কোলন ক্যান্সারের কার্যকরী চিকিৎসার জন্য টিএলআর অ্যাগোনিস্ট এবং সিডি47-এসআইআরপি চেকপয়েন্ট ব্লকেড সহ লাইপোসোম-ভিত্তিক কো-ইমিউনোথেরাপি

বিমূর্ত:

অ্যান্টিটিউমার অনাক্রম্যতা ক্যান্সার থেরাপির একটি অপরিহার্য উপাদান এবং এটি প্রাথমিকভাবে সহজাত ইমিউন প্রতিক্রিয়া দ্বারা মধ্যস্থতা করে, যা অভিযোজিত প্রতিরোধী প্রতিক্রিয়া শুরু এবং গঠনে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। উদীয়মান প্রমাণগুলি ক্যান্সারের চিকিত্সার জন্য প্রতিশ্রুতিবদ্ধ থেরাপিউটিক লক্ষ্য হিসাবে CD47 এবং টোল-লাইক রিসেপ্টর 7 (TLR7) এর মতো সহজাত ইমিউন চেকপয়েন্ট এবং প্যাটার্ন রিকগনিশন রিসেপ্টরকে চিহ্নিত করেছে। ফিউশন প্রোটিন Fc-CV1 এর উপর ভিত্তি করে, যা একটি উচ্চ-সম্পর্কযুক্ত SIRP ভেরিয়েন্ট (CV1) এবং মানব IgG1 অ্যান্টিবডির Fc খণ্ড নিয়ে গঠিত, আমরা এমন একটি প্রস্তুতিকে কাজে লাগিয়েছি যা Fc-CV1 কে ইমিকুইমড (TLR7 অ্যাগোনিস্ট)-লোডেড লাইপোসোমগুলির সাথে যুক্ত করে। CILPs) সক্রিয়ভাবে CT26 লক্ষ্য করতে। WT সিনজেনিক কোলন টিউমার মডেল। ইন ভিট্রো গবেষণায় দেখা গেছে যে CILPs বিনামূল্যে ইমিকুইমডের তুলনায় উচ্চতর টেকসই রিলিজ বৈশিষ্ট্য এবং সেল আপটেক দক্ষতা প্রদর্শন করেছে। ভিভোতে, অ্যাসেস প্রমাণ করেছে যে সিআইএলপিগুলি টিউমারগুলিতে আরও দক্ষ সঞ্চয় এবং নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীগুলির তুলনায় আরও উল্লেখযোগ্য টিউমার দমন প্রভাব প্রদর্শন করেছে। এই ইমিউনোথেরাপি প্রস্তুতির কম ডোজ এবং কম বিষাক্ততার সুবিধা রয়েছে। এই ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে ইমিউন চেকপয়েন্ট ব্লকেড (ICB) থেরাপি এবং সহজাত অনাক্রম্যতা অ্যাগোনিস্টের সংমিশ্রণ, যেমন Fc-CV1 এবং এই গবেষণায় ব্যবহৃত ইমিকুইমড-লোডেড লাইপোসোম প্রস্তুতি, টিউমার থেরাপির জন্য একটি অত্যন্ত কার্যকর কৌশল উপস্থাপন করতে পারে।

সিস্টানচে টিউবুলোসা-অ্যান্টিটিউমারের উপকারিতা

কীওয়ার্ড:

imiquimod; liposome; Fc-CV1; ইমিউনোথেরাপি; মলাশয়ের ক্যান্সার

1। পরিচিতি

ক্যান্সারের বৈশ্বিক ঘটনা বার্ষিক বৃদ্ধি অব্যাহত রয়েছে, যা বিশ্বের জনসংখ্যার স্বাস্থ্যের জন্য একটি গুরুতর হুমকি সৃষ্টি করে এবং স্বাস্থ্যসেবা ব্যবস্থার উপর একটি ভারী বোঝা চাপিয়ে দেয়। বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার একটি প্রতিবেদন অনুসারে, 2020 সালে, বিশ্বব্যাপী 19.29 মিলিয়ন ক্যান্সারের নতুন কেস এবং 9.96 মিলিয়ন ক্যান্সারের মৃত্যু ঘটেছে [1]। যাইহোক, ক্লিনিকাল রোগ নির্ণয়, সার্জারি, রেডিওথেরাপি এবং কেমোথেরাপির ক্রমাগত উন্নতির সাথে, ক্যান্সার রোগীদের সামগ্রিক বেঁচে থাকা এবং জীবনের মান উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হয়েছে। উল্লেখযোগ্যভাবে, ইমিউনোথেরাপি, যেটি 1890-এর দশকে কোলি ভ্যাকসিনের মাধ্যমে উদ্ভূত হয়েছিল [2], রেডিওথেরাপি এবং কেমোথেরাপি উভয়েরই পূর্ববর্তী এবং গত দশকে উল্লেখযোগ্য অগ্রগতি করেছে, ক্যান্সার রোগীদের উপকার করেছে।

টিউমার ইমিউনোথেরাপি তার চমৎকার বায়োকম্প্যাটিবিলিটি এবং উচ্চ নির্দিষ্টতার জন্য স্বীকৃত হয়েছে এবং টিউমার কোষগুলি [3-5] নির্মূল করার জন্য ইমিউন প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করতে সক্ষম। টিউমার ইমিউনোথেরাপির দুটি প্রধান কৌশল হল রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা বৃদ্ধি এবং রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা স্বাভাবিককরণ [6]। রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা বৃদ্ধির ধরণগুলি মূলত সাইটোকাইন থেরাপি, টিউমার থেরাপিউটিক ভ্যাকসিন এবং মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি নিয়ে গঠিত। টোল-লাইক রিসেপ্টর (TLRs) কে ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপির সম্ভাব্য লক্ষ্য হিসাবে বিবেচনা করা হয় কারণ সহজাত ইমিউন সিস্টেম সক্রিয়করণে তাদের ভূমিকা রয়েছে। টিএলআর অ্যাগোনিস্টগুলি একটি ইমিউন সহায়ক হিসাবে তৈরি করা হয়েছে এবং বিভিন্ন ধরণের টিএলআর অ্যাগোনিস্ট ক্লিনিকাল ট্রায়ালের মধ্য দিয়ে চলেছে [7]। মনোফসফোরিল লিপিড এ এবং ইমিকুইমড, টিএলআর 4 এবং টিএলআর 7 অ্যাগোনিস্ট যথাক্রমে ক্লিনিকাল অ্যাপ্লিকেশনের জন্য খাদ্য ও ওষুধ প্রশাসনের কাছ থেকে অনুমোদন পেয়েছে [7-9]। ইমিকুইমোড, একটি TLR7 অ্যাগোনিস্ট [9], ইমিউন প্রতিক্রিয়া সক্রিয় করে এবং TLR7 [10,11] ট্রিগার করে টিউমার-বিরোধী কার্যকলাপ বাড়ায়। ইমিউন স্বাভাবিকীকরণ কৌশলটি ইমিউন চেকপয়েন্ট ব্লকেড (ICB) ওষুধ দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয় যা ত্রুটিপূর্ণ অভিযোজিত টিউমার ইমিউন প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে। যেহেতু প্রথম চেকপয়েন্ট ইনহিবিটর, ipilimumab 2011 সালে মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে ক্লিনিকাল অ্যাপ্লিকেশনের জন্য অনুমোদিত হয়েছিল, ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস, যেমন PD1/PDL1 ইনহিবিটরস, ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপি [12-14] এ একটি যুগান্তকারী সাফল্য এনেছে। PD1/PDL1-এর মতো অভিযোজিত ইমিউন চেকপয়েন্ট ব্যতীত, কিছু সহজাত ইমিউন চেকপয়েন্ট, যেমন SIRP-CD47, এছাড়াও অনেক মনোযোগ আকর্ষণ করেছে এবং অ্যান্টিবডি ড্রাগ ডেভেলপমেন্টে উল্লেখযোগ্য আগ্রহের ক্ষেত্র হয়ে উঠেছে [15-17]।

