মেসেনকাইমাল স্টেম/স্ট্রোমাল সেল-ডিরাইভড এক্সোসোম পার্ট 1

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

বিমূর্ত:এক্সোসোম হল ন্যানো-আকারের ভেসিকল যা কোষ থেকে কোষ যোগাযোগের জন্য মধ্যস্থতাকারী হিসাবে কাজ করে। তাদের অনন্য নিউক্লিক অ্যাসিড, প্রোটিন, এবং লিপিড কার্গো কম্পোজিশনের সাথে যা উৎপাদক কোষের বৈশিষ্ট্যগুলিকে প্রতিফলিত করে, এক্সোসোমগুলি কোষ-মুক্ত থেরাপিউটিক হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। বিভিন্ন সেলুলার উত্স থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির মধ্যে, মেসেনকাইমাল স্টেম সেল-ডিরাইভড এক্সোসোমগুলি (এমএসসি-এক্সোসোমগুলি) তাদের ইমিউনোমোডুলেটরি এবং পুনরুত্পাদনমূলক ফাংশনের কারণে খুব মনোযোগ পেয়েছে। প্রকৃতপক্ষে, অনেক গবেষণায় বিভিন্ন ইন ভিট্রো এবং ভিভো মডেলগুলিতে এমএসসি-এক্সোসোমের অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি, অ্যান্টি-এজিং এবং ক্ষত নিরাময়ের প্রভাব দেখানো হয়েছে। এছাড়াও, এক্সোসোম বায়োলজির ক্ষেত্রে সাম্প্রতিক অগ্রগতিগুলি নির্দিষ্ট নির্দেশিকা এবং মান নিয়ন্ত্রণ পদ্ধতির বিকাশকে সক্ষম করেছে, যা শেষ পর্যন্ত এক্সোসোমের ক্লিনিকাল প্রয়োগের দিকে নিয়ে যাবে। এই পর্যালোচনাটি সাম্প্রতিক অধ্যয়নগুলিকে হাইলাইট করে যা MSC এক্সোসোমগুলির থেরাপিউটিক সম্ভাব্যতা এবং চর্মরোগের জন্য প্রাসঙ্গিক ক্রিয়াকলাপের পদ্ধতির পাশাপাশি এক্সোসোম থেকে প্রাপ্ত থেরাপিউটিকসের বিকাশের জন্য প্রয়োজনীয় মান নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাগুলিকে তদন্ত করে।

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

কীওয়ার্ড:বিরোধী পক্বতা; বিরোধী প্রদাহ; চুল বৃদ্ধি; ইমিউনোমডুলেশন; মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (এমএসসি); MSC- exosomes; চামড়া বাধা; চিকিৎসাবিদ্যা; পুনর্জন্মমূলক নান্দনিকতা; ক্ষত নিরাময়

1। পরিচিতি

এক্সট্রাসেলুলার ভেসিকেল (EVs) বা এক্সোসোমগুলির আবিষ্কার 1940-এর দশকে ফিরে যায় এবং এই ক্ষুদ্র ভেসিকেলগুলি দীর্ঘকাল ধরে সেলুলার আবর্জনা বিন হিসাবে উপেক্ষা করা হয়েছিল [1-3]। সেল-থেকে-কোষ যোগাযোগের জন্য বার্তাবাহক হিসাবে এক্সোসোমগুলির পুনঃআবিষ্কারের পরে তারা শুধুমাত্র মাঝামাঝি সময়ে উল্লেখযোগ্য মনোযোগ আকর্ষণ করতে শুরু করে [1,4-6]। এটা বললে অত্যুক্তি হবে না যে আমরা এক্সোসোম যুগের ভোরে আছি। 2018 এবং 2019 সালে PubMed-এ বার্ষিক EVs বা exosomes এবং সম্পর্কিত বিষয়ে তিন হাজারেরও বেশি প্রকাশনা ছিল[1]।cistanche tubulosa নির্যাসএক্সোসোম-ভিত্তিক থেরাপিউটিকসের বাণিজ্যিকীকরণের দিকে দৌড় ইতিমধ্যেই শুরু হয়েছে [7-10]। শীর্ষ চারটি এক্সোসোম স্টার্ট-আপ কোম্পানি, কোডিয়াক বায়োসায়েন্স, এক্সোসোম ডায়াগনস্টিকস, ইভক্স থেরাপিউটিকস, এবং এক্সোকোবিও প্রায় $386.2 মিলিয়ন বিনিয়োগকারী তহবিল পেয়েছে [8]। এছাড়াও, এক্সোসোম স্টার্ট-আপ এবং বড় ফার্মা কোম্পানিগুলির মধ্যে বেশ কয়েকটি বড় চুক্তি করা হয়েছে [১০]।

