টিউমার কোষের বিরুদ্ধে ভেষজ পদার্থ অ্যাক্টিওসাইডের নির্বাচনী সাইটোটক্সিসিটি এবং এর যান্ত্রিক অন্তর্দৃষ্টি
Mar 14, 2022
যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com
ক্রিস্টিনা চেইমোনিদি এট আল
বিমূর্ত
প্রাকৃতিক পণ্যগুলি চরম কাঠামোগত বৈচিত্র্য দ্বারা চিহ্নিত করা হয় এবং এইভাবে তারা অভিনব অ্যান্টি-টিউমার এজেন্ট সনাক্তকরণের জন্য একটি অনন্য উত্স সরবরাহ করে। এখানে, আমরা যে ভেষজ পদার্থ রিপোর্টঅ্যাক্টিওসাইডলিপিয়া সিট্রিওডোরা পাতা থেকে উন্নত ফাইটোকেমিক্যাল পদ্ধতি দ্বারা বিচ্ছিন্ন হওয়া মেটাস্ট্যাটিক টিউমার কোষের বিরুদ্ধে বর্ধিত সাইটোটক্সিসিটি দেখায়; বিভিন্ন সাইটোটক্সিক এজেন্ট এবং সংবেদনশীল কেমোরেসিস্ট্যান্ট ক্যান্সার কোষের সাথে সমন্বয়ে কাজ করে।অ্যাক্টিওসাইডশারীরবৃত্তীয় সেলুলার প্রেক্ষাপটে এটি বিষাক্ত ছিল না, যখন এটি অক্সিডেটিভ লোড বৃদ্ধি করে, প্রোটিওস্ট্যাটিক মডিউলগুলির কার্যকলাপকে প্রভাবিত করে এবং টিউমার কোষের লাইনে ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসেসকে দমন করে। ইনট্রাপেরিটোনিয়াল বা মৌখিক (পানীয় জলের মাধ্যমে) মেলানোমা মাউস মডেলে অ্যাক্টিওসাইডের প্রয়োগ টিউমারগুলিতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়াগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে; তবুও, শুধুমাত্র ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ডেলিভারি টিউমার বৃদ্ধিকে দমন করে এবং টিউমার-প্রতিক্রিয়াশীল ইমিউন প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করে। ভর-স্পেকট্রোমেট্রি শনাক্তকরণ/পরিমাণ বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ডেলিভারিঅ্যাক্টিওসাইডএর ফলে উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চতর, বনাম মৌখিক প্রশাসন, প্লাজমা এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিউমারে যৌগের ঘনত্ব, পরামর্শ দেয় যে এর ভিভো-তে টিউমার-বিরোধী প্রভাব প্রশাসনের রুট এবং টিউমারে অর্জিত ঘনত্বের উপর নির্ভর করে। অবশেষে, আণবিক মডেলিং অধ্যয়ন এবং এনজাইমেটিক কার্যকলাপের পরীক্ষাগুলি দেখিয়েছে যেঅ্যাক্টিওসাইডপ্রোটিন কাইনেজ সিকে বাধা দেয়। চূড়ান্তভাবে, অ্যাক্টিওসাইড অভিনব টিউমার-বিরোধী এজেন্টগুলির বিকাশের জন্য একটি রাসায়নিক ভারা হিসাবে প্রতিশ্রুতি রাখে।
কীওয়ার্ড:অ্যাক্টিওসাইড, ক্যান্সার, প্রাকৃতিক যৌগ, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, প্রোটিওস্ট্যাসিস, ইমিউনোমোডুলেশন
1। পরিচিতি
