বিমূর্ত

Cistanche tubulosaঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধে ব্যাপকভাবে প্রয়োগ করা একটি মূল্যবান টনিক ভেষজ। ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড দ্বারা উপস্থাপিত ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড হল এর মূল জৈব সক্রিয় পদার্থ। এই গবেষণার লক্ষ্য হল আধুনিক প্রক্রিয়াকরণ পরামিতি অপ্টিমাইজ করাCistanche tubulosaইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইডের ফলন উন্নত করতে ক্বাথের টুকরো, এবং কোষীয় স্তরে এর অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি মেকানিজম আরও অন্বেষণ করুন।

একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষাগুলি পরিচালিত হয়েছিল, তারপরে বক্স-বেহেনকেন প্রতিক্রিয়া-সারফেস অপ্টিমাইজেশান দ্বারা স্লাইস পুরুত্ব, স্টিমিং টাইম এবং শুষ্ক তাপমাত্রাকে প্রভাবিত করার কারণ হিসাবে। দুটি মার্কার যৌগের বিষয়বস্তু সনাক্ত করতে উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) গৃহীত হয়েছিল। এলপিএস-প্ররোচিত RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ ইনজুরি মডেলটি ফার্মাকোলজিকাল ক্রিয়াকলাপগুলি মূল্যায়ন করার জন্য তৈরি করা হয়েছিল। প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS), নাইট্রিক অক্সাইড (NO), ম্যালন্ডিয়ালডিহাইড (MDA), SOD, CAT, LDH এবং glutathione (GSH) বিষয়বস্তু সহ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমগুলির ক্রিয়াকলাপ নির্ধারণ করা হয়েছিল। ELISA প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন TNF-, IL-1 এবং IL-6-এর নিঃসরণ স্তর পরীক্ষা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। p38/AKT/JNK/NF‑κB সিগন্যালিং পাথওয়েতে মূল প্রোটিনের ফসফোরিলেশন স্থিতি বিশ্লেষণ করতে ওয়েস্টার্ন ব্লট অ্যাস করা হয়েছিল।

সর্বোত্তম প্রক্রিয়াকরণের শর্তগুলি ছিল 0.6 সেন্টিমিটারের স্লাইস পুরুত্ব, 6 মিনিটের স্টিমিং সময় এবং 57 ডিগ্রি শুকানোর তাপমাত্রা। এই অবস্থার অধীনে, অ্যাকটিওসাইডের বিষয়বস্তু 7.25% এবং ইচিনাকোসাইড 31.62% এ পৌঁছেছে। অপ্টিমাইজ করা ক্বাথ টুকরা থেকে নির্যাস উল্লেখযোগ্যভাবে LPS-উদ্দীপিত RAW264.7 কোষে অন্তঃকোষীয় ROS, NO এবং MDA-এর অতিরিক্ত উত্পাদন হ্রাস করতে পারে। এটি SOD, CAT, LDH-এর কার্যকলাপকে উন্নত করেছে এবং আন্তঃকোষীয় GSH স্তর বৃদ্ধি করেছে, এদিকে TNF-, IL-1 এবং IL-6-এর প্রকাশকে উল্লেখযোগ্যভাবে বাধা দিয়েছে। ওয়েস্টার্ন-ব্লট ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK এবং p-NF-κB/NF-κB-এর নিষ্কাশন ডাউন-নিয়ন্ত্রিত ফসফোরিলেশন অনুপাত।

অপ্টিমাইজড স্টিমিং-ড্রাইং প্রসেসিং প্রযুক্তি কার্যকরভাবে প্রধান ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের পুনরুদ্ধারের হার বাড়াতে পারে।Cistanche tubulosa. ক্বাথের টুকরাগুলি p38/AKT/JNK/NF‑κB সংকেত পথকে বাধা দেওয়ার মাধ্যমে LPS-ট্রিগার করা কোষের ক্ষতির বিরুদ্ধে অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব প্রয়োগ করে। এই অধ্যয়ন প্রমিত শিল্প প্রক্রিয়াকরণের জন্য ব্যবহারিক প্রযুক্তিগত পরামিতি প্রদান করেCistanche tubulosa, এবং এই ভেষজ সম্পদ থেকে প্রাপ্ত কার্যকরী খাদ্য এবং নিউট্রাসিউটিক্যাল পণ্যগুলির বিকাশের জন্য পরীক্ষামূলক প্রমাণ সরবরাহ করে।

কীওয়ার্ড: Cistanche tubulosa; ক্বাথ-পিস প্রক্রিয়াকরণ প্রযুক্তি; অ্যাক্টিওসাইড; echinacoside; অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ স্ট্রেস; RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ; p38/AKT/JNK/NF‑κB পথ

