অংশ Ⅱ: PKD1 এর অতিরিক্ত এক্সপ্রেশন পলিসিস্টিক কিডনি রোগের কারণ হয়

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

ক্যারোলিন থিভিয়ার্জ, আলমিরা কুরবেগোভিচ, মার্টিন কুইলার্ড, রিচার্ড গুইলাউম, অলিভিয়ার কোট এবং মেরি ট্রুডেল

অন্তর্নিহিত প্যাথোজেনেটিক প্রক্রিয়াঅটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগ(ADPKD) ব্যাখ্যা করা বাকি। যদিও প্রমাণ আছে যে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন হ্যাপ্লোইনসফিসিয়েন্সি এবং হেটেরোজাইগোসিটি হ্রাস ইঁদুরের মধ্যে সিস্ট গঠনের কারণ হতে পারে, প্যারাডক্সিকভাবে উচ্চ মাত্রার PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1ADPKD (অটোসোমাল ডমিনেন্ট পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) রোগীদের কিডনিতে অভিব্যক্তি সনাক্ত করা হয়েছে। PKD1 কিনা তা নির্ধারণ করতে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ফাংশন লাভ একটি প্যাথোজেনেটিক প্রক্রিয়া হতে পারে, একটি PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ব্যাকটেরিয়া কৃত্রিম ক্রোমোজোম PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-BAC) শুধুমাত্র একটি স্থায়ী PKD1 লক্ষ্য করার জন্য সমজাতীয় পুনর্মিলন দ্বারা সংশোধন করা হয়েছিল (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অভিব্যক্তি প্রাপ্তবয়স্কদের কিডনিতে পছন্দ করে। বেশ কিছু ট্রান্সজেনিক লাইন তৈরি করা হয়েছিল যা বিশেষভাবে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) কিডনিতে ট্রান্সজিন 2- থেকে 15- PKD1 এর উপর ভাঁজ (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ1) অন্তঃসত্ত্বা স্তর। সমস্ত ট্রান্সজেনিক ইঁদুর প্রজননযোগ্যভাবে টিউবুলার এবং গ্লোমেরুলার সিস্ট এবং রেনাল অপ্রতুলতা তৈরি করে এবং রেনাল ব্যর্থতার কারণে মারা যায়। এই মডেলটি দেখায় যে বন্য-টাইপ PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1মানুষের এডিপিকেডি (অটোসোমাল প্রভাবশালীপলিসিস্টিক কিডনি রোগ) আমাদের ফলাফলগুলি সমস্ত ট্রান্সজেনিক লাইন থেকে ইঁদুরের মধ্যে একটি আকর্ষণীয় বর্ধিত রেনাল সি-মাইক এক্সপ্রেশন উন্মোচন করেছে, যা নির্দেশ করে যে সি-মাইক PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) আণবিক পথ। এই গবেষণাটি শুধুমাত্র একটি অমূল্য এবং প্রথম PKD তৈরি করেনি（পলিসিস্টিক কিডনি রোগ）আণবিক প্যাথোজেনেসিস এবং থেরাপির মূল্যায়নের মডেল কিন্তু এটি প্রমাণও দেয় যে কার্যের লাভ ADPKD-তে একটি প্যাথোজেনেটিক প্রক্রিয়া হতে পারে (অটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগ).

কিডনি রোগের চিকিৎসায় সিস্তানচে

অংশ Ⅰ করতে এখানে ক্লিক করুন

ফলাফল

PKD1 এর উৎপাদন (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-Ac-BAC সমজাতীয় পুনর্মিলন দ্বারা। PKD1 কিনা তা নির্ধারণ করতে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1এডিপিকেডি (অটোসোমাল ডমিনেন্ট পলিসিস্টিক কিডনি ডিজিজ) ফেনোটাইপ তৈরির জন্য একা ফাংশন লাভ যথেষ্ট, আমরা প্রথমে একটি জিনোমিক ক্লোনকে বিচ্ছিন্ন করেছিলাম যার মধ্যে সম্পূর্ণ PKD1 রয়েছে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) একটি BAC ভেক্টর 129/Sv লাইব্রেরিতে জিন। এই লাইব্রেরিটি PCR দ্বারা PKD1 এর জন্য দুটি সেট প্রাইমার সহ স্ক্রীন করা হয়েছিল (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন যা 5'এন্ডে এক্সন 1 এবং 3'এন্ডের দিকে এক্সন 39 থেকে 40 পর্যন্ত বিস্তৃত (চিত্র 1)। PKD1 এর জন্য একটি ইতিবাচক BAC ক্লোন (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন সনাক্ত করা হয়েছিল যাতে সমগ্র সংলগ্ন Tsc2 জিন শরীর অন্তর্ভুক্ত ছিল। পিকেডি 1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) সন্নিবেশটি বিশদভাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল যাতে জিনোমিক কাঠামো অন্তঃসত্ত্বা PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ1) 129/Sv মাউস স্ট্রেনের জিন যেখান থেকে সন্নিবেশ করা হয়েছে এবং C57BL/6J ইনব্রিড স্ট্রেন থেকে। PKD1 এর জিনোমিক মানচিত্র (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) দক্ষিণী দাগ বিশ্লেষণের মাধ্যমে বিএসি-তে এবং এই জন্মগত স্ট্রেনে লোকাস, চারটি সীমাবদ্ধ এনজাইম পরিপাক এবং সাতটি প্রোব সমগ্র PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)জিন, পুনর্বিন্যাসের কোন প্রমাণ ছাড়াই অভিন্ন দেখায় (চিত্র 1)। এই BAC-তে একটি -121-kb সন্নিবেশ রয়েছে যার মধ্যে রয়েছে ~37 kb আপস্ট্রিম এবং -39 kb একটি PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ1) ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং সিকোয়েন্সিং দ্বারা নির্ধারিত জিন।

