অংশ Ⅰ হার্বা সিস্টাঞ্চের সহায়ক মান যখন মুরিন মডেলগুলিতে স্ট্যাটিনের সাথে সংমিশ্রণে ব্যবহৃত হয়

এলেন ওয়াট, চুন ফাই এনজি, চি মান কুন, চেং ঝাং, সি গাও, ব্রায়ান টমলিনসন এবং ক্লারা বিক সান লাউ

1 চাইনিজ মেডিসিন ইনস্টিটিউট, দ্য চাইনিজ ইউনিভার্সিটি অফ হংকং, শাটিন, নিউ টেরিটরি, হংকং।

পশ্চিম চীনের ফাইটোকেমিস্ট্রি এবং উদ্ভিদ সম্পদের 2 রাষ্ট্রীয় কী ল্যাবরেটরি, হংকং এর চীনা বিশ্ববিদ্যালয়, শাতিন, নতুন অঞ্চল, হংকং।

3 ডিভিশন অফ ক্লিনিক্যাল ফার্মাকোলজি, মেডিসিন এবং থেরাপিউটিকস বিভাগ, হংকং এর চাইনিজ ইউনিভার্সিটি, শাতিন, নিউ টেরিটরি, হংকং। ইলেইন ওয়াট এবং চুন ফাই এনজি এই কাজে সমানভাবে অবদান রেখেছিলেন। চিঠিপত্র এবং উপকরণগুলির জন্য অনুরোধগুলি সিবিএসএলকে সম্বোধন করা উচিত (ইমেল: claralau@cuhk.edu.hk)

আরও তথ্যের জন্য: emily.li@wecistanche.com

Cistanche সম্পর্কে আরও তথ্য পেতে এখানে ক্লিক করুন

বিমূর্ত

স্ট্যাটিনগুলি পেশী বিষাক্ততার সমস্যাগুলির জন্য সুপরিচিত।হারবাসিস্তানচ(HC) হল একটি চীনা ভেষজ যা ঐতিহ্যগতভাবে কোমর এবং হাঁটুতে ব্যথার জন্য ব্যবহৃত হয়। আমাদের পূর্ববর্তী ইন ভিট্রো গবেষণা পরামর্শ দিয়েছে যে এটি স্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশী বিষাক্ততার বিরুদ্ধে রক্ষা করতে পারে। যাইহোক, এটি ভিভোর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবে কখনও তদন্ত করা হয়নি। এই অধ্যয়নের উদ্দেশ্য ছিল জলীয় নির্যাস কিনা তা নির্ধারণ করাহারবাসিস্তানচে(HCE) ইঁদুরের সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশীর বিষাক্ততা প্রতিরোধ করতে পারে এবং Herba Cistanche E উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য-প্ররোচিত হাইপারকোলেস্টেরলেমিয়া এবং উচ্চতর লিভারের কোলেস্টেরল কমাতেও উপকারী প্রভাব ফেলতে পারে কি না, যার ফলে সম্মিলিত থেরাপিতে ব্যবহার করার সময় সিমভাস্ট্যাটিনের ডোজ কমিয়ে দেয়। আমাদের ফলাফল থেকে, Herba Cistanche E উল্লেখযোগ্যভাবে সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশীর ওজন হ্রাস এবং ইঁদুরের উচ্চতর প্লাজমা ক্রিয়েটাইন কিনেস হ্রাস করেছে।হারবাসিস্তানচেE এছাড়াও পেশী গ্লুটাথিয়নের মাত্রা, পেশী মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতা এবং সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশী প্রদাহ হ্রাসে সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত হ্রাসকে উন্নত করেছে। অধিকন্তু, এইচসিই উচ্চ চর্বিযুক্ত ইঁদুরের লিভারের ওজন, লিভারের মোট লিপিডের মাত্রা এবং প্লাজমা লিপিডের মাত্রা হ্রাস করতে পারে। উপসংহারে, আমাদের অধ্যয়ন ভিভো প্রমাণ দিয়েছে যেহারবা সিস্তানচেE-এর পেশীতে সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত বিষাক্ততার উপর সম্ভাব্য প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব রয়েছে এবং খাদ্য-প্ররোচিত নন-অ্যালকোহলযুক্ত ফ্যাটি লিভার এবং হাইপারলিপিডেমিয়ায় উপকারী প্রভাব রয়েছে যখন একা বা কম মাত্রায় সিমভাস্ট্যাটিনের সাথে সংমিশ্রণে ব্যবহার করা হয়।

HMG-CoA রিডাক্টেস ইনহিবিটর, স্ট্যাটিন নামেও পরিচিত, মাঝারি এবং উচ্চ কার্ডিওভাসকুলার রোগের ঝুঁকি সহ হাইপারকোলেস্টেরলেমিক রোগীদের জন্য উপকারী হওয়ার জন্য ভালভাবে নথিভুক্ত। স্ট্যাটিনস, বিশ্বের সর্বাধিক বিক্রিত প্রেসক্রিপশন ড্রাগ ক্লাসগুলির মধ্যে একটি, মেভালোনেট পাথওয়ের প্রাথমিক পর্যায়ে অন্তঃসত্ত্বা কোলেস্টেরল সংশ্লেষণ কমাতে HMG-CoA থেকে মেভালোনিক অ্যাসিডের হ্রাসকে বাধা দেওয়ার মাধ্যমে কাজ করে 2, 3. যদিও স্ট্যাটিনগুলি সাধারণত ভালভাবে সহ্য করা হয় , সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ এবং সুপরিচিত ক্লিনিকাল প্রতিকূল প্রভাবগুলির মধ্যে একটি হল কঙ্কালের পেশীর অস্বাভাবিকতা, যা সৌম্য মায়ালজিয়া থেকে গুরুতর মায়োপ্যাথি পর্যন্ত হতে পারে, 5. একটি টেলিফোন সাক্ষাত্কারের মাধ্যমে পরিচালিত 10,409 ফরাসি বিষয়ের উপর একটি বড় সমীক্ষায়, 10 শতাংশ রোগী গ্রহণ করেছেন স্ট্যাটিন ট্রিটমেন্ট পেশীর উপসর্গের রিপোর্ট করেছে, যেখান থেকে এই লক্ষণযুক্ত রোগীদের 30 শতাংশ চিকিত্সা বন্ধ করে দিয়েছে। ন্যাশনাল লিপিড অ্যাসোসিয়েশন স্ট্যাটিন সেফটি টাস্ক ফোর্স স্ট্যাটিন থেরাপির অধীনে থাকা রোগীদের পেশী-সম্পর্কিত লক্ষণগুলির ব্যবস্থাপনার জন্য সুপারিশ প্রদান করেছে। সাধারণভাবে, পরামর্শ দেওয়া হয় যে রোগীদের মধ্যে গুরুতর উপসর্গ যেমন 5×ULN-এর বেশি এলিভেটেড ক্রিয়েটাইন কিনেস (CK) আছে, স্ট্যাটিনগুলি বন্ধ রাখা উচিত, যতক্ষণ না CK স্তর আবার স্বাভাবিক হয়5। এই পার্শ্বপ্রতিক্রিয়াগুলির সংঘটনের কারণে, এবং স্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশীর বিষাক্ততার জন্য কোনও কার্যকর চিকিত্সা বিদ্যমান নেই, তাই স্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশী সমস্যাগুলির পরিচালনার জন্য নতুন থেরাপির সন্ধান করার তাগিদ রয়েছে।