SIRP -CD47 চেকপয়েন্ট প্রথম চিহ্নিত করা হয়েছিল 1999 সালে [18,19]। SIRP হল একটি CD47 রিসেপ্টর যা কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের নিউরন [20] এবং মাইলয়েড কোষে প্রকাশিত হয়, যার মধ্যে মনোসাইট, ম্যাক্রোফেজ, গ্রানুলোসাইট এবং ডেনড্রাইটিক কোষ রয়েছে। CD47 হল একটি "স্ব-লেবেলিং অণু" যা প্রায় সমস্ত স্বাভাবিক কোষে প্রকাশ করা হয় এবং বেশিরভাগ টিউমার কোষে অতিমাত্রায় প্রকাশ করা হয় [২১]। টিউমার কোষের পৃষ্ঠে, CD47 SIRP-এর সাথে আবদ্ধ হয়, যা ম্যাক্রোফেজ-মধ্যস্থ ফ্যাগোসাইটোসিসকে বাধা দেয়, যা টিউমার ইমিউন পালানোর একটি গুরুত্বপূর্ণ উপায় [22]। এটি দেখানো হয়েছে যে টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের মধ্যে ম্যাক্রোফেজের ফ্যাগোসাইটোসিস বাড়ানো যেতে পারে যখন CD47 এবং SIRP এর বাঁধন ব্লক করা হয় [20-25]। অতএব, ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটর যা CD47/SIRP পথকে অবরুদ্ধ করে তা ক্যান্সার থেরাপিতে তৈরি এবং প্রয়োগ করা হয়েছে [26]।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

এই গবেষণায়, আমরা কোলন ক্যান্সারের চিকিৎসার জন্য ইমিকুইমড এবং ফিউশন প্রোটিন (Fc-CV1) এর সংমিশ্রণ ব্যবহার করেছি। CV1 হল একটি পরিবর্তিত মানব রিকম্বিন্যান্ট SIRP প্রোটিন যার মূল প্রোটিনের তুলনায় CD47 এর জন্য 50,000-গুণ বেশি সখ্যতা রয়েছে [27]। Fc-CV1 "নবস-ইনটু-হোল" প্রযুক্তি ব্যবহার করে নির্মিত হয়েছিল, CV1 মনোমার এবং মানব IgG1 এর Fc খণ্ডের উপর ভিত্তি করে। ইমিকুইমড [২৮,২৯] এর সাথে সম্পর্কিত দুর্বল থেরাপিউটিক কার্যকারিতা এবং সিস্টেমিক বিষাক্ততার সীমাবদ্ধতাগুলি কাটিয়ে উঠতে, আমরা ইথানল ইনজেকশন পদ্ধতির মাধ্যমে ন্যানোলিপোসোমগুলি প্রস্তুত করেছি। ন্যানোলিপোসোমগুলির ওষুধ সরবরাহে কম বিষাক্ততার বৈশিষ্ট্য রয়েছে [30,31]। পরবর্তীকালে, ইমিকুইমড লাইপোসোমগুলিতে আবদ্ধ ছিল যা পৃষ্ঠ Fc-CV1 সংযোজিত হয়েছিল। অবশেষে, এই অভিনব ন্যানো-প্রস্তুতি টিউমার টিস্যুতে সক্রিয়ভাবে TLR7 অ্যাগোনিস্ট সরবরাহ করতে পারে এবং একটি ICB ড্রাগ এবং একটি TLR অ্যাগোনিস্ট হিসাবে দ্বৈত কাজ করে। এটি CD47+ CT26.WT সিনজেনিক কোলন টিউমার মডেল [32] এর চিকিত্সার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল।

2. ফলাফল এবং আলোচনা

2.1। LPs (ব্ল্যাঙ্ক লাইপোসোম), আইএলপি (নন-সিডি47-টার্গেটেড ইমিকুইমড-এনক্যাপসুলেটেড লাইপোসোম), সিএলপি (সিডি 47 টার্গেটেড লাইপোসোম), এবং সিআইএলপি (কাপল্ড এফসি-সিভি1 থেকে ইমিকুইমড (টিএলআর7 অ্যাগোনিস্ট)-লোড করা

CILPs সফলভাবে ইথানল ইনজেকশন এবং অ্যামোনিয়াম সালফেট গ্রেডিয়েন্ট পদ্ধতি দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল। চিত্র 1A CILP-এর সংশ্লেষণ প্রক্রিয়া প্রদর্শন করে। একটি TEM বিশ্লেষণ দেখিয়েছে যে CILPগুলি গোলাকার এবং অভিন্ন আকারের ছিল (চিত্র 1B)। তদ্ব্যতীত, ডিএলএস ফলাফল প্রকাশ করেছে যে চারটি লাইপোসোমের কণার আকার ছিল ইউনিমোডাল বিতরণ (চিত্র 1 সি)। বাইন্ডিং রেট (BR) SDS-PAGE দ্বারা যাচাই করা হয়েছে, যা চিত্র 1D, E-তে প্রদর্শিত হয়েছে। চিত্র 1D Fc-CV1-এর আণবিক ওজন এবং ডায়ালাইজড এবং প্রাক-ডায়ালাইজড CILP-এর আপেক্ষিক ব্যান্ড উজ্জ্বলতা দেখায়। ইমেজ J-এর ইলেক্ট্রোফোরেটিক ব্যান্ডের স্ক্যানিং ডেনসিটোমেট্রির (চিত্র 1E) মাধ্যমে BR কে 67.13 ± 37.10% গণনা করা হয়েছিল, যা CD47-লক্ষ্যযুক্ত টিউমার কোষের সম্ভাবনা প্রদান করে।

চিত্র 1. (A) CILP-এর সংশ্লেষণের পরিকল্পিত চিত্র। (B) CILP-এর TEM চিত্র

এইচপিএলসি ইমিকুইমড (পরিপূরক চিত্র S1) এর এনক্যাপসুলেশন দক্ষতা (EE) সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। পরিপূরক চিত্র S1A-তে প্রদর্শিত হিসাবে, বিনামূল্যে ইমিকুইমড একটি উল্লেখযোগ্য একক শিখর দেখায়, যখন সিএলপিগুলি একই পরীক্ষার অবস্থার অধীনে কোন শিখর দেখায়নি (পরিপূরক চিত্র S1B)। অতএব, পরীক্ষার শর্তে সরাসরি CILP সনাক্ত করা সম্ভব। প্রত্যাশিত হিসাবে, ডায়ালাইসিসের আগে এবং পরে সিআইএলপিগুলির সনাক্তকরণের মানগুলি যথাক্রমে মোট ওষুধের সামগ্রী এবং লাইপোসোমে ওষুধের সামগ্রী হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল (পরিপূরক চিত্র S1C, D)। ইমিকুইমডের EE 85.44 ± 4.11% হিসাবে গণনা করা হয়েছিল। রিপোর্ট করা প্যাসিভ-লোডিং ড্রাগ-ডেলিভারি সিস্টেম [33-35] এর সাথে তুলনা করে, এই গবেষণাটি উচ্চতর এনক্যাপসুলেশন দক্ষতা এবং আরও সুবিধাজনক প্রস্তুতি প্রক্রিয়া অর্জন করেছে।

DLS দেখিয়েছে যে LP-এর ব্যাস ছিল 111.567 ± 0.655 nm, যখন CLPs, ILPs, এবং CILPs 117.467 ± 0.34{{10} এর সামান্য বড় আকার দেখায় } nm, 120.233 ± 0.776 nm, এবং 13{{30}।{38}}33 ± 0.974 nm, যথাক্রমে (সারণী 1)। এই লাইপোসোমগুলির আকারের পরিবর্তনগুলি Fc-CV1 এবং ইমিকুইমোডের পরিবর্তনের জন্য দায়ী করা যেতে পারে। PDI 0.1 এর কাছাকাছি ছিল (টেবিল 1), ইঙ্গিত করে যে এই ড্রাগ-ডেলিভারি যানগুলি তাদের বিতরণে অত্যন্ত সমজাতীয় ছিল। অতিরিক্তভাবে, LPs, CLPs, ILPs, এবং CILPs-এর জেটা-সম্ভাব্য মানগুলি −2.231 ± 0.167 mV, −2.492 ± 0.033 mV, −2.383 ± 0.070 mV, এবং −2.07, −2.07, মানসম্পন্ন −2.07 mV. , পরামর্শ দেয় যে পৃষ্ঠ-সংযোজিত Fc-CV1 এবং এনক্যাপসুলেটেড ইমিকুইমড লাইপোসোমের চার্জে সামান্য প্রভাব ফেলেছিল।

সারণি 1. যথাক্রমে এলপি, সিএলপি, আইএলপি এবং সিআইএলপি-এর ব্যাস, জেটা-সম্ভাব্য, পিডিআই এবং ইই।

