকের ফটোজিং প্রতিরোধ এবং চিকিত্সার জন্য মূল লক্ষ্য এনজাইমগুলিকে প্রতিনিধিত্ব করে; অধিকন্তু, W.filifera নির্যাসগুলি সেরা প্রতিশ্রুতিশীল ক্রিয়াকলাপগুলিকে তাদের ইন ভিট্রো সাইটোটক্সিসিটি, সেলুলার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ এবং ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলির জন্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

2. ফলাফল এবং আলোচনা

2.1.এনজাইম ইনহিবিশন

ডাব্লু. ফিলিফেরা সজ্জা এবং বীজের নির্যাসগুলি প্রথমে 50 ug/mL ঘনত্বে পরীক্ষা করা হয়েছিল।sistancheসমস্ত সজ্জা নির্যাস উল্লেখযোগ্য এনজাইম বাধা প্রয়োগ করেনি (ডেটা দেখানো হয়নি)। বীজের নির্যাসের এনজাইম প্রতিরোধমূলক ক্রিয়াকলাপগুলি গণনা করা হয়েছিল এবং অর্ধ-সর্বোচ্চ প্রতিরোধক ঘনত্ব (এছাড়াও) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। সারণি 1 নমুনাগুলির প্রতিরোধ ক্ষমতা মূল্যায়ন করার জন্য, মানক ইনহিবিটরগুলির তুলনায় বীজের নির্যাস থেকে প্রাপ্ত ICso মানগুলি দেখায়। যেমনটি লক্ষ্য করা যায়, সমস্ত নির্যাস টাইরোসিনেজ কার্যকলাপকে দুর্বলভাবে বাধা দেয়, যার আইসিএসও মান আদর্শ, কোজিক অ্যাসিডের চেয়ে বেশি। ইলাস্টেস এবং কোলাজেনেস ক্রিয়াকলাপগুলির বিরুদ্ধে আরও ভাল বাধা পরিলক্ষিত হয়েছে এবং ইথানোলিক (ইইজি এবং ইইএস) এবং মেথানোলিক (এমইজি এবং এমইএস) নির্যাসগুলি সর্বোত্তম প্রভাব প্রয়োগ করেছে। ইলাস্টেসের বিরুদ্ধে এই নমুনাগুলির প্রতিরোধমূলক কার্যকলাপ অনুরূপ ছিল; ICso মানগুলি 10.75 থেকে 19.75 ug/mL পর্যন্ত এবং ধনাত্মক নিয়ন্ত্রণের সাথে তুলনীয় ছিল （oleanolic acid;ICso=11.75 ug/mL）।

পরিবর্তে, কোলাজেনেস ক্রিয়াকলাপকে নির্যাস দ্বারা দৃঢ়ভাবে বাধা দেওয়া হয়েছিল, যা স্ট্যান্ডার্ড এপিগালোক্যাটেচিন গ্যালেটের তুলনায় উচ্চতর ক্ষমতা দেখায়, ICso ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের চেয়ে তিনগুণ কম। নির্যাসগুলি বেশ কয়েকটি যৌগের মিশ্রণ ছিল তা বিবেচনা করে, একক সক্রিয় অণুগুলির ঘনত্ব IC50 মানের থেকেও কম ছিল, এইভাবে নির্যাসগুলিকে প্রতিরোধকারী যৌগের আরও প্রতিশ্রুতিশীল উত্স করে তোলে৷

2.2.লাইনওয়েভার-বার্ক প্লট দ্বারা গতিগত বিশ্লেষণ

আমরা ইথানল এবং মিথানল নির্যাসের উপর আমাদের মনোযোগ কেন্দ্রীভূত করেছি যাতে এই এনজাইমগুলির প্রতিরোধের মোড তদন্ত করার জন্য তারা ইলাস্টেস এবং কোলাজেনেস ক্রিয়াকলাপগুলির বিরুদ্ধে আরও ভাল প্রভাব ফেলেছিল। লাইনওয়েভার-বার্ক ডবল পারস্পরিক প্লট দ্বারা বাধার গতি নির্ধারণ করা হয়েছিল। বিভিন্ন ঘনত্বে নির্যাসের অনুপস্থিতি এবং উপস্থিতিতে সংশ্লিষ্ট সাবস্ট্রেটের ঘনত্ব বৃদ্ধি করে অ্যাসগুলি সঞ্চালিত হয়েছিল।

