H2O2/UVB-প্ররোচিত ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট কোলাজেন ডিগ্রেডেশনের বিরুদ্ধে Cistanche Tubulosa-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব Hsa-microRNA-4535-মধ্যস্থ TGF/Smad সিগন্যালিং এর মাধ্যমে
May 10, 2023
বিমূর্ত
এই অধ্যয়নের লক্ষ্য হল ভিট্রো এবং ফটোডামেজের ভিভো মডেল ব্যবহার করে H2O2/UVB-প্ররোচিত ক্ষতির বিরুদ্ধে cistanche-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলির অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি তদন্ত করা। তদুপরি, আমরা এই প্রক্রিয়াতে miRNA নিয়ন্ত্রণের জড়িততা চিহ্নিত করেছি। H2O2/UVB-চিকিত্সা করা HS68 হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট এবং UVB-প্ররোচিত C57BL/6J নগ্ন ইঁদুরগুলি ভিট্রো এবং ফটোডামেজের ভিভো মডেলগুলিতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ফলাফলে তা দেখা গেছেcistanche চিকিত্সাউপশম H2O2/UVB-প্রেরিত কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস, TGF/Smad সংকেত বৈকল্য, এবং ত্বকের বার্ধক্য। মাইক্রোআরএনএ অ্যারে বিশ্লেষণ এবং ডাটাবেস অনুসন্ধানের ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, has-miR-4535 কে একটি সম্ভাব্য প্রার্থী miRNA হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল যা Smad4 কে লক্ষ্য করে। ভিট্রোতে,cistanche চিকিত্সাসক্রিয় Smad2/3/4 জটিল এবং H2O2/UVB-প্রকাশিত কোষে hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশনকে বাধা দেয়। ভিভোতে, C57BL/6J নগ্ন ইঁদুরের পৃষ্ঠীয় ত্বকে কম (12 mg/kg) এবং উচ্চ মাত্রায় (24 mg/kg) cistanche এর সাময়িক প্রয়োগ TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ সংকেত প্রচার করে UVB-প্ররোচিত ত্বকের ফটোড্যামেজকে উল্লেখযোগ্যভাবে উপশম করেছে, হ্রাস করাএপিডার্মাল হাইপারপ্লাসিয়া, বলি গঠন, এবংত্বকের সেন্সেন্স, সেইসাথেhsa-miR-4535 অভিব্যক্তিকে বাধা দেয়. একসাথে নেওয়া, আমাদের অনুসন্ধানগুলি hsa-miR-4535 এবং TGF /Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ সংকেতের মধ্যে একটি লিঙ্ক নির্দেশ করেএবং এই কারণগুলির সাথে জড়িত হওয়ার পরামর্শ দিনএর ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রক্রিয়াcistancheডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টেএইচ এর বিরুদ্ধে2O2/UVB-প্ররোচিত বার্ধক্য। সাক্ষ্য-প্রমাণ সেই ইঙ্গিত দিয়েছেcistancheসঙ্গেবিরোধী বার্ধক্য বৈশিষ্ট্যহতে পারেত্বক যত্ন পণ্য একটি সম্পূরক হিসাবে বিবেচিত.