2.2। ইন ভিট্রো সেল আপটেক দক্ষতা

একটি উচ্চ-কন্টেন্ট ইমেজিং সিস্টেম ব্যবহার করে CT26.WT কোষ দ্বারা গৃহীত Cy5 এর ফ্লুরোসেন্স তীব্রতার মাধ্যমে CILP-এর সেল গ্রহণের দক্ষতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। চিত্র 2-এ দেখানো হয়েছে, বিনামূল্যে Cy5 এবং ILP-Cy5 গ্রুপের তুলনায়, CILPs-Cy5 গ্রুপগুলি 30 মিনিটের ইনকিউবেশনের পরে একটি শক্তিশালী কোষ গ্রহণের ক্ষমতা প্রদর্শন করেছে। এই ফলাফলগুলি অনুমান করে যে Fc-CV1 এফসি-সিভি 1 রিসেপ্টরের সাথে সুনির্দিষ্ট সখ্যতার কারণে ইমিকুইমড-লোডেড লাইপোসোমের অন্তঃকোষীয় ডেলিভারি ক্ষমতা বাড়িয়েছে, যা আরও শক্তিশালী অ্যান্টি-টিউমার প্রভাবের দিকে পরিচালিত করে।

চিত্র 2. বিনামূল্যে Cy5, ILPs-Cy5, এবং CILPs-Cy5 (লাল) 0.5 ঘণ্টার জন্য ইনকিউবেশনের পর CT26.WT কোষের ছবি এবং DAPI (নীল) দিয়ে দাগ দেওয়া। স্কেল বার: 50 µm। (n {{10}})। * p <0.05; **** p < 0.0001

2.3। Liposomes এর বক্ররেখা মুক্তি

ফ্রি ইমিকুইমড, আইএলপি এবং সিআইএলপি-এর ড্রাগ রিলিজ কার্ভগুলি ভিভো পরিবেশে একটি অনুকরণে পরিমাপ করা হয়েছিল। চিত্র 3 দেখায় যে বিনামূল্যে ইমিকুইমড সম্পূর্ণরূপে 1 ঘন্টা পরে প্রকাশিত হয়েছিল, যখন ILPs এবং CILPs এর সাথে আবদ্ধ ইমিকুইমডের মুক্তির হার (RR) ছিল মাত্র 54.75 ± 4৷{8}} 12 ঘন্টায় 8% এবং 39.70 ± 0.05% , যথাক্রমে। তদুপরি, ILPs এবং CILPs-এ ইমিকুইমডের ধীর মুক্তি লাইপোসোমের নিয়ন্ত্রিত ড্রাগ-রিলিজ সম্পত্তির সাথে বন্ধ করা যেতে পারে। আইএলপি এবং সিআইএলপি-তে ইমিকুইমোডের আরআর 96 ঘণ্টায় কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখায়নি, যা ইঙ্গিত করে যে "পোস্ট সন্নিবেশ" লাইপোসোমের ঝিল্লি স্থায়িত্বের উপর একটি নগণ্য প্রভাব প্রদর্শন করেছে।

চিত্র 3. পিবিএস-এ 37 ◦C তাপমাত্রায় বিনামূল্যে ইমিকুইমড, আইএলপি এবং সিআইএলপিগুলির ইমিকুইমড রিলিজ কার্ভ। ডেটা মানে ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (n=3) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। * p < 0।{5}}5, ** p < 0.01

2.4। সাইটোটক্সিসিটি স্টাডি

ভিট্রোতে CILP-এর সাইটোটক্সিসিটি অধ্যয়ন করার জন্য, CCK{{0}} অ্যাস CT26.WT কোষগুলিতে সঞ্চালিত হয়েছিল। চিত্র 4 এ দেখানো হয়েছে, কম ঘনত্বে (0.1–1 µg/mL) CILPগুলি সাইটোটক্সিসিটি প্রদর্শন করেনি, যা ইমিউনাইজেশন থেরাপির নিরাপত্তার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। 5 µg/mL ইমিকুইমোড চিকিত্সার পরে কোষের কার্যকারিতা সামান্য হ্রাস পেয়েছিল, সম্ভবত ইমিকুইমোড [36] দ্বারা প্ররোচিত ROS এবং এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলাম-মধ্যস্থ ইমিউনোজেনিক কোষের মৃত্যুর কারণে। অধিকন্তু, CILPs কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় কোষের কার্যক্ষমতায় উল্লেখযোগ্য হ্রাসের দিকে পরিচালিত করে, যা ইমিকুইমড এবং Fc-CV1-এর সিনারজিস্টিক প্রভাবকে দায়ী করা হয়।

চিত্র 4. Fc-CV1, imiquimod, CLPs, ILPs, এবং CILPs দিয়ে 24 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করা কোষগুলির কার্যকারিতা। Fc-CV1 এবং ইমিকুইমোডের ঘনত্ব উভয়ই ছিল 0–10 µg/mL। * p < 0.05, ** p < 0.01, ns=কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নেই

2.5। বায়োডিস্ট্রিবিউশন স্টাডি

টিউমার এবং প্রধান অঙ্গগুলিতে বিভিন্ন ফর্মুলেশনের বিতরণ এবং সঞ্চয় সরাসরি থেরাপিউটিক প্রভাবকে প্রভাবিত করে। ইন্ট্রাভেনাস অ্যাডমিনিস্ট্রেশনের পরে, 24 ঘন্টা পরে টিউমার এবং প্রধান অঙ্গগুলিতে বিভিন্ন ফর্মুলেশনের বিতরণ এবং জমাকরণের মূল্যায়ন করার জন্য একটি কাছাকাছি-ইনফ্রারেড ভাইভিসেকশন সিস্টেম ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স সংকেতগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। চিত্র 5-এ দেখানো হয়েছে ILPs-Cy5 এবং CILPs-Cy5-এর মোট ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা বিনামূল্যে Cy5-এর চেয়ে বেশি ছিল, যা নির্দেশ করে যে লাইপোসোমগুলি ভিভোতে দীর্ঘ-সঞ্চালনের সম্পত্তির অধিকারী ছিল। এছাড়াও, টিউমার টিস্যুতে CILPs-Cy5 ট্রিটমেন্ট গ্রুপের ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা ছিল সর্বোচ্চ, যা Fc-CV1 লিগান্ডের টিউমার-টার্গেটিং প্রভাবকে দায়ী করা যেতে পারে, যার ফলে টিউমার-বিরোধী প্রভাব বৃদ্ধি পায়। আশ্চর্যজনকভাবে, লিভার এবং প্লীহাগুলির ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা অন্যান্য অঙ্গগুলির তুলনায় বেশি শক্তিশালী ছিল, যা সম্ভবত লিভার এবং কিডনিতে রেটিকুলোএন্ডোথেলিয়াল সিস্টেম (আরইএস) দ্বারা লাইপোসোমের ফ্যাগোসাইটোসিসের কারণে হয়েছে [37]।

চিত্র 5. শিরায় প্রবেশের 24 ঘন্টা পরে টিউমার এবং প্রধান অঙ্গগুলিতে Cy5-ফ্লুরোসেন্সের বিতরণ। ডেটা মানে ± আদর্শ বিচ্যুতি (n=3) হিসাবে দেখানো হয়। **** p < 0.0001

2.6। ভিভো টিউমার ইনহিবিশন স্টাডিতে

থেরাপিউটিক সময়সূচী (চিত্র 6A) এবং বিভিন্ন প্রস্তুতির প্রভাব চিত্র 6-এ দেখানো হয়েছে। পিবিএস এবং এলপি গ্রুপের সাথে তুলনা করে, অন্যান্য চিকিত্সা গ্রুপগুলি নির্দিষ্ট টিউমার-দমনকারী প্রভাবগুলি প্রদর্শন করেছে। উল্লেখযোগ্যভাবে, CILPs-এর সাথে চিকিত্সার পরে টিউমারের পরিমাণ ন্যূনতম ছিল, পরামর্শ দেয় যে CILPs একটি চমৎকার টিউমার দমনকারী প্রভাব (চিত্র 6B) ধারণ করেছে।

চিত্র 6. (A) CT26.WT টিউমার মডেলে অ্যান্টি-কোলন ক্যান্সার চিকিত্সার পরিকল্পিত চিত্র। (খ) চিকিৎসার সময় টিউমারের আয়তনের বৃদ্ধি বক্ররেখা। (C) আপেক্ষিক টিউমার ফটোগ্রাফ এবং (D) টিউমারের ওজন 17 তম দিনে বিভিন্ন চিকিত্সা গ্রুপ থেকে সংগ্রহ করা হয়েছে। (E) শরীরের ওজনের আপেক্ষিক শরীরের ওজনের অনুপাত 0 দিনের তুলনায়। ডেটা গড় হিসাবে উপস্থাপিত হয় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (n=5)। * p < 0৷{8}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.001৷

