পার্টⅡ:সিস্তানচে সালসা থেকে নতুন ফেনাইলপ্রোপ্যানয়েড-প্রতিস্থাপিত ডিগ্লাইকোসাইডের ডিরেপ্লিকেশন-গাইডেড আইসোলেশন এবং ম্যাক্রোফেজে কোনো উৎপাদন না হওয়াতে তাদের প্রতিরোধমূলক কার্যকলাপ
Mar 04, 2022
যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com
একটি 3-মিথাইলবুটেনাইল গ্রুপ, একটি এগ্লাইকোন সাবস্ট্রাকচার, H-2-এর সাথে H-1a এবং H-1b এবং H{{এর মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দ্বারা প্রস্তাবিত হয়েছিল 4}} এবং H-5 এবং ওলেফিনিক কার্বন, kC 120.7 (C-2) এবং 136.4 (C-3) এ। এমএস ফ্র্যাগমেন্ট প্যাটার্ন সহ এনএমআর স্পেকট্রা বিশ্লেষণ এবং অ্যাসিড হাইড্রোলাইসেটের এইচপিএলসি স্পেকট্রা বিশ্লেষণ দ্বারা দুটি চিনির অংশ প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। এসিড হাইড্রোলাইজেটের এইচপিএলসি বিশ্লেষণ ব্যবহার করে তাদের নিখুঁত কনফিগারেশনটি ডি-গ্লুকোজ এবং এল-র্যামনোজ হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল [17]। অ্যানোমেরিক প্রোটনের ধ্রুবকগুলিকে যুক্ত করে এই চিনির অংশগুলিকে -গ্লুকোজ এবং একটি-রহ্যামনোজ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল। 1H-1H COZY বর্ণালী H-13 থেকে H-63 এবং H-133 থেকে H-633 (চিত্র 4) থেকে ক্রমিক পারস্পরিক সম্পর্ক দেখিয়েছে।
kH 4.70 (H-43) এ একটি ডাউনশিফ্ট গ্লুকোজ প্রোটন গ্লুকোজের উপর একটি অ্যাসিল-পরিবর্তনের পরামর্শ দেয়। HMBC বর্ণালী থেকে, H-43 এবং C-9333-এর মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক ক্যাফেওয়েল বিকল্পের অবস্থানকে নিশ্চিত করেছে। H-13 এবং C-1 (kC 64.5) এবং H-33 (kH 3.68) এবং C-133 (kC 101.2) এর মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক প্রতিটি বিকল্পের অবস্থানের পরামর্শ দিয়েছে . তদনুসারে, 6 এর গঠন নির্ধারণ করা হয়েছিল 3-মিথাইলবুটেনাইল-ও- -এল-রহ্যামনোপাইরানোসিল-(1→3)-4-ও-(ই)-ক্যাফেওয়েল- -ডি- গ্লুকোজ-পাইরানোসাইড এবং নাম cistansalside B.
Cistansalside C (12), একটি বাদামী নিরাকার পাউডার, ( প্লাস)-HR-ESI-QTOF-MS দ্বারা C26H38O13-এর একটি আণবিক সূত্র থাকার জন্য নির্ধারিত হয়েছিল, যা m/z 581.2213 [M প্লাস Na] প্লাস (calcd) এ শীর্ষস্থান দেখিয়েছিল C26H38O13Na, 581.2205 এর জন্য। m/z 163-এ একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত আয়ন প্রস্তাব করেছে যে কাঠামোতে একটি ক্যাফেওয়েল বিকল্প বিদ্যমান। m/z 325 এবং m/z 471-এ খণ্ড আয়নগুলি একটি র্যামনোজ ইউনিট এবং একটি গ্লুকোজ ইউনিটের অস্তিত্বের পরামর্শ দেয়।
12-এর এনএমআর স্পেকট্রার 6টির সাথে তুলনা করে দেখা গেছে যে তারা অ্যাগ্লাইকোন গঠন ছাড়া একই রকম ছিল। 12-এর এনএমআর স্পেকট্রাতে, kC 38 তে দুটি প্যারাফিনিক কার্বন। }}.7 (C-2) এবং 136.4 (C-3) 6-এর অ্যাগ্লাইকোনে। 12-এর অ্যাগ্লাইকোনে জীবাণু মিথাইল গ্রুপগুলি (kH 0.88) উপরে স্থানান্তরিত হয়েছিল 6 এর এগ্লাইকোনে H-4 এবং H-5 (kH 1.71 এবং 1.63) এর সাপেক্ষে (সারণী 2)। 12-এর অ্যাগ্লাইকোনকে একটি 3-মিথাইল বিউটাইল গ্রুপ বলে প্রস্তাব করা হয়েছিল, যা 1H এবং COZY NMR স্পেকট্রা দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। 3-মিথাইল বিউটাইল গ্রুপের শিখরগুলি 3.81 (1H, m, H-1a), 3.48 (1H, m, H-1b), 1.71 (1H, m) এ পরিলক্ষিত হয়েছে , H-3), 1.44 (2H, m, H-2), এবং 0.88 (H-4, 5)।
অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেটের এইচপিএলসি বিশ্লেষণ এবং এনএমআর স্পেকট্রা বিশ্লেষণের পাশাপাশি এমএস ফ্র্যাগমেন্ট প্যাটার্ন দ্বারা দুটি চিনির অংশ পুনরায় নিশ্চিত করা হয়েছিল। অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেটের HPLC বিশ্লেষণ ব্যবহার করে শর্করার পরম কনফিগারেশনগুলিকে ডি-গ্লুকোজ এবং এল-র্যামনোজ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল [17]। অ্যানোমেরিক প্রোটনের ধ্রুবকগুলিকে সংযুক্ত করার মাধ্যমে A -গ্লুকোজ আংশিক এবং একটি-রহমনোজ আংশিকতা নিশ্চিত করা হয়েছিল। 1H-1H COZY বর্ণালী H-13 থেকে H-53, H-133 থেকে H-333, এবং H{{11} থেকে ক্রমিক পারস্পরিক সম্পর্ক দেখিয়েছে } থেকে H-433 (চিত্র 4)।
এইচএমবিসি বিশ্লেষণের মাধ্যমে বিকল্পের অবস্থান নিশ্চিত করা হয়েছিল। HMBC বর্ণালীতে, H-13 এবং C-1 (kC 67.2), H-33 (kH 3.68) এবং C-133 (kC 101.2) এবং এর মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক H-43 (kH 4.70) এবং C-9333 (kC 165.7) সনাক্ত করা হয়েছে৷ ফলস্বরূপ, 12 এর গঠনটি প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল 3-মিথাইল বিউটাইল-ওএল-র্যামনোপাইরানোসিল-(1→3)-4-ও-(ই)-ক্যাফেওয়েল- -ডি-গ্লুকোজ-পাইরানোসাইড এবং নাম cistansalside C.