এক্সোসোমগুলি হল ন্যানো-আকারের এক্সট্রা সেলুলার ভেসিকেল (EVs) যা প্রায় সমস্ত ইউক্যারিওটিক কোষ দ্বারা প্রকাশিত হয় [১১]। সাধারণভাবে, তাদের আকার 30 nM থেকে 200 nM পর্যন্ত। EV-এর অন্য দুটি উপ-জনসংখ্যা হল মাইক্রোভেসিকল (100-1000 nM) এবং অ্যাপোপটোটিক বডি (500-2000 nM)[12-14]। স্টেম সেল থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির বিভিন্ন দিক থেকে আকর্ষণীয় থেরাপিউটিক সম্ভাবনা রয়েছে [15]। এটি প্রতিষ্ঠিত হয়েছে যে স্টেম সেলগুলির থেরাপিউটিক প্রভাবগুলির জন্য মোড অফ অ্যাকশন (MoA) হল মূলত প্যারাক্রাইন প্রভাবগুলি স্টেম কোষ থেকে নিঃসৃত কারণগুলির দ্বারা মধ্যস্থতা করে [6,16]। স্টেম সেলের সিক্রেটমের অংশগুলির মধ্যে, এক্সোসোমগুলি প্যারাক্রাইন প্রভাবগুলিতে একটি প্রধান ভূমিকা পালন করে বলে রিপোর্ট করা হয়েছে [16-18]। মেসেনকাইমাল স্টেম/স্ট্রোমাল সেল (এমএসসি) হল থেরাপিউটিক এক্সোসোমগুলির সবচেয়ে পছন্দের উৎস কারণ গত দশকে প্রচুর পরিমাণে ক্লিনিকাল ডেটার উপর ভিত্তি করে এমএসসি নিজেই নিরাপদ বলে মনে হয় [15]। উপরন্তু, MSC-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি (MSC-exosomes) পরিস্রাবণ দ্বারা জীবাণুমুক্ত করা যেতে পারে এবং একটি অফ-দ্য-শেল্ফ পণ্য হিসাবে উত্পাদিত হতে পারে, যখন MSCগুলি নিজেরাই পারে না। অধিকন্তু, এমএসসি-এক্সোসোমগুলি কোষ-ভিত্তিক থেরাপির প্রেক্ষাপটে সুরক্ষা সমস্যাগুলি থেকে মুক্ত বলে বিবেচিত হয়, যেমন কোষ প্রশাসন দ্বারা টিউমারিজেনিক সম্ভাবনা [19,20]।cistanche tubulosa পর্যালোচনাপ্রকৃতপক্ষে, স্নায়বিক, কার্ডিওভাসকুলার, ইমিউন, রেনাল, পেশীবহুল, যকৃত, শ্বাসযন্ত্র, চোখ এবং ত্বকের রোগের পাশাপাশি ক্যান্সার সহ বিভিন্ন রোগের মডেলে নতুন কোষ-মুক্ত থেরাপিউটিক কৌশলগুলির জন্য MSC-এর বিকল্প হিসাবে MSC-এক্সোসোমগুলি প্রয়োগ করা হয়েছে। [15,17,19,21,22]।

2. Exosomes এর উৎস হিসাবে MSCs

MSC-র স্ব-পুনর্নবীকরণ ক্ষমতা উভয়ই রয়েছে (অর্থাৎ, তারা নিজেরাই আরও MSC তৈরি করতে পারে) এবং পার্থক্য (অন্যান্য ধরণের কোষে) সম্ভাব্যতা [23]। এমএসসিগুলি বিভিন্ন টিস্যু এবং শরীরের তরল থেকে পাওয়া যেতে পারে, যেমন অ্যাডিপোজ টিস্যু, অস্থি মজ্জা (বিএম), ডেন্টাল পাল্প, সাইনোভিয়াল ফ্লুইড (এসএফ), অ্যামনিওটিক ফ্লুইড (এএফ), প্লাসেন্টা (পিএল), নাভির কর্ড (ইউসি), নাভির কর্ড রক্ত ​​(UCB), এবং Wharton's jelly (WJ) [24]। MSC গুলি ভ্রূণের স্টেম সেল (ESCs) বা প্ররোচিত প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল (iPSCs) [25-27] থেকেও পাওয়া যেতে পারে। MSC, তাদের উত্সের উপর নির্ভর করে, অ্যাডিপোসাইটস, কনড্রোসাইটস, অস্টিওব্লাস্ট এবং মায়োসাইট সহ বিভিন্ন ধরণের কোষে পার্থক্য করতে সক্ষম হয় [২৮]। এছাড়াও, MSC-এর ইমিউনোমডুলেটরি বৈশিষ্ট্য রয়েছে ইমিউন রেসপন্সের সাথে জড়িত বিভিন্ন কোষ যেমন ডেনড্রাইটিক কোষ (DCs), লিম্ফোসাইট, ম্যাক্রোফেজ, মাস্ট কোষ, নিউট্রোফিলস এবং প্রাকৃতিক ঘাতক (NK) কোষগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করার জন্য [24]। এই ভিত্তিগুলির উপর, এমএসসিগুলিকে গত কয়েক দশক ধরে বিভিন্ন রোগের জন্য শক্তিশালী সেল থেরাপিউটিক হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে।

