ক্রনিক প্রোস্টাটাইটিসের চিকিৎসায় সিস্তানচে-ভিত্তিক জিয়ান ফ্যাং হুও মিং ড্রিঙ্কের মেকানিস্টিক স্টাডি: ইন্টিগ্রেটেড নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি এবং PI3K/Akt/NF-κB পাথওয়েকে লক্ষ্য করে পরীক্ষামূলক বৈধতা

2. পদ্ধতি

2.1 নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি এবং আণবিক ডকিং বিশ্লেষণ

2.1.1 সক্রিয় উপাদান এবং রোগের লক্ষ্য চিহ্নিতকরণ

TCMSP ডাটাবেস ব্যবহার করে, Cistanche-ভিত্তিক Xian Fang Huo Ming Drink (XFHY) এর সক্রিয় যৌগগুলি ADME মানদণ্ডের সাথে স্ক্রীন করা হয়েছিল: মৌখিক জৈব উপলভ্যতা (OB) 30% এর চেয়ে বেশি বা সমান এবং ড্রাগ-সদৃশতা (DL) 0.18 এর চেয়ে বেশি বা সমান। এই যৌগগুলির সম্ভাব্য লক্ষ্যগুলি SwissTargetPrediction ব্যবহার করে চিহ্নিত করা হয়েছিল (সম্ভাব্যতা 0.1 এর চেয়ে বড় বা সমান)। সাইটোস্কেপ 3.9.1 ব্যবহার করে একটি "ভেষজ-যৌগ-লক্ষ্য" নেটওয়ার্ক তৈরি করা হয়েছিল এবং ডিগ্রী কেন্দ্রীয়তার উপর ভিত্তি করে শীর্ষ পাঁচটি যৌগ চিহ্নিত করা হয়েছিল। একই সাথে, CP/CPPS-সম্পর্কিত রোগের লক্ষ্যগুলি GeneCards, OMIM, এবং DisGeNET থেকে "ক্রনিক প্রোস্টাটাইটিস" এবং "প্রোস্টাটাইটিস" এর মতো কীওয়ার্ড ব্যবহার করে সংগ্রহ করা হয়েছিল।

 

 

 

প্রোস্টেট এবং কিডনি স্বাস্থ্যের জন্য সিস্টানচে এক্সট্র্যাক্ট সাপ্লিমেন্ট PhGs75% Ech 30% অ্যাক্ট 12%

আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন এখন কিনতে

 

 

 

2.1.2 ছেদ লক্ষ্য চিহ্নিতকরণ

XFHY যৌগিক লক্ষ্য এবং CP/CPPS রোগের লক্ষ্যগুলির মধ্যে ছেদ ভেনি 2.1 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে একটি ভেন ডায়াগ্রাম তৈরি করার জন্য নির্ধারণ করা হয়েছিল, মূল সম্ভাব্য থেরাপিউটিক লক্ষ্যগুলি সনাক্ত করে।

2.1.3 PPI নেটওয়ার্ক নির্মাণ

ইন্টারসেকশন লক্ষ্যগুলি STRING ডাটাবেসে আমদানি করা হয়েছিল (প্রজাতি: হোমো সেপিয়েন্স; মিথস্ক্রিয়া স্কোর > 0.9)। ফলস্বরূপ প্রোটিন-প্রোটিন ইন্টারঅ্যাকশন (PPI) নেটওয়ার্ক সাইটোস্কেপে আমদানি করা হয়েছিল, এবং ডিগ্রি, মধ্যবর্তীতা এবং ঘনিষ্ঠতার মতো নেটওয়ার্ক টপোলজি পরামিতিগুলির উপর ভিত্তি করে CytoHubba ব্যবহার করে মূল লক্ষ্যগুলি চিহ্নিত করা হয়েছিল।

2.1.4 "হার্ব-কম্পাউন্ড-টার্গেট-পাথওয়ে" নেটওয়ার্কের নির্মাণ

Cytoscape 3.9.1 ব্যবহার করে, XFHY, এর সক্রিয় যৌগ, লক্ষ্য এবং সংকেত পথের মধ্যে সম্পর্ক কল্পনা করার জন্য একটি নেটওয়ার্ক মডেল তৈরি করা হয়েছিল। কী নোডগুলি নির্ধারণ করতে নেটওয়ার্ক পরামিতিগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