পরীক্ষার শেষে, ইঁদুরগুলিকে বলি দেওয়া হয়েছিল এবং বিভিন্ন প্রস্তুতির থেরাপিউটিক কার্যকারিতা নির্ধারণের জন্য তাদের টিউমারগুলি এক্সাইজ করা হয়েছিল, ছবি তোলা হয়েছিল এবং ওজন করা হয়েছিল। চিত্র 6C, D-তে দেখানো হয়েছে, CILP-এর চিকিত্সা গোষ্ঠীর অন্যান্য গোষ্ঠীর তুলনায় সবচেয়ে ছোট এবং হালকা টিউমার ছিল, যা প্রমাণ করে যে CILP-গুলি সবচেয়ে বড় টিউমার দমনকারী প্রভাবের অধিকারী। সারণি 2 দেখায় যে CILP-এর টিউমার বৃদ্ধির বাধা হার 84.35% হিসাবে গণনা করা হয়েছিল। উপরন্তু, 84.35% টিউমার দমন হার CLPs এবং ILPs গোষ্ঠীগুলির তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল এবং এর মানে হল "আমাকে খাবেন না" অক্ষকে অবরুদ্ধ করার এবং ইমিউন প্রতিক্রিয়া সক্রিয়করণের একটি সমন্বয়মূলক প্রভাব রয়েছে। . ভিট্রোতে (2.5-5 μg/mL) সমতুল্য প্রস্তুতির সাথে তুলনা করে, উচ্চ প্রতিরোধের হার ফর্মুলেশন-অ্যাক্টিভেটেড ইমিউন রেসপন্সের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত ছিল এবং ভিভোতে ইমিউন এস্কেপ মেকানিজমকে অবরুদ্ধ করেছিল, যা ভিট্রোতে পাওয়া যায় না।

সারণী 2. টিউমার ওজন এবং বিভিন্ন চিকিত্সা গ্রুপের টিউমার বৃদ্ধি বাধা (TGI) এর তথ্য।

2.7। CILPs টি-সেলে অনুপ্রবেশ এবং IFN এর ক্ষরণ বৃদ্ধি করেছে

টিউমারের ইমিউন সেল মিলিউ অন্বেষণ করতে, CILPs দ্বারা প্ররোচিত ইমিউন সেলকে অ্যান্টি-টিউমার অ্যাস শেষে ইমিউনোহিস্টোকেমিকভাবে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। CILPs গ্রুপের টিউমার বিভাগে CD4+ এবং CD8+ T কোষগুলি বৃদ্ধি করা হয়েছিল (চিত্র 7)। Fc-CV1 এবং ইমিকুইমড থেরাপির সহ-ডেলিভারির ফলে উল্লেখযোগ্য CD4+ এবং CD8+ টি কোষের অনুপ্রবেশ ঘটেছে। এছাড়াও, CILPs চিকিত্সার অধীনে থাকা টিউমারগুলিতে একটি উল্লেখযোগ্য IFN নিঃসরণ ছিল, কারণ CILPs টোল-সদৃশ রিসেপ্টর 7 ট্রিগার করে এবং ইমিউন প্রতিক্রিয়া সক্রিয় করে।

চিত্র 7. মাউস টিউমার টিস্যুর ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি; ইতিবাচক কোষ বাদামী দাগ হয়. স্কেল বার, 50 µm (n=5)।

2.8। CILPs এর জৈব নিরাপত্তা মূল্যায়ন

CILPs-মধ্যস্থ থেরাপির জৈব নিরাপত্তাও থেরাপিউটিক মূল্যায়ন অ্যাক্সেস করার ক্ষেত্রে একটি গুরুত্বপূর্ণ সূচক ছিল। ভিভোতে টিউমার প্রতিরোধের অধ্যয়নের সময়, CILPs চিকিত্সার সময়কালে উল্লেখযোগ্য ওজন হ্রাস করেনি (চিত্র 6D)। লিভার এবং কিডনির জৈব রাসায়নিক পরামিতিগুলি ইঁদুরের স্ট্যান্ডার্ড রেফারেন্স রেঞ্জ (টেবিল 3) অনুসারে স্বাভাবিক পরিসরে ছিল এবং অঙ্গের হিস্টোলজি কোনও উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন দেখায়নি, যা ইঙ্গিত করে যে CILP গুলি চমৎকার জৈব নিরাপত্তার অধিকারী ছিল (চিত্র 8)। এই ফলাফলগুলি ক্যান্সার চিকিত্সার জন্য নিরাপদ এবং কার্যকর ইমিউনোথেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে CILP-এর সম্ভাব্যতা মূল্যায়নে গুরুত্বপূর্ণ।

সারণী 3. লিভার এবং কিডনির জৈব রাসায়নিক পরামিতি

চিত্র 8. H&E (হেমাটক্সিলিন এবং ইওসিন) প্রধান অঙ্গগুলির দাগ। স্কেল বার, 50 µm (n=3)

3. উপকরণ এবং পদ্ধতি

3.1। উপকরণ

Imiquimod MedChem এক্সপ্রেস (সাংহাই, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। Fc-CV1 অ্যান্টিবডি ড্রাগস এবং টার্গেটেড থেরাপির স্টেট কী ল্যাবরেটরি দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। কোলেস্টেরল, হাইড্রোজেনেটেড লেসিথিন (HSPC), DSPE-PEG2000, DSPE-PEG2000-NHS, এবং DSPE-PEGCy5 Xi'an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. (Si'an, China) থেকে কেনা হয়েছে। 40,6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিন্ডোল (DAPI) কীজেন বায়োটেক (নানজিং, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। অ্যামোনিয়াম সালফেট সিনোফার্ম (সাংহাই, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। মিথানল (ক্রোমাটোগ্রাফিক গ্রেড) এবং অ্যাসিটোনিট্রিল (ক্রোমাটোগ্রাফিক গ্রেড) আলাদিন রিজেন্ট কোম্পানি (সাংহাই, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। অন্যান্য বিকারকগুলি সমস্ত গার্হস্থ্য বিশ্লেষণাত্মক গ্রেডের। মাউস কোলন ক্যান্সার সেল লাইন CT26। চাইনিজ একাডেমি অফ সায়েন্সের সেল ব্যাংক দ্বারা ডাব্লুটি সরবরাহ করা হয়েছিল। কোষগুলি 5% CO2 এবং 95% বায়ুতে 10% FBS (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, নিউ ইয়র্ক, NY, USA) ধারণকারী RPMI 1640 মাধ্যমের একটি সেল ইনকিউবেটরে জন্মানো হয়েছিল। 4-6 সপ্তাহের মহিলা BALB/c ইঁদুরগুলি পেঙ্গ্যু ল্যাবরেটরি অ্যানিমাল ব্রিডিং কোং লিমিটেড (জিনান, চীন) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল।

3.2। ফাঁকা Liposomes প্রস্তুতি

প্রথমে, HSPC-এর 13.455 mg, DSPE-PEG2000-এর 4.3595 mg, এবং 4.7095 mg কোলেস্টেরল সঠিকভাবে ওজন করা হয়েছিল এবং 0.1 mL ইথানলে দ্রবীভূত হয়েছিল (HSPC: DSPE-PEG2000:{12}}। 5.05:39.3 মোলার অনুপাত)। দ্বিতীয়ত, ইথানল দ্রবণটি একটি সিরিঞ্জের মাধ্যমে একটি প্রিহিটেড অ্যামোনিয়াম সালফেট দ্রবণে (250 mM, 1 mL, 65 ◦C) দ্রুত ইনজেক্ট করা হয়েছিল এবং তারপর চৌম্বকীয় নাড়ার মাধ্যমে 65 ◦C তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, প্রস্তুত দ্রবণটি পলিকার্বোনেট ঝিল্লির (অবন্তী, অ্যালাবাস্টার, AL, USA) মাধ্যমে পর্যায়ক্রমে বের করা হয়েছিল; আকার ছিল যথাক্রমে 200 এনএম, 100 এনএম এবং 50 এনএম। অবশেষে, 22.5 mg/mL এর লিপিড ঘনত্বের সাথে খালি লাইপোসোম (LPs) এর ফলস্বরূপ সমাধান ছিল।