Cistanche ক্যাম বিরোধী বার্ধক্য

এমএসসি-এক্সোসোমের রিপোর্ট করা প্রিক্লিনিকাল স্টাডিতে, এমএসসিগুলিকে নিম্নলিখিত ক্রমে বিভিন্ন টিস্যু/কোষ থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল: BM(51 শতাংশ), নাভি/প্ল্যাসেন্টাল টিস্যু (23 শতাংশ), অ্যাডিপোজ টিস্যু (13 শতাংশ), ESC বা iPSCs থেকে প্রাপ্ত (8 শতাংশ), এবং অন্যান্য (5 শতাংশ) [29]। যেহেতু MSC-এর বৈশিষ্ট্য এবং কার্যকারিতা তাদের উৎপত্তির উপর নির্ভর করে, তাই এটা স্পষ্ট যে MSC এক্সোসোমগুলি MSC-এর উৎপত্তি অনুসারে পরিবর্তিত হয়। যাইহোক, তাদের টিস্যুর উৎপত্তি অনুসারে MSC-এক্সোসোমগুলির তুলনামূলক অধ্যয়ন এখনও সীমিত, এবং শুধুমাত্র কয়েকটি রিপোর্ট একই গবেষণার মধ্যে বিভিন্ন MSC-এক্সোসোমের তুলনা করেছে (সারণী 1)[30-35]:(1)মানব অ্যাডিপোজ টিস্যু- প্রাপ্ত MSC(ASC)-এক্সোসোমগুলি নেপ্রিলাইসিনের উচ্চতর কার্যকলাপ প্রদর্শন করে, একটি অ্যামাইলয়েড (A)পেপটাইড অবক্ষয়কারী এনজাইম মস্তিষ্কে, তারপর মানুষের অস্থি মজ্জা MSC (BM-MSC)-এক্সোসোম, আলঝেইমার রোগে ASC-এক্সোসোমগুলির থেরাপিউটিক প্রাসঙ্গিকতার পরামর্শ দেয়৷ [৩০];(২) হিউম্যান BM-MSC-EVs এবং Wharton'sjelly MSC(WJ-MSC)-EVs কোষের বিস্তার হ্রাস করে এবং অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করে, যখন ASC-EVs কোষের বিস্তার বাড়িয়ে দেয় এবং U87MG গ্লিওব্লাস্টোমা কোষে কোনো অ্যাপোপটোটিক প্রভাব ফেলেনি [৩১] ]। যাইহোক, ক্যান্সার কোষের উপর MSC-exosomes এর প্রভাব বিতর্কিত [36]। উদাহরণ স্বরূপ, এএসসি-এক্সোসোমগুলি ভিট্রো এবং ভিভো উভয় ক্ষেত্রেই প্রোস্টেট ক্যান্সারের উপর ক্যান্সার-বিরোধী কার্যকলাপ রয়েছে বলে রিপোর্ট করা হয়েছে[37];(3) মানুষের মাসিক তরল MSC(MSC)-exosomes এবং BM-MSC-exosomes উভয়ই নিউরাইট বৃদ্ধিকে উন্নীত করে। কর্টিকাল এবং সংবেদনশীল নিউরনে, যখন হিউম্যান কোরিয়ন এমএসসি-এক্সোসোম এবং ইউসি-এমএসসি-এক্সোসোম ছিল না।cistanche UKএটি পরামর্শ দেয় যে MSC উত্সগুলির একটি উপযুক্ত নির্বাচন নিউরোডিজেনারেটিভ রোগের চিকিত্সার জন্য অপরিহার্য হতে পারে [32]; (4) মানব iPSC MSC (MSC)-এক্সোসোমস এবং সাইনোভিয়াল মেমব্রেন MSC (SM-MSC)-এক্সোসোম উভয়ই ক্ষয়প্রাপ্ত অস্টিওআর্থারাইটিস (OA) একটি মুরিন মডেলে, কিন্তু এমএসসি-এক্সোসোমগুলির SM-MSC-এক্সোসোমের তুলনায় একটি উচ্চতর থেরাপিউটিক প্রভাব ছিল [33];(5) তুলনামূলক একটি গবেষণা

ক্যানাইন MSCs রিপোর্ট করেছে যে BM-MSCs এএসসির তুলনায় এক্সোসোম সহ উচ্চ স্তরের সিক্রেটোম প্রকাশ করেছে [৩৪]; এবং (6) হিউম্যান অ্যামনিওটিক ফ্লুইড MSCs (AF-MSCs) BM-MSCs [35] এর চেয়ে বেশি পরিমাণে এক্সোসোম প্রকাশ করে। যাইহোক, উপরের অধ্যয়নের মধ্যে ফলাফলগুলি সরাসরি তুলনা করা কঠিন, কারণ সেগুলি এক্সোসোমগুলির জন্য বিচ্ছিন্নতা, চরিত্রায়ন এবং কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য তুলনামূলক প্রক্রিয়া বা পদ্ধতির সাথে সঞ্চালিত হয়নি। এছাড়াও, বিভিন্ন দাতাদের থেকে ভিন্নতা বা MSC-এর জন্য প্রস্তুতির পদ্ধতিগুলি একটি বিশিষ্ট চ্যালেঞ্জ হিসাবে রয়ে গেছে [38,39]। তবুও, এটি পরামর্শ দেওয়া হয় যে MSC-এক্সোসোমগুলি MSC-এর উত্সের উপর নির্ভর করে বিভিন্ন বৈশিষ্ট্য এবং কার্যকারিতা প্রদর্শন করতে পারে। তাই, জৈবিক পার্থক্য যেমন MSC-এর উৎপত্তি এবং তাদের exosomes এর কার্যকারিতা নির্দিষ্ট ক্লিনিকাল অ্যাপ্লিকেশনের জন্য বিবেচনা করা উচিত।

3. থেরাপিউটিক ইভির বিকাশের জন্য ইভির মান নিয়ন্ত্রণ

EV-ভিত্তিক থেরাপিউটিকস[40-42] বিকাশের জন্য একটি ভাল উত্পাদন অনুশীলন (GMP)-সঙ্গত প্রক্রিয়া এবং মান নিয়ন্ত্রণ (QC) সহ ক্লিনিকাল-গ্রেড ইভি তৈরি করা গুরুত্বপূর্ণ। একাডেমিক সেটিংসে প্রজননযোগ্য অধ্যয়নের জন্য উপযুক্ত QCisও গুরুত্বপূর্ণ। সম্প্রতি, ইন্টারন্যাশনাল সোসাইটি ফর এক্সট্রাসেলুলার ভেসিকল (ISEV) ন্যূনতম তথ্যের একটি সিরিজের প্রস্তাব করেছে স্টাডিজ অফ এক্সট্রাসেলুলার ভেসিকেল (MISEV), যা MISEV2018[43-45] হিসাবে চূড়ান্ত করা হয়েছে। কোরিয়ার খাদ্য ও ওষুধ নিরাপত্তা মন্ত্রক (MFDS) ইভি থেরাপি পণ্যগুলির জন্য বিশ্বের প্রথম নির্দেশিকা প্রকাশ করেছে, যার শিরোনাম রয়েছে গুণমান, নন-ক্লিনিক্যাল, এবং এক্সট্রাসেলুলার ভেসিকল থেরাপি পণ্যের ক্লিনিকাল মূল্যায়নের নির্দেশিকা [46। সারণি 2-এ দেখানো হয়েছে, এই নির্দেশিকাগুলির বেশিরভাগ মানদণ্ড একই রকম[1] এবং ইতিমধ্যেই GMP সেটিংসে প্রয়োগ করা হয়েছে [42, A7,48]। রুটিন QC মানদণ্ডের মধ্যে রয়েছে ইভির পরিমাণ, আকার, পরিচয় এবং বিশুদ্ধতা নির্ধারণ।

