প্রথম অংশ DsbA-L মাইটোকন্ড্রিয়নমিডিয়াটেড টিউবুলার সেল অ্যাপোপটোসিসে VDAC1 এর সাথে যোগাযোগ করে এবং তীব্র কিডনি রোগের অগ্রগতিতে অবদান রাখে

সারসংক্ষেপ

1। পটভূমি

আমরা দেখিয়েছি যে ডিসালফাইড-বন্ড A oxidoreductase-like প্রোটিন (DsbA-L) রেনাল ফাইব্রোসিসের অগ্রগতির সাথে জড়িত ছিল। যাইহোক, তীব্র কিডনি ইনজুরিতে (AKI) DsbA-L এর সুনির্দিষ্ট কার্যকারিতা এবং এর সাথে জড়িত প্রক্রিয়াগুলি এখনও স্পষ্ট করা হয়নি।

2. পদ্ধতি

আমরা ভিট্রো এবং ভিভিতে কো-আইপি (কো-ইমিউনোপ্রিসিপিটেশন) দ্বারা VDAC1-এর সাথে যোগাযোগ করা DsbA-L চিত্রিত করেছি এবং মিউটেশন পরীক্ষার মাধ্যমে তাদের মিথস্ক্রিয়া অংশগুলি খুঁজে পেয়েছি। উপরের ফলাফলগুলি তাদের সহ-স্থানীয়করণ দ্বারা যাচাই করা হয়েছিল। উপরন্তু, আমরা VAN, CL, P, এবং I/R-প্ররোচিত AKI-এর মডেলগুলিতে DsbAL এবং VDAC1 এর কার্যকারিতা যাচাই করার জন্য PT-DsbA-L এবং VDAC1 KO ইঁদুরের দুটি মডেল তৈরি করেছি।

3. ফলাফল

PT-DsbA-L-KO ইঁদুরগুলি VDAC1 এর নিম্ন নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে I/R, VAN- এবং CLP-প্ররোচিত AKI অগ্রগতির উন্নতি দেখিয়েছে। অবশেষে, আমরা ইসকেমিক বা তীব্র ইন্টারস্টিশিয়াল নেফ্রাইটিস (AIN)-প্ররোচিত AKI রোগীদের কাছ থেকে নেওয়া HK-2 কোষ এবং কিডনি বায়োপসি পরীক্ষা করে সংকেত অণুতে এই পরিবর্তনগুলি নিশ্চিত করেছি। যান্ত্রিকভাবে, ডিএসবিএ-এল রেনাল সেল অ্যাপোপটোসিস এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ইনজুরির জন্য BUMPT কোষের মাইটোকন্ড্রিয়াতে VDAC1 এর অ্যামিনো অ্যাসিড 9-13 এবং 22-27 এর সাথে মিথস্ক্রিয়া করে।

4. ব্যাখ্যা

এই কাজটি পরামর্শ দিয়েছে যে DsbA-L, প্রক্সিমাল টিউবুলার কোষে অবস্থিত, সরাসরি VDAC1-এর স্তরগুলিকে আপ-রেগুলেট করে AKI-এর অগ্রগতি চালায়। চলমান শিরোনাম: AKI-তে DsbA-L-এর ভূমিকা।

5. তহবিল

চীনের ন্যাশনাল ন্যাচারাল সায়েন্স ফাউন্ডেশন, হুনান প্রাদেশিক বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি উদ্ভাবনের মূল প্রকল্প থেকে একটি অনুদান, হুনান প্রদেশের আন্তর্জাতিক সহযোগিতা ও বিনিময় প্রকল্পের বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি বিভাগ, চাংশা বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি ব্যুরো প্রকল্প, হুনান প্রদেশের প্রাকৃতিক বিজ্ঞান ফাউন্ডেশন, মৌলিক সেন্ট্রাল সাউথ বিশ্ববিদ্যালয়ের কেন্দ্রীয় বিশ্ববিদ্যালয়গুলির জন্য গবেষণা তহবিল, স্নাতকোত্তর চীন হুনান প্রাদেশিক বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি বিভাগের জন্য হুনান প্রাদেশিক উদ্ভাবন ফাউন্ডেশন।

কীওয়ার্ড

DsbA-L; ভিডিএসি_I; বাক্স; Cyt-c; AKI

Cistanche সুবিধা পেতে এবং Cistanche বড়ি কিনতে এখানে ক্লিক করুন

ভূমিকা

তীব্র কিডনি ইনজুরি (AKI), একটি বিধ্বংসী ক্লিনিকাল জটিলতা যার উচ্চ হারের অসুস্থতা এবং মৃত্যুর হার, সমগ্র বিশ্ব জুড়ে লক্ষ লক্ষ রোগীকে প্রভাবিত করে (1)। AKI সাধারণত সেপসিস, নেফ্রোটক্সিক এজেন্ট এবং ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন ইনজুরি (IRI)(2) দ্বারা প্ররোচিত হয়। এখনও পর্যন্ত, AKI-এর অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়াগুলি এখনও সম্পূর্ণরূপে ব্যাখ্যা করা হয়নি। ফলস্বরূপ, AKI-এর জন্য কোনও কার্যকর চিকিত্সা কৌশল উপলব্ধ নেই।

