পূর্বের ভয় শেখা নতুন ভয়ের স্মৃতিকে সরাসরি কর্টিকাল নেটওয়ার্কের মধ্যে দ্রুত একীকরণ সক্ষম করে পার্ট 3

পরীক্ষামূলক অলঙ্করণ

ডেটা পুনরুত্পাদনযোগ্যতা বিভিন্ন প্রতিলিপি (S1 টেবিল) দিয়ে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। Te2 (চিত্র 1A–1C) তে প্রথম CNQX নিষ্ক্রিয়করণ পরীক্ষাগুলি উচ্চ সংখ্যক প্রতিলিপিতে সঞ্চালিত হয়েছিল কারণ সেগুলিই ছিল প্রথম পরীক্ষা যা আমরা পরিচালনা করেছিলাম এবং আমাদের অধ্যয়নের প্রধান অনুমান পরীক্ষা করার জন্য পরিবেশিত হয়েছিল। ওজন-ভারসাম্যপূর্ণ পদ্ধতিতে বিভিন্ন আচরণগত গোষ্ঠীতে প্রাণীদের অগ্রাধিকার দেওয়া হয়েছিল। একই ব্রুডের পুরুষ প্রাণীগুলিকে এলোমেলোভাবে প্রতিটি পরীক্ষামূলক গ্রুপে বরাদ্দ করা হয়েছিল। আমরা প্রথমে আমাদের অধ্যয়নের মূল অনুমানটিকে সম্বোধন করেছি, অর্থাত্, কর্টিকাল নিষ্ক্রিয়তা পরীক্ষামূলকভাবে নিষ্পাপ ইঁদুর এবং প্রাণীদের মধ্যে একটি নতুন ভয়ের স্মৃতির একীকরণকে ভিন্নভাবে প্রভাবিত করতে পারে যারা পূর্বের ভয়ের ঘটনা শিখেছিল।

পুরুষ প্রাণীদের অত্যন্ত শক্তিশালী স্মৃতি রয়েছে কারণ তাদের একটি শক্তিশালী বেঁচে থাকার প্রবৃত্তি এবং পুনরুত্পাদনের ইচ্ছা রয়েছে। বন্য অঞ্চলে বেঁচে থাকা প্রাণীদের পরিবেশের সাথে আরও ভালভাবে খাপ খাইয়ে নিতে এবং জীবন রক্ষা করার জন্য প্রচুর ভৌগলিক তথ্য, খাবারের ধরন, শিকারী ট্র্যাক এবং দলের সদস্যদের অবস্থান মনে রাখতে হবে।

উদাহরণস্বরূপ, পুরুষ সিংহদের পুরো অঞ্চলের অবস্থা, সদস্যতার সম্পর্ক এবং অঞ্চল এবং তাদের অবস্থা রক্ষা করার জন্য প্রতিযোগীদের অবস্থান মনে রাখতে হবে। পুরুষ জেব্রাদের বেঁচে থাকার এবং পুনরুত্পাদনের জন্য তৃণভূমিতে জলের উত্স এবং খাবারের অবস্থান মনে রাখতে হবে। একটি সোডা কোম্পানী একবার একটি বিজ্ঞাপন চালায় যে দেখায় যে একটি পুরুষ মেরু ভালুক একজন ডুবুরি এবং তার অনন্য ঘ্রাণ মনে রাখতে পারে যাতে পরের বার যখন তারা তাকে দেখে তখন সে তাকে সনাক্ত করতে পারে।

অতএব, পুরুষ প্রাণীদের তাদের অঞ্চল রক্ষা, পর্যাপ্ত খাদ্য সরবরাহ এবং বংশ বৃদ্ধির ক্ষেত্রে শক্তিশালী স্মৃতি থাকতে হবে। এটি তাদের মানব গবেষণায় গুরুত্বপূর্ণ বিষয় করে তোলে, উদাহরণস্বরূপ, স্মৃতিশক্তি দুর্বলতা এবং আলঝেইমার রোগের মতো রোগগুলি অন্বেষণ করা।

মানব জগতে, আমরা পুরুষ প্রাণীদের স্মৃতি থেকেও অনুপ্রেরণা নিতে পারি। নতুন জিনিসের প্রতি ক্রমাগত এক্সপোজার, ক্রমাগত শেখা এবং চিন্তাভাবনা আমাদের স্মৃতিশক্তি এবং অভিযোজনযোগ্যতা বাড়াতে পারে এবং আমাদের জীবনযাত্রার মান এবং কাজের দক্ষতা উন্নত করতে পারে। অতএব, আসুন আমরা পুরুষ প্রাণীদের কাছ থেকে শিখি, জ্ঞান এবং অভিজ্ঞতা সঞ্চয় করতে থাকি, শক্তিশালী বেঁচে থাকার প্রবৃত্তি এবং প্রজনন আকাঙ্ক্ষা থাকতে পারি এবং একটি ভাল ভবিষ্যত তৈরি করি। দেখা যায় আমাদের স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে হবে। Cistanche deserticola উল্লেখযোগ্যভাবে স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে পারে কারণ Cistanche deserticola হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধি উপাদান যার অনেকগুলি অনন্য প্রভাব রয়েছে, যার মধ্যে একটি হল স্মৃতিশক্তি উন্নত করা। কিমা করা মাংসের কার্যকারিতা অ্যাসিড, পলিস্যাকারাইড, ফ্ল্যাভোনয়েড ইত্যাদি সহ বিভিন্ন সক্রিয় উপাদান থেকে আসে৷ এই উপাদানগুলি বিভিন্ন উপায়ে মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যকে উন্নীত করতে পারে৷

মস্তিষ্কের কার্যকারিতা উন্নত করার উপায়গুলি জানুন ক্লিক করুন

এই গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগত পার্থক্যের ক্ষেত্রে, আমরা শেষ পর্যন্ত স্যালাইনের ইনজেকশনের মাধ্যমে অতিরিক্ত নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীগুলি সম্পাদন করেছি। অপটোজেনেটিক পরীক্ষা-নিরীক্ষায় অনুরূপ পদ্ধতি প্রয়োগ করা হয়েছিল, যেখানে AAV-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী শুধুমাত্র নিষ্পাপ এবং পূর্বে প্রশিক্ষিত ইঁদুরের মধ্যে পরিসংখ্যানগত পার্থক্য সনাক্ত করার পরে সঞ্চালিত হয়েছিল। এই পরীক্ষামূলক সময়সূচীগুলি আমাদেরকে অপ্রয়োজনীয় নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী এবং অপ্রয়োজনীয় প্রাণীদের ব্যবহার এড়াতে অনুমতি দেয়, যা প্রাণী পরীক্ষা সংক্রান্ত ইউরোপীয় এবং ইতালীয় আইনের একটি মূল সমস্যা (3 রুপি নীতি)।

আচরণগত পদ্ধতি

সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা দিনের আলোর পর্যায়ে (8 AM থেকে 4 PM) চালানো হয়েছিল। পরীক্ষামূলক চাহিদার উপর নির্ভর করে প্রাণীগুলিকে এককভাবে সুবিধা থেকে পরীক্ষামূলক কক্ষে বিভিন্ন ছোট স্বচ্ছ বালতিতে পরিবহন করা হয়েছিল।

