ক্রিস্টাল বৃদ্ধিতে প্রোটিনের প্রভাব ব্যাখ্যা করার জন্য মানুষের কিডনিতে পাথরে ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং প্রোটিনের মাল্টিকালার ইমেজিং

edmund.chen@wecistanche.com

কিডনিপাথরের রোগ একটি সাধারণ ব্যাধি, যা জনসংখ্যার 1.7-14.8 শতাংশকে জীবনে অন্তত একবার প্রভাবিত করে 1,2। 50 শতাংশ পর্যন্ত ক্ষেত্রে, এই রোগটি প্রথম পর্বের 5 বছরের মধ্যে পুনরাবৃত্তি হয়। এই স্বাস্থ্য সমস্যার গুরুত্ব সত্ত্বেও, পাথর গঠনের জন্য প্রতিরোধমূলক থেরাপি অনুপলব্ধ। এর প্যাথোজেনেসিস বোঝাকিডনিএর সংঘটন এবং পুনরাবৃত্তি কমাতে পাথর গঠন অপরিহার্যকিডনিপাথর রোগ3. প্রায় 80 শতাংশকিডনিপাথর হল ক্যালসিয়াম অক্সালেট (CaOx) পাথর 4,5। CaOx পাথর খনিজ পর্যায়ের ~90 শতাংশ নিয়ে গঠিত, অর্থাৎ, CaOx যা আরও ক্যালসিয়াম অক্সালেট মনোহাইড্রেট [Ca(C2O4) ·H2O](COM) এবং ক্যালসিয়াম অক্সালেট ডাইহাইড্রেট [Ca(C2O4) ·2H2O](COD), এবং জৈব পদার্থের একটি অপেক্ষাকৃত ছোট ভগ্নাংশ, যাকে নেফ্রো-ইউরোলজি বিভাগ, গ্র্যাজুয়েট স্কুল অফ মেডিকেল সায়েন্সেস, নাগোয়া সিটি ইউনিভার্সিটি, 1-কাওয়াসুমি, মিজুহো-চো, মিজুহো-কু, নাগোয়া 467‑8601, জাপান হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছে . 2ইনস্টিটিউট ফর অ্যাডভান্সড কো-ক্রিয়েশন স্টাডিজ, ওসাকা ইউনিভার্সিটি, 2-1, ইয়ামাদাওকা, সুইটা 565-0871, জাপান। 3Graduate School of Engineering, Osaka University, 2-1, Yamadaoka, Suita 565-0871, জাপান। 4 গ্র্যাজুয়েট স্কুল অফ লাইফ অ্যান্ড এনভায়রনমেন্টাল সায়েন্স, কিয়োটো প্রিফেকচারাল ইউনিভার্সিটি, 1-5, হাঙ্গি-চো, শিমোগামো, সাকিও-কু, কিয়োটো, কিয়োটো 606-8522, জাপান। 5 আর্থ সায়েন্স ডিপার্টমেন্ট, তোহোকু ইউনিভার্সিটি, 6‑3 Aza‑Aoba, Aramaki, Aoba‑ku, Sendai 980‑8578, জাপান। 6জাতীয় প্রকৃতি ও বিজ্ঞান জাদুঘর, 4‑1‑1 আমাকুবো, সুকুবা 305‑0005, জাপান। 7স্বাস্থ্য ও চিকিৎসা গবেষণা ইনস্টিটিউট, ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ অ্যাডভান্সড ইন্ডাস্ট্রিয়াল সায়েন্স অ্যান্ড টেকনোলজি (AIST), 2217-14, হায়াশি-চো, তাকামাতসু, কাগাওয়া 761-0395, জাপান। 8 তাজিরি থিন সেকশন ল্যাবরেটরি, 3‑1‑11 Sannose, Higashiosaka, Osaka 577‑0849, জাপান। 9ইনস্টিটিউট অফ লেজার ইঞ্জিনিয়ারিং, ওসাকা ইউনিভার্সিটি, 2-6, ইয়ামাদাওকা, সুইটা সিটি, ওসাকা 565-0871, জাপান। *ইমেল: maruyama@cryst.eei.eng.osaka-u.ac.jp; a-okada@med.nagoya-cu.ac.jp

কীওয়ার্ড:কিডনি; কিডনি পাথর; কিডনীর রোগ; রেনাল কিডনি ফিজিওলজি

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ব্যর্থতার উন্নতি ঘটাবে

প্রোটিন ম্যাট্রিক্স 6 হিসাবে। এর প্যাথোজেনেসিসকিডনিপাথর গঠনে খনিজ উপাদান এবং প্রোটিন ম্যাট্রিক্স 7,8 এর মধ্যে জটিল মিথস্ক্রিয়া জড়িত বহু-পদক্ষেপ প্রক্রিয়া অন্তর্ভুক্ত। প্রোটিনের 100 টিরও বেশি প্রজাতি সনাক্ত করা হয়েছেকিডনিপাথর 9-11। তাদের মধ্যে, বেশ কয়েকটি প্রোটিন, বিশেষ করে ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং প্রোটিন, CaOx পাথর গঠনের প্রক্রিয়ায় অপরিহার্য ভূমিকা পালন করে 12-16। স্ফটিক নিউক্লিয়েশন, স্ফটিক বৃদ্ধি, স্ফটিক একত্রীকরণ, এবং স্ফটিক আনুগত্য সহ পাথর গঠনের অনেক ধাপে এই প্রোটিনের নির্দিষ্ট প্রভাবগুলি নিবিড়ভাবে তদন্ত করা হয়েছে, অসংখ্য ভিট্রো ক্রিস্টালাইজেশন স্টাডিজ 17-19 সহ। ইন ভিট্রো অধ্যয়ন পাথর গঠনের নির্দিষ্ট ধাপে নির্দিষ্ট প্রোটিনের প্রভাব মূল্যায়ন করার জন্য দরকারী। যাইহোক, প্রকৃত পাথর গঠনের পরিবেশে, প্রোটিনের সংখ্যা একই সাথে কাজ করে এবং প্রোটিন, ক্যালসিয়াম আয়ন এবং অক্সালেটের ঘনত্বে প্রস্রাবের গঠন ওঠানামা করে। এই উদ্বেগ আমাদের প্রকৃত মানুষ অনুসন্ধান করতে অনুপ্রাণিতকিডনিস্ফটিক বৃদ্ধিতে প্রোটিনের প্রকৃত প্রভাব খুঁজে পেতে পাথর। বেশিরভাগ পূর্ববর্তী গবেষণায়, প্রোটিনগুলির সনাক্তকরণকিডনিপাথর নিষ্কাশন এবং নিষ্কাশন 9-11 পরে ভর স্পেকট্রোস্কোপি দ্বারা পরিচালিত হয়েছে। এইভাবে, পাথরে প্রোটিনের স্থানিক বন্টনের তথ্য হারিয়ে গেছে। খুব সীমিত তদন্তে, প্রোটিন সনাক্তকরণকিডনিকিডনির পাথরের টুকরো টুকরো অংশ দিয়ে পাথর পরীক্ষা করা হয়েছে যাতে CaOx ক্রিস্টালগুলি decalcifcation 20,21 দ্বারা সম্পূর্ণরূপে অপসারণ করা হয়। এই পদ্ধতিটি প্রোটিনের বিতরণ খুঁজে বের করার জন্য দরকারীকিডনিপাথর যা পাথর গঠনে নির্দিষ্ট প্রোটিনের প্রভাব বুঝতে সাহায্য করে। যাইহোক, পাথর গঠনের তথ্য একটি বিশাল পরিমাণ, মধ্যে নথিভুক্তকিডনিপাথরের স্ফটিক, এই পদ্ধতিতে হারিয়ে যায়। কিডনি পাথরের খনিজ তথ্যের গুরুত্ব যা স্ফটিক পর্যায়গুলির সনাক্তকরণ এবং স্লাইস বিভাগগুলি এবং পালিশ করা পাতলা অংশগুলি ব্যবহার করে পরিচালিত স্ফটিক টেক্সচার শ্রেণীবিভাগ দ্বারা অর্জিত হতে পারে।কিডনিঅপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি সহ পাথরগুলি 70 বছরেরও বেশি পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখানো হয়েছে 22,23৷