Cistanche অ্যান্টি-এজিং পণ্য পেতে এখানে ক্লিক করুন
ভূমিকা
মানুষের ত্বকের বার্ধক্যের ক্লিনিকাল লক্ষণগুলির মধ্যে রয়েছে কুঁচকে যাওয়া, শিথিলতা এবং অনিয়মিত পিগমেন্টেশন [১]। ত্বকের বার্ধক্যের প্রক্রিয়াটি জটিল এবং দুটি প্রকারে বিভক্ত করা যেতে পারে: অন্তর্নিহিত বার্ধক্য এবং বহির্মুখী বার্ধক্য। অভ্যন্তরীণ বার্ধক্য সময় এবং জেনেটিক কারণের কারণে হয়, যখন বহির্মুখী বার্ধক্য, যাকে ফটোজিংও বলা হয়, প্রধানত অতিবেগুনী বিকিরণের সংস্পর্শে আসার ফলে [2, 3]। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে প্রচুর প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) অভ্যন্তরীণ এবং বহির্মুখী উভয় বয়সের সময় উত্পন্ন হয়। ROS এর জমে থাকা মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস (MAPK) সিগন্যালিং প্ররোচিত করতে পারে এবং এর ডাউনস্ট্রিম ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর, অ্যাক্টিভেটর প্রোটিন-1 (AP-1) সক্রিয় করতে পারে। সক্রিয় AP-1 নিউক্লিয়াসে স্থানান্তর করতে পারে এবং ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসেস (MMPs) [4] এর প্রবর্তক অঞ্চলে আবদ্ধ হতে পারে। এমএমপিগুলি হল একটি বড় দস্তা-নির্ভর এন্ডোপেপ্টিডেস গ্রুপ, যা ত্বকের ডার্মিস এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) এর অবনতিতে অবদান রাখে। বিশেষ করে, এমএমপি-1, একটি কোলাজেনেস, কোলাজেন প্রকার I এবং III [5] এর বিভাজনের সাথে জড়িত। কোলাজেন প্রকার I এবং III, ECM এর প্রধান উপাদান, ত্বকের ডার্মিসকে সমর্থন এবং শক্তি প্রদান করতে সক্ষম এবং তাদের অব্যবস্থাপনা বয়স্ক ত্বকের বৈশিষ্ট্যগত কুঁচকে যাওয়া এবং শিথিলতার দিকে পরিচালিত করে [6]। ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-বিটা (TGF) হল তিনটি ভিন্ন আইসোফর্ম, TGF 1, TGF 2 এবং TGF 3 সহ একটি সর্বব্যাপী এবং শক্তিশালী সাইটোকাইন, যা মানুষের ত্বকের ডার্মিসে কোলাজেন সংশ্লেষণকে ইতিবাচকভাবে নিয়ন্ত্রণ করতে পারে [2]। TGF গুলি TGF রিসেপ্টর প্রকার I (T RI) এবং II (T RII) সহ নির্দিষ্ট কোষের পৃষ্ঠের সেরিন/থ্রোনাইন কাইনেজ রিসেপ্টর কমপ্লেক্সগুলির সাথে মিথস্ক্রিয়া করে তাদের সংকেত শুরু করে। T RI ফসফোরিলেশন R-Smads (Smad2 এবং Smad3) এর ফসফোরিলেশনকে ট্রিগার করে। সক্রিয় R-Smads এর নিউক্লিয়াস ট্রান্সলোকেশন নিয়ন্ত্রণ করতে Smad4 এর সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করে এবং Smad-বাইন্ডিং এলিমেন্ট (SBE) [7, 8] এর প্রবর্তকদের সাথে আবদ্ধ হওয়ার মাধ্যমে ট্রান্সক্রিপশনলি কোলাজেন প্রকার I এবং III সক্রিয় করে। মাউন্টিং প্রমাণ ইঙ্গিত করে যে উন্নত ROS প্রজন্ম, অভ্যন্তরীণ বা ফটোজিং দ্বারা প্ররোচিত, TGF/Smad সিগন্যালিং পথের দুর্বলতায় অবদান রাখে, যার ফলস্বরূপ মানুষের ত্বকের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে কোলাজেন সংশ্লেষণ হ্রাস পায় [9, 10]।