Cistansalside D (17), একটি নিরাকার বাদামী পাউডার, ইতিবাচক মোড উচ্চ-রেজোলিউশন ESI-QTOF-MS দ্বারা C31H38O14 এর একটি আণবিক সূত্র থাকার জন্য নির্ধারিত হয়েছিল, যা m/z 657.2147 [M প্লাস Na] প্লাস এ একটি অ্যাডাক্ট আয়ন শিখর দেখিয়েছিল (C31H38O14Na, 657.2154 এর জন্য ক্যালসিডি)। m/z 147 এ একটি [M প্লাস H x এগ্লাইকোন x Rha x অ্যাসিটাইল Glc] প্লাস আয়ন, m/z 351 এ [M প্লাস H x অ্যাগ্লাইকোন x Rha] প্লাস আয়ন এবং [M প্লাস H x অ্যাগ্লাইকোন] সহ খণ্ড আয়ন m/z 497 এ প্লাস আয়নও সনাক্ত করা হয়েছে। m/z 147-এ একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত আয়ন প্রস্তাব করেছে যে একটি কিউমারয়ল বিকল্প এর গঠনে উপস্থিত ছিল। m/z 351 এবং m/z 497-এ খণ্ড আয়নগুলি একটি র্যামনোজ ইউনিট এবং একটি অ্যাসিটাইল-প্রতিস্থাপিত গ্লুকোজ ইউনিটের অস্তিত্বের পরামর্শ দেয়।
থেকে cistansalsidecistanche ঔষধি
13C-NMR স্পেকট্রাম 31টি কার্বন পরমাণুর উপস্থিতি প্রকাশ করেছে। kH 4.61 (1H, m, H-13) এবং 4.60 (1H, s, H{{10}) এ দুটি অ্যানোমেরিক প্রোটন 1H এবং HSQC বর্ণালীতে পরিলক্ষিত হয়েছিল . 1H-NMR বর্ণালী একটি 1.97 (3H, s, acetyl-CH3), kH 7.55 এ একটি ট্রান্স-ওলেফিন (1H, d, J=15.9 Hz, H{{) এ একটি মিথাইল গ্রুপের উপস্থিতি নির্দেশ করে 25}}) এবং 6.34 (1H, d, J=15.9 Hz, H-8333) এবং kH 7.53 (2H, d, J=6 এ দুটি প্যারা-প্রতিস্থাপিত বেনজিন রিং। 9 Hz, H-3333, 5333) এবং 6.79 (2H, d, J=6.9 Hz, H-2333, 6333)/ kH 6.98 (2H, d, J {{5 0}}.0 Hz, H-2, 6) এবং 6.65 (2H, d, J=8.0 Hz, H-3, 5) (সারণী 2) . HMBC NMR বর্ণালী থেকে, kc 165.5 (C-9333) এবং H-8333 এবং H-2333, 6333, এবং C-7333 (kc) তে কার্বনিল কার্বনের মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক 145.4) একটি (ই)-কৌমারয়ল গ্রুপের পরামর্শ দিয়েছে। একটি মিথাইল প্রোটন পিক এবং kc 169.0 এ কার্বনাইল কার্বনের মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক একটি এসিটাইল গ্রুপের উপস্থিতি নিশ্চিত করেছে।
KC 155.6 (C-4) এবং 128.6 (C-1) এ H-3, 5 এবং কোয়াটারনারি অ্যারোমেটিক কার্বনের মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্কের ভিত্তিতে একটি 4-হাইড্রোক্সিফেনাইল গ্রুপ প্রস্তাবিত হয়েছিল . একটি হাইড্রোক্সিলেটেড ইথাইল গ্রুপ কোজি এনএমআর সংকেত দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল kH 2.66 (2H, t, J=6.1 Hz, H-7), 3.90 (1H, m, H-8a ) এবং 3.54 (1H, m, H-8b)। H-7 এবং C-1 (kC 128.6) এবং C-2, 6 (kC 129.7) এর মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক একটি 4-হাইড্রোক্সিফেনাইলথাইল গ্রুপের পরামর্শ দিয়েছে, একটি অ্যাগলাইকোন সাবস্ট্রাকচার হিসেবে।
এমএস ফ্র্যাগমেন্ট প্যাটার্ন থেকে প্রস্তাবিত দুটি চিনির অংশ, অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেট এবং এনএমআর স্পেকট্রার এইচপিএলসি বিশ্লেষণ দ্বারা পুনঃনিশ্চিত করা হয়েছিল। ডি-গ্লুকোজ এবং এল-র্যামনোজ অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেটের এইচপিএলসি বিশ্লেষণ ব্যবহার করে ব্যাখ্যা করা হয়েছিল [17]। অ্যানোমেরিক প্রোটনের ধ্রুবকগুলিকে যুক্ত করার মাধ্যমে A -গ্লুকোজ আংশিক এবং একটি-রহ্যামনোজ আংশিকতা প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। 1H-1H COZY বর্ণালী H-13 থেকে H-53 এবং H-133 থেকে H-633 (চিত্র 4) থেকে অনুক্রমিক পারস্পরিক সম্পর্ক দেখিয়েছে।
1H-NMR বর্ণালী থেকে, H-23 (kH 4.69) এবং H-43 (kH 4.80) এর ডাউনফিল্ড স্থানান্তর গ্লুকোজের উপর অ্যাসিল-প্রতিস্থাপিত অবস্থানের পরামর্শ দেয়। গ্লুকোজ এবং দুটি অ্যাসিল গ্রুপের মধ্যে সংযোগগুলি H-43 (kH 4.80) এবং C-9333 এবং H-23 এবং একটি এসিটাইল গ্রুপের (kC 169.0) কার্বনিল কার্বনের মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল ) H-33 (kH 3.95) এবং C-1333 এবং H-8 এবং C-13-এর মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দ্বারা অ্যাগ্লাইকোন এবং র্যামনোজের অবস্থানগুলি দেওয়া হয়েছিল। তদনুসারে, 17 এর গঠনটি 4-হাইড্রোক্সিফেনাইলথিল-2-ও-এসিটাইল-ও- -এল-রহ্যামনোপাইরানোসিল-(1→3)-4-ও-(ই)- হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল coumaroyl- -D-glucopyranoside এবং নাম cistansalside D.