সারণী 2 দেখায় যে ইইজি এবং ইইএস ইলাস্টেসের বিরুদ্ধে অপ্রতিদ্বন্দ্বী প্রতিরোধক হিসাবে কাজ করেছে। প্রকৃতপক্ষে, এই নির্যাসগুলির গতিগত বিশ্লেষণ নির্যাসের ঘনত্ব বৃদ্ধির জন্য সমান্তরাল রেখার একটি পরিবার তৈরি করেছে (চিত্র 2A,B)। এই কিরেটিক বিশ্লেষণ ইঙ্গিত করে যে এই নির্যাসগুলি এনজাইম-সাবস্ট্রেট কমপ্লেক্সের সাথে আবদ্ধ হতে পারে ভারসাম্য ধ্রুবক (Krs) হিসেব করা হয়েছিল ইন্টারসেপ্ট (1/Vmax) বনাম ইনহিবিটর ঘনত্বের রিপ্লোটিং থেকে, যার ফলস্বরূপ EEG এবং EES এর জন্য যথাক্রমে 3.91 এবং 8.89 ug/mL এর মান। মেথানোলিক নির্যাসগুলির প্রতিরোধের মোড প্রকৃতপক্ষে প্রকাশ করে যে এই নির্যাসগুলি একটি অপ্রতিযোগিতামূলক বাধা হিসাবে কাজ করে। প্রকৃতপক্ষে, নির্যাসের ঘনত্ব বৃদ্ধি করে, বিভিন্ন ঢাল সহ সরল রেখার একটি পরিবার, যা সমস্ত আবসিসার উপর ছেদ করে, পাওয়া গেছে (চিত্র 2C,D)। এই বিশ্লেষণ ইঙ্গিত করে যে নির্যাসগুলি কেবল এনজাইম-সাবস্ট্রেট কমপ্লেক্সের সাথেই নয়, মুক্ত এনজাইমের সাথেও আবদ্ধ হতে পারে। মুক্ত এনজাইম (Kj) এবং এনজাইম-সাবস্ট্রেট কমপ্লেক্স (Kis) এর সাথে আবদ্ধ হওয়ার জন্য ভারসাম্যের ধ্রুবকগুলি হয় ঢাল (Km/Vmax) বা 1/Vmax মান (y-ইন্টারসেপ্ট) প্লট করা বনাম ইনহিবিটর ঘনত্ব থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল, যথাক্রমেঅবশেষে, নির্যাসের বিভিন্ন ঘনত্বে কোলাজেনেসের গতিগত আচরণ চিত্র 3A-D-এ দেখানো হয়েছে। সমস্ত নির্যাস 7 এর পরিসরে Krs মানের সাথে অপ্রতিদ্বন্দ্বী প্রতিরোধক হিসাবে কাজ করেছে৷{3}}.04 ug/mL (টেবিল 2)

আমাদের পূর্ববর্তী কাজে, আমরা HPLC-DAD-ESI/MS ব্যবহার করে ডাব্লু ফিলিফেরা বীজের অ্যালকোহলযুক্ত নির্যাস বিশ্লেষণ করেছি। আমরা হাইলাইট করেছি যে এই নির্যাসের প্রধান ফেনোলিক যৌগগুলি ফ্লাভান-3-ওল [7] নিয়ে গঠিত। তাদের মধ্যে, ডব্লিউ ফিলিফেরা বীজের নির্যাসের প্রধান যৌগ ছিল বি-টাইপ প্রোসায়ানিডিন। প্রোসায়ানিডিন পলিমারাইজেশনের ডিগ্রি এবং ইলাস্টেসকে বাধা দেওয়ার জন্য প্রোসায়ানিডিনের ক্ষমতার মধ্যে একটি ইতিবাচক সম্পর্ক পূর্ববর্তী একটি গবেষণাপত্রে [11,12] পরিলক্ষিত হয়েছিল। তদুপরি, কিছু প্রোসায়ানিডিন যৌগ দ্বারা ইলাস্টেস এবং কোলাজেনেসের বিরুদ্ধে প্রতিরোধমূলক কার্যকলাপ রিপোর্ট করা হয়েছে [13,14]। এই যৌগগুলির সিনার্জিক ক্রিয়া উভয় এনজাইমের বিরুদ্ধে W.filifera মিথেনোলিক নির্যাসের উল্লেখযোগ্য বাধা ব্যাখ্যা করতে অবদান রাখতে পারে।