যদিও মেকানিজমের একটি মেডলে প্রস্তাব করা হয়েছে এবং স্ট্যাটিনের প্রতিকূল প্রভাবের জন্য দায়ী হতে পারে, মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রক্রিয়াগুলি স্ট্যাটিন1-এর পেশী বিষাক্ততার প্রতিকূল প্রভাবের সাথে জড়িত বলে মনে করা হয়। মেভালোনেট শুধুমাত্র একটি কোলেস্টেরলের পূর্বসূরী নয় বরং গুরুত্বপূর্ণ যৌগগুলিরও অগ্রদূত, যেমন সেলেনোপ্রোটিন, ডলিচল এবং ইউবিকুইনোন7, 8। স্ট্যাটিন সেলেনোপ্রোটিন যেমন গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস (GPx) কম-নিয়ন্ত্রিত করতে পারে, যা অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের ঘনত্বের সাথে আপোস করে। প্রভাব4. স্ট্যাটিনগুলি ইউবিকুইনোনের ক্ষয়ও হতে পারে, যার ফলে অক্সিজেন খরচ কমে যায় এবং এটিপি সংশ্লেষণ9। তদ্ব্যতীত, ভিট্রো এবং ভিভো গবেষণায় বৃদ্ধি প্রমাণ করেছে যে স্ট্যাটিন টিস্যু মাইটোকন্ড্রিয়াতে সরাসরি কাজ করতে পারে যার ফলে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (আরওএস) এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বৃদ্ধি পায়, যার ফলে কোষের মৃত্যু ঘটে এবং তাই লিভার এবং পেশীর আঘাতে অবদান রাখে 10, 11।

হারবাসিস্তানচ, পুরো শুকনো উদ্ভিদসিস্তানচেমরুভূমিYC Ma (Orobanchaceae family), হল পরজীবী উদ্ভিদ যা প্রধানত উত্তর এবং উত্তর-পূর্ব চীনের মরুভূমি অঞ্চলে জন্মে। চাইনিজ মেডিসিন থিওরি অনুসারে, হার্বা সিস্টাঞ্চে মিষ্টি, উষ্ণ এবং নোনতা 13 এর স্বাদ রয়েছে। এটি একটি ইয়াং-উদ্দীপক চীনা টনিক ভেষজ যা প্রাথমিকভাবে পুরুষত্বহীনতা, বন্ধ্যাত্ব, অকাল বীর্যপাতের মতো লক্ষণগুলির সাথে কিডনির ঘাটতির চিকিত্সার জন্য ব্যবহৃত হয়। এটি একটি চাইনিজ ভেষজ যা ঐতিহ্যগতভাবে রোগীদের কোমর এবং হাঁটুর ব্যথার জন্য নির্ধারিত হয় এবং সাধারণত পেশীর সমস্যাগুলির চিকিত্সার জন্য চীনা ফর্মুলেশনগুলিতে ব্যবহৃত হয়12, 14৷ মজার বিষয় হল, এটি আধুনিক বৈজ্ঞানিক গবেষণার সাথেও সামঞ্জস্যপূর্ণ যা বিরোধী প্রমাণ করেছে৷ -ব্যায়াম-পরবর্তী ইঁদুরে হার্বা সিস্টাঞ্চের পলিস্যাকারাইড সমৃদ্ধ এবং ফেনাইলেথানয়েড-সমৃদ্ধ নির্যাসের ক্লান্তি কার্যক্রম পেশীর ক্ষতি হ্রাস করে এবং ATP সঞ্চয়স্থানের উন্নতি করে। এছাড়াও, সাম্প্রতিক কাজ প্রমাণ করেছে যে হার্বা সিস্টাঞ্চের একটি মিথানল নির্যাস মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP প্রজন্মকে উন্নত করতে পারে।হারবাসিস্তানচএছাড়াও এটি বিভিন্ন অঙ্গে একটি শক্তিশালী অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং ফ্রি র‌্যাডিক্যাল স্ক্যাভেঞ্জার হিসাবে প্রমাণিত হয়েছে, যা ভিভো স্টাডিজ17, 18-এ অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং ROS কার্যকলাপ হ্রাস করে। আমাদের গবেষণাগার দ্বারা পরিচালিত একটি সাম্প্রতিক গবেষণায়, আমরা প্রমাণ করেছি যে আমাদেরহারবাসিস্তানচজলীয় নির্যাস L6 কঙ্কালের পেশী কোষে সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত বিষাক্ততাকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রতিরোধ করে, সেইসাথে L6 কোষে এটিপি উৎপাদনে ডোজ-নির্ভর পুনরুদ্ধার সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত হ্রাস, যা সম্ভাব্যতার পরামর্শ দেয়হারবাসিস্তানচস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশী বিষাক্ততা 19 থেকে রক্ষা করার জন্য জলীয় নির্যাস। তবুও, ভিভোর প্রমাণের অভাব রয়েছে।

অতএব, আমরা যে অনুমানহারবাসিস্তানচজলীয় নির্যাস (HCE) সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশী বিষাক্ততার উপর উপকারী প্রভাব ফেলতে পারে। এইভাবে, এই অধ্যয়নের লক্ষ্য নির্ধারণ করা হয়েছে যে HCE-এর ব্যবহার ভিভো পশুর মডেল ব্যবহার করে সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশীর বিষাক্ততা কমাতে পারে এবং উপরন্তু, HCE উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য-প্ররোচিত হাইপারকোলেস্টেরলেমিয়া এবং উন্নত লিভার কোলেস্টেরল কমাতেও উপকারী প্রভাব ফেলতে পারে কিনা। , এর ফলে ব্যবহৃত সিমভাস্ট্যাটিনের ডোজ হ্রাস করা হয়।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

ভেষজ উপকরণ প্রমাণীকরণ এবং নিষ্কাশন.

এর কাঁচা ভেষজ উপাদানহারবাসিস্তানচ(Cistanche deserticola, অভ্যন্তরীণ মঙ্গোলিয়া থেকে প্রাপ্ত) চীনের গুয়াংজুতে একটি বিখ্যাত সরবরাহকারী জি জিন থেকে কেনা হয়েছিল। চীনা ফার্মাকোপিয়া 201013 অনুসারে পাতলা স্তরের ক্রোমাটোগ্রাফি এবং আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি ব্যবহার করে হার্বা সিস্তানচেস রাসায়নিকভাবে প্রমাণীকৃত হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে।verbascosideএবংechinacoside(ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট ফর দ্য কন্ট্রোল অফ ফার্মাসিউটিক্যাল অ্যান্ড বায়োলজিক্যাল পণ্য, চীন থেকে কেনা) রাসায়নিক চিহ্নিতকারী হিসেবে। রাসায়নিক প্রমাণীকরণের উপর, হার্বেরিয়াম ভাউচারের নমুনাহারবাসিস্তানচভাউচার নমুনা নম্বর 2014-3434 সহ হংকংয়ের চাইনিজ ইউনিভার্সিটি অফ চাইনিজ মেডিসিনের জাদুঘরে জমা করা হয়েছিল।