cistanche (3,5,7-ট্রাইহাইড্রোক্সিফ্লাভোন), ফ্ল্যাভোনয়েড পরিবারের একটি প্রাকৃতিক সদস্য, আলপিনিয়া অফিসিনারাম এবং প্রোপোলিসে প্রচুর পরিমাণে পাওয়া যায়। সিস্টানচে ইস্কেমিক স্ট্রোক, ডায়াবেটিস এবং বিভিন্ন ধরণের ক্যান্সারের চিকিত্সার জন্য একটি সম্ভাব্য প্রার্থী [11-13]। উপরন্তু, cistanche র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি কার্যকলাপের অধিকারী [14, 15]। আমরা পূর্বে দেখিয়েছি যে cistanche H2O2-প্রদাহকে কমিয়েছে এবং HS68 কোষে ইনসুলিনের মতো গ্রোথ ফ্যাক্টর 1 রিসেপ্টর (IGFI-R)/ERK1/2 সিগন্যালিং পাথওয়ের মাধ্যমে কোলাজেন গঠনের প্রচার করেছে [16, 17]। তদ্ব্যতীত, একটি গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে সিস্টানচেকে আলপিনিয়া অফিসিনারামের যৌগ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল এবং ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট কোষগুলিতে কোলাজেনেস প্রতিরোধক প্রভাব রয়েছে [18]। যাইহোক, সিস্টানচ কীভাবে ত্বকের ত্বকের বার্ধক্য নিয়ন্ত্রণ করে তার সাথে সম্পর্কিত আরও বিশদ আণবিক প্রক্রিয়া অজানা।
MicroRNAs (miRNAs) হল ছোট, একক স্ট্র্যান্ডেড, নন-কোডিং RNA অণুর একটি গ্রুপ যার গড় দৈর্ঘ্য 22 নিউক্লিওটাইড। পরিপক্ক miRNA গুলি DNA ক্রম থেকে প্রতিলিপি করা হয়। বেশিরভাগ ক্ষেত্রে, পরিপক্ক miRNAs mRNA অনুবাদকে নীরব করার জন্য লক্ষ্য mRNA-এর 3′-অঅনুবাদিত অঞ্চল (UTRs) এর সাথে আবদ্ধ হয় [19]। মানুষের ত্বকে, miRNAs কোষ বিপাক, ক্যান্সার, সেন্সেন্স এবং কোলাজেন গঠনের নিয়ন্ত্রণে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে [20-23]। উদাহরণস্বরূপ, miR-377 ডিএনএ মিথাইলট্রান্সফেরেজ 1 (DNMT1) অভিব্যক্তিকে বাধা দেওয়ার মাধ্যমে ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট সেন্সেন্সকে প্ররোচিত করতে পারে, যা পরবর্তীতে p53 প্রোমোটার এবং ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট সেন্সেন্স [22]-এ কম মেথিলেশনের দিকে পরিচালিত করে। মানব ত্বকের UVB-প্ররোচিত ক্ষতিতে miRNA প্রোফাইল
প্যাপিলা কোষ (এনএইচডিপি) আগে তদন্ত করা হয়েছিল [24]। যাইহোক, এমআইআরএনএ রেগুলেশনের মাধ্যমে ইউভিবি-প্ররোচিত ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট সেন্সেন্স, বিশেষ করে প্রাকৃতিক যৌগ জড়িত হওয়ার ক্ষেত্রে অনেকাংশে অজানা। এই গবেষণার লক্ষ্য ছিল H2O2/UVB-প্ররোচিত ত্বকের ক্ষতির বিরুদ্ধে cistanche-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের পাশাপাশি এই প্রক্রিয়ায় microRNA- মধ্যস্থতাকারী কোলাজেন অবক্ষয়ের ভূমিকা তদন্ত করা। আমরা আরও লক্ষ্য করেছি কোলাজেন সংশ্লেষণ নিয়ন্ত্রণে জড়িত মাইক্রোআরএনএগুলি সনাক্ত করা।
ফলাফল
cistanche HS68 হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে UVB/H2O2-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটি বাধা দেয়