2.3.সান প্রোটেকশন ফ্যাক্টর

সম্ভাব্য ত্বক প্রয়োগ সহ যৌগগুলির জন্য ফটোপ্রোটেক্ট্যান্ট কার্যকলাপ অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, এইভাবে আমরা আমাদের নির্যাসের সূর্য সুরক্ষা ফ্যাক্টর (SP) নির্ধারণ করেছি। এসপিএফ একটি পদার্থের অতিবেগুনী রশ্মি শোষণ করার ক্ষমতা নির্দেশ করে, এই ধরনের বিকিরণ দ্বারা উত্পাদিত বিষাক্ত প্রভাব থেকে ত্বককে রক্ষা করে। উদ্ভিদ-ভিত্তিক প্রসাধনীগুলিতে অতিবেগুনী বিকিরণ শোষণের দুর্দান্ত সম্ভাবনা রয়েছে কারণ উদ্ভিদের নির্যাসে পলিফেনল থাকে, যেমন ফ্ল্যাভোনয়েড বা ক্যারোটিনয়েড। এই যৌগগুলি, সুগন্ধযুক্ত রিংযুক্ত, অতিবেগুনী রশ্মি শোষণ করতে পারে এবং তাই, সূর্যের ফিল্টার হিসাবে কাজ করতে পারে। যেহেতু W.filifera-এর অ্যালকোহলযুক্ত বীজের নির্যাসে ফেনোলিক এবং ফ্ল্যাভোনয়েড যৌগ রয়েছে [7], তাই এই নির্যাসের ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সারণি 3 এ দেখানো হয়েছে, 100 ug/mL এর ঘনত্বে সমস্ত বিশ্লেষণ করা নির্যাস, 1.52 থেকে 3.35 পর্যন্ত SPF মান দেখিয়েছে। মিথানল নির্যাস সর্বোত্তম ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের অধিকারী হওয়ার জন্য প্রকাশ করা হয়েছিল। অতিবেগুনী রশ্মি ত্বকের রোগের জন্য দায়ী এবং তারা এমন প্রক্রিয়াগুলিকে ট্রিগার করে যার ফলে ত্বকের বার্ধক্য, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং বলি গঠন হয়। এইভাবে, এই বিকিরণের শোষণ হ্রাস করে, একটি পরোক্ষ উপায়ে, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্রিয়াকলাপ এবং বার্ধক্যজনিত এনজাইমগুলিকে বাধা দেয়।

2.4। কোষের কার্যক্ষমতা এবং অন্তঃকোষীয় ROS স্তর

যেহেতু অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বার্ধক্য এবং বয়স-সম্পর্কিত ক্ষতির একটি মূল কারণ, তাই আমরা এটিও পরীক্ষা করেছি যে ডাব্লু ফিলিফেরা নির্যাসগুলি একটি সেলুলার সিস্টেমে HO2-প্রেরিত ROS জেনারেশনকে বাধা দেয় কিনা। পূর্ববর্তী একটি কাগজে, আমরা একটি স্পেকট্রোফোটোমেট্রিক পদ্ধতি (ABTS অ্যাস) ব্যবহার করে বীজের নির্যাসের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্রিয়াকলাপগুলি বর্ণনা করেছি [7]। নমুনাগুলি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য সহ ফেনোলিক যৌগগুলির একটি ভাল উত্স হিসাবে প্রকাশিত হয়েছিল, এমইজি সর্বোত্তম কার্যকলাপ দেখায়। যেহেতু এই নির্যাসটির সর্বোত্তম অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্রিয়াকলাপ এবং প্রচুর সম্ভাবনা ছিল, তাই পরীক্ষিত এনজাইমের (কোলিনস্টেরেজ, জ্যান্থাইন অক্সিডেস, এবং এখানে উপস্থাপিত বার্ধক্যজনিত এনজাইমগুলি) এর বিরুদ্ধে বাধা ক্রিয়াকলাপ বিবেচনা করে, আমরা একটি সেলুলার মডেলে MEG-এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা নিশ্চিত করার সিদ্ধান্ত নিয়েছি।