শ্রবণ প্রশিক্ষণ: প্রথম আচরণগত অধিবেশন। শ্রবণ ভয়-কন্ডিশনড প্রাণী (CS1-CS2)। এই দলে, ইঁদুরগুলিকে তাদের বাড়ির খাঁচা থেকে আলতো করে নেওয়া হয়েছিল এবং আবাসন ঘর থেকে শব্দরোধী ঘরে নিয়ে যাওয়া হয়েছিল। সেখানে একবার, প্রাণীগুলিকে একটি আয়তক্ষেত্রাকার কালো খাঁচা (35 × 40 সেমি) সমন্বিত কন্ডিশনার যন্ত্রপাতির ভিতরে রাখা হয়েছিল যা একটি শক ডেলিভারি সেটআপের সাথে সংযুক্ত একটি স্টেইনলেস স্টিলের রড গ্রিড (1 সেমি ব্যাস, 1.5 সেমি দূরে) দিয়ে সজ্জিত ছিল।

ইঁদুরগুলি 1 মিনিটের জন্য নির্বিঘ্নে রেখে দেওয়া হয়েছিল। এই সময়ের পরে, 15 kHz ফ্রিকোয়েন্সি (প্রতিটি 15 s সময়কাল, 80 dB, 36 s ট্রায়ালের ব্যবধান) একটি বিশুদ্ধ টোন সমন্বিত 7 শর্তযুক্ত উদ্দীপনা (CSs) পরিচালিত হয়েছিল। প্রতিটি স্বরের শেষ 1 সেকেন্ড একটি বেদনাদায়ক US (0.5 mA, 1 s) এর সাথে যুক্ত ছিল। কন্ডিশনিং সেশনের শেষে, ইঁদুরগুলিকে তাদের বাড়ির খাঁচায় ফিরিয়ে আনা হয়েছিল।

শক-শুধু প্রাণী (শক-সিএস 2)। এই গোষ্ঠীতে, ইঁদুরগুলিকে একইভাবে একই কন্ডিশনার যন্ত্রপাতির ভিতরে রাখা হয়েছিল। অবিলম্বে পরে, প্রতিটি ইঁদুর একটির পরপরই 7-পায়ের ধাক্কা (1 s, 0.5 mA) এর শিকার হয়েছিল। উদ্দীপনা শেষে, প্রাণীদের তাদের বাড়ির খাঁচায় ফিরিয়ে আনা হয়েছিল। কন্ডিশনার খাঁচায় সময় স্থায়ীত্ব ছিল 9 সেকেন্ডের কম। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে এই পদ্ধতিটি বেদনাদায়ক উদ্দীপনা এবং সংবেদনশীল উদ্দীপনার মধ্যে সহযোগী প্রক্রিয়াগুলি এড়ানোর অনুমতি দেয় [29,30]।

গন্ধ ভয়-কন্ডিশনড প্রাণী (গন্ধ-CS2)। এই গ্রুপে, উপরের পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীগুলিতে নিযুক্ত একই আয়তক্ষেত্রাকার কালো খাঁচার ভিতরে ইঁদুরগুলি স্থাপন করা হয়েছিল এবং একটি শক ডেলিভারি সেটআপের সাথে সংযুক্ত ছিল। ইঁদুরগুলি 2 মিনিটের জন্য নির্বিঘ্নে রেখে দেওয়া হয়েছিল। এই সময়ের পরে, ভ্যানিলা গন্ধ সমন্বিত 7 টি সিএস পরিচালনা করা হয়েছিল (প্রতিটি সময়কাল 10 সেকেন্ড, 24 সেকেন্ড ট্রায়াল ব্যবধান)। প্রতিটি গন্ধের শেষ 1 সেকেন্ড একটি বেদনাদায়ক US (0.5 mA, 1 s) এর সাথে যুক্ত ছিল। কন্ডিশনিং মডিউলটি একটি বায়ুচলাচল উত্সের কাছে স্থাপন করা হয়েছিল যাতে তাদের অফসেট হওয়ার পরে বিতরণ করা উদ্দীপনার অধ্যবসায় এড়াতে হয়। খাঁচা একটি উপরের গ্রিড সঙ্গে নিশ্চিত করা হয়েছিল. একটি ফ্লো-ডিলিউশন অলফ্যাক্টোমিটার ব্যবহার করে গন্ধ উপস্থাপন করা হয়েছিল। বিশুদ্ধ বাতাস (1.5 লি./মিনিট) একটি সোলেনয়েড ভালভের দিকে নির্দেশিত হয়েছিল, যেটি চালিত হলে 10 মিলি ভ্যানিলা গন্ধযুক্ত 15 মিলি বোতলে বাতাস চলে যায়।

টোন-শুধু প্রাণী (টোন-CS2)। এই গোষ্ঠীর ইঁদুরগুলিকে একই কালো খাঁচার ভিতরে রাখা হয়েছিল এবং মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের অনুপস্থিতিতে বিতরণ করা 15- kHz টোন (7 উদ্দীপনা, 15 সেকেন্ড সময়কাল, 36 s ITI) দিয়ে উপস্থাপন করা হয়েছিল।

প্রাক-উন্মুক্ত প্রাণী (টোন-সিএস1-CS2)। ইঁদুরগুলিকে কন্ডিশনিং খাঁচার ভিতরে রাখা হয়েছিল এবং, 1 মিনিট পরে, তাদের 20 বার একা 15- kHz টোন দিয়ে উপস্থাপন করা হয়েছিল, এবং 24 ঘন্টা পরে একই টোন মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের CS1 হওয়ার সাথে যুক্ত হয়েছিল।

সাদা শব্দ ভয়-কন্ডিশনড প্রাণী (WN-CS2)। এই দলে, ইঁদুরগুলিকে আয়তক্ষেত্রাকার কালো খাঁচার ভিতরে স্থাপন করা হয়েছিল এবং 1 মিনিটের জন্য নির্বিঘ্নে রেখে দেওয়া হয়েছিল। এই সময়ের পরে, একটি WN সমন্বিত 7 টি সিএস (প্রতিটি সময়কাল 15 সেকেন্ড, 75 ডিবি, 36 সেকেন্ড ইন্টার ট্রায়ালের ব্যবধান) পরিচালিত হয়েছিল। প্রতিটি স্বরের শেষ 1 সেকেন্ড একটি বেদনাদায়ক US (0.5 mA, 1 s) এর সাথে যুক্ত ছিল। কন্ডিশনিং সেশনের শেষে, ইঁদুরগুলিকে তাদের বাড়ির খাঁচায় ফিরিয়ে আনা হয়েছিল।

শ্রবণ ভয় শিক্ষা: দ্বিতীয় আচরণগত প্রশিক্ষণ। উপরের অনুচ্ছেদে বর্ণিত পদ্ধতির দুই সপ্তাহ পরে, প্রাণীদের অন্য একটি ভিন্ন শ্রবণ ভয় কন্ডিশনার টাস্কে প্রশিক্ষণ দেওয়া হয়েছিল। আমাদের পূর্ববর্তী কাজ [10] হিসাবে, ইঁদুরগুলিকে একটি স্ট্যান্ডার্ড স্কিনারের বাক্সে রাখা হয়েছিল, এবং 2 মিনিটের জন্য অবিচ্ছিন্ন রেখে দেওয়া হয়েছিল। এই সময়ের পরে, 3 kHz ফ্রিকোয়েন্সি (প্রতিটি সময়কাল 8 s, 80 dB, 22 s আন্তঃ-পরীক্ষা ব্যবধান) বিশুদ্ধ টোন সমন্বিত 7 CSs বিতরণ করা হয়েছিল। প্রতিটি স্বরের শেষ 1 সেকেন্ড একটি বেদনাদায়ক US (0.5 mA, 1 s) এর সাথে যুক্ত ছিল। কন্ডিশনিং সেশনের শেষে, ইঁদুরগুলিকে তাদের বাড়ির খাঁচায় ফিরিয়ে আনা হয়েছিল।

