ইঁদুরের ভিট্রিয়াস গহ্বরে অ্যালোজেনিক রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষের অনুক্রমিক বাইনোকুলার ট্রান্সপ্লান্টেশনের জন্য ইমিউন প্রতিক্রিয়া

বিমূর্ত:

অ্যালোজেনিক হিউম্যান রেটিনাল প্রোজেনিটর সেল (RPC) এর ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ট্রান্সপ্লান্টেশন অন্ধ রেটিনাল অবক্ষয়ের চিকিত্সা হিসাবে প্রতিশ্রুতি রাখে। পূর্ববর্তী কাজ দেখিয়েছে যে একক ইনজেকশনের পরে স্নায়ু পূর্ববর্তীরা অ্যালোগ্রাফ্ট হিসাবে ভালভাবে সহ্য করা হয়; যাইহোক, অ্যালোজেনিক কোষের অনুক্রমিক ডেলিভারি গ্রাফ্টগুলির পরবর্তী প্রতিরোধ ক্ষমতা প্রত্যাখ্যানের সাথে হোস্ট সংবেদনশীলতার সম্ভাব্য ঝুঁকি বাড়ায়। বর্তমান অধ্যয়নটি মাউস পশুর মডেল ব্যবহার করে অ্যালোজেনিক আরপিসিগুলির বারবার ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ট্রান্সপ্ল্যান্টের দ্বারা একটি ইমিউন প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত হবে কিনা তা মূল্যায়ন করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছিল। অ্যালোজেনিক হিউম্যান সেল প্রোডাক্টের রোগীদের বারবার চিকিত্সার পরে কী আশা করা যেতে পারে সে সম্পর্কে সুরক্ষা ডেটা সরবরাহ করার জন্য আমরা প্রাথমিকভাবে C57BL/6 জেনেটিক ব্যাকগ্রাউন্ড সহ দাতাদের কাছ থেকে প্রাপ্ত মুরিন রেটিনাল প্রোজেনিটর সেল (gmRPCs) ইনজেকশন দিয়েছি। . জিএমআরপিসি-তে ইমিউন প্রতিক্রিয়া হালকা ছিল, টি কোষ, বি কোষ, নিউট্রোফিল এবং প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষ সমন্বিত, ম্যাক্রোফেজ স্পষ্টভাবে প্রাধান্য পেয়েছে। জিএমআরপিসিগুলির পুনরাবৃত্তি ডোজ দিয়ে চিকিত্সা করা প্রাণীগুলি সংবেদনশীলতার প্রমাণ দেখায়নি, বা গ্রাফটগুলির অনাক্রম্য-মধ্যস্থতা ধ্বংসও ছিল না। ইমিউনোসপ্রেসিভ চিকিত্সার অনুপস্থিতি সত্ত্বেও, অ্যালোজেনিক জিএমআরপিসি গ্রাফ্টগুলি পুনরাবৃত্তি ডোজ করার পরে বেঁচে থাকে, এইভাবে প্রাথমিক পর্যবেক্ষণের জন্য সমর্থন প্রদান করে যে ভিট্রিয়াস গহ্বরে অ্যালোজেনিক আরপিসিগুলির বারবার ইনজেকশন রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসা রোগীদের মধ্যে সহ্য করা হয়।

cistanche উদ্ভিদ-বৃদ্ধি প্রতিরোধ ক্ষমতা

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

কীওয়ার্ড: স্টেম সেল; ইমিউন সহনশীলতা; ইমিউন বিশেষাধিকার; দুর্নীতি প্রত্যাখ্যান; ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশন

1। পরিচিতি

রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসা (RP) জেনেটিক রড-কোন অবক্ষয়ের একটি শ্রেণীকে অন্তর্ভুক্ত করে এবং এর ফলে প্রগতিশীল দৃষ্টি প্রতিবন্ধকতা এবং শেষ পর্যন্ত অন্ধত্ব দেখা দেয়। বেশিরভাগ ক্ষেত্রে, দৃষ্টি সংরক্ষণ বা পুনরুদ্ধার করার জন্য কোন প্রমাণিত থেরাপিউটিক ব্যবস্থা নেই; যাইহোক, এই অপূরণীয় চিকিৎসা প্রয়োজন মোকাবেলার একটি কৌশল হল স্টেম সেল প্রতিস্থাপন। আমাদের গবেষণা গোষ্ঠী সংস্কৃত হিউম্যান রেটিনাল প্রোজেনিটর সেল (RPC) এর ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনকে RP-এ হস্তক্ষেপ করার উপায় হিসাবে থেরাপিউটিক লক্ষ্যের সাথে অগ্রগতি স্থিতিশীল করার বা সম্ভবত রোগের গতিপথকে বিপরীত করার উপায় হিসাবে অনুসন্ধান করেছে। আরপিজিগুলি টিস্যু দানের মাধ্যমে অপরিণত রেটিনা থেকে বা সম্প্রতি, প্লুরিপোটেন্ট সেল লাইন থেকে প্রাপ্ত করা যেতে পারে। প্রাণীর মডেলের গবেষণায় দেখা গেছে যে এই কোষগুলি চোখের মধ্যে ইনজেকশনের পরে অবক্ষয় থেকে ফটোরিসেপ্টরকে উদ্ধার করতে সক্ষম এবং হোস্ট চোখের রড ফটোরিসেপ্টরগুলির মধ্যে পার্থক্য করতেও সক্ষম। প্রাণী অধ্যয়ন থেকে কিছু প্রমাণ পাওয়া গেছে যে ইনজেকশন দেওয়া এইচআরপিসি কার্যকরী, সমন্বিত ফটোরিসেপ্টর হয়ে উঠতে পারে এবং এর ফলে মৃত কোষগুলিকে সরাসরি প্রতিস্থাপন করে রেটিনাকে স্থিতিশীল করতে পারে। এইভাবে, ইনজেকশন করা এইচআরপিসিগুলি একটি নিউরোট্রফিক ফ্যাশনের পাশাপাশি কোষ প্রতিস্থাপন প্রক্রিয়ার মাধ্যমে আরপিকে চিকিত্সা করতে পারে। যেভাবেই হোক, এই কোষ-ভিত্তিক পদ্ধতিটি আরপি এবং সম্ভাব্য অন্যান্য রেটিনা রোগে আক্রান্ত রোগীদের চিকিত্সার জন্য একটি যুক্তিসঙ্গত কৌশল সরবরাহ করে।

আরপিসি-এর আরেকটি অনুকূল বৈশিষ্ট্য, এবং সম্ভবত নিউরাল প্রোজেনিটররা, হল আপেক্ষিক সহনশীলতা এই কোষগুলিকে অ্যালোগ্রাফ্ট হিসাবে প্রতিস্থাপনের পরে প্রদান করে, বিশেষ করে যখন রেটিনা [1,2] এর মতো অনাক্রম্য অধিকার প্রদর্শন করে এমন একটি স্থানে বিতরণ করা হয়। এটি বলেছে, পুনর্জন্মমূলক ওষুধের ক্ষেত্রে পরিচালিত ক্লিনিকাল ট্রায়ালগুলির সাম্প্রতিক পর্যালোচনাগুলি প্রদাহ এবং অনাক্রম্যতা প্রত্যাখ্যান [3,4] সম্পর্কিত ব্যাপক এবং উল্লেখযোগ্য চ্যালেঞ্জগুলি রিপোর্ট করে চলেছে, যার মধ্যে রেটিনাল জিন থেরাপির মতো চোখের লক্ষ্যবস্তু হস্তক্ষেপের জন্য [5], যেমন পাশাপাশি কিছু কিন্তু সব সেল থেরাপি নয় [6]। যদিও একটি স্থানীয় কোষের ধরন, রেটিনাল পিগমেন্ট এপিথেলিয়াল (RPE) কোষ প্রত্যাখ্যানের সমস্যাগুলি থেকে মুক্ত নয় [7-9]; অতএব, প্রাপকদের ইমিউন দমন বর্তমানে আদর্শ অনুশীলন [10,11]। অন্যদিকে, মানব RPCগুলি অ্যালোগ্রাফ্ট [6,12-16] হিসাবে উল্লেখযোগ্যভাবে সহনীয় বলে মনে হয়, যদিও এটি জেনোগ্রাফ্ট হিসাবে তাদের ব্যবহারে প্রসারিত হয় না, যেখানে ইমিউন দমন প্রয়োজন [17]। চোখের মধ্যে অ্যালোজেনিক আরপিসিগুলির টেকসই বেঁচে থাকার ভিত্তিটি ব্যবহৃত কোষ এবং প্রাপক সাইট [1,8,18,19] সম্পর্কিত অনেকগুলি কারণ জড়িত থাকতে পারে। ফ্লো সাইটোমেট্রি ব্যবহার করে পূর্ববর্তী কাজে, আমরা দেখিয়েছি যে মানুষের নিউরাল প্রোজেনিটর, উভয় মস্তিষ্ক থেকে প্রাপ্ত এবং রেটিনা থেকে প্রাপ্ত, এক্সপ্রেস ক্লাস I, কিন্তু ক্লাস II নয়, প্রধান হিস্টোকম্প্যাটিবিলিটি (MHC) অ্যান্টিজেন [20,21]। গ্রাফ্ট প্রত্যাখ্যানের শাস্ত্রীয় পদ্ধতিতে CD4+ হোস্ট লিম্ফোসাইট [20-25] দ্বারা বিদেশী MHC ক্লাস II অণুগুলির অ-নির্দিষ্ট স্বীকৃতি জড়িত। এইভাবে, দ্বিতীয় শ্রেণীর অণুর অনুপস্থিতি গ্রাফ্টেড প্রোজেনিটর কোষগুলিকে এই প্রক্রিয়ার মাধ্যমে মধ্যস্থতা প্রতিরোধী প্রত্যাখ্যান এড়াতে অনুমতি দিতে পারে। যাইহোক, অন্তঃসত্ত্বাভাবে ইনজেকশন দেওয়া এইচআরপিসিগুলির আপাত "ইমিউন প্রিভিলেজড" অবস্থা অগত্যা পরম নয়। যদিও মুরিন সেন্ট্রাল নার্ভাস সিস্টেম (সিএনএস) প্রোজেনিটাররা সনাক্তযোগ্য শ্রেণী I বা শ্রেণী II MHC অণুগুলিকে বেসলাইনে প্রকাশ করে না এবং অ্যালোগ্রাফ্ট [1,2,20] হিসাবে স্পষ্ট প্রতিরোধ ক্ষমতা প্রদর্শন করে, এই কোষগুলি নির্দিষ্ট পরিস্থিতিতে ইমিউন প্রত্যাখ্যানের মধ্য দিয়ে যেতে পারে। গবেষণায় দেখা গেছে যে MHC অ্যান্টিজেনগুলি ইন্টারফেরন-গামা (IFN) [1,26] সহ সিএনএস প্রোজেনিটারগুলির উদ্দীপনার মাধ্যমে প্ররোচিত হতে পারে। পূর্বে গ্রাফ্ট করা হোস্টের সংবেদনশীলতার পরে সিএনএস পূর্বপুরুষদের প্রত্যাখ্যান করা যেতে পারে। অতএব, সিএনএস পূর্ববর্তী কোষগুলি (আরপিসি সহ) অ্যালোঅ্যান্টিজেনগুলি প্রকাশ করে যা হোস্ট ইমিউন সিস্টেম দ্বারা সনাক্ত করা হয়। একসাথে, এটি বোঝায় যে গ্রাফ্টেড প্রোজেনিটর কোষগুলির অনাক্রম্য সুবিধাপ্রাপ্ত অবস্থা অস্থায়ী এবং মডুলেশন সাপেক্ষে, যেমন, স্থানীয় মাইক্রোএনভায়রনমেন্টে উপস্থিত সাইটোকাইন দ্বারা, এবং যা RP-এর মতো অধঃপতনের সময় পরিবর্তন হতে পারে। এই সমস্ত কারণে, একাধিক ইন্ট্রাভিট্রিয়াল RPC ইনজেকশনের প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া ভবিষ্যদ্বাণী করা কঠিন এবং বিশেষভাবে পরীক্ষা করা আবশ্যক।

cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত

যদি RPC চিকিত্সা RP-এ ক্লিনিক্যালি সফল বলে প্রমাণিত হয়, তাহলে এই দ্বিপাক্ষিক অন্ধ রোগে উভয় চোখের চিকিত্সার জন্য শক্তিশালী প্রণোদনা থাকবে। অন্তত নিরাপত্তার কারণে, বাইনোকুলার চিকিত্সা সাধারণত ক্রমানুসারে সঞ্চালিত হবে, দুটি ইনজেকশনের মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য ব্যবধানের সাথে। উল্লেখ্য, অ্যালোজেনিক কোষের এই অনুক্রমিক ডেলিভারির ফলে প্রথম ইনজেকশনের প্রতিক্রিয়ায় হোস্ট সংবেদনশীলতা হতে পারে, দ্বিতীয় ইনজেকশনের প্রতিক্রিয়ায় সম্ভাব্য প্রতিরোধ ক্ষমতা প্রত্যাখ্যানকে ট্রিগার করে। এর ফলে উভয় চোখের গ্রাফ্ট নষ্ট হয়ে যেতে পারে। RP [27] তে hRPCs এর সাথে একক সাবরেটিনাল ডোজ পরীক্ষা করা বা প্রাণীদের [28,29] মধ্যে মানব নিউরাল প্রোজেনিটারের সাথে পুনরায় ডোজ করার পূর্বের রিপোর্টগুলি অনাক্রম্য দমনকে অন্তর্ভুক্ত করেছে। অতএব, নিম্নলিখিত অধ্যয়নটি একটি ভিন্ন জিনগত পটভূমি সহ একটি ইমিউন-সক্ষম মাউস স্ট্রেনে অনুক্রমিক অ্যালোগ্রাফ্ট হিসাবে মুরিন আরপিসিগুলির অনুবাদমূলক তদন্ত হিসাবে ডিজাইন করা হয়েছিল। মানব RPC পণ্যগুলিকে অন্তর্ভুক্ত না করে, এই কাজটি IND-সক্ষম গবেষণার অংশ হিসাবে পশুদের ডেটা অ্যাড্রেসিং সুরক্ষা প্রদানের জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল, অর্থাৎ, FDA- নিবন্ধিত ট্রায়ালগুলিতে বারবার RPC অ্যালোগ্রাফ্ট চিকিত্সা গ্রহণকারী রোগীদের জন্য প্রতিরোধ ক্ষমতা দমন করা প্রয়োজন কিনা।

2. ফলাফল

অ্যালোজেনিক মাউসে দ্বিপাক্ষিক RPC ইনজেকশনের ইমিউনোলজিকাল ফলাফল অধ্যয়ন করার জন্য, gmRPCs (C57BL/6 জেনেটিক ব্যাকগ্রাউন্ড) BALB/c প্রাপকদের এক চোখে অন্তঃসত্ত্বাভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং 2 সপ্তাহ পরে আরপিসিগুলির দ্বিতীয় ডোজ অন্য চোখে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। 2-সপ্তাহের সময়ের ব্যবধানটি প্রথম গ্রাফ্টকে সহজাত এবং অভিযোজিত উভয় প্রতিরোধ ক্ষমতা প্ররোচিত করার অনুমতি দেওয়ার জন্য যথেষ্ট বলে বেছে নেওয়া হয়েছিল। পরীক্ষামূলক প্রাণীদের মধ্যে কোনোটিই কোনো প্রতিরোধক দমনকারী ওষুধের চিকিত্সা পায়নি যাতে প্রাকৃতিক শারীরবৃত্তীয় প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়া লক্ষ্য করা যায়।

2.1.ক্লিনিকাল পর্যবেক্ষণ এবং চক্ষু পরীক্ষা কোনো অস্বাভাবিকতা প্রকাশ করেনি

প্রতিটি জিএমআরপিসি ইনজেকশনের সময় পরীক্ষামূলক প্রাণীর ওজন পরিমাপ করা হয়েছিল। সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রাণী প্রথম এবং দ্বিতীয় ইনজেকশনের মধ্যে ওজন বৃদ্ধি দেখিয়েছে, সামগ্রিক ভাল স্বাস্থ্যের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। দ্বিতীয় জিএমআরপিসি ইনজেকশনের পরে 14 তম দিনে এবং 28 ± 1 দিন শেষ হওয়া প্রাণীগুলি সার্জিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মাধ্যমে পরীক্ষা করা হয়েছিল। পরীক্ষিত চোখের সংখ্যাগরিষ্ঠ অংশের পূর্ববর্তী এবং পশ্চাৎভাগ উভয়ই "স্বাভাবিক সীমার মধ্যে" (WNL) বলে বিচার করা হয়েছিল। চিকিত্সা না করা, শ্যাম-ট্রিটেড, এবং জিএমআরপিসি-চিকিত্সা করা গোষ্ঠীগুলির মধ্যে প্রদাহ বা অন্যান্য দৃশ্যমান অস্বাভাবিকতার কোনও লক্ষণ ছিল না, যা ইঙ্গিত করে যে জিএমআরপিসি ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশন এই পদ্ধতির মাধ্যমে সনাক্তযোগ্য প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া বা শারীরিক টিস্যুর ক্ষতি করেনি। দ্বিতীয় জিএমআরপিসি ইনজেকশন (চিত্র 1) এর পরে 14 এবং দিন 28 ± 1 উভয় দিনেই গ্রাফ্ট নিয়ে গঠিত সেল ক্লাস্টারগুলি ভিট্রিয়াসে দৃশ্যমান ছিল। টেকসই দাতা কোষের বেঁচে থাকার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, জিএমআরপিসিগুলির বারবার ইনজেকশন সেল ক্লাস্টারের আকারে লক্ষণীয় পরিবর্তন আনেনি। স্থূল প্যাথলজিও টার্মিনাল এন্ডপয়েন্টে মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং কোন বর্ধিত চোখের গোলা (টিউমার গঠনের নির্দেশক) বা অন্যান্য অস্বাভাবিকতা লক্ষ করা যায়নি।

চিত্র 1. একটি সার্জিক্যাল মাইক্রোস্কোপের (সমস্ত=বাম চোখ, OS) মাধ্যমে ফান্ডাস ফটোগ্রাফির মাধ্যমে ভিভোতে ট্রান্সপ্লান্ট করা জিএমআরপিসি। (A, B), শাম-চিকিৎসা করা প্রাণী (শাম/শাম, এস/এস); (C, D), শ্যাম-চিকিত্সা করা ডান চোখ এবং জিএমআরপিসি-চিকিত্সা করা বাম চোখ (শাম/সেল, এস/সি) দ্বারা নিয়ন্ত্রণ করা প্রাণী এবং জিএমআরপিসি (কোষ/কোষ, সি/সি) দিয়ে ক্রমানুসারে উভয় চোখ সহ প্রাণীদের চিকিত্সা করা হয়েছিল সার্জিক্যাল মাইক্রোস্কোপের মাধ্যমে পর্যবেক্ষণ ও চিত্রিত। উপরের প্যানেল (A, C, E) 14 দিনের পোস্ট-সেকেন্ড ইনজেকশনে তোলা OS-এর ছবি দেখায়; নিচের প্যানেল (B, D, F) 28 দিনের পোস্ট-সেকেন্ড ইনজেকশনে তোলা OS-এর ছবি দেখায়। অ্যালোগ্রাফ্টগুলিকে ফ্যাকাশে রঙের সেল ক্লাম্প (তীর) হিসাবে দেখা যেত কোষ-ইনজেক্ট করা বাম চোখের (S/C, C/C) উভয় সময় পয়েন্টে (দিন 14: (C, D); এবং 28 দিন: ( ই, এফ))। গ্রাফ্ট ব্যতীত, পূর্ববর্তী এবং পশ্চাদ্ভাগের অংশগুলিতে কোনও সুস্পষ্ট প্রদাহ বা অতিরিক্ত অস্বাভাবিকতা দেখা যায়নি, যেমনটি এইভাবে অক্ষীয়ভাবে দেখা হয়।

2.2। ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট লেবেলিং ভিট্রিয়াসে ইমিউন কোষ দেখায়

পাঁচটি প্রধান ইমিউন কোষের (ম্যাক্রোফেজ, নিউট্রোফিলস, প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষ, টি কোষ এবং বি কোষ) জন্য ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট লেবেলিং অকুলার ক্রায়োসেকশনে সঞ্চালিত হয়েছিল এবং জিএমআরপিসি ইনজেকশনের পরে চোখে ইতিবাচক ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশ প্রকাশ করেছে (চিত্র 2A-F)। টি কোষ (CD3), B কোষ (CD45R), নিউট্রোফিল (Ly-6G), এবং প্রাকৃতিক ঘাতক কোষ (CD49b) gmRPCs দ্বারা ইনজেকশন করা চোখে সীমিত উপস্থিতি প্রদর্শন করে, যেখানে সক্রিয় ম্যাক্রোফেজগুলি (Iba-1 ). অপরিশোধিত এবং শ্যাম-চিকিত্সা করা প্রাণীদের তুলনীয় টিস্যু অকুলার ক্রায়োসেকশনে ইমিউন কোষগুলি দেখায়নি, এটি পরামর্শ দেয় যে ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশ জিএমআরপিসি গ্রাফ্টগুলির প্রতিক্রিয়া ছিল। এই পর্যবেক্ষণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, ইমিউন কোষগুলি জিএমআরপিসি গ্রাফ্টগুলির আশেপাশের অঞ্চলে বা জিএমআরপিসি ক্লাস্টারগুলির মধ্যে অবস্থিত ছিল।