টিউবুলার কোষের আঘাত কয়েক দশক ধরে AKI-এর একটি গুরুত্বপূর্ণ চালক হিসাবে স্বীকৃত হয়েছে। গবেষণার অগ্রগতির সাথে সাথে, ক্রমবর্ধমান সংখ্যক গবেষকরা চিহ্নিত করেছেন যে মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতি টিউবুলার কোষের আঘাতের ক্ষেত্রে একটি মুখ্য ভূমিকা পালন করে এবং এই প্রাথমিক ক্ষতি সঞ্চিত হওয়ার কারণে ঘটে। ROS, সাইটোকাইনের উৎপাদন, এবং সেলুলার ডেথ (নেক্রোসিস এবং অ্যাপোপটোসিস উভয়ই সহ); সম্মিলিতভাবে, এই সমস্ত প্রক্রিয়াগুলি AKI-তে অবদান রাখে৷{1}} যদিও গবেষণার একটি ক্রমবর্ধমান সংস্থা AKI-তে মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতির অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলির উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছে,7- 12 মাইটোকন্ড্রিয়াল আঘাতের জন্য দায়ী সুনির্দিষ্ট প্রক্রিয়া এখনও সনাক্ত করা যায়নি৷

ডিসালফাইড-বন্ড একটি অক্সিডোরেডাক্টেস-জাতীয় প্রোটিন (DsbAL) প্রথমে ইঁদুরের যকৃতের কোষে মাইটোকন্ড্রিয়া প্রোটিন হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। 13 পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে DsbA-L খাদ্য বা ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথি (DN)- প্ররোচিত স্থূলতা, প্রদাহ, ইনসুলিন প্রতিরোধ, বা কিডনিতে আঘাত।{5}} মজার বিষয় হল, আমাদের সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে DsbA-L মধ্যস্থতাকারী একতরফা ইউরেটারাল অবস্ট্রাকশন (UUO)-প্রেরিত রেনাল ফাইব্রোসিস। যাইহোক, AKI তে টিউবুলার DsbA-L এর ভূমিকা এবং প্রক্রিয়া এখনও সম্পূর্ণ অজানা।

বর্তমান সমীক্ষায়, একটি মাউস মডেলে DsbA-L (PT-DsbA-L-KO) এর প্রক্সিমাল টিউবুলার মুছে ফেলার ফলে ভ্যানকোমাইসিন (VAN)- এবং cecal ligation এবং puncture (CLP) এর সাথে I/R-এর উল্লেখযোগ্য ক্ষয় হয়েছে। )-প্ররোচিত AKI। ধারাবাহিকভাবে, DsbA-L মাউস রেনাল প্রক্সিমাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল (BUMPT) কোষগুলিতে I/R, VAN- এবং LPS-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিসও মধ্যস্থতা করেছে। মজার বিষয় হল, আমরা দেখতে পেলাম যে DsbA-L প্রোটিনের ভিডিএসি পরিবারের একটি প্রধান সদস্য, ভোল্টেজ-নির্ভর অ্যানিয়ন চ্যানেল 1 (VDAC1) এর 9-13 এবং 22 27 অঞ্চলের সাথে যোগাযোগ করেছে; এই প্রভাবগুলি ভিভো এবং ইন ভিট্রো মাইটোকন্ড্রিয়াল নমুনা এবং মানব AKI নমুনা উভয় ক্ষেত্রেই পরিলক্ষিত হয়েছিল। উপরন্তু, আমরা দেখিয়েছি যে PTVDAC1-KO এছাড়াও AKI-এর ভিট্রো এবং ভিভো উভয় মডেলেই রেনাল সেল অ্যাপোপটোসিসকে উন্নত করেছে। সম্মিলিতভাবে, আমরা দেখিয়েছি যে DsbA-L মাইটোকন্ড্রিয়ন-মধ্যস্থ টিউবুলার সেল অ্যাপোপটোসিসে VDAC1 এর সাথে যোগাযোগ করেছে এবং তাই AKI এর অগ্রগতি ঘটায়।

Cistanche tubulosa

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

1. নৈতিকতা বিবৃতি

গবেষণাটি দ্বিতীয় জিয়াংয়া হাসপাতালের রিভিউ বোর্ড, পিপলস রিপাবলিক অফ চায়না (নং 2018065) ​​দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল এবং এই গবেষণায় 18 জন রোগীকে নিয়োগ করা হয়েছিল। গবেষণায় অন্তর্ভুক্তির আগে সমস্ত অংশগ্রহণকারীদের লিখিত অবহিত সম্মতিতে নিয়োগ করা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণী পরীক্ষা-নিরীক্ষা সেকেন্ড জিয়াংয়া হসপিটাল, পিপলস রিপাবলিক অফ চায়না (নং 2020310) এর অ্যানিমাল কেয়ার এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত গাইডিং নীতিগুলি মেনে চলে।

