সিস্টানচে সালসা সেল সংস্কৃতিতে ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড বায়োসিন্থেসিসে জড়িত হাইড্রোজেন পারক্সাইড প্রতিক্রিয়াশীল ইএসটিগুলির সনাক্তকরণ

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

জে চেন এট আল

বিমূর্ত
হাইড্রোজেন পারক্সাইড হল একটি কার্যকর অ্যাবায়োটিক ইলিসিটর যা উদ্ভিদে সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট জৈবসংশ্লেষণকে প্ররোচিত করতে পারে। আমরা দেখাই যে একটি লবণ-সহনশীল ঔষধি গাছের কোষ সাসপেনশন সংস্কৃতিতেসিস্তানচেসালসা, বায়োঅ্যাকটিভ উপাদান উত্পাদনphenylethanoidগ্লাইকোসাইডH2O2 চিকিত্সার পরে (PeGs) বৃদ্ধি করা হয়েছিল। PeGs সম্পর্কিত জিন সনাক্ত করতে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)H2O2 দ্বারা প্রভাবিত জৈব সংশ্লেষণ, আমরা একটি ব্যবহার করে H2O2 প্রতিক্রিয়াশীল জিনের একটি দমন বিয়োগমূলক সংকরকরণ লাইব্রেরি তৈরি করেছিসিস্তানচেসালসাসেল লাইন এবং 105টি এক্সপ্রেসড সিকোয়েন্স ট্যাগ (ইএসটি) এবং 85টি জিন চিহ্নিত করেছে। ইএসটি লাইব্রেরির কার্যকরী টীকা এবং জিন অন্টোলজি বিশ্লেষণে বিভিন্ন স্ট্রেস প্রতিক্রিয়া, গৌণ বিপাকের জৈব সংশ্লেষণ এবং ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেশন সম্পর্কিত জিন দেখানো হয়েছে। তাদের মধ্যে, আমরা পিজিগুলির সাথে সম্পর্কিত দুটি জিন সনাক্ত করেছি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণ পথ (4-কউমারেট কোএনজাইম A ligase এবং cinnamate 4-hydroxylase), এবং দুটি WRKY টাইপ ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর। H2O2 চিকিত্সার পরে নির্বাচিত জিনের অভিব্যক্তি RT-qPCR দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। PeG এর প্রথম দিকে বর্ধিত প্রতিলিপি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণের পথের জিনগুলি চিকিত্সার পরে প্রকাশ করে যে H2O2 প্ররোচিত PeGs(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)এর মূল জিনগুলির আপ-নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে জৈব সংশ্লেষণ।
অতিরিক্ত কীওয়ার্ড: সিনামেট-4-হাইড্রোক্সিলেস, 4-কোমরেট কোএনজাইম এ লিগেস, দমন বিয়োগমূলক সংকরকরণ।সিস্তানচেসালসা. phenylethanoidগ্লাইকোসাইড