প্রাথমিক CaOx স্ফটিকের সাথে প্রোটিন বিতরণের মূল্যায়ন করার জন্য বিশ্লেষণের অনুপস্থিতিকিডনিপাথর পাথর গঠন বোঝার জন্য একটি উল্লেখযোগ্য বাধা হয়েছে. প্রোটিন বিতরণ এবং স্ফটিক পর্যায়/মরফোলজির সমন্বিত মূল্যায়ন পাথর গঠনের ইতিহাস সম্পর্কে গুরুত্বপূর্ণ তথ্য প্রদান করতে পারে। একাধিক ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং (মাল্টি-আইএফ স্টেনিং) জৈবিক নমুনার অনেক ধরণের নরম টিস্যুতে দুই বা ততোধিক প্রোটিনের বিতরণ দেখানোর জন্য ব্যবহার করা হয়েছে24। ছিদ্রযুক্ত ক্যালসিয়াম ফসফেট স্ফটিক দ্বারা গঠিত হাড়ের টিস্যুতে কৌশলটির প্রয়োগ, হাড়ের খনিজ হোমিওস্ট্যাসিসের গতিশীল নিয়ন্ত্রণের ক্ষেত্রেও গুরুত্বপূর্ণ অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করে। তবে এটি তদন্তে ব্যবহার করা হয়নিকিডনিঘন এবং শক্ত স্ফটিক দ্বারা গঠিত পাথর, যদিও একক ইমিউনোফ্লোরোসেন্স স্টেনিং ব্যবহার করা হয়েছে একটি নির্দিষ্ট প্রোটিনের বিতরণ দেখানোর জন্যকিডনিপাথর যা খনিজ তথ্য ধরে রাখে না 20,21। এই গবেষণাটি এমন অবস্থার তদন্ত করেছে যা মাল্টি-আইএফ স্টেনিংকে সক্ষম করেকিডনিমূল খনিজ তথ্য ধরে রাখতে পাথরের নমুনা। আমরা তিনটি ভিন্ন প্রোটিন, অস্টিওপন্টিন (OPN) এর বিতরণ তদন্ত করেছি।রেনালপ্রোথ্রোমবিন খণ্ড 1 (RPTF-1), এবং ক্যালগ্রানুলিন A (Cal-A), CaOx পাথরের পাতলা অংশে। এই প্রোটিনগুলি বেশিরভাগ CaOx পাথরে সাধারণ এবং ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং প্রোটিন হিসাবে পরিচিত যা সম্ভাব্যভাবে CaOx পাথর গঠন 26-28 কে প্রভাবিত করে। আমাদের সর্বোত্তম জ্ঞান অনুসারে, এটিই প্রথম গবেষণা যেখানে একাধিক ম্যাট্রিক্স প্রোটিনকে একটিতে সহ-ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়কিডনিপাথর CaOx পাথর গঠনের সময় প্রতিটি প্রোটিনের ডিস্ট্রিবিউশন, ভৌত রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য এবং জটিল শারীরিক পরিবেশের পরিবর্তনের উপর ভিত্তি করে আমরা CaOx স্ফটিক বৃদ্ধিতে প্রতিটি প্রোটিনের ভিভো ইফেক্টকে আরও ব্যাখ্যা করি।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ডায়ালাইসিস উন্নত করবে

ফলাফল

এফটি-আইআর বিশ্লেষণের সাথে মিলিত মাইক্রোস্কোপিক পর্যবেক্ষণের উপর ভিত্তি করে, এর ডোমেনগুলিকিডনিপাথরের নমুনাগুলিকে তিন ধরনের টেক্সচারে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল যা শুবার্ট এবং ব্রায়েন23-এ রিপোর্টের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ: ইউহেড্রাল সিওডি স্ফটিক দ্বারা গঠিত অনিয়মিত টেক্সচার (টাইপ 1, ইউহেড্রাল সিওডি সমষ্টি হিসাবে উল্লেখ করা হয়; চিত্র 1সি), মোজাইক টেক্সচার যা অনিয়মিত COM দ্বারা গঠিত স্ফটিক (টাইপ 2, মোজাইক COM হিসাবে উল্লেখ করা হয়; চিত্র 1f), এবং কেন্দ্রীভূত স্তরিত COM স্ফটিক (টাইপ 3, এককেন্দ্রিক COM হিসাবে উল্লেখ করা হয়; চিত্র 1i)। বেশিরভাগ পর্যবেক্ষণ করা CaOx পাথরের নমুনায় এই তিনটি টেক্সচার রয়েছে (সারণী 1)। জৈবিক নমুনার জন্য ব্যবহৃত মাল্টি-আইএফ স্টেনিং প্রোটোকল এর পাতলা অংশগুলির বিশ্লেষণে প্রয়োগ করা হয়েছিলকিডনিএকটি সাধারণ ভূতাত্ত্বিক পদ্ধতি দ্বারা প্রস্তুত পাথরের নমুনা। অ্যাপ্লিকেশানের জন্য, স্টেনিংয়ের আগে পাতলা অংশের এচিং অবস্থা সামঞ্জস্য করা হয়েছিল এবং দেখা গেছে যে দৃশ্যায়ন তখনই সফল হয়েছিল যখন পালিশ করা পাতলা অংশটি সামান্য খোদাই করা হয়েছিল (1 মিনিটের জন্য pH 6৷{1}} সাইট্রেট দ্রবণ সহ ) সাধারণ স্টেনিং প্রক্রিয়ার আগে। Te মাল্টি-আইএফ স্টেনিং তিনটি ভিন্ন স্টোন টেক্সচারে তিনটি প্রোটিনের বিভিন্ন রঙের (OPN: সবুজ, RPTF-1: নীল, এবং, Cal-A: লাল) সহ-ভিজ্যুয়ালাইজেশন সক্ষম করেছে৷