3.3। CD47 টার্গেটেড Imiquimod-Encapsulated Liposomes এর প্রস্তুতি

প্রথমে, ডিএসপিই-পিইজি2000-এনএইচএসকে ddH2O (60 ◦C) এ দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং তারপরে Fc-CV1 এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 5 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় একটি কাঁপানো টেবিলে ইনকিউব করা হয়েছিল (Fc-CV1:DSPEPEG2000- NHS=12:1 মোলার অনুপাত)। Fc-CV1 এবং DSPE-PEG2000-NHS-এর মধ্যে সংযোগের রাসায়নিক বিক্রিয়া প্রক্রিয়া Fc-CV1-এ প্রাথমিক অ্যামাইনের সাথে NHS এস্টারের বিক্রিয়াকে জড়িত করে এবং একটি টেবিল অ্যামাইন বন্ড কনজুগেট তৈরি করে। প্রস্তুত দ্রবণটি আনুপাতিকভাবে LPs-এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য 60 ◦C তাপমাত্রায় ফ্লোসোমগুলিতে Fc-CV1 ঢোকানো হয়েছিল, যার নাম "পোস্ট ইনসার্টেশন" [৩৮]। মিশ্রণের অনুপাত ছিল 2.25 মিলিগ্রাম এফসি-সিভি1 প্রতি 22.5 মিলিগ্রাম লাইপোসোমে পরিবর্তন করা হয়েছিল। তখন CD47 টার্গেটেড লাইপোসোম (CLPs) প্রাপ্ত হয়েছিল।

পরবর্তীকালে, সিএলপিগুলিকে একটি ডায়ালাইসিস ব্যাগে (300 kDa) রাখা হয়েছিল এবং বাইরের জলীয় পর্যায়ে অ্যামোনিয়াম সালফেট এবং অবশিষ্ট Fc-CV1 অপসারণের জন্য 1 ঘন্টার জন্য HEPES (10 mM, pH=7.4) এর বিরুদ্ধে ডায়ালাইজ করা হয়েছিল। ডায়ালাইজড সিএলপিগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় 1 মিলিগ্রাম থেকে 7 μmol মোট ফসফোলিপিডের অনুপাতে ইমিকুইমোড দ্রবণ (5 মিলিগ্রাম/এমএল) দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং তারপরে আনক্যাপসুলেটেড ইমিকুইমোড দূর করতে তিনবার পিবিএস (300 কেডিএ) এর বিপরীতে ডায়ালাইজ করা হয়েছিল, যা উল্লেখ করা হয়েছে। অ্যামোনিয়াম সালফেট গ্রেডিয়েন্ট টেকনিক [৩৯]। CILPs তারপর প্রাপ্ত করা হয়. অতিরিক্তভাবে, নন-সিডি47-লক্ষ্যযুক্ত ইমিকুইমড-এনক্যাপসুলেটেড লাইপোসোম (ILPs) প্রস্তুত করা হয়েছিল। সিএলপি এবং আইএলপিগুলিকে সিআইএলপিগুলির নিয়ন্ত্রণ হিসাবে বিবেচনা করা হত।

3.4। চরিত্রায়ন

এই লাইপোসোমগুলির রূপবিদ্যা একটি ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ (টিইএম, জোয়েল, টোকিও, জাপান) দিয়ে ছবি তোলা হয়েছিল। এই লাইপোসোমের আকার, জেটা-সম্ভাব্য এবং পলিমার ডিসপারসিটি ইনডেক্স (পিডিআই) ম্যালভার্নের জেটা সাইজার জেডএসই (মালভার্ন, ইউকে) ব্যবহার করে ডায়নামিক লাইট স্ক্যাটারিং (ডিএলএস) এবং ইলেক্ট্রোফোরেটিক লাইট স্ক্যাটারিং (ইএলএস) দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। লাইপোসোমে ঢোকানো Fc-CV1 এর বাঁধাইয়ের হার (BR) 15% সোডিয়াম লরিল সালফেট-পলিয়াক্রাইলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (SDS-PAGE) এবং ইমেজ জে সফ্টওয়্যার (বেথেসডা, MD, USA) দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। ইমিকুইমডের এনক্যাপসুলেশন দক্ষতা (EE) উচ্চ-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC, থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, নিউ ইয়র্ক, NY, USA) দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল।

সিস্টানচে টিউবুলোসা-অ্যান্টিটিউমারের উপকারিতা

3.5। ভিট্রো সেল আপটেক স্টাডিতে

এই লাইপোসোমগুলির ইন ভিট্রো সেল গ্রহণ CT26-এ Cy5 এর ক্রমবর্ধমান প্রতিপ্রভ তীব্রতা দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। WT কোষ। DSPE-PEG-Cy5 CILPs এবং ILPs (DSPE-PEG-Cy5: CILPs বা ILPs=1:5 ভর অনুপাত) 60 ◦C এ যথাক্রমে 1 ঘন্টার জন্য, এবং তারপরে ফ্লুরোসেন্ট লাইপোসোম দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল CILPs-Cy5 এবং ILPs-Cy5 নামে নামকরণ করা হয়েছে। CT26.WT কোষগুলিকে 96-কূপ প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং এলোমেলোভাবে তিনটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল (1 × 104 কোষ/ওয়েল, n=3)। কোষের সংমিশ্রণ 50-70% এ পৌঁছানোর পরে, প্রতিটি গ্রুপকে যথাক্রমে 37 ◦C তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য বিনামূল্যে Cy5, ILPs-Cy5 এবং CILPs-Cy5 দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল, যেখানে Cy5 এর চূড়ান্ত ঘনত্ব ছিল 1 µg/mL 0.1 mL RPMI 1640 মাঝারি। পরবর্তীকালে, পিবিএস দিয়ে দুবার ধোয়ার পরে 15 মিনিটের জন্য কোষগুলিকে 4% প্যারাফর্মালডিহাইড দ্বারা স্থির করা হয়েছিল এবং তারপরে পিবিএস দিয়ে দুবার ধোয়ার পরে 10 মিনিটের জন্য 10 μL DAPI (1 µg/µL) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। অবশেষে, পিবিএস দিয়ে দুবার ধোয়ার পরে প্রতিটি গ্রুপের কোষের গ্রহণ একটি উচ্চ-কন্টেন্ট ইমেজিং সিস্টেম (আণবিক ডিভাইস, সানিভেল, CA, USA) দ্বারা রেকর্ড করা হয়েছিল।

3.6। ইমিকুইমড রিলিজ স্টাডি

ডায়ালাইসিস পদ্ধতি (300 kDa) ব্যবহার করে বিভিন্ন ওষুধ-বোঝাই লাইপোসোমের মুক্তির বক্ররেখা সম্পাদিত হয়েছিল, এবং ফলাফলগুলি বিনামূল্যে ইমিকুইমড সমাধানের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, 0.6 মিলি আইএলপি, সিআইএলপি এবং ইমিকুইমড দ্রবণ আলাদাভাবে ডায়ালাইসিস ব্যাগে প্যাক করা হয়েছিল এবং তারপরে 500 মিলি পিবিএস দ্রবণে (pH=7.4, 37 ◦C) রাখা হয়েছিল। পূর্বনির্ধারিত সময়ের ব্যবধানে (0, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, এবং 96 ঘন্টা) ব্যাগ থেকে নমুনার সমান পরিমাণ বের করা হয়েছিল এবং রিলিজ রেট (RR) নিম্নলিখিত সমীকরণ ব্যবহার করে ইমিকুইমডের গণনা করা হয়েছিল:

যেখানে Sund এবং Sd বিভিন্ন সময়ে যথাক্রমে প্রি-ডায়ালাইজড এবং ডায়ালাইজড প্রস্তুতিতে ইমিকুইমডের HPLC পিক এলাকা প্রতিনিধিত্ব করে (n=3)।

3.7। CILPs এর সাইটোটক্সিসিটি

CT{{0}}.WT কোষগুলিকে একটি 96-ওয়েল প্লেটে বীজ করা হয়েছিল (1 × 104/ওয়েল, n=3) এবং 100 μL RPMI 1640 মাধ্যমের সঙ্গম পর্যন্ত চাষ করা হয়েছিল কাছাকাছি পৌঁছেছে 70%। CILP-এর সাইটোটক্সিসিটি নির্ণয় করার জন্য, RPMI 1640 মাধ্যমটিকে প্রতিটি কূপ থেকে সরানো হয়েছিল এবং CILPs এবং RPMI 1640 মাধ্যমের একটি জটিল সমাধান দিয়ে প্রতিস্থাপিত হয়েছিল, Fc-CV1 এবং ইমিকুইমডের ঘনত্ব 0 থেকে 10 µg/mL পর্যন্ত। কোষগুলি 24 ঘন্টার জন্য একটি জটিল দ্রবণ দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। এছাড়াও, যে কোষগুলিকে এফসি-সিভি 1, সিএলপি, ইমিকুইমড সলিউশন এবং আইএলপিগুলির সাথে একই ঘনত্বে চিকিত্সা করা হয়েছিল সেগুলিকে নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল। 24 ঘন্টা পরে একটি CCK-8 পরীক্ষা দিয়ে বেঁচে থাকা কোষগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল, এবং চিকিত্সা না করা কোষগুলির কার্যকারিতা 100% হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল।