ডুমুর 2.SBPkdlrAc নির্মাণ এবং ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের উত্পাদন। (a) দুটি পরিবর্তন প্রবর্তনের জন্য মুরিনে পিকেডিএল-বিএসি-তে ধারাবাহিক সমজাতীয় পুনর্মিলন ইভেন্টগুলি সম্পাদিত হয়েছিল: পিকেডিএল ইনিশিয়েশন কোডনের অবিলম্বে SB নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলি প্রবেশ করানো হয়েছে এবং এক্সন (প্রাক্তন) এ প্রবর্তিত ইকোআরআই (আরআই*) এর একটি নীরব বিন্দু মিউটেশন। 10। BAC রিকম্বিনেশন ভেক্টরে একটি R6Ky প্রতিলিপির উত্স, একটি অ্যাম্পিসিলিন-প্রতিরোধী জিন, একটি SacB জিন, একটি RecA জিন এবং একটি অনন্য Smal ক্লোনিং সাইট রয়েছে যেখানে "SB" নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলি (বা exon 10 সাইলেন্ট পয়েন্ট মিউটেশন) ক্লোন করা হয়েছিল। Pkd1 জিন অস্ত্রের সাথে। BAC পুনঃসংযোজন ভেক্টরটি ই, কোলি (DH10B) কোষে ইলেক্ট্রোপোরেট করা হয়েছিল Pkdl-BAC ওয়াইল্ড টাইপ ধারণকারী, এবং নির্বাচনের পর BAC সমন্বিত উৎপন্ন করার জন্য দুটি Pkd1 অস্ত্রের মধ্যে একটির মাধ্যমে একটি প্রথম সমজাতীয় পুনঃসংযোজন ঘটনা ঘটেছে। BAC সমন্বিতকরণের পুনর্মিলন ভেক্টর এবং নকল করা Pkdl অঞ্চলগুলি একটি দ্বিতীয় নির্বাচন ধাপে বাদ দেওয়া হয়েছিল। সমাধান করা Pkdl-BAC গুলি হয় বন্য প্রকারে প্রত্যাবর্তন করতে পারে বা ইচ্ছাকৃত পরিবর্তন অন্তর্ভুক্ত করতে পারে। নতুন পরিবর্তিত BAC-তে পরবর্তী সমজাতীয় পুনর্মিলন চালু করা যেতে পারে।(b)(ienomc DNA ot SBPkd l-etransgenic mxce ছিল anakZed bv Sou thern blot.AVicToiD1ecLon লিনিয়ারাইজড টুকরোগুলির মাথার মধ্যে ট্রান্সজিন সন্নিবেশ ঘটায়। -টু-টেইল, এবং/অথবা লেজ-থেকে-টেইল ওরিয়েন্টেশন। 5'এন্ড হিন্দআইআই-এর সাথে জিনোমিক ডিএনএ হজম করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং নির্দিষ্ট ট্রান্সজেন এসবি প্রোব (বাম প্যানেল) দিয়ে হাইব্রিডাইজ করা হয়েছিল। তিনটি ট্রান্সজেনিক মাউস লাইনই প্রত্যাশিত 10 তৈরি করেছে .9- হেড-টু-টেইল সন্নিবেশের জন্য kb ব্যান্ড; লাইন 39-এ পর্যবেক্ষণ করা অতিরিক্ত ব্যান্ড সম্ভবত SB এবং মাউস জিনোমের মধ্যে একটি জংশন ফ্র্যাগমেন্টকে প্রতিনিধিত্ব করে৷ ট্রান্সজিনের অভ্যন্তরীণ অখণ্ডতা বেশ কয়েকটি সীমাবদ্ধ এনজাইম হজম দ্বারা নিরীক্ষণ করা হয়েছিল, এবং জিনোমিক ডিএনএর একটি প্রতিনিধি ব্লট ইকোআরআই দিয়ে পরিপাক করা হয়েছে এবং পিকেডিএল প্রোব (এক্সন 7-15) দিয়ে হাইব্রিডাইজ করা হয়েছে (মাঝারি প্যানেল)।

এই SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-বিএসি ক্লোনটি ই. কোলাইতে পরপর দুটি সমজাতীয় পুনর্মিলন ঘটনা দ্বারা পরিবর্তিত হয়েছিল। PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিনটি সিডিএনএ মানচিত্রে 2355 অবস্থানে একটি অভিনব ইকোআরআই সাইট তৈরি করতে একটি নিউক্লিওটাইড (জি থেকে এ) প্রতিস্থাপন করে এক্সন 10 এ ট্যাগ করা হয়েছিল। এই নীরব বিন্দু মিউটেশন তৈরি করা হয়েছিল PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অন্তঃসত্ত্বা থেকে BAC এর জিন এবং প্রতিলিপি। উপরন্তু, আমরা PKD1 এর 5'নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলি প্রতিস্থাপন করেছি (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-BAC জিন SBM থেকে পূর্বে চিহ্নিত "SB" রেনাল এপিথেলিয়াল-নির্দিষ্ট উপাদানগুলির সুবিধা গ্রহণ করে (c-Myc-এর সাথে সংযুক্ত) অথবা SBF-এর সাথে লিঙ্কযুক্ত c-fos) গঠন-ট্রান্স-জিন কিডনিতে অভিব্যক্তি সীমাবদ্ধ করতে (36, 38)(চিত্র 2a)।

এই নতুন SBPkdlrAG-BAC NotL দিয়ে হজম করা হয়েছিল, যা SB উপাদানগুলির অবিলম্বে উজানে অবস্থিত একটি অনন্য সাইট এবং Tsc2 জিন বডির মধ্যে ClaI, Tsc2 নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলি এবং জিনের দেহের 5'অর্ধেক অংশকে T'sc2 এর অভাব নিশ্চিত করার জন্য সমস্ত টিস্যুতে এক্সোজেনাস এক্সপ্রেশন এবং প্রোক্যারিওটিক বিএসি ভেক্টর সিকোয়েন্স (চিত্র 1 এবং 2) অপসারণ করতে। এই 70-kb NotI-ClaI রৈখিক খণ্ডটি বিচ্ছিন্ন, বিশুদ্ধ ছিল। এবং oocyte microinjection (36) এর জন্য পরিমাপ করা হয়েছে।

CISTANCHE বেনিফিট: কিডনি রোগের চিকিৎসা

SBPkdl-ac ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের উত্পাদন এবং বিশ্লেষণ। SBPkdlrAc ট্রান্সজিনের বেশ কয়েকটি কপি বহনকারী চার ট্রান্সজেনিক প্রতিষ্ঠাতা ধারাবাহিকভাবে PKD তৈরি করেছেন। চারটি SBPKD1 থেকে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1দক্ষিণী বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত RAC প্রতিষ্ঠাতা ইঁদুর, তিনটি SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)TAG ট্রান্সজেনিক লাইন ট্রান্সজিনের দুই থেকে নয়টি কপি (চিত্র 2b) দিয়ে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। এই লাইনগুলিতে ট্রান্সজিন অখণ্ডতার বৈশিষ্ট্য 5', অভ্যন্তরীণ এবং 3'প্রোবের মাধ্যমে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল যেমন চিত্র.2b-এর প্রতিনিধি উদাহরণ দ্বারা দেখানো হয়েছে৷ SBPkdlrAc-এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ 10.9 kb এ 5'"SB" প্রোবের ব্যান্ডের সাথে ট্রান্সজেনিক লাইন প্রকাশিত হয়েছে৷ ট্রান্স-জিন একটি মাথা-থেকে-টেইল অভিযোজনে একত্রিত হচ্ছে এবং 3' প্রোব a 7৷{12}}kb ব্যান্ড (চিত্র.2b) দিয়ে প্রকাশ করা হচ্ছে৷ এছাড়াও, অভ্যন্তরীণ অনুসন্ধান 94-kb এন্ডোজেনাস PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ব্যান্ডের পাশাপাশি 6৷{19}}কেবি এবং 2৷{21}}কেবি ব্যান্ড ট্রান্সজিনের সনাক্ত করেছে এক্সন 10 (চিত্র 2b) এ EcoRI সন্নিবেশ সাইটের কারণে। এই ইঁদুরগুলিতে জিনোমিক ওভারল্যাপিং কাঠামো বিশ্লেষণের উপর ভিত্তি করে ট্রান্সজিনের সম্পূর্ণ অনুলিপি রয়েছে।

PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)প্রাপ্তবয়স্ক SBPkdl-Ac ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের কার্যকারিতা লাভ। SBPkdl-AG এর অভিব্যক্তি। ট্রান্সজিন এবং PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন বিভিন্ন অঙ্গে তদন্ত করা হয়েছিল। ট্রান্সজিন এবং/অথবা অন্তঃসত্ত্বা জিন থেকে প্রতিলিপি স্তরের পরিমাপ উত্তর ব্লট বিশ্লেষণ (চিত্র 3a) দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল। প্রত্যাশিত হিসাবে, ট্রান্সজিন এবং অন্তঃসত্ত্বা জিন প্রতিলিপিগুলি একই দৈর্ঘ্যের ছিল (14.2 কেবি)। নিয়ন্ত্রণ GAPDH এক্সপ্রেশনের উপর ভিত্তি করে, সমস্ত SBPkd 1 এ মাউস লাইনের কিডনিগুলি স্বাভাবিক PKD1 এর তুলনায় ধারাবাহিকভাবে প্রতিলিপি অভিব্যক্তি বৃদ্ধি করেছে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) একই বয়সের প্রাপ্তবয়স্কদের কিডনিতে (n=3) মাত্রা। বিভিন্ন ট্রান্সজেনিক লাইনের জন্য রেনাল ট্রান্সজেন এবং এন্ডোজেনাস এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণ রেনাল এন্ডোজেনাস PKD1 এর উপরে 2- থেকে 15- ভাঁজ পর্যন্ত পরিসীমা প্রদর্শন করে(পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)মাত্রা (চিত্র 3a)। বিশেষ করে, ট্রান্সজেনিক লাইন39(n=4) PKD1 উচ্চতর দেখিয়েছে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1লাইন 3 (n=3) এবং 41(n=4) এর চেয়ে ) স্তর। উপরন্তু, PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)উত্তর ব্লট বিশ্লেষণ দ্বারা পরিমাপিত এক্সপ্রেশন স্তরগুলি এক্সন 1 এবং 2 (চিত্র 3বি) এ প্রাইমার ব্যবহার করে রিয়েল-টাইম পিসিআর দ্বারা প্রাপ্তদের সাথে সম্পর্কিত।

FIG.3.SBPkdlrA ইঁদুরের রেনাল এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ। (a) নর্দার্ন ব্লটিং দ্বারা তিনটি ট্রান্সজেনিক লাইন থেকে কিডনিতে Pkd1 এন্ডোজেনাস (এন্ডো) এবং SBPkdlrA ট্রান্সজিন (Tg) ট্রান্সক্রিপ্টের এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ। প্রতিটি ট্রান্সজেনিক লাইন থেকে দুটি নমুনা, 3,39, এবং 41 একই জেনেটিক পটভূমি থেকে স্বাভাবিক নিয়ন্ত্রণ বয়সের সাথে মিলে যাওয়া ইঁদুরের অন্তঃসত্ত্বা রেনাল পিকেডিএল ট্রান্সক্রিপ্টের সাথে তুলনা করা হয়েছিল (C5BI 6I ×CBA/DE, কিডনি আরএনএ নমুনাগুলি ট্রান্সজেনিক ইঁদুর থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল শেষ পর্যায়ের রেনাল ডিজিজ। এন্ডো এবং টিজি থেকে ট্রান্সক্রিপ্ট দুটিই দৈর্ঘ্যে -14.2 কেবি। ননট্রান্সজেনিক নিয়ন্ত্রণের তুলনায় সমস্ত ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের কিডনিতে ট্রান্সক্রিপ্টগুলির একটি পদ্ধতিগত ওভার এক্সপ্রেশন পরিলক্ষিত হয়েছিল। GAPDH একটি অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল লোড করার জন্য। এই ট্রান্সজেনিক ইঁদুরগুলিতে রেনাল এক্সপ্রেশনের পরিমাণ 2- থেকে 15-ভাঁজ পর্যন্ত Pkd1এন্ডোজেনাস স্তরের সাপেক্ষে নিয়ন্ত্রণ ইঁদুর থেকে নির্বিচারে 1 এ সেট করা হয়েছে। এন্ডোজেনাস এবং ট্রান্সজিন (এক্সন 1 এবং এক্সন 2) এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর এবং অর্ধ-পরিমাণমূলক RT-PCR দ্বারা শুধুমাত্র Pkd1 ট্রান্সজিন (B. exon 2) সহ মোট Pkdl প্রশস্ত করতে ব্যবহৃত হয়, SBPkdlAc ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশনের RT-PCR বিশ্লেষণ রেনালের মধ্যে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং অতিরিক্ত রেনাল টিস্যু। SBPkdl.Ac ট্রান্সজিন (Tg) এর একটি প্রতিনিধি অর্ধ-পরিমাণমূলক মূল্যায়ন দেখানো হয়েছে যেটিতে তিনটি ট্রান্সজেনিক লাইনের (3. 39, এবং 41) এবং এক্সট্রারেনাল টিস্যুগুলির একটি মাউস থেকে একটি রেনাল টিস্যু নমুনা (K) অন্তর্ভুক্ত রয়েছে। H, হৃদয়; লু, ফুসফুস; B. মস্তিষ্ক; লি, লিভার; এবং 39 লাইনের একটি মাউস থেকে এস. প্লীহা। ট্রান্সজিনের অভিব্যক্তি সমস্ত ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের কিডনিতে সহজেই সনাক্ত করা যায়, যেখানে এটি বহিরাগত টিস্যুতে কম থেকে সনাক্ত করা যায় না। SBPkd1rAc ট্রান্সজিন থেকে অভিব্যক্তি একটি নির্দিষ্ট 307-bp অ্যামপ্লিকন তৈরি করেছে, যেখানে S16 অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ একটি 102-bp অ্যামপ্লিকন তৈরি করেছে। M,100-bp মার্কার; H, O, PCR পরিবর্ধনের জন্য নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ। (c) SBPkdlr-এর রিয়েল-টাইম PCR এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ। ট্রান্সজিনটি বেশ কয়েকটি স্বাধীন ইঁদুর থেকে নির্ধারিত হয়েছিল। তিনটি ট্রান্সজেনিক মাউস লাইন 3 (n=5), 39(n =7), এবং 41 (n=5) থেকে SBPkdl.Ac ট্রান্সজিন দেখায় যে লাইন 39 এবং 41 সর্বোচ্চ ছিল রেনাল এক্সপ্রেশন মাত্রা। তিনটি ট্রান্সজেনিক লাইনের ইঁদুর (n=3) থেকে এক্সট্রারেনাল টিস্যুতে SBPkdlrAc ট্রান্সজিনের অভিব্যক্তি রিয়েল-টাইম পিসিআর দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। প্রতিটি ট্রান্সজেনিক লাইনের কিডনির (100 শতাংশ) তুলনায়, এক্সট্রারেনাল টিস্যুগুলির বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশনের মাত্রা ক্রমাগতভাবে 10- থেকে 1,000-ভাঁজ মস্তিষ্ক, হৃৎপিণ্ড, লিভার, অগ্ন্যাশয়ে কম ছিল , প্লীহা এবং ফুসফুস। (d) SBPkdl.Ac কিডনিতে অর্ধ-পরিমাণমূলক RT-PCR দ্বারা অন্তঃসত্ত্বা c-mc জিনের প্রকাশ। একটি পরিকল্পিত চিত্র দেখায় যে প্রাইমারগুলি c-Myc কে প্রশস্ত করতে ব্যবহৃত হয়। প্রত্যাশিত হিসাবে, প্রাপ্তবয়স্কদের ননট্রান্সজেনিক কিডনিতে (নিয়ন্ত্রণ) c-Myc-এর অভিব্যক্তি ন্যূনতম। বিপরীতে, তিনটি লাইনের সমস্ত প্রাপ্তবয়স্ক SBPkdlrAc কিডনিতে c-Mye-এর বর্ধিত অভিব্যক্তি সনাক্ত করা হয়, যেমনটি প্রাপ্তবয়স্কদের ট্রান্সজেনিক SBM কিডনিতে ব্যবহৃত হয়। ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ। c-Myc এর amplicon ছিল 250 bp; S16 এর amplicon, একটি অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ, ছিল 102 bp.M,100-bp মার্কার।