আমরা দেখতে পেয়েছি যে প্রতিটি প্রোটিন COM এবং COD-তে এর অবস্থানের উপর নির্ভর করে একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত বিতরণ প্যাটার্ন দেখিয়েছে। Te euhedral COD সমষ্টি 15 টি নমুনার মধ্যে 7 টি নমুনায় পাওয়া গেছে (সারণী 1)। Te euhedral COD সমষ্টি প্রধানত CaOx এর পরিধিতে উপস্থিত ছিলকিডনিপাথর (চিত্র 1a–c)। টেস সিওডি স্ফটিকগুলির একটি টেট্রাগোনাল বাইপিরামিড আকৃতি রয়েছে যা{101} মুখ 29 দ্বারা গঠিত। অনেক COD বাইপিরামিডের উভয় পিরামিডের ডগায় {110} মুখ থাকে (চিত্র 2b এবং পরিপূরক চিত্র S1)। COD স্ফটিকগুলির একটি মাল্টি-IF স্টেনিং চিত্র চিত্র 2a-এ দেখানো হয়েছে এবং OPN পর্যায়ক্রমে COD-এর {110} মুখে উপস্থাপন করে, যেমনটি চিত্র 2c-তে সাদা তীর দ্বারা দেখানো হয়েছে। এই মুখটি বাইপিরামিড টিপের একই মুখ যা সাধারণ COD ইন ভিট্রো ক্রিস্টাল গ্রোথ 29-এ দেখা যায় না। RPTF{11}} মুখ বরাবর সমান্তরাল স্তর হিসাবে উপস্থিত হয়েছে, µm-স্কেল ব্যবধান সহ, চিত্র 2d-এ হলুদ তীর দ্বারা দেখানো হয়েছে৷ এই স্ফটিক মুখটি সাধারণ COD বৃদ্ধির বৈশিষ্ট্য। ক্যাল-এ সিওডি স্ফটিকের বাইরে উপস্থিত ছিল, নির্দিষ্ট মুখের উপর কোন পছন্দের শোষণ দেখায় না (চিত্র 2e)। একই বন্টন নিদর্শন অন্যান্য পাথরের নমুনায় দেখা গেছে (পরিপূরক চিত্র S2)। Te মোজাইক COM টেক্সচার হল CaOx পাথরের সবচেয়ে প্রচলিত টেক্সচার (চিত্র 1d–f)। এই টেক্সচারটি 15টির মধ্যে 12টি নমুনায় পরিলক্ষিত হয়েছিল (সারণী 1)। মোজাইক COM-এর মাল্টি-IF স্টেনিং চিত্র 3a,b-এ দেখানো হয়েছে। OPN এবং RPTF-1 COM ক্রিস্টাল জুড়ে উপস্থিত ছিল (চিত্র 3c,d)। বিপরীতভাবে, ক্যাল-এ একচেটিয়াভাবে শস্যের সীমানা বরাবর উপস্থিত ছিল (অর্থাৎ, COM শস্যের পৃষ্ঠে) (চিত্র 3e)। আমরা আরও বিশ্লেষণ করেছি প্রোটিনের একটি লাইন তীব্রতা প্রোফাইল, যেমনটি চিত্র 3a-তে দেখানো হয়েছে, প্রতিটি প্রোটিন বিতরণ প্যাটার্নকে বিশদভাবে মূল্যায়ন করতে (চিত্র 4a-তে হলুদ লাইন)। OPN এবং RPTF-1 স্ফটিক এলাকায় উচ্চতর তীব্রতা দেখিয়েছে, যেখানে Cal-A কম তীব্রতা দেখিয়েছে

স্ফটিক এলাকা (চিত্র 4b)। ক্যাল-এ-এর উচ্চ তীব্রতা স্ফটিক সীমানা বরাবর একচেটিয়াভাবে পরিলক্ষিত হয়েছিল। এই প্রোটিন বিতরণগুলি অনেক নমুনায় দেখা গেছে, যদিও COM শস্যের আকার এবং আকৃতি ভিন্ন ছিল (পরিপূরক চিত্র। S3)। Te concentric COM হল CaOx পাথরের একটি সাধারণ টেক্সচার (চিত্র 1g–i)। আমরা 15টির মধ্যে 10টি নমুনায় এই টেক্সচারটি পেয়েছি (সারণী 1)। OPN, RPTF-1, এবং Cal-A কেন্দ্রীভূত স্তরগুলিতে বিতরণ করা হয়েছিল (চিত্র 5a)। OPN এবং RPTF-1 COM ক্রিস্টাল জুড়ে ধ্রুবক এবং নিয়মিত স্তর হিসাবে উপস্থিত ছিল, যা একটি µm-স্কেল ব্যবধান তৈরি করে (চিত্র 5b,c)। বিপরীতে, Cal-A বিতরণটি পাথরের বাইরের পৃষ্ঠে অবস্থিত অনিয়মিত এবং অপেক্ষাকৃত প্রশস্ত-ব্যবধান স্তরগুলির সমন্বয়ে গঠিত ছিল (চিত্র 5d)। SEM পর্যবেক্ষণ প্রতিটি Cal-A স্তরের কাছাকাছি একটি ফাঁক স্তর দেখায় (চিত্র 6a,b)। ফাঁক স্থান সৃষ্টিকারী উভয় পৃষ্ঠতলই ক্ষুদ্র আমানত দ্বারা দখল করা হয়েছিল যা ঘনকেন্দ্রিক COM (চিত্র 6c,d) রচনাকারী প্রধান COM ক্রিস্টাল থেকে স্পষ্টভাবে আলাদা ছিল। এককেন্দ্রিক COM-তে এই প্রোটিনগুলির Te লাইন তীব্রতার প্রোফাইলগুলি প্রতিটি প্রোটিন প্রোফাইলে স্পাইক দেখায় (চিত্র 4c,d)। OPN এবং RPTF-1-এর Te প্রোফাইলগুলি একই রকম ছিল (যেমন, OPN-এর 5.58±2.70 µm/স্তর এবং RPTF-এর 5.99±2.56 µm/স্তর-1) (পরিপূরক সারণী S1)৷ যাইহোক, OPN এবং RPTF-1 এর তুলনায় Cal-A স্তরগুলির স্বতন্ত্রভাবে বড় ব্যবধান ছিল (যেমন, 23.17±18.57 µm/স্তর)। অনুরূপ বন্টন প্যাটার্ন এবং ব্যবধানগুলি অন্যান্য 9টি নমুনার বেশিরভাগ ক্ষেত্রে দেখা গেছে, যদিও ক্যাল-এ স্তরটি কয়েকটি নমুনায় দেখা যায়নি (পরিপূরক চিত্র S4 এবং টেবিল S1)।

