ভিভো অ্যাডমিনিস্ট্রেশন অফ গাট ব্যাকটেরিয়াল কনসোর্টিয়া একটি অ-ইউরোলিথিন-উত্পাদক ইঁদুর মডেলে ইউরোলিথিন মেটাবোটাইপ A এবং B এর প্রতিলিপি করে

কয়েক দশক ধরে, ellagitannins (ETs) andellagic acid (EA) এর ব্যবহার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টিক্যান্সার, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি, অ্যান্টিব্যাকটেরিয়াল এবং অ্যান্টি-এইচআইভি রেপ্লিকেশন কার্যক্রম সহ অসংখ্য জৈবিক প্রভাবের সাথে যুক্ত। খুবই দরিদ্র। পূর্ববর্তী মানব গবেষণায় দেখা গেছে যে EA-O-glucuronide-এর মূত্রত্যাগ 1% এর কম। (Uros), যা অন্তত আংশিকভাবে, ET- এবং (বা) EA-সমৃদ্ধ খাবারের উপকারী প্রভাবের জন্য দায়ী। 1,4

জোলাপ ক্লিক করুন

প্রথমত, EA এলাগিটানাস নামে পরিচিত এনজাইম দ্বারা ET-এর এস্টার বন্ডের হাইড্রোলাইসিসের মাধ্যমে মুক্তি পায়। 5 EA আরও ক্ষয়প্রাপ্ত হয়, 6H-dibenzo[b,d]pyran-6-উরোস নামে একটি ডেরিভেটিভ তৈরি করে। প্রতিক্রিয়ার এই ক্যাসকেড একটি ল্যাকটোনেজ এনজাইম দ্বারা একটি ল্যাকটোন রিংক্লেভেজ দিয়ে শুরু হয়, যার ফলে লুটিক অ্যাসিড হয়, যা পরে পেন্টাহাইড্রক্সি-ইউরো (ইউরো-এম5) তে ডিকারবক্সিলেটেড হয়। ক্রমাগত ডিহাইড্রোক্সিলেশন এটিকে টেট্রাহাইড্রক্সি-ইউরোসে রূপান্তরিত করে (উরো-ডি, ইউরো-ই, এবং Uro-M6) এবং trihydroxy-Uros (Uro-C, UroM7, এবং Uro-G), অবশেষে dihydroxy-Uros (Uro-A andisoUro-A) এবং monohydroxy-Uro (Uro-B) পাওয়া যায়, পরবর্তীটি সাধারণত সনাক্ত করা হয় যখন isoUro-A উৎপন্ন হয়

ইটি-সমৃদ্ধ খাবার খাওয়ার পর মানুষের মধ্যে ইউরো বিপাকীয় প্রোফাইলের বিস্তৃত বৈচিত্র্য ET অবক্ষয়ের জন্য দায়ী কোলনিক মাইক্রোবায়োটার মধ্যে আন্তঃব্যক্তিক পার্থক্য নির্দেশ করে। )phenols.6,9 অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং (পলি) ফেনলগুলির মধ্যে এই দ্বিমুখী মিথস্ক্রিয়া বৈজ্ঞানিক সম্প্রদায়কে তাদের উপর ভিত্তি করে জনসংখ্যাকে ক্লাস্টার করতে প্ররোচিত করেছেবিপাকীয় ফেনোটাইপ (ধাতুর ধরন) পলিফেনলের প্রভাবের পার্থক্য ব্যাখ্যা করতে। 10,11 আরও বিশেষভাবে, theET এবং EA বিপাক অনুসারে, ব্যক্তিদের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম রচনা এবং কার্যকারিতার সাথে যুক্ত ইউরোমেটাবোটাইপস (UMs) এ স্তরিত করা যেতে পারে। 7,8,12

তিনটি ভিন্ন Uro উত্পাদন প্রোফাইলের সাথে সম্পর্কিত তিনটি মানব UMs (UM-A,UM-B, এবং UM-0) পশ্চিম ও পূর্ব জনসংখ্যায় বর্ণনা করা হয়েছে৷13-15 এই বিষয়ে, মেটাবোটাইপ A (UM-A) ব্যক্তি বেশ কয়েকটি মধ্যবর্তী ইউরো তৈরি করে কিন্তু শুধুমাত্র ইউরোলিথিন A(Uro-A), এই UM-এ প্রধান শোষিত Uro, থিমিকোবিয়াল ক্যাটাবলিক পাথওয়ের শেষে। মেটাবোটাইপ বি (ইউএম-বি) ব্যক্তিরা কিছু মধ্যবর্তী ইউরো এবং তিনটি চূড়ান্ত ইউরো তৈরি করে, যেমন, ইউরোলিথিন বি (ইউরো-বি), ইউরোলিথিন এ (আইসোউরো-এ), এবং ইউরো-এ, যা ইউএম-বি-তে প্রধান শোষিত ইউরো। অতএব, মধ্যবর্তী ইউরোগুলি প্রাথমিকভাবে অন্ত্রে কাজ করতে পারে, যখন চূড়ান্তগুলির স্থানীয় এবং পদ্ধতিগত প্রভাব থাকতে পারে৷ 6 বিপরীতে, ধাতব প্রকারের ব্যক্তিরা 0 (UM-0) এই চূড়ান্ত উরোগুলি তৈরি করতে পারে না (শুধুমাত্র পূর্বসূরি ইউরোলিথিন-এম 5 এখনও পর্যন্ত সনাক্ত করা হয়েছে, যা অন্ত্রে শোষিত হয় না)।