যেহেতু এই পদ্ধতিগুলি ইভিগুলিকে নন-ইভি কণা থেকে আলাদা করতে পারে না, তাই এই পদ্ধতিগুলির ফলাফলগুলিকে TEM, AFM বা অন্যান্য মাইক্রোস্কোপিক পর্যবেক্ষণের ফলাফলের সাথে তুলনা করার পরামর্শ দেওয়া হয়৷ সংক্ষিপ্ত রূপ: AF4, মাল্টি-এঙ্গেল আলো বিচ্ছুরণ এবং অসমমিতিক প্রবাহ ক্ষেত্র-প্রবাহ ভগ্নাংশের সাথে মিলিত হয়; AFM, পারমাণবিক শক্তি মাইক্রোস্কোপি; DLS, গতিশীল আলো বিচ্ছুরণ; FCM, প্রবাহ সাইটোমেট্রি; এফসিএস, ফ্লুরোসেন্স কোরিলেশন স্পেকট্রোস্কোপি; ISEV, ইন্টারন্যাশনাল সোসাইটি ফর এক্সট্রাসেলুলার ভেসিকল; LAL, লিমুলাস অ্যামিবোসাইট লাইসেট; MoA, কর্মের মোড; MFDS, খাদ্য ও ওষুধ নিরাপত্তা মন্ত্রণালয়; এনটিএ, ন্যানো পার্টিকেল ট্র্যাকিং বিশ্লেষণ; RPS, প্রতিরোধী পালস সেন্সিং; WB, ওয়েস্টার্ন ব্লটিং।

3.1.ইভি পরিমাণ এবং আকার

MISEV2018 এবং MFDS নির্দেশিকা উভয়ই EVs [45,46] এর পরিমাণ নির্ধারণের জন্য কমপক্ষে দুটি ভিন্ন পদ্ধতি ব্যবহার করার পরামর্শ দেয়। EV-এর পরিমাপ মোট পরিমাণ প্রোটিন, লিপিড বা RNAs পরিমাপ করে অর্জন করা যেতে পারে যেহেতু EV-তে এই সমস্ত অণু থাকে। এই পদ্ধতিগুলি, তবে, ইভি কণার সংখ্যার তথ্য প্রদান করে না। ন্যানো পার্টিকেল ট্র্যাকিং অ্যানালাইসিস (এনটিএ), রেজিস্টিভ পালস সেন্সিং (আরপিএস), এবং ডাইনামিক লাইট স্ক্যাটারিং (ডিএলএস) সহ কণার সংখ্যা এবং আকার পরিমাপ করার জন্য বেশ কয়েকটি পদ্ধতি উপলব্ধ। সর্বাধিক ব্যবহৃত পদ্ধতি হল NTA [42,47-53]।NTA জলীয় দ্রবণে একক কণার ব্রাউনিয়ান গতি ট্র্যাক করে কণার সংখ্যা এবং আকার নির্ধারণ করে [54]। যাইহোক, NTA বহু-বিচ্ছুরিত নমুনার কম রেজোলিউশন এবং আন্তঃ-ডিভাইস, ইন্টার-অ্যাস, এবং ইন্ট্রা-এবং আন্ত-ব্যক্তিগত বৈচিত্র [55-57] এর মতো উচ্চ বৈচিত্র্যের দ্বারা ভুগছে। উপরন্তু, এনটিএ প্রোটিন সমষ্টির মতো অন্যান্য ন্যানো পার্টিকেল থেকে ইভিগুলিকে আলাদা করে না।cistanche wirkungসম্প্রতি, নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি [58] সহ ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত ইভি সনাক্ত করতে ফ্লুরোসেন্স এনটিএর জন্য যন্ত্রগুলি চালু করা হয়েছে। EV-এর পরিমাপ, তবে, অত্যন্ত চ্যালেঞ্জিং রয়ে গেছে। বিশেষ করে ISEV সম্মেলনের সময় বিশেষ করে ন্যানোফ্লো সাইটোমেট্রি 59,60], ডাইরেক্ট স্টকাস্টিক অপটিক্যাল রিকনস্ট্রাকশন মাইক্রোস্কোপি [61], অপটিক্যাল ডিস্ক প্রযুক্তির সাথে এক্সোকাউন্টার [62] এবং ইমেজিং ফ্লো সাইটোমেট্রি [63] এর মতো নতুন প্রযুক্তি এবং যন্ত্রগুলি প্রতি বছর চালু করা হয়েছে। . যদিও সম্পূর্ণ GMP-সামঞ্জস্যপূর্ণ যন্ত্রগুলি বিকাশ করতে কিছুটা সময় লাগবে, তবে EV-এর পরিমাণ নির্ণয়ের জন্য পদ্ধতিতে দুর্দান্ত অগ্রগতির ফলে অদূর ভবিষ্যতে বর্তমান বাধাগুলি কাটিয়ে উঠবে বলে আশা করা হচ্ছে।