এই গবেষণায়, CaOx পাথরের তিনটি টেক্সচারের অনুপাত এবং তিনটি টেক্সচারে তিনটি প্রোটিনের বন্টনের সাথে পূর্বের পাথরের বয়স এবং লিঙ্গের কোন স্পষ্ট সম্পর্ক ছিল না, যদিও তদন্ত করা পাথরের পরিমাণ পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণের জন্য পর্যাপ্ত ছিল না। . OPN, RPTF-1, এবং Cal-A ইলেক্ট্রোলাইসিস 9–11 সহ পাথরের গুঁড়ার নির্যাস থেকে সনাক্তকরণের ভিত্তিতে CaOx পাথরে উপস্থিত বলে জানা গেছে। ইমিউনোসাইটোকেমিক্যাল কৌশলের সাহায্যে CaOx স্টোন ডিক্যালসিফাই করার ক্ষেত্রে OPN-এর মাইক্রো-স্কেল ডিস্ট্রিবিউশন CaOx স্টোন 21,30-এ ঘনকেন্দ্রিক lamellae-এ OPN বিতরণ দেখায়। বর্তমান পদ্ধতিটি পূর্বে বিবেচিত "জৈব স্তর" (চিত্র 7a,b) এ তিনটি ভিন্ন প্রোটিনের অবস্থানকে স্পষ্টভাবে কল্পনা করেছে। OPN এর বন্টন প্যাটার্ন যা আমরা বর্তমান সমীক্ষায় এককেন্দ্রিক COM এ দেখাই তা পূর্ববর্তী পর্যবেক্ষণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। আমরা আরও খুঁজে পেয়েছি যে ঘনকেন্দ্রিক COM-এ RPTF-1-এর বন্টন প্যাটার্ন প্রায় OPN-এর মতো, যেখানে COD স্ফটিকগুলিতে RPTF-1-এর বিতরণ OPN-এর থেকে আলাদা৷ বিপরীতভাবে, ক্যাল-এ-এর বন্টন প্যাটার্ন অন্য দুটি প্রোটিন থেকে সম্পূর্ণ আলাদা। OPN, RPTF-1, এবং Cal-A-এর বিভিন্ন মাইক্রো-স্কেল বিতরণ CaOx পাথর গঠনের ইতিহাস রেকর্ড করে।

আলোচনা

স্ফটিকের মধ্যে প্রোটিন সংযোজনের প্রাথমিক নিয়ন্ত্রণকারী ফ্যাক্টর।OPN এবং RPTF{{0}} উভয়ই ইউহেড্রাল সিওডি স্ফটিক, মোজাইক COM গ্রেইন এবং ঘনকেন্দ্রিক COM (Figs. 2a, 3a, এবং 5a) এ উপস্থিত ছিল। এই অনুসন্ধানটি নিশ্চিত করে যে এই প্রোটিনগুলি COD এবং COM স্ফটিক উভয়ের মধ্যেই অন্তর্ভুক্ত। ক্যাল-এ ইউহেড্রাল সিওডি স্ফটিকের বাইরে এবং মোজাইক COM শস্যের চারপাশে উপস্থিত ছিল (ডুমুর। 2e এবং 3e)। এককেন্দ্রিক COM ক্ষেত্রে, ক্যাল-এ স্তরগুলির চারপাশে সাধারণত একটি ফাঁক স্থান পাওয়া যায় যা পরামর্শ দেয় যে ক্যাল-এ স্তরগুলি স্ফটিকের মধ্যে অন্তর্ভুক্ত নয় তবে স্ফটিকগুলির পৃষ্ঠে বিতরণ করা হয়েছে (ডুমুর। 5d এবং 6a–d)। এই ডিস্ট্রিবিউশনগুলি নির্দেশ করে যে OPN এবং RPTF-1 CaOx স্ফটিকের মধ্যে একত্রিত হওয়ার প্রবণতা রয়েছে, যেখানে Cal-A খুব কমই একত্রিত হয়। CaOx স্ফটিকের মধ্যে Te প্রোটিন শোষণ এবং সংযোজন তাত্ত্বিকভাবে তাদের অ্যামিনো অ্যাসিড সাইড চেইনগুলির বাঁধাই বল এবং সংশ্লিষ্ট প্রোটিনের অন্যান্য নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্য যেমন ইলেক্ট্রোস্ট্যাটিক নেতিবাচক চার্জ 31,32 দ্বারা প্রভাবিত হয়। নেট চার্জ নির্দেশ করে যে OPN এবং RPTF-1 Cal-A এর চেয়ে বেশি ঋণাত্মক চার্জযুক্ত, OPN, RPTF-1 এর আইসোইলেকট্রিক পয়েন্ট এবং 3.5, 2.5–3 এর Cal-A৷{28} }, এবং 6.5–7.0, যথাক্রমে33–35। Te OPN, RPTF-1, এবং Cal-A-এ ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং ডোমেন আছে বলে জানা যায়36–38৷ এই ডোমেনগুলি অতিরিক্তভাবে ক্রমবর্ধমান স্ফটিক পৃষ্ঠগুলিতে স্থানীয় বাঁধাই সাইট হিসাবে কাজ করতে পারে। OPN, RPTF-1 এবং Cal-A-এর Te ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং ডোমেনগুলি যথাক্রমে 10, 7, এবং 2 ক্যালসিয়াম আয়নগুলিকে আবদ্ধ করতে পারে, 36–38৷ এইভাবে, CaOx-এর পৃষ্ঠে ধনাত্মক চার্জযুক্ত Ca-এর সাথে এই প্রোটিনগুলির বাল্ক এবং স্থানীয় সখ্যতা CaOx-এ এই প্রোটিনগুলির বিভিন্ন অন্তর্ভূক্তির কার্যকারিতা সৃষ্টি করে, স্ফটিক পৃষ্ঠের উপর উপস্থিত হওয়া ধাপে এবং কিঙ্ক সাইটগুলিতে বৃদ্ধির ইউনিটগুলিকে অন্তর্ভুক্ত করে ক্রিস্টাল বৃদ্ধি এগিয়ে যায়39,40 . প্রোটিন এবং ক্রমবর্ধমান স্ফটিক পৃষ্ঠের মধ্যে গাছ-মাত্রিক সামঞ্জস্য নির্ধারণ করবে

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ব্যথার উন্নতি ঘটাবে

স্ফটিক পৃষ্ঠের মধ্যে প্রোটিন সংযোজনের পরিমাণ। ক্রমবর্ধমান কিঙ্ক সাইট এবং পদক্ষেপগুলির সাথে একটি শক্তিশালী আবদ্ধ করার ক্ষমতা সহ প্রোটিনগুলি আরও দক্ষতার সাথে ক্রমবর্ধমান স্ফটিকের সাথে যুক্ত হতে থাকে। বর্তমানে রিপোর্ট করা বন্টন এবং তিনটি প্রোটিনের ক্যালসিয়াম সম্বন্ধীয়তা নির্দেশ করে যে OPN এবং RPTF-1 এর দৃঢ় সখ্যতা COD এবং COM স্ফটিকের মধ্যে বাইন্ডিং এবং একত্রিত করার সুবিধা দেয়। বিপরীতভাবে, ক্যাল-এ, যার একটি নিম্ন সম্বন্ধ রয়েছে, শুধুমাত্র স্ফটিক পৃষ্ঠকে মেনে চলে কিন্তু স্ফটিকের মধ্যে অন্তর্ভুক্ত করা হয় না। একটি পূর্ববর্তী গবেষণা যা আরও ফসফরিলেটেড পেপটাইড দ্বারা COM-এ পেপটাইড অন্তর্ভুক্তির উচ্চ হার দেখিয়েছিল এই ব্যাখ্যাটিকে সমর্থন করে43। এই আলোচনাগুলি আমাদের ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং বৈশিষ্ট্যের উপর ভিত্তি করে অন্যান্য অনেক প্রোটিনের বিতরণের পূর্বাভাস দিতে দেয়।

