KLRG1 টিউমার-অনুপ্রবেশকারী CD4 টি কোষের উপসেটগুলি টিউমারের অগ্রগতি এবং ইমিউনোথেরাপি প্রতিক্রিয়ার সাথে যুক্ত চিহ্নিত করে

বিমূর্ত

ইমিউনো-অনকোলজিতে বায়োমার্কার আবিষ্কার এবং লক্ষ্য সনাক্তকরণের বর্তমান পদ্ধতিগুলি টিউমার অনাক্রম্যতার স্ট্যাটিক স্ন্যাপশটের উপর নির্ভর করে। অ্যান্টিটিউমার ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলির সাময়িক প্রকৃতিকে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে চিহ্নিত করার জন্য, আমরা একটি 34-প্যারামিটার বর্ণালী প্রবাহ সাইটোমেট্রি প্যানেল তৈরি করেছি এবং সমালোচনামূলক প্রসঙ্গে উচ্চ-থ্রুপুট বিশ্লেষণ করেছি।

আমরা দুটি স্বতন্ত্র প্রিক্লিনিকাল মডেলের ব্যবহার করেছি যা যথাক্রমে ক্যান্সার ইমিউনোইডিটিং (NPKC1) এবং ইমিউন চেকপয়েন্ট ব্লকেড (ICB) প্রতিক্রিয়া (MC38) পুনঃসংবেদন করে এবং ইমিউন নজরদারি এবং পলায়ন এবং/অথবা ICB প্রতিক্রিয়ার মূল ইনফ্লেকশন পয়েন্টগুলিতে এবং চারপাশে একাধিক প্রাসঙ্গিক টিস্যু প্রোফাইল করে।

লক্ষ্যগুলি কোষের গুরুত্বপূর্ণ জৈব অণুগুলিকে নির্দেশ করে, যেমন প্রোটিন, এনজাইম এবং রিসেপ্টর। লক্ষ্য স্বীকৃতি হ'ল রোগের চিকিত্সা এবং ওষুধের বিকাশে প্রয়োগের জন্য এই জৈব অণুগুলির নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্য এবং কাজগুলি সনাক্ত করতে রাসায়নিক এবং জৈবিক পদ্ধতির ব্যবহার।

অনাক্রম্যতা বলতে বোঝায় বিদেশী রোগজীবাণুর আক্রমণ এবং অন্তঃসত্ত্বা অস্বাভাবিক কোষের বৃদ্ধি প্রতিরোধ করার জন্য শরীরের ক্ষমতা। ইমিউন সিস্টেমের মূল হল ইমিউন কোষ এবং অণু, যাদের তাদের লক্ষ্যগুলির সাথে ঘনিষ্ঠ সংযোগ এবং মিথস্ক্রিয়া রয়েছে।

রোগের চিকিত্সা এবং ওষুধের বিকাশে, লক্ষ্য সনাক্তকরণ এবং অনাক্রম্যতার মধ্যে সম্পর্ক অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। উদাহরণস্বরূপ, অনেক ওষুধের কার্যপ্রণালী হল লক্ষ্য শনাক্তকরণের মাধ্যমে, নির্দিষ্ট প্রোটিন, এনজাইম, রিসেপ্টর এবং অন্যান্য অণুকে লক্ষ্য করে, তাদের কার্যাবলীকে প্রভাবিত করে এবং থেরাপিউটিক প্রভাব অর্জনের জন্য সংকেত ট্রান্সডাকশন নিয়ন্ত্রণ করে। ইমিউন সিস্টেমের কোষ এবং অণুগুলিও ওষুধের লক্ষ্য হতে পারে। উদাহরণস্বরূপ, অ্যান্টিক্যান্সার ওষুধগুলি ক্যান্সার কোষগুলির প্রতিরোধ ক্ষমতাকে প্রভাবিত করে এবং কোষের অ্যাপোপটোসিস এবং বিস্তার নিয়ন্ত্রণ করে থেরাপিউটিক প্রভাব অর্জন করে।

