বর্ধিত YKL-40 কিন্তু আলঝেইমার রোগে আক্রান্ত রোগীদের মধ্যে C-প্রতিক্রিয়াশীল প্রোটিনের মাত্রা নয়Ⅱ

2. উপাদান এবং পদ্ধতি

2.1। মানব দাতা

এই গবেষণায় মোট 123টি বিষয় অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল: (1) কোনো নিউরোডিজেনারেটিভ রোগের (স্বাস্থ্য নিয়ন্ত্রণ) কোনো প্রমাণ ছাড়াই বয়স্ক ব্যক্তিদেরকে নিয়ন্ত্রণ (n=37) হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছে; (2) AD (MCI) রোগীদের কারণে MCI (n=22); (3) সম্ভাব্য মৃদু/মধ্যম – গুরুতর বিক্ষিপ্ত AD রোগী (n=34); (4) PD রোগী (n=30)। অধ্যয়ন অংশগ্রহণকারীদের মেমরি ক্লিনিক (নিয়ন্ত্রণ, এমসিআই, এবং এডি বিষয়) এবং হাসপাতাল ইউনিভার্সিটিরিও 12 ডি অক্টুব্রে (মাদ্রিদ, স্পেন) এর মুভমেন্ট ডিসঅর্ডার ইউনিট (পিডি অংশগ্রহণকারী) থেকে নথিভুক্ত করা হয়েছিল। বিষয় জনসংখ্যাগত এবং ক্লিনিকাল বৈশিষ্ট্যগুলি সারণি 1 এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে।

সমস্ত অংশগ্রহণকারীদের এমসিআই বা সম্ভাব্য এডি ডিমেনশিয়া [43-45] এর মধ্যে প্রতিষ্ঠিত ডায়গনিস্টিক মানদণ্ড ব্যবহার করে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল। নির্ণয়টি একটি বিশদ ক্লিনিকাল মূল্যায়ন, নিউরোসাইকোলজিকাল মূল্যায়ন এবং নিউরোইমেজিং (এমআরআই) এর উপর ভিত্তি করে করা হয়েছিল। কার্যকরী বৈকল্য ক্লিনিকাল ডিমেনশিয়া রেটিং (সিডিআর) স্কোরের মাধ্যমে পরিমাপ করা হয়েছিল [46]।

পারকিনসন রোগ এবং আলঝেইমার রোগের চিকিৎসার জন্য cistanche tcm-এ ক্লিক করুন

PD রোগীদের মুভমেন্ট ডিসঅর্ডার সোসাইটি (MDS) ক্লিনিকাল ডায়গনিস্টিক মানদণ্ড [47] অনুসরণ করে নির্ণয় করা হয়েছিল এবং ক্লিনিকালভাবে প্রতিষ্ঠিত PD-এর জন্য সমস্ত মানদণ্ড পূরণ করা হয়েছিল। PD রোগীরা জ্ঞানীয় অভিযোগ উল্লেখ করেননি এবং ডিমেনশিয়ার লক্ষণগুলি প্রদর্শন করেননি। কন্ট্রোল গ্রুপ 50 বছর বা তার বেশি বয়সী জ্ঞানীয়ভাবে স্বাভাবিক ব্যক্তিদের নিয়ে গঠিত হয়েছিল, জ্ঞানীয় দুর্বলতার ক্লিনিকাল লক্ষণ এবং স্নায়বিক বা মানসিক রোগের ইতিহাস ছাড়াই।

প্রতিটি অংশগ্রহণকারীর জন্য বর্জনের মানদণ্ড ছিল সহগামী উল্লেখযোগ্য সেরিব্রোভাসকুলার রোগ এবং যে কোনও স্নায়বিক, মানসিক, ওষুধ, বা অ-স্নায়বিক চিকিৎসা কমরবিডিটির প্রমাণ যা জ্ঞান বা মোটর ফাংশনকে প্রভাবিত করতে পারে। অধ্যয়নের অনুমোদন হাসপাতাল ইউনিভার্সিটিরিও 12 ডি অক্টুব্রের রিসার্চ এথিক্স কমিটি থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং সমস্ত অংশগ্রহণকারী লিখিত অবহিত সম্মতি প্রদান করেছিলেন।