ভূমিকা

সিস্তানচেসালসাHaloxylos ammodendrun এর মূলে একটি বহুবর্ষজীবী উদ্ভিদ পরজীবী এবং এটি পশ্চিম চীনের মরুভূমিতে জন্মে। শতাব্দী ধরে,সিস্তানচেপ্রজাতি ঐতিহ্যগত ভেষজ ঔষধ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছে (Wang et al. 2012)। জৈব সক্রিয় উপাদানphenylethanoidগ্লাইকোসাইড(PeGs) যা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) ক্লিয়ারেন্স, বিকিরণ সুরক্ষা, অনাক্রম্যতা বৃদ্ধি এবং অ্যান্টি-এজিং (Nan et al. 2013) এর উপর একটি অসাধারণ প্রভাব ফেলে। পিজি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচেফেনিল্যালানাইন (চিত্র 1 সাপ্লি.) থেকে শুরু হয় এবং সংশ্লেষিত ক্যাফেইক অ্যাসিড আরও গ্লাইকোসিলেটেড হয়ে বিভিন্ন পিজি তৈরি করে।(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)(ওয়াং এট আল। 2012)। তিনটি প্রধান পিজি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড), echinacoside, acteoside, এবং 2'-acetylacteoside, সবচেয়ে সক্রিয় উপাদান হিসাবে বিবেচিত হয়সিস্তানচে(কোবায়াশি এট আল। 1984)। যাতে তাদের বিষয়বস্তু উন্নত হয়সিস্তানচেকোষ সংস্কৃতি, চিটোসান, পুট্রেসসিন, এজি প্লাস এবং অসমোটিক স্ট্রেস সহ বিভিন্ন এলিসিটর পরীক্ষা করা হয়েছে (ওয়্যাং এট আল। 2005a,b, চেং এট আল। 2005, 2006, লিউ এট আল। 2007, লিউ এবং চেং 2008)। যাইহোক, PeGs জড়িত জিন(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচে, প্রধানত ফেনিল্যালানাইন বিপাক পথ জিন, খুব কমই চিহ্নিত করা হয়েছে। Cistanche deserticola (Hu et al. 2011) এ সম্প্রতি শুধুমাত্র একটি জিন এনকোডিং ফেনিল্যালানাইন অ্যামোনিয়া-লাইজ (PAL) সনাক্ত করা হয়েছে। অন্যান্য জিন এনকোডিং, উদাহরণস্বরূপ, সিনামেট-4-হাইড্রোক্সিলেস (C4H), যা দারুচিনিকে কিউমেরিক অ্যাসিডে রূপান্তরকে অনুঘটক করতে পারে, এবং 4-কৌমারেট কোএনজাইম এ লিগেস (4CL), লিগনিন এবং ফ্ল্যাভানয়েডের জন্য একটি অপরিহার্য জিন জৈব সংশ্লেষণ, পাওয়া যায়নিসিস্তানচে.
আমরা এর কোষ সংস্কৃতি ব্যবহার করেছিসিস্তানচেসালসাPeGs অধ্যয়ন করতে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণ এবং সম্পর্কিত জিনের অভিব্যক্তি। আমরা PeGs এ একটি কার্যকর ইলিসিটর H2O2 এর প্রভাবও তদন্ত করেছি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণ তদ্ব্যতীত, PeGs এর সাথে জড়িত প্রাথমিক প্রতিক্রিয়াশীল জিনগুলি সন্ধান করতে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণ, আমরা H2O2- প্রতিক্রিয়াশীল জিনের একটি cDNA লাইব্রেরি তৈরি করতে দমন বিয়োগমূলক সংকরকরণ (SSH) চালিয়েছি।

চিত্র 1. H2O2 চিকিত্সার পরে RT-qPCR দ্বারা নির্ধারিত আপেক্ষিক জিনের অভিব্যক্তি। CsWRKY1 - WRKY ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর (Contig07), CsC4H1 - দারুচিনি 4-হাইড্রোক্সিলেস (কন্টিগ09), Cs4CL1 - 4-কুমারেট: ligase (Contig03), CsHSP1 - হিট শক প্রোটিন 70 kDa (Contig 01), এবং CsSOD1 - সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (Contig16)। কোষগুলিকে 80 ug dm-3 H2O2 দিয়ে একটি তরল মাধ্যমে 2 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং অভিব্যক্তিগুলিকে জল দিয়ে চিকিত্সা করা নিয়ন্ত্রণের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। মানে প্লাস - তিনটি জৈবিক পুনরাবৃত্তির SD; * - পি <0.05, **="" -="" পি=""><>

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

CS2001 সেল লাইন এর পাপড়ি থেকে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিলসিস্তানচেসালসা(CA Mey.) Beck Neimenggu প্রদেশে সংগৃহীত এবং subcultured. সংস্কৃতি পদ্ধতিটি পূর্বে প্রকাশিত একটি প্রোটোকলের অনুরূপ ছিল (Liu et al. 2007)। সাধারণত, একটি কঠিন মুরাশিগে এবং স্কুগ (1962; MS) মাধ্যম উপ-সংস্কৃতির জন্য এবং একটি তরল মাধ্যম PeG-এর জন্য ব্যবহৃত হত।(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণ (এটি 30 g dm-3 গ্লুকোজ এবং 2৷{9}} mg dm-3 indole-3-এসেটিক অ্যাসিডের সাথে পরিপূরক পরিবর্তিত MS মাধ্যম ছিল)। H2O2 চিকিত্সার জন্য, 50 ± 0.2 গ্রাম কোষ একটি দ্রুত বৃদ্ধির সময়কালে, সাধারণত 20 থেকে 30 দিন পর তারা কঠিন মাধ্যমে উপসংস্কৃতির পরে, একটি 250 সেমি 3 এরলেনমেয়ার ফ্লাস্কে একটি 50 সেমি 3 তরল মাধ্যমের মধ্যে টিকা দেওয়া হয়। এবং বিভিন্ন H2O2 ঘনত্বের সাথে বা ছাড়া অন্ধকারে সভ্য। পেজি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)H2O2 দ্বারা 10 ডি ইনডাকশনের পরে বিষয়বস্তু পূর্বে প্রকাশিত একটি পদ্ধতি অনুসারে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (লিউ এট আল। 2007) মিথানল গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন সহ রিভার্স-ফেজ হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির উপর ভিত্তি করে।