Cistansalside E (18) একটি নিরাকার বাদামী পাউডার হিসাবে বিচ্ছিন্ন ছিল। এর আণবিক সূত্রটি 13C-NMR ডেটা দ্বারা C31H38O14 এবং m/z 657.2166 [M প্লাস Na] প্লাস (C31H38O14Na, 657.2154 এর জন্য ক্যালসিডি) উচ্চ-রেজোলিউশন ইএসআই-কিউটিওএফ-এমএস পিক হিসাবে নির্ধারণ করা হয়েছিল। অতিরিক্তভাবে, m/z 163 এ একটি ক্যাফেওয়েল আয়ন, m/z 367 এ একটি [M প্লাস H x Aglycone x Rha] প্লাস আয়ন এবং m/z 513 এ একটি [M প্লাস H x অ্যাগ্লাইকোন] আয়ন সহ খণ্ড আয়নও শনাক্ত করা হয়েছে। খণ্ড আয়নগুলি একটি র্যামনোজ ইউনিট এবং একটি এসিটাইল-প্রতিস্থাপিত গ্লুকোজ ইউনিটের অস্তিত্বের পরামর্শ দেয়।
1H-NMR বর্ণালী kH 4.63 (1H, d, J=8.2 Hz, H-13) এবং 4.60 (1H, s, H-133 এ দুটি অ্যানোমেরিক প্রোটনের উপস্থিতির পরামর্শ দিয়েছে ) এবং kH 4.71 (1H, dd, J=8.9, 8.2 Hz, H-23) এবং 4.81 (1H, dd, J=9.7 এ দুটি অ্যাসিল-প্রতিস্থাপিত গ্লুকোজ প্রোটন , 9.5 Hz, H-43)। 1H এবং HMBC বর্ণালী kH 1.94 (3H, s, acetyl-CH3), kH 7.48 (1H, d, J=15.9 Hz) এ একটি (E)-ক্যাফেওয়েল ময়েটিতে একটি এসিটাইল গ্রুপের অস্তিত্বের পরামর্শ দিয়েছে, H-7333), 7.02 (1H, d, J=1.6 Hz, H-2333), 6.98 (1H, dd, J=8.1, 1.6 Hz, H-6333), 6.76 (1H,d, J=8.1 Hz, H-5333) এবং 6.21 (1H, d, J=15.9 Hz, H{ {67}}) এবং kH 7.29 (2H, m, H-3, 5), 7.21 (2H, m, H-2, 6) এবং 7.20 (1H,) এ একটি মনো-প্রতিস্থাপিত বেনজিন রিং m, H-4) (সারণী 2)। H-7 (2H, kH 2.80, m) এবং C-1 (kC 138.8) এবং H-7 এবং C-এর মধ্যে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দ্বারা একটি ফিনাইলমিথাইল গ্রুপ, একটি এগ্লাইকোন সাবস্ট্রাকচার, প্রস্তাবিত হয়েছিল -2, 6 (kC 128.9) এবং H-7 এর আরামদায়ক NMR সংকেতগুলি H-8a (1H, kH 3.99, m) এবং H-8b (1H, kH 3.63, m)।
অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেট এবং এনএমআর স্পেকট্রা বিশ্লেষণের HPLC বিশ্লেষণ দ্বারা দুটি চিনির অংশ পুনঃনিশ্চিত করা হয়েছিল। শর্করার নিখুঁত কনফিগারেশনগুলি অ্যাসিড হাইড্রোলাইসেটের এইচপিএলসি বিশ্লেষণ ব্যবহার করে ব্যাখ্যা করা হয়েছিল, যা ডি-গ্লুকোজ এবং এল-র্যামনোজ [17] বলে নিশ্চিত করা হয়েছিল। A -Glucose moiety এবং an -rhamnose moiety প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল অ্যানোমেরিক প্রোটনের ধ্রুবককে যুক্ত করার মাধ্যমে। 1H-1H COZY বর্ণালী H-13 থেকে H-53, H-133 থেকে H-233, এবং H{{11} থেকে ক্রমিক পারস্পরিক সম্পর্ক দেখিয়েছে } থেকে H-333 (চিত্র 4)।
এইচএমবিসি বর্ণালী থেকে, H{{0}} এবং C-8 (kC 69.4), H-23 এবং একটি এসিটাইল গ্রুপের কার্বনিল কার্বন (kC 169.1) এর মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক H-33 (kH 3.95) এবং C-133 (kC 102.0) এবং H-43 (kH 4.81) এবং C-9333 (kC 165.6) এর মধ্যে বিকল্পগুলির অবস্থান নিশ্চিত করেছে গঠন. অতএব, 18-এর গঠন নির্ধারণ করা হয়েছিল ফিনাইলথিল-2-O-acetyl-OaL-rhamnopyranosyl-(1→3)-4-O-(E)-caffeoyl- -D-গ্লুকোপাইরানোসাইড এবং নাম cistansalside E.
বেশিরভাগ ট্রান্স-সিনাময়ল বিকল্পগুলি ভিট্রোতে cis-isoform-এ আইসোমারাইজড ছিল। আলো ট্রান্স-সিনামিক অ্যাসিড ডেরিভেটিভগুলিকে সিআইএস-আইসোফর্মে রূপান্তরিত করার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে [18,19]। ট্রান্স-আইসোফর্মের প্রায় 70 শতাংশ বিচ্ছিন্নতা বজায় রাখার জন্য সিনামোয়েলের বিকল্পগুলির ট্রান্স-সিস রূপান্তরের ভারসাম্য পরিলক্ষিত হয়। cis ফর্মের ওলেফিন প্রোটনের জন্য, আনুমানিক 6.90 পিপিএম(d, J=12~13 Hz, H-7333) এবং 5.80 ppm (d, J=12~13 Hz, H-8333) 1H-NMR স্পেকট্রাতে বরাদ্দযোগ্য ছিল, যেখানে সর্বোচ্চ 7.55 পিপিএম (d, J=15.8 Hz, H-7333) এবং 6.40 ppm (d, J { {28}}.8 Hz, H-8333) রূপান্তরের জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল [20]৷ ট্রান্স-সিস মিশ্রণের 1H-NMR বর্ণালীতে, দুটি অলিফিনিক প্রোটনের (H-7333 এবং H-8333) শিখরগুলি 7:3 (ট্রান্স:সিস) অনুপাতে পরিলক্ষিত হয়েছিল। cis ফর্মের 13C-NMR শিখরগুলি রূপান্তরের মতো ছিল৷
cistanche থেকে কার্যকর উপাদান: acteosides
সমস্ত বিচ্ছিন্নতাগুলি RAW-তে LPS-প্ররোচিত NO উত্পাদনের উপর তাদের বাধা প্রভাবের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল
সমস্ত বিচ্ছিন্নতাগুলি RAW 264.7 কোষে LPS-প্ররোচিত NO উত্পাদনের উপর তাদের বাধা প্রভাবের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। ডেক্সামেথাসোন একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং এর IC50 ছিল 7৷{18}} uM। পরীক্ষিত যৌগগুলির মধ্যে, যৌগ 5 (IC50 42.7 o 6.6 uM), 11 (IC50 37.3 o 2.2 uM), 13 (IC50 40৷{2{{ ২৪। মান > 100 uM)। এই যৌগগুলির সাইটোটক্সিসিটি ছিল কিনা তা যাচাই করার জন্য, MTT অ্যাস ব্যবহার করে কোষের কার্যক্ষমতা পরিমাপ করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ, তাদের কেউই উল্লেখযোগ্য সাইটোটক্সিসিটি প্রদর্শন করেনি (পরিপূরক চিত্র S6-1)। এই চারটি যৌগ LPS-উদ্দীপিত RAW 264.7 কোষে NF-λB পথের বিরুদ্ধে তাদের বাধামূলক কার্যকলাপের জন্য মূল্যায়ন করার জন্য নির্বাচিত হয়েছিল। এলপিএস সহ RAW 264.7 কোষের উদ্দীপনা 0.5 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে I入B এবং NF-入B (p65) এর ফসফোরিলেশনকে প্ররোচিত করে। NF- 入 B (p65) এর ফসফোরিলেশন 11, 13 এবং 18 যৌগগুলির সাথে প্রিট্রিটমেন্ট দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করা হয়েছিল যেমন পশ্চিমা দাগ বিশ্লেষণ (চিত্র 5) দ্বারা দেখানো হয়েছে। অতএব, 11, 13 এবং 18 যৌগগুলি ম্যাক্রোফেজে NF-入B-এর বাধার মাধ্যমে প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব প্রয়োগ করতে পারে।
চিত্র 5।এলপিএস-উদ্দীপিত RAW 264.7 কোষে I入B এবং NF-入B (p65) এর ফসফোরিলেশনের উপর চারটি যৌগের প্রভাব। (A) ওয়েস্টার্ন ব্লটগুলি LPS এবং নমুনা-চিকিত্সা করা RAW 264.7 কোষগুলিতে পরিচালিত হয়েছিল; (বি, সি) ইমিউনোব্লট সংকেতগুলি আণবিক বিশ্লেষক/পিসি ডেনসিটোমেট্রি সফ্টওয়্যার (বায়ো-র্যাড, রিচমন্ড, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। ফসফরিলেটেড আইসোফর্মের ঘনত্বের বিশ্লেষণ রিপোর্ট করা হয়েছে। RAW 264.7 কোষে NF- 入 B -অ্যাক্টিন-এর বিষয়বস্তুতে স্বাভাবিক করা হয়েছিল।
3. উপকরণ এবং পদ্ধতি
3.1. সাধারণ পরীক্ষা পদ্ধতি