কার্সিনোজেনেসিসটি বেশ কয়েকটি কোষের সংকেত পথের নিয়ন্ত্রণমুক্তকরণ দ্বারা চিহ্নিত করা হয় এবং এটি বর্ধিত সেলুলার অক্সিডেটিভ, প্রতিলিপিকারী, বিপাকীয়, জিনোটক্সিক এবং প্রোটিওটক্সিক স্ট্রেসের সাথে যুক্ত। এই স্ট্রেস ফেনোটাইপগুলিকে মানিয়ে নিতে এবং কাটিয়ে ওঠার জন্য, ম্যালিগন্যান্ট কোষগুলি (অনকোজিনগুলি ব্যতীত) বেশ কয়েকটি নন-অনকোজেনিক পথগুলিকে উন্নীত করে যার লক্ষ্য হয় দমন করা বা (অন্তত) চলমান স্ট্রেস উপশম করা। টিউমারিজেনেসিসের সময় ঘন ঘন আপনিয়ন্ত্রিত হওয়া বিভিন্ন অ-অনকোজেনিক পথগুলির মধ্যে সেলুলার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়াগুলির সাথে প্রোটিওস্ট্যাসিস নেটওয়ার্ক (পিএন) এর মডিউলগুলি রয়েছে [2,3]।
PN-এর মূল উপাদান হল দুটি প্রধান অবক্ষয় যন্ত্র, যথা অটোফ্যাগি-লাইসোসোম পাথওয়ে (ALP) এবং Ubiquitin-Proteasome Pathway (UPP), সেলুলার মলিকুলার চ্যাপেরোনের নেটওয়ার্ক সহ। ALP প্রধানত প্রোটিন সমষ্টি এবং ক্ষতিগ্রস্থ অর্গানেলগুলির অবক্ষয়ের সাথে জড়িত [4], যখন UPP স্বাভাবিক স্বল্পস্থায়ী প্রোটিন এবং অ-মেরামতযোগ্য মিসফোল্ড বা উন্মোচিত প্রোটিনগুলিকে হ্রাস করে [5-8]। 26Seukaryotic প্রোটিজোম গঠিত হয় 19S নিয়ন্ত্রক কণা (RP) এবং 20 স্কোর কণা (CP); পরেরটি চারটি স্তূপীকৃত হেপ্টামেরিক রিং দ্বারা গঠিত (-টাইপের দুটির চারপাশে -টাইপের দুটি) যা একটি ব্যারেলের মতো কাঠামো তৈরি করে। কাইমোট্রিপসিন-লাইক (সিটি-এল), ট্রিপসিন-লাইক (টিএল), এবং ক্যাসপেস-লাইক (সিএল) প্রোটিসোম পেপটাইডেজ ক্রিয়াকলাপগুলি যথাক্রমে 5, 2 এবং 1 প্রোটিসোমাল সাবুনিটে অবস্থিত [6]। বিভিন্ন হেমাটোলজিক ম্যালিগন্যান্সির বিরুদ্ধে প্রোটিজোম ইনহিবিটর বোর্টেজোমিব (ভেলকেড®; PS-341 নামেও পরিচিত) এবং কারফিফিলজোমিবের ক্লিনিকাল কার্যকারিতা প্রমাণিত হয়েছে ক্যান্সারের চিকিৎসা। সেলুলার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা পথের জটিল নেটওয়ার্ক যা কার্সিনোজেনেসিস [3,10] এর সময় ঘন ঘন আপ-নিয়ন্ত্রিত হয় তার মধ্যে রয়েছে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম, সেইসাথে বিভিন্ন ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর যা সাইটোপ্রোটেকটিভ জিনোমিক প্রতিক্রিয়াগুলিকে একত্রিত করে; এর মধ্যে রয়েছে ফর্কহেড বক্স ও (ফক্সো) এবং নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর এরিথ্রয়েড 2-সম্পর্কিত ফ্যাক্টর (Nrf-2)। এনআরএফ-2 অক্সিডেটিভ এবং/অথবা জেনোবায়োটিক ক্ষতির বিরুদ্ধে কোষগুলির সুরক্ষায় কেন্দ্রীয় কারণ এটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং দ্বিতীয় পর্বের জিনের প্রকাশকে উদ্দীপিত করে [11-13]।
