যোগাযোগ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

অনুগ্রহ করে পার্ট 2-এ এখানে ক্লিক করুন

Cistanche একটি খুব ভাল neuroprotective প্রভাব আছে

গ্যাব্রিয়েল গনজালেজ 1,2 , Jiˇrí Grz 1, Cosimo Walter D'Acunto 1, Petr Ka ˇnovsk2 এবং Miroslav Strnad1,2,*

1. গ্রোথ রেগুলেটরদের ল্যাবরেটরি, চেক একাডেমি অফ সায়েন্সেসের পরীক্ষামূলক উদ্ভিদবিদ্যা ইনস্টিটিউট,

এবং বিজ্ঞান অনুষদ, প্যালাকি বিশ্ববিদ্যালয়, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, Czech Republic;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (জেজি); waldacun@gmail.com (CWD)

2. নিউরোলজি বিভাগ, ইউনিভার্সিটি হাসপাতাল ওলোমোক এবং মেডিসিন ও ডেন্টিস্ট্রি অনুষদ,

প্যালাকি ইউনিভার্সিটি ওলোমাউক, সিজেড-775 20 ওলোমুক, চেক প্রজাতন্ত্র; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* চিঠিপত্র: miroslav.strnad@upol.cz; টেলিফোন: প্লাস 420-585-634-850

বিমূর্ত: সাইটোকিনিনসএডিনাইন-ভিত্তিক ফাইটোহরমোন যা উদ্ভিদের মূল প্রক্রিয়াগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে, যেমন কোষ বিভাজন এবং পার্থক্য, মূল এবং অঙ্কুর বৃদ্ধি, এপিকাল প্রাধান্য, শাখাপ্রশাখা এবং বীজ অঙ্কুরোদগম। প্রাথমিক গবেষণায়, তারা মানুষের নিউরোডিজেনারেটিভ রোগের বিরুদ্ধে প্রতিরক্ষামূলক কার্যক্রমও দেখিয়েছে। তাদের দেওয়া সুরক্ষা (প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ) সম্পর্কে জ্ঞান প্রসারিত করার জন্য, আমরা প্রাকৃতিক কার্যকলাপের তদন্ত করেছিসাইটোকিনিনসালসোলিনল (SAL)-প্ররোচিত বিষাক্ততার বিরুদ্ধে (aপারকিনসন রোগমডেল) এবং গ্লুটামেট (গ্লু)-জনিত মৃত্যুনিউরনডোপামিনার্জিক SH-SY5Y কোষের মতো। আমরা দেখেছি যে Kinetin-3-গ্লুকোসাইড, cis-zeatin রাইবোসাইড, এবং N6-আইসোপেন্টেনাইল অ্যাডেনোসিন SAL-প্ররোচিত PD মডেলে সক্রিয় ছিল। এছাড়াও, আয়রন চেলেটর ডিফেরক্সামিন (ডিএফও) এবং নেক্রোপ্টোসিস ইনহিবিটর নেক্রোস্ট্যাটিন 1 (এনইসি-1) সহ ট্রান্স-, সিস-জেটিন এবং কাইনেটিন গ্লু-প্ররোচিত মডেলে কোষের মৃত্যুর হার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। ল্যাকটেট ডিহাইড্রোজেনেস অ্যাসেস প্রকাশ করেছে যেসাইটোকিনিননিম্ন প্রদাননিউরোপ্রোটেক্টিভDFO এবং NEC-1 এর চেয়ে কার্যকলাপ। অধিকন্তু, তারা ডিএফও-এর তুলনায় কম জোরালোভাবে অ্যাপোপটোটিক ক্যাসপেস-3/7 কার্যকলাপ কমিয়েছে। তবেসাইটোকিনিনসুপারঅক্সাইড র‌্যাডিকেল উৎপাদনে DFO এবং NEC-1-এর খুব অনুরূপ প্রভাব ছিল। সামগ্রিকভাবে, তারা SAL-প্ররোচিত মডেলে প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ দেখিয়েছেপারকিনসোনিয়াননিউরোনালকোষের মৃত্যু এবং অক্সিডেটিভ ক্ষতির গ্লু-প্ররোচিত মডেল প্রধানত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হ্রাস করে।

কীওয়ার্ড: সাইটোকিনিন; ফাইটোহরমোন; neuroprotection; নিউরনের মতো SH-SY5Y কোষ; সাইটোটক্সিসিটি; সালসোলিনল; গ্লুটামেট; অক্সিডেটিভ স্ট্রেস; পারকিনসন রোগ