অপটিক্যাল ঘূর্ণন একটি Jasco P-2000 ডিজিটাল পোলারিমিটার (Jasco, Tokyo, Japan) দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল। ইউভি স্পেকট্রা একটি চিরাসক্যান প্লাস সার্কুলার ডাইক্রোইজম স্পেকট্রোমিটারে (চিরাস্ক্যান, এপিএল, ইউকে) রেকর্ড করা হয়েছিল। Jasco FT/IR-4200 স্পেকট্রোফোটোমিটার ব্যবহার করে IR স্পেকট্রা রেকর্ড করা হয়েছে। উচ্চ-রেজোলিউশনের ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন কোয়াড্রপোল-টাইম-অফ-ফ্লাইট ভর স্পেকট্রোমেট্রি (HR-ESI-qTOF-MS) একটি Agilent 6530 Accurate-Mas Q-TOF LC/MS-এ সঞ্চালিত হয়েছিল যা Agilent 1260 Infinity সিরিজ (Agilent Inc. , Palo Alto, CA, USA), এবং ব্যবহৃত কলামটি ছিল একটি Jasco SFCpak Crest C18T-5 কলাম (id 150 4.6 mm, 5 um)। MassHunter ওয়ার্কস্টেশন সফ্টওয়্যার ডেটা অধিগ্রহণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।
1D (1H এবং 13C) এবং 2D (1H-1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY) NMR স্পেকট্রা একটি Jeol LA 300 (Jeol, Tokyo, Japan), Bruker AVANCE-400, Bruker দিয়ে প্রাপ্ত হয়েছিল AVANCE-500, Bruker AVANCE-600 এবং Bruker AVANCE 800 HD স্পেকট্রোমিটার একটি ক্রায়োপ্রোবের সাথে মিলিত হয়েছে (ব্রুকার, এটলিংজেন, জার্মানি)। DMSO-d6 (কেমব্রিজ আইসোটোপ ল্যাবরেটরিজ, ইন সিস্তানচে অ্যান্ডোভার, এমএ, ইউএসএ) এনএমআর দ্রাবক এবং রেফারেন্স পিক (kH 2.50 এবং kC 39.5) হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি (CC) Sephadex LH-20 (25–100 um; Pharmacia, Uppsala, Sweden) বা Kieselgel 60 silica gel (40–63 um, 230–400 mesh, Art. 9385; Merck, Darmstadt) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল , জার্মানি)। থিন-লেয়ার ক্রোমাটোগ্রাফি (TLC) প্রি-কোটেড Kieselgel 60 সিলিকা জেল F254 প্লেটে (আর্ট। 5715; মার্ক) পরিচালিত হয়েছিল। 254 nm এবং 365 nm (VL-4.LC, 365/254; Vilber Lourmat, Torcy, France) একটি UV বাতি ব্যবহার করে TLC-তে দাগ সনাক্ত করা হয়েছে। মিডিয়াম প্রেসার লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (MPLC) একটি রেডিসেপ 120 গ্রাম সিলিকা ফ্ল্যাশ কলাম (ইসকো, লিঙ্কন, এনই, ইউএসএ) এবং কিজেগেল 60 সিলিকা জেল (40-63 um, 230-400 জাল, আর্ট। 9385; মার্কক) ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। কম্বিফ্ল্যাশ সঙ্গী (ইসকো)। উচ্চ-চাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) সিস্টেমটি ছিল একটি Gilson HPLC একটি Gilson 321 পাম্প এবং UV.VIS 151 ডিটেক্টর (Gilson, Middleton, WI, USA), আধা-প্রস্তুতিমূলক ODS কলাম ব্যবহার করে (Luna 5 um C18 (2) 100 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Phenomenex Inc., Torrance, CA, USA; Hypersil GOLD™ aQ 175 Å, id 250: 10 mm, 5 um, Thermo Scientic™, Hennigsndorf, জার্মানি C201; Å, id 250: 10 mm, 5 um, Young Jin Biochrom Co., Ltd., Seongnam, Korea)। বিশ্লেষণাত্মক RP-HPLC সিস্টেমটি ছিল a996 ফটোডিওড অ্যারে (PDA) ডিটেক্টর (Waters Corp, Milford, MA, USA) সহ একটি ওয়াটারস 2695 অ্যালায়েন্স সিস্টেম এবং ব্যবহৃত কলামটি ছিল একটি হাইপারসিল™ BDS C18 কলাম (130 Å, id 150: 4.6) mm, 5 um, Thermo Scientific™)। ফরমিক অ্যাসিড ডেজং কেমিক্যালস অ্যান্ড মেটাল কোং লিমিটেড (সিউল, কোরিয়া) থেকে কেনা হয়েছিল। HPLC গ্রেড দ্রাবক ফিশার সায়েন্টিফিক কোরিয়া লিমিটেড (সিউল, কোরিয়া) থেকে কেনা হয়েছিল। H2SO4, Na2CO3, এবং নিষ্কাশন, ভগ্নাংশ, এবং বিচ্ছিন্নকরণের জন্য প্রথম গ্রেডের দ্রাবকগুলি Daejung কেমিক্যাল অ্যান্ড মেটাল কোম্পানি লিমিটেড (সিউল, কোরিয়া) থেকে কেনা হয়েছিল৷ টোকিও কেমিক্যাল ইন্ডাস্ট্রি (টোকিও, জাপান) থেকে এল- এবং ডি-সিস্টাইন মিথাইল এস্টার হাইড্রোক্লোরাইড এবং ও-টলিসোথিওসায়ানেট কেনা হয়েছিল।
3.2. উদ্ভিদ উপাদান
পুরো গাছপালাসিস্তানচে সালসা, যা শিনজাং উইঘুর থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল, দায়েরিম ফার্মাসিউটিক্যাল হোলসেল কোম্পানির (চেওংজু, কোরিয়া) মাধ্যমে আমদানি করা হয়েছিল। প্রফেসর ডঃ জেহিউন লি (ডংগুক ইউনিভার্সিটি, সিউল, কোরিয়া) তাদের শনাক্ত করেছেন। ভাউচারের নমুনা (SNUPH2016-03) সিউল ন্যাশনাল ইউনিভার্সিটির কলেজ অফ ফার্মেসি, মেডিসিনাল প্ল্যান্ট গার্ডেনের হার্বেরিয়ামে জমা করা হয়েছিল৷
3.3. নিষ্কাশন এবং আলাদা করা
এর শুকনো পুরো গাছপালাসিস্তানচে সালসা(5.7 কেজি) কাটা এবং MeOH (20 L) দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় 99 মিনিটের জন্য সোনিকেশন সহ তিনবার বের করা হয়েছিল। ভ্যাকুওতে দ্রাবক অপসারণের পর, অপরিশোধিত নির্যাস (1.35 কেজি) H2O (5 L) এ স্থগিত করা হয়েছিল, তারপর EtOAc (5 L) দিয়ে বিভক্ত করা হয়েছিল। EtOAc অবশিষ্টাংশ (55.3 গ্রাম) সিলিকা জেল ক্রোমাটোগ্রাফিতে CHCl3/MeOH (50:1–0:1, ধাপ-গ্রেডিয়েন্ট সিস্টেম) এর সাথে 16 ভগ্নাংশে (E01-16) বিভক্ত করা হয়েছিল।
ই08 (611.7 মিলিগ্রাম) সিলিকা জেল মাঝারি চাপের তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (25 গ্রাম) এবং CHCl3/MeOH (18:1–0:1, স্টেপ-গ্রেডিয়েন্ট সিস্টেম) দ্বারা নির্গত হয়েছিল এবং 11টি ভগ্নাংশ দিয়েছে (E08a-k)। E08g থেকে, যৌগ 13 (0.7 mg) এবং 18 (0.6 mg) একটি Luna 5 um HPLC কলাম এবং 28 শতাংশ aq সহ আইসোক্র্যাটিক ইলুশন ব্যবহার করে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। MeCN। E08h (138.5 mg) সজ্জিত যৌগ 7 (10.6 mg), 8 (17.2 mg), 14 (13.4 mg) এবং 17 (4.9 mg) এর HPLC পরিশোধন (হাইপারসিল গোল্ড, 25 শতাংশ aq. MeCN)।
ই09 (1.15 গ্রাম) CHCl3/MeOH (10:1–0:1, ধাপ-এর সাহায্যে সিলিকা-MPLC কলামে (20 গ্রাম) বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। গ্রেডিয়েন্ট সিস্টেম) 11টি সাবফ্রাকশন দিতে (E09a-k)। E09e (398.7 mg) Sephadex LH-20 (MeOH) এর অধীন ছিল এবং আটটি উপভগ্নাংশ (E09e1-8) পেয়েছে। E09e6 পরবর্তীকালে যৌগ 11 (0.4 মিলিগ্রাম) সামর্থ্যের জন্য একটি হাইপারসিল গোল্ড এইচপিএলসি কলাম (22 শতাংশ aq. MeCN) ব্যবহার করে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। E09e7 থেকে, যৌগ 5 (0.6 মিগ্রা) একটি লুনা 5 um HPLC কলাম থেকে 40 শতাংশ aq সহ আইসোক্র্যাটিক ইলুকশন দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। MeOH.