3.8। বায়োডিস্ট্রিবিউশন স্টাডি

নয়টি মহিলা BALB/c ইঁদুরকে CT26 দিয়ে সাবকুটেনিয়াস ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। ডান দিকের ডাব্লুটি কোষ (5 × 105 ) এবং এই টিউমার বহনকারী ইঁদুরগুলি এলোমেলোভাবে তিনটি গ্রুপে বিভক্ত ছিল (n=3)। টিউমারের পরিমাণ ক্যালিপার ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং নিম্নলিখিত সূত্র দ্বারা গণনা করা হয়েছিল:

যখন টিউমারের পরিমাণ 100 mm3 এ পৌঁছায়, তখন বিনামূল্যে Cy5, ILP-Cy5, এবং CILPs-Cy5কে 0.4 মিলিগ্রাম/কেজি সাই5 এর ডোজ শিরায় ইনজেকশন দেওয়া হয়। ইন্ট্রাভেনাস ইনজেকশনের চব্বিশ ঘণ্টা পর টিউমার, হার্ট, লিভার, প্লীহা, ফুসফুস এবং কিডনি বের করা হয়। টিউমার এবং প্রধান অঙ্গগুলির ফ্লুরোসেন্স সংকেতগুলি IVIS অপটিক্যাল ইমেজিং সিস্টেম (IVIS Lumina LT III, PerkinElmer, Waltham, MA, USA) দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল।

3.9। ভিভো টিউমার ইনহিবিশন স্টাডিতে

পঁয়ত্রিশটি মহিলা BALB/c ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে সাতটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল (n=5), এবং 5 × 105 CT26৷ ডাব্লুটি কোষগুলি প্রতিটি মাউসের ডান দিকের অংশে সাবকুটেনিওসভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। যখন মাউস টিউমারের আকার প্রায় 100 মিমি 3 ছিল, তখন চিকিত্সা শুরু করা হয়েছিল। PBS, LPs, imiquimod, Fc-CV1, ILPs, CLPs, এবং CILPs 0, 4, 8 এবং 12 দিনে শিরায় ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। প্রথম এবং দ্বিতীয় ইনজেকশনে ইমিকুইমডের ডোজ ছিল 2.5 মিলিগ্রাম/কেজি এবং 5 মিলিগ্রাম/কেজি। তৃতীয় এবং চতুর্থ ইনজেকশনে। সমস্ত ইনজেকশনে, Fc-CV1 এর ডোজ ছিল 5 মিগ্রা/কেজি। এই ডোজে, শরীরে ওষুধের ঘনত্ব ছিল 2.5-5 µg/mL, যা একটি ইন ভিট্রো পরীক্ষায় কোষে সাইটোটক্সিসিটি প্রয়োগ করে। টিউমারের ব্যাস এবং শরীরের ওজন চিকিত্সার সময় প্রতিদিন পরিমাপ করা হয়েছিল। 17 তম দিনে, ইঁদুরের টিউমারগুলি বের করা হয়েছিল এবং তাদের ওজন পরিমাপ করা হয়েছিল। টিউমার গ্রোথ ইনহিবিশন (TGI) নিম্নলিখিত সূত্র অনুসারে গণনা করা হয়েছিল:

3.10। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি

CD4, CD8, এবং IFN এর ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি স্টেনিং একটি স্ট্যান্ডার্ড প্রোটোকল অনুসারে টিউমার টিস্যুতে সঞ্চালিত হয়েছিল। টিউমার টিস্যুগুলির অংশগুলির প্যারাফিন বিভাগকে ডিপারাফিনাইজ করার এবং রিহাইড্রেট করার পরে, টিস্যুকে ঢেকে রাখার জন্য বৃত্তে 3% BSA যোগ করা হয়েছিল এবং তারপরে এটি ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য সিল করা হয়েছিল। বিভাগগুলিকে CD4, CD8, এবং IFN অ্যান্টিবডি (Servicebio, Wuhan, China) দিয়ে রাতারাতি 4 ◦C তাপমাত্রায় দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং তারপর 50 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (HRP-লেবেলযুক্ত, Servicebio, Wuhan, China) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। পিবিএস দিয়ে দুইবার ধোয়ার পর। শেষ পর্যন্ত, ডিএবি ক্রোমোজেনিক এজেন্টের সাথে প্রতিক্রিয়া করার পরে বিভাগগুলি মাইক্রোস্কোপের (নিকন, ই100, টোকিও, জাপান) অধীনে কল্পনা করা হয়েছিল।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

3.11। CILPs এর জৈব নিরাপত্তা মূল্যায়ন

টিউমার-নিরোধ অধ্যয়নের শেষে, সমস্ত টিউমার সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং এই টিউমারগুলির ওজন পরিমাপ করা হয়েছিল। অ্যালানাইন ট্রান্সমিনেজ (ALT), অ্যাসপার্টেট ট্রান্সমিনেজ (AST), ক্রিয়েটিনিন (CREA) এবং ইউরিয়া (UREA) সহ জৈব রাসায়নিক পরামিতিগুলি ইঁদুরের রক্তে সনাক্ত করা হয়েছিল। টাটকা টিউমার টিস্যু এবং প্রধান অঙ্গগুলিকে 4% প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির করা হয়েছিল এবং একটি এমবেডিং মেশিন ব্যবহার করে প্যারাফিনে এম্বেড করা হয়েছিল (উহান জুনজি ইলেকট্রনিক্স, জেবি-পি5, উহান, চীন)। 5 µm পুরুত্বের টিস্যু স্লাইসগুলি মাইক্রোটোম (Leica Instrument, RM2016, Shanghai, China) এর মাধ্যমে কাটা হয়েছিল এবং তারপর প্রোটোকল অনুসারে হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন (H&E) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। পরবর্তীকালে, স্টেনিং স্লাইসগুলি একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল (নিকন, ই 100, টোকিও, জাপান)।

3.12। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

সমস্ত ডেটা গড় ± SD হিসাবে প্রকাশ করা হয়। গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8 ব্যবহার করে একমুখী আনোভা দ্বারা গ্রুপগুলির মধ্যে তাত্পর্য স্তর পরীক্ষা করা হয়েছিল৷{2}}.2৷ p < 0.05 একটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল।

3.13। পশু নৈতিকতা

প্রাণী সংক্রান্ত সমস্ত পদ্ধতি এবং সুপারিশগুলি পরীক্ষাগার প্রাণীদের যত্ন এবং ব্যবহারের জন্য জাতীয় নির্দেশিকা অনুসরণ করে লিয়াওচেং বিশ্ববিদ্যালয়ের বৈজ্ঞানিক গবেষণা নীতিশাস্ত্রের বিশেষ কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল (অনুমোদন কোড: 2022111010; অনুমোদনের তারিখ: 1 নভেম্বর 2022)।

cistanche উদ্ভিদ-বৃদ্ধি প্রতিরোধ ক্ষমতা

4। উপসংহার

সংক্ষেপে, ইমিকুইমড-এনক্যাপসুলেটেড সিডি47-লক্ষ্যযুক্ত লাইপোসোমগুলি সফলভাবে বিকশিত হয়েছিল, এবং ইন ভিট্রো ফলাফলগুলি প্রমাণ করে যে CILPগুলি একটি ভাল-টেকসই মুক্তি এবং নির্দিষ্ট লক্ষ্যকরণ প্রভাবের অধিকারী। ভিভোর ফলাফলে দেখা গেছে যে প্রস্তুতি টিউমার কোষ দ্বারা কার্যকরভাবে গ্রহণ করা যেতে পারে এবং এটি ইমিউন প্রতিক্রিয়ার দ্বৈত কার্যকারিতা এবং সহজাত ইমিউন চেকপয়েন্ট অবরোধের কারণে চমৎকার টিউমার চিকিত্সার দক্ষতা এবং জৈব নিরাপত্তা প্রদর্শন করে। অতএব, Fc-CV1 এর সাথে মিলিত ইমিকুইমড-এনক্যাপসুলেটেড লাইপোসোমগুলি CD47 এক্সপ্রেশন টিউমার চিকিত্সার উন্নতির জন্য অভিনব ন্যানোমেডিসিন বলে মনে হচ্ছে। সহজাত অনাক্রম্যতার উপর ভিত্তি করে ইমিউনোথেরাপি ভবিষ্যতে ICB-এর সাথে সিনারজিস্টিক সমন্বয়ের জন্য টিউমার বৃদ্ধির বিরুদ্ধে একটি সাধারণ কৌশল হিসাবে কাজ করতে পারে।