ইউএম এবং বৃহৎ অন্ত্র বরাবর ইউরোপ্রোফাইলের মধ্যে পার্থক্য পরিলক্ষিত হয়েছে, ডিস্টালকোলন অঞ্চলে প্রধান ইউরো উৎপাদন দেখায়। 16-19 উল্লেখযোগ্যভাবে, স্প্যানিশ এবং চীনা স্বাস্থ্যকর স্বেচ্ছাসেবকদের মধ্যে UM-0 শতাংশ প্রায় 10% এবং এর চেয়েও বেশি হতে পারে। মার্কিন জনসংখ্যা।13-15 ব্যাকটেরিয়া জেনারা গর্ডোনিব্যাক্টর এবং এলাগিব্যাক্টরকে কিছু Uros-এ EA বিপাক করতে সক্ষম হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে।20-23তবে, এটি পাওয়া গেছে যে কিছু মধ্যবর্তী (উদাহরণস্বরূপ, Uro-D, Uro-E, Uro- M7, এবং Uro-G) এবং চূড়ান্ত Uros (Uro-A এবং Uro-B) এই ব্যাকটেরিয়াগুলির বিশুদ্ধ সংস্কৃতিতে উত্পাদিত হয় না, যা UM-A এবং UM-B উভয় কনফিগার করে এমন Uros সেট সম্পূর্ণ করার জন্য অন্যান্য ব্যাকটেরিয়ার প্রয়োজনীয়তা বোঝায়। . সম্প্রতি, ভিট্রোতে Uroproducing metabotypes (UM-A এবং UM-B) উৎপাদনের জন্য EA বিপাকের সাথে জড়িত গ্যাটব্যাকটেরিয়াল কনসোর্টিয়া সনাক্ত করা হয়েছে৷24

Gordonibacter plusEnterocloster genera এবং Ellagibacter plus Enterocloster ধারণকারী ব্যাকটেরিয়া কনসোর্টিয়া যথাক্রমে UM-A এবং UM-B-এর সাথে যুক্ত ইউরোলিথিনগুলি ভিট্রোতে উত্পাদিত করে। 25 তবে, এই ব্যাকটেরিয়া কনসোর্টিয়ার ক্ষমতা মানুষের ইউএম-বি-এ-ভিউ-এ-এর সাথে সম্পর্কিত ইউরো-প্রোফাইলের প্রতিলিপি তৈরি করে। এখনও অজানা। অধিকন্তু, নতুন প্রোবায়োটিক হিসাবে এই ইউরো-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া খাওয়ার নিরাপত্তা এখনও অনিশ্চিত, কারণ এটি আগে প্রাণী বা মানুষের মধ্যে পরীক্ষা করা হয়নি। বর্তমান সমীক্ষায়, উপরের ব্যাকটেরিয়া সংঘকে ইউরো-নন-প্রোডাকিং (UM-0-লাইক) ইঁদুরের অন্ত্রে উপনিবেশ করার ক্ষমতার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং যথাক্রমে UM-A এবং UM-B অনুকরণ করে ইউরোপ্রোডিউসারে রূপান্তরিত করা হয়েছিল। এই ব্যাকটেরিয়া কনসোর্টিয়ার নিরাপত্তাও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। এছাড়াও, মল নমুনাগুলিতে এলাজিব্যাক্টর এবং এন্টারোক্লোস্টার সনাক্ত এবং পরিমাপ করার জন্য দুটি নতুন রিয়েল-টাইম কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর (কিউপিসিআর)-ভিত্তিক পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছিল।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