3.2। ইভি আইডেন্টিটি

ইভির সাথে বিভিন্ন ধরণের প্রোটিন যুক্ত বলে জানা গেছে, বিশেষ করে এক্সোসোম, যার মধ্যে রয়েছে টেট্রাস্পানিনস (CD9, CD63, এবং CD81), অ্যানেক্সিনস, ফ্লোটিলিন, এবং ALG-2-ইন্টারেক্টিং প্রোটিন X(Alix), এবং টিউমার সংবেদনশীলতা জিন 101 (TSG101) প্রোটিন [45,64]। CD9, CD63, CD81, TSG101, এবং Alix-এর মতো প্রোটিনগুলিকে এক্সোসোমগুলির জন্য নির্দিষ্ট চিহ্নিতকারী হিসাবে সুপারিশ করা হয় কারণ তারা উদ্ভূত কোষ [45,64-66] এর তুলনায় এক্সোসোমে অত্যন্ত সমৃদ্ধ বলে পরিচিত। উপরন্তু, যেহেতু Alix এবং TSG101 মাল্টিভেসিকুলার বডি (MVBs) গঠনের সাথে জড়িত, তাই এই প্রোটিনের উপস্থিতি এক্সোসোম |43,45,64] এর এন্ডোসাইটিক উত্সকে সমর্থন করার জন্য অপরিহার্য। QC-এর জন্য, এক্সোসোমে এই প্রোটিনগুলি সনাক্ত করার জন্য কমপক্ষে আধা-পরিমাণগত পদ্ধতিগুলি সুপারিশ করা হয় [46]। এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) এবং ফ্লো সাইটোমেট্রিক বিশ্লেষণ প্রতিটি জিএমপি-সম্মত সুবিধা এবং সাধারণ একাডেমিক ল্যাবগুলির জন্য উপযুক্ত। যদিও পশ্চিমা ব্লটিংটি একাডেমিক ল্যাবগুলিতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে, এই পদ্ধতিটি যথাযথ পরিমাণ এবং পদ্ধতির বৈধতার অভাবের দ্বারা সীমাবদ্ধ [67]।

3.3.EV বিশুদ্ধতা

EVs-এর বিশুদ্ধতাও QC-এর জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ মাপকাঠি। EV-এর বিশুদ্ধতা নিরীক্ষণ করার একটি সহজ পদ্ধতি হল কণা-থেকে-প্রোটিন, প্রোটিন-থেকে-লিপিড, বা RNA-থেকে-কণা অনুপাত নির্ধারণ করা [45]। হিস্টোন, ল্যামিন A/C, GRP94 (যেমন, HSP90B1), GM130 (অর্থাৎ, GOLGA2), এবং সাইটোক্রোম C (অর্থাৎ, CYC1) এর মতো অন্তঃকোষীয় প্রোটিনের অনুপস্থিতি ইভিসোরেক্সোসোমের বিশুদ্ধতা নির্ধারণের আরেকটি গুরুত্বপূর্ণ মাপকাঠি। প্রোটিনগুলি তাদের কঠোর সেলুলার স্থানীয়করণের কারণে এক্সোসোমে সমৃদ্ধ হয় না [43,45]। অ্যান্টিবায়োটিক এবং সিরাম সহ কোষ সংস্কৃতি প্রক্রিয়ার অমেধ্যগুলিও সম্ভাব্য বিপজ্জনক পদার্থগুলি অপসারণের নিরীক্ষণের জন্য বিশ্লেষণ করা উচিত [46]। প্রজননযোগ্যতা নিশ্চিত করতে EV-এর প্রতিটি ব্যাচকে থেরাপিউটিক উদ্দেশ্যে বা কার্যকরী পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করার আগে রুটিন QC দ্বারা যোগ্য হতে হবে, এমনকি একাডেমিক ল্যাবেও।

3.4.পোটেনসি অ্যাসেস

ভিভোতে EV-এর কার্যকারিতা ভবিষ্যদ্বাণী করার জন্য ক্ষমতার পরীক্ষাগুলি হল সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ OC মানদণ্ড। ইউএস ফুড অ্যান্ড ড্রাগ অ্যাডমিনিস্ট্রেশন (এফডিএ) এর মতো নিয়ন্ত্রক কর্তৃপক্ষ সেলুলার এবং জিন থেরাপি পণ্যগুলির জন্য উপযুক্ত ক্ষমতা পরীক্ষা ব্যবহার করার পরামর্শ দেয় [68]। MISEV2018 এবং MFDS নির্দেশিকাগুলিও EV QC [45,46] এর জন্য ক্ষমতার পরীক্ষা সহ সুপারিশ করে। ক্ষমতাকে "পণ্যের নির্দিষ্ট ক্ষমতা বা ক্ষমতা হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়, যেমনটি উপযুক্ত পরীক্ষাগার পরীক্ষা দ্বারা নির্দেশিত হয় বা প্রদত্ত ফলাফলকে কার্যকর করার উদ্দেশ্যে পণ্যের প্রশাসনের মাধ্যমে প্রাপ্ত পর্যাপ্তভাবে নিয়ন্ত্রিত ক্লিনিকাল ডেটা দ্বারা নির্দেশিত হয়"[68]। অনেক জৈবিক এবং জৈব রাসায়নিক পরীক্ষাগুলি ইভি বা এক্সোসোমের শক্তি প্রদর্শনের জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে [69,70]। যেহেতু EVs-এর পরিমাপ করা চ্যালেঞ্জিং রয়ে গেছে, তাই একটি উপযুক্ত ক্ষমতার পরীক্ষা প্রতিষ্ঠা ব্যাচ-টু-ব্যাচের সামঞ্জস্য নিরীক্ষণ এবং ইভিগুলির ডোজ নির্ধারণের জন্য একটি অমূল্য হাতিয়ার হবে [71]। যদিও আদর্শ শক্তির পরীক্ষাগুলি MoA-এর প্রতিনিধিত্ব করা উচিত, ইভিগুলির জটিল কার্গোতে একক বায়োঅ্যাকটিভ পদার্থ সনাক্তকরণে অসুবিধার কারণে একক জৈব রাসায়নিক বা বিচ্ছিন্ন কোষ-ভিত্তিক অ্যাসেগুলির সাথে একটি উপযুক্ত শক্তি পরীক্ষা সেট আপ করা কঠিন। উদাহরণ স্বরূপ, ভিভোতে ইন ভিট্রো সেল-ভিত্তিক অ্যাসেস [70-73] এর সাথে জটিল রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা অনুকরণ করা কঠিন।