H2O2 চিকিত্সার 2 ঘন্টা পরে কোষগুলি একটি বুচনার ফানেল ব্যবহার করে ফিল্টার পেপারের মাধ্যমে মাঝারি থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপরে সেগুলিকে তরল নাইট্রোজেন এবং মাটিতে পাউডারে হিমায়িত করা হয়েছিল। প্রতি 2 গ্রাম সেল পাউডারে 1 cm3 2-mercaptoethanol, 1 cm3 of 200 g dm{{10}} সারকোসিলের মিশ্রণ ব্যবহার করে লাইজ করা হয়েছিল, এবং একটি GTC বাফারের 8 cm3 (5 M guanidinium isothiocyanate, 62.5 mM Tris-HCl, pH 8.0, 6.25 mM EDTA, pH 8.0, 5 mM thiourea, এবং 10 mM dithiothreitol)। তারপরে কোষগুলিকে 15 মিনিটের জন্য বরফের উপর সেঁকানো হয়েছিল, তারপরে 8.5 M CH3COOK এর 1/3 ভলিউম, pH 6.0 যোগ করা হয়েছিল, এবং কোষগুলিকে 15 মিনিটের জন্য বরফের উপর ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপর 15 মিনিটের জন্য 15 000 g এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল . টোটাল আরএনএ ক্ষয় করার জন্য আইসোপ্রোপ্যানলের সমান আয়তনে সুপারনাট্যান্ট যোগ করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে একটি RNeasy মিনি কিট (কিয়াজেন, হিলডেন, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) দ্বারা মোট আরএনএ আরও বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। মেসেঞ্জার আরএনএ একটি অলিগোটেক্স এমআরএনএ মিডি কিট (কিয়াজেন) ব্যবহার করে মোট আরএনএ থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল।

phenylethanoidগ্লাইকোসাইডভিতরেসিস্তানচেসালসা

নিয়ন্ত্রণ থেকে একটি SSH লাইব্রেরি তৈরি করা হয়েছিল এবং 30 শতাংশ H2O2-কোষের নমুনাগুলি 2 ঘন্টা পরে একটি PCR-নির্বাচন সিডিএনএ বিয়োগ কিট (ক্লোনটেক, মাউন্টেন ভিউ, ইউএসএ) ব্যবহার করে উত্পাদিত হয়েছিল৷ লাইব্রেরি নির্মাণের জন্য, পণ্যগুলিকে জেল পিউরিফিকেশন কিট (কিয়াজেন) ব্যবহার করে আলাদাভাবে শুদ্ধ করা হয়েছিল এবং একটি টিএ ক্লোনিং কিট (তিয়ানজেন, বেইজিং, চীন) ব্যবহার করে একটি পিজিইএম ভেক্টরে ক্লোন করা হয়েছিল। স্বাধীন ক্লোন থেকে প্লাজমিডগুলি বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং T7 প্রাইমার ব্যবহার করে সিকোয়েন্স করা হয়েছিল। CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3) এর সাথে কনটিগ সমাবেশের জন্য লাইব্রেরি থেকে সমস্ত প্রকাশকৃত সিকোয়েন্স ট্যাগ (EST) সিকোয়েন্স (ভেক্টর সিকোয়েন্সগুলি সরানো হয়েছে) ব্যবহার করা হয়েছিল। ইএসটিগুলি কন্টিগ এবং সিঙ্গলটনে বিভক্ত ছিল; এগুলি NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov) তে BLASTx প্রোগ্রাম ব্যবহার করে হোমোলজি অনুসন্ধানের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। তারপরে ব্লাস্ট2জিও (http://www. blast2go.com) ব্যবহার করে জিন অন্টোলজি (GO) পদ অনুসারে সিকোয়েন্সগুলি টীকা, বিশ্লেষণ এবং শ্রেণিবদ্ধ করা হয়েছিল।
রিয়েল-টাইম পরিমাণগত পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (RT-qPCR) বুস্টিন এট আল অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল। (2009)। সিডিএনএ নমুনাগুলি মোট আরএনএর 0.5 ইউজি থেকে প্রাইমস্ক্রিপ্ট আরটি রিএজেন্ট কিট (টাকারা, দালিয়ান, চীন) ব্যবহার করে সংশ্লেষিত হয়েছিল। RT-qPCR SYBR Premix Ex Taq II এবং ROX প্লাস কিটস (টাকারা) ব্যবহার করে ABI 7300 রিয়েল-টাইম PCR সিস্টেমে (অ্যাপ্লাইড বায়োসিস্টেম, ফস্টার সিটি, ইউএসএ) তিনটি প্রযুক্তিগত প্রতিলিপি সহ করা হয়েছিল। প্রাইমারগুলি অনলাইন প্রাইমার 3 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে Takara দ্বারা সরবরাহিত নির্দেশ অনুসারে ডিজাইন করা হয়েছিল; এই গবেষণায় ব্যবহৃত প্রাইমারগুলি সারণি 1 সাপ্লে তালিকাভুক্ত করা হয়েছে। জিনের অভিব্যক্তিগুলি 18S আরএনএ-তে স্বাভাবিক করা হয়েছিল, যার অভিব্যক্তি সমস্ত নমুনায় স্থিতিশীল ছিল।