রাসায়নিক এবং বিকারক

Uros রাসায়নিকভাবে সংশ্লেষিত এবং বিশুদ্ধ করা হয়েছিল VillapharmaResearch SL (Parque Tecnológico de Fuente Álamo, Murcia, Spain) দ্বারা। EA সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, MO, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। ফসফেট বাফার স্যালাইন (পিবিএস) ফিশার সায়েন্টিফিক (ইউএসএ) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল, যখন মিথানল, ইথানল এবং ফর্মিক অ্যাসিড ছিল প্যানরিয়াক কুইমিকা (বার্সেলোনা, স্পেন) থেকে। লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এলসি-এমএস) গ্রেড দ্রাবকগুলি জেটি বেকার (ডেভেনটার, নেদারল্যান্ডস) থেকে কেনা হয়েছিল। আল্ট্রাপুর মিলিপুর জল (বেডফোর্ড, এমএ, ইউএসএ) পুরো অধ্যয়ন জুড়ে ব্যবহৃত হয়েছিল। সমস্ত রাসায়নিক এবং বিকারক বিশ্লেষণাত্মক গ্রেডের ছিল।

ব্যাকটেরিয়া কনসোর্টিয়া প্রস্তুতি

Gordonibacter urolithinfaciens DSM 27213T, Ellagibacter isourolithinfaciens DSM 104140T, এবং Enterocloster বোল্ট CEBASS4A9, তাদের সকলকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছে এবং আমাদের ল্যাবে চিহ্নিত করা হয়েছে (CEBAS-CSIC, স্প্যানিশলি 5-এ ক্লিভেনটেড)। - কনসেপ্ট 400 অ্যানেরোবিক চেম্বারে (বেকাররাস্কিন টেকনোলজিস লিমিটেড, ব্রিজন্ড, সাউথ ওয়েলস, ইউকে) 48 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রীতে চালগ্রেন অ্যানেরোব মিডিয়াম (ডব্লিউএএম, অক্সয়েড) টিউব এবং 10% গ্লিসারল এবং 0.0.5 গ্লিসারল এবং পিবিএস-এ সাসপেন্ড করা হয়েছে। কুইমিকা, বার্সেলোনা, স্পেন)। অ্যানেরোবিক ইনকিউবেশনের পরে, কনসোর্টিয়া প্রস্তুত করা হয়েছিল। 24,25 সংক্ষেপে, "ব্যাকটেরিয়াল কনসোর্টিয়াম A" তে জি রয়েছে। urolithinfaciens এবং E. bolteae স্ট্রেন; "ব্যাকটেরিয়াল কনসোর্টিয়ামবি"-তে E. isourolithinifaciens এবং E. bolteae কালচার রয়েছে; এবং "কন্ট্রোল ককটেল" 10% গ্লিসারল এবং 0.05% এল-সিস্টাইন হাইড্রোক্লোরাইড সহ জীবাণুমুক্ত পিবিএস রয়েছে। প্রশাসনের আগে, সমস্ত ককটেলগুলি 3.5 মিলি অ্যালিকোটগুলিতে বিতরণ করা হয়েছিল এবং −80 ডিগ্রিতে রাখা হয়েছিল।

প্রাণী, খাদ্য, এবং পরীক্ষামূলক নকশা

পরীক্ষামূলক প্রোটোকল (রেফারেন্স 624/2020) স্থানীয় সরকার, স্প্যানিশ ন্যাশনাল রিসার্চ কাউন্সিলের বায়োএথিক্স কমিটি (মাদ্রিদ, স্পেন), এবং ইউনিভার্সিটি অফ মুর্সিয়া (স্পেন) থেকে অ্যানিমেল এক্সপেরিমেন্টেশন এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। পরীক্ষাগুলি পশু পরীক্ষা সংক্রান্ত ইউরোপীয় ইউনিয়নের সুপারিশ অনুসরণ করে (ইউরোপীয় পার্লামেন্টের নির্দেশিকা 2010/63/ইইউ এবং বৈজ্ঞানিক উদ্দেশ্যে ব্যবহৃত প্রাণীদের সুরক্ষার কাউন্সিল)। উইস্টার ইঁদুর (n=18; 9 মহিলা এবং 9 পুরুষ) 240 ± 31 গ্রাম ওজনের এনভিগো (বার্সেলোনা, স্পেন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। এই ইঁদুরের মডেলটি আমাদের প্রাথমিক গবেষণায় পর্যবেক্ষণ করা উরোস তৈরির অক্ষমতার উপর ভিত্তি করে নির্বাচন করা হয়েছিল যেখানে বিভিন্ন ইঁদুরের মডেলের মল নমুনা পরীক্ষা করা হয়েছিল। তিনটি গ্রুপ (A, B, এবং C) এলোমেলোভাবে 6টি প্রাণীকে (3টি মহিলা এবং 3টি পুরুষ ইঁদুর) দিয়ে তৈরি করা হয়েছিল। ) প্রতি গ্রুপ (চিত্র 1)।