4. MSC-Exosomes দ্বারা বিরোধী প্রদাহ এবং ইমিউনোমোডুলেশন

ইমিউন কোষগুলি প্রদাহজনক সাইটোকাইনস এবং মধ্যস্থতাকারীর মতো দ্রবণীয় কারণগুলি নিঃসরণ করে, যা প্রদাহের ক্ষেত্রে অবদান রাখতে পারে [74,75]। বিশেষ করে, টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর (TNF)- x, ইন্টারলিউকিন(IL)-6, এবং IL-1 সহ প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলি প্রধানত সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ দ্বারা উত্পাদিত হয়। এই সাইটোকাইনগুলি প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া যেমন ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণ এবং অতিরিক্ত ইমিউন কোষ নিয়োগ [74,75] এর আপগ্রেশনে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। বিপরীতে, প্রদাহ বিরোধী সাইটোকাইনগুলি নিয়ন্ত্রক টি কোষ (Tregs), সহায়ক T (Th)2 কোষ, বিকল্পভাবে সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ এবং মনোসাইট দ্বারা উত্পাদিত হয়, যা প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া এবং অনাক্রম্যতা নিয়ন্ত্রণ করে 75,76]। প্রধান অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি সাইটোকাইনগুলির মধ্যে রয়েছে lL-1 রিসেপ্টর অ্যাগোনিস্ট (lL-1RA), lL-4, IL-10, এবং ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর (TGF)- [76]।সাইট্রাস বায়োফ্ল্যাভোনয়েডসএই সাইটোকাইনগুলি Th1l প্রতিক্রিয়া এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলির উত্পাদনকে বাধা দেয় [76]।

প্রদাহ হল ক্ষতিকারক উদ্দীপনার প্রতিক্রিয়ায় সহজাত অনাক্রম্যতার একটি প্রক্রিয়া, যার মধ্যে রয়েছে প্যাথোজেন, ক্ষতিগ্রস্ত কোষ বা জ্বালা, এবং সাধারণত তাপ, ব্যথা, লালভাব, ফোলাভাব এবং কার্যকারিতা হ্রাস [77] হিসাবে প্রকাশ পায়। অনিয়ন্ত্রিত দীর্ঘস্থায়ী প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া বিভিন্ন প্রদাহজনক রোগের সাথে যুক্ত যেমন অ্যালার্জি, হাঁপানি, অটোইমিউন রোগ, প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগ (IBD), OA, এথেরোস্ক্লেরোসিস এবং হেপাটাইটিস [77-79]। উপরন্তু, অনেক বিজ্ঞানী এখন হার্ট অ্যাটাক, স্ট্রোক, টাইপ 2 ডায়াবেটিস, আল্জ্হেইমের রোগ এবং এমনকি ক্যান্সারের মতো বেশিরভাগ দীর্ঘস্থায়ী রোগের মূল কারণ হিসাবে প্রদাহকে বিবেচনা করেন [80,81]। অতএব, প্রদাহ নিয়ন্ত্রণ প্রদাহজনিত রোগের চিকিত্সার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ থেরাপিউটিক লক্ষ্য। এটি প্রদর্শিত হয়েছে যে MSC-তে প্রদাহ এবং ইমিউন প্রতিক্রিয়া উপশম করার জন্য অভ্যন্তরীণ ইমিউনোসপ্রেসিভ ক্ষমতার সম্পত্তি রয়েছে [82]। এমএসসি-এক্সোসোমগুলি এমএসসি সেল থেরাপির একটি চমৎকার বিকল্প হতে পারে কারণ এমএসসি-এক্সোসোমগুলি উদ্ভূত কোষগুলির অনুরূপ জৈবিক ফাংশন ধারণ করে, যখন তারা আরও স্থিতিশীল এবং তাদের উদ্ভূত কোষগুলির তুলনায় কম ইমিউনোজেনিসিটি রয়েছে [83]। প্রকৃতপক্ষে, এমএসসি-এক্সোসোমগুলির প্রদাহ-বিরোধী এবং ইমিউনোমোডুলেটরি ফাংশনগুলি ব্যাপকভাবে রিপোর্ট করা হয়েছে (সারণী 3) [২১,84-151]।