2.2। তরল নমুনা

সংগ্রহ CSF নমুনাগুলি সমস্ত বিষয় (স্বাস্থ্যকর রোগী এবং MCI, AD, এবং PD বিষয় সহ) থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং 15 মিলি জীবাণুমুক্ত পলিপ্রোপিলিন টিউবে কটিদেশীয় পাংচার দ্বারা প্রমিত পদ্ধতি অনুসারে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। তারপরে নমুনাগুলিকে 10 মিনিটের জন্য 3000 rpm 4 ◦C তাপমাত্রায় কেন্দ্রীভূত করা হয়েছিল। প্রোটিজ ইনহিবিটর ককটেল (রোচে, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) সহ 0.5 মিলি পলিপ্রোপিলিন ক্রায়োজেনিক টিউবে সুপারনেট্যান্ট অ্যালিকোটগুলি −80 ◦C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

রক্তের নমুনা রোগীদের এবং সুস্থ ব্যক্তিদের কাছ থেকে অ্যান্টিকিউবিটাল শিরা পাংচারের মাধ্যমে প্রাপ্ত করা হয়েছিল। 7 মিলি ইডিটিএ-2না টিউবে সংগৃহীত পুরো রক্ত ​​থেকে প্লাজমা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য পুরো রক্ত ​​2000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। তারপরে সুপারন্যাট্যান্টগুলিকে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং প্রোটিজ ইনহিবিটর ককটেল (রোচে, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) সহ পলিপ্রোপিলিন ক্রায়োজেনিক টিউবগুলিতে আলাদা করা হয়েছিল এবং −80 ◦C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

2.3। টিস্যুর নমুনা

পোস্টমর্টেম সেরিব্রাল অরবিফ্রন্টাল কর্টেক্স টিস্যু AD এবং নিয়ন্ত্রিত ব্যক্তিদের দ্বারা নির্ণয় করা মস্তিষ্কের দাতাদের কাছ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। হিমায়িত নমুনাগুলি ইনস্টিটিউট অফ নিউরোপ্যাথোলজি ব্রেইন ব্যাঙ্ক IDIBELL-হসপিটাল ইউনিভার্সিটারি ডি বেলভিট (হসপিটালেট ডি লোব্রেগাট, স্পেন) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। হেলসিঙ্কির ঘোষণা অনুসারে বিষয়ের সম্মতি প্রাপ্ত হয়েছিল এবং দায়িত্বপ্রাপ্ত প্রতিষ্ঠানের গবেষণা নীতিশাস্ত্র কমিটি থেকে অনুমোদন এসেছে।

সমস্ত ক্ষেত্রে, লিখিত অবহিত সম্মতি উপলব্ধ ছিল। নিউরোফাইব্রিলারি ট্যাঙ্গেল প্যাথলজি এবং এ ফলক [৪৮] অনুসারে এডি-র পোস্টমর্টেম নির্ণয়ের ভিত্তিতে বিষয়গুলি নির্বাচন করা হয়েছিল। AD ক্ষেত্রে উচ্চ AD নিউরোপ্যাথোলজিক পরিবর্তন দেখায় (ব্রাক স্টেজ V/VI এবং মাঝারি থেকে ঘন ঘন নিউরিটিক প্লেক স্কোর)। কন্ট্রোল অংশগ্রহণকারীদের স্নায়বিক উপসর্গ বা AD নিউরোপ্যাথলজিক পরিবর্তনের নিম্ন গ্রেডের সাথে/বিহীন হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল। মোট 24টি নমুনাকে AD এবং নিয়ন্ত্রণে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল, যেমনটি সারণি 2 এ উপস্থাপিত হয়েছে।

2.4। DNA পরিশোধন এবং Apolipoprotein E (APOE) জিনোটাইপিং

প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে, QIAmp DNA ব্লাড মিনি কিট (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) ব্যবহার করে পেরিফেরাল রক্ত ​​থেকে জিনোমিক ডিএনএ বের করা হয়েছিল। মানব APOE C112R এবং R158C পলিমরফিজমগুলি APOE ε2, ε3 এবং ε4 অ্যালিলগুলি সনাক্ত করার জন্য সনাক্ত করা হয়েছিল, LightCycler 480 II ইন্সট্রুমেন্টস কিট (Roche ডায়াগনস্টিকস, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসরণ করে।