স্মৃতি ধরে রাখার ভয়। CS2 (3 kHz) তে সম্প্রতি অর্জিত শ্রবণ ভয় স্মৃতি ধরে রাখার 4 দিন পরে পরীক্ষা করা হয়েছিল। অপটোজেনেটিক্স পরীক্ষা-নিরীক্ষার জন্য, সাম্প্রতিক মেমরির পরীক্ষাটি 24 ঘন্টা পরে লেজার ডেলিভারির মাধ্যমে সঞ্চালিত হয়েছিল CS2-যে সময়ে আমরা CNQX-এর প্রশাসনের মাধ্যমে কর্টিকাল নিষ্ক্রিয়করণ সম্পাদন করেছিলাম (অর্থাৎ, 24 ঘন্টা পরে প্রশিক্ষণ)। ইঁদুরগুলি কন্ডিশনার জন্য ব্যবহৃত যন্ত্রের থেকে আলাদা একটি যন্ত্রে অভ্যস্ত ছিল এবং প্রাসঙ্গিক সংকেতগুলিতে শর্তযুক্ত ভয়ের আচরণ এড়াতে একটি ভিন্ন ঘরে রাখা হয়েছিল [10,62]।

নতুন যন্ত্রটিতে একটি স্বচ্ছ প্লাস্টিকের খাঁচা রয়েছে যার একটি কালো রঙের সাইড একটি নিষ্কাশন ফ্যান দিয়ে সজ্জিত একটি শব্দ-ক্ষম বাক্সের মধ্যে ঘেরা, যা ঘের থেকে দুর্গন্ধযুক্ত বাতাস দূর করে এবং 60 ডিবি এর পটভূমির শব্দ প্রদান করে। অভ্যাস সেশনের সময় প্রাণীদের দিনে 5 মিনিটের জন্য খাঁচা অন্বেষণ করার অনুমতি দেওয়া হয়েছিল। ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার পরীক্ষার দিনে, 2 মিনিট বিনামূল্যে অনুসন্ধানের পরে, আমরা 3 kHz (8 s—22 ITI) এর 4 CS2 বিতরণ করেছি যার পরে কোনও US অনুসরণ করা হয়নি৷

পরীক্ষামূলক চাহিদার প্রয়োজন হলে, ইঁদুরগুলিকে তারপরে দূরবর্তী ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল, দ্বিতীয় শ্রবণ ভয় কন্ডিশনিং ট্রায়ালের 2 সপ্তাহ আগে অর্জিত হয়েছিল। এই লক্ষ্যে, 3-kHz টোনে ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার পরীক্ষার 7 দিন পরে, প্রাণীদের একটি অভিনব পরিবেশে (একটি কালো এবং সাদা ডোরাকাটা খাঁচা) রাখা হয়েছিল এবং তারপরে 15-kHz টোন দিয়ে উপস্থাপন করা হয়েছিল। 36 এর ব্যবধানে চারটি টোন উপস্থাপন করা হয়েছিল।

প্রাসঙ্গিক প্রশিক্ষণ: প্রথম আচরণগত অধিবেশন। প্রাসঙ্গিক ভয় কন্ডিশনার গ্রুপ (CtxA-CtxB)। এই দলে, ইঁদুরগুলিকে তাদের বাড়ির খাঁচা থেকে আলতো করে নিয়ে যাওয়া হয়েছিল, একটি বালতিতে রাখা হয়েছিল এবং আবাসন ঘর থেকে শব্দরোধী ঘরে নিয়ে যাওয়া হয়েছিল। সেখানে একবার, প্রাণীগুলিকে কন্ডিশনার যন্ত্রপাতির ভিতরে রাখা হয়েছিল যা উপরে উল্লিখিত আয়তক্ষেত্রাকার কালো খাঁচা নিয়ে গঠিত, একটি শক ডেলিভারি সেটআপের সাথে সংযুক্ত স্টেইনলেস স্টিলের রড গ্রিড দিয়ে সজ্জিত। ইঁদুরগুলি 1 মিনিটের জন্য নির্বিঘ্নে রেখে দেওয়া হয়েছিল। এই সময়ের পরে, 5 US (0.5 mA, 1 s) 51 সেকেন্ড সময়ের ব্যবধানে পরিচালিত হয়েছিল। অধিবেশন শেষে, প্রাণীদের তাদের বাড়ির খাঁচায় ফিরিয়ে আনা হয়েছিল।

শুধুমাত্র শক গ্রুপ (শক-CtxB)। ইঁদুর, একবার কন্ডিশনিং যন্ত্রের ভিতরে রাখা হলে, অবিলম্বে একের পর এক 5-ফুট ধাক্কা (1 s, 0.5 mA) পেয়ে যায়। কন্ডিশনার খাঁচায় সময় স্থায়ীত্ব ছিল 7 সেকেন্ডের কম। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে এই পদ্ধতিটি বেদনাদায়ক উদ্দীপনা এবং সংবেদনশীল উদ্দীপনার মধ্যে সহযোগী প্রক্রিয়াগুলি এড়ানোর অনুমতি দেয় [29,30]।

শুধুমাত্র শক গ্রুপ (শক-CtxB)। ইঁদুর, একবার কন্ডিশনিং যন্ত্রের ভিতরে রাখা হলে, অবিলম্বে একের পর এক 5-ফুট ধাক্কা (1 s, 0.5 mA) পেয়ে যায়। কন্ডিশনার খাঁচায় সময় স্থায়ীত্ব ছিল 7 সেকেন্ডের কম। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে এই পদ্ধতিটি বেদনাদায়ক উদ্দীপনা এবং সংবেদনশীল উদ্দীপনার মধ্যে সহযোগী প্রক্রিয়াগুলি এড়ানোর অনুমতি দেয় [29,30]।

নতুন প্রাসঙ্গিক ভয় কন্ডিশনার এবং সাম্প্রতিক ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখা। উপরের অনুচ্ছেদে বর্ণিত পদ্ধতির দুই সপ্তাহ পর, সমস্ত গোষ্ঠীকে একটি বেদনাদায়ক মার্কিন (0.5 mA, 1 s) সঙ্গে একটি নতুন প্রাসঙ্গিক পরিবেশ (স্কিনারের বক্স মডিউল, একটি ভিন্ন ঘরে স্থাপন করা) সংযুক্ত করার জন্য প্রশিক্ষণ দেওয়া হয়েছিল। . প্রতিটি প্রাণীকে নতুন চেম্বারের ভিতরে স্থাপন করা হয়েছিল এবং 2 মিনিটের জন্য নির্বিঘ্নে রেখে দেওয়া হয়েছিল। তারপর, এটি 30 সেকেন্ডের ব্যবধানে 5 মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে উন্মুক্ত করা হয়েছিল।

ভয় কন্ডিশনার পদ্ধতির 4 দিন পরে স্কিনারের বক্স চেম্বারে 3 মিনিটের জন্য আবার ইঁদুর রেখে প্রাসঙ্গিক ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার পরীক্ষা করা হয়েছিল। অপটোজেনেটিক্স পরীক্ষা-নিরীক্ষার জন্য, সাম্প্রতিক মেমরির পরীক্ষাটি লেজার ডেলিভারির 24 ঘন্টা পরে করা হয়েছিল CtxB-ইউএস শেখার পরে যে সময়ের ব্যবধানে আমরা সিএনকিউএক্সের প্রশাসনের মাধ্যমে কর্টিকাল নিষ্ক্রিয়করণ (অর্থাৎ, প্রশিক্ষণের 24 ঘন্টা পরে) সাদৃশ্য রেখেছিলাম। পরীক্ষামূলক চাহিদার প্রয়োজন হলে, নতুন অ্যাসোসিয়েশনের 2 সপ্তাহ আগে মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে জোড়া দেওয়া প্রসঙ্গে প্রাণীদের রেখে দূরবর্তী ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার জন্য ইঁদুরগুলি পরীক্ষা করা হয়েছিল।