cistanche উদ্ভিদউপর প্রভাব উপরনিউরোপ্রোটেকশন

1। পরিচিতি

পারকিনসন রোগ(PD) হল দ্বিতীয় সবচেয়ে সাধারণ মোটর-সম্পর্কিত নিউরোডিজেনারেটিভ রোগ, এবং বিশ্বব্যাপী নির্ণয় করা মামলার সংখ্যা 2015 সালে 6 মিলিয়ন থেকে বেড়ে 2040 সালের মধ্যে 12 মিলিয়নের বেশি হবে বলে আশা করা হচ্ছে [1]। এটি নির্দিষ্ট অবক্ষয়ের সাথে যুক্ত মোটর লক্ষণ এবং ডোপামিনার্জিক (DA) এর প্রায় 30-70 শতাংশ ক্ষতি দ্বারা চিহ্নিত করা হয়।নিউরননিগ্রা পার্স কমপ্যাক্টা এবং স্ট্রিয়াটামের প্রতি তাদের অনুমান [2,3]। কিছু, অনেকের মধ্যে, PD-এর পরিচিত আণবিক বৈশিষ্ট্যগুলির মধ্যে রয়েছে উন্নত অক্সিডেটিভ এবং নাইট্রোসেটিভ স্ট্রেস, মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা [4-7], এক্সিটোটক্সিসিটি [8], ubiquitin/proteasomal সিস্টেমের কর্মহীনতা [9], এবং নিউরোইনফ্ল্যামেশন [10]। বর্তমান চিকিত্সার বিভিন্ন প্রতিকূল পার্শ্ব-প্রতিক্রিয়া রয়েছে এবং শুধুমাত্র লক্ষণীয় উপশম প্রদান করে [১১], তাই ডিজেনারেটিং ডিএ-তে কার্যকর নিরাময়মূলক প্রভাব সহ ওষুধ বিকাশের তীব্র প্রচেষ্টা রয়েছে।নিউরন. এই ধরনের প্রচেষ্টায় সাহায্য করতে পারে এমন সংস্থানগুলির মধ্যে প্রাকৃতিক যৌগগুলি রয়েছে যার কম পার্শ্বপ্রতিক্রিয়া রয়েছে। অন্যান্য বিষয়ের সাথে, জিঙ্কগো বিলোবা (জিঙ্কগেটিন, জিঙ্কগোলাইড, বিলোবালাইড), জিনসেং (জিনসেনোসাইডস), এবং ফ্ল্যাভোনয়েডস (বাইকেলিন, কেমফেরল, রুটিন এবং লুটেওলিন) থেকে প্রাপ্ত পদার্থগুলি ভিট্রো-ইনক হিউম্যান নেউরোব্লাস্ট লাইনের বিভিন্ন মডেলে বিস্তৃত প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে। -SY5Y) এবং 1,1'-ডাইমিথাইল-4,4'-বাইপিরিডিনিয়াম ডাইক্লোরাইড (প্যারাকোয়াট), 1-মিথাইল- 4-ফিনাইল-1 দ্বারা প্ররোচিত PD-এর ভিভো মডেলগুলিতে, 2,3,6-টেট্রাহাইড্রোপাইরিডিন (MPTP), 1-মিথাইল-4-ফেনাইলপাইরিডিনিয়াম (এমপিপি প্লাস), এবং 6-হাইড্রোক্সিডোপামিন (6-ওএইচডিএ) [12]।

এখানে উপস্থাপিত গবেষণাটি প্রাকৃতিক ফাইটোহরমোন নামক এক শ্রেণীর প্রভাবের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেসাইটোকিনিন(CKs), এবং তাদের বিপাক, যা উদ্ভিদের কোষ বিভাজন, বৃদ্ধি, পার্থক্য এবং পাতার সেন্সেন্সের সুপরিচিত নিয়ন্ত্রক [13]। কাঠামোগতভাবে, CKগুলি হল অ্যাডেনিন ডেরিভেটিভস যা N6- অবস্থানে একটি প্রিনাইল (আইসোপেন্টেনাইল) বা সুগন্ধযুক্ত সাইডচেইনের সাথে প্রতিস্থাপিত হয়। প্রাকৃতিক রূপের মধ্যে রয়েছে 6-(ই)-4-হাইড্রক্সি-3-মিথাইল কিন্তু-2-এনাইল্যামিনোপিউরিন (ট্রান্স-জেটিন, টিজেড), এর 6-(জেড)-আইসোমার ( cis-zeatin, cZ), N6-isopentenyl adenine (iP), 6-benzyl amino purine (BAP), 6-furfurylaminopurine (kinetin, K), এবং ortho-, meta-, এবং বিএপি-র প্যারা-হাইড্রোক্সিলেটেড বা মেথোক্সিলেটেড ডেরিভেটিভস, যাকে টপোলিন বলা হয় (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT)। বিভিন্ন 9-রাইবোসাইড, 9-নিউক্লিওটাইড, সেইসাথে এই ফর্মগুলির 7-, 9, এবং ও-গ্লুকোসাইডগুলিও সাধারণত দেখা যায়, যেমনটি সারণী 1 এ দেখানো হয়েছে। এতে তাদের স্থানীয় ভূমিকা ছাড়াও গাছপালা, CKগুলি প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির (ROS) প্রতি শক্তিশালী অ্যান্ট-অক্সিডেন্ট কার্যকলাপ দেখিয়েছে যা বার্ধক্যজনিত ব্যাধিগুলির বিভিন্ন ইন ভিট্রো স্ট্রেস মডেলগুলিতে সুরক্ষা প্রদান করে [14]।

সারণী 1. এর কাঠামোসাইটোকিনিনএবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এজেন্ট।