চিত্র 2. চিকিত্সা গ্রুপ দ্বারা অনুপ্রবেশকারী ইমিউন কোষের ইমিউনো-লেবেলিং। (A) নিয়ন্ত্রণ বিভাগের ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট চিত্র (এককভাবে গৌণ অ্যান্টিবডি), (B) অ্যান্টি-আইবা-1 (সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ এবং মাইক্রোগ্লিয়া মার্কার), (সি) অ্যান্টি-লাই-6জি (নিউট্রোফিল মার্কার), (D) অ্যান্টি-CD49b (প্রাকৃতিক ঘাতক সেল মার্কার), (E) অ্যান্টিবডি অ্যান্টি-CD3 (T সেল মার্কার), এবং (F) অ্যান্টি-CD45R (বি সেল মার্কার) চিত্রটিতে প্রদর্শিত হয়েছে। উপস্থিত সীমিত লাল সংকেতগুলি লিউকোসাইট মার্কারগুলির জন্য ইতিবাচক অ্যান্টিবডি লেবেলিং নির্দেশ করে, সবুজ সংকেতগুলি gmRPC গ্রাফ্টগুলি নির্দেশ করে এবং নীল সংকেতগুলি DAPI পারমাণবিক লেবেলিং নির্দেশ করে। হলুদ হল সংকেতগুলির একটি অ-নির্দিষ্ট ওভারল্যাপ, ফটোরিসেপ্টরের বাইরের অংশগুলিতে সবচেয়ে স্পষ্ট যা অটোফ্লোরেসেন্স প্রদর্শন করে। চিকিত্সা গোষ্ঠী: চিকিত্সাবিহীন (UT), উভয় চোখই চিকিত্সা করা হয়নি; S/S, গাড়ির সাথে উভয় চোখ ছ্যাঁকা-চিকিৎসা (ক্রমানুসারে); S/C, ডান চোখে গাড়ির সাথে ইনজেকশনের পরে বাম চোখে 50,000 gmRPCs এবং; C/C, উভয় চোখে 50,{16}} জিএমআরপিসি (ক্রমানুসারে) অনুচ্ছেদ 4-এ ইনজেকশন দেওয়া হয়েছে

চোখের প্রতিটি ইমিউন কোষের সর্বোচ্চ সংখ্যা কোষের ধরন দ্বারা পরিবর্তিত হয় (চিত্র 3A-E)। বিপরীতে, দ্বিপাক্ষিক ইনজেকশন (কোষ/কোষ) প্রাপ্ত প্রাণীদের সাথে একক জিএমআরপিসি ইনজেকশন (শাম/কোষ) প্রাপ্ত প্রাণীদের তুলনা করার সময় দ্বি-মুখী আনোভা ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশে কোনও পার্থক্য প্রকাশ করেনি। এটি ম্যাক্রোফেজগুলির অনুপ্রবেশের ক্ষেত্রে ছিল (এন্টি-আইবা-1 স্টেনিং) (চিত্র 3A), নিউট্রোফিলস (অ্যান্টি-লাই-6জি স্টেনিং) (চিত্র 3B), প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষ (CD49b স্টেনিং) ( চিত্র 3C), টি কোষ (CD3 স্টেনিং) (চিত্র 3D), এবং বি কোষ (CD45R স্টেনিং) (চিত্র 3E)।

2.3। ELISPOT অ্যান্টিজেন রিকল রেসপন্স দেখায়নি

ELISPOT হল অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট IFN উৎপাদনকারী T কোষ অ্যাক্টিভেশন পরীক্ষা করার একটি উপায়। ফোরবোল 12-মাইরিস্টেট 13-এসিটেট (পিএমএ) চিকিত্সা ছিল একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ যা দ্বিতীয় বার্তাবাহক, ডিএজি-র অনুকরণ করে, টি সেল রিসেপ্টর পাথওয়েকে সক্রিয় করতে এবং এর ফলে, টি কোষ সক্রিয়করণ ঘটায়। চিত্র 4A-D-এ, PMA-চিকিত্সা করা গোষ্ঠীগুলি একা প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলির সাথে নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় অনেক বেশি IFN স্পট সংখ্যা দেখিয়েছে (যেমন, CLN থেকে লিম্ফোসাইট, প্লীহা থেকে স্প্লেনোসাইট)। যখন প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলি C57BL/6 স্প্লেনোসাইট (B6 SPL) এর সাথে সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল, সেদিন 14 নমুনাগুলি প্রতিক্রিয়াকারী কোষের একা গ্রুপের সাথে তুলনীয় ছিল, শুধুমাত্র সামান্য বেশি IFN স্পট সংখ্যার সাথে, T কোষ সক্রিয়করণের অভাব নির্দেশ করে (চিত্র 4A, খ)।

চিত্র 3. জিএমআরপিসি প্রতিস্থাপনের পরে ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশের পরিমাণ। অনুপ্রবেশকারী ইমিউন কোষগুলিকে প্রতিটি পরীক্ষামূলক অবস্থার জন্য জিএমআরপিসি ইনজেকশনের পরে ইমেজিং ক্ষেত্রের মধ্যে লাল ফ্লুরোসেন্ট সংকেত হিসাবে কল্পনা করা হয়েছিল, ইমেজজে ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল এবং বার গ্রাফে প্লট করা হয়েছিল। Iba-1 (সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ এবং মাইক্রোগ্লিয়া মার্কার) (A), অ্যান্টি-লাই-6G (নিউট্রোফিলস মার্কার) (B), অ্যান্টি-CD49b (প্রাকৃতিক ঘাতক কোষ চিহ্নিতকারী) (C), অ্যান্টিবডি থেকে ডেটা অ্যান্টি-সিডি 3 (টি কোষ চিহ্নিতকারী) (ডি), এবং অ্যান্টি-সিডি 45আর (বি কোষ চিহ্নিতকারী) (ই) চিত্রটিতে প্রদর্শিত হয়েছিল। শ্যাম/সেল এবং সেল/সেল গ্রুপের মধ্যে তাৎপর্য পরীক্ষা করার জন্য দ্বি-মুখী আনোভা পরীক্ষা ব্যবহার করা হয়েছিল; p মান ছিল: (A) p < {{10}.4492, (B) p < 0.9376, (C) p < 0.119{{18 }}, (D) p < 0.6411, এবং (E) p < 0.7201 (কোনটিই উল্লেখযোগ্য ছিল না)।

এই অ্যাস ব্যবহার করে অ্যালোজেনিক দাতা কোষ পরীক্ষা করার সময়, জিএমআরপিসি (আইপি গ্রুপ) দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনলি ইনজেকশন করা প্রাণীদের প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলিতে অ্যান্টিজেন প্রত্যাহার প্রতিক্রিয়া ছিল না কারণ নমুনাগুলি এফএন স্পট কাউন্ট দ্বারা বেশি টি কোষ সক্রিয়তা দেখায়নি যেগুলি শ্যাম প্রাণীদের তুলনায় কখনও প্রকাশ পায়নি। জিএমআরপিসিতে (শ্যাম/শাম)। একবার (শ্যাম/সেল) বা বারবার (কোষ/কোষ) জিএমআরপিসিগুলির সাথে অভ্যন্তরীণভাবে ইনজেকশন দেওয়া প্রাণীগুলির মধ্যে কোনও অ্যান্টিজেন প্রত্যাহার প্রতিক্রিয়া দেখায়নি। একটি ক্ষেত্রে, জিএমআরপিসি ডোজিংয়ের পুনরাবৃত্তির প্রতিক্রিয়াগুলি আরও নিঃশব্দ দেখা গেছে (চিত্র 4 বি)। একসাথে, এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে জিএমআরপিসিগুলি খুব কম অ্যান্টিজেনিসিটি প্রদর্শন করে। উল্লেখ্য যে C57BL/6 স্প্লেনোসাইট gmRPCs এর জেনেটিক ব্যাকগ্রাউন্ডের সাথে মিলে গেছে। অপ্রত্যাশিতভাবে, বিকল্প উদ্দীপক কোষ, জিএমআরপিসি, নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় সমস্ত পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীতে IFN স্পট সংখ্যা বাড়িয়েছে (চিত্র 4A-D)। একটি সম্ভাব্য ব্যাখ্যা হতে পারে gmRPCs যা এই পরীক্ষায় একটি উচ্চ পটভূমি সৃষ্টি করে। গুরুত্বপূর্ণভাবে, চিকিত্সা না করা, শ্যাম-ট্রিটেড, একক জিএমআরপিসি ইনজেকশন এবং বারবার জিএমআরপিসি ইনজেকশন গ্রুপগুলির মধ্যে কোনও পার্থক্য ছিল না, যা আবার অ্যান্টিজেন প্রত্যাহার প্রতিক্রিয়াগুলির অনুপস্থিতিকে নির্দেশ করে।

চিত্র 4. জিএমআরপিসি প্রতিস্থাপনের পরে এলিস্পট পরিমাপ। এলিস্পট অ্যাসেসগুলিকে নিম্নলিখিত গোষ্ঠী হিসাবে সেট করা হয়েছিল: নিয়ন্ত্রণ, একা প্রতিক্রিয়াকারী কোষ (লিম্ফোসাইট বা স্প্লেনোসাইট যেখানে টি কোষ রয়েছে সার্ভিকাল লিম্ফ নোড (সিএলএন) বা পরীক্ষামূলক প্রাণীর প্লীহা (এসপিএল) থেকে বিচ্ছিন্ন; পিএমএ, ফোরবোল দিয়ে চিকিত্সা করা প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলি {{1} }মাইরিস্টেট 13-এসিটেট (PMA) এবং Ca ionophore; B6 SPL, C57BL/6 প্রাণী থেকে বিচ্ছিন্ন স্প্লেনোসাইটের সাথে মিশ্রিত প্রতিক্রিয়াকারী কোষ; gmRPCs, একই প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলি gmRPCs এর সাথে মিশ্রিত। (A), প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলি ছিল স্প্লেনোসাইট দ্বিতীয় gmRPCs ইনজেকশনের পরে 14 তম দিনে বলিদান করা পরীক্ষামূলক প্রাণী থেকে। (B) প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলি ছিল পরীক্ষামূলক প্রাণীর CLN থেকে লিম্ফোসাইট যেগুলি দ্বিতীয় gmRPCs ইনজেকশনের পরে 14 তম দিনে বলি দেওয়া হয়েছিল। (C) প্রতিক্রিয়াকারী কোষগুলি দ্বিতীয় gmRPCs ইনজেকশনের পরে 29 দিনে বলিদান করা পরীক্ষামূলক প্রাণীর স্প্লেনোসাইটগুলি ছিল। (D) প্রতিক্রিয়াশীল কোষগুলি ছিল পরীক্ষামূলক প্রাণীর CLN থেকে প্রাপ্ত লিম্ফোসাইট যা দ্বিতীয় gmRPCs ইনজেকশনের পরে 29 দিনে বলি দেওয়া হয়েছিল। শ্যাম/সেল এবং সেল/সেল গ্রুপের মধ্যে তাৎপর্য (*) পরীক্ষা করার জন্য দ্বি-মুখী আনোভা পরীক্ষা ব্যবহার করা হয়েছিল; p মানগুলি ছিল: (A) p < 0.5332, (B) p < 0৷{15}}001 (গুরুত্বপূর্ণ), (C) p < 0.0207 ( উল্লেখযোগ্য), এবং (D) p <0.3355।