1. ভূমিকা

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight Orobanchaceae পরিবারের অন্তর্গত, এবং এর ঔষধি অংশ হল স্কেল পাতা সহ শুকনো মাংসল কান্ড। চীনে, এই উদ্ভিদটি প্রধানত উত্তর-পশ্চিমের শুষ্ক অঞ্চলে রোপণ করা হয়, যেখানে দক্ষিণ জিনজিয়াংয়ের বৃহত্তম রোপণ এলাকা রয়েছে। একটি সুপরিচিত টনিক ভেষজ ওষুধ হিসাবে, এটি কিডনি-ইয়াংকে টোনিফাই করতে, সারাংশ এবং রক্তকে পুনরায় পূরণ করতে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করতে অন্ত্রকে আর্দ্র করতে কাজ করে। চিকিৎসাগতভাবে, এটি কিডনি-ইয়াং-এর ঘাটতি, সার-রক্তের অপ্রতুলতা, বন্ধ্যাত্ব, কোমর এবং হাঁটুর দুর্বলতা এবং সেইসাথে অন্ত্রের শুষ্কতা কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিত্সার জন্য ব্যবহৃত হয়।

ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড, প্রধানত ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড হল প্রাথমিক সক্রিয় উপাদানCistanche tubulosa. চাইনিজ ফার্মাকোপিয়া প্রয়োজনীয়তা অনুসারে, যোগ্যতাসম্পন্ন কাঁচা ওষুধে ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইডের মোট বিষয়বস্তু 1.50% এর কম হবে না, যা গুরুত্বপূর্ণ গুণমান মূল্যায়ন সূচক হিসাবে কাজ করে। জন্য ঐতিহ্যগত প্রক্রিয়াকরণ পন্থাCistanche tubulosaবেশিরভাগই ভেজানো-আদ্র করা, টুকরা-শুকানো বা ওয়াইন-স্টীমিং পদ্ধতি গ্রহণ করে। প্রচুর অধ্যয়ন সক্রিয়-কম্পোনেন্ট ফলন উন্নত করার উপর ফোকাস করে, যখন জৈবিক-অ্যাক্টিভিটি যাচাইকরণের সাথে প্রক্রিয়াকরণ-প্রযুক্তি অপ্টিমাইজেশানের সমন্বয়ে গবেষণাগুলি অপর্যাপ্ত থাকে।

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস একাধিক বিপাকীয় এবং প্রদাহজনিত রোগের সাধারণ রোগগত ভিত্তি হিসাবে কাজ করে। বিদ্যমান গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে মোট গ্লাইকোসাইড থেকে নিষ্কাশিত হয়Cistanche tubulosaপ্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া দমন করতে পারে এবং সেপসিস প্রাণীদের লিভারের আঘাত কমানোর জন্য Nrf2/HO-1 পথ সক্রিয় করতে পারে। এই ভেষজ থেকে লিগনান গ্লাইকোসাইড ভগ্নাংশ PI3K/AKT সংকেত নিয়ন্ত্রণ করে ম্যাক্রোফেজ প্রদাহ প্রশমিত করতে পারে। তা সত্ত্বেও, আধুনিক প্রক্রিয়াকৃত ক্বাথ টুকরাগুলির ফার্মাকোলজিকাল সম্পত্তি এবং এর অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়া এখনও আরও অন্বেষণের প্রয়োজন।

এই সমীক্ষায়, বক্স-বেহেনকেন রেসপন্স-সারফেস ডিজাইন একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষার উপর ভিত্তি করে প্রয়োগ করা হয়েছিল, স্লাইস বেধ, স্টিমিং টাইম এবং শুকানোর তাপমাত্রা প্রসেসিং ওয়ার্কফ্লো অপ্টিমাইজ করার জন্য ভেরিয়েবল হিসাবে। সর্বোত্তম প্রযুক্তিগত পরামিতি প্রাপ্ত করার পরে, এলপিএস-প্ররোচিত RAW264.7 অক্সিডেটিভ-ক্ষতি কোষের মডেলটি অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং প্রদাহ-বিরোধী ক্ষমতা মূল্যায়ন করতে এবং প্রাসঙ্গিক সংকেত প্রক্রিয়া ছিন্ন করার জন্য প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। এই কাজটি পাইলট-স্কেল উত্পাদনের জন্য স্থিতিশীল এবং কার্যকরী প্রক্রিয়াকরণ পরামিতি প্রদান করতে চায় এবং এর ব্যাপক ব্যবহারের জন্য পরীক্ষামূলক ভিত্তি স্থাপন করতে চায়Cistanche tubulosaসম্পদ

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1 উদ্ভিদ উপাদান, বিকারক এবং যন্ত্র

এর তাজা মাংসল ডালপালাCistanche tubulosaহোতান, জিনজিয়াং থেকে শরত্কালে ফসল তোলা হয়েছিল। RAW264.7 মাউস মনোসাইট-ম্যাক্রোফেজ লিউকেমিয়া কোষগুলি Procell Life Science & Technology Co., Ltd (উহান, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল।