প্রতিটি ইঁদুর গোষ্ঠীকে দুটি ভিন্ন খাঁচায় রাখা হয়েছিল, লিঙ্গ দ্বারা বিভক্ত, একটি ঘরে তাপমাত্রা-নিয়ন্ত্রিত পরিবেশ (22± 2 ডিগ্রি) যেখানে 55 ± 10% আপেক্ষিক আর্দ্রতা এবং একটি নিয়ন্ত্রিত আলো-অন্ধকার চক্র (12 ঘন্টা)। ইঁদুরগুলি একটি আদর্শ চাউ ডায়েট পেয়েছে (টেকলাড, বার্সেলোনা, স্পেন) যাতে রয়েছে (%/100 গ্রাম তাজা ওজন) 14.3% প্রোটিন (ভুট্টার আঠাযুক্ত খাবার), 48% কার্বোহাইড্রেট (গম, মাটির গম, ভুট্টা) এবং 4% চর্বি (সয়াবিনয়েল) ), 2.9 kcal g−1 শক্তির ঘনত্ব, এবং 4.1% অপরিশোধিত ফাইবার, 95% বিশুদ্ধতা (3.6 mg প্রতি 100 g ofchow) এর চেয়ে বেশি বা সমান EA পাউডারের সাথে সম্পূরক। EA কে গ্রাউন্ড স্ট্যান্ডার্ডফিডের সাথে একজাতীয়ভাবে মিশ্রিত করা হয়েছিল, রি-পেলেটেড এবং লাইওফিলাইজড করা হয়েছিল। EA-সমৃদ্ধ খাদ্য আর্দ্রতা এবং আলো থেকে দূরে সংরক্ষণ করা হয়. EA ডোজ দেওয়া হয়খাদ্যে ইঁদুর ছিল আনুমানিক 0.72 মিলিগ্রাম প্রতি ইঁদুর প্রতি দিন (EA1× খাদ্য), মানুষের সমতুল্য ডোজ 41 mg day−1.26 সমস্ত গোষ্ঠীকে EA 1× ডায়েট খাওয়ানো হয়েছিল এবং পুরো পরীক্ষা জুড়ে ট্যাপ ওয়াটার অ্যাড লিবিটাম ( 5 সপ্তাহ)। যেহেতু প্রথম সপ্তাহে মল নমুনায় শনাক্ত করা EA কম ছিল, তাই পরের দিনগুলিতে কিছু অতিরিক্ত EA যোগ করা হয়েছিল। 3 সপ্তাহে, জলে দ্রবীভূত ইঁদুর প্রতি 1.5 mgEA এর অতিরিক্ত ডোজ পশুদের গ্যাভেজ দ্বারা মৌখিকভাবে দেওয়া হয়েছিল (মোট=EA 3× ডায়েট), যা শুধুমাত্র 1 সপ্তাহের জন্য দেওয়া হয়েছিল। অবশেষে, 4 সপ্তাহে, প্রতিদিন ইঁদুর প্রতি ≈5 গ্রাম আখরোট (অন্য EA উত্স) EA 1× ডায়েটে যোগ করা হয়েছিল এবং ব্যাকটেরিয়ার সক্ষমতার উপর খাদ্য ম্যাট্রিক্স-ধারণকারী EA-এর প্রভাব মূল্যায়ন করার জন্য গবেষণার শেষ অবধি বজায় রাখা হয়েছিল। Uros উত্পাদন. ওজন, খাদ্য, এবং জল খাওয়া প্রতিদিন পরিমাপ করা হয়। অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া সংঘটি মৌখিকভাবে গ্যাভেজ দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল। গ্রুপ A পেয়েছে 500 µL ব্যাকটেরিয়া ককটেল A, GroupB পেয়েছে 500 µL ব্যাকটেরিয়াল ককটেল B, এবং গ্রুপ C(নিয়ন্ত্রণ) পেয়েছে 500 µL PBS। মৌখিক গ্যাভেজ প্রথম দুই সপ্তাহে প্রতি 2 দিন এবং পরবর্তী 2 সপ্তাহে প্রতিদিন করা হয়েছিল। গত সপ্তাহে (দিন 28 থেকে 32), প্রাণীরা একই খাদ্যের সাথে EA এবং আখরোটের পরিপূরক কিন্তু মুখে ব্যাকটেরিয়া প্রশাসন ছাড়াই চালিয়ে গেছে। অধ্যয়নের শেষে, একটি CO2 চেম্বার ব্যবহার করে প্রাণী বলি দেওয়া হয়েছিল।