CaOx স্ফটিক বৃদ্ধিতে OPN এবং RPTF-1 এর ভিভো সিলেক্টিভ শোষণ এবং প্রতিরোধমূলক প্রভাব।Te euhedral COD স্ফটিক যেগুলি প্রধানত CaOx পাথরের পরিধিতে উপস্থিত থাকে একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত স্তরিত টেক্সচারের সাথে বৃদ্ধি পায় যেখানে তথাকথিত "জৈব পদার্থের স্তর" এবং "খনিজ স্তর" ক্রিস্টাল বৃদ্ধির সময় একে অপরের বিকল্প হয়44,45। যদিও স্তর পরিবর্তনের অন্তর্নিহিত সঠিক কারণগুলি অস্পষ্ট থেকে যায়, সম্ভাব্য ব্যাখ্যাগুলির মধ্যে রয়েছে মানব হোস্টের পরিবেশের পরিবর্তনগুলি,কিডনিফিজিওলজি এবং প্রস্রাবের জৈব রাসায়নিক পরিবর্তন, এবং গতিশীল প্রতিক্রিয়া প্রক্রিয়া যা খনিজ 8-এ পাওয়া দোলক জোনিং কাঠামো গঠন করে। বর্তমান ফলাফলগুলি দেখায় যে OPN এবং RPTF-1 যথাক্রমে ইন্ট্রাক্রিস্টালাইন প্রোটিন হিসাবে COD মুখগুলির {110} এবং {101} অনুরূপ স্তরিত টেক্সচার তৈরি করে, যেখানে Cal-A স্তরিত টেক্সচারে অন্তর্ভুক্ত নয় (চিত্র 2c) -ই)। এটি সারফেস সিলেক্টিভ শোষণ/প্রোটিন অন/ইন ইনকর্পোরেশনের ভিভো প্রমাণকিডনিপাথরের স্ফটিকগুলি ইঙ্গিত করে যে প্রোটিনের বন্টনগুলি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপি (চিত্র 7a) দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা ঐতিহ্যবাহী "জৈব পদার্থের স্তর" এর সাথে অভিন্ন নয়। সিওডি ক্রিস্টালে ওপিএন-এর নির্বাচনী শোষণের ইন ভিট্রো প্রমাণ চিয়েন এট আল দ্বারা রিপোর্ট করা হয়েছিল। (2009 এবং 2018) 46,47। এই রিপোর্ট অনুসারে, OPN COD-এর সাধারণ ক্রিস্টালোগ্রাফিক {110} মুখের সাথে আবদ্ধ হয় এবং আমাদের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হয়ে খনিজ পর্যায়ে অন্তর্ভুক্ত হয় (চিত্র 7b)। Te সারফেস সিলেক্টিভ শোষণ/সংযোজন সম্ভবত প্রতিটি প্রোটিনের ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং ক্ষমতা এবং/অথবা প্রোটিন অণুতে কার্যকরী গ্রুপের মধ্যে বিভিন্ন আণবিক সামঞ্জস্য এবং প্রতিটি স্ফটিক পৃষ্ঠে জালি আয়নগুলির বিন্যাসের ফলে হয়েছে।

বেশিরভাগ প্রোটিন কথিত পাথর গঠনের সময় CaOx স্ফটিক বৃদ্ধি বাধা দেয় 48,49। পেপটাইড দ্বারা স্ফটিক বৃদ্ধির বাধাকে স্টেপ পিনিং এবং/অথবা কিঙ্ক ব্লকিং 41-43 হিসাবে বিবেচনা করা হয়। পূর্ববর্তী ইন ভিট্রো স্টাডিতে, OPN এবং RPTF-1 CaOx স্ফটিক বৃদ্ধিতে বাধা হিসাবে পরিচিত। যাইহোক, ইনহিবিশন ব্যাপ্তিকিডনিপাথর গঠন অস্পষ্ট থাকে।

আপনার বর্তমান পর্যবেক্ষণ দেখায় যে বেশিরভাগ কিডনি স্টোন সিওডি স্ফটিকগুলির মুখের সাথে একটি সাধারণ স্ফটিক অভ্যাস রয়েছে (চিত্র 2বি)৷ ক্রিস্টাল সারফেস যেগুলির বৃদ্ধির হার তুলনামূলকভাবে ধীর থাকে সাধারণত ভালভাবে বিকশিত হয়40। এই তহবিলটি নির্দেশ করে যে COD-এর মুখগুলির বৃদ্ধির হার অন্যান্য পৃষ্ঠের তুলনায় ধীরগতির (যেমন, {110})৷ RPTF-1-এর Te preferential adsorption যা সম্ভাব্যভাবে COD-তে অন্তর্ভুক্ত করার মাধ্যমে স্ফটিক বৃদ্ধিকে হ্রাস করে{101} মুখের সাথে একটি স্তরিত কাঠামো হিসাবে পাওয়া গেছে (চিত্র 2d)। অন্যদিকে, আমরা COD ক্রিস্টাল (চিত্র 2c) এর ভিতরে OPN স্তরিত কাঠামো হিসাবে {110}টি মুখ পেয়েছি। ভিট্রো অধ্যয়ন46-এ প্রাপ্ত OPN-মুক্ত COD স্ফটিকগুলির {110} মুখের তুলনায় OPN স্তরিত কাঠামো আরও উন্নত হওয়ায় Te {110} মুখগুলি উপস্থিত হয়েছে৷ OPN এর অগ্রাধিকারমূলক শোষণ সহ COD-এর Te {110} মুখটি সাধারণ স্ফটিক অভ্যাসের COD-তে প্রদর্শিত স্ফটিক মুখ নয়। তাই, {110}-এ OPN শোষণ আপেক্ষিক পৃষ্ঠের বৃদ্ধির হারকে অত্যন্ত কমিয়ে দেবে, এবং {110} মুখগুলি দেখানোর জন্য হ্রাস যথেষ্ট ধীর ছিল৷ {110} মুখের উত্থান, অন্য কথায়, কিডনিতে পাথরের অনেক নমুনায় সাধারণ স্ফটিক অভ্যাস পরিবর্তন করে। COM স্ফটিক একটি মোজাইক টেক্সচার বা এককেন্দ্রিক টেক্সচার (ডুমুর। 3a এবং 5a) হিসাবে প্রদর্শিত হয়। OPN এবং RPTF-1 উভয়ই মোজাইক টেক্সচারে (চিত্র 3c,d) COM শস্যে একজাতভাবে উপস্থিত। তাই, এই ধরনের COM এর বৃদ্ধির হারের উপর এই প্রোটিনগুলির প্রভাব স্পষ্ট নয়। এককেন্দ্রিক COM-এ, ল্যাথ-সদৃশ স্ফটিকগুলি কেন্দ্র থেকে বাইরের দিকে র‌্যাডিয়ালি সারিবদ্ধ হয়। ল্যাথ-সদৃশ স্ফটিকগুলির স্ফটিক মুখগুলি স্পষ্ট নয়, তবে প্রস্রাবের সংস্পর্শে থাকা গোলাকার COM-এর বাইরের পৃষ্ঠের একই ক্রিস্টালোগ্রাফিক মুখগুলি থাকা উচিত। বর্তমান ফলাফলগুলি স্পষ্টভাবে দেখায় যে OPN এবং RPTF-1-এর অনুরূপ বিতরণ লাইন প্রোফাইল রয়েছে যেখানে তারা ঘনকেন্দ্রিক COM-এ প্রায় 4 থেকে 6 µm-স্কেল ব্যবধান স্তর (Figs. 4c,d, 5b,c, এবং) হিসাবে পর্যায়ক্রমে বিতরণ করে পরিপূরক সারণী S1)। এটি ইঙ্গিত দেয় যে OPN এবং RPTF-1 এর মধ্যে প্রস্রাবের সংস্পর্শে আসা COM-এর নির্দিষ্ট স্ফটিক মুখগুলিতে শোষণ এবং অন্তর্ভুক্তির ক্ষেত্রে একটি নগণ্য পার্থক্য রয়েছে। পূর্ববর্তী ইন ভিট্রো কাজগুলি দেখিয়েছিল যে OPN-এর COM বৃদ্ধিতে বাধা প্রভাব রয়েছে {100}, {121}, এবং {010} মুখ 51৷ যখন এই প্রতিরোধক প্রভাব বিবেচনা করা হয়, তখন বর্তমান ফলাফল নির্দেশ করে যে ঘনকেন্দ্রিক COM বৃদ্ধি OPN দ্বারা বাধাগ্রস্ত হয়েছিল৷ এবং সম্ভবত RPTF-1 দ্বারা RPTF-1-এর একই রকম ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং ক্ষমতা রয়েছে এবং এইভাবে COM-এর অনুরূপ নিগমকরণ দক্ষতা রয়েছে।