হারবাসিস্তানচপূর্বে বর্ণিত হিসাবে জলীয় নির্যাস প্রস্তুত করা হয়েছিল 19। সংক্ষেপে, 1 কেজি কাঁচা ভেষজ 1 ঘন্টা ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল, তারপর 10x পাতিত জল ব্যবহার করে 100 ডিগ্রিতে রিফ্লাক্সের নীচে 1 ঘন্টা গরম করে দুবার নিষ্কাশন করা হয়েছিল। জলীয় নির্যাস (HCE) তারপর একত্রিত এবং ফিল্টার করা হয়, এবং পরিস্রুত 60 ডিগ্রী কম চাপে ঘনীভূত হয়। Te ঘনীভূত নির্যাস শুষ্কতা lyophilized ছিল. ফলনের শতাংশ ছিল 50.1 শতাংশ w/w. সমস্ত নিষ্কাশিত পাউডার ভ্যাকুয়াম প্যাক করা হয়েছিল এবং ব্যবহার না হওয়া পর্যন্ত সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

পরীক্ষামূলক প্রাণী।

সিমভাস্ট্যাটিন এসআর ফার্মাসলিউশনস লিমিটেড থেকে কেনা হয়েছিল। পুরুষ স্প্রাগ ডাওলি ইঁদুর (180-200 গ্রাম) এবং পুরুষ C57Bl/6J ইঁদুর (8-সপ্তাহ পুরানো) ল্যাবরেটরি অ্যানিমেল সার্ভিসেস সেন্টার, হংকংয়ের চাইনিজ ইউনিভার্সিটি দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। হংকং এর চাইনিজ ইউনিভার্সিটি (রেফ নং 12/074/MIS) এর অ্যানিমাল এক্সপেরিমেন্টেশন এথিক্স কমিটি দ্বারা প্রাণী পরীক্ষাগুলি অনুমোদিত হয়েছিল। সমস্ত পরীক্ষামূলক পদ্ধতি হংকংয়ের চাইনিজ বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রাণী পরীক্ষার নীতিশাস্ত্র কমিটি দ্বারা নির্দিষ্ট অনুমোদিত নির্দেশিকা দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল। সমস্ত ইঁদুর (প্রতি খাঁচায় 3টি প্রাণী) এবং ইঁদুর (প্রতি খাঁচায় 5টি প্রাণী) একটি 12-ঘন্টা আলো-অন্ধকার চক্রের সাথে 21 ডিগ্রির একটি ধ্রুবক তাপমাত্রায় স্বাভাবিক মানের খাঁচায় রাখা হয়েছিল। প্রতিটি স্ট্যান্ডার্ড খাঁচায় বিছানাপত্র হিসাবে অ্যাস্পেন থাকে। সমস্ত প্রাণীকে খাদ্য এবং জলে অ্যাড লিবিটাম অ্যাক্সেসের অনুমতি দেওয়া হয়েছিল।

ইঁদুরে স্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশী বিষাক্ততার অধ্যয়ন।

সমস্ত ইঁদুর এলোমেলোভাবে 5টি গ্রুপে বিভক্ত ছিল (n=5–10)। সমস্ত প্রাণী একটি সাধারণ চাউ ডায়েটে ছিল। তাদের প্রতিদিন পাতিত জল বা সিমভাস্ট্যাটিন দেওয়া হত এবং এইচসিই চিকিত্সার সাথে বা ছাড়াই ইন্ট্রাগাস্ট্রিকভাবে। যে প্রাণীদের সিমভাস্ট্যাটিন এবং এইচসিই উভয়ই দেওয়া প্রয়োজন, তাদের জন্য সরাসরি ভেষজ-ওষুধের রাসায়নিক মিথস্ক্রিয়া প্রতিরোধ করার জন্য সিমভাস্ট্যাটিন প্রশাসনের 3 ঘন্টা পরে HCE দেওয়া হয়েছিল। টি ভেষজ নির্যাস বা সিমভাস্ট্যাটিন একটি পরিচিত ঘনত্বে পাতিত জলে 0.5 শতাংশ মিথাইলসেলুলোসে দ্রবীভূত হয়েছিল। একটি প্রাক-গণনা করা ভলিউম প্রতিটি প্রাণীকে ব্যক্তির ওজন অনুযায়ী ইন্ট্রাগাস্ট্রিকভাবে দেওয়া হয়েছিল যাতে গণনা করা ভলিউমে প্রস্তাবিত ডোজ প্রয়োজনীয় পরিমাণ থাকে। এই গ্রুপগুলির বিশদ বিবরণ নিম্নরূপ:

গ্রুপ ক) সাধারন-চাউ ডায়েট প্লাস পাতিত জল (সাধারণ নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ)

গ্রুপ খ) সাধারণ-চাউ ডায়েট প্লাস সিমভাস্ট্যাটিন (640 মিলিগ্রাম/কেজি)

গ্রুপ গ) সাধারণ-চাউ ডায়েট প্লাস সিমভাস্ট্যাটিন (640mg/kg) প্লাস কম ডোজ HCE (1.1 গ্রাম/কেজি প্রাণী)

গ্রুপ d) সাধারণ-চাউ ডায়েট প্লাস সিমভাস্ট্যাটিন (640mg/kg) প্লাস হাই ডোজ HCE (2.2 গ্রাম/কেজি প্রাণী)

গ্রুপ ই) সাধারণ-চাউ ডায়েট প্লাস হাই ডোজ HCE (2.2 গ্রাম/কেজি প্রাণী)

দৈনিক খাদ্য গ্রহণ রেকর্ড করা হয়েছিল এবং শরীরের ওজন সপ্তাহে দুবার পরিমাপ করা হয়েছিল। 4 সপ্তাহের জন্য চিকিত্সা দেওয়া হয়েছিল। এর পরে, কেটামাইন (100mg/kg) এবং xylazine (10mg/kg) intraperitoneally এর মিশ্রণ ব্যবহার করে প্রাণীদের চেতনানাশক করা হয়েছিল। কার্ডিয়াক পাংচার দ্বারা রক্ত ​​প্রত্যাহার করা হয়েছিল এবং জমাট বাঁধতে দেওয়া হয়েছিল। প্লাজমা তখন সেন্ট্রিফিউগেশন (3,000 rpm 10 মিনিটের জন্য) দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল। বিভিন্ন পেশী (কোয়াড্রিসেপস, গ্যাস্ট্রোকনেমিয়াস, সোলিয়াস, টিবিয়ালিস অ্যান্টিরিয়ার এবং এক্সটেনসর ডিজিটোরামলঙ্গাস) এক্সাইজ করা হয়েছিল এবং বিশ্লেষণ না হওয়া পর্যন্ত −80 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

প্লাজমা ক্রিয়েটাইন কিনেস পরিমাপ। প্লাজমা ক্রিয়েটাইন কিনেস (CK) কার্যকলাপ নির্মাতার নির্দেশ অনুসারে স্ট্যানবিও সিকে লিকুই-ইউভি® কিট (2910-430, স্ট্যানবিও ল্যাবরেটরি, ইউএসএ) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল।