নমুনা পদ্ধতি

UPLC-ESI-QTOF-MS/MS এবং 16S rRNAgene সিকোয়েন্সিং এবং qPCR দ্বারা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা দ্বারা ইউরো বিশ্লেষণের জন্য গবেষণার সময় মল নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। হেমাটোলজিকাল এবং সিরাম জৈব রাসায়নিক বিশ্লেষণের জন্য বিভিন্ন সময় বিন্দুতে (বেসলাইন, দিন 28 এবং অধ্যয়নের শেষে) রক্ত ​​বের করা হয়েছিল। রক্তের নমুনাগুলি লেজের শিরা (≈500 µL) থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং বেসলাইন এবং 28 এবং 32 দিনগুলিতে হেপারিনযুক্ত টিউবগুলিতে সংগ্রহ করা হয়েছিল (চিত্র 1)। প্লাজমা বিচ্ছেদ অবিলম্বে 3000g সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা 4 ডিগ্রি এবং frozen এ 10 মিনিটের জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল। সেরোবায়োকেমিক্যাল ভেরিয়েবলের আরও সংকল্প না হওয়া পর্যন্ত 80 ডিগ্রি। যকৃত, কিডনি এবং প্লীহা সংগ্রহ করা হয়েছিল, ওজন করা হয়েছিল এবং কোরবানির সময় কোনও রূপগত পার্থক্য সনাক্ত করার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল।

প্রাইমারের ডিজাইন এবং অপ্টিমাইজেশন এবং কিউপিসিআর দ্বারা এলাগিব্যাক্টর এবং এন্টারোক্লোস্টারের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য অনুসন্ধান

Ellagibacter isourolithinifaciens DSM 104140T এবং E. bolted CEBAS S4A9 এর 16S rRNA জিনের ক্রমগুলি GenBank ডাটাবেস (EMBL ডাটাবেস) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। অনুক্রমগুলি আণবিক বিবর্তনীয় জেনেটিক্স অ্যানালাইসিস সফ্টওয়্যার (MEGA 11) তৈরি করে ফাইলোজেনেটিক্যালি ক্লোজ ব্যাকটেরিয়াগুলির সাথে সারিবদ্ধ করা হয়েছিল এবং প্রাইমার ডিজাইন করার জন্য সংরক্ষিত এবং পরিবর্তনশীল ক্রমগুলির অঞ্চলগুলির জন্য পরিদর্শন করা হয়েছিল এবং এলাজিব্যাক্টর এবং এন্টারোক্লোস্টার (টি 1) সনাক্ত এবং পরিমাপ করার জন্য অনুসন্ধান করা হয়েছিল। প্রাইমারস্যান্ড প্রোবটি যথাক্রমে প্রাইমার কোয়েস্ট্যান্ড অলিগো বিশ্লেষক সরঞ্জামগুলির সাথে ডিজাইন এবং যাচাই করা হয়েছিল (ইন্টিগ্রেটেড ডিএনএটেকনোলজিস, ইনক., বেলজিয়াম)। TaqMan প্রোবটিকে 5′ এবং 3′ এ লেবেল করা হয়েছিল একটি 6- কার্বক্সি-ফ্লুরোসেসিন গ্রুপের সাথে (6FAM) এবং একটি ব্ল্যাকবেরি quencher (BBQ), যথাক্রমে। qPCR একটি ABI 7500 sequence সনাক্তকরণ সিস্টেম ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। প্রতিটি প্রাইমার এবং প্রোবের চূড়ান্ত ঘনত্ব ছিল এলাগিব্যাক্টরের জন্য 300 এবং 375 nM এবং এন্টারোক্লোস্টারের জন্য 200 এবং 500 nM। এলাগিব্যাক্টরের ডিএনএ পরিবর্ধনের জন্য একটি প্রচলিত কিউপিসিআর প্রোটোকল করা হয়েছিল এবংএন্টারোক্লোস্টার, যথাক্রমে। এলাগিব্যাক্টেরমপ্লিফিকেশনের জন্য র‌্যাম্পিং প্রোফাইল ছিল 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রিতে 1 চক্র, তারপর 15 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রির 45 সাইকেল, 40 সেকেন্ডের জন্য 50 ডিগ্রি এবং 31 সেকেন্ডের জন্য 72 ডিগ্রি। অবশেষে, 5 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রিতে 1টি চক্র যোগ করা হয়েছে। . এন্টারোক্লোস্টার পরিবর্ধনের জন্য র‌্যাম্পিং প্রোফাইল ছিল 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রিতে 1 চক্র, তারপর 15 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রির 40টি চক্র, 40 সেকেন্ডের জন্য 65 ডিগ্রি এবং 31 সেকেন্ডের জন্য 72 ডিগ্রি। অবশেষে, 5 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রিতে 1টি চক্র যোগ করা হয়েছে।

মল ডিএনএ নিষ্কাশন এবং অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল বিশ্লেষণ