বিশেষ করে, CKs এর মডেলে সাইটোপ্রোটেকটিভ কার্যকলাপ রয়েছে যেমন H2O2- মানুষের ফাইব্রোব্লাস্টের কোষের মৃত্যু [15] এবং ইঁদুর অ্যাস্ট্রোসাইটগুলিতে ডি-গ্যালাকটোজ-প্ররোচিত গ্লাইকক্সিডেটিভ স্ট্রেস [16]। তার চেয়েও বড় কথা, এ প্রসঙ্গে তারা দেখিয়েছেননিউরোপ্রোটেক্টিভনিউরোডিজেনারেটিভ রোগের সাথে সম্পর্কিত মডেলগুলিতে প্রভাব যেমন ফ্যামিলিয়াল পিডি, প্রোটিসোম ইনহিবিটর MG 132-প্ররোচিত বা H2O2- SH-SY5Y কোষে প্ররোচিত বিষাক্ততা [17], HT22 মাউস হিপোক্যাম্পালের গ্লু-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ ক্ষতিনিউরোনালকোষ [18], এবং হান্টিংটন রোগের PC12 সেল মডেল [19]। অন্যান্য গবেষণা ইঙ্গিত করে যে CK-এর প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপগুলি সেলুলার রেডক্স সিস্টেমের প্রত্যক্ষ [20,21] এবং পরোক্ষ [15,16,22] মড্যুলেশন উভয়ই জড়িত। CK এর বৈশিষ্ট্যযুক্ত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্রিয়াকলাপ ছাড়াও, তাদের মাইটোকন্ড্রিয়াতে নিয়ন্ত্রক প্রভাব রয়েছে যা উন্নত করেনিউরোনালকার্যক্ষমতা [১৭]। তদুপরি, কে মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লির সম্ভাবনাকে স্থিতিশীল করতে পারে এবং এটিপি উত্পাদন বাড়াতে পারে, যার ফলে এইচটি 22 কোষের গ্লু-প্ররোচিত মৃত্যু হ্রাস করতে পারে [18]। যাইহোক, বেশ কয়েকটি মডেলে তাদের প্রভাব সম্পর্কিত তথ্য পাওয়া সত্ত্বেও, PD-এর সবচেয়ে সাধারণ (বিক্ষিপ্ত) আকারে CK-এর প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ সম্পর্কে সীমিত জ্ঞান রয়েছে।

উপরে বর্ণিত জ্ঞানের ব্যবধান মোকাবেলা করার জন্য, আমরা দুটি ইন ভিট্রো মডেলে প্রাকৃতিক CKs এবং তাদের বিপাকীয় প্রভাবগুলিকে পদ্ধতিগতভাবে মূল্যায়ন করেছি: PD-এর একটি সালসোলিনল (SAL)-প্রেরিত মডেল এবং গ্লুটামেট (Glu)-প্রেরিত অক্সিডেটিভ ক্ষতির মডেল।নিউরনSH-SY5Y কোষের মতো। এই লাইনটি এর ডোপামিনার্জিক ফেনোটাইপ, এসএএল-এর মতো ডোপামিনার্জিক টক্সিনের প্রতি সংবেদনশীলতা এবং তুলনামূলকভাবে স্থিতিশীল জনগোষ্ঠীর সুবিধাজনক গঠনের কারণে ব্যবহৃত হয়েছিল।নিউরোনাল10 uM অল-ট্রান্স রেটিনোইক অ্যাসিড (ATRA) [23-25] এর সাথে 48 ঘন্টা এক্সপোজারের পরে প্রসারণের হার হ্রাস সহ কোষগুলি।

নিউরন-সেলুলার রেডক্স সিস্টেমের কর্মহীনতার মাধ্যমে পিডি প্যাথলজি অনুকরণ করার জন্য এন্ডো/এক্সোটক্সিন এসএএল-এর মতো কোষগুলি উন্মুক্ত করা হয়েছিল: গ্লুটাথিয়ন (জিএসএইচ) হ্রাস করা এবং অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট এনজাইম (Cu/Zn সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ এবং ক্যাটালেস) কার্যকলাপ এবং মাইটোকন্ড্রি উভয়েরই বাধা। কমপ্লেক্স (I এবং II), যা অ্যাপোপটোসিস এবং নেক্রোসিসের দিকে পরিচালিত করে [26]। অন্য মডেলে, গ্লু রেডক্স সিস্টেমের বিঘ্ন ঘটিয়ে সম্ভাব্য প্রাণঘাতী অক্সিডেটিভ ক্ষতিকে প্ররোচিত করে। SH-SY5Y সেল লাইনের উভয় মডেলই পূর্বে নিউরোপ্রোটেকশন স্টাডিতে ব্যবহার করা হয়েছে [26,27]।