বিভিন্ন প্রাসঙ্গিক পদ্ধতি অনুসারে প্রাণীগুলিকে 2টি ভিন্ন বালতিতে কন্ডিশনার চেম্বারে নিয়ে যাওয়া হয়েছিল।

হিমায়িত পরিমাপ। সমস্ত পরীক্ষামূলক পদ্ধতিতে, ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার মূল্যায়ন একটি হিমায়িত প্রতিক্রিয়া হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল [10], শ্বাসযন্ত্রের গতিবিধি ব্যতীত সোমাটিক গতিশীলতার সম্পূর্ণ অনুপস্থিতি হিসাবে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি প্রাণীর জন্য, হিমায়িত অবস্থায় ব্যয় করা সময়ের পরিমাণ (সেকেন্ডে) 2 জন স্বাধীন পর্যবেক্ষক দ্বারা অফলাইনে পরিমাপ করা হয়েছিল যারা প্রাণী গোষ্ঠীতে অন্ধ ছিল।

অস্ত্রোপচার পদ্ধতি

টার্গেট সাইটগুলিতে নির্বাচিত পদার্থগুলি পরিচালনা করার জন্য, ইঁদুরগুলিকে আইসোফ্লুরেন দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল: আনয়নটি 2 লি/মিনিট মেডিকেল বাতাসে 4% [ভোল/ভোল] এ সঞ্চালিত হয়েছিল এবং 2% [ভোল/ভোল] এ অবিচ্ছিন্ন এক্সপোজারে প্রসারিত হয়েছিল) যখন স্টেরিওট্যাক্সিক যন্ত্রপাতিতে ইঁদুর বসানো হয়েছিল।

মাথার খুলির একটি ছেদ তৈরি করা হয়েছিল, এবং একটি 28- গেজ ইনফিউশন সূঁচের অনুপ্রবেশের অনুমতি দেওয়ার জন্য ছোট বুর গর্তগুলি ড্রিল করা হয়েছিল। একটি ইনফিউশন পাম্পে লাগানো একটি 10-উল হ্যামিল্টন সিরিঞ্জ পদার্থ সরবরাহ করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ইনফিউশনের পরে, সুইটি অতিরিক্ত 3 মিনিটের জন্য জায়গায় রেখে দেওয়া হয়েছিল। তারপরে স্টেইনলেস স্টিলের ক্ষত ক্লিপ দিয়ে ছেদটি বন্ধ করা হয়েছিল, এবং প্রাণীটিকে ব্যথানাশক/অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি কেটোপ্রোফেন (2 মিলিগ্রাম/কেজি শরীরের ওজন) একটি সাবকুটেনিয়াস ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং অ্যানেস্থেসিয়া থেকে পুনরুদ্ধার না হওয়া পর্যন্ত প্রাণীটিকে উষ্ণ এবং পর্যবেক্ষণে রাখা হয়েছিল।

পূর্ববর্তী গবেষণার মতো [10,32-34], প্রাণীদের ক্যানুলেশন অপ্রয়োজনীয় ছিল, সক্রিয় যৌগগুলি সরাসরি স্টেরিওট্যাক্সিকভাবে পরিচালিত হয়। এই পদ্ধতিটি সুবিধাজনক কারণ স্থায়ী-ক্যানুলেটিং পদ্ধতির অন্তর্নিহিত অস্ত্রোপচারের ট্রমা এড়ানো হয়, এইভাবে একটি একক সুই অনুপ্রবেশ [10,32-34] ট্রমাকে সীমাবদ্ধ করে। প্রকৃতপক্ষে, সাধারণ অ্যানেশেসিয়া মেমরি একত্রীকরণকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করে না [10,32-34]। শেখার পরীক্ষার সাথে সম্পর্কিত যৌগ প্রশাসনের সময় সঠিক ছিল তা নিশ্চিত করার জন্য যাতে ইঁদুররা 1 ঘন্টার কাছাকাছি এবং প্রশিক্ষণের প্রায় 1 দিন পরে নির্বাচিত যৌগগুলি গ্রহণ করে, পরিকল্পিত ইনজেকশনের সময়ের 5 মিনিট আগে আইসোফ্লুরেন অ্যানেস্থেশিয়া প্ররোচিত করা হয়েছিল, যেমন, 55 মিনিটে প্রশিক্ষণের 60 মিনিট পরে ইঁদুরের মধ্যে এবং 23 ঘন্টা এবং 55 মিনিট পশুদের মধ্যে প্রশিক্ষণের 24 ঘন্টা পরে ইনজেকশন দেওয়া হয়। প্রতিটি ইঁদুরকে শর্তযুক্ত করা হয়েছিল এবং তারপরে আলাদাভাবে অপারেশন করা হয়েছিল। বিভিন্ন আচরণগত গোষ্ঠীর অন্তর্গত প্রাণীদের একটি আন্তঃপ্রাণ উপায়ে চালিত করা হয়েছিল।

এএমপিএ/কাইনেট গ্লুটামেট রিসেপ্টর সিএনকিউএক্স ({{0}সায়ানো-7-নাইট্রোকুইনোক্সালাইন-2,3-ডায়ন) (টোক্রিস, 10 এনজি /ul) [20,21] জীবাণুমুক্ত স্যালাইন দ্রবণে (NaCl, 0.9%) দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং HCl এর সাথে pH 7.4 এ সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। প্রোটিন সংশ্লেষণ প্রতিরোধক অ্যানিসোমাইসিন (Merck, 125 ug/ul) ইকুইমোলার এইচসিএল-এ দ্রবীভূত করা হয়েছিল, জীবাণুমুক্ত স্যালাইন দিয়ে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং NaOH-এর সাথে pH 7.4-এ সমন্বয় করা হয়েছিল। জীবাণুমুক্ত স্যালাইন (0.9% NaCl) যানবাহন নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্যাক্সিনোস এবং ওয়াটসন অ্যাটলাস [26] থেকে নেওয়া নিম্নলিখিত স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কগুলিতে এই পদার্থগুলি দ্বিপাক্ষিকভাবে 0.1 উল/মিনিট হারে এবং প্রতি সাইট 0.5 উল ভলিউমে ইনজেকশন করা হয়েছিল, Te2 কর্টিকাল ফিল্ডকে জিলস অ্যাটলাসে রেফার করা হয়েছিল [25]:

সেকেন্ডারি অডিটরি কর্টেক্স (Te2): 1) AP: −5,8 L: ±7,2 DV: −6. 2) AP: -6,8 L: ±7,2 DV: −6.

অগ্রবর্তী সিঙ্গুলেট কর্টেক্স (ACC): 1) AP: +2,5 L: ±0,6 DV: −2,2। 2) AP: +3,7 L: ±0,6 DV: −2,2।

ইনজেকশনের পরিমাণ (0.5 ul প্রতি সাইট) পূর্ববর্তী গবেষণার উপর ভিত্তি করে নির্বাচন করা হয়েছিল যেখানে সক্রিয় যৌগগুলি Te2 [10,34] এবং ACC [55,63] প্রাপ্তবয়স্ক ইঁদুরগুলিতে ইনজেকশন করা হয়েছিল।

ডোরসাল হিপ্পোক্যাম্পাস নিষ্ক্রিয় করতে, সক্রিয় যৌগগুলি নিম্নলিখিত স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কে প্রতি সাইটে 0.6 ul এর ভলিউমে ইনজেকশন করা হয়েছিল:

ডোরসাল হিপ্পোক্যাম্পাস: 1) AP: −2,8 L: ±1,6 DV: −3,3। 2) AP: −4,2 L: ±2,6 DV: −3.