মল নমুনা থেকে ডিএনএ নিষ্কাশন নিউক্লিওস্পিন® টিস্যু ডিএনএ পিউরিফিকেশন কিট (মাচেরি-নাগেল, জার্মানি) দিয়ে সঞ্চালিত হয়েছিল, কিছু পরিবর্তনের সাথে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে। ডিএনএ ফ্লোরিমেট্রি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল (Qubit3৷{2}} – ThermoFisher Scientific™, UK), এবং বিশুদ্ধতা 260/280 nm (A260/A280) (NanoDrop-ThermoFU, ScientificUK) তরঙ্গদৈর্ঘ্যে শোষণ অনুপাত থেকে পরিমাপ করা হয়েছিল ) অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা কম্পোজিশন 16S rRNA জিনের V3 এবং V4 পরিবর্তনশীল অঞ্চলগুলিকে ইলুমিনা প্রোটোকল অনুসরণ করে (ইলুমিনা ইনক., সান দিয়েগো, CA, USA) 2 × 300 bp পেয়ারড-এন্ড রান (MiSeqReqa3) এর পঠিত দৈর্ঘ্য সহ নির্ধারণ করা হয়েছিল। , ইলুমিনা ইনক।) একটি MiSeq-Illumina প্ল্যাটফর্মে (FISABIO সিকোয়েন্সিং সার্ভিস, স্পেন) মেটাজেনমিক সিকোয়েন্সিং করা হয়েছিল। ডেটা প্রসেসিং, কাইমেরিক সিকোয়েন্স রিমুভাল, সিকোয়েন্স অ্যালাইনমেন্ট, এবং 16S rRNA জিন সিকোয়েন্স ক্লাস্টারিং অন্যত্র বর্ণনা করা হয়েছে ট্যাক্সোনমিক ক্লাসিফিকেশন পাওয়ার জন্য। বর্তমান গবেষণায় ডিজাইন করা নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং প্রোবগুলি উপরে বর্ণিত কিউপিসিআর প্রোটোকল অনুসরণ করে ব্যবহার করা হয়েছিল। Gordonibacter, Enterocloster, এবং Ellagibacter-এর জিনোমিক ডিএনএ স্ট্যান্ডার্ড কার্ভগুলি পরিমাপের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। সমস্ত মল নমুনা তিন প্রতিলিপিতে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

মল নমুনাগুলিতে ইউরোলিথিন নিষ্কাশন, সনাক্তকরণ এবং পরিমাণ নির্ধারণ

MeOH/H2O (8{{ 20}/20), 0.1% HCl দিয়ে অ্যাসিডিফাইড, এবং ব্লক হিটারে 10 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় 1500 rpm-এ 2 মিনিটের জন্য ঘূর্ণি এবং ঝাঁকুনি দিয়ে একজাতকরণ করা হয়। সাসপেনশনটি 10 ​​মিনিটের জন্য 14 000g এ 4 ডিগ্রীতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, এবং সুপারনাট্যান্টকে a0.22 µm PVDF মেমব্রেন ফিল্টার (মিলিপুর কর্পোরেশন, বেডফোর্ড, এমএ) এর মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং MeOH (0.1% ফর্মিক অ্যাসিড) দিয়ে 3× মিশ্রিত করা হয়েছিল ) একটি UPLC-ESI-QTOF-MS সিস্টেমে ইনজেকশন দেওয়ার আগে। একটি UPLC সিস্টেম (Agilent 1290Infinity) একটি কোয়াড্রপোল টাইম-অফ-ফ্লাইট (QTOF) LC/MSsystem (6550 Accurate-Mass) (Agilent Technologies, Waldbronn, Germany) এর সাথে মিলিত হয়েছিল .29,30 সংক্ষেপে, বিচ্ছেদ করা হয়েছিল aPoroshell 120 EC-C18 রিভার্স-ফেজ কলামে, জল এবং অ্যাসিটোনিট্রিল ব্যবহার করে, উভয়ই 0.1% ফরমিক অ্যাসিড দিয়ে অম্লীয়, মোবাইলফেজ হিসাবে। প্রবাহের হার ছিল 0.4 mL min−1, এবং ইনজেকশনের আয়তন ছিল 5 μL। MassHunter গুণগত বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার (সংস্করণ B.10, Agilent Technologies, Waldbronn, Germany) ডেটা প্রক্রিয়াকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। সমস্ত বিপাককে মানগুলির সাথে সরাসরি তুলনা করে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং তাদের আণবিক ভর দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা ভাল রৈখিকতা (R2 > 0.99) সহ EA এবং বিভিন্ন Uros এর জন্য প্রাপ্ত হয়েছিল।