চিত্র 7. CaOx-এ তিনটি প্রধান টেক্সচারে প্রোটিন বিতরণের স্কিম্যাটিক্স। (a) প্রোটিন ম্যাট্রিক্স বিতরণকে পূর্ববর্তী গবেষণায় বিবেচনা করা হয়েছে (সাদা রঙ: খনিজ পর্যায় কালো রঙ: জৈব পদার্থ)। (b) বর্তমান গবেষণায় নির্দিষ্ট প্রোটিন বিতরণ পাওয়া গেছে (সবুজ: অস্টিওপন্টিন (OPN), নীল: রেনাল প্রোথ্রোমবিন ফ্র্যাগমেন্ট 1 (RPTF-1), এবং লাল: ক্যালগ্রানুলিন A (Cal-A)। Type1 idiomorphic COD, Type2 মোজাইক COM, এবং Type3 কেন্দ্রীভূতভাবে স্তরিত COM।

CaOx ক্রিস্টাল বৃদ্ধিতে Cal-A-এর ভিভো ইনহিবিটরি প্রভাব।COM এবং COD স্ফটিক উভয়ের নির্দিষ্ট স্ফটিক মুখের উপর Cal-A শোষণ বর্তমান ফলাফলে দেখা যায়নি (Figs. 2a এবং 3a)। OPN এবং RPTF-1-এর তুলনায় Cal-A-এর কম ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং ক্ষমতা রয়েছে এবং এটি ইউহেড্রাল সিওডি স্ফটিকের বাইরে এবং স্তরিত কাঠামো ছাড়াই মোজাইক COM শস্যের চারপাশে উপস্থিত ছিল (ডুমুর। 2a,e, এবং 3a,e)। যাইহোক, ক্যাল-এ ভিট্রো স্টাডি 28-এ CaOx ক্রিস্টাল বৃদ্ধিকে বাধা দিতেও পরিচিত। তাই, ক্যাল-এ একটি সার্ফ্যাক্ট্যান্ট অণু হিসাবে কাজ করতে পারে যা স্ফটিক 39,40,52 এর মধ্যে অন্তর্ভুক্ত না করেই আকারবিদ্যা এবং স্ফটিক বৃদ্ধির হারকে প্রভাবিত করে। নিয়মিত প্রস্রাবের অবস্থার অধীনে (অর্থাৎ, অনিয়মিত উচ্চ ক্যাল-এ ঘনত্ব ব্যতীত), OPN এবং RPTF থেকে COM এবং COD-এর স্ফটিক বৃদ্ধিতে OPN এবং RPTF-1-এর তুলনায় Cal-A-এর কম প্রতিরোধমূলক প্রভাব থাকতে পারে{{17} } স্ফটিকের মধ্যে একত্রিত করে পিনিং এবং/অথবা ব্লক করার মাধ্যমে স্ফটিক মুখের ধাপগুলির বিকাশকে বাধা দেয়। তাই, কিডনিতে পাথরে প্রোটিনের ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং ক্ষমতা CaOx বৃদ্ধিতে তাদের বাধার প্রভাবের পরিমাণ মূল্যায়ন করতে সাহায্য করবে সমকেন্দ্রিক COM-এ, Cal-A 20 থেকে 50 µm পর্যন্ত দূরত্ব ছিল এমন অ-পর্যায়ক্রমিক স্তরগুলি দেখায় (ডুমুর। 4c,d) , 5d, এবং পরিপূরক সারণী S1)। ক্যাল-এ পাথরের প্রাক্তনদের মূত্র 28 শনাক্ত করা হয়েছে। সুতরাং, প্রস্রাবের ঘনত্বের ওঠানামা স্বাভাবিকভাবেই ঘটতে হবে। যাইহোক, ক্যালসিয়াম আয়নগুলির সাথে কম সখ্যতার কারণে, ক্যাল-এ ঘনত্বের ছোট ওঠানামা COM টেক্সচারে রেকর্ড করা যাবে না। ক্যাল-এ প্রদাহ 53,54 এর প্রতিক্রিয়া হিসাবে প্রস্রাবে অ-পর্যায়ক্রমে প্রদাহ বিরোধী প্রোটিন হিসাবে নির্গত হয়। তবে, ক্যাল-এ-এর অ-পর্যায়ক্রমিক স্তরগুলি অনিয়মিত পরিবেশগত পরিবর্তনের কারণে, যেমন সংক্রমণ, আঘাত এবং রক্তপাতের কারণে প্রস্রাবে মাঝে মাঝে ক্যাল-এ-এর উচ্চ ঘনত্ব রেকর্ড করতে পারে। COM বৃদ্ধির উপর এর প্রতিরোধক প্রভাব দৃঢ়ভাবে ক্রমবর্ধমান স্ফটিকগুলির চারপাশে এর ঘনত্বের উপর নির্ভর করবে কারণ বেশ কয়েকটি পেপটাইডের ক্যালসাইট স্ফটিক বৃদ্ধির উপর নির্ভরশীলতা রয়েছে। ক্যাল-এ ক্রমবর্ধমান পৃষ্ঠকে আংশিকভাবে দখল করে COM বৃদ্ধিকে দুর্বলভাবে কমিয়ে দিতে পারে যখন স্ফটিকের চারপাশে এর ঘনত্ব কম থাকে কারণ প্রোটিন CaOx-এ অন্তর্ভুক্ত হওয়ার প্রবণতা নেই। সমকেন্দ্রিক COM-এ, SEM পর্যবেক্ষণ দ্বারা পাওয়া ক্ষুদ্র আমানত দ্বারা বেষ্টিত ফাঁক স্তরগুলি মাল্টি-IF ইমেজিং (চিত্র 6a-d) দ্বারা পাওয়া Cal-A স্তরগুলির মতো প্রায় অভিন্ন স্থানগুলি উপস্থিত করে। অতএব, যখন ক্যাল-এ স্তরটি কিছু জৈবিক পরিবর্তনের কারণে অনিয়মিতভাবে উচ্চ ঘনত্বের কারণে পুরু হয়ে যায়, তখন ক্যাল-এ ক্রমবর্ধমান পৃষ্ঠকে ব্যাপকভাবে দখল করে CaOx বৃদ্ধির একটি শক্তিশালী প্রতিরোধক হিসাবে কাজ করতে পারে। প্রদাহ, যা ক্যাল-এ নিঃসরণের একটি ট্রিগার, পাথর গঠনের একটি ভিন্ন ধাপকেও প্রভাবিত করতে পারে কারণ এক ধরনের শ্বেত রক্তকণিকা (অর্থাৎ, ম্যাক্রোফেজ) যা কিডনি পাথর গঠনে প্রচার এবং প্রতিরোধমূলক প্রভাব ফেলে একটি কিডনি পাথর মডেল মাউস16.