2. অ্যান্টিবডি এবং বিকারক

Anti-COXIV (ab33985, RRID: AB_879754), VDAC1 (ab14734, RRID: AB_443084), and PGC-1a (ab191838, RRID: AB_2721267) antibodies were obtained from Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Anti-Caspase3 (9662, RRID: AB_331439) and cleavedcapase3 (9664, RRID: AB_2070042) antibodies were purchased from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Anti-Bax (50599-2-Ig, RRID: AB_2061561), Cyt-c (10993-1-AP, RRID: AB_2090467), NRF1 (12482- 1-AP, RRID: AB_2282876), GAPDH (60004-1-Ig, RRID: AB_2107436), and b-tubulin (10094-1-AP, RRID: AB_2210695) antibodies were obtained from Proteintech (Rosemont, IL, USA). The anti-DsbA-L antibody was provided by Dr. Feng Liu(14). All secondary antibodies (MitoTracker Green FM and MitoTracker Red CMXRos) were obtained from Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). The calcium ionophore was purchased from Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Antimycin A (>95 শতাংশ বিশুদ্ধ, ab141904) এবং একটি মাইটোকন্ড্রিয়া/সাইটোসল ফ্র্যাকশনেশন কিট (ab65320) Abcam (কেমব্রিজ সায়েন্স পার্ক, কেমব্রিজ, ইউকে) থেকে কেনা হয়েছিল। DsbAL মাউসের লক্ষ্য ক্রম পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছে।22

3. ইস্কেমিক রিপারফিউশন, CLP, এবং VAN দ্বারা AKI মডেল তৈরি করা

C57BL/6J পুরুষ ইঁদুর (RRID: MGI:5657312) 8-10 সপ্তাহ বয়সী Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd থেকে কেনা হয়েছিল। প্রক্সিমাল টিউবুল-নির্দিষ্ট DsbA-L বা VDAC1 ডিলিট প্রদর্শনকারী ইঁদুরগুলি DsbA-কে অতিক্রম করে উত্পাদিত হয়েছিল। (ফ্লক্স/ফ্লক্স) ইঁদুর (ড. ফেং লিউ দ্বারা প্রদত্ত) বা ভিডিএসি1 (ফ্লক্স/ফ্লক্স) ইঁদুর (সাংহাই মডেলের জীব থেকে প্রাপ্ত) PEPCK-Cre ইঁদুরের সাথে (ড. ভলকার হ্যাস (পেনসিলভানিয়া বিশ্ববিদ্যালয়, ফিলাডেলফিয়া, PA) দ্বারা প্রদত্ত ) পূর্বে বর্ণিত হিসাবে। 22,23 পুরুষ ইঁদুরগুলি (8-10 সপ্তাহ বয়সের) ইস্কিমিয়া, CLP, এবং VAN নেফ্রোটক্সিক AKI-এর শিকার হয়েছিল, যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে। 28 মিনিটের পরে 24 ঘন্টা বা 48 ঘন্টার জন্য রিপারফিউশন। ইঁদুরের শরীরের তাপমাত্রা আনুমানিক 37 ডিগ্রি বজায় রাখা হয়েছিল। CLP-প্ররোচিত AKI-এর জন্য, সিকামটি ডগা থেকে 1.5 সেন্টিমিটার অবস্থানে শক্তভাবে বাঁধা ছিল। এটি অনুসরণ করা হয়েছিল। 18 ঘন্টার জন্য খোঁচা। VAN আঘাতের জন্য, ইঁদুরগুলিকে VAN এর একক ডোজ 600 mg/kg ডোজ দিয়ে পরপর 7 দিন ধরে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল, যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে। DsbA-L বা VDAC1 প্লাজমিড, বা VDAC1 siRNA (15 মিলিগ্রাম/কেজি ডোজ এ) সপ্তাহে দুবার লেজের শিরার মাধ্যমে ২২; স্যালাইন একটি নিয়ন্ত্রণ ইনজেকশন হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রতিটি অধ্যয়নের জন্য, আমরা পূর্ববর্তী অধ্যয়নের উপর ভিত্তি করে পক্ষপাত এড়াতে নমুনাগুলিকে একসাথে বিশ্লেষণ করেছি এবং নমুনার আকার (n=6) নির্ধারণ করতে PASS সফ্টওয়্যার ব্যবহার করেছি। আমরা সেই নমুনাটি বাদ দিয়েছি যা শেষ বিন্দুর আগে মডেল স্থাপনে মারা গেছে বা ব্যর্থ হয়েছে। পরীক্ষামূলক ইঁদুরগুলি এলোমেলো-সংখ্যার টেবিল দ্বারা গোষ্ঠীভুক্ত করা হয়েছিল। তদন্তকারীরা পরীক্ষার সময় অন্ধ ছিলেন না তবে বরাদ্দ, নমুনা সংগ্রহ এবং ডেটা বিশ্লেষণের সময় অন্ধ হয়েছিলেন। সমস্ত প্রাণী পরীক্ষা-নিরীক্ষা গণপ্রজাতন্ত্রী চীনের দ্বিতীয় জিয়াংয়া হাসপাতালের অ্যানিমাল কেয়ার এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত গাইডিং নীতিগুলি মেনে চলে। ইঁদুরগুলিকে একটি 12-ঘন্টা আলো/অন্ধকার পরিবেশে একটি আদর্শ ইঁদুরের খাদ্য এবং জলে বিনামূল্যে প্রবেশাধিকার দেওয়া হয়েছিল৷

হারবা সিস্তানচে

4. কোষ সংস্কৃতি এবং একটি ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন মডেল