হেমাটোলজি এবং ক্লিনিকাল কেমিস্ট্রি

ইঁদুরের রক্তের নমুনার জন্য নির্দিষ্ট সফ্টওয়্যার (AVDIA 120, Siemens,Munich, Germany) সহ একটি স্বয়ংক্রিয় হেমাটোলজিকাল বিশ্লেষক ব্যবহার করে হেপারিনাইজড রক্তে হেমাটোলজিকাল ভেরিয়েবলগুলি নির্ধারণ করা হয়েছিল। বিশ্লেষণ করা ভেরিয়েবলগুলি হল গড় কর্পাসকুলার ভলিউম (MCV), গড় কর্পাসকুলার হিমোগ্লোবিন (MCH), গড় কর্পাসকুলার হিমোগ্লোবিন ঘনত্ব (MCHC), এরিথ্রোসাইট ডিস্ট্রিবিউশন (RDW), গড় প্লেটলেট ভলিউম (MPV), প্লেটলেটক্রিট (PCT), প্লেটলেট ডিস্ট্রিবিউশন প্রস্থ (PDW) , গড় প্লেটলেট কম্পোনেন্ট (MPC), গড় প্লেটলেট ভর (MPM), প্লেটলেট কাউন্ট (PLT), রেটিকুলোসাইট হিমোগ্লোবিন কন্টেন্ট (CHr), এবং গড় রেটিকুলোসাইট কর্পাসকুলার ভলিউম (MCVr)। প্লাজমা জৈব রাসায়নিক ভেরিয়েবল, ক্যালসিয়াম (Ca), এবং ফসফরাস (P) একটি Olympus AU400 রসায়ন এবং বিষবিদ্যা বিশ্লেষক (বেকম্যান কুল্টার, ক্যালিফোর্নিয়া, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। জৈব রাসায়নিক ভেরিয়েবলগুলি ছিল মোট প্রোটিন (PROT), অ্যালবুমিন (ALBU), গ্লোবুলিন (GLOB), ক্রিয়েটিনিন (CREA), গ্লুকোজ (GLUC), কোলেস্টেরল (CHOL), ট্রাইগ্লিসারাইডস (TRIGL), ক্ষারীয় ফসফেটেস (ALP), গামা-গ্লুটামিল ট্রান্সপেপ্টিডেস ( GGT), অ্যাসপার্টেট অ্যামিনোট্রান্সফেরেজ (AST), এবং অ্যালানাইন অ্যামিনোট্রান্সফেরেজ (ALT)। অবশেষে, থাইরক্সিন (T4) স্তরগুলি একটি IMMULITE® 1000 immunoassay সিস্টেম (Siemens) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

ডেটা গড় ± মান বিচ্যুতি (SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়। পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 27 দিয়ে সম্পাদিত হয়েছিল।{1}} (SPSS Inc., Chicago, IL, USA), এবং < 0.05 এর সাথে পার্থক্য পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়। শাপিরো-উইল্ক পরীক্ষার মাধ্যমে ডেটা স্বাভাবিকতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। বিভিন্ন চিকিৎসা গোষ্ঠীর মধ্যে তুলনা করা হয় টুকি'স বা ডনেট'স টি3 পোস্ট হক টেস্টের সাথে ভেরিয়েন্সের বারবার মাপা বিশ্লেষণ (RM ANOVA) ব্যবহার করে, ডেটা যথাক্রমে একটি স্বাভাবিক বা অ-স্বাভাবিক বন্টন অনুসরণ করেছে কিনা তার উপর নির্ভর করে। পুরুষ ও মহিলাদের মধ্যে পার্থক্যগুলি জোড়া স্টুডেন্টস টি-টেস্ট, বা উইলকক্সন স্বাক্ষরিত র‌্যাঙ্ক পরীক্ষা ব্যবহার করে অনুসন্ধান করা হয়েছিল যখন ডেটা যথাক্রমে সাধারণত বা অ-সাধারণভাবে বিতরণ করা হয়। চি-স্কোয়ার লিনিয়ার ডিসক্রিমিন্যান্ট অ্যানালাইসিস ইফেক্টসাইজ (LEfSe) গ্রুপের মধ্যে ডিফারেনশিয়াল ব্যাকটেরিয়া বৈশিষ্ট্য সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক স্বাভাবিক-বন্টনকৃত ডেটাতে ভেরিয়েবলের মধ্যে সম্ভাব্য সম্পর্ক বিশ্লেষণ করতে ব্যবহার করা হয়েছিল, যখন স্পিয়ারম্যান পারস্পরিক সম্পর্ক অ-স্বাভাবিক-বন্টিত ডেটাতে প্রয়োগ করা হয়েছিল। সিগমা প্লট 14.5 (সিস্ট্যাট সফটওয়্যার, সান জোসে, CA, USA) ব্যবহার করে ডেটা প্লটগুলি সম্পাদিত হয়েছিল।