2.5। প্রোটিন বিশ্লেষণ

নিউরোইনফ্ল্যামেটরি বায়োমার্কার (ওয়াইকেএল-40 এবং সিআরপি) এর সিএসএফ এবং প্লাজমা ঘনত্ব ELISA কিট ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (হিউম্যান চিটিনেস 3-যেমন 1 কোয়ান্টিকাইন ELISA কিট (DC3L10), R&D; হিউম্যান CRP কোয়ান্টিকাইন ELISA কিট (DCRP{) {5}}), R&D) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে। ব্রেন YKL-40 এবং GFAP প্রোটিনের মাত্রাও পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। পোস্টমর্টেম সেরিব্রাল অরবিফ্রন্টাল কর্টেক্স টিস্যু AD এবং নিয়ন্ত্রিত ব্যক্তিদের দ্বারা নির্ণয় করা মস্তিষ্কের দাতাদের কাছ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।

সংক্ষিপ্তভাবে, মানুষের সেরিব্রাল অরবিফ্রন্টাল কর্টেক্স নমুনাগুলি লাইসিস বাফার (50 মিমি ট্রিস/এইচসিএল বাফার, পিএইচ 7.4 যাতে 2 মিমি ইডিটিএ, 0.2 শতাংশ ননাইডেট পি-40, 1 মিমি পিএমএসএফ, প্রোটিয়াস থাকে এবং ফসফেটেস ইনহিবিটর ককটেল; রোচে, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) এবং 14 ◦C তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়,{10}} rpm 4 ◦C। সুপারনেট্যান্টগুলি উদ্ধার করা হয়েছিল এবং −80 ◦C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। বিসিএ পদ্ধতি ব্যবহার করে প্রোটিনের পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, এমএ, ইউএসএ)। সমান পরিমাণে প্রোটিন (YKL-40-এর জন্য 20 µg এবং GFAP-এর জন্য 5 µg) Laemmli নমুনা বাফারের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল -মেরকাপটোথানলের সাথে সম্পূরক, 5 মিনিটের জন্য 95 ◦C তাপমাত্রায় উত্তপ্ত করা হয়েছিল, 10 শতাংশ NuPAGE Bis-Tris Gels দ্বারা সমাধান করা হয়েছিল ( থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, এমএ, ইউএসএ), এবং পলিভিনিলাইডিন ডিফ্লুরাইড (পিভিডিএফ) ঝিল্লিতে (মিলিপুর, এমএ, ইউএসএ) স্থানান্তরিত হয়েছে।

পরবর্তীতে, প্রাথমিক অ্যান্টিবডি সহ 4 ◦C তাপমাত্রায় মেমব্রেনগুলিকে অবরুদ্ধ করা হয়েছিল এবং রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল: একটি রিকম্বিন্যান্ট র্যাবিট মনোক্লোনাল অ্যান্টি-ওয়াইকেএল-40 অ্যান্টিবডি (ab255297, 1:500, Abcam) এবং একটি মাউস মনোক্লোনাল অ্যান্টি-GFAP অ্যান্টিবডি (G3893,1) :0000, সিগমা অলড্রিচ)। তারপরে মেমব্রেনগুলিকে যথাযথ হর্সরাডিশ পারক্সিডেস (HRP)-সংযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (G-21234, 1:5000, Thermo Fisher Scientific, MA, USA; ab97023, 1:40000, Abcam) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল।

জিএফএপি সনাক্তকরণের জন্য YKL-40 এর জন্য -টুবুলিন (ab40742, 1:5000, Abcam) বা অ্যাক্টিনের বিরুদ্ধে (A1978, সিগমা অ্যালড্রিচ) এর বিরুদ্ধে মাউস মনোক্লোনাল এইচআরপি-সংযুক্ত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে প্রোটিন লোডিং নিরীক্ষণ করা হয়েছিল। ইমিউনো কমপ্লেক্সগুলি একটি বর্ধিত কেমিলুমিনেসেন্স রিএজেন্ট (ইসিএল ক্ল্যারিটি; বায়ো-র্যাড, সিএ, ইউএসএ) দ্বারা প্রকাশিত হয়েছিল। ইমেজ স্টুডিও লাইট 5.0 সফ্টওয়্যার (Li-COR বায়োসায়েন্সেস, NE, USA) দিয়ে ডেনসিটোমেট্রিক পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল। প্রোটিন ব্যান্ডগুলি লোডিং নিয়ন্ত্রণে স্বাভাবিক করা হয়েছিল এবং নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল

2.6। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

Stata/IC সফ্টওয়্যার (Stata 16.1, StataCorp LLC, College Station, TX, USA) এবং প্রিজম (GraphPad Software version 8.00, La Jolla, CA, USA) ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ এবং গ্রাফগুলি সম্পাদিত হয়েছিল। বিতরণের স্বাভাবিকতা মূল্যায়ন করার পরে, CSF এবং প্লাজমা YKL-40 এবং CRP স্তরগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলি ননপ্যারামেট্রিক ক্রুস্কাল-ওয়ালিস র্যাঙ্ক পরীক্ষা ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পেয়ারওয়াইজ তুলনার জন্য p-মানটি Bonferroni সংশোধনের সাথে প্রদর্শিত হয়। CSF YKL-40 অ্যাসোসিয়েশন বিশ্লেষণে বিভ্রান্তিকর ভেরিয়েবলের (বয়স, লিঙ্গ এবং APOE ε4) জন্য একটি বর্ণনামূলক একাধিক লিনিয়ার রিগ্রেশন মডেল সঞ্চালিত হয়েছিল।

ক্লিনিকাল নির্ণয়ের সাথে বিভ্রান্তিকর ভেরিয়েবলের মিথস্ক্রিয়াগুলি মডেল থেকে বাদ দেওয়া হয়েছিল (সম্পূর্ণ মিথস্ক্রিয়াগুলির জন্য তাত্পর্য: p > 0.10)। রিগ্রেশন সহগ "b" হিসাবে প্রদর্শিত হয়। লিঙ্গ বন্টনের পার্থক্য, অংশগ্রহণকারীদের বয়স, সূচনার বয়স, এবং গ্রুপগুলির মধ্যে রোগ শুরু হওয়ার পর থেকে বছরগুলি পিয়ারসন চি-স্কোয়ার এবং আনোভা পরীক্ষার মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যেখানে উপযুক্ত।

বায়োমার্কার এবং জনসংখ্যাগত বৈশিষ্ট্যগুলির মধ্যে সম্পর্কগুলি পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক পরীক্ষা, স্টুডেন্ট টি-টেস্ট এবং মান-হুইটনি ইউ পরীক্ষার মাধ্যমে পরীক্ষা করা হয়েছিল, যেখানে উপযুক্ত। একটি ননপ্যারামেট্রিক প্রবণতা পরীক্ষা (জঙ্কহিরে প্রবণতা পরীক্ষা) একটি প্রবণতার অস্তিত্ব মূল্যায়ন করার জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল যখন এক্সপোজিশনটি অর্ডিনাল বিভাগগুলি দেখায়। রিগ্রেশন লজিস্টিক বিশ্লেষণের সাথে প্রদত্ত ক্লিনিকাল নির্ণয়ের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতি মডেল করার পরে ROC বক্ররেখা তৈরি করা হয়েছিল।

YKL{{0}} এবং GFAP ওয়েস্টার্ন ব্লট এক্সপ্রেশন স্তরগুলি তাদের নিজ নিজ লোডিং নিয়ন্ত্রণে (-টিউবুলিন এবং -অ্যাক্টিন) স্বাভাবিক করা হয়েছিল এবং ননপ্যারামেট্রিক মান-হুইটনি ইউ পরীক্ষার সাথে নিয়ন্ত্রণ অনুপাতের গড়ের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। গ্রাফে, CSF এবং প্লাজমা YKL-40 এবং CRP স্তরগুলিকে মধ্যমা এবং আন্তঃকোয়ার্টাইল পরিসীমা হিসাবে দেখানো হয়েছে। YKL-40 এর মস্তিষ্কের অভিব্যক্তিটি গড় (SEM) এর গড় ± স্ট্যান্ডার্ড ত্রুটি হিসাবে দেখানো হয়েছে। সমস্ত ক্ষেত্রে, পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য p <0.05 এ সেট করা হয়েছিল।