3. আলোচনা 

রেটিনাল ডিজেনারেটিভ রোগের চিকিত্সার একটি উপায় হিসাবে স্টেম সেল প্রযুক্তিতে যথেষ্ট আগ্রহ রয়েছে এবং আমাদের গ্রুপ আরপিতে অ্যালোজেনিক এইচআরপিসিগুলির ব্যবহার অন্বেষণ করছে। অ্যালোজেনিক হিউম্যান RPC প্রোডাক্টের একাধিক ডোজ যখন ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে দেওয়া হয় তখন সম্ভাব্য ইমিউন পরিণতির বিষয়ে তথ্য সংগ্রহ করতে, আমরা গ্রাফ্ট হিসাবে C57BL/6 ব্যাকগ্রাউন্ড থেকে gmRPCs এবং হোস্ট হিসাবে BALB/c ইঁদুর ব্যবহার করে বর্তমান প্রাণী অধ্যয়ন করি। এই অসমান জেনেটিক ব্যাকগ্রাউন্ডগুলি অ্যালোজেনিক এইচআরপিসিগুলির সাথে অনুক্রমিক চিকিত্সার মডেল করতে এবং মানুষের মধ্যে পরীক্ষার আগে প্রাথমিক সুরক্ষা ডেটা সরবরাহ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

প্রতিক্রিয়াগুলি সম্পূর্ণরূপে মূল্যায়ন করার জন্য, হোস্ট প্রাণীরা কোনও ইমিউনোসপ্রেসিভ চিকিত্সা পায়নি। আমরা বর্ণিত ইনজেকশন সময়সূচী অনুসারে একটি একক জিএমআরপিসি ইনজেকশন দ্বারা উত্পন্ন ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলিকে ক্রমিক দ্বিপাক্ষিক ডোজের সাথে তুলনা করেছি। চক্ষু সংক্রান্ত পরীক্ষাগুলি 1 ডোজ gmRPCs বা gmRPCs-এর 2 ডোজ প্রাপ্ত প্রাণীদের গোষ্ঠীর মধ্যে প্রদাহ বা অন্য কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য প্রকাশ করেনি, যা পরামর্শ দেয় যে প্রাপকদের হয় প্রাথমিক gmRPC চিকিত্সার দ্বারা সংবেদনশীল করা হয়নি, বা সংবেদনশীলতা সূক্ষ্ম ছিল। ইমিউনোলেবেলিং ফলাফল প্রকাশ করেছে যে সমস্ত পাঁচটি ইমিউন কোষের প্রকার পরীক্ষা করা হয়েছে, যথা T কোষ (CD3), B কোষ (CD45R), ম্যাক্রোফেজ (Iba-1), নিউট্রোফিলস (Ly-6G), এবং প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষ ( CD49b), চোখে অনুপ্রবেশ করেছিল এবং প্রতিস্থাপনের পরে RPC গ্রাফ্টগুলিকে লক্ষ্য করেছিল। তা সত্ত্বেও, এই অনুপ্রবেশ ছিল তুলনামূলকভাবে মাঝারি এবং, যদিও অন্যান্য কোষের ধরন সনাক্ত করা যায়, এটি প্রধানত ইবা-1 পজিটিভ ম্যাক্রোফেজ দ্বারা গঠিত। খুব সীমিত সংখ্যক টি কোষ, বি কোষ, নিউট্রোফিল এবং প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষ উপস্থিত ছিল। মজার বিষয় হল, একক এবং পুনরাবৃত্তি RPC গ্রাফ্ট দ্বারা প্রদর্শিত বেঁচে থাকা সমান ছিল, ম্যাক্রোফেজের উপস্থিতি সত্ত্বেও উভয় ক্ষেত্রেই গ্রাফ্টগুলির ক্ষতি ছাড়াই। সামগ্রিকভাবে, এটি পরামর্শ দেয় যে জিনগতভাবে পৃথক RPC-তে সহজাত এবং অভিযোজিত প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়া উভয়ই মাঝারি ছিল, যদিও ইমিউন দমন নিযুক্ত করা হয়নি। তদ্ব্যতীত, ELISPOT পরীক্ষার ফলাফলগুলি জিএমআরপিসি-চিকিত্সা করা গ্রুপগুলিতে কোনও অ্যান্টিজেন প্রত্যাহার প্রতিক্রিয়া দেখায়নি, এই বিতর্কের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে T কোষগুলি C57BL/6 ইঁদুর থেকে gmRPC গ্রাফ্টগুলি প্রত্যাখ্যানে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে না। আবার, জিএমআরপিসি গ্রাফ্টগুলির ম্যাক্রোফেজ অনুপ্রবেশ লক্ষ্য করা গেছে, যদিও এটি ক্লাসিক্যাল ইমিউন প্রত্যাখ্যান [22-24] এর সাথে সম্পর্কিত ধরণের উল্লেখযোগ্য গ্রাফ্ট ধ্বংসের সাথে যুক্ত ছিল না।

পুরুষদের জন্য cistanche উপকারিতা-প্রতিরোধ ক্ষমতা শক্তিশালী করে

একসাথে, এই পর্যবেক্ষণগুলি এমন একটি পরিস্থিতি প্রকাশ করে যা অন্যান্য টিস্যুতে দেখা ব্যাপকভাবে স্বীকৃত T এবং B কোষ-মধ্যস্থিত অ্যালোজেনিক ট্রান্সপ্লান্ট প্রত্যাখ্যান প্রক্রিয়া থেকে স্পষ্টভাবে পৃথক। একাধিক কারণ এই পরিস্থিতিতে অবদান রাখতে পারে। একদিকে, চোখের একটি "ইমিউন সুবিধাপ্রাপ্ত" সাইট হিসাবে ধারণা রয়েছে, যদিও কর্নিয়া এবং রেটিনার সাথে ভিট্রিয়াস কতটা এই ধরনের বৈশিষ্ট্যগুলি ভাগ করে তা কম অধ্যয়ন করা হয় এবং সম্ভবত আরও বিতর্কিত। অন্যদিকে, RPC গুলি নিজেরাই অ্যালোগ্রাফ্ট হিসাবে কম ইমিউনোজেনিসিটি প্রদর্শন করে বলে মনে হয়, আরও ঘন ঘন অধ্যয়ন করা কোষের ধরণের তুলনায়। যেমনটি আমরা আগে দেখিয়েছি, মুরিন আরপিসি-তে MHC ক্লাস I এবং ক্লাস II অ্যান্টিজেনগুলির বেসলাইন এক্সপ্রেশনের অভাব রয়েছে, যদিও এগুলি সাইটোকাইন উদ্দীপনার মাধ্যমে প্ররোচিত হয়। MHC অভিব্যক্তির এই অনুপস্থিতি প্রতিস্থাপনের পরে এই কোষগুলির বেঁচে থাকার ক্ষেত্রে অবদান রাখতে পারে। তা সত্ত্বেও, গ্রাফ্টগুলিতে ইমিউন কোষের উপস্থিতি এই ধারণাটিকে সমর্থন করে যে এই সেটিংয়ে গ্রাফ্ট সহনশীলতা প্যাসিভ নয় এবং একটি সক্রিয় ইমিউনোরেগুলেটরি ঘটনা থেকে পরিণত হয়। এখানে, এটি জোর দেওয়া উচিত যে একই ধরণের ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশ ইতিমধ্যেই একক ইনজেকশনের পরে উপস্থিত ছিল এবং পুনরাবৃত্তি ডোজ দিয়ে এটিকে আরও বাড়িয়ে তোলেনি, এইভাবে আমাদের উপসংহারকে আন্ডারস্কোর করে যে গ্রাফ্টগুলির ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশ, বিশেষত ম্যাক্রোফেজগুলির দ্বারা, পূর্বের ফলাফল ছিল না। হোস্ট সংবেদনশীলতা। এই পরীক্ষার পরামিতিগুলির মধ্যে, পুনরাবৃত্তি ডোজ সামগ্রিক গ্রাফ্ট কার্যকারিতা হ্রাস করতে দেখা যায়নি, যা থেরাপিউটিক প্রসঙ্গে টেকসই কার্যকারিতার সম্ভাবনার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। বিকল্প পরামিতি, যেমন বিভিন্ন আন্তঃ-ইনজেকশন ব্যবধান, ক্লিনিকাল প্রয়োগের সাথে প্রাসঙ্গিক হতে পারে এমন পরিমাণে ইমিউন কোষের কার্যকলাপ বৃদ্ধি বা হ্রাস করতে পারে। ম্যাক্রোফেজ প্রাধান্য সহ অনুপ্রবেশের কোষীয় উপাদানগুলি মানুষের ক্ষেত্রেও প্রযোজ্য হবে কিনা তা স্পষ্ট নয়। তদ্ব্যতীত, এই অ্যালোগ্রাফ্টগুলির বেঁচে থাকা সুস্থ রক্ত-রেটিনা বাধা সহ একটি স্বাভাবিক রেটিনার উপর নির্ভরশীল নাও হতে পারে। এখানে ব্যবহৃত BALB/c প্রাপক অ্যালবিনো এবং হালকা ক্ষতির জন্য সংবেদনশীল [30]। তদুপরি, বিভিন্ন রেটিনাল অবক্ষয় মডেলের সাথে পূর্ববর্তী কাজগুলিতে টেকসই বেঁচে থাকা বারবার দেখা গেছে (যেমন, [31])।