পেশী গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস পরিমাপ। পেশী glutathione peroxidase (GPx) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুযায়ী বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ কিট (703102, কেম্যান কেমিক্যাল, USA) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, পেশী টিস্যুগুলিকে পিএইচ 7.4 এ পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল যে কোনও লোহিত রক্তকণিকা অপসারণ করা হয়েছিল, এবং 5-10 মিলি কোল্ড লাইসিস বাফারে একত্রিত করা হয়েছিল, তারপরে হোমোজেনেটকে 10,000 গ্রাম 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্টকে তারপরে সরিয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং বাণিজ্যিক কিট ব্যবহার করে জিপিএক্স কার্যকলাপের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল।

পেশী মাইটোকন্ড্রিয়াল এবং সাইটোসোলিক ভগ্নাংশের প্রস্তুতি। পেশী নমুনা থেকে মাইটোকন্ড্রিয়াল এবং সাইটোসোলিক ভগ্নাংশগুলি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে মাইটোকন্ড্রিয়া আইসোলেশন কিট (MITOISO, সিগমা-অলড্রিচ কর্পোরেশন, USA) ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, তাজা পেশীর নমুনাগুলি নিষ্কাশন মাখন দিয়ে পূর্ব-চিকিত্সা করা হয়েছিল, ছোট ছোট টুকরো করে কাটা হয়েছিল এবং নিষ্কাশন বাফারে একজাতকরণ করা হয়েছিল। টিস্যু হোমোজেনেটগুলি তখন সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং সাইটোসোলিক ভগ্নাংশ বিশ্লেষণের জন্য সংরক্ষিত ছিল। মাইটোকন্ড্রিয়াল প্যালেটগুলিকে ধুয়ে আবার সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশ বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

পেশী মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) পরিমাপ। ROS পূর্ববর্তী সাহিত্য20 থেকে সংশোধিত প্রোটোকল দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, DCFDA সমাধান (C6827, Invitrogen, USA) ব্যবহার করে মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশ (50 µg প্রোটিন/ml) থেকে ROS পরিমাপ করা হয়েছিল। মিশ্রণটি অন্ধকারে 10 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রীতে সেঁকানো হয়েছিল, তারপরে ফটো-অ্যাক্টিভেশনের জন্য এটি সাবস্ট্রেট দ্রবণ (10 মিমি পাইরুভেট, 15 মিমি ম্যালেট) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। বায়োরাড ফ্লুওস্টার অপটিমা 413-101 বিএমজি ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোপ্লেট রিডার দ্বারা 485 এনএম উত্তেজনা এবং 520 এনএম নির্গমনে প্রতি 5 মিনিটে প্রতি 5 মিনিটে ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল। ROS প্রজন্মের পরিমাপের জন্য ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা গণনা করা হয়েছিল।

পেশী মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাব্য। পেশীর নমুনা থেকে মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশের মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্য নির্মাতার প্রোটোকল (MITOISO, Sigma-Aldrich Corporation, USA) অনুসারে নির্ধারিত হয়েছিল। এই পদ্ধতিটি একটি নির্দিষ্ট-বিন্দু অ্যাস যা জে-এগ্রিগেট গঠনের সাথে JC-1 এর গ্রহণকে পরিমাপ করে। সংক্ষেপে, মাইটোকন্ড্রিয়াল সাসপেনশনটি 20 µg প্রোটিন ধারণ করার জন্য পাতলা করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 7 মিনিটের জন্য JC-1 দাগের সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল। এই 7-মিনিট হল এমন একটি সময় যা প্রস্তুতকারক বিভিন্ন যৌগ ব্যবহার করে (উৎপাদকের প্রোটোকলে উল্লেখ করা হয়েছে) ব্যবহার করে অপ্টিমাইজ করা এবং যাচাই করা হয়েছে যেহেতু দ্রবণের পর্যবেক্ষিত প্রতিপ্রভ 5-10 মিনিটের পরে একটি মালভূমিতে উঠবে, তারপরে একটি তীব্র হ্রাস পাবে মাইটোকন্ড্রিয়াল ম্যাট্রিক্সের ভিতরে এবং বাইরে JC{11}} ঘনত্বের সমানকরণের কারণে JC{10}} ফ্লুরোসেন্স। ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা 490nm উত্তেজনা এবং 590nm নির্গমনে BioRad Fluostar Optima 413-101 BMG ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোপ্লেট রিডার দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল৷ সম্ভাব্য গ্রেডিয়েন্ট পরিমাপের জন্য ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা গণনা করা হয়েছিল।

পেশী হিস্টোলজি এবং প্রদাহ মূল্যায়ন। পেশীগুলির মধ্যে প্রদাহজনক কোষগুলির ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি CD68 এবং CD163 স্টেনিং দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল যেমনটি পূর্বে বর্ণিত 21-23। 5 μm এর প্যারাফন বিভাগগুলি কাটা হয়েছিল, সুপারফ্রস্ট™ প্লাস গ্লাস স্লাইডগুলিতে (মেনজেল-গ্লাসার, জার্মানি) লেগেছিল। Te প্রাইমারি মাউস অ্যান্টি-র‍্যাট CD68, ED1, এবং CD163 অ্যান্টিবডি, ED2, (Bio-Rad, USA) বিভাগগুলিতে 1:100 ডিলিউশনে প্রয়োগ করা হয়েছিল। EnVision™ সিস্টেম (Dako, Denmark) দ্বারা নির্দিষ্ট স্টেনিং শনাক্ত করা হয়েছে, সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি, EnVision-HRP পলিমার-কনজুগেটেড অ্যান্টি-মাউস IgG ব্যবহার করে 1:200 এর পাতলা করা হয়েছে, এবং DAB সলিউশন (ডাকো, ডেনমার্ক) ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছে। হেমাটক্সিলিনের সাথে পাল্টা স্টেইনিং দ্বারা। বিভাগগুলি তারপরে হিস্টোন (DPX) এ ডিবিউটাইল-ফথালেটে মাউন্ট করা হয়েছিল। ইমেজজে সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে পরিমাণগত ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দ্বারা পেশীতে নিউট্রোফিলের উপস্থিতি সনাক্ত করা হয়েছিল।

পেশী জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ। পিসিআর অ্যাস যা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সম্পর্কিত জিনগুলির প্রোফাইল ইঁদুর অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ডিফেন্স পিসিআর-অ্যারে (PARN-065Z, SABiosciences, Frederick, USA) ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। পিসিআর অ্যারে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল। সংক্ষিপ্তভাবে, একটি ডিনাচারিং গুয়ানিডিন থায়োসায়ানেট বাফারে (RNeasy kit, Qiagen) পেশীর নমুনাগুলির লাইসিস এবং সমজাতকরণের পরে একটি সিলিকা জেল-ভিত্তিক ঝিল্লির সাথে নির্বাচনী বাঁধনের মাধ্যমে মোট আরএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। আরএনএ RT2 ফার্স্ট স্ট্র্যান্ড কিট (SABiosciences, Frederick, USA) ব্যবহার করে সিডিএনএ-তে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল। এই cDNA তারপর RT2 SYBR গ্রীন qPCR মাস্টার মিক্সে (SABiosciences, Frederick, USA) যোগ করা হয়েছিল। এরপরে, প্রতিটি নমুনা ইঁদুরের অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ডিফেন্স পিসিআর-অ্যারেগুলিতে (এসএবিওসায়েন্সেস, ফ্রেডরিক, ইউএসএ) এলিকোট করা হয়েছিল। সমস্ত পদক্ষেপ প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুযায়ী সঞ্চালিত হয়েছিল।

উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য-প্ররোচিত হাইপারলিপিডেমিয়া এবং ইঁদুরের হেপাটিক স্টেটোসিসের অধ্যয়ন।

সমস্ত ইঁদুর এলোমেলোভাবে 5টি গ্রুপে বিভক্ত ছিল (n=8–10) এবং নিম্নলিখিতগুলি পেয়েছিল: গ্রুপ a) সাধারণ-চাউ ডায়েট (সারণী 1); গ্রুপ b থেকে e) উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য (21 শতাংশ চর্বি এবং 0.15 শতাংশ কোলেস্টেরল রয়েছে) (সারণী 2)। স্থূলতা প্ররোচিত করার জন্য প্রাণীদের জন্য 8 সপ্তাহের জন্য ডায়েট দেওয়া হয়েছিল। 8 সপ্তাহের পরে, সমস্ত উচ্চ চর্বিযুক্ত গোষ্ঠীকে পাতিত জল, বা সিমভাস্ট্যাটিন প্রতিদিন দেওয়া হয়েছিল, এবং বা এইচসিই ইনট্রাগাস্ট্রিকভাবে, সিমভাস্ট্যাটিন প্রশাসনের 3 ঘন্টা পরে দেওয়া হয়েছিল। Te ভেষজ নির্যাস বা সিমভাস্ট্যাটিন একটি পরিচিত ঘনত্বে পাতিত জলে 0.5 শতাংশ মিথাইলসেলুলোসে (সিগমা-অলড্রিচ কর্পোরেশন, ইউএসএ) দ্রবীভূত হয়েছিল। একটি প্রাক-গণনা করা ভলিউম প্রতিটি প্রাণীকে ব্যক্তির ওজন অনুযায়ী ইন্ট্রাগাস্ট্রিকভাবে দেওয়া হয়েছিল যাতে গণনা করা ভলিউমে প্রস্তাবিত ডোজ প্রয়োজনীয় পরিমাণ থাকে। এই গ্রুপগুলির বিশদ বিবরণ নিম্নরূপ:

গ্রুপ ক) সাধারণ-চৌ ডায়েট প্লাস পাতিত জল

গ্রুপ খ) উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য এবং পাতিত জল

গ্রুপ c) উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য প্লাস সিমভাস্ট্যাটিন (50mg/kg)

গ্রুপ ডি) উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য প্লাস HCE (4.4 গ্রাম/কেজি)

গ্রুপ ই) উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য প্লাস সিমভাস্ট্যাটিন (25mg/kg) প্লাস HCE (4.4 g/kg)

দৈনিক খাদ্য গ্রহণ রেকর্ড করা হয়েছিল এবং শরীরের ওজন সপ্তাহে দুবার পরিমাপ করা হয়েছিল। 16-সপ্তাহের অধ্যয়নের শেষে, সমস্ত ইঁদুরকে 16-ঘন্টা রাতারাতি উপবাসের পর বলি দেওয়া হয়েছিল৷ কেটামাইন (100mg/kg) এবং xylazine (10mg/kg) ইন্ট্রাপেরিটোনলি মিশ্রণের মাধ্যমে প্রাণীদের চেতনানাশক করা হয়েছিল। কার্ডিয়াক পাংচার দ্বারা রক্ত ​​প্রত্যাহার করা হয়েছিল এবং জমাট বাঁধতে দেওয়া হয়েছিল। প্লাজমা সেন্ট্রিফিউগেশন (3,000 rpm 10 মিনিটের জন্য) দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল। লিভার এক্সাইজ করা হয়েছিল এবং বিশ্লেষণ না হওয়া পর্যন্ত −80 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

প্লাজমা এবং লিভারের লিপিড পরিমাপ।

প্লাজমা ট্রাইগ্লিসারাইড, কোলেস্টেরল (11488872216 এবং 11489232216, রোচে ডায়াগনস্টিকস, সুইজারল্যান্ড), উচ্চ-ঘনত্ব এবং নিম্ন-ঘনত্বের লাইপোপ্রোটিন কোলেস্টেরল (এল-টাইপ এইচডিএল-সি এবং এল-টাইপ এলডিএল-সি, ওয়াকোসেন্টের দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ কিট ব্যবহার করে এনজাইমেটিক পদ্ধতি। স্ট্যানবিও সিকে লিকুই-ইউভি® কিট (2910-430, স্ট্যানবিও ল্যাবরেটরি, ইউএসএ) ব্যবহার করে প্লাজমা ক্রিয়েটাইন কিনেস (CK) কার্যকলাপ নির্ধারণ করা হয়েছিল। Bligh এবং Dyer24 পদ্ধতি দ্বারা নিষ্কাশনের পরে মোট লিভার লিপিডগুলি মহাকর্ষীয়ভাবে নির্ধারণ করা হয়েছিল। আইসোপ্রোপ্যানল (সিগমা-অলড্রিচ, ইউএসএ) 25-এ দ্রবণীয়করণের পরে স্বতন্ত্র হেপাটিক লিপিডগুলিকে এনজাইম্যাটিকভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল (উপরে বর্ণিত হিসাবে)।

লিভার হিস্টোপ্যাথলজি এবং প্রদাহ মূল্যায়ন। হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন স্টেনিং (H&E স্টেনিং)। প্যারাফিন-এমবেডেড টিস্যুর টিক বিভাগগুলি (5 μm) একটি মাইক্রোটোম দিয়ে কেটে সুপারফ্রস্ট প্লাস® মাইক্রোস্কোপ স্লাইডগুলিতে (থার্মো সায়েন্টিফিক, ইউএসএ) স্থাপন করা হয়েছিল। হ্যারিস এট আল-এর পদ্ধতি অনুসারে বিভাগগুলি H&E স্টেনিংয়ের শিকার হয়েছিল। 26 এবং হিস্টোন (DPX) (Sigma-Aldrich, USA)25-এ dibutyl-phthalate দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছে।

ম্যাক-3 স্টেনিং এবং পরিমাণ নির্ধারণ। প্যারাফিন-এমবেডেড টিস্যুর পুরু অংশ (5 μm) একটি মাইক্রোটোম ব্যবহার করে কাটা হয়েছিল এবং সুপারফ্রস্ট প্লাস® মাইক্রোস্কোপ স্লাইডগুলিতে (থার্মো সায়েন্টিফিক, ইউএসএ) স্থাপন করা হয়েছিল। অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল, তারপরে পেরোক্সিডেস ব্লক (ডাকো সাইটোমেশন, ডেনমার্ক) দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল। প্রাথমিক বিশুদ্ধ অ্যান্টি-মাউস ম্যাক-3 অ্যান্টিবডি (বিডি ফার্মিংজেন, ইউএসএ) 1:50 ডিলিউশনে বিভাগে প্রয়োগ করা হয়েছিল। EnVision™ সিস্টেম (ডাকো, ডেনমার্ক) ব্যবহার করে নির্দিষ্ট স্টেনিং সনাক্ত করা হয়েছিল। স্লাইডগুলিকে সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি, এনভিশন-এইচআরপি পলিমার-কনজুগেটেড অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি দিয়ে 1:200 এর পাতলা করে দেওয়া হয়েছিল। ম্যাক-3 ডিএবি দ্রবণ (ডাকো, ডেনমার্ক) ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং হেমাটক্সিলিন দিয়ে পাল্টা দাগ দেওয়া হয়েছিল। বিভাগগুলি তখন ডিপিএক্সে মাউন্ট করা হয়েছিল। ইমেজজে সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে পরিমাণগত ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দ্বারা লিভারে ম্যাক্রোফেজের উপস্থিতি সনাক্ত করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ. চিকিত্সা এবং নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যগুলি বৈচিত্র্যের একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল, তারপরে পোস্টহক বনফেরোনির একাধিক তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছিল। সমস্ত পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ গ্রাফপ্যাড প্রিজম সংস্করণ 6 ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল৷{2}} (গ্রাফপ্যাড, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)৷ পি এর একটি সম্ভাবনা<0.05 would="" be="" considered="" statistically="">