অতএব, ওষুধের বিকাশ এবং ক্লিনিকাল চিকিত্সার ক্ষেত্রে, লক্ষ্য শনাক্তকরণ এবং অনাক্রম্যতার কারণগুলির ব্যাপক বিবেচনা ওষুধের আরও কার্যকর বিকাশ এবং উন্নত থেরাপিউটিক প্রভাবের দিকে পরিচালিত করতে পারে। এই দৃষ্টিকোণ থেকে, আমাদের রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা উন্নত করতে হবে। Cistanche রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা বাড়াতে পারে। সিস্টানচে ভিটামিন সি, ভিটামিন সি, ক্যারোটিনয়েড ইত্যাদির মতো বিভিন্ন অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট উপাদানে সমৃদ্ধ৷ এই উপাদানগুলি মুক্ত র্যাডিকেলগুলিকে ধ্বংস করতে পারে, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস কমাতে পারে এবং অনাক্রম্যতা উন্নত করতে পারে৷ সিস্টেম প্রতিরোধের।

cistanche tubulosa নির্যাস পাউডার ক্লিক করুন

মেশিন লার্নিং-চালিত ডেটা বিশ্লেষণ KLRG1 এক্সপ্রেশনের একটি প্যাটার্ন প্রকাশ করে যা স্বতন্ত্রভাবে ইন্ট্রাটুমোরাল ইফেক্টর CD4 টি কোষের জনসংখ্যাকে চিহ্নিত করে যা গঠনমূলকভাবে টিউমার মডেল জুড়ে টিউমার বোঝার সাথে যুক্ত হয় এবং ICB এর প্রতিক্রিয়ায় রিগ্রেশনের মধ্য দিয়ে টিউমারগুলিতে হারিয়ে যায়। একইভাবে, টিউমার-অনুপ্রবেশকারী নিয়ন্ত্রক টি কোষের একটি হেলিওস-কেএলআরজি 1 প্লাস উপসেট (ট্রেগস) টিউমারের অগ্রগতির সাথে ইমিউন ভারসাম্য থেকে পালানোর জন্য যুক্ত ছিল এবং আইসিবি-তে সাড়া দেওয়া টিউমারগুলিতেও হারিয়ে গিয়েছিল।

বৈধতা অধ্যয়নগুলি রেনাল ক্যান্সারে রোগের অগ্রগতির সাথে সম্পর্কিত মানব টিউমার-অনুপ্রবেশকারী CD4 T কোষগুলিতে KLRG1 স্বাক্ষর নিশ্চিত করেছে। এই ফলাফলগুলি ক্যান্সার প্রতিরোধ ক্ষমতার আরও তদন্তের জন্য KLRG1 প্লাস CD4 T কোষের জনসংখ্যাকে উপসেট হিসাবে মনোনীত করে এবং গতিশীল বায়োমার্কার এবং/অথবা লক্ষ্য আবিষ্কারের একটি ইঞ্জিন হিসাবে অনুদৈর্ঘ্য বর্ণালী প্রবাহ প্রোফাইলিংয়ের উপযোগিতা প্রদর্শন করে।

ভূমিকা

ইমিউনোথেরাপি এখন ক্যান্সার চিকিৎসার একটি স্তম্ভ। যাইহোক, বেশিরভাগ ইমিউনোথেরাপিউটিক এজেন্টগুলির প্রতিক্রিয়া বিরল, সীমিত সংখ্যক টিউমার প্রকারের মধ্যে সীমাবদ্ধ এবং ভবিষ্যদ্বাণী করা কঠিন (1)। প্রতিক্রিয়ার হার উন্নত করা এবং প্রতিক্রিয়ার ভবিষ্যদ্বাণীমূলক বায়োমার্কার তৈরি করা টিউমার ইমিউনোলজি ক্ষেত্রের কেন্দ্রীয় লক্ষ্য, তবে এটি এখনও চ্যালেঞ্জিং।

জটিল মাল্টি-সেলুলার মিথস্ক্রিয়া যে কোনও রোগীর একটি অ্যান্টিটিউমার ইমিউন প্রতিক্রিয়ার ফলাফলকে নিয়ন্ত্রণ করতে পারে। অতএব, এটি সাধারণ যে একক বায়োমার্কার - বা একক পথের থেরাপিউটিক মড্যুলেশন - কিছু ক্ষেত্রে উপযোগী হওয়ার প্রবণতা রয়েছে, তবে বেশিরভাগ ক্যান্সার রোগীদের নয়।