প্রথমত, কোষের কার্যক্ষমতার উপর W.filifera নির্যাসের প্রভাব HaCaT কোষগুলিতে তদন্ত করা হয়েছিল। অমর মানব কেরাটিনোসাইট HaCaT সেল লাইন এপিডার্মাল হোমিওস্ট্যাসিস অধ্যয়ন করার জন্য মডেল হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে [15]। এই নির্যাসের নিরাপত্তা নির্ধারণের জন্য, কোষগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য নমুনার বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং একটি MTT পরীক্ষা ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে নির্যাসটি HaCaT কোষে সাইটোটক্সিক ছিল না এবং 100 ug/mL (চিত্র 4) এ শুধুমাত্র একটি ছোট হ্রাস (80 শতাংশের কার্যকারিতা) পরিলক্ষিত হয়েছিল। যেহেতু 50 ug/mL (96 শতাংশের কার্যকারিতা) পর্যন্ত কার্যকারিতা প্রভাবিত হয়নি, তাই আমরা এই নির্যাস ঘনত্ব পর্যন্ত ব্যবহার করে আরও সেলুলার পরীক্ষা করার সিদ্ধান্ত নিয়েছি। আমরা অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের আগে এবং পরে এবং MEG-এর সাথে চিকিত্সার পরে কোষগুলিতে ROS স্তরগুলি মূল্যায়ন করেছি। গবেষণাটি 21,7'-ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট (ডিসিএফএইচ-ডিএ) ব্যবহার করে পরিচালিত হয়েছিল, যা সহজেই কোষের ঝিল্লির মাধ্যমে ছড়িয়ে পড়ে এবং অন্তঃসত্ত্বা এস্টেরেস দ্বারা DCFH-তে হাইড্রোলাইজ করা হয়। DCF-তে দ্রুত বৃদ্ধি অন্তঃকোষীয় ROS দ্বারা DCFH-এর অক্সিডেশন নির্দেশ করে, H2O2. যেমন চিত্র 5-এ দেখানো হয়েছে, H2O2 ইনকিউবেশন উল্লেখযোগ্যভাবে HaCaT কোষে ROS গঠন বৃদ্ধি করেছে, কিন্তু নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা ডোজ-প্রতিক্রিয়া পদ্ধতিতে H2O2-প্ররোচিত ROS উত্পাদনকে বাধা দিতে সক্ষম হয়েছিল। এইভাবে, এই ফলাফলগুলি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট অ্যাসেগুলিকে নিশ্চিত করে এবং পরামর্শ দেয় যে MEG কোষগুলিতে ROS গঠনও কমাতে পারে।

এই কাগজে বিশ্লেষণ করা মিথানোলিক নির্যাস উচ্চ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য দেখিয়েছে। এই নির্যাসের ফেনোলিক সংমিশ্রণে ফ্লাভান-3-ওল এবং বি-টাইপ প্রোসায়ানিডিনগুলি ছিল প্রধান ফেনোলিক যৌগ [7]। Procyanidins, পলিফেনলিক বায়োফ্লাভোনয়েডের একটি গ্রুপ, অক্সিজেন মুক্ত র্যাডিকেলের বিরুদ্ধে বিস্তৃত জৈবিক, ফার্মাকোলজিক্যাল এবং কেমোপ্রোটেক্টিভ বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে বলে জানা গেছে [16,17]। পূর্ববর্তী একটি গবেষণায় দেখানো হয়েছে যে প্রোসায়ানিডিন-এর অ্যান্টি-র্যাডিক্যাল কার্যকলাপ উচ্চ ঘনত্বে শক্তিশালী [১৮]। তদুপরি, প্রোঅ্যান্থোসায়ানিডিন নির্যাসগুলি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ভিটামিন সি এবং ট্রলক্স [19] এর চেয়ে বেশি কার্যকর সুপারঅক্সাইড র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জার।

3. উপকরণ এবং পদ্ধতি

3.1.রাসায়নিক

সমস্ত রাসায়নিক বিকারকগুলি সিগমা কেমিক্যাল কোং (সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) থেকে বিশুদ্ধ বাণিজ্যিক পণ্য হিসাবে প্রাপ্ত হয়েছিল যদি না অন্যথায় নির্দেশিত হয়, এবং আরও পরিশোধন ছাড়াই ব্যবহার করা হয়।