5'অঅনুবাদিত অঞ্চলে (বি, -গ্লোবিন প্রমোটার) এবং PKD1 এর এক্সন 2-এ প্রাইমার ব্যবহার করে প্রাপ্তবয়স্ক বয়সে তিনটি ট্রান্সজেনিক লাইনে রিয়েল-টাইম পিসিআর এবং আধা-পরিমাণমূলক আরটি-পিসিআর দ্বারা ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশন স্তরের পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল। (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)(চিত্র 3 খ)। SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের আরএসি এক্সপ্রেশনটিকে অভ্যন্তরীণ মান হিসাবে S16 রাইবোসোমাল প্রোটিন জিন পণ্যের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। অর্ধ-পরিমাণগত RT-PCR পরিবর্ধনের জন্য ব্যবহৃত শর্তগুলি রৈখিক পরিসরের মধ্যে ছিল। রিয়েল-টাইম পিসিআর এবং অর্ধ-পরিমাণমূলক RT-PCR দ্বারা ট্রান্সজিন অভিব্যক্তি ধারাবাহিকভাবে এবং বিশেষভাবে অন্যান্য অঙ্গের (চিত্র 3b এবং c) সাথে সম্পর্কিত সমস্ত ট্রান্সজেনিক লাইনের কিডনিতে সর্বোচ্চ অভিব্যক্তি দেখায়। একটি পৃথক নমুনার জন্য রেনাল এক্সপ্রেশন স্তরগুলি ব্যবহৃত সনাক্তকরণ কৌশলগুলির সাথে পুনরুত্পাদনযোগ্য ছিল। PKD1 এর সর্বোচ্চ স্তর (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ট্রান্সজেন রেনাল এক্সপ্রেশন 39 এবং 41 লাইনের জন্য পরিমাপ করা হয়েছিল। বর্ধিত PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এক্সপ্রেশন ট্রান্সজিন বা অন্তঃসত্ত্বা জিনের ফলে হয়েছে কিনা তা নিরীক্ষণ করতে, তিনটি ট্রান্সজেনিক লাইনের একই গ্রুপের ইঁদুরকে রেনাল PKD1 এর সাথে তুলনা করা হয়েছিল। পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশন এবং রেনাল PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এর জন্য রিয়েল-টাইম পিসিআর দ্বারা মোট (ট্রান্সজিন এবং অন্তঃসত্ত্বা) প্রকাশ। মজার ব্যাপার। লাইন 3 এর তুলনায় 39 এবং 41 লাইন দেখায় যে PKD1 বৃদ্ধি পেয়েছে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1ট্রান্সজিন রেনাল এক্সপ্রেশন PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি ডিজিজ 1) মোট রেনাল এক্সপ্রেশনের অনুরূপ বা তার উপরে ছিল, এই প্ররোচিত অভিব্যক্তির জন্য বিশেষভাবে দায়ী হিসাবে ট্রান্সজিনকে নির্দেশ করে। বিভিন্ন অঙ্গে (হার্ট, ফুসফুস, মস্তিষ্ক, যকৃত, অগ্ন্যাশয় এবং প্লীহা সহ), SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) RAC; প্লীহা এবং ফুসফুসে ট্রান্সজিন খুব দুর্বল অভিব্যক্তি দেখায়-অনেক অঙ্গে শনাক্ত করা যায় না এমন অভিব্যক্তি সহ (চিত্র 3b)। রিয়েল-টাইম পিসিআর দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছে কিডনির অভিব্যক্তি (চিত্র 3c) এর তুলনায় এক্সট্রারেনাল টিস্যুতে ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশনের একটি 10-থেকে 1,000-গুণ নিম্ন স্তরের। SBPkdlrAc ট্রান্সজিনের "এসবি" নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলি অগ্রাধিকারমূলক রেনাল এক্সপ্রেশন প্রদান করে; সি-মাইক (এসবিএম) এবং সি-ফস (এসবিএফ) (36, 38) এর সাথে সংযুক্ত ট্রান্সজিনে ব্যবহার করার সময় এই বিশেষ অঙ্গ বিতরণও নির্ধারিত হয়েছিল। c-Mye, PKD1 এর একটি ডাউনস্ট্রিম ইফেক্টর (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) SBPkdlrAc-এ সিগন্যালিং পথ: ইঁদুর। SBPkdlrAc ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের আন্তঃকোষীয় প্যাথোজেনেটিক প্রক্রিয়া সম্পর্কে অন্তর্দৃষ্টি অর্জনের জন্য, আমরা পরবর্তীতে মানব ADPKD (অটোসোমাল ডমিনেন্ট পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) কিডনিতে c-Myc ডিরেগুলেশনের পূর্ববর্তী পর্যবেক্ষণের ভিত্তিতে c-Myc রেনাল এক্সপ্রেশন স্তর নিরীক্ষণ করার চেষ্টা করেছি। তিনটি ট্রান্সজেনিক লাইন 3(n=4).39(n=7), এবং 41 (n =4) ​​পাশাপাশি নিয়ন্ত্রণ (n {{9}) থেকে কিডনির বিশ্লেষণ করা হয়েছিল }}).যেমন চিত্র 3d-এ দেখানো হয়েছে, একই বয়সের ইঁদুর নিয়ন্ত্রণের তুলনায় SBPkdlrAa ইঁদুরের মধ্যে অন্তঃসত্ত্বা সি-মাইয়ের একটি উল্লেখযোগ্য অভিব্যক্তি রয়েছে। মজার বিষয় হল, কিছু SBPkdlrAG কিডনিতে c-Myc এক্সপ্রেশনের মাত্রা, বিশেষ লাইন 39, রেনাল c-Myc এক্সপ্রেশন দ্বারা উত্পাদিত PKD SBM ট্রান্সজেনিক মাউস মডেলের সাথে তুলনীয় মাত্রায় পৌঁছেছে।