ডাঃ উইলফ্রেড লিবারথাল (বোস্টন ইউনিভার্সিটি স্কুল অফ মেডিসিন) বা সাংহাই ঝংকিয়াক্সিনঝো বায়োটেক থেকে প্রাপ্ত HK{{0}} কোষ থেকে প্রাপ্ত BUMPT কোষগুলি DMEM (Gibco, 11965092) এর সাথে 10 শতাংশ FBS (Gibco,101092) যোগ করা হয়েছিল এবং 1 শতাংশ পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco, 15140163) 37 ডিগ্রিতে 5 শতাংশ CO2। ইস্কেমিক সেল মডেলের জন্য, BUMPTs কোষগুলিকে 10mM অ্যান্টিমাইসিন A (মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স III, Abcam, ab141904-এর একটি প্রতিরোধক) এবং 1.5mM ক্যালসিয়াম আয়নোফোর (সিগমা, A23187) দিয়ে হ্যাঙ্কসের ব্যালেন্সড সল্ট সলিউশন, SH300303030300-এর জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল। 2 h.30 তারপরে আমরা রিপারফিউশন পর্যায়ে 0, 2, এবং 4 ঘন্টার জন্য DMEM মাধ্যমে HBSS প্রতিস্থাপন করেছি। কোষ অ্যাপোপটোসিস ক্লিভড-ক্যাসপেস 3, ব্যাক্স এবং সাইট-সি সহ অ্যাপোপটোটিক সূচকগুলির জন্য মরফোলজি এবং ইমিউনোব্লটিং দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। লিপোফেকশনের মাধ্যমে বেশ কিছু প্লাজমিড তৈরি এবং কোষে স্থানান্তরিত হয়েছিল: DsbA-L, HA-VDAC1-1-25, HA-VDAC1-26-366, HA-VDAC1-পূর্ণ দৈর্ঘ্য, HA-VDAC{{33 }}D9-13,22-27, HAVDAC1-D39-45,55-57, এবং HA- VDAC1-D9-13, DsbA-L এবং VDAC1-এর জন্য 22-27 D39-45,55-57, এবং siRNA। ট্রান্সফেকশনের ছয় থেকে আট ঘণ্টা পরে, সংস্কৃতির মাধ্যমটি ডিএমইএম দিয়ে প্রতিস্থাপিত হয়েছিল। ইঁদুরের জন্য DsbA-L siRNA এবং VDAC1 siRNA এর ক্রম ছিল যথাক্রমে 50 - GCAUGGAGCAACCAGAGAUTT -30 এবং 50 - CCAGAGCAACTTCGCAGTT -30; স্ক্র্যাম্বল করা NC siRNA-এর ক্রমগুলি ছিল 50 -UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-30৷ মানুষের জন্য DsbA-L siRNA এবং VDAC1 siRNA এর ক্রম ছিল যথাক্রমে 50 - UCAUUGCCAUGUAUAGUCCU-30 এবং 50 -UAUUAAGCCAAAUCCAUAGCC -30; স্ক্র্যাম্বল করা NC siRNA-এর ক্রমগুলি ছিল 50 -AACCACUCAACUUUUUCC CAA -30৷ IR এর মডেলটি তখন প্রবর্তিত হয়েছিল যখন কোষের ঘনত্ব 90 শতাংশে পৌঁছেছিল।

5. ফ্লো সাইটোমেট্রি

ফ্লো সাইটোমেট্রি এফআইটিসি অ্যানেক্সিন ভি অ্যাপোপটোসিস ডিটেকশন কিট (বিডি, 556547) এর নির্দেশ অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল। বিভিন্ন চিকিত্সা সহ BUMPT বা HK-2 কোষগুলিকে EDTA ছাড়াই ট্রিপসিন ব্যবহার করে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং PBS দিয়ে তিনবার ধোয়া হয়েছিল, তারপরে FITC দ্বারা 15 মিনিটের জন্য এবং PI ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য, এবং অবশেষে প্রবাহ সাইটোমেট্রি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল।

6. AKI রোগী এবং নমুনা সংগ্রহ

প্রোটোকলটি গণপ্রজাতন্ত্রী চীনের দ্বিতীয় জিয়াংয়া হাসপাতালের পর্যালোচনা বোর্ড দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। এই গবেষণায় 12 জন পুরুষ এবং 6 জন মহিলা সহ 18 জন রোগীকে নিয়োগ করা হয়েছিল। নিয়োগ নীতি কিডনি বায়োপসি উপর ভিত্তি করে ছিল. রোগীর তথ্য সারণী 1 এ সম্পূরক করা হয়েছে। কিডনি বায়োপসি নমুনাগুলি ন্যূনতম পরিবর্তন রোগ (এমসিডি) (n=6) এবং ইসকেমিক বা তীব্র ইন্টারস্টিশিয়াল নেফ্রাইটিস (AIN)-প্ররোচিত AKI (n{{6}) সহ জীবিত রোগীদের কাছ থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছিল })। আমরা ঘোষণা করি যে সমস্ত অধ্যয়ন মানব অংশগ্রহণকারীদের সাথে গবেষণার জন্য সমস্ত প্রাসঙ্গিক নৈতিক নিয়মাবলী মেনে চলে এবং হেলসিঙ্কি নীতির ঘোষণার সাথে সম্মতিতে পরিচালিত হয়েছিল এবং যে অধ্যয়নটি পর্যালোচনা এবং অনুমোদনের জন্য বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি মন্ত্রকের নির্দেশিকা মেনে চলে মানব জেনেটিক রিসোর্স। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় MCD-এর অন্তর্ভুক্তি এবং বর্জনের মানদণ্ড বর্ণনা করা হয়েছিল। IR এর জন্য: অন্তর্ভুক্তির মানদণ্ড: 1 ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন রোগীদের জন্য বায়োপসি, 2 75 বছরের কম বয়সী; বর্জনের মানদণ্ড 1: অপারেটিভ মেডিকেল পরীক্ষায় পাওয়া টিউমারযুক্ত রোগীদের বাদ দিন, 2 যথাক্রমে ডায়াবেটিস, গাউট, উচ্চ রক্তচাপ, মূত্রনালীর যক্ষ্মা বা সংক্রমণের ইতিহাস সহ রোগীদের বাদ দিন। AIN এর জন্য: অন্তর্ভুক্তির মানদণ্ড1: ক্লিনিক্যালি অ্যাকিউট ইন্টারস্টিশিয়াল নেফ্রাইটিস হিসাবে নির্ণয় করা হয়েছে2 বায়োপসি AIN রোগীদের নিশ্চিত করেছে, 3 বয়স 75 বছরের কম; বর্জনের মানদণ্ড 1: ভর্তির আগে অস্বাভাবিক রক্তের ক্রিয়েটিনিনযুক্ত রোগীদের বাদ দিন, 2 ডায়াবেটিস, গাউট, উচ্চ রক্তচাপ, মূত্রনালীর যক্ষ্মা বা সংক্রমণের ইতিহাস সহ রোগীদের বাদ দিন। এই নমুনাগুলি তখন HE, TUNEL এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির পাশাপাশি ইমিউনোপ্রিসিপিটেশন (আইপি) এবং ইমিউনোব্লটিং এর জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