E10 (1.20 g) Sephadex LH-20 কলামে MeOH-এর সাহায্যে নয়টি ভগ্নাংশে (E10ai) বিভক্ত ছিল। E10g (147.5 mg), যৌগগুলি 4 (13.4 mg), 9 (8.0 mg) এবং 15 (5.0 mg) HPLC বিচ্ছেদ (Inno, 23 শতাংশ aq. MeCN) দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। ভগ্নাংশ E10h (470.0 mg) একটি হাইপারসিল গোল্ড কলামে আইসোক্র্যাটিক ইলিউশন (40 শতাংশ aq. MeOH) দ্বারা শুদ্ধ করা হয়েছিল যৌগ 1 (3.8 mg), 10 (42.1 mg) এবং 16 (3.0 mg)।
E11 (2.96 গ্রাম) নয়টি ভগ্নাংশ (E11a-i) দিতে MeOH-এর সাথে সেফাডেক্স LH-20 এলুট করে। E11e কে Sep-Pak C18 কার্টিজ দ্বারা ধাপে ধাপে 10 শতাংশ, 20 শতাংশ, 30 শতাংশ, 50 শতাংশ এবং 100 শতাংশ aq দিয়ে আলাদা করা হয়েছে। MeOH সাতটি ভগ্নাংশ (E11e1-7), তারপরে লুনা 5 um HPLC (28 শতাংশ aq. MeCN) যৌগগুলি 3 (3.4 মিগ্রা), 6 (1.4 মিগ্রা) এবং 12 (1.2 মিগ্রা) দিতে।
ছয়টি ভগ্নাংশ (18:1–0:1) দেওয়ার জন্য একটি CHCl3/MeOH স্টেপ-গ্রেডিয়েন্ট সিস্টেম ব্যবহার করে E12 (19.0 g) সিলিকা MPLC (120 g) এর অধীন ছিল , E12a-f)। E12f একটি Sephadex LH-20 কলামে (MeOH) ক্রোমাটোগ্রাফ করা হয়েছিল, যার ফলে সাতটি ভগ্নাংশ (E12f1-7)। E12f7 সজ্জিত যৌগ 2 (3.3 mg) এর HPLC পরিশোধন (হাইপারসিল গোল্ড, 25 শতাংশ aq. MeCN)। HPLC এর জন্য ব্যবহৃত সমস্ত দ্রাবক ছিল 0.05 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিড বাফার। HPLC এবং MPLC ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য সাধারণ প্রবাহের হার ছিল যথাক্রমে 3 এবং 40 মিলি/মিনিট।
3.4.চরিত্রায়ন
Cistansalside A (5): বাদামী নিরাকার পাউডার; [ |20 x33.7 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 332 (3.18); IR (পরিচ্ছন্ন) vmax 3359, 1748, 1705, 1602, 1516 cmx1; 1H-NMR (800 MHz) এবং 13C-NMR (200 MHz) ডেটা, সারণি 2 দেখুন; HRMS (ESI-TOF) m/z [M প্লাস Na] প্লাস 645.2146 (C30H38O14Na, 645.2154 এর জন্য ক্যালসিডি)।
Cistansalside B (6): বাদামী নিরাকার পাউডার; [ |20 x72.9 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 333 (3.32); IR (পরিচ্ছন্ন) vmax 3400, 1705, 1603, 1516 cmx1; 1H-NMR (500 MHz) এবং 13C-NMR (125 MHz) ডেটা, সারণি 2 দেখুন; HRMS (ESI-TOF) m/z [M প্লাস Na] প্লাস 579.2054 (C26H36O13Na, 579.2048 এর জন্য ক্যালসিডি)।
Cistansalside C (12): বাদামী নিরাকার পাউডার; [ |20 x61.6 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 337 (3.25); IR (পরিচ্ছন্ন) vmax 3359, 1704, 1602, 1508 cmx1; 1H-NMR (800 MHz) এবং 13C-NMR (200 MHz) ডেটা, সারণি 2 দেখুন; HRMS (ESI-TOF) m/z [M প্লাস Na] প্লাস 581.2213 (C26H38O13Na, 581.2205 এর জন্য ক্যালসিডি)।
Cistansalside D (17): বাদামী নিরাকার পাউডার; [ |20 x51.1 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 221 (3.53), 315 (3.52); IR (পরিচ্ছন্ন) vmax 3358, 1746, 1722, 1603, 1516, 1232, 1157, 1039 cmx1; 1H-NMR(400 MHz) এবং 13C-NMR (75 MHz) ডেটা, সারণি 2 দেখুন; HRMS (ESI-TOF) m/z [M plus Na] প্লাস 657.2147 (calcd. for C31H38O14Na, 657.2154)।
Cistansalside E (18): বাদামী নিরাকার পাউডার; [ |20 x59.2 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) Amax nm (log e) 336 (3.22); IR (পরিচ্ছন্ন) vmax 3370, 1741, 1712, 1602, 1231, 1157 cmx1; 1H-NMR (800 MHz) এবং 13C-NMR (200 MHz) ডেটা, সারণি 2 দেখুন; HRMS (ESI-TOF) m/z [M প্লাস Na] প্লাস 657.2166 (C31H38O14Na, 657.2154 এর জন্য ক্যালসিডি)
3.5.HPLC-QTOF-MS বিশ্লেষণ
ক্রোমাটোগ্রাফিক-মাস স্পেকট্রোমেট্রি বিশ্লেষণ একটি Agilent 1260 ইনফিনিটি সিরিজ এলসি সিস্টেমে (Agilent Technologies, Inc., USA) সম্পাদিত হয়েছিল। বিশ্লেষণাত্মক কলামটি ছিল একটি SFCpak Crest C18T-5 কলাম (id 15{{10}} : 4.6 mm, 5 um, Jasco, Japan)। মোবাইল ফেজটিতে MeCN (A) তে 0.1 শতাংশ (v/v) ফর্মিক অ্যাসিড এবং 0-35 মিনিট (23 শতাংশ A), 35-45 মিনিট (35-45 মিনিট) গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন ব্যবহার করে জল (B) রয়েছে 23–28 শতাংশ A), 45–75 মিনিট (28 শতাংশ A) এবং 75–80 মিনিট (90 শতাংশ A)। প্রবাহের হার 0.3 মিলি/মিনিট রাখা হয়েছিল। শোষণ 320 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল। ESI উত্সের শর্তগুলি নিম্নরূপ ছিল: শুকানোর গ্যাস (N2) প্রবাহের হার, 10 L/min; শুকানোর গ্যাস তাপমাত্রা, 350 ডিগ্রী; নেবুলাইজার, 30 psig; খাপ গ্যাস প্রবাহের হার, 12.0 L/min; খাপ গ্যাস তাপমাত্রা, 350 ডিগ্রী; কৈশিক, 4000 V; স্কিমার, 60 V; অক্টাপোল আরএফ, 750 ভি; ফ্র্যাগমেন্টর ভোল্টেজ, 180 V; ইতিবাচক মোড। সিস্টেমটি ম্যাশুন্টার ওয়ার্কস্টেশন সফ্টওয়্যারের অধীনে পরিচালিত হয়েছিল। ভর পরিসীমা m/z 50-1000 এ সেট করা হয়েছিল।
3.6.অ্যাসিড হাইড্রোলাইসিস