ডোরসাল হিপ্পোক্যাম্পালের অপরিবর্তনীয় ক্ষতগুলি 0.1 ul/ হারে NMDA (Tocris, 18 ug/ul, জীবাণুমুক্ত স্যালাইন দ্রবণে দ্রবীভূত, 0,4 ul প্রতি সাইট) পরিচালনার দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল উপরে উল্লিখিত স্থানাঙ্কের পয়েন্টে মিনিট। একই স্থানাঙ্ক স্যালাইন-ইনজেকশন নিয়ন্ত্রণ এবং শ্যাম-চালিত প্রাণীদের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

লাল রেট্রোবিডস (লুমাফ্লুর, স্যালাইনে 1:2 ডিলিউশন, 0.6 উল) নিম্নলিখিত স্থানাঙ্ক অনুসারে বিএলএ-তে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল: AP: −2.8; এল: ±5.4; DV: −8.3।

পরীক্ষা-নিরীক্ষার শেষে, সিএনকিউএক্স, অ্যানিসোমাইসিন, বা স্যালাইন ইনজেকশনের ক্ষেত্রে সুই ট্র্যাকগুলি বা এনএমডিএ ইনজেকশনের ক্ষেত্রে ঘাগুলির প্রসারণ হিস্টোলজিক্যালি যাচাই করা হয়েছিল। ইঁদুরগুলিকে গভীরভাবে অবেদন দেওয়া হয়েছিল এবং 4% ফর্মালডিহাইড দিয়ে ইন্ট্রাকার্ডিয়ালি পারফিউজ করা হয়েছিল। তাদের মস্তিষ্ক একটি ক্রিওস্ট্যাটে 30 μm এ বিভাগ করা হয়েছিল। নিসল-দাগযুক্ত সিরিয়াল বিভাগগুলি প্রচলিত পদ্ধতি ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং বিভাগগুলিকে 2.5 × বর্ধিত একটি মাইক্রোস্কোপের অধীনে হিস্টোলজিক্যালভাবে যাচাই করা হয়েছিল।

অপটোজেনেটিক পরীক্ষা

ভাইরাস ইনজেকশন। অ্যাডেনো-সম্পর্কিত ভাইরাস AAV5:CaMKII ::eNpHR3।{3}}চেরি এবং নিয়ন্ত্রণ ভেক্টর AAV5:CaMKII -cherry ইউনিভার্সিটি অফ নর্থ ক্যারোলিনা ভেক্টর কোর (চ্যাপেল হিল, নর্থ ক্যারোলিনা, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। থিসেন্টেন্সভাইরাল্টিটারওয়াস5:8 ভাইরাল টাইটার ছিল 5.8 × 10^12 vg/ml উভয় ভাইরাসের জন্য। CaMKII প্রোমোটার ব্যবহার পিরামিডাল নিউরনের পক্ষে ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশন সক্ষম করে। ভাইরাস একটি −80˚C ফ্রিজারে রাখা হয়েছিল। Te2 বা ACC কে লক্ষ্য করে ভাইরাল ইনফিউশনগুলি প্রতিটি গর্তের জন্য 0.5 ul এর ভলিউমে উপরের স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কে সঞ্চালিত হয়েছিল। ভাইরাসটিকে 0.1 উল/মিনিট হারে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল, এবং সুইটি অতিরিক্ত 5 মিনিটের জন্য রেখে দেওয়া হয়েছিল। ভাইরাল ইনজেকশন অপটোজেনেটিক্স পরীক্ষার 4 সপ্তাহ আগে সঞ্চালিত হয়েছিল।

আলোকসজ্জা।

অপটিক ফাইবারগুলি (প্লেক্সন, 200/230 μm কোর; 10 মিমি দৈর্ঘ্য) দ্বিপাক্ষিকভাবে বিএলএ (AP=−2.8, L=± 5.4, V=−8.2 মিমি প্রতিস্থাপন করা হয়েছিল ব্রেগমা থেকে)। লেজার ডায়োড (লেজারগ্লো টেকনোলজিস) এর সাথে মিলিত প্লেক্সব্রাইট অপ্টোজেনেটিক স্টিমুলেশন সিস্টেম ব্যবহার করে BLA-তে Te2 প্রজেকশন বা BLA-তে ACC প্রজেকশনের অপটোজেনেটিক ইনহিবিশন প্রাপ্ত হয়েছিল। হলুদ আলো (589 এনএম) উৎপন্ন হয় এবং একটি অপটিক্যাল ফাইবারের মধ্য দিয়ে যায়। প্রজেকশন সাইটগুলির আলোকসজ্জার জন্য অপটিক ফাইবারের ডগায় আনুমানিক শক্তি ঘনত্ব ছিল 10 থেকে 15 মেগাওয়াট। ভয়ের স্মৃতি ধরে রাখার সময়, টোন শুরু হওয়ার 4 সেকেন্ড আগে হালকা নির্গমন শুরু হয়েছিল, পুরো টোন জুড়ে অব্যাহত ছিল এবং টোন অফসেট হওয়ার 4 সেকেন্ড পরে বন্ধ করা হয়েছিল। প্রাসঙ্গিক ভয় কন্ডিশনার গ্রুপের প্রাণীরা পুরো প্রসঙ্গ অন্বেষণের সময় হালকা উদ্দীপনা পেয়েছে (3 মিনিট)। স্মৃতি ধরে রাখার ট্রায়ালের আগে 2 দিনের জন্য ইঁদুরগুলি প্যাচ কর্ডের সাথে পরিচিত ছিল।

ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি। অপটোজেনেটিক্স পরীক্ষা-নিরীক্ষার সমাপ্তির পর, ভাইরাসের বিস্তার পরীক্ষা করার জন্য ইঁদুরগুলিকে 4% PAF দিয়ে গভীরভাবে চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং ইনট্রাকার্ডিয়ালভাবে পারফিউজ করা হয়েছিল। মস্তিস্কগুলি বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল, 4˚C তাপমাত্রায় রাতারাতি সংরক্ষণ করা হয়েছিল এবং অবশেষে 30% সুক্রোজে স্থানান্তরিত হয়েছিল। করোনাল বিভাগগুলি (30 μm) একটি ক্রিওস্ট্যাটে কাটা হয়েছিল এবং পিবিএসে সংগ্রহ করা হয়েছিল। ফ্রি-ফ্লোটিং বিভাগগুলি RT এ 1 ঘন্টার জন্য একটি ব্লকিং সলিউশনে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। তারপরে, তারা RT-এ রাতারাতি ব্লকিং সলিউশনে প্রাথমিক মনোক্লোনাল মাউস অ্যান্টিবডি অ্যান্টি এমচেরি (1:500 ডিলিউশন, অ্যাবক্যাম) এ ইনকিউব করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, বিভাগগুলিকে পিবিএস দিয়ে ধুয়ে 1 ঘন্টার জন্য RT এ সেকেন্ডারি ফ্লুরোসেন্ট অ্যালেক্সাফ্লুর-568 অ্যান্টি-মাউস অ্যান্টিবডি (1:600, ইনভিট্রোজেন) পিবিএস-এ মিশ্রিত করা হয়েছিল। বিভাগগুলি পিবিএস-এ ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, DAPI (ভেক্টর) ধারণকারী মাউন্টিং মিডিয়া দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছিল এবং কভারস্লিপ করা হয়েছিল।