7. ইমিউনোপ্রিসিপিটেশন

BUMPT কোষ থেকে সাইটোপ্লাজম এবং মাইটোকন্ড্রিয়া এবং ইঁদুর এবং AKI রোগীদের কিডনি টিস্যু মাইটোকন্ড্রিয়া/সাইটোসল ফ্র্যাকশনেশন কিট (Abcam, ab65320) ব্যবহার করে আলাদা করা হয়েছিল; কিটটি প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী দ্বারা ব্যবহৃত হয়েছিল। অ্যান্টিবডিগুলি (DsbA-L, VDAC1, HA, বা IgG) চৌম্বকীয় পুঁতির সাথে আবদ্ধ ছিল। এরপরে, আমরা মাইটোকন্ড্রিয়া/সাইটোপ্লাজম লাইসেট যোগ করেছি এবং তিন ঘন্টার জন্য এটিকে ইনকিউব করেছি। এরপরে, ইমিউনোব্লটিং দ্বারা সংশ্লিষ্ট মার্কারগুলির প্রকাশের জন্য মিশ্রণটি নির্গত এবং তদন্ত করা হয়েছিল।

8. আপেক্ষিক পরিমাণগত PCR (qPCR)

ট্রাইজল বিকারক (ইনভিট্রোজেন, কার্লসব্যাড, সিএ, ইউএসএ) দ্বারা BUMPT কোষ বা কিডনি টিস্যু থেকে আরএনএ বের করা হয়েছিল। প্রাইম স্ক্রিপ্ট আরটি রিএজেন্ট কিট এবং জিডিএনএ ইরেজার (TaKaRa, RR037A) ব্যবহার করে RNA-কে প্রথম-স্ট্র্যান্ড cDNA-তে বিপরীতভাবে প্রতিলিপি করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে।31'34 এর পরে, আমরা cDNA কে একটি টেমপ্লেট হিসাবে TB সবুজ (TaKaRa, RR820A) এবং একটি হালকা সাইক্লার 96 (Roche) নিম্নলিখিত প্রাইমার জোড়া সহ ব্যবহার করেছি: DsbA-L: 5 - AAATATGGGGCCTT TGGGCT-3'(ফরোয়ার্ড) এবং 5'- TAGCAACTCCAAGCGGTCA G-3'(বিপরীত); এবং GAPDH: 5'-GGTCTCCTCTCTGACTTCACA-3'(ফরোয়ার্ড) এবং 5'-GTGAGGGTC TCTCTCTTCT-3'(বিপরীত); PGC- 1a: 5'-ATGTGTCGCCTTTCTTGCTCTTCC-3 (ফরোয়ার্ড) এবং 5'-CTCCCGCTTCTCGTGCTCTTTG-3'(বিপরীত); NrF1:5'-TCTGCTGTGGCTGATGGAGA GG-3'(ফরোয়ার্ড) এবং NrF1:5'-GATGCTTGCGTCGTCTGGATGG-3 (বিপরীত);

9. BUN এবং ক্রিয়েটিনিন সনাক্তকরণ

BUN এবং creatinine সনাক্তকরণ BUN (Urea Nitrogen Content Assay Kit Beijing Boxbio Science & Technology Co, Ltd.) এবং Creatinine Assay kit (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China) এর প্রোটোকল অনুযায়ী সম্পাদিত হয়েছিল।