SBPKD1 তে রেনাল অসঙ্গতি (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ARC mice similar to PKD. To characterize the phenotype caused by the transgene expression, gross and histologic examinations were undertaken on transgenic kidneys. Adult kidneys from all transgenic lines were affected bilaterally. Kidneys contained numerous cortical cysts that varied from microscopic to macroscopic in size (Fig.4a and b). SBPkdlrAc. kidneys were pale, a typical finding in PKD. On histologic examination, all transgenic founder mice and progenies (n = 25;n>প্রতিটি লাইনের জন্য 6) একাধিক টিউবুলার (টি) এবং গ্লোমেরুলার সিস্ট (জি) (চিত্র 4ডি,এফ, এবং জি) তৈরি করেছে। সিস্টগুলি কর্টিকাল এবং মেডুলারি অঞ্চলের টিউবুলে পাশাপাশি প্যাপিলা (চিত্র 4 ডি এবং ই) থেকে টিউবুল সংগ্রহ করা হয়েছিল। ট্রান্সজেনিক ইঁদুরগুলি নলাকার এপিথেলিয়াল হাইপারপ্লাসিয়া (তীরের মাথা) প্রদর্শন করে যার মধ্যে সিস্টিক এবং নন-সিস্টিক টিউবুল এবং ঘন ঘন হাইপারট্রফি (চিত্র 4g এবং h) জড়িত। তবে পৃথক ইঁদুরের মধ্যে তীব্রতা পরিবর্তিত হয়। ইন্টারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস (এফ) পেরিভাসকুলার লিম্ফয়েড অনুপ্রবেশ, এবং প্রোটিনেসিয়াস কাস্ট (পি) ঘন ঘন পরিলক্ষিত হয়েছে (চিত্র 4 ডি এবং ই)

চিত্র 4

বর্ধিত PKD1 এর স্থানীয়করণ সাইটকে আরও সুনির্দিষ্টভাবে সংজ্ঞায়িত করতে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1কিডনিতে অভিব্যক্তি, আমরা পূর্বে ব্যবহৃত এক্সন 36-45 প্রোব ব্যবহার করে সিটু হাইব্রিডাইজেশন করেছিলাম(16)। হাইব্রিডাইজেশন সংকেতটি বিশেষভাবে এপিথেলিয়াল কোষের আস্তরণের সিস্ট এবং হাইপারপ্লাস্টিক টিউবুলের পাশাপাশি গ্লোমেরুলার সিস্টগুলিতে স্থানীয়করণ করা হয়েছিল। এছাড়াও, ননসিস্টিক বা সামান্য প্রসারিত টিউবুলের এপিথেলিয়ামের উপর কিছু সংকেত দেখা গেছে, সম্ভবত ভবিষ্যতে সিস্টিক পরিবর্তনের জন্য পূর্বনির্ধারিত টিউবুলগুলিকে চিহ্নিত করা হয়েছে (চিত্র 4i এবং j)। রেনাল হিস্টোলজিক বিশ্লেষণ জন্মের সময় ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের উপরও করা হয়েছিল (n=8), প্রসবোত্তর দিন 10(P10)(n=3), P20(n=5), P35(n{ {10}}), এবং P45(n= 3) একই বয়সের নেতিবাচক লিটারমেটদের তুলনায় (n =2 থেকে 4)। মজার বিষয় হল, সমস্ত নবজাতক ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের তুলনায় নলাকার এবং গ্লোমেরুলার প্রসারণ প্রদর্শিত হয় নেতিবাচক লিটারমেট নিয়ন্ত্রণ করুন (চিত্র 4k এবং 1), ইঙ্গিত করে যে SBM ইঁদুর এবং ADPKD-তে পরিলক্ষিত হিসাবে গর্ভাশয়ে রেনাল অসঙ্গতি শুরু হয়েছে (অটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) রোগী। টিউবুলার এবং গ্লোমেরুলার প্রসারণ প্রগতিশীল বয়সের সাথে আকার এবং সংখ্যায় বৃদ্ধি পায়। P35 দ্বারা, ট্রান্সজেনিক ইঁদুরগুলি SBPkdlrsc ইঁদুরগুলিতে আরও গুরুতর হাইপারপ্লাসিয়া এবং গ্লোমেরুলোস্ক্লেরোসিসের পরিবর্তিত রেনাল শারীরবৃত্তীয় ফাংশনের প্রমাণ প্রদর্শন করে। সমস্ত ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের রেনাল ফিজিওলজিক ফাংশনগুলি PKD-এর মতো বৈশিষ্ট্যগুলি প্রদর্শন করে, যখন ননট্রান্সজেনিক লিটারমেটরা কখনও এই রোগটি বিকাশ করেনি। জন্মের কয়েক মাসের মধ্যে, আক্রান্ত প্রাণীদের দীর্ঘস্থায়ী রেনাল অপ্রতুলতা দেখা দেয়। সিরাম এবং প্রস্রাবের মাত্রা পরিমাপের মাধ্যমে এই প্রাণীদের রেনাল কার্যকরী পরামিতিগুলির জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। রক্তের ইউরিয়া নাইট্রোজেন (BUN) এবং ক্রিয়েটিনিন, প্রস্রাবের অসমোলালিটি, প্রস্রাবের প্রোটিন এবং আয়ন নির্গমন (সারণী 1)। নিয়ন্ত্রণের তুলনায় তিনটি লাইনের সমস্ত ইঁদুর ঘনীভূত ত্রুটিগুলি প্রদর্শন করেছে, ADPKD-তে একটি সাধারণ অনুসন্ধান (অটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) এবং ফলস্বরূপ প্রস্রাবের BUN কমে গেছে। ক্রিয়েটিনিন, প্রোটিন এবং আয়রনের ঘনত্ব। ট্রান্সজেনিক SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1প্রতিটি লাইন থেকে rAc.প্রতিষ্ঠাতা এবং বংশধরদের (n=6) SDS-PAGE(চিত্র 5) দ্বারা প্রস্রাবের নমুনাগুলিতে প্রোটিনুরিয়ার জন্য গুণগতভাবে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। 2 মাসের বেশি বয়সী ইঁদুরগুলি অনির্বাচিত প্রোটিনুরিয়া প্রদর্শন করে যা বয়সের সাথে অগ্রসর হয়। এছাড়াও, সিরাম BUN এবং সিরাম ক্রিয়েটিনিনের মাত্রা বৃদ্ধি করা হয়েছিল, যা রেনালের অপ্রতুলতা প্রকাশ করে (সারণী 2)। যেহেতু দীর্ঘস্থায়ী রেনাল অপ্রতুলতা সাধারণত হেমাটোলজিক পরামিতিগুলির পরিবর্তনের দিকে পরিচালিত করে, এগুলি 3 থেকে 14 মাস বয়সের SBPkdlAc ট্রান্সজেনিক ইঁদুরগুলিতে পরীক্ষা করা হয়েছিল (সারণী 2)। হিমোগ্লোবিন এবং হেমাটোক্রিট স্বাভাবিক মাত্রার অর্ধেক পৌঁছে যাওয়ার সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাসকৃত লোহিত রক্তকণিকার সংখ্যা দ্বারা প্রমাণিত এই ট্রান্সজেনিক ইঁদুরগুলি অ্যানিমিক ছিল। অন্যান্য লোহিত রক্তকণিকার পরামিতি, যেমন রেটিকুলোসাইটের শতাংশ, প্রত্যাশিতভাবে প্রভাবিত হয়নি, যখন একটি রেনাল ত্রুটি দ্বারা প্ররোচিত হয়৷ এই প্রাণীগুলি ক্রমাগতভাবে -5.9± 2.8 মাস বয়সে রেনাল ব্যর্থতার কারণে মারা যায় (n {{12}) }) ট্রান্স-জেনিক লাইন 39 এবং পরবর্তী বয়সে, -14.6± 3.1 মাস (n= 20) এবং-11.7 ±6.5 মাস (n=7) ,যথাক্রমে 3 এবং 41 লাইনের জন্য।