গ্রাফ্ট টিকে থাকার তুলনায়, গ্রাফ্টের মধ্যে কোষের কার্যক্ষমতা আরও জটিল পরিস্থিতি উপস্থাপন করে। সিএনএস প্রোজেনিটর কোষের একটি পরিচিত ক্ষয়ক্ষতি রয়েছে যা দ্রুত প্রতিস্থাপনের পরে ঘটে, সম্ভবত আকস্মিক বৃদ্ধির ফ্যাক্টর প্রত্যাহার সহ সম্ভাব্য একাধিক কারণের কারণে। একবার চোখের মধ্যে স্থির হয়ে গেলে, বিচ্ছিন্ন কোষগুলি গোলকের মতো সমষ্টিতে একত্রিত হয়, যার কেন্দ্রগুলি বৃদ্ধির জন্য একটি সাবঅপ্টিমাল মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট প্রদান করে, সম্ভবত ভাস্কুলারাইজেশনের অভাব এবং পুষ্টির বিস্তারের চ্যালেঞ্জগুলির কারণে। আরপিসি গ্রাফ্টের জন্য ম্যাক্রোফেজগুলির আপাত ট্রপিজম গ্রাফ্টগুলির অভ্যন্তরে এই অব্যবহারযোগ্য কোষগুলির উপস্থিতির একটি অনির্দিষ্ট প্রতিক্রিয়া হতে পারে, ম্যাক্রোফেজগুলি কোষীয় ধ্বংসাবশেষের স্কেভেঞ্জার হিসাবে তাদের ভূমিকায় কাজ করে। বিকল্পভাবে, সম্পূর্ণরূপে কার্যকর RPCগুলি সক্রিয়ভাবে ম্যাক্রোফেজগুলিকে আকর্ষণ করতে পারে, যেমন, কেমো-আকর্ষণীয় সাইটোকাইনের অভিব্যক্তির মাধ্যমে, যার ফলে হোস্ট কোষগুলি দ্বিতীয়ভাবে অ-কার্যকর দাতা কোষ থেকে ধ্বংসাবশেষের মুখোমুখি হবে। গুরুত্বপূর্ণভাবে, এই নির্দিষ্ট সেটিংসে দেখা ম্যাক্রোফেজ অনুপ্রবেশের মাত্রা গ্রাফ্ট বা হোস্ট রেটিনার জন্য নেতিবাচক পরিণতি বলে মনে হয় না, অ-ইমিউন সুবিধাপ্রাপ্ত সাইটগুলিতে সেলুলার অ্যালোগ্রাফ্টগুলির প্রতিক্রিয়ার বিপরীতে [৪]। অবশেষে, এটি উল্লেখ করার মতো যে এখানে রিপোর্ট করা ফলাফলগুলি, যদিও একটি মুরিন মডেলের মধ্যে সীমাবদ্ধ, মানুষের মধ্যে কাজের জন্য প্রভাব থাকতে পারে। মাউসের বিপরীতে, আমরা জানি যে সভ্য মানব RPC বেসলাইনে MHC ক্লাস I অ্যান্টিজেনের শক্তিশালী মাত্রা প্রকাশ করে; অতএব, তুলনা স্বীকৃতভাবে অস্থায়ী। তবুও, এটি লক্ষ্য করা আকর্ষণীয় যে চীনের একটি গ্রুপ দ্বারা সাবরেটিনাল এইচআরপিসি গ্রাফ্টগুলির ক্লিনিকাল পরীক্ষা [১৩], সেইসাথে আমাদের গ্রুপ দ্বারা ইন্ট্রাভিট্রিয়াল এইচআরপিসি ট্রান্সপ্লান্টেশন, পরবর্তীতে আরপি (জেসি) সহ অ-ইমিউনোসপ্রেসড রোগীদের মধ্যে অ্যালোগ্রাফ্টগুলির টেকসই বেঁচে থাকা দেখানো হয়েছে। -01, [32], অপ্রকাশিত ডেটা)। এখানে উপস্থাপিত কাজের সাথে সাদৃশ্যপূর্ণ উভয় চোখের (JC-01 এক্সটেনশন, অপ্রকাশিত ডেটা) অনুক্রমিক ইনজেকশনের পরেও এটি ঘটেছিল। উপরন্তু, গ্রাফ্ট সারভাইভাল জেসি-02 [৩৩]-এর একটি ফলো-আপ গবেষণায় দেখা গেছে, যেখানে একই চোখে ক্রমিক পুনরাবৃত্তি ডোজ দেওয়া হয়েছিল [৩৪]। একত্রে নেওয়া, এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে স্নায়ু পূর্ববর্তী প্রতিস্থাপনের সেটিংয়ে, বিশেষত চোখের জন্য, ইমিউন দমন সবসময় প্রয়োজনীয় নয়, যদিও এই ঘটনার সীমা এবং অন্তর্নিহিত নিয়ন্ত্রক প্রক্রিয়াগুলি ব্যাখ্যা করা বাকি রয়েছে।

4. উপকরণ এবং পদ্ধতি

4.1। সেল সংস্কৃতি

পূর্বে বৈশিষ্ট্যযুক্ত gmRPCs [31] এই অ্যালোজেনিক গবেষণার জন্য দাতা কোষ হিসাবে বেছে নেওয়া হয়েছিল। মূলত, জিএমআরপিসিগুলিকে জিএফপি-ট্রান্সজেনিক C57BL/6 ইঁদুর থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল একটি বর্ধিত সবুজ ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন (GFP) প্রকাশ করার জন্য জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত। জিএমআরপিসিগুলিতে জিএফপি প্রোটিনের অভিব্যক্তিটি আগ্রহের বিষয় ছিল যে এটি অতিরিক্ত লেবেলিংয়ের প্রয়োজন ছাড়াই ইনজেকশনের পরে গ্রাফটগুলির ভিজ্যুয়ালাইজেশনের অনুমতি দেয়। বর্তমান অধ্যয়নের জন্য, জিএমআরপিসিগুলিকে উন্নত DMEM/F12 পরিপূরক N-2 সম্পূরক (1:100, লাইফ টেকনোলজি, কার্লসব্যাড, CA, USA), Glutamax-1 (1:100, জীবন প্রযুক্তি , Carlsbad, CA, USA), এবং EGF (20 ng/mL, রিকম্বিন্যান্ট, হিউম্যান, লাইফ টেকনোলজিস, কার্লসব্যাড, CA, USA) এবং 37 ◦C এবং 5% CO2 এ ইনকিউটেড। কোষগুলিকে রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল মিশ্র সাসপেনশন/আলগালিভাবে সংযুক্ত উপনিবেশে আনকোটেড টিস্যু কালচার ফ্লাস্কে। কোষগুলিকে ট্রিপল সিলেক্ট সিটিএস (লাইফ টেকনোলজিস, কার্লসব্যাড, সিএ, ইউএসএ) এক মিনিটের জন্য পিবিএস-এ 1:5 মিশ্রিত করা এবং ট্রিপসিনের যোগ করা আয়তনের 10 গুণ দ্বারা নিরপেক্ষ করে ট্রিপসিনাইজেশনের মাধ্যমে পাস করা হয়েছিল। সেল-ট্রাইপসিন মিশ্রণটি ঘরের তাপমাত্রায় 2 মিনিটের জন্য 140 গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, সুপারনাট্যান্ট সরিয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং পছন্দসই ঘনত্বে টিস্যু কালচার ফ্লাস্কে বীজ বপনের আগে সেল পেলেটটি তাজা মিডিয়াতে পুনরায় চালু করা হয়েছিল। কোষের ঘনত্ব এবং কার্যকারিতা ট্রিপ্যান ব্লু স্টেনিংয়ের মাধ্যমে নির্ধারিত হয়েছিল; কাউন্টেস (লাইফ টেকনোলজিস, কার্লসব্যাড, সিএ, ইউএসএ) এবং হিমোসাইটোমিটার দ্বারা গণনা করা হয়েছিল।

ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনের জন্য, BSS PLUS®-এ সেল পেলেট 50K কোষ/µL এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল। ইনজেকশনের আগে এবং পরে কোষের ঘনত্ব এবং কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ইনজেকশনের ডোজ ছিল 50,000 টি কোষ প্রতি চোখের প্রতি ইনজেকশন। ডোজ এবং যানবাহন আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার উপর ভিত্তি করে নির্বাচন করা হয়েছিল।

4.2। পরীক্ষামূলক প্রাণী

বর্তমান অধ্যয়নের উদ্দেশ্য ছিল অ্যালোজেনিক আরপিসি-র পুনরাবৃত্ত ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে প্ররোচিত সম্ভাব্য অ্যালোজেনিক ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলি তদন্ত করা। প্রাপক প্রাণীগুলি ছিল BALB/c ইঁদুর, যেগুলি C57BL/6 ইঁদুর থেকে জিনগতভাবে আলাদা যেগুলি থেকে gmRPCs বিচ্ছিন্ন ছিল। প্রতিটি টাইম পয়েন্টের জন্য চিকিত্সা করা পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীতে কমপক্ষে তিনটি প্রাণীর ব্যবহারকে পরীক্ষামূলক সময়কালে ফলাফলের পরিবর্তনশীল এবং সম্ভাব্য প্রাণীর ক্ষতির বিষয়ে গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগত তাত্পর্যের মূল্যায়নের অনুমতি দেওয়ার জন্য প্রয়োজন বলে মনে করা হয়েছিল। তদ্ব্যতীত, পরীক্ষামূলক ফলাফলকে সম্ভাব্যভাবে প্রভাবিত করে এমন অনেক অতিরিক্ত কারণের প্রেক্ষিতে, যেমন অসফল কোষ ইনজেকশন পদ্ধতি বা প্রাণীর লড়াইয়ের ফলে সম্ভাব্য অ্যাট্রিশন, পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য প্রয়োজনীয় ন্যূনতম সংখ্যা পূরণ নিশ্চিত করার জন্য প্রতি গ্রুপে পাঁচটি প্রাণীর উপর ইনজেকশন পদ্ধতি সঞ্চালিত হয়েছিল।

cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত

সারণী 1 চার-সময়ের প্রতিটি পয়েন্টের (4, 7, 14, এবং 28 দিন) জন্য প্রস্তুত করা প্রাণীদের চারটি দল দেখায় যেখানে ইমিউনোফ্লোরেসেন্স সহ হিস্টোপ্যাথোলজির মূল্যায়ন করা হবে। 10-6 gmRPC ইন্ট্রাপেরিটোনলি দিয়ে ইনজেকশন করা প্রাণীদের দুটি অতিরিক্ত গ্রুপ দুটি ELISPOT মূল্যায়ন সময় পয়েন্টের প্রতিটির জন্য ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে প্রস্তুত করা হয়েছিল (14 এবং 28 দিন)। সারণী 2 প্রতিটি গ্রুপের জন্য নির্ধারিত মূল্যায়নের সংক্ষিপ্ত বিবরণ দেয়।

সারণী 1. পরীক্ষামূলক দল।

সারণী 2. মূল্যায়নের সময় পয়েন্ট।

4.3। ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশন

জিএমআরপিসিগুলি ইনট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে পরিচালিত হয়েছিল। একবার চেতনানাশক, মাইড্রিয়াসিল (1% ট্রপিকামাইড চক্ষু সমাধান) এবং ফেনাইলেফ্রিন (2.5% চক্ষু সমাধান) ইনজেকশন দেওয়ার জন্য প্রাণীর উভয় চোখে প্রয়োগ করা হয়েছিল। যখন পর্যাপ্ত মাইড্রিয়াসিস অর্জন করা হয়েছিল, তখন প্রাণীটিকে ম্যানুয়ালি সংযত করা হয়েছিল এবং প্রাণীটির মাথা ঘোরানো হয়েছিল চোখের অকুলার অক্ষকে সারিবদ্ধ করার জন্য সার্জিক্যাল মাইক্রোস্কোপের অপটিক্স দিয়ে ইনজেকশন দেওয়ার জন্য যাতে চোখের পশ্চাদ্ভাগের (অর্থাৎ, ভিট্রিয়াস এবং রেটিনা) কল্পনা করা যায়। . চোখের পাতার উপর চাপ দিয়ে চোখের মৃদুভাবে ম্যানুয়ালি প্রস্তাব করা হয়েছিল এবং একটি ইনসুলিন সিরিঞ্জের উপর একটি 31G সুই ব্যবহার করা হয়েছিল নিকৃষ্ট অনুনাসিক চতুর্ভুজায় লিম্বস সংলগ্ন স্ক্লেরাকে আলতোভাবে ছিদ্র করতে। দাতা কোষ (বা যান নিয়ন্ত্রণ) ধারণকারী একটি পালিশ গ্লাস মাইক্রোপিপেট টিপ সরাসরি ভিজ্যুয়ালাইজেশনের অধীনে কাঁচের গহ্বরে ছেদনের মাধ্যমে উন্নত করা হয়েছিল। লেন্স বা পোস্টেরিয়র সেগমেন্ট স্ট্রাকচারের অখণ্ডতা ব্যাহত না করার জন্য যত্ন নেওয়া হয়েছিল। সেল বা যানবাহন একা 1 মাইক্রোলিটার একটি ভলিউম ইনজেকশনের ছিল. ইন্ট্রাওকুলার চাপের ভারসাম্যের অনুমতি দেওয়ার জন্য বেশ কিছু মুহুর্তের বিরতির পরে, পিপেটের ডগাটি ধীরে ধীরে চোখ থেকে সরানো হয়েছিল, সমস্তই সরাসরি ভিজ্যুয়ালাইজেশনের অধীনে। অবস্থানের সাথে সাথে যেকোন ইন্ট্রাওকুলার রক্তপাত লক্ষ্য করা গেছে। ইনজেকশনের পরে, প্রাণীটিকে পুনরুদ্ধার করার জন্য শোষক-সাইড-আপ/প্লাস্টিক-সাইড-ডাউন সহ একটি তাজা ডিসপোজেবল প্যাড দিয়ে রেখাযুক্ত একটি পরিষ্কার খাঁচায় রাখা হয়েছিল। একটি হিটিং প্যাড ব্যবহার করে পুনরুদ্ধারের সুবিধা দেওয়া হয়েছিল এবং প্রাণীর অ্যাম্বুলেশন করার ক্ষমতা দ্বারা যাচাই করা হয়েছিল। জেগে ওঠার পরে, প্রাণীটিকে জলে অ্যাড লিবিটাম অ্যাক্সেস সহ পোস্ট-অপারেটিভ খাঁচায় স্থানান্তর করা হয়েছিল। অপারেটিভের পরে প্রতিদিনের ভিত্তিতে প্রাণীদের চাক্ষুষভাবে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ইন্ট্রাওকুলার ইনজেকশন সম্পর্কিত ন্যূনতম বা কোন লক্ষণ পরিলক্ষিত হয়নি।