উদাহরণস্বরূপ, বর্তমানে ব্যাপক ক্লিনিকাল ব্যবহারে তিনটি ইমিউন-সম্পর্কিত বায়োমার্কার রয়েছে; (i) টিউমার মিউটেশনাল ভার (TMB), ডিএনএ মেরামত যন্ত্রপাতি (2-4), (ii) ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দ্বারা PD-L1 এক্সপ্রেশন (IHC)(5), এবং (iii) পূর্ব-বিদ্যমান অনাক্রম্যতা যা পরিমাপ করা হয় CD8 T কোষের ভিতরে এবং আশেপাশের টিউমারের উপস্থিতি দ্বারা, যাকে বলা হয় ইমিউনোস্কোর(6)।

যদিও প্রতিটি নির্দিষ্ট প্রসঙ্গে ইমিউনোথেরাপির প্রতিক্রিয়ার সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে জড়িত, এই ভবিষ্যদ্বাণীগুলির সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা উপ-অনুকূল (7) থাকে। এই ইউনিমোডাল পদ্ধতিগুলি টিস্যু জুড়ে এবং সময়ের সাথে সাথে ঘটে যাওয়া এই জাতীয় প্রতিক্রিয়াগুলির গতিশীল প্রকৃতি সহ টিউমার প্রতিরোধ ক্ষমতার অন্তর্নিহিত জটিল প্রক্রিয়াগুলিকে সম্পূর্ণরূপে ক্যাপচার করতে ব্যর্থ হয়।

যেমন, ক্রস-টিস্যুতে বায়োমার্কার সনাক্তকরণ এবং লক্ষ্য আবিষ্কারের জন্য উচ্চ মাল্টিপ্লেক্সড একক-কোষ ইমিউন প্রোফাইলিং পদ্ধতির প্রয়োগ, অনুদৈর্ঘ্য পদ্ধতিতে বৃহত্তর ভবিষ্যদ্বাণীমূলক এবং অনুবাদমূলক ইউটিলিটি সহ সংক্ষিপ্ত ইমিউন ফিনোটাইপ প্রদান করতে পারে।

এই লক্ষ্যে, আমরা একটি 34-প্যারামিটার স্পেকট্রাল ফ্লো সাইটোমেট্রি প্যানেল এবং উচ্চমাত্রিক ডেটা বিশ্লেষণ পাইপলাইন তৈরি করেছি যাতে ক্যান্সার ইমিউনোইডিটিং চক্রের বিভিন্ন পর্যায়ের সাথে যুক্ত প্রোটিন-স্তরের ইমিউন ফিনোটাইপগুলিকে জিজ্ঞাসাবাদ করা হয়, যার মধ্যে ইমিউন এস্কেপ এবং টিউমার বৃদ্ধি এবং ইমিউন চেকপয়েন্ট রয়েছে প্রিক্লিনিকাল মডেল জুড়ে অবরোধ (ICB) প্রতিক্রিয়া।

আমরা NPK-C1 এবং ICB-চিকিত্সা করা MC38 মডেলগুলি প্রোফাইল করেছি, টিউমারের অগ্রগতির মূল ইনফ্লেকশন পয়েন্টগুলির উপর এবং চারপাশে একাধিক টিস্যু (টিউমার, ড্রেনিং বনাম নন-ড্রেনিং লিম্ফ নোড এবং রক্ত) বিশ্লেষণ করে। এটি প্রাকৃতিক এবং ICB-প্ররোচিত টিউমার রিগ্রেশন, ইমিউন ভারসাম্যের রূপান্তর এবং ভারসাম্য থেকে অনিয়ন্ত্রিত টিউমার পালানোর পরবর্তী রূপান্তরের অন্তর্নিহিত গতিবিদ্যার গভীর বৈশিষ্ট্যকে সহজতর করেছে। রেনাল ক্যান্সারের মানব একক-কোষ ডেটাসেটের বৈধতা অধ্যয়ন এই ফলাফলগুলির অনুবাদগত প্রাসঙ্গিকতা নিশ্চিত করেছে।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