সামগ্রিক কিডনি পাথর গঠনে মাল্টি-আইএফ ইমেজিংয়ের সম্ভাব্য প্রয়োগ।আপনার বর্তমান কাজটি প্রোটিনের মাল্টি-আইএফ ইমেজিংয়ের প্রয়োগকে কঠিন বায়োমিনারেল নমুনাগুলিতে প্রসারিত করেছে, অর্থাৎ কিডনিতে পাথর। ক্রিস্টাল নিউক্লিয়েশন, স্ফটিক বৃদ্ধি, স্ফটিক একত্রীকরণ এবং স্ফটিক আনুগত্য কিডনি পাথর গঠনের গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ হিসাবে বিবেচিত হয়েছে। OPN, RPTF-1, এবং Cal-A 48,49 ইন ভিট্রো স্টাডিজ দ্বারা CaOx এর নিউক্লিয়েশন, বৃদ্ধি এবং একত্রিতকরণের প্রতিরোধক হিসাবে রিপোর্ট করা হয়েছে। মাল্টি-আইএফ ইমেজিংয়ের বর্তমান প্রসারিত প্রয়োগ প্রোটিন দ্বারা CaOx বৃদ্ধির প্রতিরোধমূলক প্রভাবের ভিভো প্রমাণ দেয় যা পূর্ববর্তী ইন ভিট্রো স্টাডি দ্বারা উহ্য ছিল। প্রতিটি ধাপে প্রোটিনের প্রভাবের উপর অনুসন্ধানগুলি ইঁদুরের ভিভো স্টাডিজের পাশাপাশি ইন ভিট্রো স্টাডিজ 14,15,26 দ্বারা পরিচালিত হয়েছে। উদাহরণস্বরূপ, স্ফটিক গঠনের একটি বাধা এবং স্ফটিক আনুগত্যের একটি প্রতিরোধক হিসাবে OPN-এর একটি সমালোচনামূলক পুনর্নবীকরণমূলক ভূমিকা ইঁদুরের ভিভো পরীক্ষার ভিত্তিতে রিপোর্ট করা হয়েছে যেখানে, OPN দ্বারা টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষে স্ফটিক আনুগত্যের প্রচার এবং CaOx স্টোন বৃদ্ধি OPN-নকআউট মাইস 14,15 ব্যবহার করে সাম্প্রতিক ভিভো পরীক্ষাগুলির উপর ভিত্তি করে গঠনের প্রতিবেদন করা হয়েছে। একটি OPN-নকআউট মাউসের কিডনি পাথরে পাওয়া একটি সম্পূর্ণ ভিন্ন স্ফটিক রূপবিদ্যাও কিডনি পাথর গঠনের একাধিক ধাপে OPN-এর প্রভাবকে সমর্থন করে। বর্তমান ভিজ্যুয়ালাইজেশন পদ্ধতিটি ইঁদুরের ইন ভিট্রো স্টাডিতে প্রোটিনের প্রভাবের মূল্যায়ন করতে এবং এমনকি মানুষের কিডনিতে পাথর গঠনের বিভিন্ন ধাপের মূল্যায়নেও কার্যকর হবে। এই অভিনব বিশ্লেষণ আমাদেরকে CaOx স্টোন গঠনে বিভিন্ন প্রোটিনের ভিভো ইফেক্টের মাধ্যমে ব্যাখ্যা করার অনুমতি দেবে যা মানুষের কিডনি স্টোন রোগ পরিচালনার জন্য প্যাথলজিকাল পরীক্ষা এবং ব্যক্তিগতকৃত ওষুধের জন্য একটি পথ খুলে দিতে পারে।

পদ্ধতি

নীতিশাস্ত্র বিবৃতি. এই গবেষণাপত্রে উপস্থাপিত গবেষণা প্রকল্পটি নাগোয়া সিটি বিশ্ববিদ্যালয়ের স্নাতক স্কুল অফ মেডিসিনের প্রাতিষ্ঠানিক পর্যালোচনা বোর্ড দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। সমস্ত পদ্ধতি প্রাসঙ্গিক নির্দেশিকা এবং প্রবিধান অনুযায়ী বাহিত হয়. সমস্ত বিষয় থেকে লিখিত অবহিত সম্মতি নৈতিক কমিটি বোর্ড দ্বারা অনুমোদিত পদ্ধতি অনুযায়ী প্রাপ্ত করা হয়েছিল।

পাথর সংগ্রহ এবং পাথর বিভাগ প্রস্তুত. কিডনির পাথর রোগীদের কাছ থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং জাপানের নাগোয়া সিটি বিশ্ববিদ্যালয়ে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। বাল্ক ইনফ্রারেড স্পেকট্রোস্কোপি (IR) এর তথ্যের ভিত্তিতে আমাদের হাজার হাজার মানুষের কিডনি পাথর সংগ্রহ থেকে পনেরটি CaOx কিডনি পাথরের নমুনা নির্বাচন করা হয়েছিল এবং পাতলা বিভাগগুলি প্রস্তুত করা হয়েছিল। পাথরের বাল্ক খনিজ গঠন আইআর বিশ্লেষণের সাথে অনুমান করা হয়েছিল। একটি পেট্রোলজিকাল পাতলা বিভাগকরণ পদ্ধতি, যা মূলত ভূতাত্ত্বিক তদন্তের জন্য ডিজাইন করা হয়েছিল, এই কিডনি পাথরের তদন্তে প্রয়োগ করা হয়েছিল55। কিডনি পাথরের নমুনাগুলি সম্পূর্ণরূপে ইপোক্সি রজন এবং কাটাতে এমবেড করা হয়েছিল। ক্রস-সেকশনটি ঘষিয়া তুলিয়া ফেলিতে সক্ষম (SiC এবং Al2O3) সহ স্থল ছিল এবং তারপরে পালিশ করা মুখটি ইপোক্সি রজন ব্যবহার করে একটি কাচের স্লাইডে লাগানো হয়েছিল। কাচের স্লাইডের সমান্তরালে একটি 1-মিমি পুরু নমুনা তৈরি করতে একটি দ্বিতীয় কাটা সঞ্চালিত হয়েছিল। তারপর নমুনাটি 20-30 µm বেধে পালিশ করা হয়েছিল এবং হীরার স্লারি দ্বারা পলিশ দিয়ে শেষ করা হয়েছিল।