যৌগগুলিকে 1 N H2SO4 (100 uL) ব্যবহার করে 90 ডিগ্রীতে জল স্নানের সাথে 2 ঘন্টার জন্য উত্তপ্ত করা হয়েছিল, তারপরে স্যাচুরেটেড জলীয় Na2CO3 দ্রবণ দিয়ে নিরপেক্ষ করা হয়েছিল। দ্রবণগুলি N2 এর একটি স্রোতের নীচে শুকানোর পরে, পণ্য এবং মানক শর্করাগুলি (D-Glc, L-Glc, L-Rha) এল-সিস্টাইন মিথাইল এস্টার হাইড্রোক্লোরাইড (0.5 মিলিগ্রাম) ধারণকারী পাইরিডিনে (100 uL) দ্রবীভূত হয়েছিল। একটি L-rhamnose নমুনা পাইরিডিনে (100 uL) ডি-সিস্টাইন মিথাইল এস্টার হাইড্রোক্লোরাইড (0.5 মিলিগ্রাম) ধারণকারী দ্রবীভূত হয়েছিল। এর পরে, তারা 1 ঘন্টার জন্য 60 ডিগ্রিতে উত্তপ্ত হয়েছিল। সমাধানগুলিকে 1 uL (1.11 mg) o-tolylisothiocyanate দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, যা 1 ঘন্টার জন্য 60 ডিগ্রিতে আবার উত্তপ্ত করা হয়েছিল। প্রতিটি চূড়ান্ত মিশ্রণ সরাসরি বিশ্লেষণাত্মক RP-HPLC (Hypersil™ BDS C18 কলাম, 17 শতাংশ aq. MeCN, 0.8 mL/min, 40 মিনিট, 35 ডিগ্রি) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। 21.9 এবং 40.4 মিনিটে শীর্ষের টিআর যথাক্রমে ডি-গ্লুকোজ এবং এল-র্যামনোজের থিওকার্বামোয়েল থিয়াজোলিডিন ডেরিভেটিভের সাথে মিলে যায়।
3.7. সেল সংস্কৃতি
মুরিন ম্যাক্রোফেজ, RAW 264.7, কোরিয়ান রিসার্চ ইনস্টিটিউট অফ বায়োসায়েন্স অ্যান্ড বায়োটেকনোলজি (ডেজিয়ন, কোরিয়া) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং 10 শতাংশ ভ্রূণ বোভাইন সিরাম এবং 100 U/mL পেনিসিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন সালফেট ধারণকারী RPMI মাধ্যমে জন্মায়। 37 ডিগ্রীতে একটি আর্দ্রতাযুক্ত 5 শতাংশ CO2 বায়ুমণ্ডলে কোষগুলিকে ইনকিউবেট করা হয়েছিল।
3.8.মাদক ও রাসায়নিক
RPMI, পেনিসিলিন এবং স্ট্রেপ্টোমাইসিন হাইক্লোন (লোগান, ইউটি, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল। বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন এবং এলপিএস সিগমা (সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল।
3.9.কোন উৎপাদনের পরিমাপ
কালচার মিডিয়ামে নাইট্রাইটের ঘনত্ব গ্রিস প্রতিক্রিয়া অনুসারে NO উত্পাদনের সূচক হিসাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। কোষগুলিকে 2: 105 কোষ/কূপ 96-ওয়েল কালচার প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল। 18 ঘন্টার জন্য RAW 264.7 কোষের প্রাক-ইনকিউবেশনের পরে, কোষগুলিকে যৌগ (50 uM, 10 uM, 5 uM, বা 1 uM) দিয়ে প্রিট্রিট করা হয়েছিল এবং 24-এর জন্য LPS (500 ng/mL) দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল। জ. পরীক্ষা যৌগ DMSO মধ্যে দ্রবীভূত. কোষগুলিকে গাড়ি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে 0.05 শতাংশ DMSO দিয়েও চিকিত্সা করা হয়েছিল। RAW 264.7 কোষগুলি (2: 105 কোষ/ওয়েল) ফিনল লাল ছাড়া RPMI ব্যবহার করে 96-ওয়েল প্লেটে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং 0.5 ঘন্টার জন্য নমুনাগুলির সাথে প্রিট্রিট করা হয়েছিল৷ সেলুলার NO উত্পাদন 500 ng/mL চূড়ান্ত ঘনত্ব এলপিএস এবং 24 ঘন্টা ইনকিউবেশন যোগ করার দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল। ইনকিউবেশনের পরে, কন্ডিশন্ড মিডিয়ার 100 ইউএল একই ভলিউম গ্রিস রিএজেন্টের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 15 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। 540 এনএম এ মিশ্রণের শোষণ একটি ELISA মাইক্রোপ্লেট রিডার (বেঞ্চমার্ক, বায়ো-র্যাড ল্যাবরেটরিজ, রিচমন্ড, CA, USA) দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রাপ্ত মানগুলি RPMI তে দ্রবীভূত সোডিয়াম নাইট্রাইটের মানক ঘনত্বের সাথে তুলনা করা হয়েছিল এবং নমুনা-চিকিত্সা করা কোষগুলির শর্তযুক্ত মিডিয়াতে নাইট্রাইটের ঘনত্ব গণনা করা হয়েছিল।
৩.১০।
কোষগুলিকে 5: 104 কোষ/কূপের ঘনত্বে {{0}} ওয়েল প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং নমুনার উপস্থিতিতে সিরাম-মুক্ত মিডিয়া দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। পরীক্ষা যৌগ DMSO মধ্যে দ্রবীভূত. কোষগুলিকে গাড়ি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে 0.05 শতাংশ DMSO দিয়েও চিকিত্সা করা হয়েছিল। 24 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, 10 uL MTT (স্যালাইনে 5 mg/mL) যোগ করা হয়েছিল এবং আরও 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশন অব্যাহত রাখা হয়েছিল। জীবন্ত কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল সাকসিনেট ডিহাইড্রোজেনেজ এমটিটিকে ইনকিউবেশনের সময় দৃশ্যমান ফরমাজান স্ফটিকগুলিতে রূপান্তরিত করে। ফরমাজান স্ফটিকগুলি তখন ডাইমিথাইল সালফক্সাইডে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং একটি এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) মাইক্রোপ্লেট রিডার (বেঞ্চমার্ক, বায়ো-র্যাড ল্যাবরেটরিজ) ব্যবহার করে শোষণকে 540 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল। আপেক্ষিক কোষের কার্যকারিতা চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর শোষণের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। সব পরীক্ষায় তৃতীয়ক মধ্যে সঞ্চালিত হয়।