তথ্যসূত্র

1. সং, এইচ.; ফেরলে, জে.; সিগেল, আরএল; Laversanne, M.; সোরজোমাতরম, আই.; জেমাল, এ.; Bray, F. গ্লোবাল ক্যান্সার পরিসংখ্যান 2020: 185টি দেশে 36টি ক্যান্সারের জন্য বিশ্বব্যাপী ঘটনা এবং মৃত্যুর গ্লোবোকান অনুমান। CA ক্যান্সার জে ক্লিন। 2021, 71, 209-249। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

2. কার্লসন, আরডি; ফ্লিকিংগার, জেসি, জুনিয়র; স্নুক, এই টকিন টক্সিন: কোলিস থেকে আধুনিক ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপি পর্যন্ত। টক্সিন 2020, 12, 241। [CrossRef] [PubMed]

3. বারবারি, সি.; ফন্টেইন, টি.; পরাজুলি, পি.; লামিছনে, এন.; জাকুবস্কি, এস.; লামিছনে, পি.; দেশমুখ, আরআর ইমিউনোথেরাপি এবং ইমিউনো-অনকোলজির জন্য সমন্বয় কৌশল। int. জে মোল। বিজ্ঞান 2020, 21, 5009। [ক্রসরেফ]

4. হেগড়ে, পিএস; চেন, ডিএস ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপিতে শীর্ষ 10 চ্যালেঞ্জ। অনাক্রম্যতা 2020, 52, 17-35। [ক্রসরেফ]

5. জৈন, কে কে ব্যক্তিগতকৃত ইমিউনো-অনকোলজি। মেড. প্রিন্স। অনুশীলন করুন। 2021, 30, 1-16। [ক্রসরেফ]

6. সানমামেদ, এমএফ; চেন, এল. ক্যানসার ইমিউনোথেরাপিতে একটি প্যারাডাইম শিফট: এনহ্যান্সমেন্ট থেকে নরমালাইজেশন। সেল 2018, 175, 313–326। [ক্রসরেফ]

7. হুসেইন, WM; লিউ, টিওয়াই; Skwarczynski, M.; Toth, I. টোল-লাইক রিসেপ্টর অ্যাগোনিস্ট: একটি পেটেন্ট পর্যালোচনা (2011-2013)। বিশেষজ্ঞ মতামত. সেখানে। প্যাট. 2014, 24, 453–470। [ক্রসরেফ]

8. চি, এইচ.; লি, সি.; ঝাও, এফএস; ঝাং, এল.; এনজি, টিবি; জিন, জি.; Sha, O. টোল-লাইক রিসেপ্টর 7 অ্যাগোনিস্টের টিউমার-বিরোধী কার্যকলাপ। সামনে। ফার্মাকোল। 2017, 8, 304। [CrossRef] [PubMed]

9. ওয়াং, ওয়াই।; ঝাং, এস.; লি, এইচ.; ওয়াং, এইচ.; ঝাং, টি.; হাচিনসন, এমআর; ইয়িন, এইচ.; ওয়াং, এক্স. টোল-লাইক রিসেপ্টরের ছোট-অণু মডুলেটর। এসিসি। কেম। Res. 2020, 53, 1046-1055। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

10. লে মার্সিয়ার, আই.; পুজল, ডি.; সানলাভিল, এ.; সিসিরাক, ভি.; গোবার্ট, এম.; ডুরান্ড, আই.; ডুবইস, বি.; Treilleux, I.; মার্ভেল, জে.; ভ্লাচ, জে.; ইত্যাদি Intratumoral Plasmacytoid ডেনড্রাইটিক কোষ দ্বারা টিউমার প্রচার Tlr7 Ligand চিকিত্সা দ্বারা বিপরীত হয়। ক্যান্সার রেস. 2013, 73, 4629–4640। [ক্রসরেফ]

11. মা, এফ.; ঝাং, জে.; ঝাং, জে.; Zhang, C. Tlr7 অ্যাগোনিস্ট ইমিকুইমোড এবং গার্ডিকিমোড ইঁদুরের মেলানোমার জন্য ডিসি-ভিত্তিক ইমিউনোথেরাপির উন্নতি করে। সেল। মোল। ইমিউনল। 2010, 7, 381-388। [ক্রসরেফ]

12. বিলান, এস.; কায়দার-ব্যক্তি, ও.; গিল, জেড. ইমিউনোথেরাপির যুগে অগ্রগতির পরে চিকিত্সা। ল্যানসেট অনকল। 2020, 21, e463–e476। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

13. ডারভিন, পি.; টুর, এসএম; শসিধরন নায়ার, ভি.; এলকর্ড, ই. ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস: সাম্প্রতিক অগ্রগতি এবং সম্ভাব্য বায়োমার্কার। মেয়াদ। মোল। মেড. 2018, 50, 1-11। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

14. লি, বি.; চ্যান, এইচএল; চেন, পি. ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস: বেসিকস এবং চ্যালেঞ্জস। কার মেড. কেম। 2019, 26, 3009–3025। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

15. জিয়া, এক্স।; ইয়ান, বি.; তিয়ান, এক্স।; লিউ, প্র.; জিন, জে.; শি, জে.; Hou, Y. Cd47/Sirpalpha পাথওয়ে মধ্যস্থতা করে ক্যান্সার ইমিউন এস্কেপ এবং ইমিউনোথেরাপি। int. জে. বিওল। বিজ্ঞান 2021, 17, 3281–3287। [ক্রসরেফ]

16. স্ববোদা, ডিএম; স্যালম্যান, ডিএ দ্য প্রমিজ অফ ম্যাক্রোফেজ ডাইরেক্টেড চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস ইন মাইলয়েড ম্যালিগন্যান্সি। সেরা অনুশীলন এবং গবেষণা. ক্লিন। হেমাটোল। 2020, 33, 101221।

17. লেন্টজ, আরডাব্লু; কোল্টন, এমডি; মিত্র, এসএস; মেসারস্মিথ, ডাব্লুএ ইননেট ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস: মেডিক্যাল অনকোলজিতে পরবর্তী অগ্রগতি? মোল। ক্যান্সার থার। 2021, 20, 961-974। [ক্রসরেফ]

18. জিয়াং, পি.; লেগেনাউর, সিএফ; নারায়ণন, ভি. ইন্টিগ্রিন-অ্যাসোসিয়েটেড প্রোটিন P84 নিউরাল অ্যাডেসন অণুর জন্য একটি লিগান্ড। জে. বিওল। কেম। 1999, 274, 559-562। [ক্রসরেফ]

19. সেফার্ট, এম.; ক্যান্ট, সি.; চেন, জেড.; Rappold, I.; Brugger, W.; কানজ, এল.; ব্রাউন, ইজে; উলরিচ, এ.; বুহরিং, এইচজে হিউম্যান সিগন্যাল-নিয়ন্ত্রক প্রোটিন স্বাভাবিকভাবে প্রকাশ করা হয়, কিন্তু লিউকেমিক মাইলয়েড কোষের উপসেট এবং এর কাউন্টাররিসেপ্টর Cd47 এর সাথে জড়িত সেলুলার আনুগত্যের মধ্যস্থতায় নয়। রক্ত 1999, 94, 3633–3643। [ক্রসরেফ]

20. মাতলুং, এইচএল; Szilagyi, K.; বার্কলে, এনএ; ভ্যান ডেন বার্গ, TK দ্য সিডি47-সির্পালফা সিগন্যালিং অক্ষ ক্যান্সারে একটি সহজাত ইমিউন চেকপয়েন্ট হিসাবে। ইমিউনল। রেভ. 2017, 276, 145–164। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

21. ওল্ডেনবর্গ, PA; Zheleznyak, A.; ফ্যাং, ওয়াইএফ; লেগেনাউর, সিএফ; গ্রেশাম, এইচডি; লিন্ডবার্গ, লোহিত রক্তকণিকায় স্বয়ং চিহ্নিতকারী হিসেবে Cd47-এর FP ভূমিকা। বিজ্ঞান 2000, 288, 2051-2054। [ক্রসরেফ]

22. লি, জেড.; লি, ওয়াই.; গাও, জে.; ফু, ওয়াই.; হুয়া, পি.; জিং, ওয়াই.; Cai, M.; ওয়াং, এইচ.; টং, টি. টিউমার ইমিউন ইভেশন এবং ইননেট ইমিউনোথেরাপিতে সিডি47-সিরপালফা ইমিউন চেকপয়েন্টের ভূমিকা। জীবন বিজ্ঞান. 2021, 273, 119150। [ক্রসরেফ]

