পার্ট 1: অ্যাকটিওসাইড রিপ্রেসড মাইক্রোগ্লিয়া M1 পোলারাইজেশন থ্রু ইনহিবিটেড NF-κB সিগন্যালিং পাথওয়ে এবং AMPK-মধ্যস্থ মাইটোকন্ড্রিয়া ফাংশন রিকভারি

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

অনুগ্রহ করে পার্ট 2-এ এখানে ক্লিক করুন

বিমূর্ত:

পটভূমি:আল্জ্হেইমের রোগ (AD)ডিমেনশিয়া সবচেয়ে ঘন ঘন ধরনের. যখনcistanche ঔষধি থেকে acteoside(ACT), থেকে বিচ্ছিন্ন একটি যৌগ সিস্তানচেটিউবুলোসা, নিউরোপ্রোটেক্টিভ বৈশিষ্ট্য আছে. যাইহোক, মাইক্রোগ্লিয়া মেরুকরণ নিয়ন্ত্রনের অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি অসম্পূর্ণ রয়ে গেছে।পদ্ধতি:এখানে, ACT-এর থেরাপিউটিক অ্যাকসিসি উন্মোচনের জন্য জেব্রাশ লার্ভাতে AlCl3-প্রেরিত AD মডেল প্রয়োগ করা হয়েছিল। মাইক্রোগ্লিয়া মেরুকরণে ACT এর ভূমিকা প্রদর্শনের জন্য BV-2 কোষগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। আরএনএ- সিকোয়েন্স, এইচপিএলসি-কিউ-টোফ-এমএস, ওয়েস্টার্ন ব্লট এবং আণবিক ডকিং এর মেকানিজমকে নিশ্চিত করার জন্য একত্রিত করা হয়েছিল।ফলাফল:ACT লক্ষণীয়ভাবে জেব্রাতে পরীক্ষামূলক ডিস্কিনেসিয়া এবং স্নায়ুতন্ত্রের ব্যাধিগুলিকে উন্নত করেছে৷ পরবর্তীকালে, এটি M1 মেরুকরণকে দমন করে এবং LPS-প্ররোচিত BV-2 কোষে M2 ফেনোটাইপে উন্নীত হয়। আমরা প্রথম দেখালাম যে ACT গভীর ট্রান্সক্রিপ্টোমিক প্রভাব প্রয়োগ করেছে, যা মাইটোকন্ড্রিয়া ফাংশনের সাথে সম্পর্কযুক্ত প্যানটোথেনেট এবং CoA জৈব সংশ্লেষণের ইন§অ্যামেশন, আর্জিনাইন বায়োসিন্থেসিসের মূল সংকেত পথের নিয়ন্ত্রণ জড়িত। আইন(cistanche ঔষধি থেকে acteoside) চিকিত্সা NF-κB সিগন্যালিং পাথওয়েকে বাধা দিয়ে মাইক্রোগ্লিয়া M1 মেরুকরণ হ্রাস করেছে। এবং বিপাকীয় পথগুলি HPLC-Q-TOF-MS দ্বারা আরও সংশোধিত হয়েছিল। উপরন্তু, বিপাকীয় পরিবর্তনের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, AMPK-মধ্যস্থিত PGC-1 এবং UCP-2 আপগ্র্যুলেশনের মাধ্যমে মাইটোকন্ড্রিয়া ফাংশন পুনরুদ্ধার করতে ACT অতিরিক্ত ROS সংশোধন করেছে। আশ্চর্যজনকভাবে, ACT সরাসরি NF-κB এবং AMPK উভয়ের সাথে আবদ্ধ হতে পারে, যেমনটি আণবিক ডকিং দ্বারা প্রমাণিত।উপসংহার:গবেষণাটি ACT-এর একটি ইনফিউসিভ প্রক্রিয়া প্রদান করে এবং বিপাক এবং মাইক্রোগ্লিয়া মেরুকরণের মধ্যে সংযোগ প্রকাশ করতে মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতার উপর ভিত্তি করে একটি নতুন দৃষ্টিভঙ্গি চিত্রিত করে।

পটভূমি:

আলঝাইমারএর রোগ(AD) একটি সাধারণ নিউরোডিজেনারেটিভ রোগ যার সাথে জ্ঞানীয় দুর্বলতা এবং ডিস্কিনেসিয়া[1]। এটি গুরুতর নিউরোনাল ক্ষয়, বার্ধক্য ফলক এবং নিউরোঃব্রিলারি ট্যাঙ্গল দ্বারা চিহ্নিত করা হয়[2]। AD এর প্যাথোজেনেসিস বহুমাত্রিক এবং নিউরোইন-অ্যামেশনের সাথে যুক্ত। নিউরোইন-অ্যামমেশন গ্লিয়াল কোষের সক্রিয়করণ দ্বারা চালিত হয়, যা AD[3, 4] এর বিকাশের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। নিউরোইন-অ্যামেশনের অগ্রগতি এবং বৃদ্ধির সময়, মাইক্রোগ্লিয়াকে মূল কারণ হিসাবে বিবেচনা করা হয়। মাইক্রোগ্লিয়া হল কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের প্রাথমিক ইমিউন কোষ। এটি মস্তিষ্কের বিকাশ, নিরপেক্ষ পরিবেশ বজায় রাখার পাশাপাশি আঘাত এবং মেরামতের প্রতিক্রিয়া সহ প্রক্রিয়াগুলির একটি ক্যাসকেডের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত। অধিকন্তু, মাইক্রোগ্লিয়া একটি M1 ফেনোটাইপে উদ্দীপিত হতে পারে এবং যখন AD-এর মতো নিউরোইন-অ্যামেশন-সম্পর্কিত রোগ দেখা দেয় তখন প্রো-ইন-অ্যামেটরি সাইটোকাইনের প্রকাশ বৃদ্ধি পায়। অধ্যয়নগুলি আরও দেখায় যে M1 ফেনোটাইপের মেরুকরণ প্রায়শই বিপাকীয় ব্যাধি দ্বারা সংসর্গী হয়[6], যার ফলে শক্তি বিপাক ভারসাম্যহীনতা এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা[7] হয়। এই প্রতিকূল পরিবর্তনগুলি নিউরোডিজেনারেশন থেকে উদ্ভূত হয়, এমনকি AD।

cistanche ঔষধি থেকে acteoside(ACT), একটি phenylethanoid glycoside, প্রাথমিকভাবে থেকে উদ্ভূত হয় সিস্তানচেটিউবুলোসা. ক্রমবর্ধমান প্রমাণগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে ACT-এর অনেকগুলি ফার্মাকোলজিক্যাল ক্রিয়াকলাপ রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে নিউরোপ্রোটেক্টিভ[8], অ্যান্টি-ইন§অ্যামেটরি[9], এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট[10] প্রভাব। বিশেষত, ACT শেখার এবং স্মৃতিশক্তির দুর্বলতার পাশাপাশি স্ট্রেপ্টোজোটোসিন-প্ররোচিত ইঁদুরগুলিতে শক্তি বিপাককে উন্নীত করার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে[11]। এটি পরীক্ষামূলক অটোইমিউন এনসেফালোমাইলাইটিস ইঁদুরগুলিতে নিউরোনাল অ্যাপোপটোটিক কোষের মৃত্যু এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতিকে বাধা দেওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়েছে[12]। যাইহোক, মাইক্রোগ্লিয়া M1/M2 মেরুকরণে ACT এর প্রভাবের উপর কম গবেষণায় দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছে। বিশেষত, মাইটোকন্ড্রিয়া ফাংশন মেরামত এবং কোষ বিপাক নিয়ন্ত্রণের মতো বিভিন্ন প্রক্রিয়া সম্পাদিত হয়নি। উপরন্তু, মাইক্রোগ্লিয়া M1/M2 মেরুকরণে অবদানকারী ACT এর প্রক্রিয়াটি অনাবিষ্কৃত রয়ে গেছে।

বর্তমান প্রতিবেদনটির লক্ষ্য ছিল ACT-এর থেরাপিউটিক দক্ষতার পাশাপাশি AD-তে ACT-এর অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়া তদন্ত করা। এখানে, ACT AlCl3-প্ররোচিত AD zebra¦sh লার্ভাতে একটি উল্লেখযোগ্য নিউরোপ্রোটেকশন প্রভাব দেখিয়েছে। উপরন্তু, ACT কার্যকরভাবে M1 মেরুকরণকে বাধা দেয় এবং LPS-প্ররোচিত BV-2 কোষে M2 ফেনোটাইপকে উন্নীত করে। আরএনএ-সিকোয়েন্সিং (আরএনএ-সেক) মাইক্রোগ্লিয়া মেরুকরণ নিয়ন্ত্রণে ACT এর অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি আরও ভালভাবে বোঝার জন্য বিপাক পদ্ধতির সাথে একীভূত। মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশনের পরিপ্রেক্ষিতে বিপাক এবং মাইক্রোগ্লিয়া মেরুকরণের মধ্যে ক্রসস্টাল তদন্ত করা হয়েছিল। এই অধ্যয়নটি AD এর চিকিত্সার জন্য একটি সম্ভাব্য থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে ACT এর আরও তদন্তের জন্য নতুন সম্মান প্রদান করবে।