আমরা এবং অন্যরা সম্প্রতি প্রস্তাব করেছি যে এই টিউমার নির্ভরতাগুলিকে লক্ষ্য করে (যেমন, প্রোটিওস্ট্যাটিক মডিউল এবং/অথবা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়া পথ) বা রূপান্তরিত জিনোটাইপের পরিপ্রেক্ষিতে ROS এর সেলুলার স্তর বৃদ্ধি করা টিউমার কোষগুলির নির্বাচনী হত্যার জন্য একটি সম্ভাব্য থেরাপিউটিক উইন্ডো অফার করে। ,14]; সমর্থনে, একটি ছোট অণু দ্বারা ক্যান্সার কোষের নির্বাচনী হত্যার রিপোর্ট করা হয়েছে যা সেলুলার ROS স্তরগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে [2]। এটা প্রত্যাশিত যে অ্যান্টি-টিউমার-প্রতিক্রিয়াশীল ইমিউন রেসপন্সের সক্রিয়করণ সহ সমন্বিত পদ্ধতিগুলি সম্ভবত PN এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়াগুলিকে বাধা দিয়ে এবং/অথবা সেলুলার ROS স্তরকে উন্নীত করে প্রদত্ত থেরাপিউটিক উইন্ডোকে সর্বাধিক করবে।
বিভিন্ন উত্স (উদ্ভিদ, সামুদ্রিক জীব, অণুজীব, ইত্যাদি) থেকে প্রাকৃতিক পণ্য (নিষ্কাশন বা বিশুদ্ধ যৌগ) (NPs) তাদের চরম কাঠামোগত বৈচিত্র্য এবং রাসায়নিক জটিলতার কারণে টিউমার-বিরোধী এজেন্ট হিসাবে কাজ করার ক্ষমতার জন্য স্ক্রীন করা হয়। তারা বেশ কয়েকটি সেলুলার সিগন্যালিং পাথওয়েগুলিকে প্লিওট্রপিক্যালি সংশোধন করে [16]। রিপোর্ট করা হয়েছে, NPs অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি, অ্যান্টি-টিউমার এবং/অথবা অ্যান্টি-মেটাস্ট্যাটিক প্রতিক্রিয়া সক্রিয় করে [16,17] এবং মাল্টিড্রাগ প্রতিরোধ [18,19] এড়ায়। এর মধ্যে, ফেনোলিক যৌগগুলি (ফেনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড সহ) বিভিন্ন মানব রোগের প্রতিরোধ এবং/অথবা চিকিত্সার ক্ষেত্রে তাদের ভূমিকার কারণে উল্লেখযোগ্য আগ্রহ আকর্ষণ করেছে।
অ্যাক্টিওসাইড, যাকে ব্যবহার বা ভার্বাসকোসাইড [20]ও বলা হয়, এটি একটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড যা অনেক ডাইকোটাইলেডন থেকে বিচ্ছিন্ন। জানা গেছে, অ্যাক্টিওসাইড কিছু আকর্ষণীয় জৈবিক ক্রিয়াকলাপ প্রয়োগ করে, যার মধ্যে রয়েছে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি এবং সেল অ্যাপোপটোসিস নিয়ন্ত্রণকারী বৈশিষ্ট্যগুলি [২১,২২]। তা সত্ত্বেও, এর সম্ভাব্য অ্যান্টি-টিউমার কার্যকলাপ সম্বোধন করা হয়নি। আমরা এখানে রিপোর্ট করি যে অ্যাক্টিওসাইড স্তন্যপায়ী ক্যান্সার কোষের বিরুদ্ধে শারীরবৃত্তীয় সেলুলার প্রসঙ্গে কোনও আপাত বিষাক্ত প্রভাব ছাড়াই সাইটোটক্সিসিটি বৃদ্ধি করেছে। অধিকন্তু, অ্যাক্টিওসাইড দমন করে ভিভো মাউস মডেলে মেলানোমা টিউমার বৃদ্ধি, (অন্যদের মধ্যে) অ্যান্টি-টিউমার-প্রতিক্রিয়াশীল ইমিউন প্রতিক্রিয়া সক্রিয় করে।
2। সামগ্রী ও পদ্ধতি
2.1। উদ্ভিদ উপাদান এবং নিষ্কাশন