এইচপিএলসি-গ্রেড অ্যাসিটোনিট্রিল এবং মিথানল মার্ক কোম্পানি থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ইচিনাকোসাইড (98% এর চেয়ে বেশি বা সমান) এবং অ্যাক্টিওসাইড (98% এর চেয়ে বেশি বা সমান) রেফারেন্স মান বেইজিং উত্তর ওয়েই মেট্রোলজি ইনস্টিটিউট সরবরাহ করেছিল। ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO) সিগমা-অলড্রিচ থেকে কেনা হয়েছিল। ডিএমইএম উচ্চ-গ্লুকোজ মিডিয়াম, ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (এফবিএস), পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন ডাবল-অ্যান্টিবডি সলিউশন, বিসিএ প্রোটিন কোয়ান্টিফিকেশন কিট, NO এর জন্য অ্যাস কিট, MDA, SOD, CAT, GSH এবং LDH, lipopolysaccharide (LPS), MTTSAreas-এর জন্য বাণিজ্যিক এবং ETTLIMMES-এর জন্য সমস্ত কিছু ছিল। পণ্য

পরীক্ষামূলক যন্ত্রগুলির মধ্যে রয়েছে শিমাদজু উচ্চ-কার্যক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফ, রোটারি ইভাপোরেটর, চাইনিজ-হার্ব পালভারাইজার, থার্মোস্ট্যাটিক ব্লাস্ট ড্রাইং ওভেন, স্টিম কুকার, পূর্ণ-তরঙ্গদৈর্ঘ্য মাইক্রোপ্লেট রিডার, ইলেকট্রনিক বিশ্লেষণাত্মক ভারসাম্য, রেফ্রিজারেটেড সেন্ট্রিফিউজেট এবং মাইক্রোফের্টিবিনেট বায়োফিউজেট।

2.2 একক-ফ্যাক্টর প্রক্রিয়াকরণ পরীক্ষা

তাজাCistanche tubulosaমাংসল ডালপালা 0.2 সেমি, 0.4 সেমি, 0.6 সেমি, 0.8 সেমি, 1.0 সেমি এবং 1.2 সেমি পুরুত্বের সাথে টুকরো টুকরো করা হয়েছিল। স্লাইসগুলিকে যথাক্রমে 3 মিনিট, 6 মিনিট, 9 মিনিট, 12 মিনিট, 15 মিনিট, 18 মিনিট এবং 21 মিনিটের জন্য বাষ্প করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রা (25 ডিগ্রি), 40 ডিগ্রি, 50 ডিগ্রি, 60 ডিগ্রি, 70 ডিগ্রি এবং 80 ডিগ্রি সহ বিভিন্ন তাপমাত্রার গ্রেডিয়েন্টের অধীনে শুকানো হয়েছিল। শুকনো ক্বাথ-পিস নমুনাগুলি পরবর্তী সনাক্তকরণের জন্য 40-জাল চালনী দিয়ে চূর্ণ করা হয়েছিল এবং চালিত করা হয়েছিল। কম্পোজিট স্কোরিং সূত্রটি ব্যাপক মূল্যায়নের জন্য গৃহীত হয়েছিল: যৌগিক স্কোর=ইচিনাকোসাইড সামগ্রী × 50 % + অ্যাক্টিওসাইড সামগ্রী × 50 %৷

2.3 অ্যাকটিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইডের এইচপিএলসি নির্ধারণ

নমুনা সমাধান প্রস্তুতি: সঠিকভাবে 1.0 গ্রাম পাউডার নমুনার ওজন করুন, 100 মিলি 50% মিথানল দ্রবণ যোগ করুন। 30-মিনিট ভিজানোর পরে, 40 মিনিটের জন্য অতিস্বনক নিষ্কাশন করা হয়েছিল। শীতল হওয়ার পরে ওজন হ্রাস 50% মিথেনলের সাথে সম্পূরক হয়েছিল। এইচপিএলসি ইনজেকশনের আগে সুপারনাট্যান্টকে 0.22 μm মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন দ্বারা ফিল্টার করা হয়েছিল।

অ্যাকটিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইডের মিশ্র রেফারেন্স-স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ 50% মিথানল দিয়ে প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং স্ট্যান্ডার্ড-বক্ররেখা প্লটিংয়ের জন্য সিরিয়াল ঘনত্বে মিশ্রিত করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা: COSMOSIL C₁₈ ক্রোমাটোগ্রাফিক কলাম; মোবাইল-ফেজ সিস্টেমে 0.1% ফসফরিক অ্যাসিড জলীয় দ্রবণ (A) এবং অ্যাসিটোনিট্রিল (B); সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য 330 এনএম হিসাবে সেট করা হয়েছিল; কলাম তাপমাত্রা 35 ডিগ্রী; প্রবাহের হার 1 মিলি/মিনিট। লক্ষ্য যৌগগুলির পরিমাণগত গণনার জন্য বাহ্যিক-মান পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল।