ফলাফল

এর প্রভাবহারবাসিস্তানচেইঁদুরের সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত পেশীর বিষাক্ততার উপর ই। পেশীর ওজন এবং প্লাজমা ক্রিয়েটাইন কিনেস পরিমাপ। পাঁচটি বিভিন্ন ধরণের পেশী (কোয়াড্রিসেপস, গ্যাস্ট্রোকনেমিয়াস, সোলিয়াস, টিবিয়ালিস অ্যান্টিরিয়র এবং এক্সটেনসর ডিজিটোরাম লংগাস পেশী) সমস্ত চিকিত্সা করা ইঁদুর থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। পেশী ওজনের উপর বিভিন্ন চিকিত্সার প্রভাব চিত্র 1a এ দেখানো হয়েছে। সিমভাস্ট্যাটিন (640mg/kg) ইঁদুরের কোয়াড্রিসেপস, গ্যাস্ট্রোকনেমিয়াস এবং টিবিয়ালিস অগ্রবর্তী পেশীগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে ওজন হ্রাস করে, যখন এই হ্রাসগুলি ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে কোয়াড্রিসেপস এবং গ্যাস্ট্রোকনেমিয়াস পেশীতে HCE দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল। যদিওহারবাসিস্তানচেই সিমভাস্ট্যাটিন-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে টিবিয়ালিস অগ্রবর্তী পেশীগুলির ওজন পুনরুদ্ধার করার জন্য একটি প্রবণতা প্রয়োগ করেছে, এই চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলির কোনওটিই পরিসংখ্যানগত তাত্পর্যতে পৌঁছেনি। নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের (চিত্র 1a) সাথে তুলনা করার সময় পেশী ওজনের উপর একা HCE চিকিত্সার কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব পরিলক্ষিত হয়নি।

চিত্র 1b ইঁদুরের প্লাজমা ক্রিয়েটাইন কিনেস (CK) স্তরে বিভিন্ন চিকিত্সার প্রভাব দেখিয়েছে। সিমভাস্ট্যাটিন ইঁদুরের ক্রিয়েটাইন কাইনেজ কার্যকলাপে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটায়, যা উভয় ডোজে HCE সহ-চিকিৎসা দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়। কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় সিকে স্তরে এইচসিই একা চিকিত্সার কোনও উল্লেখযোগ্য প্রভাবও ছিল না। যেহেতু গ্যাস্ট্রোকনেমিয়াস সিমভাস্ট্যাটিন চিকিত্সার প্রতি সংবেদনশীল বলে মনে হয়েছিল এবং এটি ভর দ্বারা বিচ্ছিন্ন বৃহত্তম পেশী, তাই আমরা পেশী গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস পরিমাপ (GPx), মাইটোকন্ড্রিয়াল MMP এবং ROS পরিমাপ, এবং পেশী হিস্টোলজি এবং প্রদাহ মূল্যায়ন সহ আরও বিশ্লেষণের জন্য এই পেশীটিকে বেছে নিয়েছি। .

পেশী গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস (GPx) পরিমাপ। পেশী glutathione peroxidase মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছে এবং চিত্র 2a দেখানো হয়েছে. সিমভাস্ট্যাটিন প্রশাসন ইঁদুরের পেশী গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস (GPx) পরিমাপের হ্রাসের প্রবণতাকে প্ররোচিত করেছে। যাইহোক, এইচসিই 1.1 গ্রাম/কেজি এবং 2.2 গ্রাম/কেজি উভয় মাত্রায় পেশী জিপিএক্সে সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত হ্রাসকে প্রশমিত করার জন্য একটি প্রবণতা প্রয়োগ করেছে। সাধারণ নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের তুলনায় পেশী জিপিএক্স স্তরে একা এইচসিই চিকিত্সার কোনও উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না।

মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল (MMP) এবং ROS পরিমাপ। Simvastatin (640mg/kg) চিকিত্সা পেশী MMP (চিত্র 2b) একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস প্ররোচিত করেছে। HCE এবং simvastatin (চিত্র 2b) এর সহ-চিকিৎসা গ্রহণকারী ইঁদুরদের ক্ষেত্রে এই হ্রাস ডোজ-নির্ভরশীলভাবে উন্নত হয়েছিল। অন্যদিকে, মজার বিষয় হল, সিমভাস্ট্যাটিন একা চিকিত্সা গ্রুপ স্বাভাবিক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের (চিত্র 2c) তুলনায় পেশী মাইটোকন্ড্রিয়াল ROS মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। যাইহোক, সিমভাস্ট্যাটিন-চিকিত্সা করা ইঁদুরকে দেওয়া HCE চিকিত্সা পেশী মাইটোকন্ড্রিয়াল ROS স্তরগুলিকে স্বাভাবিক স্তরে পুনরুদ্ধার করতে ডোজ-নির্ভর প্রবণতা প্রয়োগ করে। মাইটোকন্ড্রিয়াল এমএমপি এবং আরওএস পরিমাপ উভয়ের জন্য সাধারণ নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় ইঁদুরগুলিতে একা এইচসিই চিকিত্সার কোনও উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না।

পেশী হিস্টোলজি এবং প্রদাহ মূল্যায়ন। বিভিন্ন চিকিত্সা দেওয়া ইঁদুর থেকে গ্যাস্ট্রোকনেমিয়াস পেশীগুলিকে আরও হিস্টোলজিক্যালভাবে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং প্রতিনিধি দাগযুক্ত অংশগুলি চিত্র 3a এ দেখানো হয়েছে। কন্ট্রোল গ্রুপের প্রাণীরা স্বাভাবিক পেশীগুলির হিস্টোলজিকাল বিভাগগুলি প্রদর্শন করেছে। বিপরীতে, সিমভাস্ট্যাটিন দিয়ে চিকিত্সা করা প্রাণীদের H&E বিভাগগুলি প্রদাহজনক চিহ্নিতকারীর (হলুদ তীর) অনুপ্রবেশ প্রকাশ করেছে, যা সিমভাস্ট্যাটিন এবং এইচসিই এর সংমিশ্রণে ইঁদুরের পেশী বিভাগে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। ডুমুর 4 বি এবং 5 বি এ দেখানো সংশ্লিষ্ট ম্যাক্রোফেজের পরিমাণের সাথে যথাক্রমে ডুমুর 4a এবং 5a-তে ম্যাক্রোফেজ CD68 এবং CD163-এর উপস্থিতির জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণগুলিও করা হয়েছিল। পেশী অংশগুলির ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণে সিমভাস্ট্যাটিন-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে ম্যাক্রোফেজ (CD68) এর উপস্থিতি প্রকাশ পেয়েছে (বাদামী রঙ), যা উভয় মাত্রায় HCE সহ-চিকিত্সা দেওয়া হলে ইঁদুরের মধ্যে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4b)। HCE একা চিকিত্সা করা প্রাণীগুলিতেও কোনও উল্লেখযোগ্য প্রদাহ লক্ষ্য করা যায়নি। একইভাবে, পেশী অংশগুলির ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণে সিমভাস্ট্যাটিন-চিকিত্সা করা ইঁদুরে (বাদামী রঙ) CD{11}}পজিটিভ ম্যাক্রোফেজের উপস্থিতি প্রকাশ পেয়েছে, যা 2.2 g/kg (চিত্র 5b) হারে HCE সহ-চিকিত্সা দেওয়া ইঁদুরগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। ) HCE একা চিকিত্সা করা প্রাণীগুলিতেও কোনও উল্লেখযোগ্য প্রদাহ লক্ষ্য করা যায়নি।