CISTANCHE এর প্রভাব: কিডনি রোগের চিকিৎসা

আলোচনা

এখানে আমরা একটি মুরিন PKD1 এর বিচ্ছিন্নতা এবং বৈশিষ্ট্যের প্রতিবেদন করি (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-বিএসি। এই PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন ট্যাগ করা হয়েছিল এবং নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলিকে বিশেষভাবে লক্ষ্য অভিব্যক্তির জন্য প্রতিস্থাপিত হয়েছিল দুটি ধারাবাহিক সমজাতীয় পুনর্মিলন ইভেন্ট দ্বারা। এই উপন্যাস SBPkdlrAG জিনের সাহায্যে উত্পাদিত ট্রান্সজেনিক ইঁদুরগুলি PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অভিব্যক্তিতে 2-থেকে 15-গুণ বৃদ্ধি দেখিয়েছে এবং PKD-এর বৈশিষ্ট্যগত প্রাথমিক রেনাল আকারগত পরিবর্তনগুলি প্রজননযোগ্যভাবে বিকশিত হয়েছে। মধ্যবয়সে রেনাল অপ্রতুলতা স্পষ্ট হয়, এবং ইঁদুররা কিডনি ব্যর্থতায় অকালে মারা যায়। আমাদের ফলাফলগুলি আরও ইঙ্গিত করে যে এই ফেনোটাইপের জন্য দায়ী PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ওভার এক্সপ্রেশন প্রক্রিয়াটি ভিভোতে সি-মাইকের সক্রিয়করণের সংকেত দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়। এই সমীক্ষাটি দেখায় যে মুরিন পিকেডি 1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) কিডনিতে কার্যকারিতা লাভ একটি পিকেডি রেনাল ফেনোটাইপ তৈরি করার জন্য যথেষ্ট।

যেহেতু মুরিন PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিনটি মানুষের মতো নকল করা হয় না (27), আমরা সরাসরি একটি BAC ক্লোন সনাক্ত এবং বিচ্ছিন্ন করেছি যাতে পুরো PKD1 রয়েছে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন। 129/Sv মুরিন PKD1 এর সম্পূর্ণ চরিত্রায়ন (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-বিএসি। অন্য দুটি ইনব্রিড মাউস স্ট্রেনের সাথে পরোক্ষ তুলনা PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) লোকাসের অখণ্ডতা নিশ্চিত করেছে। PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-BACinsert-এ PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন থেকে -37 থেকে 39 kb পর্যন্ত আপস্ট্রিম এবং ডাউনস্ট্রিম সিকোয়েন্স রয়েছে। আমাদের বিশ্লেষণ দেখিয়েছে যে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এই বিএসি-তে জিনটি একটি সত্যবাদী মুরিন বন্য ধরণের লোকাস ছিল যা আরও গবেষণার জন্য পরিবেশন করতে পারে।

যদিও শক্তিশালী প্রমাণ রয়েছে যে ADPKD-তে সিস্ট গঠন (অটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) স্বাভাবিক PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অ্যালিল(3.21.32), সিস্টিক টিউবুলার এপিথেলিয়ামে (22.29) টেকসই বা এমনকি বর্ধিত পলিসিস্টিন-1 প্রকাশের জন্যও ইঙ্গিতপূর্ণ প্রমাণ রয়েছে। পরবর্তী পর্যবেক্ষণটি প্রশ্ন উত্থাপন করে যে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন সিস্টোজেনেসিসের যথেষ্ট আনুমানিক কারণ কিনা। মানব PKD1 বহনকারী ট্রান্সজেনিক ইঁদুরে (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1), TSC2। RAB26. NTHL1 এবং SLC9A3R2 জিন, শুধুমাত্র একটি সংখ্যালঘু ইঁদুর সিস্ট তৈরি করে এবং ট্রান্সজিনের 30 কপি থাকা সত্ত্বেও প্রাপ্তবয়স্ক অবস্থায় ট্রান্সজিন অভিব্যক্তি সনাক্ত করা যায় নি (31)। সেই ট্রান্সজেনিক ইঁদুরে। সিস্টোজেনেসিসে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অত্যধিক এক্সপ্রেশনের জন্য একটি স্পষ্ট ভূমিকা স্থাপন করা কঠিন ছিল। আমাদের মডেলটি আলাদা, কারণ পিকেডি 1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এর দুই থেকে নয়টি বন্য ধরণের কপি একা, সংলগ্ন জিন ছাড়াই, ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের মধ্যে একত্রিত হয়েছিল। যেহেতু PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিনের বিভিন্ন অঙ্গ বা টিস্যুতে প্রয়োজনীয় কাজ রয়েছে, যেমন PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিনের বিলুপ্তি সহ অসংখ্য ইঁদুরের জন্য বর্ণনা করা হয়েছে, PKD1 এর একটি সিস্টেমিক ওভার এক্সপ্রেশন (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অতিরিক্ত বিভ্রান্তিকর প্রভাব হতে পারে. ফলস্বরূপ, আমরা PKD1 এর ভূমিকা সম্বোধন করেছি (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1বিশেষভাবে কিডনিতে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) লক্ষ্য করে এমন একটি পদ্ধতি ব্যবহার করে কার্যকারিতা লাভ। সমজাতীয় পুনর্মিলন দ্বারা, আমরা প্রথমে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) আপস্ট্রিম নিয়ন্ত্রক অঞ্চলকে "SB" রেনাল সীমাবদ্ধ নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলির সাথে প্রতিস্থাপিত করেছি, যার ফলে PKD1 (PKD1) এর জন্য সাধারণত দেখা যায় কমে যাওয়া জিনের অভিব্যক্তিকে প্রতিরোধ করে।পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)যৌবনের পাশাপাশি সম্ভাব্য সেকেন্ডারি ফিডব্যাক লুপ রেগুলেশন (36,38)। দ্বিতীয়ত, আমরা মুরিন PKD1 চিহ্নিত করেছি (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এক্সন 10-এ একটি নীরব বিন্দু মিউটেশন সহ ট্রান্সজিন(Pkdlr) কিন্তু সংরক্ষিত কাঠামো এবং অখণ্ডতা সহ একটি সম্পূর্ণ কার্যকরী "বন্য-প্রকার" প্রোটিন তৈরি হবে তা নিশ্চিত করার জন্য একটি এপিটোপ ট্যাগ সন্নিবেশ করায়নি। এই পরিবর্তিত BAC থেকে, Tsc2 জিন এবং BAC ভেক্টর থেকে একটি SBPkdlrAG খণ্ডটি Tsc2 জিনের হস্তক্ষেপ রোধ করার জন্য বিশুদ্ধ করা হয়েছিল, যা একটি সিস্টিক ফেনোটাইপ (8.20.28) প্ররোচিত করতে পারে। পাশাপাশি প্রোক্যারিওটিক সিকোয়েন্স (5) এর প্রতিরোধমূলক প্রভাব এড়াতে।