23. হায়াত, এসএমজি; বিয়ানকোনি, ভি.; পিরো, এম.; জাফরি, এমআর; হাতমিপুর, এম.; সাহেবকর, এ. Cd47: ইমিউন সিস্টেমে ভূমিকা এবং ক্যান্সার থেরাপির প্রয়োগ। সেল। অনকল। 2020, 43, 19-30। [ক্রসরেফ]

24. হুয়াং, ওয়াই.; মা, ওয়াই.; গাও, পি.; ইয়াও, জেড টার্গেটিং Cd47: ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপির উপর বর্তমান গবেষণার অর্জন এবং উদ্বেগ। জে. থোরাক। ডিস. 2017, 9, E168–E174। [ক্রসরেফ]

25. ঝাং, ডব্লিউ.; হুয়াং, প্র.; Xiao, W.; ঝাও, ওয়াই.; পাই, জে.; জু, এইচ.; ঝাও, এইচ.; জু, জে.; ইভান্স, সিই; জিন, এইচ. Cd47/Sirpalpha অক্ষকে লক্ষ্য করে টিউমার-বিরোধী চিকিৎসায় অগ্রগতি। সামনে। ইমিউনল। 2020, 11, 18। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

26. লিউ, এক্স।; পু, ওয়াই।; ক্রোন, কে.; ডেং, এল.; ক্লাইন, জে.; Frazier, WA; জু, এইচ.; পেং, এইচ.; ফু, ওয়াইএক্স; Xu, MM Cd47 অবরোধ টি সেল-মধ্যস্থতা ইমিউনোজেনিক টিউমারের ধ্বংসকে ট্রিগার করে। নাট। মেড. 2015, 21, 1209-1215। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

27. উইস্কোপফ, কে.; রিং, এএম; হো, সিসি; ভলকমার, জেপি; লেভিন, এএম; ভলকমার, একে; ওজকান, ই.; ফার্নহফ, এনবি; ভ্যান ডি রিজন, এম.; উইসম্যান, আইএল; ইত্যাদি ইমিউনোথেরাপিউটিক অ্যাডজুভেন্টস টু ক্যানসার অ্যান্টিবডি হিসাবে ইঞ্জিনিয়ারড সিরপালফা ভেরিয়েন্ট। বিজ্ঞান 2013, 341, 88-91। [ক্রসরেফ]

28. জিওং, জেড.; অহলফেস্ট, জেআর টপিকাল ইমিকুইমডের ইন্ট্রাক্রানিয়াল টিউমারের বিরুদ্ধে থেরাপিউটিক এবং ইমিউনোমোডুলেটরি প্রভাব রয়েছে। জে. ইমিউনোথার। 2011, 34, 264-269। [ক্রসরেফ]

29. কামাথ, পি.; ডারউইন, ই.; অরোরা, এইচ.; নুরি, কে. ইমিকুইমড থেরাপির উপর একটি পর্যালোচনা এবং বেসাল সেল কার্সিনোমাসের সর্বোত্তম ব্যবস্থাপনার উপর আলোচনা। ক্লিন। ড্রাগ তদন্ত। 2018, 38, 883–899। [ক্রসরেফ]

30. লিউ, ওয়াই.; কাস্ত্রো ব্রাভো, কেএম; লিউ, জে. টার্গেটেড লাইপোসোমাল ড্রাগ ডেলিভারি: একটি ন্যানোসায়েন্স এবং বায়োফিজিকাল দৃষ্টিকোণ। ন্যানোস্কেল হরিজ। 2021, 6, 78-94। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

31. ফারজাদিয়ান, এফ.; ঘাসেমি, এ.; গোহরি, ও.; রুইন্টান, এ.; করিমি, এম.; হ্যাম্বলিন, এমআর ন্যানোফার্মাসিউটিক্যালস এবং ন্যানোমেডিসিনস বর্তমানে বাজারে: চ্যালেঞ্জ এবং সুযোগ। ন্যানোমেডিসিন 2019, 14, 93-126। [ক্রসরেফ]

32. Zhou, X.; জিয়াও, এল.; Qian, Y.; ডং, প্র.; সূর্য, Y.; ঝেং, ডব্লিউ; ঝাও, ডব্লিউ; Zhai, W.; কিউ, এল.; উ, ওয়াই.; ইত্যাদি ক্যান্সার ইমিউনো-থেরাপির জন্য Cd47/Sirpalpha এবং Tigit/Pvr পাথওয়েকে টার্গেটিং দ্বৈত ইনহিবিটর হিসাবে অ্যাজেলনিডিপাইনকে পুনঃস্থাপন করা। জৈব অণু 2021, 11, 706। [ক্রসরেফ]

33. নি, কে.; লুও, টি.; কালবার্ট, এ.; কাউফম্যান, এম.; জিয়াং, এক্স।; লিন, ডব্লিউ. ন্যানোস্কেল মেটাল-অর্গানিক ফ্রেমওয়ার্ক টিএলআর-7 অ্যাগোনিস্ট এবং অ্যান্টি-সিডি47 অ্যান্টিবডিগুলিকে ম্যাক্রোফেজ এবং অর্কেস্ট্রেট ক্যানসার ইমিউনোথেরাপিকে মডিউল করতে সহায়তা করে। জে. এ.এম. কেম। সমাজ 2020, 142, 12579–12584। [ক্রসরেফ]

34. চেন, প্র.; জু, এল.; লিয়াং, সি.; ওয়াং, সি.; পেং, আর.; লিউ, জেড। কার্যকরী ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপির জন্য চেকপয়েন্ট ব্লকেডের সাথে ইমিউন-অ্যাডজুভেন্ট ন্যানো পার্টিকেল সহ ফটোথার্মাল থেরাপি। নাট। কমুন 2016, 7, 13193। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

35. ওয়েই, জে.; দীর্ঘ, Y.; গুও, আর.; লিউ, এক্স।; ট্যাং, এক্স।; রাও, জে.; ইয়িন, এস.; ঝাং, জেড.; লি, এম.; তিনি, Q. অর্থোটোপিক এবং মেটাস্ট্যাটিক স্তন ক্যান্সারের দক্ষ চিকিত্সার জন্য ইমিউন চেকপয়েন্ট ব্লকেডের সাথে মাল্টিফাংশনাল পলিমেরিক মাইকেল-ভিত্তিক কেমো-ইমিউনোথেরাপি। অ্যাক্টা ফার্ম। পাপ। বি 2019, 9, 819–831। [ক্রসরেফ]

36. হুয়াং, SW; ওয়াং, এসটি; চ্যাং, এসএইচ; চুয়াং, কেসি; ওয়াং, এইচওয়াই; কাও, জেকে; লিয়াং, এসএম; উ, সিওয়াই; কাও, এসএইচ; চেন, ওয়াইজে; ইত্যাদি ইমিকুইমড ইমিউনোজেনিক কোষের মৃত্যু প্ররোচিত করে অ্যান্টিটিউমার প্রভাব প্রয়োগ করে এবং গ্লাইকোলাইটিক ইনহিবিটর 2-ডিঅক্সিগ্লুকোজ দ্বারা উন্নত হয়। জে. তদন্ত। ডার্মাটোল। 2020, 140, 1771–1783.e6. [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

37. ওয়াং, বি.; তিনি, এক্স.; ঝাং, জেড.; ঝাও, ওয়াই.; ফেং, ডব্লিউ. ভিভোতে ন্যানোমেটেরিয়ালের বিপাক: রক্ত ​​সঞ্চালন এবং অঙ্গ ক্লিয়ারেন্স। এসিসি। কেম। Res. 2013, 46, 761–769। [ক্রসরেফ]

38. আখতারি, জে.; রেজায়াত, এসএম; তেমুরি, এম.; আলাভিজাদেহ, এসএইচ; ঘেবি, এফ.; বাদি, এ.; জাফরি, এমআর টার্গেটিং, বায়ো ডিস্ট্রিবিউটিভ এবং টিউমার গ্রোথ ইনহিবিটিং ক্যারেক্টারাইজেশন অব অ্যান্টি-হার2 অ্যাফিবডি কাপলিং টু লিপোসোমাল ডক্সোরুবিসিন ব্যবহার করে বাল্ব/সি মাইস বিয়ারিং টিউবো টিউমার। int. জে ফার্ম। 2016, 505, 89-95। [ক্রসরেফ]

39. উডল, এমসি; Papahadjopoulos, D. Liposome প্রস্তুতি এবং আকার বৈশিষ্ট্য. পদ্ধতি এনজাইমল। 1989, 171, 193-217। [পাবমেড]