পেশী জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ। পেশীর মধ্যে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সম্পর্কিত জিনের উপর সিমভাস্ট্যাটিন এবং এইচসিই-এর প্রভাব নির্ধারণের জন্য, পিসিআর অ্যাস যা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সম্পর্কিত জিনগুলি প্রোফাইল করে তা ইঁদুর অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ডিফেন্স পিসিআর-অ্যারে ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। সিমভাস্ট্যাটিন চিকিত্সার দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত হওয়া জিনগুলিকে বিশ্লেষণ করা হয়েছে এবং চিত্র 6-এ উপস্থাপন করা হয়েছে। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট নিয়ন্ত্রক জিনের এক্সপ্রেশন প্রোফাইলের জন্য, সিমভাস্ট্যাটিন (640mg/kg) চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট নিয়ন্ত্রণকারী জিনের অভিব্যক্তি বাড়িয়েছে। Tese এর মধ্যে রয়েছে glutathione peroxidases (GPx) GPx1 এবং GPx7, এবং Serpinb1b এবং ক্লাব (চিত্র 6a) সহ অন্যান্য পারক্সিডেস। উভয় মাত্রায় (1.1 বা 2.2 গ্রাম/কেজি) এইচসিই জিপিএক্স এবং অন্যান্য পেরোক্সিডেসে এই সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত বৃদ্ধিকে স্বাভাবিক মাত্রায় হ্রাস করেছে। অন্যদিকে, এইচসিই চিকিত্সা একাই GPx1 এর অভিব্যক্তি মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করেছে। আরওএস বিপাক নিয়ন্ত্রণকারী জিনের অভিব্যক্তির বিষয়ে, সিমভাস্ট্যাটিন সাইবা, এনসিএফ১, এনসিএফ২, এসসিডি১ এবং ইউসিপি২ সহ অন্যান্য সুপারঅক্সাইড বিপাকীয় জিনের অভিব্যক্তিকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্ররোচিত করে। একইভাবে, উভয় মাত্রায় HCE উল্লেখযোগ্যভাবে এই বৃদ্ধি হ্রাস করেছে (চিত্র 6b)। অধিকন্তু, সিমভাস্ট্যাটিন Apoe, Ccl5, এবং Txn1 সহ অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-প্রতিক্রিয়াশীল জিনের অভিব্যক্তি প্ররোচিত করে, যখন এই অভিব্যক্তিগুলি HCE সহ-চিকিত্সা করা প্রাণীদের উভয় ডোজে (চিত্র 6c) উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। অন্যদিকে, সিমভাস্ট্যাটিন Txnip-এর জিনের অভিব্যক্তিতে উল্লেখযোগ্য হ্রাস ঘটায়। Txnip জিন এক্সপ্রেশনে (চিত্র 6c) সিমভাস্ট্যাটিন-প্ররোচিত হ্রাসের উপর HCE-এর কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না। সিমভাস্ট্যাটিন Slc38a1 এবং Vim সহ অক্সিজেন পরিবহনকারী নিয়ন্ত্রক জিনের অভিব্যক্তিতেও উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি করেছে। এইচসিই সহ-চিকিৎসা উভয় মাত্রায় এই জিনের প্রকাশকে হ্রাস করেছে (চিত্র 6d)।

ইঁদুরের খাদ্য গ্রহণ এবং শরীরের ওজনের উপর Simvastatin এবং HCE এর সম্মিলিত ব্যবহারের প্রভাব। চিত্র 7a সমস্ত চিকিত্সা গোষ্ঠীর জন্য ইঁদুরের দৈনিক খাদ্য গ্রহণ দেখিয়েছে। একটি উচ্চ চর্বিযুক্ত খাদ্য চাউ খাওয়ানো প্রাণীদের তুলনায় পশুদের দৈনিক খাদ্য গ্রহণে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটায় (p<0.001). there="" was="" however="" no="" significant="" effect="" of="" the="" herb="" or="" drug="" treatments="" among="" all="" high-fat-fed="" groups="" (fig.="">

সাপ্তাহিক শরীরের ওজন পরিমাপ। 16 সপ্তাহের উচ্চ চর্বিযুক্ত খাওয়ানোর পরে, HF-খাওয়া প্রাণীরা চৌ-খাওয়ানো প্রাণীদের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ওজন লাভ করে (চিত্র 7বি)। যাইহোক, এইচএফ-ফেড ইঁদুর এবং সমস্ত এইচএফ-ফেড গ্রহণকারী চিকিত্সা গোষ্ঠীর মধ্যে কোনও উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না। সিমভাস্ট্যাটিনের সহ-চিকিৎসা গ্রহণকারী এইচএফ-ফেড ইঁদুর এবং এইচসিই বনাম এইচএফ-ফেড ইঁদুর যে এইচসিই বা সিমভাস্ট্যাটিন চিকিত্সা গ্রহণ করে তাদের মধ্যে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না (চিত্র 7বি)।

হাইপারলিপিডেমিয়া এবং ইঁদুরের হেপাটিক স্টেটোসিসে সিমভাস্ট্যাটিন এবং এইচসিই এর সম্মিলিত ব্যবহারের প্রভাব। প্লাজমা লিপিড এবং ক্রিয়েটাইন কিনেস কার্যকলাপ পরিমাপ। সমস্ত ইঁদুরের প্লাজমা লিপিডের মাত্রা চিত্র 8-এ দেখানো হয়েছে। সাধারণ চা-খাওয়া ইঁদুরের তুলনায়, HF-খাওয়া ইঁদুরের প্লাজমা টোটাল কোলেস্টেরল (TC), যা সমস্ত চিকিত্সা গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 8a) . সিমভাস্ট্যাটিন এবং এইচসিই দিয়ে চিকিত্সা করা এইচএফ-খাওয়া ইঁদুরের প্লাজমা টিসি উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল এইচএফ প্রাণীদের তুলনায় একা সিমভাস্ট্যাটিন দেওয়া বা এইচএফ প্রাণীদের এইচসিই দেওয়া হয়েছে (পি<0.001 and=""><0.01, respectively)="" (fig.="" 8a).="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" between="" hf-fed="" mice="" receiving="" hce="" alone="" vs="" simvastatin="" alone="" treatment="" group,="" suggesting="" hce="" has="" comparable="" effects="" as="" simvastatin.="" besides,="" hf-fed="" mice="" also="" had="" significantly="" higher="" plasma="" triglyceride="" (tg)="" levels="" compared="" to="" mice="" given="" a="" normal="" chow="" diet=""><0.05) (figure="" 8b).="" there="" was="" a="" trend="" for="" a="" reduction="" in="" simvastatin="" treatment="" alone="" group="" on="" plasma="" tg="" in="" hf-fed="" animals,="" though="" this="" did="" not="" reach="" statistical="" significance.="" however,="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment="" significantly="" reduced="" plasma="" tg="" compared="" to="" control="" hf-fed="" animals=""><0.001 and=""><0.01, respectively).="" when="" comparing="" between="" simvastatin="" treatment="" alone="" group="" with="" simvastatin="" co-treatment="" with="" hce="" group,="" hce="" co-treatment="" with="" simvastatin="" had="">