4.1.ম্যাক্রোফেজ মেরুকরণ

এমএসসি-এক্সোসোমস M1 থেকে M2 এর দিকে ম্যাক্রোফেজ পোলারাইজেশনকে উৎসাহিত করে এমন প্রমাণ রয়েছে। এমএল ম্যাক্রোফেজগুলি প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন এবং কেমোকাইনের একটি বিস্তৃত বর্ণালীর অভিব্যক্তি দ্বারা চিহ্নিত করা হয়, যেমন IL-1, IL-12, এবং TNF-। বিপরীতে, M2 ম্যাক্রোফেজ ফেনোটাইপ Th2 সাইটোকাইন দ্বারা প্ররোচিত হয় এবং IL-10 এবং TGF- এবং M2 মার্কার যেমন IL-1RA, CD163, এর মতো প্রদাহবিরোধী কারণগুলির নিঃসরণ ঘটায়। এবং সিসি মোটিফ কেমোকাইন 22 (CCL22)[152]। এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে মানুষের BM-MSC-এক্সোসোম এবং চোয়ালের অস্থি মজ্জা MSC (JM-MSC)-এক্সোসোমগুলি ত্বকের ক্ষত নিরাময় [86], এবং ব্রঙ্কোপুলমোনারি ডিসপ্লাসিয়া (BPD)[86] এর মাধ্যমে উন্নত করে। ম্যাক্রোফেজ M2 মেরুকরণ। এক্সোসোমে থাকা miR-223 ম্যাক্রোফেজ M2 পোলারাইজেশনকে প্ররোচিত করে প্রদাহ দূর করে এবং ক্ষত নিরাময়কে ত্বরান্বিত করে। BM-MSC-exosomes-এর সহ-সংস্কৃতি miR-এর অভিব্যক্তি বাড়িয়েছে-223 এবং PBX/knotted homeobox 1(PKNOX1) প্রোটিনের অভিব্যক্তি হ্রাস করেছে, যা ম্যাক্রোফেজ মেরুকরণের একটি গুরুত্বপূর্ণ নিয়ামক, পেরিফেরাল রক্তের মনোনিউক্লিয়েটেড কোষ থেকে বিচ্ছিন্ন ম্যাক্রোফেজগুলিতে ( PBMCs)। এছাড়া, BM-MSC-exosomes CD206-এর সাথে সহ-সংস্কৃতির পরে ইতিবাচক ম্যাক্রোফেজগুলিকে উন্নীত করা হয়েছিল, এবং miR-223 ইনহিবিটরগুলি এই উচ্চতাকে বিপরীত করেছে [85]। একটি উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য (HFD) মাউস মডেলে, miR-223 ঘাটতি M1 ম্যাক্রোফেজের অনুপ্রবেশ বৃদ্ধি করে, এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের উত্পাদন বৃদ্ধি করে, কিন্তু পেরক্সিসোম প্রলিফেরেটর-অ্যাক্টিভেটেড রিসেপ্টর সহ M2-সংশ্লিষ্ট বায়োমার্কার হ্রাস পায় (PPARy) এবং arginase 1(ARG1)[153]। অন্য একটি গবেষণায় ব্যাখ্যা করা হয়েছে যে মানব UC-MSC-exosomes এছাড়াও M2 ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণের প্রচার করে এবং ডায়াবেটিক ত্বকের ক্ষত নিরাময় নিয়ন্ত্রণ করে [87]। শর্তহীন UC-MSC-এর তুলনায়, LPS-পূর্ব শর্তযুক্ত UC-MSC-এর এক্সোসোমে উচ্চ মাত্রার লেট-7বি, প্রদাহ কমানো এবং ক্ষত নিরাময় আরও তীব্রভাবে প্রচার করা হয়েছে। UC-MSC-exosomes টোল-মত রিসেপ্টর 4(TLR4) এবং ফসফো (p)-p65 প্রোটিন হ্রাস করেছে LPS পূর্ব শর্ত নির্বিশেষে। LPS-পূর্ব শর্তযুক্ত UC-MSC-exosomes-এর চিকিত্সার পরে, ARG1, একটি M2 ম্যাক্রোফেজ চিহ্নিতকারী, বৃদ্ধি করা হয়েছিল, এবং inducible নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস (iNOS), একটি M1 ম্যাক্রোফেজ চিহ্নিতকারী, হ্রাস করা হয়েছিল [88]। let-7b TLR4 কে লক্ষ্য করে, যার সক্রিয়করণ নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর-kB(NF-kB) সক্রিয় করার দিকে পরিচালিত করে। উপরন্তু, let-7b সাইক্লোক্সিজেনেসের অভিব্যক্তিকে কমিয়ে দেয়-2(COX{ {77}}) এবং সাইক্লিন ডি 1 প্রোটিন [154]। এটি প্রকাশিত হয়েছিল যে UC-MSC-exosomes প্রদাহকে দমন করে এবং TLR4, NF-KB, এবং p-p65 এক্সপ্রেশনের ডাউনরেগুলেশনের মাধ্যমে গুরুতর পোড়া-জনিত ত্বকের প্রদাহ সহ ইঁদুরগুলিতে M2 ম্যাক্রোফেজ থেকে সাইটোকাইন নিঃসরণ করে ক্ষত নিরাময়ের প্রচার করে [৮৯]। হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট (HDF)-এক্সোসোমের তুলনায় UC-MSC-exosomes-এ miR{{89}c-এর উচ্চ স্তর পরিলক্ষিত হয়েছে৷ miR-181c-এর এক্সপ্রেশন লেভেল পোড়া আঘাতের দ্বারা হ্রাস পায় এবং ত্বকের ক্ষতস্থানে UC-MSC-exosomes-এর চিকিত্সার পরে বৃদ্ধি পায়। এছাড়াও, UC-MSC-exosomes-এর চিকিত্সা TNF- এবং IL-1-এর অভিব্যক্তি হ্রাস করে এবং IL-10-এর অভিব্যক্তিকে বাড়িয়ে তোলে৷ এই প্রভাবগুলি miR{101}c-ওভার এক্সপ্রেসড UC-MSCs [88] থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোম দ্বারা শক্তিশালী হয়েছিল। মাউস অ্যাস্ট্রোসাইটে পরিচালিত একটি পরীক্ষায়, miR{105}c-এর এক্সপ্রেশন লেভেল LPS, একটি TLR4 রিসেপ্টর লিগ্যান্ড দ্বারা হ্রাস পেয়েছে। miR-181c-এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন এলপিএস দ্বারা প্ররোচিত IL-10 নিঃসরণ বৃদ্ধি করে[155]। প্রাথমিক মাইক্রোগ্লিয়ায়, অক্সিজেন-গ্লুকোজ বঞ্চনা (OGD) TLR4কে নিয়ন্ত্রণ করে, যখন miR-181সি এই আপ-রেগুলেশনকে বিপরীত করে। miR-181c এছাড়াও NF-kB এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন যেমন TNF-, IL-1 , এবং OGD দ্বারা প্ররোচিত iNOS কে নিয়ন্ত্রণ করে[156]। উপরন্তু, এটি পাওয়া গেছে যে মানব MSC-এক্সোসোমগুলি ম্যাক্রোফেজ M2 পোলারাইজেশনকে প্ররোচিত করে, যা বর্ধিত ARG1/iNOS অনুপাত দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল, যা ডায়াবেটিক ত্বকের ক্ষত [89] এ প্রদাহের উপশম ঘটায়।