3.2.উদ্ভিদের নমুনা প্রস্তুতি

ডব্লিউ ফিলিফেরার ফল তিউনিসিয়াতে গ্যাবেস (জি) এবং সোসে (এস) এলাকায় সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং উদ্ভিদের উপকরণগুলি পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে প্রস্তুত করা হয়েছিল [7]। সজ্জা এবং বীজকে আলাদাভাবে লাইওফিলাইজ করা হয়েছিল এবং তারপরে গাছের উপাদানগুলি (25 গ্রাম) 100 মিলি জলে (AE, জলীয় নির্যাস), ইথানল (E, ইথানল নির্যাস), বা মিথানল (ME, মিথানল নির্যাস) 72 ঘন্টার জন্য বের করা হয়েছিল। তাপমাত্রা, ক্রমাগত নাড়তে। 10,000 rpm-এ পরিস্রাবণ এবং কেন্দ্রীকরণের পরে, জলীয় নির্যাসগুলিকে লাইওফিলাইজ করা হয়েছিল, যখন প্রাপ্ত ইথানল এবং মিথানল নির্যাসগুলি আরও বিশ্লেষণের জন্য একটি ঘূর্ণমান বাষ্পীভবন ব্যবহার করে একটি ভ্যাকুয়ামের নীচে ঘনীভূত হয়েছিল। শুকনো শক্তি (1 mg/mL) ব্যবহারের আগে DMSO-তে দ্রবীভূত করা হয়েছিল।

3.3.এনজাইমেটিক ইনহিবিশন

নীচে বর্ণিত সমস্ত অ্যাসের ফলাফলগুলি ফাঁকা নিয়ন্ত্রণের শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। এনজাইম অ্যাক্টিভিটি (ICso) এর 50 শতাংশ নিষেধাজ্ঞার ফলে নির্যাসের ঘনত্ব ডোজ-প্রতিক্রিয়া কার্ভের ইন্টারপোলেশন দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। সাবস্ট্রেটের বিভিন্ন ঘনত্বে অ্যাসেস সম্পাদন করে এবং বিভিন্ন ঘনত্বে নির্যাসের অনুপস্থিতি এবং উপস্থিতি দ্বারা নিষেধাজ্ঞার মডেল নির্ধারণ করা হয়েছিল। লাইনওয়েভার-বার্ক প্লট ব্যবহার করে গতিবিদ্যার ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। অ্যাক্টিভিটি অ্যাসেস থেকে ডেটা একটি আল্ট্রস্পেক 2100 স্পেকট্রোফটোমিটার (বায়োক্রোম লিমিটেড, কেমব্রিজ, ইউকে) দিয়ে রেকর্ড করা হয়েছিল।

3.3.1। টাইরোসিনেজ ইনহিবিশন অ্যাস

ডাব্লু ফিলিফেরা নির্যাস দ্বারা টাইরোসিনেজ কার্যকলাপের বাধা 3,4-ডাইহাইড্রোক্সিফেনিল্যালানিন (এল-ডোপা) একটি সাবস্ট্রেট হিসাবে [20] ব্যবহার করে নির্ধারিত হয়েছিল। প্রতিক্রিয়া মিশ্রণে 25 মিমি ফসফেট বাফার (pH 6.8), মাশরুম টাইরোসিনেজ (100 U/mL, চূড়ান্ত ঘনত্ব), উদ্ভিদের নির্যাস দ্রবণ সহ বা ছাড়াই রয়েছে। তারপরে, L-DOPA (0.5 মিমি) মিশ্রণে যোগ করা হয়েছিল এবং ডোপাক্রোম পণ্যের গঠনের ফলে 492 এনএম-এ শোষণের বৃদ্ধি অনুসরণ করে কার্যকলাপ নির্ধারণ করা হয়েছিল। মাশরুম টাইরোসিনেজ ইনহিবিশন অ্যাসের জন্য ব্যবহৃত নির্যাসের ঘনত্বের পরিসীমা ছিল 0-0.3 মিগ্রা/মিলি। উদ্ভিদ নির্যাস ছাড়া সম্পাদিত assays মধ্যে, DMSO একটি ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ হিসাবে প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ যোগ করা হয়েছিল. কোজিক অ্যাসিড একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