শুকনো Lippia citriodora (Lamiaceae) পাতা (4.5 কেজি) গ্রিসের এথেন্সের স্থানীয় বাজার থেকে কেনা হয়েছিল। পাতাগুলিকে মিথানল (2 × 20 L) দিয়ে 12 ঘন্টা ধরে যান্ত্রিকভাবে নাড়াচাড়া করে বের করা হয়েছিল। মিথানোলিক নির্যাসটি শুষ্কতায় বাষ্পীভূত হয়ে CH2Cl2/MeOH 98/2 (15 L) এর মিশ্রণ দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। অদ্রবণীয় অবশিষ্টাংশগুলিকে আলাদা করে শুকানো হয়, একটি সবুজ-হলুদ গুঁড়া (450 গ্রাম) তৈরি করে।
2.2। অ্যাকটিওসাইড এবং UPLC-HRMS বিশ্লেষণের পরিশোধন
উল্লিখিত অবশিষ্টাংশের একটি অংশ (10 গ্রাম) দ্রুত সেন্ট্রিফিউগাল পার্টিশন ক্রোমাটোগ্রাফি (FCPC) যন্ত্রপাতি (ক্রোমাটন, ফ্রান্স) ব্যবহার করে কাউন্টারকারেন্ট ক্রোমাটোগ্রাফির শিকার হয়েছিল; 5/0.5/4.5 অনুপাতে EtOAc/EtOH/H2O এর একটি মিশ্রণ একটি বাইফেসিক দ্রাবক সিস্টেম হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। সংগৃহীত ভগ্নাংশ পাতলা স্তর ক্রোমাটোগ্রাফির অধীন ছিল; তারপরে ক্রোমাটোগ্রামগুলি একটি UV বাতির (254 এবং 365 এনএম) নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং মিথানল ভ্যানিলিন সালফেট দিয়ে স্প্রে করে দুই মিনিটের জন্য গরম করার মাধ্যমে কল্পনা করা হয়েছিল। মোট 2.1 গ্রাম অ্যাকটিওসাইড (বিশুদ্ধতা 90 শতাংশের চেয়ে বেশি বা সমান) উপরে উল্লিখিত প্রক্রিয়া দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। অ্যাক্টিওসাইড সনাক্তকরণ পারমাণবিক চৌম্বকীয় অনুরণন (NMR) এবং ভর স্পেকট্রোমেট্রি (MS) বর্ণালী দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল, যখন এর বিশুদ্ধতা UPLC-MS এবং NMR বিশ্লেষণ দ্বারা প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল; বিস্তারিত জানার জন্য Suppl দেখুন। উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ.
2.3। সেল লাইন
আমেরিকান টিস্যু কালচার কালেকশন (ATCC) থেকে B16.F1, B16.F10, YAC-1, এবং WEHI-164 মাউস সেল লাইনের সাথে মানুষের ফুসফুসের ভ্রূণীয় ফাইব্রোব্লাস্ট (IMR90 কোষ) প্রাপ্ত হয়েছিল। U2 OS এবং Sa OS হিউম্যান অস্টিওসারকোমা সেল লাইনগুলি অনুগ্রহ করে প্রফেসর ভি. গোরগোলিস (স্কুল অফ মেডিসিন, ন্যাশনাল অ্যান্ড কাপোডিস্ট্রিয়ান ইউনিভার্সিটি অফ এথেন্স, গ্রীস) দ্বারা দান করা হয়েছিল, যখন KH OS অস্টিওসারকোমা কোষ এবং কেমোরেসিস্ট্যান্ট অস্টিওসারকোমা সেল লাইনগুলি [২৩] ছিল। ড. ই. গনোস (ন্যাশনাল হেলেনিক রিসার্চ ফাউন্ডেশন, গ্রীস) এর একটি অনুদান। মাউস ক্যান্সার সেল লাইন C5N এবং A5 একটি মাল্টিস্টেজ মাউস স্কিন কার্সিনোজেনেসিস মডেলের অন্তর্গত [24,25] এবং প্রফেসর এ. বালমেইন (কমপ্রিহেনসিভ ক্যান্সার সেন্টার, ক্যালিফোর্নিয়া বিশ্ববিদ্যালয়, ইউএসএ) দ্বারা দান করা হয়েছিল। ব্যবহৃত কোষ লাইনের সংস্কৃতির অবস্থা Suppl এ রিপোর্ট করা হয়। উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ.