2.4 বক্স-বেহেনকেন রেসপন্স-সারফেস এক্সপেরিমেন্টাল ডিজাইন

একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষামূলক ফলাফল অনুসারে, স্লাইস বেধ (X₁), স্টিমিং টাইম (X₂) এবং শুকানোর তাপমাত্রা (X₃) স্বাধীন ভেরিয়েবল হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল। অ্যাকটিওসাইড সামগ্রী (Y₁, %) এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রী (Y₂, %) প্রতিক্রিয়া মান হিসাবে পরিবেশন করা হয়েছে৷ ডিজাইন-এক্সপার্ট 13.0 সফ্টওয়্যারটি মোট 17 টি গোষ্ঠীর পরীক্ষার সাথে থ্রি-ফ্যাক্টর থ্রি-লেভেল বক্স-বেনকেন পরীক্ষামূলক স্কিম স্থাপন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। মডেল ফিটিং, প্রকরণ বিশ্লেষণ এবং পরামিতি পূর্বাভাস সফ্টওয়্যার দ্বারা সম্পন্ন করা হয়েছিল। বাস্তব উত্পাদন অপারেশন মাপসই তাত্ত্বিক সর্বোত্তম পরামিতি সামঞ্জস্য করার পরে ব্যবহারিক যাচাই পরীক্ষা ত্রিপিকে বাহিত হয়েছিল।

2.5 কোষ সংস্কৃতি এবং নমুনা প্রস্তুতি

অপ্টিমাইজড প্রসেসিং অবস্থার অধীনে প্রাপ্ত ডিকোশন-টুকরো নমুনা নির্যাস পাউডারে প্রস্তুত করা হয়েছিল। পাউডারটি DMSO-তে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং কোষ পরীক্ষার জন্য 10% FBS এবং 1% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন সম্বলিত সম্পূর্ণ DMEM মাধ্যম দিয়ে আরও মিশ্রিত করা হয়েছিল। RAW264.7 কোষগুলি 5% CO₂ সহ 37 ডিগ্রিতে আর্দ্র ইনকিউবেটরে সংষ্কৃত করা হয়েছিল।

কোষের কার্যক্ষমতার জন্য 2.6 MTT অ্যাস

8 × 10⁴ কোষ/mL এর কোষ ঘনত্বে 96‑ওয়েল প্লেটে সেল সাসপেনশন টিকা দেওয়া হয়েছিল। গ্রুপগুলি দ্রাবক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ (0.1% DMSO), LPS মডেল গ্রুপ (1 ug/mL LPS), এবং একাধিক ঘনত্ব গ্রুপ হিসাবে সেট করা হয়েছিলCistanche tubulosaনির্যাস (3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ug/mL)। নমুনাগুলির 2-ঘন্টা প্রাক-ইনকিউবেশনের পরে, দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ কূপ ব্যতীত 1 ug/mL চূড়ান্ত ঘনত্ব সহ LPS যোগ করা হয়েছিল এবং আরও 24 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। MTT সমাধান (5 mg/mL) 4-ঘন্টা প্রতিক্রিয়ার জন্য যোগ করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্ট অপসারণের পরে, ফরমাজান ক্রিস্টাল দ্রবীভূত করতে DMSO যুক্ত করা হয়েছিল। কোষের কার্যক্ষমতা গণনা করতে মাইক্রোপ্লেট রিডার দ্বারা 490 এনএম-এ শোষণের মান সনাক্ত করা হয়েছিল। ফলো-আপ কার্যকরী পরীক্ষার জন্য নিরাপদ ঘনত্ব পরিসীমা নির্বাচন করা হয়েছিল।

2.7 অন্তঃকোষীয় ROS পরিমাপ

RAW264.7 কোষগুলি প্রতি কূপে 4 × 10⁵ কোষের ঘনত্বে 6-ওয়েল প্লেটে বীজ করা হয়েছিল। প্রাচীরের সাথে লেগে থাকার পরে, কোষগুলি গ্রেডিয়েন্ট-ঘনত্বের সাথে প্রিট্রিট করা হয়েছিলCistanche tubulosa2 ঘন্টার জন্য নির্যাস (12.5, 25, 50, 100 ug/mL), তারপর 24 ঘন্টার জন্য 1 ug/mL LPS দ্বারা উদ্দীপিত। ফ্লুরোসেন্ট প্রোব রিএজেন্ট কিট দিয়ে আন্তঃকোষীয় ROS স্তর সনাক্ত করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য 488 এনএম এবং নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য 525 এনএম এর অধীনে রেকর্ড করা হয়েছিল।

2.8 NO, MDA, SOD, CAT, LDH এবং GSH সনাক্তকরণ

গ্রিস পদ্ধতির মাধ্যমে কোন বিষয়বস্তু সনাক্ত করতে সেল-কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল। কোষগুলিকে প্রি-কুলড পিবিএস দিয়ে ধুয়ে বরফের উপর বসানো হয়। অন্তঃকোষীয় সুপারনাট্যান্ট অর্জনের জন্য সেল লাইসেটকে 5 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রির নিচে 10 000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। MDA বিষয়বস্তু, SOD, CAT, LDH এবং GSH স্তরের এনজাইম ক্রিয়াকলাপগুলি কিট স্পেসিফিকেশন অনুসারে কঠোরভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। মোট-প্রোটিন স্বাভাবিককরণের জন্য বিসিএ পদ্ধতি প্রয়োগ করা হয়েছিল।