কে, আইপি, বিএপি, আইপিআর, টিজেডআর এর অবক্ষয়জনিত ব্যাধিগুলির সাথে সম্পর্কিত সাইটোপ্রোটেক্টিভ এবং/অথবা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্রিয়াকলাপ এবং তাদের বিনামূল্যের ঘাঁটিগুলি পরীক্ষা করা হয়েছে, এবং (উপরে বর্ণিত হিসাবে) কিছু সিকে-এর প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ পাওয়া গেছে।নিউরোনালকোষ যাইহোক, পূর্বে প্রকাশিত কোন গবেষণায় কাঠামোটি পরীক্ষা করা হয়নি-নিউরোপ্রোটেক্টিভপ্রাকৃতিক CK এর কার্যকলাপ সম্পর্ক (SAR) (সারণী 1)। অতএব, এই গবেষণাটি পরীক্ষা করার জন্য নেওয়া হয়েছিলনিউরোপ্রোটেক্টিভ(বিরোধীপারকিনসোনিয়ান) নির্বাচিত SAL- এবং Glu-প্ররোচিত মডেলের নিউরোডিজেনারেশনে প্রায় সমস্ত পরিচিত প্রাকৃতিকভাবে ঘটমান CK-এর কার্যকলাপ। প্রথমত, আমরা প্রতিটি সিকে-এর অক্সিজেন র‌্যাডিক্যাল শোষণ ক্ষমতা (ORAC) এবং (নিরাপত্তা পরীক্ষায়) সাইটোটক্সিসিটির প্রতি মূল্যায়ন করেছিনিউরনSH-SY5Y কোষের মতো। তারপর, আমরা সুপারঅক্সাইড (O2.) উত্পাদন (ডাইহাইড্রোইথিডিয়াম, ডিএইচই অ্যাস) এবং অ্যাপোপটোটিক ক্যাসপেস-3,7 কার্যকলাপ পরিমাপ করে যৌগগুলির নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস স্তরের উপর প্রভাব মূল্যায়ন করেছি। ফলাফলগুলি প্রাকৃতিক CK-এর কাঠামোর মধ্যে সম্পর্কের প্রথম রিপোর্ট করা পদ্ধতিগত ইঙ্গিত দেয় এবংনিউরোপ্রোটেক্টিভকার্যক্রম

Cistanche herbaএকটি খুব ভাল আছেনিউরোপ্রোটেক্টিভপ্রভাব

2. ফলাফল এবং আলোচনা

2.1। সাইটোকিনিনস অক্সিজেন র্যাডিকাল শোষণ ক্ষমতা (ORAC)

যেহেতু নিউরোডিজেনারেটিভ রোগগুলি উচ্চতর অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সাথে যুক্ত, তাই অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের প্রতিরক্ষায় একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করেনিউরোনালকোষ এই বিষয়ে CK এর জৈবিক সম্ভাবনার মূল্যায়ন করতে, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা ORAC দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল, যা সাধারণত পদার্থের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয় [২৮]। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা ট্রোলক্স সমতুল্য (টিই) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল, যা সমতুল্য ভিত্তিতে ট্রোলক্সের তুলনায় যৌগগুলির কার্যকারিতা (নিম্ন থেকে উচ্চতর) নির্ধারণ করে। সারণী 1-এ উপস্থাপিত ফলাফলগুলি দেখায় যে টপোলিন (oT, mT, এবং pT) এবং তাদের রাইবোসাইডগুলির (oTR, mTR, pTR) উচ্চ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ রয়েছে, যা সম্ভবত তাদের C{{ এর ইলেক্ট্রন-সমৃদ্ধ সিস্টেমের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। 3} হাইড্রক্সি বেনজিল অ্যামিনো বিকল্প। তাদের উচ্চ ORAC মান সত্ত্বেও, টপোলিনের উচ্চতা ছিল নানিউরোপ্রোটেক্টিভকার্যকলাপ যাইহোক, K (N6-furfurylaminopurine) এবং নন-অ্যারোমেটিক cis-zeatin-O-glucoside (cZOG) সহ বেশ কয়েকটি হেটেরোঅ্যারোমেটিক CK, যার একটি 4-হাইড্রক্সি-3-মিথাইলবাট{{7} আছে }en-1-yl)অ্যামিনো বিকল্প, এছাড়াও উচ্চ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা দেখায় (সারণী 2)। অন্যান্য CK মেটাবোলাইট—কাইনেটিন-3-গ্লুকোসাইড (K3G), কাইনেটিন রাইবোসাইড 5 সহ<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

cistanche স্টেম সুবিধাচালুঅ্যান্টি-আলঝাইমার রোগ

2.2। SH-SY5Y কোষের পার্থক্য

CKs' অধ্যয়ন করতেনিউরোপ্রোটেক্টিভপ্রভাব, SH-SY5Y নিউরোব্লাস্টোমা কোষগুলি (ইতিমধ্যে বর্ণিত কারণগুলির জন্য বেছে নেওয়া হয়েছে [২৩]) পূর্বে বর্ণিত [২৩,২৪] হিসাবে 48 ঘন্টার জন্য 10 uM ATRA এর এক্সপোজার দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল। তারপরে তারা একটি মেমব্রেন স্টেনিং কিট ব্যবহার করে দাগ দেওয়া হয়েছিল যাতে আলাদা আলাদা এবং ডিফারেনসিয়েটেড কোষের মধ্যে রূপগত পার্থক্য পরীক্ষা করা হয়। চিত্র 1A তে দেখানো হয়েছেনিউরন-যেমন ডিফারেন্সিয়েটেড সেলগুলি কম ঘনত্বে বৃদ্ধি পেয়েছিল, আরও দীর্ঘায়িত ছিল এবং অভেদহীন কোষগুলির তুলনায় বেশি নিউরাইট (চিত্রে হলুদ তীর দ্বারা নির্দেশিত) তৈরি করে। পার্থক্যের সাথে যুক্ত এই রূপগত পরিবর্তনগুলি পূর্বে দেখা গেছে, এমনকি ATRA [24,30] এর সংক্ষিপ্ত এক্সপোজার (24 h) পরেও। আরও গুরুত্বপূর্ণ, নিউরাইটের সংখ্যা নাটকীয়ভাবে একটি স্তরে বেড়ে যায় যখন তারা একটি নিউরাইট নেটওয়ার্ক তৈরি করতে পারে। এই কারণে, কোষের কার্যকারিতা পরিমাপ করা হয়েছিল অপরিবর্তিত এবং পার্থক্যহীন SH-SY5Y কোষগুলির বিস্তারের হারের তুলনা করার জন্য। অপরিবর্তিত SH-SY5Y এর কার্যকারিতা সর্বাধিক বিস্তারের হার হিসাবে নেওয়া হয়েছিল। ফলাফল উপস্থিত