চারটি ভিন্ন SBPkdlrActransgenic প্রতিষ্ঠাতা ইঁদুর এবং তিনটি স্বাধীন লাইন নির্দিষ্ট রেনাল PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)-বর্ধিত অভিব্যক্তি। এই ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের মধ্যে ফেনোটাইপের সম্পূর্ণ অনুপ্রবেশ বিশেষভাবে আকর্ষণীয়। SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) rAc প্রতিষ্ঠাতা এবং মাউস লাইনগুলি ADPKD (অটোসোমাল ডমিনেন্ট পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) এর সাথে মিলিত বেশ কয়েকটি ফিজিওপ্যাথলজিক বৈশিষ্ট্যগুলি ভাগ করেছে। এর মধ্যে রয়েছে এপিথেলিয়াল হাইপারপ্লাসিয়া, ইন্টারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস এবং ফোকাল ইন্টারস্টিশিয়াল প্রদাহ সহ কর্টেক্স, মেডুলা এবং গ্লোমেরুলিতে সিস্টের বিকাশ।

যেহেতু পিকেডি ফেনোটাইপটি ধারাবাহিকভাবে সমস্ত বিভিন্ন ট্রান্সজেনিক প্রতিষ্ঠাতা ইঁদুরের মধ্যে পরিলক্ষিত হয়েছিল এবং মাউস জিনোমে ট্রান্সজিন একীকরণ একটি এলোমেলো ঘটনা, তাই ফিনোটাইপটি ক্রোমোজোমাল অবস্থানের প্রভাবের ফলে হতে পারে না তবে শুধুমাত্র বর্ধিত PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অভিব্যক্তি। প্রকৃতপক্ষে, সমস্ত লাইনে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ট্রান্সজিনের অভিব্যক্তি রেনাল সীমাবদ্ধ বলে প্রদর্শিত হয়েছিল। "এসবি" উপাদান (36,38) দ্বারা নিয়ন্ত্রিত অন্যান্য ট্রান্সজিনের জন্য পূর্বে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে। অধিকন্তু, এই বর্ধিত PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অভিব্যক্তিটি ট্রান্সজিন দ্বারা সৃষ্ট হয়েছিল এবং একটি পরোক্ষ অন্তঃসত্ত্বা PKD1 দ্বারা নয় (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) সক্রিয়করণ। সুতরাং, আমাদের ফলাফলগুলি স্পষ্ট প্রমাণ দেয় যে একটি বন্য ধরণের কার্যকরী PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) এর কার্যকারিতা একাধিক রেনাল সিস্ট তৈরি করতে পারে। গুরুত্বপূর্ণভাবে, এই SBPKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অনুশীলনগুলি প্রথম মাউস মডেল গঠন করে যা মানব PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন।

SBPkdl-Ac ইঁদুরগুলি দেখায় যে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1)ওভার এক্সপ্রেশন রেনাল সিস্টোজেনেসিসের একটি প্রাথমিক প্যাথোজেনেটিক প্রক্রিয়া। গুরুত্বপূর্ণভাবে, কিডনিতে সর্বোচ্চ ট্রান্সজিন এক্সপ্রেশন স্তরগুলি ফেনোটাইপের অগ্রগতি এবং তীব্রতার সাথে সম্পর্কযুক্ত বলে মনে হয়েছিল। আমরা আরও দেখতে পেয়েছি যে SBPKD1 এর বিকাশে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অত্যধিক এক্সপ্রেশন (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1-Ac ফেনোটাইপ ভিভোতে c-Myc সক্রিয়করণের সংকেত দেয়। ধারণা করা যায়, এই অ্যাক্টিভেশন এমনকি পলিসিস্টিন-1 সি-টার্মিনাল টেল আন্ডার-গোয়িং প্রোটিওলাইটিক ক্লিভেজ এবং নিউক্লিয়ার ট্রান্সলোকেশন (7) এর মাধ্যমেও হতে পারে, যেহেতু প্রাপ্তবয়স্ক ইঁদুরের সি-মাইকের বর্ধিত রেনাল এক্সপ্রেশন পিকেডিকে প্ররোচিত করতে দেখানো হয়েছিল, এটি PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) সিগন্যালিং পাথওয়ে এই ফলাফলটি সমস্ত মানুষের ADPKD (অটোসোমাল ডমিন্যান্ট পলিসিস্টিক কিডনি ডিজিজ) বিশ্লেষণ করা (22) কিডনিতে c-Myc এক্সপ্রেশন বৃদ্ধির আমাদের পূর্ববর্তী ফলাফলগুলির সাথেও সম্পর্কযুক্ত, সব মিলিয়ে, এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে সি-মাই PKD1 এর প্রধান মধ্যস্থতাকারী। (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) সিস্টোজেনেসিস।

PKD1 থেকে আমাদের ফলাফল (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1মুরিন পিকেডি 1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) হ্যাপ্লোইনসফিসিয়েন্সি এবং কার্যকারিতা হ্রাস সহ গেইন-অফ-ফাংশন মডেল নির্দেশ করে যে কোনও PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অনিয়ন্ত্রণ সিস্টোজেনেসিস হতে পারে (2.19৷{2}}.31.40)৷ গুরুতর PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) PKD1 দ্বারা প্ররোচিত ইঁদুরের ভারসাম্যহীনতা (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) অ্যাবলেশন বা ট্রান্সজেনিক ওভার এক্সপ্রেশন রেনাল সিস্টের প্রাথমিক সূত্রপাত এবং দ্রুত অগ্রগতি ঘটায় এবং টিউবুলের উচ্চ অনুপাতকে প্রভাবিত করে। বিপরীতে, একটি হালকা PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) ভারসাম্যহীনতা যেমন হ্যাপ্লোইনসফিসিয়েন্সি আরও ফোকাল সিস্ট সহ PKD-এর একটি ধীর অগ্রগতির দিকে পরিচালিত করে। বিপরীত পলিসিস্টিন-1 ডিসরেগুলেশনের মাধ্যমে অনুরূপ ফেনোটাইপের আপাত প্যারাডক্সিক্যাল বিকাশকে সাধারণ ফলাফল দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে, যেমন একটি আপেক্ষিক প্রোটিন ঘনত্বের ভারসাম্যহীনতা যা একটি সক্রিয় পলিসিস্টিন মাল্টিপ্রোটিন কমপ্লেক্সের গঠন বা কাজকে পরিবর্তন করতে পারে। একসাথে নেওয়া, আমাদের ফলাফল এবং অন্যান্য তদন্তকারীরা যুক্তি দেয় যে ADPKD-তে সিস্ট গঠনের প্রক্রিয়া (অটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগ) তিনটি প্যাথোজেনেটিক প্রক্রিয়া থেকে উদ্ভূত হওয়ার সম্ভাবনা রয়েছে: কার্যকারিতা লাভ, কার্যকারিতা হ্রাস এবং জিনের ডোজ প্রভাব।