2.9 এলিসা প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন সনাক্তকরণ

RAW264.7 কোষগুলিকে 16 ঘন্টার জন্য নমুনা এবং এলপিএস দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং 10 মিনিটের জন্য 10 000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। TNF‑, IL‑1 এবং IL‑6-এর নিঃসরণ ঘনত্ব ELISA কিট দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.10 ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ

নমুনা এবং এলপিএসের 45 মিনিটের হস্তক্ষেপের পরে, RIPA লাইসিস বাফার ব্যবহার করে মোট সেলুলার প্রোটিন বের করা হয়েছিল। প্রোটিনের ঘনত্ব বিসিএ কিট দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রোটিনের নমুনার সমান পরিমাণ (প্রতিটি লেনের জন্য 50 ug) বিকৃত করা হয়েছিল, SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল এবং PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 1 ঘন্টার জন্য 5% স্কিম-মিল্ক টিবিএসটি দ্রবণ দিয়ে ঝিল্লি ব্লক করা হয়েছিল, তারপর 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। টিবিএসটি দিয়ে বারবার ধোয়ার পর, সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিটি ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। টার্গেট প্রোটিন ব্যান্ডগুলি ইসিএল কেমিলুমিনেসেন্স বিকারক দ্বারা কল্পনা করা হয়েছিল। ব্যান্ড গ্রে-স্কেল বিশ্লেষণ ফসফোরিলেশন-প্রোটিন / মোট-প্রোটিন অনুপাত গণনা করার জন্য পরিচালিত হয়েছিল।

2.11 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8.0.2 সফ্টওয়্যার গ্রাফ প্লটিং এবং পরিসংখ্যান বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ডেটা তুলনার জন্য একমুখী ANOVA এবং t-পরীক্ষা গ্রহণ করা হয়েছিল।P < 0.05 represented statistically significant difference; P < 0.01 and P < 0.001 stood for higher significance. All experimental data were expressed as mean ± standard deviation (\(\bar{x}\pm s\)).

3. ফলাফল

3.1 একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষামূলক ফলাফল

স্লাইস বেধ টার্গেট-গ্লাইকোসাইড সামগ্রীতে বিশিষ্ট প্রভাব ফেলে। 0.2 সেন্টিমিটার পুরুত্বের স্লাইসগুলি অতিরিক্ত ভাপানো সহজ ছিল, যা সক্রিয় উপাদানগুলির তাপীয় পচন ঘটায়। অতিরিক্ত মোটা স্লাইস অভ্যন্তরীণ সক্রিয় পদার্থের মুক্তিতে বাধা দেয়। যখন স্টিমিং টাইম 10 মিনিটে এবং শুকানোর তাপমাত্রা 60 ডিগ্রীতে স্থির করা হয়েছিল, তখন 0.4 সেমি ছিল একক-ফ্যাক্টর স্ক্রীনিংয়ে সর্বোত্তম স্লাইস-বেধের প্যারামিটার।

অপর্যাপ্ত স্টিমিং সময় উদ্ভিদ-কোষের গঠনকে সম্পূর্ণরূপে ধ্বংস করতে পারেনি এবং কম গ্লাইকোসাইড ফলনের দিকে পরিচালিত করে। যখন স্টিমিং সময় 6 মিনিট অতিক্রম করে, তখন টিস্যু বিচ্ছিন্ন হয় এবং ইচিনাকোসাইডের পাশাপাশি অ্যাক্টিওসাইডের অবনতি ঘটে। 0.4 সেমি বেধের স্থির স্লাইস এবং 60 ডিগ্রি শুকানোর তাপমাত্রার অধীনে, 6 মিনিট ছিল সবচেয়ে ভাল বাষ্প-সময় অবস্থা।

একটি নির্দিষ্ট সীমার মধ্যে, ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের বিষয়বস্তু শুকানোর-তাপমাত্রা বৃদ্ধির সাথে বৃদ্ধি পায়, তবুও তাপমাত্রা 60 ডিগ্রি ছাড়িয়ে গেলে অবনতি ঘটে। 0.4 সেন্টিমিটার স্লাইস পুরুত্ব এবং 6 মিনিটের স্টিমিং টাইম সহ, 60 ডিগ্রী একক-ফ্যাক্টর স্ক্রীনিংয়ে সর্বোত্তম ব্যাপক কর্মক্ষমতা দেখিয়েছে।