ভিট্রোতে সিস্টানচে (চিত্র 1A) এর সাইটোটক্সিসিটি তদন্ত করার জন্য, HS68 কোষগুলিকে সিস্টানচে বিভিন্ন ডোজ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল (0, 10, 20, 30, 40, 50 μM) 24 ঘন্টার জন্য এমটিটি পরীক্ষার ফলাফল দেখিয়েছে যে সিস্টানচে এইচএস 68 কোষে সাইটোটক্সিক ছিল না (চিত্র 1 বি)। এর পরে, আমরা 24 ঘন্টার জন্য H2O2 (0, 100, 150, 200, 250, 300 μM) এবং UVB (0, 25, 30, 40, 50, 60 mJ/cm²) এর বিভিন্ন ডোজে HS68 কোষগুলিকে প্রকাশ করেছি। H2O2 এবং UVB চিকিত্সা ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস করেছে (চিত্র 1C, 1D)। H2O2 এবং UVB এক্সপোজারের পরে cistanche-এর সাইটোপ্রোটেক্টিভ বৈশিষ্ট্যগুলি মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা H2O2- (200 μM) এবং UVB-প্ররোচিত (40 mJ/cm) অনুসরণ করে cistanche এর বিভিন্ন ঘনত্ব (10, 20, 30 μM) সহ HS68 কোষকে চিকিত্সা করেছি ) ক্ষতি। H2O2 বা UVB একা চিকিৎসা
HS68 কোষে প্রভাব।
কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস কোষের মৃত্যু বা বৃদ্ধি বাধার কারণে হয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা H2O2 (50, 100, 200, 300, 400 μM) এর বিভিন্ন ডোজের সংস্পর্শে আসা HS68 কোষগুলিতে পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা বেশ কয়েকটি অ্যাপোপটোসিস এবং বেঁচে থাকার মার্কারগুলির অভিব্যক্তি পরীক্ষা করেছি। 24 ঘন্টার জন্য আমরা p-Akt-এর মতো বেঁচে থাকা মার্কারগুলির উল্লেখযোগ্যভাবে কমে যাওয়া অভিব্যক্তি এবং বর্ধিত অভিব্যক্তি খুঁজে পেয়েছি
চিত্র 1. cistanche HS68 হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে UVB/H2O2-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটি বাধা দেয়। (A) cistanche এর রাসায়নিক গঠন। (B) HS68 কোষের কোষের কার্যক্ষমতা বিভিন্ন ঘনত্বের (10, 20, 30, 40, 50 µM সহ চিকিত্সা করা হয় ) 24 ঘন্টার জন্য। (C এবং D) H2O2 (100, 150, 200, 250, 300 µM) এর বিভিন্ন ডোজ বা UVB (25, 30, 40, 50, 60 J/cm2 ) দ্বারা বিকিরণিত 24 ঘন্টার জন্য উন্মুক্ত HS68 কোষের কোষের কার্যক্ষমতা। (E এবং F) H2O2 (200 µM) এর সংস্পর্শে আসা HS68 কোষের কোষের কার্যকারিতা বা UVB (40 J/cm2 ) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য বিকিরণ করা হয় এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য cistanche (10, 20, 30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। সিস্টাঞ্চের সাইটোপ্রোটেকটিভ প্রভাবগুলি এমটিটি অ্যাস দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। কন্ট্রোল সেলগুলিকে 100 শতাংশ কার্যকরতা বরাদ্দ করা হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001 বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; ##P <0.01, ###P <0.001 বনাম H2O2 বা UVB-চিকিত্সা করা কোষ।