পদ্ধতি:

প্রাণী এবং মডেল গ্রুপিং:

এই গবেষণায় (Nanjing Qi Wu Biotechnology Co., Ltd.) ওয়াইল্ড-টাইপ জেব্রা (AB স্ট্রেন, 4 মাস বয়সী) বেছে নেওয়া হয়েছিল। এগুলিকে 14/10 ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্রের অধীনে 28 ডিগ্রিতে বজায় রাখা হয়েছিল, পূর্ববর্তী পদ্ধতি অনুসরণ করে[13]। প্রাকৃতিক সার এবং সাধারণত বিকশিত ভ্রূণগুলি একটি আলোক ইনকিউবেটরে 3 দিনের পোস্ট-ফার্টিলাইজেশন (ডিপিএফ) পর্যন্ত তৈরি এবং সংষ্কৃত করা হয়েছিল। চীন ফার্মাসিউটিক্যাল ইউনিভার্সিটির অ্যানিমেল এথিক্স কমিটির তত্ত্বাবধানে সমস্ত জেব্রাশ পরীক্ষা করা হয়েছিল।

জেব্রাশ লার্ভা ছয়টি গ্রুপে বিভক্ত এবং 3 dpf থেকে 7 dpf পর্যন্ত চিকিত্সা করা হয়েছিল: কন্ট্রোল গ্রুপ, মডেল গ্রুপ, মডেল প্লাস ডনপেজিল হাইড্রোক্লোরাইড (DPZ) গ্রুপ, মডেল প্লাস ACT গ্রুপ। কন্ট্রোল গ্রুপটি 0.2 শতাংশ DMSO সহ মাঝারি রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং মডেল গ্রুপটিকে 150 μM AlCl3 (pH 5.8) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। মডেল প্লাস ডিপিজেড গ্রুপটি AlCl3 এবং 8 μM DPZ এর সাথে সহ-চিকিত্সা করা হয়েছিল। মডেল প্লাস ACT গ্রুপগুলি AlCl3 এবং ACT এর বিভিন্ন ঘনত্ব (200, 100, 50 μM) এর সাথে সহ-চিকিত্সা করা হয়েছিল। আইন(সিস্টাঞ্চ ভেষজ থেকে অ্যাক্টোসাইড)(HPLC বিশুদ্ধতা 98 শতাংশের চেয়ে বেশি বা সমান) বাওজি হারবেস্ট বায়ো-টেক কোং লিমিটেড (বাওজি, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। AlCl3·6H2O এবং DPZ Shanghai Aladdin Bio-Chem Technology Co., LTD থেকে কেনা হয়েছে। (সাংহাই, চীন).

আচরণগত বিশ্লেষণ

28 ডিগ্রিতে একটি ভিউপয়েন্ট আচরণগত বিশ্লেষক (জেব্রাল্যাব 2018, ভিউপয়েন্ট লাইফ সায়েন্সেস কো. লিমিটেড) দিয়ে জেব্রালাশ লার্ভার গতিবিধি রেকর্ড করা হয়েছে। Brie§y, আচরণগত পরামিতি, এবং ফলাফল প্রক্রিয়াকরণ আমরা আগে যে পদ্ধতি প্রতিষ্ঠা করেছি তার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল[13]। এখানে, গড় গতি (AS), গতি পরিবর্তন (ΔS), dyskinesia রিকভারি রেট (DRR), এবং রেসপন্স e¨ciency (RE, শতাংশ ) zebra¦sh এ dyskinesia পুনরুদ্ধারের মূল্যায়ন করার জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল।

3 dpf থেকে 7 dpf পর্যন্ত চিকিত্সার পরে, ACHE এবং চ্যাট কার্যকলাপ পরিমাপের জন্য জেব্রাশ লার্ভা সংগ্রহ করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের প্রোটোকলের উপর ভিত্তি করে, কার্যকলাপটি এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) কিট (MLBIO বায়োটেকনোলজি কোং লিমিটেড, সাংহাই, চীন) দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। এবং বিভিন্ন নমুনার প্রোটিনের ঘনত্ব বিসিএ পদ্ধতি দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল।