চিত্র 1B দেখায় যে 48 ঘন্টা ATRA চিকিত্সার পরে SH-SY5Y এর বিস্তারের হার (ক্যালসিন এএম কার্যকারিতা অ্যাস দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছে) 23 শতাংশ হ্রাস পেয়েছে।

চিত্র 1. (A) একটি নিউরাইট আউটগ্রোথ কিট (ইনভিট্রোজেন™) ব্যবহার করে দাগযুক্ত ঝিল্লি সহ SH-SY5Y কোষগুলির ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোগ্রাফ: নিয়ন্ত্রণ, আলাদা কোষ (মক ট্রিটমেন্ট সমাধানের সংস্পর্শে আসে:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

সারণী 2. পরীক্ষিত অক্সিজেন র্যাডিকাল শোষণ ক্ষমতা (ORAC)সাইটোকিনিন(CKs) সমতুল্য ভিত্তিতে ট্রোলক্স সমতুল্য (TE) হিসাবে প্রকাশ করা হয়। CK-এর নাম, সংক্ষিপ্ত রূপ এবং গঠন চিত্র 1-এ উপস্থাপিত হয়েছে।

2.3। নিউরনের মতো SH-SY5Y কোষের দিকে সাইটোকিনিনের সাইটোটক্সিসিটি

ক্যালসিন এএম ভায়াবিলিটি অ্যাস [৩১] এর সাথে সিকে-এর সম্ভাব্য সাইটোটক্সিসিটির পরীক্ষায় বেশিরভাগ ক্ষেত্রেই কম বিষাক্ততা দেখা গেছে।নিউরনSH-SY5Y কোষের মতো। 90 শতাংশের নিচে কার্যকারিতা হ্রাসকে নিউরোটক্সিক প্রভাবের থ্রেশহোল্ড হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল। শুধুমাত্র দুটি ব্যতিক্রম ছিল কেআর (11.9 শতাংশ) এবং পিটিআর (10.5 শতাংশ), পূর্ববর্তী অনুসন্ধান অনুসারে যে কিছুসাইটোকিনিনবিপাক, বিশেষ করে রাইবোসাইডের সাইটোটক্সিক প্রভাব থাকতে পারে [৩২]। অন্যান্য রাইবোসাইড, যেমন সিজেডআর, আইপিআর, ওটিআর, এমটিআর, কোন আপাত হ্রাস ঘটায়নিউরনSH-SY5Y কোষের কার্যক্ষমতার মতো (সারণী 3)। ডিএফও [৩৩,৩৪] এবং এনইসি-1 [৩৫,৩৬] আমাদের ইন ভিট্রো মডেলে ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত SH-SY5Y কোষগুলিতে অ-বিষাক্ত বলে প্রমাণিত হয়েছে। উপসংহারে, প্রধানত ডেরিভেটিভস কেআর এবং পিটিআর 90 শতাংশের চেয়ে কম কার্যকারিতা দেখিয়েছিল এবং তাই নিউরোডিজেনারেশনের উভয় ইন ভিট্রো মডেলগুলিতে আরও মূল্যায়নের জন্য কম আকর্ষণীয় বলে বিবেচিত হয়েছিল।

সারণি 3. এর কোষের কার্যক্ষমতানিউরনএক্সপোজার পরে SH-SY5Y কোষের মতসাইটোকিনিন24 ঘন্টার জন্য কার্যক্ষমতা DMSO নিয়ন্ত্রণের শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়।