2.1.5 GO এবং KEGG সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ

জিন অন্টোলজি (GO) এবং কিয়োটো এনসাইক্লোপিডিয়া অফ জিনস অ্যান্ড জিনোম (KEGG) পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ (P <0.05) এর জন্য ছেদ লক্ষ্যগুলি DAVID ডাটাবেসে আপলোড করা হয়েছিল। বায়োইনফরম্যাটিক্স সরঞ্জামগুলির মাধ্যমে ফলাফলগুলি কল্পনা করা হয়েছিল।

2.1.6 আণবিক ডকিং

শীর্ষ পাঁচটি যৌগ (যেমন, কোয়ারসেটিন, কেমফেরল) লিগ্যান্ড হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং পিপিআই নেটওয়ার্কের শীর্ষ দশটি মূল লক্ষ্যগুলি রিসেপ্টর হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্রোটিন স্ট্রাকচার প্রোটিন ডেটা ব্যাঙ্ক (PDB) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল, AutoDockTools 1.5.6 (ডিহাইড্রেশন, হাইড্রোজেনেশন এবং চার্জ যোগ সহ) ব্যবহার করে প্রিপ্রসেস করা হয়েছিল এবং PDBQT ফর্ম্যাটে রূপান্তরিত হয়েছিল। MOL2 ফর্ম্যাটে লিগ্যান্ড স্ট্রাকচারগুলি TCMSP থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং একইভাবে রূপান্তরিত হয়েছিল। অটোডক ব্যবহার করে আণবিক ডকিং পরিচালিত হয়েছিল, এবং গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8 ব্যবহার করে বাঁধাইয়ের সম্বন্ধগুলি কল্পনা করা হয়েছিল।

2.2 প্রাণী পরীক্ষা

2.2.1 মডেল স্থাপন

সিপি/সিপিপিএস মডেল করার জন্য একটি রাসায়নিক আনয়ন পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। ইঁদুরকে 3% পেন্টোবারবিটাল সোডিয়াম (50 মিলিগ্রাম/কেজি) দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল। তলপেটে একটি মিডলাইন ছেদ করা হয়েছিল এবং প্রোস্টেটের প্রতিটি পার্শ্বীয় লোবে (মোট 160 μL) 3% λ-ক্যারাজেনানের 80 μL ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। শাম-চালিত ইঁদুরগুলি স্যালাইন ইনজেকশন পেয়েছে। অপারেটিভ কেয়ার টপিকাল অ্যান্টিবায়োটিক প্রয়োগ অন্তর্ভুক্ত। 7 তম দিনে, প্রোস্টেটের স্থূল এবং হিস্টোলজিক্যাল পরীক্ষার মাধ্যমে মডেলিংয়ের সাফল্য নিশ্চিত করা হয়েছিল (এডিমা, কনজেশন, এপিথেলিয়াল অবক্ষয়, এবং প্রদাহজনক অনুপ্রবেশ)।

2.2.2 গ্রুপিং এবং চিকিত্সা

সত্তরটি পুরুষ এসডি ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে সাতটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল (n=10):

স্বাভাবিক নিয়ন্ত্রণ

শাম অপারেশন

মডেল নিয়ন্ত্রণ

নিম্ন-, মাঝারি- এবং উচ্চ-ডোজ XFHY গ্রুপ

তামসুলোসিন গ্রুপ

মানুষের সমতুল্য ডোজ (7.29 গ্রাম/কেজি/দিন) এর উপর ভিত্তি করে ডোজ গণনা করা হয়েছিল। XFHY 0.3645 g/mL (নিম্ন) এবং 1.458 g/mL (উচ্চ) এ ওরাল গ্যাভেজের মাধ্যমে পরিচালিত হয়েছিল। ট্যামসুলোসিন 0.0018 মিলিগ্রাম/কেজিতে পরিচালিত হয়েছিল। সমস্ত চিকিত্সা 28 দিন স্থায়ী হয়, 8 দিনের পোস্ট-মডেলিং শুরু হয়।