পদ্ধতির পরে, প্রাণীদের অস্ত্রোপচার করা চোখে ঘষার জন্য, রফ্‌ড পশম বা টেকসই অলসতার জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, এগুলি সবই ছিল অবিলম্বে ইথানেশিয়ার কারণ। যুদ্ধে টিকে থাকা ক্ষতের কারণে দুটি প্রাণীকে শেষ করা হয়েছিল। অন্যান্য সমস্ত প্রাণী পরিকল্পিত প্রান্তে শেষ করা হয়েছিল। CO2 ইনহেলেশনের মাধ্যমে ইউথেনেসিয়া সঞ্চালিত হয়েছিল।

4.4। চক্ষু পরীক্ষা

A Leica Ultimate Red Reflex Surgical Microscope was used for ophthalmic examination and photography of experimental mice. Sedation was performed with a Ketamine Hydrochloride/Xylazine Hydrochloride mixture (50–100 mg/mL Ketamine, 5–10 mg/mL Xylazine) administered by intraperitoneal injection. After sedation, topical mydriatics (Tropicamide, Phenylephrine) were applied to the eye(s) to be imaged in 5 min intervals until adequate mydriasis was achieved, as determined via pupil diameter (>2.5 মিমি) এবং হালকা উদ্দীপনার প্রতিক্রিয়া। চোখের পলকে ক্ষতির ক্ষতিপূরণ হিসাবে, কর্নিয়াল ডেসিকেশন রোধ করার জন্য উভয় চোখেই প্রয়োজন অনুসারে একটি হাইপ্রোমেলোজ (গোনাক) দ্রবণ প্রয়োগ করা হয়েছিল। ইমেজিং পদ্ধতির জন্য, চেতনানাশক প্রাণীগুলিকে একটি হিটিং প্যাডে স্থাপন করা হয়েছিল এবং স্টার্নাল রিকম্বেন্সিতে অবস্থান করা হয়েছিল। পদ্ধতির উপসংহারে, ইনট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দ্বারা অ্যাটিপামেজোল (0.1-1 মিলিগ্রাম/কেজি) প্রয়োগের মাধ্যমে অ্যানেস্থেশিয়ার আংশিক বিপরীততা অর্জন করা হয়েছিল।

4.5। হিস্টোপ্যাথলজি

দুটি অনুক্রমিক গ্রাফ্ট (প্রতিটি চোখে একটি) প্রাপ্ত প্রাণীদের রোগ প্রতিরোধের প্রতিক্রিয়া 4 দিন, 7 দিন, 14 দিন এবং দ্বিতীয় চোখের ইনজেকশনের পরে 28 ± 1 দিন উভয় চোখের হিস্টোপ্যাথোলজির মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সারণি 1 অনুসারে যে ইঁদুরগুলিকে চিকিত্সা করা হয়েছিল তা সারণী 2-তে বর্ণিত সময়সূচীর ভিত্তিতে বন্ধ করা হয়েছিল। কার্বন ডাই অক্সাইড ইনহেলেশন ব্যবহার করে প্রাণীদের euthanized করা হয়েছিল। ফসফেট-বাফার স্যালাইনে (PBS) 2% প্যারাফর্মালডিহাইড (PFA) দিয়ে পরীক্ষামূলক প্রাণীদের উপর কার্ডিয়াক পারফিউশন সঞ্চালিত হয়েছিল। তারপরে, সমস্ত চোখের বলগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং 4 ◦C তাপমাত্রায় 48 ঘন্টার জন্য 2% PFA/PBS-এ ভিজতে দেওয়া হয়েছিল। স্থির আইবলগুলি একটি সুক্রোজ গ্রেডিয়েন্টের মাধ্যমে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল (পিবিএস-এ 10% সুক্রোজ ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য, পিবিএসে 20% সুক্রোজ 1 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় এবং 30% সুক্রোজ 4 ◦সে রাতারাতি পিবিএসে) এম্বেড করার আগে। Cryosectioning জন্য OCT মিডিয়া। চোখের ক্রায়োসেকশন (10 µm) হ্যারিসন হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন (H&E) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল রেটিনাল মাইক্রোঅ্যানাটমি কল্পনা করতে এবং ইনজেকশনযুক্ত দাতা কোষগুলি সনাক্ত করতে।

জিএমআরপিসি-চিকিত্সা করা গোষ্ঠীগুলির জন্য, জিএফপি + (দাতা) কোষগুলির জন্য ইমিউনোফ্লোরোসেন্স ব্যবহার করে ক্রায়োসেকশনগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। চোখের মধ্যে উপস্থিত নির্দিষ্ট ইমিউন কোষের ধরনগুলির সনাক্তকরণ নিম্নলিখিতগুলির জন্য নির্দিষ্ট প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে লেবেলিংয়ের মাধ্যমে সম্পাদিত হয়েছিল: CD3 (টি লিম্ফোসাইট মার্কার) [35], CD45R (বি লিম্ফোসাইট মার্কার) [36], Iba-1 (সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ এবং মাইক্রোগ্লিয়া মার্কার) [৩৭], লাই-6জি (নিউট্রোফিল মার্কার) [৩৮], এবং সিডি৪৯বি (প্রাকৃতিক ঘাতক কোষ চিহ্নিতকারী) [৩৯]। ঘরের তাপমাত্রায় পিবিএস-এ ক্রায়োসেকশনগুলি তিনবার ধোয়া হয়েছিল এবং 0.03% ট্রাইটন এক্স-100 এবং 10% সাধারণ ছাগলের সিরাম পিবিএস (এনজিএস; জ্যাকসন ইমিউনোরিসার্চ, ওয়েস্ট গ্রোভ, পিএ, ইউএসএ) দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা। ইঁদুর বিরোধী CD3 (1:100 dilution, BD Biosciences, San Jose, CA, USA), ইঁদুর বিরোধী CD45R (1:100, BD বায়োসায়েন্সেস, সান জোস, CA, USA), খরগোশ বিরোধী মাউস Iba{{ 26}} (1:400 dilution, Wako Chemicals, Richmond, VA, USA), rat anti-mouse Ly-6G (1:100 dilution, BD Biosciences, San Jose, CA, USA), এবং ইঁদুর বিরোধী -মাউস CD49b (1:100 dilution, BD Biosciences, San Jose, CA, USA) নমুনাগুলিতে প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। নমুনাগুলি আবার ঘরের তাপমাত্রায় পিবিএসে 3 বার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। অ্যালেক্সা-ফ্লুর-কঞ্জুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (ছাগল অ্যান্টি-ইঁদুর অ্যালেক্সা-ফ্লাউর-568 এবং ছাগল অ্যান্টি-র্যাবিট অ্যালেক্সা-ফ্লাওয়ার-568, লাইফ টেকনোলজিস, কার্লসব্যাড, সিএ, ইউএসএ) নমুনাগুলিতে 1 ঘন্টার জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল কক্ষ তাপমাত্রায়. তারপরে সমস্ত নমুনাগুলি ঘরের তাপমাত্রায় আরও তিনবার পিবিএস-এ ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। DAPI Fluoromount-G (সাউদার্ন বায়োটেক, বার্মিংহাম, AL, USA) ব্যবহার করে কভারস্লিপগুলি মাউন্ট করা হয়েছিল এবং স্লাইডগুলি ঘরের তাপমাত্রায় রাতারাতি শুকানোর জন্য রেখে দেওয়া হয়েছিল।

4.6। এলিস্পট এবং এমএলআর অ্যাসেস

আরপিসি-নির্দিষ্ট মেমরি টি কোষগুলি এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট স্পট (ELISPOT) অ্যাসের মাধ্যমে প্রথম গ্রাফ্ট প্লেসমেন্টের 2 এবং 4 সপ্তাহ পর পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি সময় পয়েন্টের জন্য সারণী 1 এবং 2 এ দেখানো হিসাবে পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীগুলি সেট আপ করা হয়েছিল। ELISPOT অ্যাস একটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি-কোটেড মাইক্রোপ্লেটে নিঃসৃত প্রোটিন ক্যাপচার করে এবং T সেল IFN ক্ষরণ সনাক্ত করে মেমরি টি সেল অ্যাক্টিভেশন নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। পরীক্ষামূলক রিডআউট হল মাইক্রোপ্লেটে IFN দাগের সংখ্যা। উপস্থিত IFN দাগের সংখ্যা টি কোষের সক্রিয় হওয়ার নির্দেশক। অ্যালোরেঅ্যাকটিভ টি কোষের ফ্রিকোয়েন্সি মূল্যায়ন করা হয়েছিল একটি 48 ঘন্টা মিশ্র লিউকোসাইট বিক্রিয়া (MLR) 96- ভাল মাল্টিস্ক্রিন-আইপি প্লেটগুলিতে (মিলিপুর, বার্লিংটন, এমএ, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)। রেসপন্ডার সেলগুলি ছিল লিম্ফোসাইট/স্প্লেনোসাইট যা সার্ভিকাল লিম্ফ নোড (সিএলএন) এবং পরীক্ষামূলক প্রাণীর প্লীহা থেকে বিশুদ্ধ টি কোষ ধারণকারী, এবং উদ্দীপক কোষগুলি মূলত C57BL/6 ইঁদুর থেকে প্রাপ্ত জিএমআরপিসি ছিল। এলিস্পট অ্যাসেসগুলি স্ট্যান্ডার্ড প্রোটোকলের ভিত্তিতে পরিচালিত হয়েছিল। 96-কূপ মাল্টিস্ক্রিন-আইপি প্লেটগুলিকে জীবাণুমুক্ত অবস্থায় প্রতি কূপের 35% ইথানলের 15 μL দিয়ে আগে থেকে ভেজা রাখা হয়েছিল৷ প্লেটগুলিতে 100 μL IFN ক্যাপচার অ্যান্টিবডি (ক্লোন AN-18, eBioscience, San Diego, CA, USA) মিশ্রিত PBS (2 μg/mL) প্লেটগুলিতে প্রয়োগ করার আগে তিনবার জীবাণুমুক্ত PBS দিয়ে ধোয়া হয়েছিল৷ প্লেটগুলিতে এমএলআর অ্যাসেগুলি বহন করার আগে প্লেটগুলিকে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউবেট করা হয়েছিল। ক্যাপচার অ্যান্টিবডি-কোটেড প্লেটগুলি পিবিএস দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরে RPMI1640 দিয়ে 37 ◦C তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য ব্লক করা হয়েছিল।