2.4। PD-এর SAL-প্ররোচিত মডেলে নিউরোপ্রোটেক্টিভ সাইটোকিনিনগুলির সনাক্তকরণ

এই পরীক্ষার জন্য,নিউরোনালSH-SY5Y কোষগুলি 48 ঘন্টার জন্য আলাদা করা হয়েছিল তারপর 500 uM SAL এবং প্রতিটি CK তিনটি ঘনত্বে (0.1, 1, 10 uM) সহ-চিকিত্সা করা হয়েছিল। চিত্র 2A-তে ডটেড লাইন দ্বারা দেখানো হয়েছে, 500 uM-এ নিউরোটক্সিন SAL-এর প্রয়োগ ক্যালসিন এএম অ্যাস অনুযায়ী, 30 শতাংশ দ্বারা বিভেদযুক্ত SH-SY5Y কোষগুলির কার্যকারিতা হ্রাস করেছে। N-acetylcysteine ​​(NAC) এই পরীক্ষাগুলিতে একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল কারণ এটির পূর্বে রিপোর্ট করা নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবের কারণে একই SH-SY5Y সেল-ভিত্তিক ভিট্রো মডেল [37]। 10, 100, এবং 1000 uM NAC এর ঘনত্ব SAL মডেলে আংশিক বা প্রায় সম্পূর্ণ পুনরুদ্ধার প্ররোচিত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। NAC যথাক্রমে 83.39 ± 1.74 শতাংশ এবং 89.21 ± 2.89 শতাংশের সাথে 100 uM এবং 1 মিমি ঘনত্বে কোষের কার্যক্ষমতা বৃদ্ধি করতে সক্ষম হয়েছিল। 100 uM-এ NAC-এর প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ (চিত্র 2A তে ড্যাশড লাইন দ্বারা নির্দেশিত) আরও পরীক্ষার জন্য CK নির্বাচন করার জন্য একটি শক্তির থ্রেশহোল্ড হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। এই সেটআপ অনুসারে, K3G এর সাথে 10 uM (81.84 ± 2.36 শতাংশ), cZR 0.1 uM (81.14 ± 2.30 শতাংশ) এবং 1 uM (81.53 ± 14 ± 12 শতাংশ) এ জৈবিকভাবে গুরুত্বপূর্ণ নিউরো-প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে। uM (82.43 ± 2.51 শতাংশ) সুতরাং, আইপিআর এবং সিজেডআর এনএসি থেকে কম মাইক্রো বা সাব-মাইক্রোমোলার ঘনত্বে কার্যকর নিউরোপ্রোটেক্ট্যান্ট ছিল। দ্যসাইটোকিনিনস্ক্রীনিং এও প্রকাশ করেছে যে অন্যান্য অনেক বিপাক SAL-এর সংস্পর্শে আসা ডিফারেন্টেড SH-SY5Y কোষগুলির কার্যক্ষমতা মাঝারিভাবে বাড়িয়ে তুলতে পারে। যাইহোক, কিছু পরীক্ষিত CKs (tZR, tZMP, mT, mTR, pT, এবং pTR সহ) খুব কম প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ফেলেছিল।

চিত্র 2. (A)নিউরোপ্রোটেক্টিভএর কার্যকলাপসাইটোকিনিনএবং PD-এর SAL-প্ররোচিত মডেলে N-acetylcysteine ​​(NAC) অননিউরনSH-SY5Y কোষের মতো। ড্যাশড লাইন NAC প্রভাব থ্রেশহোল্ড দেখায় যেখানেসাইটোকিনিনআরও পরীক্ষার জন্য নির্বাচিত হয়েছে; বিন্দুযুক্ত রেখাটি 500 uM SAL দিয়ে কোষের চিকিত্সা করার পরে ক্যালসিন এএম অ্যাসেতে জীবিত কোষের সংখ্যা গণনা করে; সুস্থ নিয়ন্ত্রণ কোষ (CTR, DMSO <0.1 শতাংশ)।="" অন্তত="" তিনটি="" পৃথক="" দিনে="" ট্রিপ্লিকেট।="" (বি)="" প্রোপিডিয়াম="" আয়োডাইড="" স্টেনিংয়ের="" পরে="" স্বাভাবিক="" sh-sy5y="" কোষের="" মৃত্যু।="" কমপক্ষে="" পাঁচটি="" স্বাধীন="" দিনের="" মধ্যে="" ট্রিপ্লিকেট।="" *="" p="" 500="" um="" sal="" সহ="" গাড়ির="" সাথে="" তুলনা="" করে,="" #="" p="" 500="" um="" sal="" ছাড়া="" গাড়ির="" সাথে="" তুলনা="">

নিশ্চিত করার জন্য, সবচেয়ে সক্রিয় প্রাকৃতিক CK-এর অ্যান্টি-পিডি কার্যকলাপ, সামগ্রিক কোষের মৃত্যুর হার প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI) স্টেনিং দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল, যা (কোষ বিপাক-ভিত্তিক কার্যকারিতা পরীক্ষার বিপরীতে) শুধুমাত্র প্রতিবন্ধী ঝিল্লি অখণ্ডতা, মৃত কোষগুলিকে লেবেল করে। , এবং ইতিমধ্যে মৃত কোষ [38]। শুধুমাত্র SAL এর সাথে চিকিত্সার পরে কোষের মৃত্যুর হারের ক্ষেত্রে ফলাফলগুলি স্বাভাবিক করা হয়েছিল (100 শতাংশ হিসাবে সেট করা হয়েছে)। চিত্র 2B-তে দেখানো হয়েছে, NAC পজিটিভ কন্ট্রোল পদার্থটি 100 এবং 1000 uM উভয় ক্ষেত্রেই কোষের মৃত্যুর হার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (যথাক্রমে 77.3 ± 2.21 শতাংশ এবং 77.5 ± 4.44 শতাংশ)। সামগ্রিকভাবে, এনএসি একটি প্রমাণিতনিউরোপ্রোটেক্টিভSH-SY5Y কোষের জন্য ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে (50–500 uM পরিসরে) অন্যান্য গবেষণায় রেকর্ড করা তুলনীয় কার্যকলাপের সাথে এজেন্ট [৩৭]। পিআই অ্যাসে আরও দেখিয়েছে যে CKs cZR, K3G, এবং iPR-এর প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ রয়েছে, বিশেষ করে cZR, যা 0.1 uM-এ কোষের মৃত্যুর হার 71.6 ± 5.08 শতাংশে হ্রাস করেছে। cZR-এর বিপরীতে, K3G-এর ডোজ-নির্ভর প্রভাবগুলি বিপরীত ছিল, সর্বাধিক ক্রিয়াকলাপ 10 uM (কোষের মৃত্যুর হার 75.0 ± 3.69 শতাংশে হ্রাস করে) এবং NPR-এর কার্যকলাপ 1 uM-এ শীর্ষে (হার হ্রাস করে 73.9 ± 4.99 শতাংশ)। একত্রে নেওয়া, চিত্র 2 এ দেখানো হিসাবে, CKs একটি তুলনামূলক প্রদান করেছেনিউরোপ্রোটেক্টিভকার্যকারিতা এবং সাইটোটক্সিসিটি অ্যাসেস উভয় অনুযায়ী 100 uM NAC-তে কার্যকলাপ। অধিকন্তু, সাব-মাইক্রোমোলার এবং মাইক্রোমোলার রেঞ্জে CK-এর কার্যকর ঘনত্ব যেমন cZR এবং iPR NAC-এর তুলনায় অনেক কম ছিল। PI এবং annexin V/PI এর সাথে ডবল স্টেনিং এর পরে প্রাপ্ত পূর্ববর্তী পর্যবেক্ষণগুলি ইঙ্গিত দেয় যে K অ্যাপোপটোসিস [৩৯] কমাতে পারে, এইভাবে আমরা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং ক্যাসপেস-3,7 অ্যাক্টিভেশনে CK এবং NAC-এর প্রভাবগুলিও তদন্ত করেছি (একটি ভাল- পরিচিত অ্যাপোপটোসিস মার্কার)।