উপন্যাসটি SBPkdlrAc; ইঁদুরগুলি রেনাল সিস্টোজেনেসিসের একটি শক্তিশালী মডেল গঠন করে যা PKD, PKD1 (এর প্যাথোফিজিওলজিতে প্রধান অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করতে পারে)পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) সংকেত ট্রান্সডাকশন পাথওয়ে, এবং মিথস্ক্রিয়াকারী অংশীদার। এই মডেলের অধ্যয়নের ফলে PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) মাল্টিমেরিক কমপ্লেক্স।

Cistanche কিডনি রোগের চিকিৎসা করে এবং কিডনির কার্যকারিতা উন্নত করে

তথ্যসূত্র

1. ব্লুইন, এমজে, এইচ. বিচেমিন, এ রাইট, এম ই ডি পেপে, এম. সুরেট, এএম। বিউ. B. Nakamoto, CN. ওউ, জি. স্ট্যামাটোয়ানোপোলোস এবং এম. ট্রুডেল। 2000. সিকেল সেল ডিজিজের জেনেটিক সংশোধন: ট্রান্সজেনিক মাউস মডেল ন্যাট ব্যবহার করে অন্তর্দৃষ্টি। মেড।{4}}।

2 বোল্টার, সি, এস. মুলরয়, এস. ওয়েব, এস. ফ্লেমিং, কে. ব্রিন্ডল এবং আর. স্যান্ডফোর্ড। 2001. কার্ডিওভাসকুলার, কঙ্কাল। এবং PKD1 এর লক্ষ্যযুক্ত ব্যাঘাত সহ ইঁদুরের রেনাল ত্রুটি (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন। প্রসি. Natl.Acad. বিজ্ঞান মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র 9812174-12179।

3. Brasier, JL, এবং EPHenske.1997. এর ক্ষতিপলিসিস্টিক কিডনি রোগ(PKD1）রেনাল সিস্ট কোষে ক্রোমোজোম 1φp13 এর অঞ্চল সিস্ট প্যাথোজেনেসিসের জন্য একটি ক্ষতি-অফ-ফাংশন মডেল সমর্থন করে। জে. ক্লিন। ইনভেস্টিগ.99:194-199।

4. বার্ন, টিসি, টিডি কোনারস, ডব্লিউ আর ড্যাকওস্কি, এলআর পেট্রি, টিজেভান রায়, জেএমএমহাল্যান্ড, এম ভেনেট, জি। মিলকার, আর এমএল হাকিম, জি। এমএল ল্যান্ডস, কেডব্লিউ ক্লিঙ্গার, এফ। কিয়াম, এলএফ। Onuchic, T. Watnick GGGermino, এবং N. A Doggett.1995.Anay sis of the genomic sequence for theঅটোসোমাল প্রভাবশালী পলিসিস্টিক কিডনি রোগজিন একটি লিউসিন-সমৃদ্ধ পুনরাবৃত্তির উপস্থিতি ভবিষ্যদ্বাণী করে। হাম মোল, জেনেট।{1}}।

5. Chada, K, J.Magram, K. Raphael, G.Radice, E. Lacy, এবং F.Costantini. 1985. ট্রান্সজেনিক ইঁদুরের এরিথ্রয়েড কোষে একটি বিদেশী-গ্লোবিন জিনের নির্দিষ্ট অভিব্যক্তি প্রকৃতি 337-380।

6. Chauvet, V, F.Qian, N. Bought,Y.Cai B.Fakdeekitacharoen, LF.Onuchi, T. Attie-Bitach, L. Guicharnaud, O.Devuryst,GG Germino, and M.-C. Gubler.2002. মানব ভ্রূণে এবং স্বাভাবিক কিডনি বিকাশের সময় PKDI এবং PKD2 ট্রান্সক্রিপ্ট এবং প্রোটিনের প্রকাশ। আমি জে.পাঠোল। 160973-983।

7. Chaurvet,V, X Tian, ​​H.Husson, DH Grimm, T.Wang T.Hiesberger, P. Igarashi, AMBennett, O.braghimov-Beskrovnaya, S.Somlo, এবং MJ Caplan.2004 যান্ত্রিক উদ্দীপনা ক্লিভেজ এবং পারমাণবিক প্ররোচিত করে পোবেইস্টিন-1 সি টার্মিনাসের ট্রান্সলোকেশন। Cin.Investig 114:1433-1443.

8. Cheadle, JP, MPReeve, JR Sampson, and DJ Kwiatkowski 2000. যক্ষ্মা স্ক্লেরোসিসে আণবিক জেনেটিক অগ্রগতি। হুম। জেনেট10797-114।

9. কনসোর্টিয়াম, EPKD1993। ক্রোমোজোমে টিউবারাস স্ক্লেরোসিস জিনের সনাক্তকরণ এবং বৈশিষ্ট্য 16. সেল75:1305-1315।

10. কনসোর্টিয়াম, EPKD1994.Theপলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1জিন ক্রোমোজোম 16 সেল 7781-894 এর একটি নকল অঞ্চলের মধ্যে সমস্ত প্রতিলিপিযোগ্য এনকোড করে।

11. কনসোর্টিয়াম, এল পিকে ডি 1995।পলিসিস্টিক কিডনি রোগ: PKD1 এর সম্পূর্ণ কাঠামো (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ1) জিন এবং এর প্রোটিন। সিই 81:289-298

12. Couillard, M.,R Guilkume, N Tanj, V.DAgati, এবং M. Trudel.2002. c-Myc-Induced apoptosis inপলিসিস্টিক কিডনি রোগFasL/Fas মিথস্ক্রিয়া থেকে স্বাধীন। ক্যান্সার রেস. ৬২:2210-2214।

13. ডি পেপে, এম ল্যান্ড এম ট্রুডি 1904, মানুষের সিকেল সেল গ্লোমেরুলোপ্যাথির একটি মডেল। কিডনি Int. 46:1337-1345।

14. GengL,Y, Segal B.PekseL N.Den Y. Pei,F.Carone, H G. Rennke, AM Glücksman-Kuis, MCSchneider, M Ericsson, STReeders, এবং J. Zhou. 1996. পলিয়েস্টারের সনাক্তকরণ এবং স্থানীয়করণ, PKD1 (পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1) জিন পণ্য। জে ক্লিন। তদন্ত. 98-2674-2682