3.2 প্রতিক্রিয়া-সারফেস অপ্টিমাইজেশান এবং যাচাইকরণ পরীক্ষা

পার্থক্য বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রীর জন্য রিগ্রেশন মডেলগুলি উল্লেখযোগ্য ছিল (P < 0.05, P < 0.01). The lack‑of‑fit term was non‑significant (P >0.05), ভাল মডেল ফিটিং ডিগ্রী নির্দেশ করে। সংকল্প সহগ R² 1 এর কাছাকাছি ছিল, যা পূর্বাভাসিত মান এবং প্রকৃত পরীক্ষামূলক ডেটার মধ্যে উচ্চ সম্পর্ক প্রমাণ করে।

অ্যাক্টিওসাইড বিষয়বস্তুর জন্য ফ্যাক্টরগুলির প্রভাবের ক্রম ছিল টুকরো পুরুত্ব > শুকানোর তাপমাত্রা > স্টিমিং সময়। ইচিনাকোসাইড সামগ্রীর জন্য, অর্ডারটি ছিল স্টিমিং টাইম > শুকানোর তাপমাত্রা > স্লাইস বেধ।

সফ্টওয়্যার দ্বারা গণনা করা তাত্ত্বিক সর্বোত্তম পরামিতিগুলি ছিল স্লাইস পুরুত্ব 0.600 সেমি, স্টিমিং টাইম 5.685 মিনিট এবং শুকানোর তাপমাত্রা 57.009 ডিগ্রি। ব্যবহারিক উৎপাদন অবস্থা বিবেচনা করে, প্যারামিটারগুলি স্লাইস পুরুত্ব 0.6 সেমি, বাষ্পের সময় 6 মিনিট এবং শুকানোর তাপমাত্রা 57 ডিগ্রিতে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। সমান্তরাল যাচাই পরীক্ষার তিনটি গ্রুপ 7.25% অ্যাক্টিওসাইড সামগ্রী এবং 31.62% ইচিনাকোসাইড সামগ্রী পেয়েছে। ব্যবহারিক মান এবং তাত্ত্বিক পূর্বাভাসিত মানের মধ্যে বিচ্যুতি ছিল যথাক্রমে 3.89% এবং 4.92%, যা এই প্রতিক্রিয়া-সারফেস মডেলের নির্ভরযোগ্যতা প্রদর্শন করেছে।

3.3 কোষের কার্যক্ষমতা স্ক্রীনিং ফলাফল

0-100 ug/mL ঘনত্ব সীমার মধ্যে,Cistanche tubulosaডিকোকশন-পিস নির্যাস RAW264.7 কোষে কোন সুস্পষ্ট সাইটোটক্সিসিটি ছিল না এবং সামান্য বিস্তার-প্রচারকারী প্রভাব প্রদর্শন করেছিল। যখন ঘনত্ব 200 ug/mL এবং তার উপরে পৌঁছে, কোষের কার্যক্ষমতা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়। অতএব, 12.5 ug/mL, 25 ug/mL, 50 ug/mL এবং 100 ug/mL পরবর্তী কোষ পরীক্ষার জন্য কাজের ঘনত্ব হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল।

3.4 আন্তঃকোষীয় ROS স্তরের উপর প্রভাব

দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, এলপিএস মডেল গ্রুপ উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত আন্তঃকোষীয় ROS ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা (P < 0.001), proving the successful establishment of oxidative‑stress injury model. Pretreatment of Cistanche tubulosaনির্যাস ডোজ-নির্ভর উপায়ে অত্যধিক ROS সঞ্চয় হ্রাস করেছে (P < 0.001 versus model group).

NO, MDA এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-সম্পর্কিত সূচকগুলির উপর 3.5 নিয়ন্ত্রণ৷

LPS উদ্দীপনা RAW264.7 কোষে NO এবং MDA বিষয়বস্তুর তীব্র বৃদ্ধি ঘটায়। এলপিএস মডেল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, ডোজ-নির্ভর প্রবণতা. 12.5 ug/mL নির্যাসটি MDA বিষয়বস্তুর উপর সুস্পষ্ট প্রভাব সৃষ্টি করেনি, যখন 25-100 ug/mL নির্যাস MDA ঘনত্ব পর্যবেক্ষণযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (P < 0.001).

LPS চিকিত্সার পরে, SOD, CAT, LDH এবং আন্তঃকোষীয় GSH বিষয়বস্তুর ক্রিয়াকলাপগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে. 12.5 ug/mL নির্যাস CAT এবং LDH কার্যকলাপের উন্নতি ছাড়াই SOD কার্যকলাপকে উন্নত করতে পারে৷ 25-100 ug/mL ঘনত্বে নির্যাস করুন উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত SOD, CAT, LDH এনজাইম কার্যকলাপ এবং GSH সামগ্রী ঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে।

3.6 প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন নিঃসরণে প্রতিরোধক প্রভাব

এলপিএস উদ্দীপনা RAW264.7 ম্যাক্রোফেজে TNF‑, IL‑1 এবং IL‑6 এর ব্যাপক মুক্তির সূত্রপাত করেছে।Cistanche tubulosaক্বাথ-পিস নির্যাস প্রিট্রিটমেন্ট উল্লেখযোগ্যভাবে উপরে উল্লিখিত তিনটি প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের নিঃসরণকে দমন করে (P < 0.001), presenting prominent dose‑dependent anti‑inflammatory property.