10. HE দাগ, TUL দাগ, ইমিউনোকেমিস্ট্রি, ইমিউনোফ্লুরোসেন্স, এবং ইমিউনোব্লোটিং

রেনাল টিস্যু প্যারাফিনে এম্বেড করা হয়েছিল এবং তারপরে বিভিন্ন ধরণের দাগের জন্য বিভাগগুলিতে কাটা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে। 26,35 হিস্টোলজি হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন স্টেনিং দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। রেনাল টিউবুলার ইনজুরি স্কোর করার জন্য ব্যবহৃত মানদণ্ডগুলি পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছিল। 23 টিউনেল স্টেনিং রেনাল কোষে অ্যাপোপটোসিস মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্রতি টিস্যু বিভাগে 10-20 মাইক্রোস্কোপিক ফিল্ডে TUNEL-পজিটিভ কোষের অনুপাত (শতাংশ) অ্যাপোপটোসিসের পরিমাণগত সূচক হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। 26 ইমিউনোকেমিস্ট্রি স্টেনিংয়ের জন্য, টিস্যু বিভাগগুলি একটি নির্দিষ্ট প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে 4 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল DsbA-L 1:200 বা VDAC1 1:100)। পরের দিন সকালে, বিভাগগুলিকে 37 ডিগ্রিতে 30 মিনিটের জন্য একটি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপরে 5-10 মিনিটের জন্য DAB-এর সাথে প্রতিক্রিয়া দেখানো হয়েছিল। ইমিউনোফ্লুরোসেন্স স্টেনিংয়ের জন্য, বিভাগগুলিকে একটি নির্দিষ্ট প্রাথমিক অ্যান্টিবডি (DsbA-L 1:200, VDAC1 1:100) দিয়ে রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে এবং তারপরে অন্ধকারে 37 ডিগ্রিতে 1 ঘন্টার জন্য একটি সেকেন্ডারি ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল৷ DAPI তারপর 3-5 মিনিটের জন্য যোগ করা হয়েছিল এবং বিভাগগুলি ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল৷ মাইটোকন্ড্রিয়াল স্টেনিং একটি স্ট্যান্ডার্ড প্রোটোকল দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল। BUMPT কোষ বা কিডনি থেকে প্রোটিন লাইসেট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপর প্রোটিন ধারণকারী সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্টকে SDS-PAGE এর অধীন করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল। তারপরে ঝিল্লিগুলিকে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে এবং ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য একটি মাধ্যমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে ধূসরিত করা হয়েছিল। antiCOXIV, VDAC1, PGC-1a, Bax, Cyt-c, NRF1, GAPDH, এবং b-টিউবুলিনের ঘনত্ব হল 1:1000৷ অ্যান্টি-ক্যাস্পেস3 এবং ক্লিভড-ক্যাপেস3-এর ঘনত্ব হল 1:2000।

Cistanche সম্পূরক

11. পরিসংখ্যান

সমস্ত ডেটা § SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল। দুই-টেইলড স্টুডেন্ট টি-টেস্ট দুটি গ্রুপ তুলনার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। Oneway ANOVA এর পরে Tukey-এর পোস্ট-হক বিশ্লেষণ একাধিক তুলনার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ক্রুস্কাল ওয়ালস পরীক্ষাটি অ-স্বাভাবিক বিতরণ সহ ডেটার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। গ্রাফ প্যাড সফ্টওয়্যার 8৷{4}} ডেটা বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং পি<0.05 was considered statistically significant.

12. তহবিল উৎসের ভূমিকা

তহবিলধারীরা অধ্যয়নের নকশা, তথ্য সংগ্রহ, বিশ্লেষণ, ব্যাখ্যা বা পাণ্ডুলিপির লেখার সাথে জড়িত ছিল না।

তথ্যসূত্র

1 জুক এ, বনভেন্ত্রে জেভি। তীব্র কিডনি আঘাত. আন্নু রেভ মেড. 2016;67:293–307।

2 Zhou D, Tan RJ, Lin L, Zhou L, Liu Y. তীব্র কিডনি আঘাতের পরে renoprotection এর জন্য রেনাল টিউবুলে হেপাটোসাইট গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর, c-met, সক্রিয়করণ প্রয়োজন। কিডনি Int. 2013;84(3):509–520।

3 O'Neal JB, Shaw AD, Billings FT. কার্ডিয়াক সার্জারির পরে তীব্র কিডনি আঘাত: বর্তমান বোঝা এবং ভবিষ্যতের দিকনির্দেশ। ক্রিট কেয়ার। 2016;20(1):187।

4 ইশিমোটো ওয়াই, ইনাগি আর. মাইটোকন্ড্রিয়া: তীব্র কিডনি আঘাতে একটি থেরাপিউটিক লক্ষ্য। নেফ্রোল ডায়াল ট্রান্সপ্লান্ট। 2016;31(7):1062–1069। ইউরোপীয় ডায়ালাইসিস এবং ট্রান্সপ্লান্ট অ্যাসোসিয়েশনের অফিসিয়াল প্রকাশনা - ইউরোপীয় রেনাল অ্যাসোসিয়েশন।

5 Linkermann A, Chen G, Dong G, Kunzendorf U, Krautwald S, Dong Z. AKI-তে কোষের মৃত্যু নিয়ন্ত্রিত। জে এম সোক নেফ্রোল। 2014;25(12):2689–2701।

6 আগরওয়াল এ, ডং জেড, হ্যারিস আর, এট আল। AKI এর সেলুলার এবং আণবিক প্রক্রিয়া। জে এম সোক নেফ্রোল। 2016;27(5):1288–1299।

7 Morigi M, Perico L, Rota C, et al. Sirtuin 3-নির্ভর মাইটোকন্ড্রিয়াল গতিশীল উন্নতি তীব্র কিডনি আঘাত থেকে রক্ষা করে। জে ক্লিন ইনভেস্টিগ। 2015;125(2):715–726।

8 Yu X, Xu M, Meng X, et al. নিউক্লিয়ার রিসেপ্টর PXR AKR1B7 কে টার্গেট করে AKI-তে মাইটোকন্ড্রিয়াল মেটাবলিজম এবং রেনাল ফাংশন রক্ষা করতে। Sci Transl Med. 2020;12(543):7591–7605।