2.5। সাইটোকিনিন এসএএল-প্ররোচিত সুপারঅক্সাইড র্যাডিকাল গঠন হ্রাস করে

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস (ওএস) হল বেশ কিছু নিউরোডিজেনারেটিভ রোগের একটি মূল প্যাথলজিকাল অবদানকারী, এবং উভয় SAL (এ> 100 uM) এবং টেট্রাহাইড্রোইসোকুইনোলাইনগুলি শক্তিশালী ওএস প্রবর্তক [26,40]। এইভাবে, আমরা নির্বাচিত CKs বা NAC সহ এবং ছাড়া SAL-এর উপস্থিতিতে সুপারঅক্সাইড (একটি ROS এবং গুরুত্বপূর্ণ OS চিহ্নিতকারী) গঠনও পরিমাপ করেছি। SAL এর ফলে SH-SY5Y কোষে পর্যাপ্ত OS ক্ষতি হয়েছে তা নিশ্চিত করার জন্য, কোষগুলি 24 ঘন্টার জন্য 500 uM SAL-এর সংস্পর্শে এসেছিল, যেমন পূর্ববর্তী কাজের [37] এবং উপরে উপস্থাপিত ফলাফল অনুসারে। সুপারঅক্সাইড র্যাডিকাল গঠন [41,42] সনাক্ত করতে কোষগুলিকে তখন ডাইহাইড্রোইথিডিয়াম (ডিএইচই) দ্বারা দাগ দেওয়া হয়েছিল। চিত্র 3A-তে দেখা যায়, DHE (যা সুপার অক্সাইডের সাথে প্রতিক্রিয়ার পরে লাল ফ্লুরোসেন্স সংকেত প্রদান করে) দিয়ে লেবেল করার পরে কোষগুলি দৃশ্যত পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। SAL নিয়ন্ত্রণের মাত্রা এবং NAC-চিকিত্সা কোষের তুলনায় DHE ফ্লুরোসেন্সে স্পষ্ট বৃদ্ধি ঘটায়। অধিকন্তু, তিনটি CKs (cZR, K3G, এবং iPR) এর DHE ফ্লুরোসেন্সে NAC (100 uM) এর অনুরূপ চাক্ষুষ প্রভাব ছিল। তদ্ব্যতীত, শুধুমাত্র SAL দ্বারা চিকিত্সা করা কোষগুলিতে শনাক্ত করা স্তরের ক্ষেত্রে স্পেকট্রোফটোমেট্রিক পরিমাণ নির্ধারণ (100 শতাংশ হিসাবে সেট করা হয়েছে), মাইক্রোস্কোপি পর্যবেক্ষণের সাথে সঙ্গতিপূর্ণ ছিল। চিত্র 3B-তে দেখানো হয়েছে, স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ কোষে (CTR) স্বাভাবিকীকৃত সুপারঅক্সাইডের মাত্রা ছিল 39 শতাংশের কম, এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ পদার্থ NAC 100 এবং 1000 uM-এ SAL-প্ররোচিত ROS উৎপাদনের মাঝারি থেকে সম্পূর্ণ হ্রাস প্রদান করেছে (76.3 থেকে ± 4.33 এবং 44.3 ± 5.12 শতাংশ), পরামর্শ দেয় যে গ্লুটাথিয়ন (GSH) হ্রাস মডেলটিতে একটি মূল ভূমিকা পালন করে [26]। মজার বিষয় হল, SAL OS-এর উচ্চতা সহ SH-SY5Y কোষের GSH সামগ্রীতে নাটকীয় হ্রাসকে প্ররোচিত করেছে, যা পূর্বে একটি গবেষণায় পর্যবেক্ষণ করা স্তরের অনুরূপ যা কোষের কার্যক্ষমতা, কোষের মৃত্যু, এবং গ্লুটাথিয়ন বিষয়বস্তুর উপর NAC-মধ্যস্থ প্রভাব রেকর্ড করেছে [43] . এখানে উপস্থাপিত ফলাফলগুলি দেখায় যে এনএসি সুপারঅক্সাইড র্যাডিকাল গঠনকে বেসাল স্তরে (অর্থাৎ, DMSO-চিকিত্সা নিয়ন্ত্রণের স্তরগুলিতে) হ্রাস করেছে। CK রাইবোসাইডগুলি K3G-এর সাথে সক্রিয় ঘনত্বে (0.1–1 uM) পরীক্ষা করা হয়েছিল, এবং উল্লেখযোগ্যভাবে কোষের সুপারঅক্সাইড র্যাডিকাল বিষয়বস্তুকে নিম্নলিখিত স্তরে হ্রাস