3.7 p38/AKT/JNK/NF‑κB সিগন্যালিং পাথওয়েতে মড্যুলেশন

দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, LPS হস্তক্ষেপ p‑p38/p38, p‑AKT/AKT, p‑JNK/JNK এবং p‑NF‑κB/NF‑κB এর ফসফোরিলেশন অনুপাত বাড়িয়েছে। মাঝারি এবং উচ্চ-ডোজের নির্যাস গোষ্ঠীগুলি p-p38/p38 এবং p-JNK/JNK অনুপাতকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। সমস্ত ঘনত্ব গোষ্ঠী নিম্ন-নিয়ন্ত্রিত p-AKT/AKT এবং p-NF‑κB/NF-κB স্তর (P < 0.05 or P < 0.001). Results illustrated that optimized Cistanche tubulosaডিকোকশন-পিস নির্যাস প্রোটিন ফসফোরিলেশনকে বাধা দিয়ে p38/AKT/JNK/NF-κB সংকেত পথের সক্রিয়করণকে বাধা দেয়।

4. আলোচনা

জন্য বর্তমান প্রক্রিয়াকরণ প্রয়োজনীয়তাCistanche tubulosaচাইনিজ ফার্মাকোপিয়ায় লিপিবদ্ধ শুধুমাত্র সুনির্দিষ্ট পরিমাণগত পরামিতি ছাড়াই গুণগত অপারেশন পদক্ষেপগুলি বর্ণনা করে। পূর্ববর্তী গবেষণাগুলি ইঙ্গিত করেছিল যে বিভিন্ন প্রক্রিয়াকরণ পদ্ধতিগুলি অপরিশোধিত এবং প্রক্রিয়াজাতকরণের মধ্যে রাসায়নিক গঠন এবং ফার্মাকোলজিক্যাল কার্যকলাপে বড় পার্থক্য সৃষ্টি করবে।Cistanche tubulosaনমুনা প্রক্রিয়াজাত পণ্যগুলি কাঁচামালের তুলনায় ভাল অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং ইমিউন-নিয়ন্ত্রক কর্মক্ষমতা দেখায়।

এই গবেষণায়, রেসপন্স-সারফেস পদ্ধতির মাধ্যমে অপ্টিমাইজ করা আধুনিক স্টিমিং-ড্রাইং প্রসেসিং অনেক প্রথাগত প্রক্রিয়াকরণ কৌশলের তুলনায় ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইডের অনেক বেশি ফলন পেয়েছে। এটি পরামর্শ দেয় যে স্লাইস বেধ, বাষ্পের সময়কাল এবং শুকানোর তাপমাত্রার উপর সুনির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণ কার্যকরভাবে ফেনাইলেথানয়েড-গ্লাইকোসাইড সামগ্রী বজায় রাখতে এবং উন্নত করতে পারে।Cistanche tubulosa.

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং প্রদাহ ঘনিষ্ঠভাবে সংযুক্ত প্যাথলজিকাল প্রক্রিয়া। অত্যধিক ROS লিপিড পারক্সিডেশন এবং MDA সঞ্চয়ের জন্ম দেয়; ইতিমধ্যে এটি ডাউনস্ট্রিম প্রদাহজনক ক্যাসকেডগুলিকে সক্রিয় করে এবং NO এবং একাধিক প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন তৈরি করে। প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারীরা আরও ROS উৎপাদনকে ত্বরান্বিত করে এবং একটি দুষ্ট প্যাথলজিকাল চক্র গঠন করে। আমাদের সেলুলার পরীক্ষামূলক ফলাফল প্রদর্শন করেছে যে অপ্টিমাইজ করা হয়েছেCistanche tubulosaডিকোকশন-পিস নির্যাস অপ্রয়োজনীয় ROS নির্মূল করতে পারে, অক্সিডেটিভ-ক্ষতি চিহ্নিতকারী NO এবং MDA কমাতে পারে, SOD, CAT, LDH দ্বারা উপস্থাপিত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম সিস্টেমের কার্যকলাপ পুনরুদ্ধার করতে পারে এবং আন্তঃকোষীয় GSH পুনরায় পূরণ করতে পারে, সেইসাথে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনসের সাথে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনসের মুক্তিকে বাধা দেয়।

p38, MAPK পরিবারের অন্তর্গত JNK এবং AKT-NF-κB অক্ষ হল কোর সিগন্যাল-ট্রান্সডাকশন হাব যা ম্যাক্রোফেজ অক্সিডেটিভ-প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়ার মধ্যস্থতা করে। LPS উদ্দীপনা p38, JNK এবং AKT-এর ফসফোরিলেশনকে উৎসাহিত করে, NF-κB কে আরও সক্রিয় করে এবং অসংখ্য প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি জিনের প্রতিলিপি প্ররোচিত করে। ওয়েস্টার্ন-ব্লট ডেটা তা প্রকাশ করেছেCistanche tubulosaডিকোকশন-পিস নির্যাস p38, JNK, AKT এবং NF-κB-এর ফসফোরিলেশন অ্যাক্টিভেশনকে অবরুদ্ধ করে। এটি অনুমান করা হয়েছে যে অপ্টিমাইজড প্রসেসিং থেকে উচ্চ-সামগ্রী ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড যৌথভাবে p38/AKT/JNK/NF‑κB সিগন্যালিং ক্যাসকেডকে দমন করতে অবদান রাখে, যাতে LPS-সৃষ্ট অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং প্রদাহজনক আঘাত থেকে মুক্ত করা যায় ma264.