9 Stoppe C, Averdunk L, Goetzenich A, et al. কার্ডিয়াক সার্জারির পরে তীব্র কিডনি আঘাতে ম্যাক্রোফেজ মাইগ্রেশন ইনহিবিটরি ফ্যাক্টরের প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকা। Sci Transl Med. 2018;10(441):4886–4898।

10 Wei Q, Sun H, Song S, et al. মাইক্রোআরএনএ-668 ইস্কেমিক তীব্র কিডনি আঘাতে মাইটোকন্ড্রিয়াল গতিবিদ্যা সংরক্ষণ করতে MTP18 দমন করে। জে ক্লিন ইনভেস্টিগ। 2018;128(12):5448–5464।

11 Tran M, Tam D, Bardia A, et al. PGC-1আলফা ইঁদুরের সিস্টেমিক প্রদাহের সময় তীব্র কিডনি আঘাতের পরে পুনরুদ্ধারের প্রচার করে। জে ক্লিন ইনভেস্টিগ। 2011;121(10):4003–4014।

12 Lan R, Geng H, Singh PK, et al. মাইটোকন্ড্রিয়াল প্যাথলজি এবং গ্লাইকোলাইটিক স্থানান্তর ইসকেমিক AKI পরে প্রক্সিমাল টিউবিউল অ্যাট্রোফির সময়। জে এম সোক নেফ্রোল। 2016;27(11):3356–3367।

13 হ্যারিস জেএম, মেয়ার ডিজে, কোলস বি, কেটেরার বি। ইঁদুরের লিভার মাইটোকন্ড্রিয়ার ম্যাট্রিক্স থেকে বিচ্ছিন্ন একটি অভিনব গ্লুটাথিয়ন ট্রান্সফারেজ (13-13) ক্লাস থিটা এনজাইমের সাথে কাঠামোগত মিল রয়েছে। বায়োকেম জে. 1991;278(Pt 1):137–141।

14 বাই জে, সার্ভান্তেস সি, লিউ জে, এট আল। DsbA-L mtDNA রিলিজ-অ্যাক্টিভেটেড cGAS-cGAMP-STING পথকে দমন করে স্থূলতা-প্ররোচিত প্রদাহ এবং ইনসুলিন প্রতিরোধকে প্রতিরোধ করে। Proc Natl Acad Sci USA. 2017;114(46):12196–12201।

15 চেন এইচ, বাই জে, ডং এফ, এট আল। হেপাটিক DsbA-L খাদ্য-প্ররোচিত হেপাটোস্টেটোসিস এবং ইনসুলিন প্রতিরোধের থেকে ইঁদুরকে রক্ষা করে। FASEB J. 2017;31(6):2314–2326

16 লিউ এম, জিয়াং আর, উইল্ক এসএ, এট আল। ফ্যাট-নির্দিষ্ট DsbA-L ওভার এক্সপ্রেশন অ্যাডিপোনেক্টিন মাল্টিমারাইজেশনকে উৎসাহিত করে এবং ইঁদুরকে খাদ্য-প্ররোচিত স্থূলতা এবং ইনসুলিন প্রতিরোধের থেকে রক্ষা করে। ডায়াবেটিস। 2012;61(11):2776–2786।

17 চেন এক্স, হান ওয়াই, গাও পি, এট আল। ডিসালফাইড-বন্ড একটি অক্সিডোরেডাক্টেস-জাতীয় প্রোটিন ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথিতে অ্যাক্টোপিক ফ্যাট জমা এবং লিপিড-সম্পর্কিত কিডনি ক্ষতির বিরুদ্ধে রক্ষা করে। কিডনি Int. 2019;95(4):880–895।

18 Dai XG, Xu W, Li T, et al. ফসফেটেস এবং টেনসিন হোমোলজ-প্ররোচিত পুটেটিভ কিনেস 1-সেপটিক তীব্র কিডনি আঘাতে পার্কিন-মধ্যস্থ মাইটোফ্যাগির জড়িত। চিন মেড জে (ইংরেজি)। 2019;132(19):2340–2347।

19 শোশান-বারমাটজ ভি, নাহন-ক্রিস্টাল ই, শেইনফার-কুজমিন এ, গুপ্তা আর. ভিডিএসি1, মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিসফাংশন এবং আলঝেইমার রোগ। ফার্মাকোল রেস. 2018;131:87-101।

20 Geisler S, Holmstrom KM, Skujat D, et al. PINK1/Parkin-মিডিয়াটেড মাইটোফ্যাজি VDAC1 এবং p62/SQSTM1 এর উপর নির্ভরশীল। ন্যাট সেল বায়োল। 2010;12(2):119–131।

21 Lipper CH, Stofleth JT, Bai F, et al. MitoNEET দ্বারা VDAC-এর রেডক্স-নির্ভর গেটিং। Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116(40):19924–19929।

22 Li X, Pan J, Li H, et al. UUO ইঁদুরে DsbA-L মধ্যস্থতাকারী রেনাল টিউবুলোইনটারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস। ন্যাট কমুন। 2020;11(1):4467।

23 Zhang D, Liu Y, Wei Q, et al. টিউবুলার p53 AKI-এর মধ্যস্থতা করতে একাধিক জিন নিয়ন্ত্রণ করে। জে এম সোক নেফ্রোল। 2014;25(10):2278–2289।