TGF/Smad সিগন্যালিং মানুষের ত্বকের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে কোলাজেন গঠনের জন্য সহায়ক [25-27]। অতএব, আমরা H2O2 এর সংস্পর্শে থাকা HS68 কোষে TGF/Smad পাথওয়ের মাধ্যমে কোলাজেন সংশ্লেষণে cistanche এর ভূমিকা তদন্ত করেছি। ওয়েস্টার্ন ব্লট ফলাফল ইঙ্গিত করে যে সিস্টানচে উল্লেখযোগ্যভাবে TGF/Smad সিগন্যালিং এবং সেইসাথে H2O2-উন্মোচিত HS68 কোষে কোলাজেন সংশ্লেষণকে উন্নত করেছে (চিত্র 4A)। অধিকন্তু, কোলাজেন টাইপ I এবং III এর অব্যবস্থাপনা বয়স্ক ত্বকের ফাইব্রোব্লাস্টগুলির একটি সাধারণ বৈশিষ্ট্য [২৮]। যেহেতু এমএমপি পরিবার কোলাজেন ক্যাটাবোলিজমের সাথে জড়িত [২৯], আমরা পরবর্তীতে এমএমপি-1 অ্যাক্টিভেশনে সিস্টাঞ্চের প্রভাব নিশ্চিত করেছি। আমরা দেখতে পেয়েছি যে cistanche H2O2-বর্ধিত MMP-1 স্তর (চিত্র 4A) দমন করে HS68 কোষে কোলাজেন ক্ষয় রোধ করে।
তদ্ব্যতীত, আমরা একাকী H2O2 এর সাথে চিকিত্সা করা বা ইমিউনোব্লটিং এবং ইমিউনোফ্লোরোসেন্স স্টেনিং ব্যবহার করে সিস্টানচে সহ-চিকিত্সা করা HS68 কোষগুলির তুলনা করে এই প্রতিরক্ষামূলক ক্রিয়াটির অন্তর্নিহিত সাবসেলুলার আণবিক প্রক্রিয়া সনাক্ত করেছি। cistanche চিকিত্সা p-smad2/3 এবং Smad4 এর পারমাণবিক সঞ্চয়কে উন্নত করেছে যা HS68 কোষে H2O2 এর সংস্পর্শে ব্যাহত হয়েছিল
(চিত্র 4B, 4C)। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে সিস্টাঞ্চ HS68 কোষে TGF/Smad পাথওয়ে সক্রিয় করার মাধ্যমে H2O2-প্রেরিত কোলাজেন ফ্র্যাগমেন্টেশনকে উন্নত করতে পারে।
চিত্র 4. cistanche HS68 কোষে H2O2-প্ররোচিত TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ পথের দুর্বলতাকে কমিয়ে দেয়। (A) HS68 কোষগুলি 1 ঘন্টার জন্য H2O2 (200 µM) এর সংস্পর্শে আসে এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য সিস্টানচে (30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। কোলাজেন সংশ্লেষণ-সম্পর্কিত পাথওয়ে উপাদানগুলির প্রোটিন অভিব্যক্তি (TGF , p-smad2/3, Smad4, COL1A1, COL3A1) এবং কোলাজেন অবক্ষয়-সম্পর্কিত প্রোটিন (MMP-1) ওয়েস্টার্ন ব্লট দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল৷ (বি) পারমাণবিক এবং সাইটোসোলিক ভগ্নাংশে p-smad2/3, Smad4 এর প্রোটিন অভিব্যক্তি পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। GAPDH একটি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P < 0।{35}}5, **P < 0.01, ***P < 0.001 বনাম। চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; #P <0.05, ##P <0.01, ###P <0.001 বনাম H2O2-চিকিত্সা করা কোষ। (C) অ্যান্টি-p-Smad2/3, Smad4 অ্যান্টিবডি এবং FITC/PE-কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি p-Smad2/3 (সবুজ), Smad4 (লাল) অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। DAPI নিউক্লিয়াস অবস্থান (নীল) নির্দেশ করে। চিত্রগুলি একটি ফ্লোরসেন্স মাইক্রোস্কোপ (200×) ব্যবহার করে ক্যাপচার করা হয়েছিল।