3.3.2.ইলাস্টেস ইনহিবিশন অ্যাস

বর্ণিত পদ্ধতি দ্বারা এনজাইমের ক্রিয়া দ্বারা N-succ-(Ala)3-নাইট্রোঅ্যানিলাইড (SANA) এর ক্লিভ-এজের সময় p-nitroaniline নিঃসরণ নিরীক্ষণের মাধ্যমে ইলাস্টেস ইনহিবিশন পরিমাপ করা হয়েছিল [২১], সামান্য পরিবর্তন পরীক্ষাটি 0.1 M Tris-HCl বাফার (pH8৷{10}}) এ সম্পাদিত হয়েছিল৷ পোরসিন প্যানক্রিয়াটিক ইলাস্টেস (3.3 ug/mL) 20 মিনিটের জন্য নির্যাস সহ বা ছাড়াই ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং, ইনকুলেশনের পরে, সাবস্ট্রেট (1.6 মিমি) যোগ করা হয়েছিল, এবং এনজাইমের কার্যকলাপ 410 এনএম এ পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। নিয়ন্ত্রণটি DMSO দিয়ে সঞ্চালিত হয়েছিল, যখন ওলিয়ানোলিক অ্যাসিড একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

3.3.3.কোলাজেনেস ইনহিবিশন অ্যাস

ক্লোস্ট্রিডিয়াম হিস্টোলাইটিকাম থেকে কোলাজেনেস তৈরি করা হয়েছিল ট্রাইসিন বাফারে {{0}}। /mL) 15 মিনিটের জন্য বিভিন্ন ঘনত্বে পরীক্ষার নমুনা সহ। সিন্থেটিক সাবস্ট্রেট N-(3-[2-Fury]]-acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), একই বাফার দ্রবণে প্রস্তুত, তারপর বিক্রিয়া শুরু করার জন্য যোগ করা হয়েছিল ( 0.8 mM এর চূড়ান্ত ঘনত্ব সহ। শোষণ 340 nm এ পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল [21]। নিয়ন্ত্রণটি DMSO দিয়ে সম্পাদিত হয়েছিল, যখন epigallocatechin gallate একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

3.4। ইন ভিট্রো সান প্রোটেকশন ফ্যাক্টর নির্ধারণ

মনসুর এট আল দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে, ডাব্লু. ফিলিফেরা নির্যাসগুলির সূর্য সুরক্ষা ফ্যাক্টর ইউভি অ্যাব-সর্বান্স পদ্ধতি ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। (1986) [22]। নির্যাসগুলির শোষণ (0.1 mg/mL) পরিমাপ করা হয়েছিল 290-320 nm পরিসরে, 5 nm বৃদ্ধি সহ, এবং প্রতিটি বিন্দুতে তিনটি নির্ধারণ করা হয়েছিল৷ মনসুর সমীকরণ প্রয়োগ করে SPF গণনা করা হয়েছিল: যেখানে CF=সংশোধন ফ্যাক্টর(10); EE(A)= তরঙ্গ-দৈর্ঘ্য λ;I（）= সৌর তীব্রতা বর্ণালী সহ বিকিরণের এরিথেমোজেনিক প্রভাব; Abs（λ= তরঙ্গদৈর্ঘ্য λ এ বর্ণালী ফোটোমেট্রিক শোষণের মান। EE（A） × I（A） এর মান ধ্রুবক। তারা Sayre et al দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। (1979)[23] এবং সারণি 4 এ দেখানো হয়েছে।

3.5.সেল সংস্কৃতি এবং অন্তঃকোষীয় ROS স্তর

মানুষের ত্বকের কেরাটিনোসাইট সেল লাইন HaCaT ডালবেকোর মডিফাইড ঈগলস মিডিয়াম (DMEM) তে 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (FBS, Gibco, NY, USA) এবং 1 শতাংশ পেনি-সিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন 37 ডিগ্রি, আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে সংষ্কৃত হয়েছিল শতাংশ CO2. কোষের কার্যকারিতা কালারমেট্রিক 3-(4)5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-ইএল)-2 দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। পূর্বে বর্ণিত, ছোটখাট পরিবর্তন সহ [24]। বিভিন্ন ঘনত্বে (0-100 ug/mL) MEG-এর সাথে 24 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পর, কোষগুলিকে 37 ডিগ্রিতে 3 ঘন্টার জন্য MTT দ্রবণ দিয়ে লেবেল করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ বেগুনি ফর্মাজান অবক্ষেপগুলি DMSO-তে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং 630 এনএম রেফারেন্স সহ একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে প্রতিটি কূপের শোষণ 560 এনএম নির্ধারণ করা হয়েছিল।