24 Xu X, Wang J, Yang R, Dong Z, Zhang D. EGFR-এর জেনেটিক বা ফার্মাকোলজিক বাধা সেপসিস-প্ররোচিত AKI-এর উন্নতি ঘটায়। অনকোটার্গেট। 2017;8(53):91577–91592।

25 Wang J, Li H, Qiu S, Dong Z, Xiang X, Zhang D. MBD2 ভ্যানকোমাইসিন-প্ররোচিত AKI-এর সময় কিডনি কোষের অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করতে miR-301a{3}}p কে আপরেগুলেট করে। সেল ডেথ ডিস। 2017;8(10):e3120।

26 Xu L, Li X, Zhang F, Wu L, Dong Z, Zhang D. EGFR HIPK2 ওভার এক্সপ্রেশনের মাধ্যমে AKI থেকে CKD এর অগ্রগতি চালায়। থেরানোস্টিকস। 2019;9(9):2712–2726।

27 Zhang P, Yi L, Qu S, et al. বায়োমার্কার TCONS_00016233 miR-22-3p/AIFM1 সিগন্যালিং অক্ষকে লক্ষ্য করে সেপটিক AKI চালায়। মোল থার নিউক্লিক অ্যাসিড। 2020;19:1027–1042।

28 চেন জে, ওয়াং জে, লি এইচ, ওয়াং এস, জিয়াং এক্স, ঝাং ডি। p53 ভ্যানকোমাইসিন-প্ররোচিত AKI মধ্যস্থতা করতে miR-192-5p সক্রিয় করে। বিজ্ঞান প্রতিনিধি 2016;6:38868।

29 Xu X, Pan J, Li H, et al. Atg7 পিকেসি-ডেল্টা সক্রিয়করণের মাধ্যমে ভ্যানকোমাইসিন নেফ্রোটক্সিসিটিতে রেনাল টিউবুলার সেল অ্যাপোপটোসিসের মধ্যস্থতা করে। FASEB J. 2019;33(3):4513–4524।

30 Lee HT, Emala CW. ইস্কেমিক ইনজুরির ইন ভিট্রো মডেলে প্রি-কন্ডিশনিং এবং অ্যাডেনোসিন মানুষের প্রক্সিমাল টিউবুল কোষকে রক্ষা করে। জে এম সোক নেফ্রোল। 2002;13(11):2753–2761।

31 Ge Y, Wang J, Wu D, et al. lncRNA NR_038323 miR-324-3p/ DUSP1 অক্ষকে লক্ষ্য করে ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথিতে রেনাল ফাইব্রোসিস দমন করে। মোল থার নিউক্লিক অ্যাসিড। 2019;17:741–753।

32 ওয়াং জে, প্যান জে, লি এইচ, এট আল। ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথিতে রেনাল ফাইব্রোসিসের জন্য lncRNA ZEB1-AS1 p53 দ্বারা দমন করা হয়েছিল। মোল থার নিউক্লিক অ্যাসিড। 2018;12:741–750।

33 গান YX, Sun JX, Zhao JH, et al. নন-কোডিং আরএনএগুলি ceRNA-মধ্যস্থিত miRNA ফাঁকির মাধ্যমে CLDN4-এর নিয়ন্ত্রক নেটওয়ার্কে অংশগ্রহণ করে। ন্যাট কমুন। 2017;8(1):289।

34 Zhu M, Liu J, Xiao J, et al. Lnc-mg একটি দীর্ঘ নন-কোডিং আরএনএ যা মায়োজেনেসিস প্রচার করে। ন্যাট কমুন। 2017;8:14718।

35 কিশি এস, ব্রুকস সিআর, তাগুচি কে, এট আল। প্রক্সিমাল টিউবুল ATR ম্যালাডাপ্টিভ রেনাল ইনজুরি প্রতিক্রিয়া প্রতিরোধ করতে ডিএনএ মেরামত নিয়ন্ত্রণ করে। জে ক্লিন ইনভেস্টিগ। 2019;129(11):4797–4816।

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h এবং Dongshan Zhang a,b *

ইমার্জেন্সি মেডিসিন বিভাগ, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

b জরুরী ঔষধ এবং কঠিন রোগ ইনস্টিটিউট, দ্বিতীয় জিয়াংয়া হাসপাতাল, সেন্ট্রাল সাউথ ইউনিভার্সিটি, চাংশা, হুনান 410011, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

c চক্ষুবিদ্যা বিভাগ, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

d প্রস্রাব সার্জারি বিভাগ, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

e বুক সার্জারি বিভাগ, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

f জেনারেল সার্জারি বিভাগ, দ্বিতীয় জিয়াংয়া হাসপাতাল, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

g জনস্বাস্থ্য বিভাগ, সেন্ট্রাল সাউথ ইউনিভার্সিটি, চাংশা, হুনান, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

h এন্ডোক্রিনোলজি বিভাগ, শেনজেন পিপলস হাসপাতাল, জিনান বিশ্ববিদ্যালয়ের দ্বিতীয় ক্লিনিক্যাল মেডিকেল কলেজ, সাউদার্ন ইউনিভার্সিটি অফ সায়েন্স অ্যান্ড টেকনোলজির প্রথম অনুমোদিত হাসপাতাল, শেনজেন, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন

1 জিয়াওঝো লি এবং জিয়ান প্যান এই গবেষণায় সমানভাবে অবদান রেখেছেন