পোলারাইজড মাইক্রোস্কোপি এবং ফুরিয়ার ট্রান্সফর্ম ইনফ্রারেড স্পেকট্রোফটোমেট্রি।প্রতিটি ক্রিস্টালের অপটিক্যাল বৈশিষ্ট্য যা কিডনিতে পাথর তৈরি করে তা 20-30 µm পুরু পাথরের খণ্ডাংশের সাথে পোলারাইজড মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে। VESTA56 দ্বারা গণনা করা সাধারণ COD স্ফটিক আকৃতির সাথে পর্যবেক্ষণের তুলনা করে প্রতিটি COD সমতলের পৃষ্ঠের সূচক নির্ধারণ করা হয়েছিল। অপটিক্যাল বৈশিষ্ট্যের উপর ভিত্তি করে, স্ফটিকগুলিকে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল, তারপরে একটি ফুরিয়ার ট্রান্সফর্ম ইনফ্রারেড স্পেকট্রোফটোমিটার (FT/IR6100, JASCO) দিয়ে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পরিমাপের তরঙ্গ সংখ্যার পরিসর ছিল 7800–350 সেমি-1। সমস্ত পরিমাপ পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় পরিচালিত হয়েছিল। Te পরিমাপের স্পট আকার 20×20 µm2 এ সেট করা হয়েছিল। RRUFF ডাটাবেসের সাথে প্রাপ্ত আইআর স্পেকট্রামের উপর ভিত্তি করে স্ফটিক পর্যায়গুলি চিহ্নিত করা হয়েছিল।

প্রোটিন ম্যাট্রিক্সের মাল্টিকালার ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট স্টেনিং।খনিজ পর্যায়গুলির বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত Te স্টোন বিভাগগুলি মাল্টি-আইএফ স্টেনিং সহ প্রোটিন বিতরণের বিশ্লেষণের জন্যও ব্যবহৃত হয়েছিল। ন্যূনতম এচিংয়ের জন্য 1 মিনিটের জন্য পাতলা অংশগুলিকে সাইট্রেট দ্রবণ (pH 6৷{2}}) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। Te বিভাগটি ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন (PBS) দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, তারপর Tween 20 (PBST) দিয়ে ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে 1 শতাংশ বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিনে 60 মিনিটের জন্য ব্লক করা হয়েছিল। অবরুদ্ধ করার পরে, বিভাগটি পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় রাতারাতি প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। ব্যবহৃত প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি ছিল মাউস মনোক্লোনাল অ্যান্টি-ক্যালগ্রানুলিন A (1:100 dilution, Santa Cruz Biotechnology, sc-48352), খরগোশ পলিক্লোনাল অ্যান্টি-অস্টিওপন্টিন (1:100 dilution, Santa Cruz Biotechnology, sc-20631 ), এবং ভেড়ার মনোক্লোনাল অ্যান্টি-হিউম্যান প্রোথ্রোমবিন ফ্র্যাগমেন্ট 1 (1:500 ডিলিউশন, সিডারলেন অন্টারিও, কানাডা, CL20111AP)। আলো থেকে সুরক্ষিত 1 ঘন্টার জন্য ফ্লুরোসেন্টলি কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউবেশনের আগে বিভাগটি 10 ​​মিনিটের জন্য পিবিএস দিয়ে 3 বার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। ব্যবহৃত Te ফ্লুরোসেন্টলি কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি হল অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি (এইচ প্লাস এল) ক্রস-অ্যাডসর্বড অ্যালেক্সা ফ্লোর 488-এর সাথে সংযুক্ত, অ্যান্টি-মাউস আইজিজি (এইচ প্লাস এল) ক্রস-অ্যাডসর্বড অ্যালেক্সা ফ্লোর 546-এর সাথে সংযুক্ত এবং অ্যান্টি-জি আইএইচ প্লাস এল) অ্যালেক্সা ফ্লুর 647-এর সাথে সংযুক্ত ক্রস অ্যাডসরবড। পিবিএস দিয়ে 10 মিনিটের জন্য 3 বার ধোয়ার পরে, একটি কনফোকাল অটো-ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি (নিকন A1R) ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স সনাক্ত করা হয়েছিল। সংগৃহীত উত্তেজনা এবং নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের মধ্যে রয়েছে 487 এনএম উত্তেজনা (500 এবং 550 এনএমের মধ্যে সংগৃহীত নির্গমন), 561 এনএম উত্তেজনা (570 এবং 620 এনএমের মধ্যে সংগৃহীত নির্গমন), এবং 639 এনএম (663 এবং 738 এনএম এর জন্য সংগৃহীত নির্গমন) 46}}, এবং Cal-A, যথাক্রমে। নমুনার একটি অংশ থেকে অটো-ফ্লুরোসেন্স (এএফ) পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, তবে এই গবেষণায় আলোচিত প্রোটিন সংকেতের তুলনায় সংকেতের তীব্রতা অনেক কম ছিল। অ্যান্টিবডিগুলির বাঁধন যা লক্ষ্য প্রোটিনের জন্য নির্দিষ্ট নয় তাও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। অ-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি থেকে IF সংকেতের অনুপস্থিতি নিশ্চিত করা হয়েছিল। মিথ্যা-ইতিবাচক সংকেতের অনুপস্থিতি মূল্যায়ন করতে নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ পরীক্ষা করা হয়েছিল (পরিপূরক চিত্র S5)। অ্যান্টিবডি স্টেনিংয়ের জন্য, কোনও অ-নির্দিষ্ট বাঁধাই সনাক্ত করতে আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। বিশেষত, নিয়ন্ত্রণের জন্য ব্যবহৃত প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি হল খরগোশ (DA1E) mAb IgG XP আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ (1:100 dilution সেল সিগন্যালিং), মাউস (G3A1) mAb IgG1 আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ (1:100 dilution সেল সিগন্যালিং), এবং ভেড়া mAb IgG আইসোটাইপ (1 :100 ডিলিউশন নোভাস) উপরের মতো একই ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। Te লাইন প্রোফাইলগুলি ইমেজজে দিয়ে তৈরি করা হয়েছিল, প্রতিটি প্রোটিনের জন্য যথাক্রমে 100 শতাংশ এবং 0 শতাংশ হিসাবে সর্বোচ্চ এবং সর্বনিম্ন বৈসাদৃশ্য পয়েন্ট দেখায়।