ইঁদুর। পুরুষ এবং মহিলা C57BL/6J ইঁদুর (5-6 সপ্তাহের বয়সী) জ্যাকসন ল্যাবরেটরি (বার হারবার, ME) থেকে কেনা হয়েছিল। ব্যবহারের সময় ইঁদুরের বয়স ছিল 6-8 সপ্তাহ। সমস্ত প্রাণীকে এনআইএইচ এবং আমেরিকান অ্যাসোসিয়েশন অফ ল্যাবরেটরি অ্যানিমাল কেয়ার প্রবিধানের সাথে কঠোরভাবে রাখা হয়েছিল। এই অধ্যয়নের জন্য সমস্ত পরীক্ষা এবং পদ্ধতি কলম্বিয়া ইউনিভার্সিটি মেডিকেল সেন্টার ইনস্টিটিউশনাল অ্যানিমাল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ কমিটি (IACUC) দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।

সেল লাইন. NPK-C1 সেল লাইন (মূলত LM7304) কলম্বিয়া ইউনিভার্সিটির ডঃ কোরি অ্যাবেটশেন দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। আরও বিস্তারিত জানার জন্য পূর্বের রেফারেন্স দেখুন (8,9)। NPK-C1 কোষগুলি R10-এ রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল, যার মধ্যে RPMI মাধ্যম (কর্নিং; কর্নিং, NY) 10 শতাংশ FBS (HyClone; Logan, UT), 100 U/mL পেনিসিলিন এবং 100 mg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco; Gaithersburg) এর সাথে সম্পূরক রয়েছে। এমডি)। MC38 কোলন কার্সিনোমা কোষগুলি কেরাফাস্ট থেকে কেনা হয়েছিল এবং 10 শতাংশ FBS, 100 U/mL পেনিসিলিন এবং 100 mg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco; Gaithersburg, MD) দিয়ে সম্পূরক DMEM (Corning; Corning, NY) সমন্বিত D10-এ সংস্কৃত করা হয়েছিল।

টিউমার চ্যালেঞ্জ এবং থেরাপি ইনজেকশন। 70-90 শতাংশ সঙ্গমে NPK-C1 কোষ বা 50-75 শতাংশ সঙ্গমে MC38 কোষগুলি 0 দিয়ে কাটা হয়েছিল৷{10}}5 শতাংশ ট্রিপসিন (Gibco, Gaithersburg, MD), দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল পিবিএস, বরফ-ঠান্ডা পিবিএস-এ 10x106 কোষ/mL এ গণনা করা হয়েছে এবং পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছে। 0 তম দিনে, 6-8 সপ্তাহের বয়সী ইঁদুরগুলিকে 1x106 NPK-C1 বা MC38 কোষের সাথে ডান পাশে বসানো হয়েছিল৷ ডিজিটাল ক্যালিপার দ্বারা প্রতি 2-3 দিনে X, Y, এবং Z মাত্রায় (যথাক্রমে বৃহত্তম ব্যাস, ক্ষুদ্রতম ব্যাস এবং বৃহত্তম উচ্চতা) টিউমার পরিমাপ রেকর্ড করা হয়েছিল এবং X*Y*Z গুণ করে টিউমারের পরিমাণ গণনা করা হয়েছিল। অ্যান্টি-পিডি-1 (RMP1- 14 IgG2a,κ) বা Rat IgG2a আইসোটাইপ অ্যান্টিবডি (বায়ো এক্স সেল; লেবানন, এনএইচ) জীবাণুমুক্ত পিবিএসে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 200 ug/ এ ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল (আইপি) ইনজেকশন দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল 3, 6, 9, এবং 12 পোস্ট-MC38 ইমপ্লান্টেশনে মাউস প্রতি mL।