2.2.3 হিস্টোপ্যাথলজিকাল মূল্যায়ন

বাম প্রোস্টেট লোবগুলি 4% প্যারাফর্মালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল, প্যারাফিনে এম্বেড করা হয়েছিল, বিভাগযুক্ত ছিল এবং হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন দিয়ে দাগযুক্ত ছিল। হিস্টোলজিকাল পরিবর্তনগুলি হালকা মাইক্রোস্কোপির অধীনে মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

2.2.4 প্রদাহজনক চিহ্নিতকারীর জন্য ELISA

পেটের মহাধমনির মাধ্যমে সংগৃহীত রক্ত ​​সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, এবং TNF- , IL-1 , এবং COX-2 এর সিরাম স্তরগুলি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে ELISA কিট ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।

জিন এক্সপ্রেশনের জন্য 2.2.5 qRT-PCR

প্রোস্টেট টিস্যু থেকে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল এবং সিডিএনএ-তে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল। PI3K, Akt, এবং NF-κB p65 এর জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার ব্যবহার করে রিয়েল-টাইম পিসিআর পরিচালিত হয়েছিল। GAPDH একটি অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। আপেক্ষিক অভিব্যক্তি 2^-ΔΔCt পদ্ধতি ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল।

2.2.6 প্রোটিন প্রকাশের জন্য ওয়েস্টার্ন ব্লট

RIPA বাফার ব্যবহার করে হিমায়িত প্রোস্টেট টিস্যু থেকে প্রোটিন বের করা হয়েছিল। পরিমাপ করার পরে, প্রোটিনগুলি SDS-PAGE দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল, PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65, এবং p-NF-κB p65 এর বিরুদ্ধে প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে অনুসন্ধান করা হয়েছিল। এইচআরপি-কঞ্জুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি এবং ইসিএল সনাক্তকরণ ব্যবহার করা হয়েছিল। ইমেজজে ব্যবহার করে ব্যান্ডের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.2.7 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা তিন প্রতিলিপিতে সম্পাদিত হয়েছিল। গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8 ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। একাধিক গ্রুপ তুলনার জন্য LSD বা Dunnet's টেস্টের পরে একমুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল। পি <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।

3. ফলাফল

3.1 নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি এবং আণবিক ডকিং

যৌগ-লক্ষ্য ছেদ:912 যৌগিক লক্ষ্য এবং 2,197 রোগের লক্ষ্য 374টি ওভারল্যাপিং লক্ষ্য অর্জন করেছে।

শীর্ষ যৌগ চিহ্নিত করা হয়েছে:Quercetin, kaempferol, pelargonidin, naringenin, and byakangelicol- সবই পরিচিত প্রদাহ বিরোধী এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব সহ।

পিপিআই বিশ্লেষণ:মূল লক্ষ্যগুলির মধ্যে রয়েছে TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1, এবং NFKB1।

GO এবং KEGG সমৃদ্ধকরণ:সমৃদ্ধ পথের মধ্যে রয়েছে PI3K/Akt, MAPK, RAS এবং প্রদাহ-সম্পর্কিত জৈবিক প্রক্রিয়া।

আণবিক ডকিং:মূল লক্ষ্য এবং প্রধান যৌগগুলির মধ্যে দৃঢ় বাঁধাই সম্বন্ধ পরিলক্ষিত হয়েছে (বাইন্ডিং শক্তি -5.0 kcal/mol এর চেয়ে কম বা সমান), যা উচ্চ জৈব সক্রিয়তার পরামর্শ দেয়।

3.2 পরীক্ষামূলক বৈধতা

3.2.1 HE স্টেনিং

মডেল গ্রুপের ইঁদুরগুলি গ্রন্থির এপিথেলিয়াল অবক্ষয়, স্ট্রোমাল এডিমা এবং ব্যাপক প্রদাহজনক অনুপ্রবেশ দেখিয়েছে। XFHY-চিকিত্সা করা গ্রুপগুলি প্রদাহ হ্রাস করেছে, বিশেষত মাঝারি- এবং উচ্চ-ডোজ গ্রুপগুলিতে।