কোষ্ঠকাঠিন্য-সিস্তানচে উপশমের জন্য প্রাকৃতিক ভেষজ ওষুধ

Cistanche হল পরজীবী উদ্ভিদের একটি প্রজাতি যা Orobanchaceae পরিবারের অন্তর্গত। এই গাছগুলি তাদের ঔষধি গুণাবলীর জন্য পরিচিত এবং বহু শতাব্দী ধরে ঐতিহ্যবাহী চাইনিজ মেডিসিনে (TCM) ব্যবহৃত হয়ে আসছে। Cistanche প্রজাতি প্রধানত চীন, মঙ্গোলিয়া এবং মধ্য এশিয়ার অন্যান্য অংশের শুষ্ক ও মরুভূমি অঞ্চলে পাওয়া যায়। Cistanche গাছপালা তাদের মাংসল, হলুদাভ কান্ড দ্বারা চিহ্নিত করা হয় এবং তাদের সম্ভাব্য স্বাস্থ্য সুবিধার জন্য অত্যন্ত মূল্যবান। টিসিএম-এ, সিস্তানচে টনিক বৈশিষ্ট্য রয়েছে বলে বিশ্বাস করা হয় এবং এটি সাধারণত কিডনিকে পুষ্ট করতে, জীবনীশক্তি বাড়াতে এবং যৌন ক্রিয়াকে সমর্থন করতে ব্যবহৃত হয়। এটি বার্ধক্য, ক্লান্তি এবং সামগ্রিক সুস্থতার সমস্যাগুলি সমাধান করতেও ব্যবহৃত হয়। যদিও সিস্তানচে ঐতিহ্যগত ওষুধে ব্যবহারের একটি দীর্ঘ ইতিহাস রয়েছে, তবে এর কার্যকারিতা এবং নিরাপত্তার উপর বৈজ্ঞানিক গবেষণা চলমান এবং সীমিত। যাইহোক, এতে বিভিন্ন বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ রয়েছে যেমন ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস, ইরিডয়েডস, লিগনানস এবং পলিস্যাকারাইড, যা এর ঔষধি প্রভাবে অবদান রাখতে পারে।

Wecistanche এরcistanche পাউডার, cistanche ট্যাবলেট, cistanche ক্যাপসুল,এবং অন্যান্য পণ্য ব্যবহার করে উন্নত করা হয়মরুভূমিcistancheকাঁচামাল হিসাবে, যার সবগুলিই কোষ্ঠকাঠিন্য উপশমে ভাল প্রভাব ফেলে। নির্দিষ্ট প্রক্রিয়াটি নিম্নরূপ: Cistanche এর ঐতিহ্যগত ব্যবহার এবং এতে থাকা নির্দিষ্ট যৌগগুলির উপর ভিত্তি করে কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করার জন্য সম্ভাব্য সুবিধা রয়েছে বলে মনে করা হয়। যদিও বৈজ্ঞানিক গবেষণা বিশেষত কোষ্ঠকাঠিন্যের উপর সিস্তানচে এর প্রভাব সীমিত, এটি মনে করা হয় যে একাধিক প্রক্রিয়া রয়েছে যা কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম করার সম্ভাবনায় অবদান রাখতে পারে। রেচক প্রভাব:সিস্তানচেকোষ্ঠকাঠিন্যের প্রতিকার হিসেবে ঐতিহ্যবাহী চাইনিজ মেডিসিনে দীর্ঘদিন ব্যবহার করা হয়েছে। এটির একটি হালকা রেচক প্রভাব রয়েছে বলে বিশ্বাস করা হয়, যা অন্ত্রের গতিবিধি উন্নীত করতে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য প্ররোচিত করতে সাহায্য করতে পারে। এই প্রভাবটি সিস্টানচে পাওয়া বিভিন্ন যৌগকে দায়ী করা যেতে পারে, যেমন ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড এবং পলিস্যাকারাইড। অন্ত্রকে আর্দ্র করা: ঐতিহ্যগত ব্যবহারের উপর ভিত্তি করে, সিস্তানচেকে ময়শ্চারাইজিং বৈশিষ্ট্য বলে মনে করা হয়, বিশেষ করে অন্ত্রকে লক্ষ্য করে। অন্ত্রের হাইড্রেশন এবং তৈলাক্তকরণের প্রচার করা সরঞ্জামগুলিকে নরম করতে এবং সহজে যাতায়াতের সুবিধার্থে সাহায্য করতে পারে, যার ফলে কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম হয়। অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব: কোষ্ঠকাঠিন্য কখনও কখনও পাচনতন্ত্রের প্রদাহের সাথে যুক্ত হতে পারে। সিস্তানচে কিছু নির্দিষ্ট যৌগ রয়েছে, যার মধ্যে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড এবং লিগনান রয়েছে, যেগুলির প্রদাহ-বিরোধী বৈশিষ্ট্য রয়েছে বলে বিশ্বাস করা হয়। অন্ত্রের প্রদাহ হ্রাস করে, এটি মলত্যাগের নিয়মিততা উন্নত করতে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম করতে সহায়তা করতে পারে।