টিস্যু সংগ্রহ। মাউসের ইথানেশিয়ার পর, ~200 উল রক্ত ​​0.2 শতাংশ হেপারিন (স্টেমসেল টেকনোলজিস; ভ্যাঙ্কুভার, বিসি) লেপা সিরিঞ্জের সুই ব্যবহার করে কার্ডিয়াক পাংচারের মাধ্যমে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং 10 উল 0.5 মিলিমিটারযুক্ত টিউবগুলিতে বরফের উপর স্থাপন করা হয়েছিল। EDTA (কর্নিং; কর্নিং, এনওয়াই)। টিউমার-ড্রেনিং এবং নন-ড্রেনিং ইনগুইনাল লিম্ফ নোডগুলি বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং বরফের উপর 150 ul R10 মিডিয়া ধারণকারী ভাল প্লেটে 48- স্থাপন করা হয়েছিল।

টিউমারগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল, ভর করা হয়েছিল এবং 50 মিলিগ্রাম পর্যন্ত টিউমারটি কাটা হয়েছিল এবং X-ভিভো 15 মিডিয়াতে (লোনজা; বাসেল, সুইজারল্যান্ড) 5 মিলিলিটার এপেনডর্ফ টিউবে বরফের উপর স্থাপন করা হয়েছিল। DNase (40 ul of 20 mg/mL দ্রবণ; Roche; Basel, Switzerland) এবং Collagenase D (40 mg/mL দ্রবণের 125 ul; Roche; বাসেল, সুইজারল্যান্ড) 37o C তাপমাত্রায় শেকারে ইনকিউবেশনের আগে টিউমারের নমুনায় যোগ করা হয়েছিল 30 মিনিট. ঘূর্ণি (30 সেকেন্ড) এবং 5mL R10 মিডিয়া যোগ করে ডাইজেস্ট প্রতিক্রিয়াগুলি নিভিয়ে দেওয়া হয়েছিল। টিউমার ডাইজেস্টগুলি 70 μm ফিল্টারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল (মিল্টেনি; বার্গিস গ্ল্যাডবাচ, জিই) এবং পেলেট করা হয়েছিল। রক্তের নমুনাগুলিকে 2mL ACK বাফারে (গুণমান জৈবিক; Gaithersburg, MD) পরপর দুটি 2-মিনিট ইনকিউবেশনের মাধ্যমে RBC লাইজ করা হয়েছিল এবং R10-এ ছোঁয়ার আগে নিভে যাওয়া হয়েছিল৷ লিম্ফ নোডগুলিকে 48-ওয়েল প্লেটে একটি 1mL সিরিঞ্জ প্লাঞ্জার দিয়ে শারীরিকভাবে আলাদা করা হয়েছিল, তারপর সাসপেনশনগুলিকে 40-um ফিল্টারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল৷ সমস্ত নমুনা দাগের জন্য U-নিচের 96-ওয়েল প্লেটে রাখা হয়েছিল৷

ফ্লো সাইটোমেট্রি। নমুনাগুলি পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। 100 উল পিবিএস প্লাস লাইভ/ডেড ফিক্সেবল ব্লু ডাই (1:500; ইনভিট্রোজেন; ওয়ালথাম, এমএ) তে পুনরুদ্ধারের মাধ্যমে মৃত কোষগুলি দাগযুক্ত হয়েছিল। এটি এবং আরও সমস্ত স্টেনিং বা ফিক্সেশন পদক্ষেপগুলি আলো থেকে সুরক্ষিত প্লেট শেকারে ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল। নমুনাগুলি PBS দিয়ে 2x ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, তারপর FACS (PBS প্লাস 3 শতাংশ FBS প্লাস 1mM EDTA প্লাস 10mM HEPES) TruStain FcX (1:50; BioLegend; সান দিয়েগো, CA) এবং TruStain মনোসাইট ব্লকার (1:50; বায়োলিজেন্ড; সান দিয়েগো, CA) এবং ট্রুস্টেন মনোসাইট ব্লকার (1:02; বায়োলেজেন্ড; সান দিয়েগো, CA) এবং বরফের উপর স্থাপন করা হয়েছে।