BV-2 কোষ আলাদাভাবে একটি 6-ভাল থালায় (n=6/গ্রুপ) বীজ করা হয়েছিল। চিকিত্সার পরে, মাধ্যমটি সরানো হয়েছিল এবং কোষগুলি ঠান্ডা পিবিএস দিয়ে তিনবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। তারপর অবিলম্বে কোষ বিপাক দমন তরল নাইট্রোজেন উন্মুক্ত. কোষগুলি ঠান্ডা 80 শতাংশ মিথানল (1 মিলি/ওয়েল) দিয়ে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সাসপেনশনটি 2 এমএল এপেনডর্ফ টিউবে স্থানান্তরিত হয়েছিল। প্রোটিন বৃষ্টিপাতের সুবিধার্থে, 1 মিনিটের জন্য জোরালোভাবে ঘূর্ণন করা হয় এবং 13,000 rpm-এ 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়। সেল সাসপেনশন একটি নতুন 2 মিলি এপেনডর্ফ টিউবে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং নাইট্রোজেনের স্রোতের নীচে শুকানো হয়েছিল এবং বিশ্লেষণ না হওয়া পর্যন্ত -80 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। শুকনো অবশিষ্টাংশ 150 μL প্রি-কুলড 25 শতাংশ অ্যাসিটোনিট্রিলে পুনর্গঠন করা হয়েছিল। ক্রম বিশ্লেষণের স্থায়িত্ব এবং নির্ভুলতা নিশ্চিত করার জন্য, প্রতিটি কোষের নমুনার সমান ভলিউম (10 μL) মান নিয়ন্ত্রণ (QC) নমুনা হিসাবে মিলিত হয়েছিল। মেটাবোলাইট সনাক্তকরণের সময়, এই নমুনাগুলি তাদের স্থিতিশীলতা নিশ্চিত করতে প্রতি ছয়টি কোষের নমুনার পরে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। HPLC-Q-TOF-MS-এর জন্য একটি 1 μL অ্যালিকোট ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।

HPLC-Q-TOF-MS বিশ্লেষণ Agilent 1290 HPLC সিস্টেমে সম্পাদিত হয়েছিল যা Agilent 6530 Quadrupole Time-of-Flight (Q-TOF) ভর স্পেকট্রোমিটার (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) এর সাথে সংযুক্ত। পৃথকীকরণটি একটি ACQUITY UPLC BEH C18 কলামে (2.1×100 মিমি, 1.7 μm) করা হয়েছিল। মোবাইল ফেজটি 0.1 শতাংশ ফর্মিক অ্যাসিড-জল (v/v; A) এবং অ্যাসিটোনিট্রিল (B) দ্বারা গঠিত।

নিম্নোক্ত সর্বোত্তম গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন শর্তের সাথে §ow হার {{0}}.4 মিলি/মিনিট সেট করা হয়েছিল: 0 থেকে 2 মিনিট, 5 শতাংশ বি; 2 থেকে 20 মিনিট, 5 শতাংশ থেকে 95 শতাংশ বি (পজিটিভ আয়ন মোড); 0 থেকে 2 মিনিট, 5 শতাংশ বি; 2 থেকে 20 মিনিট, 5 শতাংশ থেকে 95 শতাংশ বি (নেতিবাচক আয়ন মোড)। ভর স্পেকট্রোমিটারের অপারেশন প্যারামিটারগুলি নিম্নরূপ সেট করা হয়েছিল: গ্যাসের তাপমাত্রা, 320 ডিগ্রি ; শুকানোর গ্যাস, 10 এল/মিনিট; নেবুলাইজার, 35 psi; VCap, 4000 V; খণ্ড, 120 V।

কাঁচা ডেটা ম্যাসহান্টার ওয়ার্কস্টেশন সফ্টওয়্যার সংস্করণ B.07 এর অধীনে পরিচালিত হয়েছিল৷{1}} (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)৷ কাঁচা ডেটা XCMS প্ল্যাটফর্ম দ্বারা পূর্ব-প্রসেস করা হয়েছিল। প্রিন্সিপাল কম্পোনেন্টস অ্যানালাইসিস (PCA) এবং আংশিক ন্যূনতম-বর্গীয় বৈষম্যমূলক বিশ্লেষণ (PLS-DA) সাধারণীকৃত ডেটার মেটাবোঅ্যানালিস্ট (https://www.metaboanalyst.ca) দিয়ে পরিচালিত হয়েছিল। সাহিত্যের সাথে মিলিত, ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইট (ভিআইপি > 1, টি-টেস্ট পি< 0.05)="" were="" identi¦ed="" on="" hmdb="" (https://hmdb.ca).="" finally,="" pathway="" analysis="" was="" conducted="" with="">