করেছে (একা SAL দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলির সাথে সম্পর্কিত): cZR 80.34 ± 5.99 শতাংশ 0.1 uM-এ ; K3G 77.1 ± 4.89 শতাংশ 10 uM এ; iPR 79.2 ± 5.91 শতাংশ 1 uM এ, 100 uM NAC এর প্রভাবের সাথে তুলনীয়। সমষ্টিগতভাবে, অর্থোগোনাল প্রদর্শনগুলি দৃঢ়ভাবে নির্দেশ করে যে শক্তিশালী অ্যান্টি-ওএস কার্যকলাপ SAL-প্ররোচিত PD মডেলে NAC এবং CK-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলিতে মূল ভূমিকা পালন করে। ওএস অ্যামিলিওরেশন এবং নিউরোপ্রোটেকশনের মধ্যে একটি পারস্পরিক সম্পর্ক অন্যান্য লেখকদের দ্বারাও উল্লেখ করা হয়েছে [২৯], এবং বেশ কয়েকটি গবেষণায় দেখা গেছে যে কে এবং বিএপি Cu2 প্লাস আয়নগুলির সাথে কমপ্লেক্স গঠনের মাধ্যমে সরাসরি OS ক্রিয়াকলাপগুলিকে [৪৪] প্রশমিত করতে পারে, যার ফলে সুপারঅক্সাইড নিষ্ক্রিয় হয়। যেমন কার্যকলাপ [৪৫,৪৬]। যাইহোক, CK গুলিকে পরোক্ষ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট হিসাবেও বর্ণনা করা হয়েছে যা পারমাণবিক ফ্যাক্টর এরিথ্রয়েড 2- সম্পর্কিত ফ্যাক্টর 2 (NRF2) অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়া পথ (iPR) [22] বা গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস এবং SOD কার্যকলাপের আংশিক পুনরুদ্ধার ( ট) [16]। উপরন্তু, K আছেনিউরোপ্রোটেক্টিভSH-SY5Y কোষে H2O2 দ্বারা প্ররোচিত OS আঘাতের বিরুদ্ধে কার্যকলাপ [17]। সিকে-এর উভয় ধরনের রিপোর্ট করা অ্যান্টি-আরওএস কার্যকলাপ SAL-প্ররোচিত SH-SY5Y সেল পিডি মডেল [47-50]-এ সুপারঅক্সাইড র্যাডিকেল হ্রাসে cZR, K3G এবং iPR-এর প্রভাবগুলিকে সম্ভাব্যভাবে ব্যাখ্যা করতে পারে।

চিত্র 3. (A) মাইক্রোফটোগ্রাফগুলি SAL-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-হ্রাসকারী কার্যকলাপগুলি দেখায়সাইটোকিনিনমানুষের মধ্যে পার্থক্যনিউরনডাইহাইড্রোইথিডিয়াম (ডিএইচই) লেবেলিং অনুসরণ করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির মাধ্যমে SH-SY5Y কোষের মতো। বার=50 um. চিত্রগুলি DMSO দ্রবণ (নিয়ন্ত্রণ), 500 uM সালসোলিনল (SAL) একা, এবং 500 uM SAL এবং 1000 uM NAC ( প্লাস NAC), 0.1 uM cZR ( প্লাস cZR) এর সংমিশ্রণে কোষগুলিকে দেখায়৷ 10 uM K3G ( প্লাস K3G), 1uM iPR ( প্লাস iPR) 24 ঘন্টার জন্য DHE দিয়ে দাগ দেওয়ার আগে। (B) SAL-প্ররোচিত সুপারঅক্সাইড র্যাডিকাল গঠন এবংসাইটোকিনিনবা N-acetylcysteine ​​(NAC) প্রতিরক্ষামূলক কার্যকলাপ। গ্রাফটি ইনফিনাইট এম200 প্রো মাইক্রোপ্লেট রিডার (টেকান, অস্ট্রিয়া) ব্যবহার করে ডিএইচই দাগযুক্ত কোষের পরিমাণ দেখায়। কমপক্ষে পাঁচটি স্বাধীন দিনের মধ্যে ট্রিপ্লিকেট। * P 500 uM SAL সহ গাড়ির সাথে তুলনা করে, # P 500 uM SAL ছাড়া গাড়ির সাথে তুলনা করে।