প্রতিটি অ্যাস প্লেটে নিম্নলিখিত নিয়ন্ত্রণগুলি অন্তর্ভুক্ত ছিল: কোন কোষ নেই এমন কূপ, উদ্দীপনা ছাড়াই কোষ ধারণ করে এবং ফোরবোল {{0}}মাইরিস্টেট 13-এসিটেট (পিএমএ) চিকিত্সা সহ কোষ ধারণকারী কূপ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে Ca ionophore. PMA চিকিত্সা টি সেল রিসেপ্টর পাথওয়েকে সক্রিয় করার জন্য দ্বিতীয় মেসেঞ্জার, DAG-এর অনুকরণ করে একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে কাজ করে এবং এর ফলে টি কোষ সক্রিয়করণের কারণ হয়, Ca ionophore কোষে ক্যালসিয়াম আয়ন প্রবেশের সুবিধা দেয়। রঙের প্রতিক্রিয়ার আগে প্লেটগুলি 37 ◦C তাপমাত্রায় 36 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। প্লেটগুলিকে {{10}} ধারণকারী পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। PBS-এ (0.5 µg/mL) প্রতিটি কূপে প্রয়োগ করা হয়েছিল। প্লেটগুলিকে অতিরিক্ত 2 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করা হয়েছিল। প্লেটগুলি আবার পিবিএস-এ 0.01% টুইন 20 দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। প্রতি কূপে 100 μL স্ট্রেপ্টাভিডিন-এপি (1:1000 ডাইলিউশন, ইনভিট্রোজেন) প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং প্লেটগুলি ঘরের তাপমাত্রায় 45 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। সমস্ত প্লেট পিবিএস-এ 0.01% টুইন 20 দিয়ে আবার তিনবার এবং পিবিএস একা আরও তিনবার ধোয়া হয়েছিল। অবশেষে, রঙ করার জন্য প্রতিটি কূপে 100 μL BCIP/NBT (সিগমা অ্যালড্রিচ, মিউনিখ, জার্মানি) যোগ করা হয়েছিল। সমস্ত প্লেট কলের জল দিয়ে ব্যাপকভাবে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং ডেটা বিশ্লেষণের আগে শুকানো হয়েছিল।

cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত

5। উপসংহার

এই সমীক্ষাটি দেখায় যে ভিট্রিয়াস গহ্বরে অ্যালোজেনিক RPC-এর অনুক্রমিক বাইনোকুলার গ্রাফটগুলি মাউসের ক্লাসিক্যাল ইমিউন প্রত্যাখ্যানকে উস্কে দেয় না। যদিও এটি স্বীকৃত যে এই অ্যালোজেনিক হিস্টোলজিক্যাল স্টাডিগুলি মানব RPC ক্লিনিকাল পণ্যের সাথে সঞ্চালিত হতে পারে না, তথ্যটি একটি ক্লিনিকাল নিরাপত্তা অধ্যয়নের (jCyte, JC-01E, অপ্রকাশিত ডেটা) ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ দেখা যায় যেখানে রেটিনাইটিস রোগীদের পিগমেন্টোসা ইমিউনোসপ্রেসিভ চিকিত্সা ছাড়াই সমসাময়িক দ্বিপাক্ষিক ইনজেকশন পেয়েছে। যদিও দুটি গবেষণার সরাসরি তুলনা করা কঠিন, এটি লক্ষণীয় যে উভয়ের সামগ্রিক ফলাফল অ্যালোগ্রাফ্ট বেঁচে থাকার ক্ষেত্রে সাদৃশ্য দেখিয়েছে।

তথ্যসূত্র

1. হোরি, জে.; এনজি, টিএফ; শাতোস, এম.; ক্লাসেন, এইচ.; Streilein, JW; তরুণ, এমজে নিউরাল প্রোজেনিটর কোষে ইমিউনোজেনিসিটির অভাব রয়েছে এবং অ্যালোগ্রাফ্ট হিসাবে ধ্বংস প্রতিরোধ করে। স্টেম সেল 2003, 21, 405-416। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

2. ক্লাসেন, এইচ.; শোয়ার্টজ, পিএইচ; জিয়ান, বি.; নেদারকোট, এইচ.; ইয়াং, এমজে; ব্রাগাডোত্তির, আর.; তুলিস, জিই; Warfvinge, K.; নারফস্ট্রম, কে. বিকাশমান বিড়ালের মস্তিষ্ক থেকে বিচ্ছিন্ন নিউরাল পূর্বসূরগুলি ডিস্ট্রোফিক বিড়ালের রেটিনায় প্রতিস্থাপনের পরে রেটিনাল একীকরণ দেখায়। পশুচিকিত্সক চক্ষু. 2007, 10, 245-253। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

3. সালাডো-মানজানো, সি.; পারপিনা, ইউ.; Straccia, M.; মোলিনা-রুইজ, এফজে; Cozzi, E.; Rosser, AE; ক্যানালস, জেএম কি ইমিউনোলজিক্যাল রেসপন্স নিউরোডিজেনারেটিভ রোগে সেল থেরাপির জন্য একটি বাধা? সামনে। কোষ নিউরোস্কি। 2020, 14, 250। [ক্রসরেফ]

4. Petrus-Reurer, S.; রোমানো, এম.; হাউলেট, এস.; জোন্স, জেএল; Lombardi, G.; সায়েব-পার্সি, কে. ইমিউনোলজিকাল বিবেচনা এবং পুনর্জন্মমূলক সেলুলার থেরাপির জন্য চ্যালেঞ্জ। কমুন বায়োল 2021, 4, 798। [ক্রসরেফ]

5. বুচার, কে.; রদ্রিগেজ-বোকানেগ্রা, ই.; দৌলেটবেকভ, ডি.; ফিশার, MD ইমিউন প্রতিক্রিয়া রেটিনাল জিন থেরাপি ব্যবহার করে ade no সম্পর্কিত ভাইরাল ভেক্টর-ইমপ্লিকেশনস ফর ট্রিটমেন্টের সাফল্য এবং নিরাপত্তা। অনুষ্ঠান রেটিন। চোখের রেস. 2021, 83, 100915। [ক্রসরেফ]

6. সিং, এমএস; পার্ক, এসএস; আলবিনি, টিএ; ক্যান্টো-সোলার, এমভি; ক্লাসেন, এইচ.; ম্যাকলারেন, আরই; তাকাহাশি, এম.; নাগিয়েল, এ.; শোয়ার্টজ, এসডি; ভারতী, কে. রেটিনাল স্টেম সেল প্রতিস্থাপন: নিরাপত্তা এবং সম্ভাবনার ভারসাম্য। অনুষ্ঠান রেটিন। চোখের রেস. 2020, 75, 100779। [ক্রসরেফ]

7. কামাও, এইচ.; মান্দাই, এম.; ওকামোটো, এস.; সাকাই, এন.; সুগা, এ.; সুগীতা, এস.; কিরিউ, জে.; তাকাহাশি, এম. মানব প্ররোচিত প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল-ডিরাইভড রেটিনাল পিগমেন্ট এপিথেলিয়াম সেল শীটগুলির বৈশিষ্ট্য ক্লিনিকাল প্রয়োগের লক্ষ্যে। স্টেম সেল প্রতিনিধি 2014, 2, 205-218। [ক্রসরেফ]

8. সুগীতা, এস.; কামাও, এইচ.; ইওয়াসাকি, ওয়াই.; ওকামোটো, এস.; হাশিগুচি, টি.; ইসেকি, কে.; হায়াশি, এন.; মান্দাই, এম.; তাকাহাশি, এম. প্ররোচিত প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল থেকে প্রাপ্ত রেটিনাল পিগমেন্ট এপিথেলিয়াল কোষ দ্বারা টি-সেল সক্রিয়করণের বাধা। তদন্ত. চক্ষু. ভিস। বিজ্ঞান 2015, 56, 1051–1062। [ক্রসরেফ]

9. ম্যাকগিল, টিজে; স্টডার্ড, জে.; রেনার, এলএম; মেসাউদি, আই.; ভারতী, কে.; মিতালিপভ, এস.; লাউয়ার, এ.; উইলসন, ডিজে; নিউরিঞ্জার, এম. অ্যালোজেনিক আইপিএসসি-ডিরাইভড আরপিই সেল গ্রাফ্ট ফেইলিউর ফলোয়িং ইনটু দ্য সাবরেটিনাল স্পেসে ট্রান্সপ্লান্টেশন অন হিউম্যান প্রাইমেট। তদন্ত. চক্ষু. ভিস। বিজ্ঞান 2018, 59, 1374–1383। [ক্রসরেফ]

10. সুগীতা, এস.; মান্দাই, এম.; কামাও, এইচ.; তাকাহাশি, এম. আরপিই কোষ প্রতিস্থাপনের ইমিউনোলজিক্যাল দিক। অনুষ্ঠান রেটিন। চোখের রেস. 2021, 84, 100950। [ক্রসরেফ]

11. নায়ার, ডিএসআর; টমাস, রেটিনার ডিজেনারেটিভ রোগের জন্য বিবি স্টেম সেল-ভিত্তিক চিকিত্সার কৌশল। কার স্টেম সেল রেস. সেখানে। 2022, 17, 214-225। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

12. মার্টিনেজ ভেলাজকুয়েজ, এলএ; ব্যালিওস, বিজি দ্য নেক্সট জেনারেশন অফ মলিকুলার অ্যান্ড সেলুলার থেরাপিউটিকস ফর ইনহেরিটেড রেটিনা ডিজিজ। int. জে মোল। বিজ্ঞান 2021, 22, 11542। [ক্রসরেফ]

13. লিউ, ওয়াই.; চেন, এসজে; লি, এসওয়াই; কিউ, এলএইচ; মেং, এক্সএইচ; ওয়াং, ওয়াই.; Xu, HW; লিয়াং, জেডকিউ; Yin, ZQ রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসা রোগীদের মধ্যে মানব রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষ প্রতিস্থাপনের দীর্ঘমেয়াদী নিরাপত্তা। স্টেম সেল রেস. সেখানে। 2017, 8, 209। [CrossRef] [PubMed]