Cistanche এর প্রক্রিয়া আলঝাইমার রোগ এবং পারকিনসন রোগের চিকিৎসা করে

Cistanche হল একটি ভেষজ যা ঐতিহ্যগতভাবে চীনা ওষুধে আলঝাইমার রোগ (AD) এবং পারকিনসন্স ডিজিজ (PD) এর মতো স্নায়বিক ব্যাধি সহ বিভিন্ন স্বাস্থ্য অবস্থার চিকিত্সার জন্য ব্যবহৃত হয়েছে। সিস্তানচে বেশ কিছু জৈব সক্রিয় যৌগ রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড এবং ইরিডয়েড গ্লাইকোসাইড, যার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, প্রদাহ বিরোধী এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব রয়েছে। এই যৌগগুলি মুক্ত র্যাডিকেল এবং প্রদাহজনক প্রক্রিয়াগুলির দ্বারা সৃষ্ট ক্ষতি থেকে নিউরোনাল কোষগুলিকে রক্ষা করতে সহায়তা করে, যা AD এবং PD এর বিকাশ এবং অগ্রগতিতে অবদান রাখে বলে বিশ্বাস করা হয়।

উপরন্তু, Cistanche ডোপামিন এবং অ্যাসিটাইলকোলিন সহ মস্তিষ্কে নির্দিষ্ট নিউরোট্রান্সমিটারের মাত্রা বাড়াতে দেখানো হয়েছে, যা মস্তিষ্কের স্বাভাবিক কার্যকারিতার জন্য গুরুত্বপূর্ণ। এই নিউরোট্রান্সমিটারের মাত্রা বৃদ্ধি করে, Cistanche জ্ঞানীয় কার্যকারিতা উন্নত করতে এবং AD এবং PD-এর লক্ষণগুলি কমাতে সাহায্য করতে পারে।

সামগ্রিকভাবে, AD এবং PD-এর চিকিৎসায় Cistanche-এর প্রক্রিয়াগুলির মধ্যে এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি, এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব, সেইসাথে মস্তিষ্কে নিউরোট্রান্সমিটারের মাত্রা বাড়ানোর ক্ষমতা জড়িত।

চলবে...

ভিক্টর আন্তোনিও ব্ল্যাঙ্কো-পালমেরো 1,2,3,† , মার্কোস রুবিও-ফার্নান্দেজ 1,2,†, ডিজায়ারে আন্তেকেরা 1,2 , আলবার্তো ভিলারেজো-গালেন্ডে 1,2,3 , হোসে আন্তোনিও মোলিনা 1,2,3, ইসিড্রো ফেরার 1,4,5,6, ফার্নান্দো বার্তোলোম 1,2,* এবং ইভা ক্যারো 1,2,*

1 নেটওয়ার্ক সেন্টার ফর বায়োমেডিকেল রিসার্চ ইন নিউরোডিজেনারেটিভ ডিজিজেস (CIBERNED), 28031 মাদ্রিদ, স্পেন; victorb1989@gmail.com (VAB-P।); marcosrubio.imas12@h12o.es (MR-F.); eeara@yahoo.es (DA); avgalende@yahoo.es (AV-G.); cvillaiza@telefonica.net (জ্যাম); 8082ifa@gmail.com (ইফ)

নিউরোডিজেনারেটিভ ডিজিজের 2 গ্রুপ, হাসপাতাল 12 ডি অক্টুব্রে রিসার্চ ইনস্টিটিউট (imas12), 28041 মাদ্রিদ, স্পেন

3 নিউরোলজি সার্ভিস হাসপাতাল ইউনিভার্সিটিরিও 12 ডি অক্টোবর, 28041 মাদ্রিদ, স্পেন

4 বেলভিটজ বায়োমেডিকেল রিসার্চ ইনস্টিটিউট (IDIBELL), Hospitalet de Llobregat, E08907 বার্সেলোনা, স্পেন

5 ডিপার্টমেন্ট অফ প্যাথলজি এবং এক্সপেরিমেন্টাল থেরাপিউটিকস, ইউনিভার্সিটি অফ বার্সেলোনা, E08900 বার্সেলোনা, স্পেন 6 ইনস্টিটিউট অফ নিউরোসায়েন্স, ইউনিভার্সিটি অফ বার্সেলোনা, E08000 বার্সেলোনা, স্পেন * চিঠিপত্র: fbartolome.imas12@h12o.es (FB); carroeva@h12o.es (EC); টেলিফোন: প্লাস 34-913908765 (FB & EC); ফ্যাক্স: প্লাস 34-913908544 (FB এবং EC)