শুধুমাত্র সিমভাস্ট্যাটিন চিকিত্সা দেওয়া HF-খাওয়া ইঁদুরের তুলনায় কম প্লাজমা TG (p<0.01) (fig.="" 8b).="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" between="" hf-fed="" mice="" receiving="" hce="" alone="" vs="" the="" simvastatin="" treatment="" group,="" though="" hce="" had="" a="" slightly="" better="" reduction="" in="" tg="" levels.="" in="" addition,="" high-fat-diet-induced="" significant="" increase="" in="" plasma="" high-density="" lipoprotein="" (hdl)="" cholesterol="" and="" plasma="" low-density="" lipoprotein="" (ldl)="" cholesterol="" in="" mice="" compared="" to="" normal="" chow-fed="" animals="" (fig.="" 8c="" and="" d).="" simvastatin="" treatment="" alone="" significantly="" reduced="" both="" lipids="" in="" high-fat-fed="" mice.="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment="" also="" significantly="" reduced="" both="" types="" of="" plasma="" lipids="" compared="" to="" mice="" given="" hf="" diet="" alone.="" there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" both="" lipids="" among="" all="" treatment="" groups.="" figure="" 8e="" showed="" the="" effect="" of="" different="" treatments="" on="" plasma="" creatine="" kinase="" (ck)="" levels.="" interestingly,="" hf="" diet-induced="" significant="" increase="" in="" plasma="" ck="" levels="" in="" mice="" compared="" to="" normal-chow-fed="" mice="" (fig.="" 8e).="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" the="" co-treatment="" of="" simvastatin="" significantly="" reduced="" plasma="" ck="" levels="" compared="" to="" mice="" given="" hf="" diet="" alone=""><0.01 and=""><0.01, respectively).="" simvastatin="" treatment="" alone="" also="" significantly="" reduced="" the="" high-fat="" diet-induced="" increase="" in="" plasma="" ck="" levels.="" there="" was="" also="" no="" significant="" difference="" in="" plasma="" ck="" levels="" among="" all="" active="" treatment="" groups="">আইভার লিপিড পরিমাপ।

এইচএফ-প্ররোচিত হেপাটোমেগালি (বর্ধিত লিভার) এর উপর বিভিন্ন চিকিত্সা গোষ্ঠীর প্রভাবগুলি মোট হেপাটিক লিপিড সামগ্রীতে উল্লেখযোগ্য হ্রাসের সাথে যুক্ত ছিল, যা লিভার প্রতি লিপিডের মিলিগ্রাম হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল (চিত্র 9a)। এইচএফ-ফেড ইঁদুরে মোট লিভারের লিপিড উপাদান সাধারণ চাউ-ফেড ইঁদুরের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (3।{5}}গুণ বেশি, p<0.001). simvastatin="" exerted="" no="" significant="" effect="" on="" the="" high-fat="" diet-induced="" increase="" in="" total="" liver="" lipid.="" interestingly,="" hce="" significantly="" reduced="" such="" a="" diet-induced="" increase="" in="" liver="" lipid=""><0.05). on="" the="" other="" hand,="" simvastatin="" co-treatment="" with="" hce="" exerted="" a="" trend="" to="" reduce="" the="" liver="" lipid="" content="" though="" did="" not="" reach="" statistical="" significance="" (p="0.15)." however,="" when="" comparing="" the="" liver="" lipid="" content="" among="" all="" treatment="" groups,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" all="">

চিত্র 9b এবং c-এ দেখানো হয়েছে, লিভারের মোট কোলেস্টেরল (TC) এবং লিভার ট্রাইগ্লিসারাইড (TG) পরিমাপ প্রকাশ করেছে যে HF-খাওয়া ইঁদুরের উভয় লিপিডের মাত্রা স্বাভাবিক চা-খাওয়া ইঁদুরের তুলনায় (অর্থাৎ 3৷{4} } টিসিতে গুণ বৃদ্ধি, পি<0.001; and="" 3.4-fold="" increase="" in="" tg,=""><0.001). simvastatin="" treatment="" significantly="" reduced="" liver="" total="" cholesterol="" levels=""><0.05) but="" not="" triglyceride="" levels.="" on="" the="" other="" hand,="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment,="" significantly="" reduced="" both="" liver="" total="" cholesterol="" and="" triglyceride="" levels="" in="" high-fat-fed="" mice.="" when="" comparing="" the="" effects="" among="" all="" groups,="" we="" observed="" no="" significant="" difference="" in="" liver="" total="" cholesterol,="" but="" there="" was="" a="" significant="" reduction="" in="" liver="" tg="" for="" the="" hce="" treatment="" group="" as="" compared="" to="" the="" simvastatin="" treatment="" group="" (fig.="" 9b="" and="">

লিভারের প্রদাহ মূল্যায়ন। ম্যাক্রোফেজ (ম্যাক-3) (চিত্র 10a) এর উপস্থিতির জন্য দাগ দেওয়ার জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং করা হয়েছিল। লিভার বিভাগের ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণে উচ্চ-চর্বিযুক্ত এবং স্বাভাবিক চা-খাওয়া ইঁদুর উভয় ক্ষেত্রেই Mac-3-এর উপস্থিতি প্রকাশ পেয়েছে (বাদামী রঙ)। সিমভাস্ট্যাটিন-চিকিত্সা করা প্রাণীদের মধ্যে এই প্রদাহ আরও বৃদ্ধি পেয়েছিল, যদিও এই ধরনের বৃদ্ধি পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য পর্যন্ত পৌঁছায়নি। মজার বিষয় হল, HCE চিকিত্সা, সিমভাস্ট্যাটিন সহ-চিকিৎসা সহ বা ছাড়াই উচ্চ চর্বিযুক্ত ইঁদুরের প্রদাহ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে। সমস্ত চিকিত্সা গোষ্ঠীর মধ্যে তুলনা করার সময়, এইচসিই চিকিত্সা, সিমভাস্ট্যাটিন সহ-চিকিত্সা সহ বা ছাড়াও সিমভাস্ট্যাটিন চিকিত্সা গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম প্রদাহ ছিল (পি<0.001 and=""><0.001, respectively).="" these="" data="" are="" also="" presented="" as="" percentage="" areas="" in="" fig.="">

পড়া চালিয়ে যান...