যে প্রক্রিয়াগুলি দ্বারা hsa-miR-4535 Smad4 এর অভিব্যক্তি এবং HS68 কোষে এর ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিংয়ের উপর প্রভাব ফেলে তা আরও নির্ধারণ করতে, আমরা HS68 কোষগুলিকে hsa-miR-4535 অনুকরণ বা ইনহিবিটর দিয়ে স্থানান্তরিত করেছি এবং Smad4 পরিমাপ করেছি। এবং এর ডাউনস্ট্রিম কোলাজেন এক্সপ্রেশন। ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে hsa-miR-4535 দ্বারা hsa-miR-4535 ইনহিবিটর দ্বারা নিষেধাজ্ঞা উল্লেখযোগ্যভাবে Smad4 mRNA এবং H2O2-চিকিত্সা করা HS68 কোষে প্রোটিন এক্সপ্রেশনের নিম্ননিয়ন্ত্রণকে বিপরীত করেছে (চিত্র 7A–7C) . অধিকন্তু, hsa-miR-4535 দমন করা H2O2-প্রেরিত COL1A1 এবং COL3A1 প্রতিবন্ধকতা H2O2-চিকিত্সা করা HS68 কোষে আংশিকভাবে পুনরুদ্ধার করেছে (চিত্র 7C)।
বিপরীতভাবে, hsa-miR-4535 মিমিক ট্রান্সফেকশনের ফলে বর্ধিত hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশন H2O2 (চিত্র 7D–7F) এর সংস্পর্শে থাকা HS68 কোষে Smad4-এর সিস্টানচে-মিডিয়াটেড আপগ্র্যুলেশনকে অবরুদ্ধ করে। এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন miR-4535 আংশিকভাবে cistanche-প্ররোচিত COL1A1 এবং COL3A1 মাত্রা হ্রাস করেছে (চিত্র 7F)। hsa-miR-4535 (চিত্র 8A–8C) এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন বা siRNA (চিত্র 8D, 8E) দ্বারা Smad4 প্রতিরোধের ফলে H2O2 এক্সপোজারের পরে সিস্টানচে চিকিত্সার অধীনে কোলাজেন সংশ্লেষণ হ্রাস পেয়েছে। আশ্চর্যজনকভাবে, আমরা দেখতে পেয়েছি যে উভয়ই সরাসরি Smad4
নীরবতা এবং hsa-miR দিয়ে চিকিত্সা-4535 H2O2-চিকিত্সা করা HS68 কোষে বিপরীত cistanche-প্ররোচিত কোলাজেন সংশ্লেষণের অনুকরণ করে। একসাথে নেওয়া, আমরা উপসংহারে পৌঁছেছি যে cistanche কোলাজেন সংশ্লেষণকে নিয়ন্ত্রিত করে, সম্ভাব্যভাবে H2O2 এর সংস্পর্শে থাকা HS68 কোষে Smad4 সংকেত বাড়াতে hsa-miR-4535 স্তর হ্রাস করার মাধ্যমে।
চিত্র 5. Hsa-miR-4535 লক্ষ্য Smad4. (A) সিস্টাঞ্চের সাথে চিকিত্সা করা HS68 কোষে মাইক্রোআরএনএ এক্সপ্রেশন মাইক্রোয়ারে ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। (B) ভেন ডায়াগ্রাম সম্ভাব্য mRNA প্রার্থীদের চিত্রিত করে যা miRDB এবং TargetScanHuman ডেটাবেসের উপর ভিত্তি করে hsa-miR-4535 দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হতে পারে। Hsa-miR-4535 এর জন্য Smad4-3′-UTR mRNA-তে পুটেটিভ miRNA-বাইন্ডিং সাইটগুলির ক্রম বিশ্লেষণ। মিলগুলি সরল রেখা দ্বারা নির্দেশিত হয়। (C) HS68 কোষগুলি Smad4-3′-UTR-WT (ওয়াইল্ড-টাইপ; 0.5 µg/mL) প্লাস hsa-miR-4535 মিমিক (2{) এর সাথে সহ-স্থানান্তরিত হয়েছিল {25}} nM) বা Smad4-3′-UTR MT (মিউট্যান্ট; 0.5 µg/mL) প্লাস hsa-miR-4535 মিমিক (20 nM) 24 ঘণ্টার জন্য। লুসিফেরেজ কার্যকলাপ রেনিলার সাথে নির্ধারিত এবং স্বাভাবিক করা হয়েছিল। ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3); ***P < 0.001, বনাম Smad4-3′-UTR-MT প্লাস hsa-miR-4535 মিমিক গ্রুপ। G1=নিয়ন্ত্রণ, G2=cistanche (10 μM), G3=cistanche (30 μM)