14. ওয়াং, ওয়াই.; ট্যাং, জেড.; গু, পি. রেটিনা অবক্ষয়ের জন্য স্টেম/প্রেজেনিটর সেল-ভিত্তিক প্রতিস্থাপন: ক্লিনিকাল ট্রায়ালগুলির একটি পর্যালোচনা। সেল ডেথ ডিস। 2020, 11, 793। [CrossRef] [PubMed]

15. জার্মান, ওএল; ভ্যালেস-মাউরিজি, এইচ.; সোটো, টিবি; Rotstein, NP; পলিটি, এলই রেটিনা স্টেম সেল, আশা এবং বাধা। ওয়ার্ল্ড জে. স্টেম সেল 2021, 13, 1446–1479। [ক্রসরেফ]

16. কারামালি, এফ.; বেহতাজ, এস.; Babaei-Abraki, S.; Hadady, H.; আতেফি, এ.; সাভোজ, এস.; Soroushzadeh, S.; নাজাফিয়ান, এস.; নাসর এসফাহানি, এমএইচ; ক্লাসেন, এইচ ফটোরিসেপ্টর অবক্ষয়ের জন্য সম্ভাব্য থেরাপিউটিক কৌশল: দৃষ্টি পুনরুদ্ধারের পথ। J. অনুবাদ। মেড. 2022, 20, 572। [ক্রসরেফ]

17. সেমো, এম.; হামেদি, এন.; স্টেভানাতো, এল.; কার্টার, ডি.; ব্রুক, জি.; ইয়াং, এম.; কফি, পি.; সিনডেন, জে.; প্যাটেল, এস.; Vugler, A. মানব রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষের কার্যকারিতা এবং নিরাপত্তা। অনুবাদ। ভিস। বিজ্ঞান টেকনোল। 2016, 5, 6। [ক্রসরেফ]

18. মোচিজুকি, এম.; সুগীতা, এস.; কামোই, কে. চোখের ইমিউনোলজিক্যাল হোমিওস্টেসিস। অনুষ্ঠান রেটিন। চোখের রেস. 2013, 33, 10-27। [ক্রসরেফ]

19. ইয়ামাসাকি, এস.; সুগীতা, এস.; হোরিউচি, এম.; মাসুদা, টি.; ফুজি, এস.; মাকাবে, কে.; কাওয়াসাকি, এ.; হায়াশি, টি.; কুয়াহারা, এ.; কিশিনো, এ.; ইত্যাদি মানব ESC- এবং iPSC-প্রাপ্ত রেটিনাসের কম ইমিউনোজেনিসিটি এবং ইমিউনোসপ্রেসিভ বৈশিষ্ট্য। স্টেম সেল প্রতিনিধি 2021, 16, 851–867। [ক্রসরেফ]

20. ক্লাসেন, এইচ.; শোয়ার্টজ, এমআর; বেইলি, এএইচ; ইয়ং, এমজে সারফেস মার্কারগুলি মাল্টিপোটেন্ট হিউম্যান এবং মাউস নিউরাল প্রোজেনিটর কোষ দ্বারা প্রকাশ করা হয় টেট্রাস্পানিন এবং নন-প্রোটিন এপিটোপস। নিউরোসি। লেট. 2001, 312, 180-182। [ক্রসরেফ]

21. ক্লাসেন, এইচ.; জিয়ান, বি.; কিরভ, II; ইয়াং, এমজে; শোয়ার্টজ, পোস্ট-মর্টেম হিউম্যান টিস্যু থেকে রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষের PH বিচ্ছিন্নতা এবং অটোলোগাস ব্রেন প্রোজেনিটারের সাথে তুলনা। জে. নিউরোস্কি। Res. 2004, 77, 334-343। [ক্রসরেফ]

22. ইনগুলি, ই. প্রতিস্থাপনে সেলুলার প্রত্যাখ্যানের প্রক্রিয়া। পেডিয়াটার। নেফ্রোল। 2010, 25, 61-74। [ক্রসরেফ]

23. ইসা, এফ.; শিওপু, এ.; কাঠ, কেজে গ্রাফ্ট প্রত্যাখ্যান এবং প্রতিস্থাপন সহনশীলতায় টি কোষের ভূমিকা। বিশেষজ্ঞ রেভ. ক্লিন। ইমিউনল। 2010, 6, 155-169। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

24. নাসর, এম.; সিগডেল, টি.; সারওয়াল, এম. ট্রান্সপ্লান্ট প্রত্যাখ্যানের জন্য ডায়াগনস্টিকসে অগ্রগতি। বিশেষজ্ঞ রেভ. মো. নির্ণয়। 2016, 16, 1121–1132। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

25. ক্লাসেন, এইচ.; ইমফেল্ড, কেএল; রে, জে.; ইয়াং, এমজে; গেজ, এফএইচ; বারম্যান, এমএ প্রাপ্তবয়স্ক হিপ্পোক্যাম্পাল প্রোজেনিটর কোষের ইমিউনোলজিক্যাল বৈশিষ্ট্য। ভিস। Res. 2003, 43, 947-956। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

26. উইঙ্গার, জেজি; ওয়েস্ট, বিএম; প্লাস্টেড, WC; ক্লাউস, এসএম; ওয়ালশ, সিএম; লেন, TE MHC অমিলের ফলে ভাইরাল-প্ররোচিত ডিমাইলিনেশনের একটি মডেলে মেরুদণ্ড প্রতিস্থাপনের পর নিউরাল প্রোজেনিটার সেল প্রত্যাখ্যান হয়। স্টেম সেল 2012, 30, 2584–2595। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

27. ReNeuron, L. ফার্স্ট-ইন-হিউম্যান ফেজ I/IIa, ওপেন-লেবেল, রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসা (RP) রোগীদের মধ্যে সাবরেটিনলি ট্রান্সপ্লান্টেড হিউম্যান রেটিনাল প্রোজেনিটর সেল (এইচআরপিসি) এর সুরক্ষা এবং সহনশীলতার সম্ভাব্য অধ্যয়ন। ক্লিনিক্যাল ট্রায়াল# NCT02464436। অনলাইনে উপলব্ধ: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02464436 (27 ফেব্রুয়ারি 2023 এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে)।

28. লু, বি.; লিন, ওয়াই.; Tsai, Y.; Girman, S.; অ্যাডামাস, জি.; জোন্স, এমকে; শেলী, বি.; Svendsen, CN; ওয়াং, এস. একটি পরবর্তী মানব নিউরাল প্রোজেনিটর ট্রান্সপ্ল্যান্ট ডিজেনরেট রেটিনায় প্রাথমিক গ্রাফ্ট বেঁচে থাকা বা থেরাপিউটিক কার্যকারিতার সাথে আপস করে না। অনুবাদ। ভিস। বিজ্ঞান টেকনোল। 2015, 4, 7। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

29. জোন্স, এমকে; লু, বি.; Girman, S.; ওয়াং, এস. রেটিনাল ডিজেনারেটিভ রোগে প্রতিস্থাপন এবং সংরক্ষণের জন্য সেল-ভিত্তিক থেরাপিউটিক কৌশল। অনুষ্ঠান রেটিন। চোখের রেস. 2017, 58, 1-27। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

30. বেল, বিএ; কৌল, সি.; বনিলহা, ভিএল; Rayborn, ME; শাদ্রচ, কে.; হলিফিল্ড, জেজি দ্য বিএএলবি/সি মাউস: বার্ধক্যের সময় রেটিনাল প্যাথলজিতে স্ট্যান্ডার্ড ভিভারিয়াম আলোর প্রভাব। মেয়াদ। চোখের রেস. 2015, 135, 192-205। [ক্রসরেফ]

31. ক্লাসেন, এইচজে; এনজি, টিএফ; কুরিমোটো, ওয়াই.; কিরভ, আই.; শাতোস, এম.; কফি, পি.; তরুণ, এমজে মাল্টিপোটেন্ট রেটিনাল প্রোজেনিটররা বিকাশের মার্কার প্রকাশ করে, রেটিনাল নিউরনে পার্থক্য করে এবং হালকা-মধ্যস্থ আচরণ সংরক্ষণ করে। তদন্ত. চক্ষু. ভিস। বিজ্ঞান 2004, 45, 4167–4173। [ক্রসরেফ]

32. jCyte, Inc. রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসায় হিউম্যান রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষের (jCell) একক নিরাপত্তা, ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশন। ক্লিনিকাল ট্রায়াল# NCT02320812। অনলাইনে উপলব্ধ: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02320812 (24 ফেব্রুয়ারি 2023 এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে)।

33. jCyte, Inc. রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসা সহ প্রাপ্তবয়স্কদের মধ্যে হিউম্যান রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষের ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনের নিরাপত্তা এবং কার্যকারিতা। ক্লিনিকাল ট্রায়াল# NCT03073733। অনলাইনে উপলব্ধ: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03073733 (24 ফেব্রুয়ারি 2023 এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে)।

34. jCyte, Inc. রেটিনাইটিস পিগমেন্টোসা সহ প্রাপ্তবয়স্কদের মধ্যে হিউম্যান রেটিনাল প্রোজেনিটর কোষের (কোষ) পুনরাবৃত্তির ইন্ট্রাভিট্রিয়াল ইনজেকশনের নিরাপত্তা। ক্লিনিকাল ট্রায়াল# NCT04604899। অনলাইনে উপলব্ধ: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04604899 (24 ফেব্রুয়ারি 2023 এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে)।

35. ওডেজানস, জেজে; ভ্যান ডের ভালক, পি. টি কোষ এবং এন কে কোষের নিওপ্লাজমের ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল শ্রেণীবিভাগ। জে ক্লিন। পথোল। 2002, 55, 892। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

36. তোস্তানোস্কি, এলএইচ; চিউ, ওয়াইসি; গ্যামন, জেএম; সাইমন, টি.; Andorko, JI; ব্রমবার্গ, জেএস; জুয়েল, CM স্থানীয় লিম্ফ নোড মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট পুনঃপ্রোগ্রামিং সহনশীলতা প্রচার করে যা সিস্টেমিক এবং অ্যান্টিজেন নির্দিষ্ট। সেল প্রতিনিধি 2016, 16, 2940–2952। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

37. জুর্গা, এএম; প্যালেজনা, এম.; কুটার, কেজেড ডিফারেনশিয়াল মাইক্রোগ্লিয়া ফেনোটাইপসের সাধারণ এবং বৈষম্যমূলক মার্কারগুলির ওভারভিউ। সামনে। কোষ নিউরোস্কি। 2020, 14, 198। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

38. লি, জেসি; Zou, XM; ইয়াং, এসএফ; জিন, জেকিউ; ঝু, এল.; লি, সিজে; ইয়াং, এইচ.; ঝাং, এজি; ঝাও, টিকিউ; চেন, সিওয়াই নিউট্রোফিল এক্সট্রা সেলুলার ফাঁদগুলি গ্যাস্ট্রিক ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীদের ক্যান্সার-সম্পর্কিত থ্রম্বোসিসের বিকাশে অংশগ্রহণ করে। ওয়ার্ল্ড জে. গ্যাস্ট্রোএন্টেরল। 2022, 28, 3132–3149। [ক্রসরেফ]

39. Kee, BL প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষ এবং ILC1 উন্নয়ন. এনসাইকেল ইমিউনোবায়োল। 2016, 1, 140-148।