এনএমডিএ ইনজেকশন নেওয়া ইঁদুরের মস্তিষ্ক একইভাবে সংগ্রহ করা হয়েছিল। ফ্রি-ফ্লোটিং বিভাগগুলি, বেশ কয়েকটি ধুয়ে ফেলার পরে, ঘরের তাপমাত্রায় রাতারাতি ব্লকিং দ্রবণে প্রাথমিক মনোক্লোনাল মাউস অ্যান্টি-নিউন (1:1,000 ডিলিউশন, মার্ক) অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, বিভাগগুলিকে পিবিএস দিয়ে ধুয়ে 1 ঘণ্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় বায়োটিনিলেটেড হর্স অ্যান্টি-মাউস অ্যান্টিবডি (1:200 ডিলিউশন, ভেক্টর) দিয়ে ইনকিউব করা হয়। অ্যাভিডিন-বায়োটিন কমপ্লেক্স (এবিসি কমপ্লেক্স 1:100, ভেক্টর, 2 ঘন্টা এবং ইনকিউবেশনের অর্ধেক) নিউনকে দাগ দেওয়ার জন্য ডায়ামিনোবেনজিডিন (0.03%, মার্ক) এর সাথে মিলিত হয়েছিল। তারপরে বিভাগগুলিকে পিবিএস-এ ধুয়ে ফেলা হয় এবং জেলটিন-প্রলিপ্ত স্লাইডে স্থানান্তরিত করা হয়, ডিহাইড্রেট করা হয় এবং একটি কভারস্লিপ দিয়ে ঢেকে দেওয়া হয়।

রেট্রো বিডস-ইনজেক্ট করা ইঁদুরের Te2 বিভাগগুলি RT-এ রাতারাতি ব্লকিং সলিউশনে প্রাথমিক পলিক্লোনাল খরগোশ অ্যান্টি-ফস অ্যান্টিবডি (1:2,000, সেল সিগন্যালিং) দিয়ে ইনকিউবেশন করে। পরবর্তীকালে, স্লাইসগুলিকে পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয় এবং অ্যান্টি-র্যাবিট অ্যালেক্সা 488 (1:1,000, ইনভিট্রোজেন, পিবিএস-এ) দিয়ে RT এ 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়। অবশেষে, ইমিউনোলেবেলযুক্ত বিভাগগুলি পিবিএস-এ ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, জেলটিন-প্রলিপ্ত স্লাইডে মাউন্ট করা হয়েছিল এবং একটি DAPI- পরিপূরক মাউন্টিং মাধ্যম দিয়ে আচ্ছাদিত হয়েছিল।

মাইক্রোস্কোপি

একটি Zeiss Airyscan কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে mCherry লেবেলিং পরীক্ষা করা হয়েছিল: দুটি লেজার ব্যবহার করা হয়েছিল (405 এবং 561 nm), প্রতিটি DAPI (কোষের নিউক্লিয়ার জন্য নিসল দাগ) এবং অ্যালেক্সা 568 (mCherry) এর জন্য সর্বোচ্চ নির্গমন বর্ণালীর সাথে সম্পর্কিত ), যথাক্রমে। ইনজেকশন সাইটগুলিতে ভাইরাসের বিস্তার বিশ্লেষণ করার জন্য, Te2 এবং ACC-এর মাইক্রোগ্রাফগুলি মোজাইক চিত্র হিসাবে অর্জিত হয়েছিল (প্রতিটি একক 10× উদ্দেশ্য ব্যবহার করে অর্জিত হয়েছিল)। BLA-তে অ্যাক্সন টার্মিনালগুলিকে 40× উদ্দেশ্য ব্যবহার করে 1 μm ব্যবধানে (159 μm বর্গ; জুম ভগ্নাংশ, 1.0) 10 বিভাগের z-স্ট্যাক হিসাবে ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

retrobeads-ইনজেক্ট করা প্রাণীদের জন্য যেগুলি cFos ইমিউনোলেবেলিং এর মধ্য দিয়ে গেছে, ছবিগুলি 40× বড়করণে (159 μm বর্গ; জুম ভগ্নাংশ, 1.0) 3টি ভিন্ন লেজারের সাথে অর্জিত হয়েছিল, যা সর্বোচ্চ নির্গমন বর্ণালীর সাথে সম্পর্কিত। যথাক্রমে DAPI (কোষের নিউক্লিয়ার জন্য Nissl স্টেইন), AlexaFluor 488 (cFos), এবং টেক্সাস রেড (রেট্রোবিডস) এর জন্য। 0.7 μm এর বিভাগগুলি একটি 10-μm z-স্ট্যাকের সাথে অর্জিত হয়েছিল৷ সিএফওস, পুঁতি-লেবেলযুক্ত, এবং ডাবল-পজিটিভ (cFos + জপমালা লেবেলযুক্ত) প্রকাশকারী নিউক্লিয়াসের সংখ্যা টি 2 অঞ্চলের প্রতিটি প্রাণীর জন্য ব্রেগমা [10] থেকে 6.7 থেকে 7.3 মিমি পর্যন্ত অ্যান্টেরোপোস্টেরিয়র স্থানাঙ্কে পরিমাপ করা হয়েছিল। তারপরে প্রতিটি প্রাণীর গড় তৈরি করতে ডেটা গড় করা হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি পরিসংখ্যানগতভাবে তুলনা করা হয়েছিল। নিউনের ডিএবি স্টেনিং সহ বিভাগগুলির চিত্রগুলি একটি রঙিন সিসিডি ক্যামেরার মাধ্যমে একটি মাইক্রোস্কোপের সাথে সংযুক্ত নিউরোলুসিডা সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল [10]।

ডেটা বিশ্লেষণ এবং বর্জনের মানদণ্ড

প্রতিটি গ্রুপের জন্য n আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা [10,16,17] অনুসারে একটি অগ্রাধিকার প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল, পূর্বে প্রকাশিত কাজগুলি (ACC [6,22,55] এবং Te2 [10,59] এর রেফারেন্স হিসাবে দেখুন), এবং জি-পাওয়ার অনুমানের মাধ্যমে, নিম্নলিখিত সারণী অনুসারে (সারণী 1):

প্রতিটি বিশ্লেষণের জন্য, আমরা প্রতিটি গ্রুপের জন্য 8 থেকে 10 প্রাণীর চূড়ান্ত গড় সংখ্যা অনুমান করেছি। একই পরীক্ষামূলক সেশনে (S1 টেবিল) অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ সহ গোষ্ঠীগুলি চালানো হয়েছিল। অস্ত্রোপচার এবং আচরণগত পদ্ধতির পরিবর্তনশীলতার পরিপ্রেক্ষিতে, আমরা একটি অগ্রাধিকার একটি বৃহত্তর সংখ্যক পরীক্ষামূলক বিষয় অন্তর্ভুক্ত করেছি (15% পর্যন্ত বেশি) যা কিছু ক্ষেত্রে পরীক্ষামূলক মানদণ্ড পূরণ করেছে এবং অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছে, এইভাবে একটি নির্বিচারে বর্জন এড়ানো। হিপোক্যাম্পাল অধ্যয়নের ক্ষেত্রে, স্বতন্ত্র সময়ের ব্যবধানে এনএমডিএ এবং সিএনকিউএক্স ইনজেকশনের প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করতে, আমরা বিভিন্ন গোষ্ঠীর মধ্যে যানবাহন এবং শ্যাম-চালিত ইঁদুরের মধ্যে নিয়ন্ত্রণ প্রাণীর মোট সংখ্যার ভারসাম্য বজায় রেখেছি।