এই গবেষণায় এখনও সীমাবদ্ধতা বিদ্যমান। সমস্ত ফার্মাকোলজিকাল মূল্যায়ন ইন-ভিট্রো সেল মডেলে সম্পন্ন হয়েছিল। ইন-ভিভো কার্যকারিতা এবং প্রক্রিয়াজাতের বিপাকীয় বৈশিষ্ট্য যাচাই করার জন্য আরও পশু-স্তরের পরীক্ষা-নিরীক্ষার প্রয়োজন।Cistanche tubulosaক্বাথ টুকরা।

উপসংহারে, এই গবেষণাটি পরিমাপযোগ্য এবং পরিমাপযোগ্য আধুনিক প্রক্রিয়াকরণ প্রযুক্তি প্রতিষ্ঠা করেছেCistanche tubulosaক্বাথ টুকরা। স্লাইস পুরুত্ব 0.6 সেমি, স্টিমিং টাইম 6 মিনিট এবং শুকানোর তাপমাত্রা 57 ডিগ্রি প্রক্রিয়াকরণের পরামিতিগুলির অধীনে, প্রধান ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের বিষয়বস্তু ব্যাপকভাবে উন্নত হয়েছে। প্রক্রিয়াকৃত ক্বাথের টুকরাগুলি p38/AKT/JNK/NF‑κB সংকেত পথকে বাধা দিয়ে LPS-উদ্দীপিত RAW264.7 ম্যাক্রোফেজে অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং প্রদাহজনক ক্ষতি কমাতে পারে। এই গবেষণাটি শিল্পোন্নত উৎপাদনের জন্য ব্যবহারিক প্রযুক্তিগত রেফারেন্স প্রদান করে এবং জিনজিয়াং-উৎপত্তির কার্যকরী-খাদ্য এবং খাদ্যতালিকা-সম্পূরক পণ্যগুলির বিকাশের জন্য পরীক্ষামূলক ভিত্তি প্রদান করে।Cistanche tubulosa.

স্বীকৃতি

এই কাজটি জিনজিয়াং একাডেমি অফ এগ্রিকালচারাল সায়েন্সেস (xjnkq‑2022022) এবং জিনজিয়াং "তিয়ানচি ডক্টর প্রোগ্রাম" (2021) এর যুব বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি ব্যাকবোন ইনোভেশন ক্যাপাসিটি চাষ প্রকল্প দ্বারা সমর্থিত ছিল।

তথ্যসূত্র

[১] লিন জে, ইউ এইচ, ঝাও ওয়াই, এট আল। থেকে echinacoside নিষ্কাশনCistanche tubulosaএবং সেপসিস ইঁদুরের লিভারের আঘাতের উপর এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের তদন্ত।খাদ্য বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি. 2023;43:e010523.

[২] গুও জে, ট্যাং এস, মিয়াও ওয়াই, এট আল। থেকে লিগনান গ্লাইকোসাইডের প্রদাহবিরোধী প্রভাবCistanche tubulosaPI3K/AKT পাথওয়ের মাধ্যমে LPS/IFN-প্ররোচিত RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ কোষগুলিতে কান্ড।বর্তমান ফার্মাসিউটিক্যাল বায়োটেকনোলজি. 2021;22(10):1380‑1391.

[৩] রানী ভি, দীপ জি, সিং আরকে, ইত্যাদি। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং বিপাকীয় ব্যাধি: প্যাথোজেনেসিস এবং থেরাপিউটিক কৌশল।জীবন বিজ্ঞান. 2016;148:183‑193.

[৪] মার্টিনেজ-ডি-টোডা আই, সেপ্রিয়ান এন, ডিয়াজ-ডি-কাস্ত্রো ই। মানুষের প্যাথোফিজিওলজিতে অক্সি-প্রদাহ-বার্ধক্যের ভূমিকা।কোষ. 2021;10(11):2974.

[৫] চুং ওয়াইসি, সং এসজে, লি এ, এট আল। আইসোবাভাচিন ম্যাক্রোফেজ এবং জেব্রাফিশে লিপোপলিস্যাকারাইড-প্ররোচিত প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলিকে MAPK এবং NF-κB সংকেত পথগুলিকে দমন করে।Ethnopharmacology জার্নাল. 2024;321:117501.