3.2.2 প্রদাহজনক মার্কার স্তর

মডেল গ্রুপের তুলনায়, XFHY উল্লেখযোগ্যভাবে সিরাম TNF- , IL-1 , এবং COX-2 মাত্রা (P < 0.01) হ্রাস করেছে, যা প্রদাহ-বিরোধী কার্যকারিতা নির্দেশ করে।

3.2.3 জিন এক্সপ্রেশন (qPCR)

XFHY ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে PI3K, Akt, এবং NF-κB p65-এর mRNA মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। কম ডোজ কমে Akt এবং p65 শুধুমাত্র; মাঝারি- এবং উচ্চ-ডোজ গ্রুপগুলি বৃহত্তর দমন দেখিয়েছে।

3.2.4 প্রোটিন এক্সপ্রেশন (ওয়েস্টার্ন ব্লট)

PI3K, Akt (Ser473, Thr308), এবং NF-κB p65-এর ফসফোরিলেশন স্তরগুলি মডেল গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হয়েছিল এবং XFHY-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে, বিশেষত মাঝারি এবং উচ্চ মাত্রায় হ্রাস পেয়েছে।

 

4. আলোচনা

ক্লিনিকাল অভিজ্ঞতার উপর ভিত্তি করে, এই গবেষণাটি নিশ্চিত করে যেCistanche-ভিত্তিক XFHYসিপি/সিপিপিএস-এ একটি উল্লেখযোগ্য অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব রয়েছে। নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি বিশেষত মূল সক্রিয় যৌগ চিহ্নিত করেছেquercetin, প্রমাণিত অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য সহ। PPI বিশ্লেষণ যেমন টার্গেট হাইলাইটTNF, IL6, এবংAKT1, যা প্রোস্টাটাইটিসে প্রদাহের কেন্দ্রবিন্দু।

কেইজিজি বিশ্লেষণে জড়িত থাকার পরামর্শ দেওয়া হয়েছেPI3K/Akt/NF-κBসংকেত পথ-প্রদাহ এবং ইমিউন নিয়ন্ত্রণে ব্যাপকভাবে স্বীকৃত। XFHY এই পথকে বাধা দিয়ে থেরাপিউটিক প্রভাব প্রয়োগ করতে পারে, এইভাবে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন এক্সপ্রেশন হ্রাস করে।

উপরন্তু, Akt (Ser473 এবং Thr308) এর দ্বৈত ফসফোরিলেশন NF-κB সক্রিয়করণের জন্য গুরুত্বপূর্ণ বলে মনে হচ্ছে। XFHY উভয় সাইটেই ফসফোরিলেশনকে বাধা দেয়, আপস্ট্রিম অ্যাক্ট দমনের মাধ্যমে NF-κB সংকেতকে বাধা দেওয়ার পরামর্শ দেয়।

উপসংহার

XFHY PI3K/Akt/NF-κB পথ অবরুদ্ধ করে, এর অভিব্যক্তি হ্রাস করে CP/CPPS উপশম করতে পারেIL-1 , TNF-, এবংCOX-2, এবং প্রোস্টেট টিস্যুতে প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া হ্রাস করা। পথের সম্পৃক্ততা, বিশেষ করে Ser473 এবং Thr308-এ Akt-এর ফসফোরিলেশন, XFHY-এর কার্যকারিতার জন্য একটি সম্ভাব্য যান্ত্রিক ব্যাখ্যা প্রদান করে। PI3K/Akt/NF-κB হল নির্দিষ্ট পথ যার মাধ্যমে XFHY তার থেরাপিউটিক ক্রিয়া সম্পাদন করে কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য আরও গবেষণার নিশ্চয়তা রয়েছে।

 

স্বার্থের দ্বন্দ্ব:
লেখক স্বার্থের কোন দ্বন্দ্ব ঘোষণা করেন না।

---

আপনি একটি চান যদি আমাকে জানানগ্রাফিকাল বিমূর্ত, সারসংক্ষেপ টেবিল, বাপাওয়ারপয়েন্ট উপস্থাপনাএই গবেষণার উপর ভিত্তি করে!