3.11.ইমিউনোব্লট বিশ্লেষণ
প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতি অনুযায়ী পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, RAW264.7 কোষগুলিকে 6{{20}} মিমি কালচার ডিশে (2: 106/mL), তারপরে 50 uM যৌগগুলির প্রিট্রিটমেন্ট করা হয়েছিল . বরফ-ঠান্ডা পিবিএস (পিএইচ 7.4) এ কোষগুলি দুবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল, 15 মিনিটের জন্য বরফের লাইসিস বাফারে কোষের ছত্রাকগুলি পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল এবং কোষের ধ্বংসাবশেষ সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা সরানো হয়েছিল। প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ণয় করা হয়েছিল বায়ো-র্যাড প্রোটিন অ্যাস রিএজেন্ট ব্যবহার করে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে। প্রোটিন (20-30 ug) 1:1 এর সাথে 2: নমুনা বাফার (20 শতাংশ গ্লিসারল, 4 শতাংশ SDS, 10 শতাংশ 2- মিশ্রিত হয়েছিল ME, 0.05 শতাংশ ব্রোমোফেনল ব্লু, এবং 1.25 M Tris [pH 6.8]), 8 বা 15 শতাংশ SDS-PAGE জেলে লোড করা হয় এবং 90 মিনিটের জন্য 150 V এ চলে। সেলুলার প্রোটিনগুলি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে বায়ো-র্যাড আধা-শুকনো স্থানান্তর ব্যবস্থা ব্যবহার করে ইমিউনোব্লট পলিভিনিলাইডেন ডিফ্লুরাইড মেমব্রেনে (বায়ো-র্যাড) স্থানান্তরিত হয়েছিল। তারপরে ঝিল্লিগুলি 5 শতাংশ স্কিমড মিল্ক এবং 0.1 শতাংশ টুইন ধারণকারী ট্রিস-বাফারযুক্ত স্যালাইনে সংশ্লিষ্ট p-NF-入B, NF-入B, pI入B এবং অ্যাক্টিন প্রাথমিক অ্যান্টিবডি (Abcam, Cambridge, UK) দিয়ে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়। 20. পরের দিন, ব্লটগুলি তিনবার ট্রিস-বাফারযুক্ত স্যালাইন (0.1 শতাংশ টুইন 20) দিয়ে ধুয়ে এবং 1 ঘন্টার জন্য একটি এইচআরপি-সংযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টি-আইজিজি অ্যান্টিবডি (পাতলা করা 1:2000–1) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। :20,000)। ট্রিস-বাফার স্যালাইন (0.1 শতাংশ টুইন 20) দিয়ে ব্লটগুলি আবার তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং কেমিলুমিনেসেন্ট সাবস্ট্রেট ইসিএল প্লাস (আমেরশাম বায়োসায়েন্সেস, পিসকাটাওয়ে, এনজে, ইউএসএ) ব্যবহার করে ইমিউনোরেক্টিভ ব্যান্ড তৈরি করা হয়েছিল।
3.12.পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ
পরীক্ষামূলক ডেটা SEM গড় হিসাবে উপস্থাপিত হয়। পরিসংখ্যানগত তাৎপর্যের স্তর নির্ধারণ করা হয়েছিল ভিন্নতা বিশ্লেষণের মাধ্যমে (ANOVA) তারপরে একাধিক তুলনার জন্য Dunnett-এর টি-পরীক্ষা।
Cistanche সালসা নির্যাস
4. উপসংহার
এই সমীক্ষায়, আমরা 13টি পরিচিত যৌগকে বিচ্ছিন্ন ও চিহ্নিত করার পাশাপাশি সিস্টানসালসাইড AE (5, 6, 12, 17, এবং 18) নামে পাঁচটি নতুন ফিনাইলপ্রোপ্যানয়েড-প্রতিস্থাপিত গ্লাইকোসাইডের গঠন বিচ্ছিন্ন এবং ব্যাখ্যা করেছি। পরিচিত যৌগগুলি লাইপেডোসাইড এআই (1) [21], 23-এসিটাইল্যাকটিওসাইড (2) [22], আইসোসিস্তানোসাইড সি (3) [15], ওসম্যানথুসাইড বি (4) [21], এপিমেরিডিনোসাইড এ ( 7) [15], cistanoside D (8) [23], salsaside B (9) [6], tubuloside E (10) [16], cistanoside M (11) [15], isomartynoside (13) [24], সালসাসাইড সি (14) [6], জিওনোসাইড সি (15) [25] এবং সালসাসাইড এফ (16) [6]। তাদের গঠনগুলি ব্যাপক বর্ণালীবীক্ষণিক তথ্য বিশ্লেষণের মাধ্যমে এবং সাহিত্যে রিপোর্ট করা ডেটার সাথে তুলনা করে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। এটি নিশ্চিত করা হয়েছিল যে ফিনাইলপ্রোপ্যানয়েড-প্রতিস্থাপিত গ্লাইকোসাইডগুলির অস্থায়ীভাবে ভবিষ্যদ্বাণী করা কাঠামোগুলি তাদের আসল কাঠামোর সাথে সঠিকভাবে মিলেছে।
Cistanche সালসা নির্যাস উপকারিতা
তথ্যসূত্র
1. শিমামুরা, এইচ.; মিয়াজাওয়া, এম.; এনোমোটো, কে.; নাকামুরা, S.-I.; কামেওকা, এইচ. সালমোনেলা টাইফিমুরিয়াম TA1535/pSK1002 উমু টেস্টে সিস্তানচে সালসা থেকে ফ্যাটি অ্যাসিড দ্বারা Trp-P-1-এর SOS-প্ররোচিত কার্যকলাপের দমন। নাট। পণ্য লেট. 1997, 10, 261-265। [ক্রসরেফ]
2. জিওন, ই.; চুং, কে.-এস.; An, H.-J. বেনাইন প্রোস্ট্যাটিক হাইপারপ্লাসিয়ার অগ্রগতির উপর সিস্তানচেস সালসার অ্যান্টি-প্রলিফারেশন প্রভাব। করতে পারা. জে. ফিজিওল। ফার্মাকোল। 2016, 94, 104-111। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
3.জু, সি.; জিয়া, এক্স।; জু, আর.; ওয়াং, ওয়াই.; Zhou, Q.; সান, এস. মাল্টি-স্টেপ ইনফ্রারেড ম্যাক্রো-ফিঙ্গারপ্রিন্টিং দ্বারা হার্বা সিস্টাঞ্চের দ্রুত বৈষম্য এবং ক্লাস সাদৃশ্যের সফট স্বাধীন মডেলিং (SIMCA)। স্পেকট্রোচিম। Acta Part A Mol. বায়োমল। SpectrosCistanche2013, 114, 421–431। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
4. জিয়াং, ওয়াই.; লি, এসপি; ওয়াং, YT; চেন, এক্সজে; টিউ, উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ডায়োড অ্যারে সনাক্তকরণ-ভর স্পেকট্রোমেট্রি সহ আঙুলের ছাপ দ্বারা হার্বা সিস্টাঞ্চের পিএফ পার্থক্য। জে. ক্রোমাটোগ্র 2009, 1216, 2156-2162। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