সেলুলার ROS স্তরগুলি DCFH-DA পদ্ধতি [25] দিয়ে নির্ধারিত হয়েছিল। HaCaT কোষগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য MEG(0-50 ug/mL) এর বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল। তারপরে, কোষগুলিকে 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে DCFH-DA (10 uM) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। ইনকিউবেশনের পরে, কূপগুলিতে 1 mM HzO2 যুক্ত করা হয়েছিল, এবং DCF-এর ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা অবিলম্বে 485 এনএম একটি উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং 530 এনএম নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্যে একটি ফ্লুরোসেন্ট প্লেট রিডার ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল, 50 মিনিটের ব্যবধানে রিডিং নেওয়া হয়েছিল। মিনিট

3.6.ডেটা বিশ্লেষণ

সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা ট্রিপলিকেটে সম্পাদিত হয়েছিল এবং ডেটাকে 士 স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি （SD） হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। গ্রাফপ্যাড প্রিজম সফ্টওয়্যার সংস্করণ 8 (সান দিয়েগো, CA, USA) ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত পার্থক্যগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। গোষ্ঠীর মধ্যে তুলনা ভ্যারিয়েন্সের একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল এবং তারপরে Tukey একাধিক তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছিল। 0.05 এর চেয়ে কম Ap-মান পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।

4। উপসংহার

উপসংহারে, আমরা প্রথমবারের মতো রিপোর্ট করি যে W.filifera থেকে বীজের নির্যাস ত্বকের বার্ধক্যের সাথে জড়িত মূল এনজাইমগুলিকে বাধা দিতে কার্যকর। প্রাকৃতিক বা "অভ্যন্তরীণ" বার্ধক্য একটি শারীরবৃত্তীয় ঘটনা যা সময়ের সাথে সাথে সমস্ত মানুষের টিস্যুতে ঘটে। যাইহোক, ত্বক বাহ্যিক চাপ সৃষ্টিকারী কারণগুলির সংস্পর্শে আসে যা ত্বকের অকাল বার্ধক্যের একটি প্রধান কারণকে প্রতিনিধিত্ব করে। "বাহ্যিক" বার্ধক্য মূলত ত্বকের সংযোগকারী টিস্যুর UV-প্ররোচিত ক্ষতির সাথে সম্পর্কিত। অতিবেগুনী রশ্মি অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সৃষ্টি করে, যা ইসিএম-এর অবনতিকারী এনজাইমগুলির সক্রিয়করণ এবং বলিরেখা এবং বয়সের দাগের জন্য দায়ী। এই প্রেক্ষাপটে W.filifera-এর বীজের যে গুরুত্ব থাকতে পারে তা এই পাণ্ডুলিপিটি রিপোর্ট করে। চিত্র 6-এ দেখানো হয়েছে, নির্যাসগুলি অকাল বার্ধক্য প্রতিরোধে কাজ করতে পারে, একই সাথে বিভিন্ন ফ্রন্টে কাজ করে।

প্রথমত, নির্যাসগুলি তাদের ফটোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবগুলির মাধ্যমে প্রক্রিয়ার শুরুতে কাজ করতে পারে এবং তাই, ইউভি রশ্মি শোষণকে হ্রাস করে। তারপর, তারা মিথানল নির্যাস দিয়ে একটি ভাল অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব দেখিয়েছে, কোষের বিষাক্ততা ছাড়াই সেলুলার সিস্টেমে ROS গঠন প্রতিরোধ করে। অবশেষে, সমস্ত নির্যাস, বিশেষ করে, মেথানোলিক নমুনা, কোলাজেনেস, ইলাস্টেস এবং টাইরোসিনেজ (পরবর্তীটি সামান্য পরিমাণে) বাধা দিতে পারে। সামগ্রিকভাবে, প্রাপ্ত ফলাফলগুলি দেখায় যে W.filifera বায়োঅ্যাকটিভ অণুর উত্স হতে পারে এবং পর্যবেক্ষিত কার্যকলাপের জন্য দায়ী একক সক্রিয় উপাদানগুলিকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য আরও পরীক্ষা-নিরীক্ষাকে উত্সাহিত করতে পারে।

এই নিবন্ধটি উদ্ভিদ 2021, 10, 151 থেকে নেওয়া হয়েছে। https://doi.org/10.3390/plants10010151 https://www.mdpi.com/journal/plants