উপকারcistanche acteoside
2.4। মেলানোমা মাউস মডেল পুরুষ
C57BL/6 ইঁদুর (25–30 গ্রাম ওজন, 6-8 সপ্তাহ বয়স) হেলেনিক পাস্তুর ইনস্টিটিউট থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং নিয়ন্ত্রিত তাপমাত্রা (22 ডিগ্রি) এবং ফটোপিরিয়ড (12 ঘন্টা আলো: 12 ঘন্টা অন্ধকার) এর অধীনে রাখা হয়েছিল ) জল এবং খাবার বিনামূল্যে প্রবেশাধিকার সঙ্গে. ইঁদুরগুলিকে 105 B16.F1 মেলানোমা কোষ (100 μL পিবিএস-এ) দিয়ে ত্বকের নিচের অংশে টিকা দেওয়া হয়েছিল এবং এলোমেলোভাবে 3টি গ্রুপে (n=5/গ্রুপ) বরাদ্দ করা হয়েছিল। যখন টিউমারগুলি স্পষ্ট হয়ে ওঠে (11 দিন) ইঁদুর দুটি রুটের মাধ্যমে অ্যাক্টিওসাইড গ্রহণ করে; হয় intraperitoneally (IP) (1 mg/মাউস 200 μL PBS এ মিশ্রিত করা হয়; প্রতি অন্য দিনে মোট 6 ডোজ দেওয়া হয়) অথবা মুখে মুখে পানি পান করে (OR) (2.5 মিলিগ্রাম/মাউস; টানা 13 দিনের জন্য মোট 13 ডোজ)। নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরগুলি পিবিএস পরিচালিত হয়েছিল। একটি ডিজিটাল ক্যালিপার দিয়ে গঠিত টিউমারগুলির প্রধান এবং ছোট অক্ষগুলি পরিমাপ করে প্রতি 2 দিনে টিউমার বৃদ্ধি রেকর্ড করা হয়েছিল। সূত্রটি ব্যবহার করে পরিমাপগুলি টিউমারের আয়তনে রূপান্তরিত হয়েছিল: টিউমারের আয়তন (cm3)=প্রধান অক্ষ × ছোট অক্ষ 2 × 0.5৷ 28 তম দিনে, জরায়ুর স্থানচ্যুতি দ্বারা প্রাণীদের euthanized করা হয়েছিল এবং প্লীহাগুলিকে অপসারণ করা হয়েছিল। পরীক্ষাটি অনুরূপ ফলাফলের সাথে তিনবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল।
স্প্লেনোসাইটগুলি পৃথকভাবে সমজাতীয় প্লীহা থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং অবিলম্বে তাদের সাইটোটক্সিসিটি বনাম B16.F1, YAC-1, এবং WEHI-164 কোষের লক্ষ্যগুলির জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। ইফেক্টর সেল ডিগ্র্যানুলেশনের ফলে কোষের পৃষ্ঠে CD107 এক্সপোজার সনাক্তকরণের ভিত্তিতে সাইটোটক্সিসিটি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। স্প্লেনোসাইট (105 কোষ/কূপ) 5 শতাংশ CO2-তে 37 ডিগ্রীতে, 100:1 অনুপাতের একটি ইফেক্টর থেকে লক্ষ্যমাত্রা (E: T) অনুপাতে 96-ওয়েল U নীচের মাইক্রোপ্লেটে লক্ষ্যগুলির সাথে সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল। FITC-কনজুগেটেড অ্যান্টি-CD107a এবং অ্যান্টি-CD107b মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (25 μL/mL) এবং মোনেনসিন (6 μL/mL; সমস্ত BD বায়োসায়েন্সেস থেকে) প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল। কোষগুলি 6 ঘন্টা পরে কাটা হয়েছিল এবং একটি FACSCanto II ফ্লো সাইটোমিটার ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। সমান্তরালভাবে, সাপ্লে বর্ণিত ডাউনস্ট্রিম অ্যাসেসের জন্য টিউমারগুলি এক্সাইজ করা হয়েছিল এবং প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ.
cistanche acteoside