5. কোবায়াশি, এইচ.; কারাসাওয়া, এইচ.; মিয়াসে, টি.; ফুকুশিমা, এস. সিস্তানচিস হার্বা এর গঠন বিষয়ক অধ্যয়ন। V. দুটি নতুন ফিনাইলপ্রোপ্যানয়েড গ্লাইকোসাইড, সিস্টানোসাইডস ই এবং এফ কেম এর বিচ্ছিন্নতা এবং গঠন। ফার্ম। ষাঁড়. 1985, 33, 1452-1457। [ক্রসরেফ]
6. লেই, এল.; জিয়াং, ওয়াই.; লিউ, এক্স.-এম.; Tu, P.-F.; উ, এল.-জে.; চেন, এফ.-কে. Cistanche সালসা থেকে নতুন Glycosides. হেলভ চিম। অ্যাক্টা 2007, 90, 79-85। [ক্রসরেফ]
7. কার্টবায়েভা, ইবি; সাকিপোভা, জেডবি; ইব্রাগিমোভা, এলএন; কাপসাল্যামোভা, EN; Ternynko, II কাজাখস্তান প্রজাতন্ত্রে ক্রমবর্ধমান Cistanche সালসা (CA Mey) G. Beck এর ফেনোলিক যৌগগুলির রচনামূলক গবেষণা। জে কেম। ফার্ম। Res. 2015, 7, 120-122।
8. লিউ, জে.-ওয়াই.; গুও, জেড.-জি.; জেং, জেড.-এল। সিস্তানচে সালসার সাসপেনশন কালচারের পূর্বসূরি খাওয়ানোর মাধ্যমে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের উন্নত সঞ্চয়। বায়োকেম। ইঞ্জি. জে. 2007, 33, 88-93। [ক্রসরেফ]
9. মারুয়ামা, এস.; আকাসাকা, টি.; ইয়ামাদা, কে.; Tachibana, H. Cistanche সালসা নির্যাস প্রোটিন-বাউন্ড অনুরূপ কাজ করে
পলিস্যাকারাইড-কে (PSK) বিভিন্ন ধরণের সেল লাইনে। জে. ট্রেডিট। মেড. 2008, 25, 166-169।
10. তিয়ান, এক্স.-এফ.; পু, এক্স.-পি. সিস্টানচেস সালসা থেকে পাওয়া ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড নিউরনে 1-মিথাইল-4-ফেনাইলপাইরিডিনিয়াম আয়ন দ্বারা প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দেয়। J. Ethnopharmacol। 2005, 97, 59-63। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
11.মিচেল, টি.; হালাবালাকি, এম.; স্কল্টসুনিস, AL নতুন ধারণা, পরীক্ষামূলক পদ্ধতি এবং প্রাকৃতিক উত্স থেকে নভেল ফাইটোয়েস্ট্রোজেন আবিষ্কারের জন্য ডিরেপ্লিকেশন কৌশল। প্লান্টা মেড। 2013, 79, 514-532। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
12. ডি মেডিইরোস, এলএস; আব্রেউ, এলএম; নিলসেন, এ.; ইঙ্গমার, এইচ.; লারসেন, TO; নিলসেন, কেএফ; রড্রিগেস-ফিলহো, ই. এন্ডোফাইটিক ছত্রাক Setophoma sp থেকে depsides theaflavins ST এবং lecanora DF-এর dereplication-নির্দেশিত বিচ্ছিন্নতা। ফাইটোকেমিস্ট্রি 2015, 111, 154–162। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
13.রাকোটনড্রাইবে, এলএইচ; রাসোলোমম্পিয়ানিনা, আর.; পার্ক, H.-Y.; লি, জে.; স্লেবোডনিক, সি.; ব্রোডি, পিজে; ব্লাসিয়াক, এলসি; হিল, আর.; টেনডাইক, কে.; শেন, ওয়াই।; ইত্যাদি নির্বাচিত স্ট্রেপ্টোমাইসেস প্রজাতি থেকে অ্যান্টিপ্রোলিফারেটিভ এবং অ্যান্টিপ্লাজমোডিয়াল যৌগ। বায়োর্গ। মেড. কেম। লেট. 2015, 25, 5646–5649। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
14.জিয়াং, ওয়াই.; লিউ, এফ.-জে.; ওয়াং, Y.-M.; লি, এইচ.-জে। ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন ট্যান্ডেম কোয়াড্রপোল-টাইম-অফ-ফ্লাইট ভর স্পেকট্রোমেট্রির সাথে উচ্চ-কার্যক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা সেলোসিয়া বীর্য থেকে নভেল হেপাটোপ্রোটেকটিভ ট্রাইটারপেনয়েড স্যাপোনিনগুলির অনুকরণ-নির্দেশিত বিচ্ছিন্নতা। জে ফার্ম। বায়োমেড। পায়ুপথ। 2017, 132, 148-155। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
15.ঝাং, জে.; লি, সি.; চে, ওয়াই.; উ, জে.; ওয়াং, জেড.; Cai, W.; লি, ওয়াই.; মা, জেড.; Tu, P. LTQ-অরবিট্র্যাপ-ভিত্তিক কৌশল প্রথাগত চীনা ওষুধের লক্ষ্যবস্তু শ্রেণী আবিষ্কার, শনাক্তকরণ এবং তার ওমিক্স গবেষণা: হার্বা সিস্টাঞ্চের তিনটি ভিন্ন প্রজাতির ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের উপর একটি কেস স্টাডি। আরএসসি অ্যাড. 2015, 5, 80816–80828। [ক্রসরেফ]
16. ইয়োশিজাওয়া, এফ.; Deyama, T.; তাকিজাওয়া, এন.; উসমানগানি, কে.; আহমদ, এম. সিস্তানচে টিউবুলোসা (শ্রেঙ্ক) হুকের উপাদান। চ ২. একটি নতুন ফেনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড এবং একটি নতুন নিওলিগনান গ্লাইকোসাইডের বিচ্ছিন্নতা এবং কাঠামো। কেম। ফার্ম। ষাঁড়. 1990, 38, 1927-1930। [ক্রসরেফ]
17. তানাকা, টি.; নাকাশিমা, টি.; Ueda, T.; টমি, কে.; কুনো, আই. রিভার্সড-ফেজ HPLCistancheChem দ্বারা অ্যালডোজ এন্যান্টিওমারের বৈষম্য সহজ। ফার্ম। ষাঁড়. 2007, 55, 899-901। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
18. Wong, WS; গুও, ডি.; ওয়াং, এক্সএল; ইয়িন, জেডকিউ; জিয়া, বি.; Li, N. আরবিডোপসিস থালিয়ানায় cis-cinnamic অ্যাসিডের অধ্যয়ন। প্ল্যান্ট ফিজিওল। বায়োকেম। 2005, 43, 929-937। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
19.Kahnt, G. বিভিন্ন pH এ জলীয় দ্রবণের বিকিরণ চলাকালীন হাইড্রোক্সিসিনামিক অ্যাসিডের ট্রান্স-সিস-ইকুইলিব্রিয়াম। ফাইটোকেমিস্ট্রি 1967, 6, 755-758। [ক্রসরেফ]