ব্রিলিয়ান্ট স্টেইন প্লাস বাফার (বিডি; ফ্র্যাঙ্কলিন লেকস, এনজে) এর সাথে সম্পূরক এফএসিএস-এ সর্বোত্তম পাতলাকরণে (পরিপূরক সারণী S1 দেখুন) সারফেস অ্যান্টিবডিগুলি প্রস্তুত করা হয়েছিল, তারপরে একটি ব্লকিং সমাধানে নমুনায় যুক্ত করা হয়েছিল। দাগ দেওয়ার পরে, নমুনাগুলি FACS বাফার দিয়ে 2x ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং FoxP3 ফিক্সেশন/পারমিবিলাইজেশন কিট বাফার (ইবায়োসায়েন্স; সান দিয়েগো, CA) এর 100 ul এ স্থির করা হয়েছিল। নমুনাগুলি 1X পারমিবিলাইজেশন বাফার (1X PW) দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরে 1X PW প্লাস আন্তঃকোষীয় অ্যান্টিবডিগুলিতে দাগ দেওয়া হয়েছিল। তারপরে নমুনাগুলি 1X PW-তে দুবার ধুয়ে তারপর 100 ul FluoroFix বাফারে (বায়োলেজেন্ড: সান দিয়েগো, CA) স্থির করা হয়েছিল, FACS দিয়ে দুবার ধোয়া হয়েছিল, তারপর 200 ul FACS-এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল এবং পরের দিন অধিগ্রহণের জন্য 96টি ওয়েল প্লেটে সিল করে দেওয়া হয়েছিল সাইটেক অরোরা 5-লেজার সাইটোমিটার।

একই সাথে দাগযুক্ত স্প্লেনোসাইট নমুনাগুলি একক দাগ নিয়ন্ত্রণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। বিশ্লেষণ এবং পরিসংখ্যান. অনুদৈর্ঘ্য প্রোফাইলিং পরীক্ষাগুলি MC38 এবং NPK-C1 মডেলগুলির জন্য প্রতিটি একবার পরিচালিত হয়েছিল। প্রতি টাইম পয়েন্টে মোট n=10-25টি ইঁদুরের মূল্যায়ন করা হয়েছে। FlowJo v10.8.1 (BD; Franklin Lakes, NJ) এ ফ্লো সাইটোমেট্রি ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছে এবং FlowJo এক্সচেঞ্জ থেকে উচ্চমাত্রিক প্লাগইন অ্যালগরিদম UMAP এবং FlowSOM ডাউনলোড করা হয়েছে। 30k লাইভ CD45 প্লাস টিউমার-অনুপ্রবেশকারী কোষ এবং 15k পর্যন্ত লাইভ CD45 প্লাস রক্ত ​​বা LN-প্রাপ্ত কোষ প্রতি নমুনা উচ্চমাত্রিক বিশ্লেষণের জন্য সংযুক্ত করা হয়েছিল।

সমস্ত মাত্রিকতা হ্রাস এবং ক্লাস্টারিং ফ্লোজোতে সঞ্চালিত হয়েছিল। গ্রাফপ্যাড প্রিজম v9.3.1 এ পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ককে পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ তৈরি করতে ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং ওয়েল্চের সংশোধনের সাথে জোড়াবিহীন ছাত্রদের টি-পরীক্ষাগুলি গ্রুপগুলির মধ্যে ক্লাস্টার ফ্রিকোয়েন্সি তুলনা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। একক-কোষ বিশ্লেষণী পদ্ধতি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে (10,11)।

KLRG1 রেগুলনটি Obradovic, et al(11) থেকে কনসেনসাস metaVIPER KLRG1 রেগুলন থেকে বের করা হয়েছিল। KLRG1 রেগুলন স্বাক্ষর গণনা করার জন্য, আমরা বৈশিষ্ট্য হিসাবে রেগুলন জিন এবং লক্ষ্য হিসাবে KLRG1 সহ একটি র্যান্ডম ফরেস্ট রিগ্রেশন মডেল ফিট করি, তারপর KLRG1 এক্সপ্রেশনের উপর তাদের প্রভাব নির্ধারণ করতে রেগুলন জিনের জিনি গুরুত্ব স্কোরগুলি গণনা করি৷ প্রতিটি কোষের KLRG1 রেগুলন স্কোর ওজন হিসাবে গুরুত্ব স্কোর সহ কোষের সমস্ত রেগুলন জিনের অভিব্যক্তি পরিমাপের ওজনযুক্ত যোগফল দ্বারা দেওয়া হয়েছিল।

For more information:1950477648nn@gmail.com