আচরণগত বিশ্লেষণ, হিস্টোলজিকাল পরিদর্শন এবং কোষের সংখ্যা অন্ধভাবে সম্পাদিত হয়েছিল। NMDA- অপরিবর্তনীয় ক্ষতগুলির ক্ষেত্রে সুই ট্র্যাকের অপর্যাপ্ত স্থানীয়করণ বা ক্ষত সহ প্রাণীগুলিকে ডেটা বিশ্লেষণ (S1 টেবিল) থেকে বাদ দেওয়া হয়েছিল। ফার্মাকোলজিকাল স্টাডিতে, আমরা একটি ভুল সুই বসানোর কারণে মোট 465টি প্রাণীর মধ্যে 57টি প্রাণীকে বাদ দিয়েছি (Te2 এর জন্য 22/255, ACC-এর জন্য 31/179 এবং হিপোক্যাম্পাসের জন্য 4/31)। ট্রেসিং স্টাডিতে, 21টি প্রাণীর উপর, আমরা 3টি বিষয় বাদ দিয়েছি যেখানে রেট্রোবিডের ইনজেকশন বিএলএ মিস করেছে। Te2 অপটোজেনেটিক্স স্টাডিতে, মোট 30 টিরও বেশি প্রাণী, আমরা 1 ইঁদুরকে বাদ দিয়েছি কারণ অপটিক ফাইবারের স্থান নির্ধারণ লক্ষ্য অঞ্চলের উপরে ছিল না, 1 ইঁদুর। সর্বোপরি, ভাইরাসটি Te2 এবং 2টি ইঁদুরে অনুপস্থিত ছিল কারণ ইনজেকশন সাইটগুলিতে ভাইরাসের বিস্তার যথাক্রমে 4.7% এবং 5.3% এর চেয়ে কম ছিল। পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণে অন্তর্ভুক্ত ইঁদুরগুলিতে, ন্যূনতম ভাইরাসের বিস্তার ছিল আরও পূর্ববর্তী স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কে 39.6% এবং আরও পোস্টেরিয়র স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কে 50.2%।

একইভাবে, ACC অপটোজেনেটিক্স পরীক্ষায়, মোট 32 টি প্রাণীর উপর, 2 টি ইঁদুরকে নির্মূল করা হয়েছিল কারণ অপটিক ফাইবারগুলির অবস্থান লক্ষ্য অঞ্চলের উপরে ছিল না। দুটি ইঁদুরকে বাদ দেওয়া হয়েছিল কারণ এসিসিতে ভাইরাস অনুপস্থিত ছিল, 1টি প্রাণী কারণ ভাইরাসটি সংলগ্ন সেকেন্ডারি মোটর কর্টেক্সে ছিল এবং 1টি ইঁদুর কারণ ইনজেকশন সাইটগুলিতে এসিসি এলাকার 2.3% এর কম ছিল। অবশিষ্ট ইঁদুরের মধ্যে, ন্যূনতম ভাইরাসের বিস্তার ছিল আরও অগ্রবর্তী স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কে 33.3% এবং আরও পিছনের স্থানাঙ্কে 42.2%।

এনএমডিএ ক্ষত গবেষণায়, ক্ষতগুলি বেশিরভাগই ডোরসাল হিপ্পোক্যাম্পাসের CA1 অঞ্চলকে লক্ষ্য করে। ডোরসাল হিপ্পোক্যাম্পাসের সমগ্র এলাকায় হিপোক্যাম্পাল ক্ষতের ন্যূনতম (লাল) এবং সর্বাধিক প্রসারণ (গোলাপী) ছিল যথাক্রমে 23.2% এবং 53,5% আরও অগ্রবর্তী স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কে এবং 28.3% এবং 62.3% আরও পিছনের স্থানাঙ্কে। মোট 73 টিরও বেশি প্রাণী, 4টি ইঁদুরকে নির্মূল করা হয়েছিল কারণ ক্ষতটি অনুপস্থিত ছিল, যখন ক্ষতটির প্রসারণ 5 টির কম ছিল বলে অতিরিক্ত 3টি প্রাণীকে বাতিল করা হয়েছিল৷{13}}% (যেমন 4.8%, 4.3%, 3.1) %) 2 স্থানাঙ্কে হিপোক্যাম্পাল এলাকা সম্পর্কিত।

ZEN 30 সফ্টওয়্যারের অঞ্চল-কনট্যুর টুল ব্যবহার করে ভিজ্যুয়াল পরিদর্শন এবং ম্যানুয়াল পরিমাপের মাধ্যমে এলাকা কনট্যুর বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। এলাকার মানগুলি তখন অঞ্চলের মোট ক্ষেত্রফলের উপর স্বাভাবিক করা হয়েছিল। Te2, ACC, এবং হিপ্পোক্যাম্পাসের স্টেরিওট্যাক্সিক স্থানাঙ্কগুলি প্যাক্সিনোস অ্যাটলাসের উপর ভিত্তি করে ছিল [26] এবং, Te2 এর ক্ষেত্রে, কর্টিকাল ফিল্ডকে জিলস অ্যাটলাসে রেফার করা হয়েছিল [25]।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

সমস্ত ডেটা গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপিত হয়। সমস্ত ডেটা ভিন্নতার সমতার জন্য লেভেনের পরীক্ষায় উত্তীর্ণ হয়েছে। এইভাবে, সমস্ত পরীক্ষা জুড়ে প্যারামেট্রিক পরিসংখ্যান নিযুক্ত করা হয়েছিল। 2টি গ্রুপের ডেটা 2-টেইলড আনপেয়ারড স্টুডেন্ট টি-টেস্ট ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল। Tukey-এর পোস্ট-হক টেস্টের সাথে একটি 1-ওয়ে ANOVA পরীক্ষা ব্যবহার করে একাধিক-গ্রুপ তুলনা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। গোষ্ঠীর মধ্যে এবং গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যগুলিকে সমাধান করার জন্য, আমরা একটি 3 × 2 মিশ্র-ডিজাইন ANOVA মডেল গণনা করেছি একটি গ্রুপ (CS1-CS2, Tone-CS1-CS2, WN-CS2) এর মধ্যে- বিষয় পরিবর্তনশীল এবং শর্ত (সাম্প্রতিক কন্ডিশনিং + ইনজেকশনের আগে এবং পরে) অন্তর্গত-বিষয় পরিবর্তনশীল হিসাবে। যেখানে গ্রুপ × অবস্থার মিথস্ক্রিয়া তাৎপর্যপূর্ণ ছিল, আমরা একটি সাধারণ প্রধান প্রভাব বিশ্লেষণ করেছি এবং আমরা বনফেরনি সংশোধনের সাথে প্রতিটি পি-মান সামঞ্জস্য করেছি। প্রতিটি মিশ্র ANOVA মডেলের জন্য, আমরা মাউচলির গোলাকার পরীক্ষার মাধ্যমে গোলাকার অনুমানের মূল্যায়ন করেছি।

পরিসংখ্যানগত পরামিতি (অর্থাৎ, প্রতিটি গোষ্ঠীর জন্য n-এর সঠিক মান, SEM, পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা, প্রভাবের আকার এবং সঠিক p-মান) কিংবদন্তিতে রিপোর্ট করা হয়েছে। সমান নমুনা আকারের জন্য, জোড়াবিহীন টি-পরীক্ষার জন্য প্রভাবের আকারগুলি SD-এর সাদৃশ্য অনুসারে কোহেনের ডি বা গ্লাসের ডি গণনা করে নির্ধারিত হয়েছিল, যখন বিভিন্ন নমুনার আকারের জন্য, হেজেস'জি। পিয়ারসনের সহগ ব্যবহার করে কোষের সংখ্যা এবং জমাট বাঁধার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক গণনা করা হয়েছিল। ডেটা পরিসংখ্যানগত পদ্ধতির অনুমান পূরণ করেছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা P < 0.05 স্তরে শূন্য অনুমানকে প্রত্যাখ্যান করেছি। সমস্ত পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ SPSS পরিসংখ্যান 22 (IBM) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল।