তদুপরি, বিভিন্ন MSC থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি অন্যান্য প্রদাহজনক রোগের পাশাপাশি ত্বকের ক্ষতগুলিতে M2 ম্যাক্রোফেজগুলির সক্রিয়করণের প্রচারে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। এটি পাওয়া গেছে যে মাউস BM-MSC-এক্সোসোমগুলি let-7/হাই মোবিলিটি গ্রুপ AT-Hook 2(HMGA2)/NF-kB পাথওয়ে [90] এর মাধ্যমে ভিভোতে ম্যাক্রোফেজ M2 পোলারাইজেশনের মাধ্যমে এথেরোস্ক্লেরোসিসের প্রদাহ থেকে মুক্তি দেয়। BM-MSC-exosomes-এ let{10}} পরিবারের সমৃদ্ধকরণ পাওয়া গেছে, এবং BM-MSC-exosomes-এর চিকিত্সা ApoE-/-ইঁদুরে let-7 স্তরকে উন্নীত করেছে [90]। Zhao et al. প্রকাশ করেছেন যে মাউস BM-MSC-exosomes এছাড়াও M2 ফেনোটাইপ (iNOS-CD206 প্লাস) এর দিকে মেরুকরণ ম্যাক্রোফেজের মাধ্যমে মায়োকার্ডিয়াল ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন (IR) আঘাতকে হ্রাস করে এবং IL-10 এবং ARG1 বৃদ্ধি করে, যা নিয়ন্ত্রিত হয় miR-182 টার্গেটিং TLR4[91]। মানব বিএম-এমএসসি-এক্সোসোমগুলি মেটালোথিওনিন-2 (MT2A)-নির্ভর পদ্ধতিতে M2b ম্যাক্রোফেজগুলির মেরুকরণের মাধ্যমে ইঁদুরগুলিতে ডেক্সট্রান সোডিয়াম সালফেট (DSS)-প্ররোচিত IBD হ্রাস করার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে [92]। অন্য একটি রিপোর্টে প্রকাশ করা হয়েছে যে মাউস ESC-এক্সোসোম M2 ম্যাক্রোফেজ এবং IL-10 রিলিজ [157] বাড়িয়ে কার্ডিওমায়োপ্যাথিকে উন্নত করেছে। উপরন্তু, এটি রিপোর্ট করা হয়েছিল যে ইঁদুর ASC-এক্সোসোম M2 ম্যাক্রোফেজ পোলারাইজেশনকে উন্নীত করে মায়োকার্ডিয়াল ইনফার্কশনকে উন্নত করে, যা স্ফিংগোসিন-1-ফসফেট রিসেপ্টর 1(S1PR1)[93] বৃদ্ধির দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়। স্ফিংগোসাইন 1-ফসফেট (S1P)/sphingosine kinase 1 (SphK1)/S1PR অক্ষের গুরুত্ব আরও S1PR1 এর নীরবতা দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল, যা H9c2 কোষে ASC-এক্সোসোম দ্বারা হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস হ্রাসকে বিলুপ্ত করেছে। একইভাবে, মানব এএসসি-এক্সোসোমগুলি মানব পিবিএমসিগুলিতে M2 ম্যাক্রোফেজ মার্কারগুলিকে প্ররোচিত করে [94]। হিও এট আল। প্রকাশ করেছে যে মানব ASC-এক্সোসোমগুলি ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরগুলির বর্ধিত স্তর নিশ্চিত করে M2 ম্যাক্রোফেজ ফেনোটাইপকে প্ররোচিত করে (যেমন, সংকেত ট্রান্সডুসার এবং ট্রান্সক্রিপশন 6 (STAT6) এর অ্যাক্টিভেটর), MAF BZIP ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর B (MafB) ইত্যাদি), যার ফলে ইমিউনোমোডুলেটরি এবং অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি প্রভাব নিয়ন্ত্রণ করে যেমন ট্রেগস এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলি (যেমন, IL-10 এবং TNF- -উদ্দীপিত জিন-6(TSG-6))[94 ]। মাউস ASC-এক্সোসোমগুলি M2 ম্যাক্রোফেজ মেরুকরণকেও প্ররোচিত করে এবং স্থূল ইঁদুরগুলিতে সাদা অ্যাডিপোজ টিস্যু (WAT) এর প্রদাহ হ্রাস করে[96]। এই প্রভাবগুলি ASC-এক্সোসোমে একটি ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর, STAT3 এর উপর নির্ভরশীল। তদ্ব্যতীত, ASC-এক্সোসোম-শিক্ষিত M2 ম্যাক্রোফেজগুলি নিজেরাই ASC-এর বিস্তার এবং ASC থেকে ল্যাকটেট উৎপাদনকে প্ররোচিত করে, যা WAT beiging [95]কে আরও প্রচার করে। যাইহোক, MSC-exosomes দ্বারা M2 ম্যাক্রোফেজ মেরুকরণ নিয়ন্ত্রণের জন্য বিস্তারিত অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়া বোঝার জন্য আরও অধ্যয়ন প্রয়োজন।

এই নিবন্ধটি সেল 2020, 9, 1157 থেকে নেওয়া হয়েছে; doi:10.3390/cells9051157 www.mdpi.com/journal/cells