ওয়েস্টার্ন ব্লটিং ফলাফল নিশ্চিত করেছে যে HS68 কোষে cistanche UVB-বর্ধিত MMP-1 এক্সপ্রেশনকে দমন করেছে (চিত্র 9A)। তদুপরি, আমরা ইউভিবি এক্সপোজারের শিকার এইচএস 68 কোষগুলিতে সিস্টাঞ্চের অ্যান্টি-বার্ধক্য প্রভাবকে স্পষ্ট করে দিয়েছি যে সিস্টানচে p16 এবং পি21 স্তরের UVB-প্ররোচিত উচ্চতা হ্রাস করেছে (চিত্র 9A)। সিস্টানচে Smad4 কে লক্ষ্য করে hsa-miR-4535 প্রতিরোধের মাধ্যমে UVB-প্ররোচিত কোলাজেন ব্রেকডাউন হ্রাস করতে পারে কিনা তা মূল্যায়ন করতে, আমরা qPCR ব্যবহার করে UVB এবং cistanche সহ-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে hsa-miR-4535 এবং Smad4 স্তরগুলি তদন্ত করেছি। আমরা দেখতে পেয়েছি যে Hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশনটি UVB-উন্মুক্ত কোষগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছে কিন্তু cistanche চিকিত্সার পরে হ্রাস পেয়েছে। বিপরীতভাবে, Smad4 এক্সপ্রেশনটি UVB এক্সপোজার দ্বারা দমন করা হয়েছিল এবং এই দমনটি সিস্টানচে চিকিত্সা (চিত্র 9B, 9C) দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত হয়েছিল। সম্মিলিতভাবে, আমাদের অনুসন্ধানগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে এইচএস68 কোষে Smad4 সংকেত প্রচার করার জন্য hsa-miR-4535 স্তরগুলিকে দমন করে কোলাজেন গঠনে UVB-প্ররোচিত হ্রাস পুনরুদ্ধার করতে H2O2-এর মতো একই রকম প্রভাব ফেলে।
উপরন্তু, cistanche অ্যাপ্লিকেশন টিজিএফ, p smad2/3, এবং Smad4 প্রোটিন অভিব্যক্তি UVB- প্রতিবন্ধী ত্বকের টিস্যুতে (চিত্র 12C) উদ্ধার করেছে। আমাদের অনুসন্ধানে ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে সিস্টানচে শেষ পর্যন্ত কোলাজেন সংশ্লেষণকে উন্নীত করার জন্য P- smad2/3 সক্রিয় করার জন্য Smad4 এক্সপ্রেশন বাড়ানোর জন্য hsamiR-4535কে বাধা দিয়ে ত্বককে UVB-প্ররোচিত ক্ষতি থেকে রক্ষা করতে পারে (চিত্র 13)।
চিত্র 9. cistanche TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণের পথকে উন্নত করে এবং UVB-উন্মুক্ত HS68 কোষে hsa-miR-4535 অভিব্যক্তিকে বাধা দেওয়ার পাশাপাশি ডার্মাল সেন্সেন্সকে হ্রাস করে। HS68 কোষগুলি UVB (40 mJ/cm2 ) এর সংস্পর্শে এসেছিল এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য cistanche (30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। (A) কোলাজেন সংশ্লেষণ-সম্পর্কিত পাথওয়ে উপাদানগুলির প্রোটিন অভিব্যক্তি (TGF, p-smad2/3, Smad4, COL1A1, COL3A1), কোলাজেন অবক্ষয়-সম্পর্কিত প্রোটিন (MMP{{20}}), এবং সেন্সেন্স- সম্পর্কিত চিহ্নিতকারী (p16 এবং p21) পশ্চিমী দাগ দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। GAPDH একটি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। (B এবং C) hsa-miR-4535 এবং Smad4 এর RNA এক্সপ্রেশন qRT-PCR দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P < 0.05, **P < 0.01, বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; #P <0.05, ##P <0.01 বনাম UVB- উন্মুক্ত কোষ।
আরো জন্য অনুরোধ:
ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: প্লাস 86 15292862950