নির্ভরযোগ্য তথ্য

S1 ডুমুর। Te2 (A) এবং ACC কর্টেক্স (B) এর নিডেল ট্র্যাকের ম্যাগনিফিকেশন CNQX দিয়ে ইনজেক্ট করা, উদাহরণ হিসেবে নির্বাচিত। (সি) প্রক্রিয়াটির 2 সপ্তাহ পরে একই প্রসঙ্গে উপস্থাপন করা হলে, শুধুমাত্র শক-প্রাণীরা একটি কম ভয়ের প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছিল, এটি প্রদর্শন করে যে প্রক্রিয়াটি শক দেওয়া হয়েছিল সেই প্রসঙ্গে শর্তযুক্ত হিমায়িত করেনি। (D) CSs (CS1, 3 kHz এবং CS2, 15 kHz) (ছাত্র t test, t(14)=3.44, p {{ হিসাবে নিযুক্ত 2 টোনগুলির ভারসাম্য বজায় রেখে চিত্র 1-এর মতো অনুরূপ ফলাফলগুলি পাওয়া গেছে 13}}৷{20}}040, গ্লাসের ডি=4.14)৷ (ই) গন্ধ-সিএস-এ কন্ডিশনার ইঁদুরগুলি গন্ধে জমে যাওয়া, কন্ডিশনিংয়ের 2 সপ্তাহ পরে, কন্ডিশনার প্রসঙ্গে একটি ভিন্ন পরিবেশে পরীক্ষা করা হলেও এটি বেশি ছিল, যার ফলে ভয়টি বিশেষভাবে এই কিউ ডেলিভারির সাথে যুক্ত ছিল। স্কেল বার, 300 μm। ��P <0.01। সমস্ত ডেটা গড় এবং SEM। S1 Fig-এর সারাংশ ডেটা S1 S1 Supporting Figure Data নামে ফাইলে সমর্থনকারী তথ্যে পাওয়া যাবে। (টিআইএফ)

S2 Fig. CNQX ইনজেকশন ইঁদুরের সাম্প্রতিক শ্রবণ-ভয় স্মৃতির ধারণকে ব্যাহত করে যেখানে ভয়ের সাধারণীকরণ শুধুমাত্র একটি স্বন প্রাক-এক্সপোজার দ্বারা বা CS1 হিসাবে একটি সাদা গোলমাল টোন ব্যবহার করে কমিয়ে দেওয়া হয়েছিল। একটি 3 × 2 মিক্সড-ডিজাইন আনোভা (গ্রুপের প্রধান প্রভাব: F(2,42)=6.478, p {{10}}৷{62}}0 4, η2=0। 236, অবস্থার প্রধান প্রভাব: F(1,42)=0.161, p=0.691, η2=0.004, গ্রুপ × কন্ডিশন ইন্টারঅ্যাকশন F(2,42)=3.942, p=0.027, η2=0.158) দেখিয়েছে যে 3 kHz টোনে ফ্রিজিং মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের সাথে সংযুক্ত হওয়ার আগে কম ছিল প্রাণীদের মধ্যে যারা 15 kHz-ইউএস জোড়ার আগে 15 kHz টোন প্রি-এক্সপোজার পেয়েছে (n=10, p=0.001) বা সাদা আওয়াজের শর্তযুক্ত ইঁদুরগুলিতে (n=13 , p=0.008) CS1-CS2 প্রাণীর (n=22) তুলনায় যা একটি পরিবর্তনশীল ভয় সাধারণীকরণ প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছে। যাইহোক, CS-US শেখার পরে এবং Te2 কর্টেক্সে cnqx ইনজেকশনের পরে, সাম্প্রতিক ভয়ের স্মৃতি সমস্ত গোষ্ঠীর মধ্যে দুর্বল হয়েছিল (p > 0.05)। গ্রুপের মধ্যে সাধারণ প্রধান প্রভাব (CS-US শেখার আগে এবং পরে cnqx ইনজেকশন দ্বারা অনুসরণ করা হয়): CS1-CS2, p=0.025; টোন-CS1-CS2, p=0.189; WN-CS2, p=0.347) �P < 0.05, ��P < 0.01। সমস্ত ডেটা গড় এবং SEM। S1 S1 Supporting Figure Data নামের ফাইলটিতে S2 Fig-এর সারসংক্ষেপ তথ্য পাওয়া যাবে। (টিআইএফ)

S3 চিত্র। (A) বিএলএকে লক্ষ্য করে রেট্রোবিডস ইনজেকশনের এলোমেলো উদাহরণ। (B এবং C) Te2 (B) এবং ACC কর্টেক্স (C) এ AAV ভেক্টর দিয়ে ইনজেকশন করা প্রাণীদের BLA-এর উপরে অপটিক্যাল ফাইবার বসানোর উদাহরণ। স্কেল বার, 500 μm।

স্বীকৃতি

আমরা ডক্টর ই. মানসেরোকে তাদের ক্রমাগত সমর্থন এবং পরামর্শের জন্য ধন্যবাদ জানাই।

লেখক অবদান

ধারণাগতকরণ: গিউলিয়া কনসিনা, আনামারিয়া রেনা, বেনেদেত্তো স্যাচেটি।

ডেটা কিউরেশন: গিউলিয়া কনসিনা, লুইসেলা মিলানো, বেনেদেত্তো স্যাচেটি।

আনুষ্ঠানিক বিশ্লেষণ: গিউলিয়া কনসিনা, আনামারিয়া রেনা, লুইসেলা মিলানো।

তহবিল অধিগ্রহণ: Giulia Concina, Benedetto Sacchetti.

তদন্ত: Giulia Concina, Annamaria Renna, Luisella Milano.

পদ্ধতি: Giulia Concina, Annamaria Renna, Luisella Milano.

তত্ত্বাবধান: বেনেদেত্তো স্যাচেটি।

বৈধতা: বেনেদেত্তো স্যাচেটি।

লেখা - মূল খসড়া: গিউলিয়া কনসিনা, বেনেদেত্তো স্যাচেটি।

লেখা - পর্যালোচনা এবং সম্পাদনা: আন্নামারিয়া রেনা, লুইসেলা মিলানো।

তথ্যসূত্র
1. ফ্র্যাঙ্কল্যান্ড PW, Bontempi B. সাম্প্রতিক এবং দূরবর্তী স্মৃতির সংগঠন। ন্যাট রেভ নিউরোসি। 2005; 6:119-130। https://doi.org/10.1038/nrn1607 PMID: 15685217

2. দুদাই ওয়াই। একত্রীকরণের নিউরোবায়োলজি, বা, এনগ্রাম কতটা স্থিতিশীল? আন্নু রেভ সাইকোল। 2004; 55:51–86। https://doi.org/10.1146/annurev.psych.55.090902.142050 PMID: 14744210

3. Squire LR, Genzel L, Wixted JT, Morris RG। মেমরি একত্রীকরণ. কোল্ড স্প্রিং হার্ব পার্সপেক্ট বিওল। 2015; 3:7 https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021766 PMID: 26238360

4. আলভারেজ পি, স্কয়ার এলআর। মেমরি একত্রীকরণ এবং মিডিয়াল টেম্পোরাল লোব: একটি সাধারণ নেটওয়ার্ক মডেল। Proc Natl Acad Sci US A. 1994; 91:7041–7045। https://doi.org/10.1073/pnas.91.15.7041 PMID: 8041742

5. ম্যাকক্লেল্যান্ড জেএল, ম্যাকনটন বিএল, ও'রিলি আরসি। কেন হিপ্পোক্যাম্পাস এবং নিওকর্টেক্সে পরিপূরক শিক্ষা ব্যবস্থা রয়েছে: শেখার এবং স্মৃতির সংযোগবাদী মডেলগুলির সাফল্য এবং ব্যর্থতা থেকে অন্তর্দৃষ্টি। সাইকোল রেভ. 1995; 102:419-457।

For more information:1950477648nn@gmail.com