ফলাফলগুলি R সংস্করণ 3.1.1 ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, ছাত্রদের টি-পরীক্ষা দ্বারা পার্থক্যের তাত্পর্য যাচাই করা হয়েছিল।

ফলাফল

হাইড্রোজেন পারক্সাইড-প্ররোচিত তিনটি প্রধান PeG-এর জৈব সংশ্লেষণ(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)ভিতরেসিস্তানচেসালসাসাসপেনশন সেল (সারণী 1) কিন্তু কোষের বৃদ্ধির উপর কোন সুস্পষ্ট প্রভাব নেই (চিত্র S2)। 10 ug dm-3 H2O2 চিকিত্সার (P < 0৷{28}}5)="" পরে="" ইচিনাকোসাইডের="" বিষয়বস্তু="" ইতিমধ্যেই="" বৃদ্ধি="" পেয়েছে,="" 20="" ug="" dm="" এর="" পরে="" একটি="" উচ্চতর="" বৃদ্ধি="" রেকর্ড="" করা="" হয়েছিল="" -3="" h2o2="" চিকিত্সা="" (p="">< 0.01),="" এবং="" সর্বোচ্চ="" বৃদ্ধি="" ছিল="" 40,="" 80,="" এবং="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" চিকিত্সার="" পরে৷="" অ্যাকটিওসাইডের="" জন্য="" একই="" রকম="" ফলাফল="" দেখানো="" হয়েছে,="" কিন্তু="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" চিকিত্সার="" পরে="" এর="" বিষয়বস্তু="" শীর্ষে="" পৌঁছেছে।="" 2'-অ্যাসিটিল্যাকটিওসাইডের="" জৈবসংশ্লেষণ="" h2o2="" চিকিত্সার="" জন্য="" কম="" সংবেদনশীল="" ছিল;="" এর="" বিষয়বস্তুর="" একটি="" উল্লেখযোগ্য="" বৃদ্ধি="" (p=""><0.05) 40="" ug="" dm-3="" এর="" বেশি="" h2o2="" ঘনত্বে="" ছিল।="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" চিকিত্সার="" পরে,="" তিনটি="" প্রধান="" peg-এর="">(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)নিয়ন্ত্রণে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (P < 0.01)।="" অতএব,="" এই="" ঘনত্ব="" আরও="" পরীক্ষায়="" ব্যবহৃত="">
H2O2 দ্বারা আপ-নিয়ন্ত্রিত প্রাথমিক প্রতিক্রিয়াশীল জিনের জন্য সমৃদ্ধ একটি লাইব্রেরি তৈরি করতে, আমরা এখান থেকে cDNA ব্যবহার করেছিসিস্তানচেসালসাসাসপেনশন কোষ 2 ঘন্টার জন্য 80 ug dm-3 H2O2 দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। SSH লাইব্রেরিতে সিঙ্গেল-পাস সিকোয়েন্সিং 129 রিকম্বিন্যান্ট ক্লোন ভেক্টর সিকোয়েন্স বাদ দেওয়ার পরে 105টি পরিষ্কার EST দিয়েছে। এই পরিষ্কার ESTগুলি CAP3 দ্বারা সমাবেশের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল এবং 18টি কন্টিগ এবং 67টি সিঙ্গেলটন তৈরি হয়েছিল (সারণী 2)। এইভাবে, এই লাইব্রেরিতে 85 টি জিন বিচ্ছিন্ন ছিল। পরিচ্ছন্ন 105 EST-এর গড় দৈর্ঘ্য ছিল 527 bp, যা একটি ক্রম সাদৃশ্য-ভিত্তিক কার্যকরী শ্রেণীবিভাগের জন্য পর্যাপ্ত।

phenylethanoidগ্লাইকোসাইডভিতরেসিস্তানচেসালসা

লাইব্রেরিতে প্রাপ্ত সমস্ত 85 জিন BLASTx দ্বারা GenBank নন-অপ্রয়োজনীয় প্রোটিন ডাটাবেসের বিরুদ্ধে ক্রম সাদৃশ্যের জন্য পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল (ই-মান 0.001 এর চেয়ে কম বা সমান)। একুশটি জিন ডাটাবেসে কোনো হিট দেখায়নি, তারা নির্দিষ্ট হতে পারেসিস্তানচেসালসা. BLASThits সহ ফলাফলগুলি আরও GO এবং KEGG পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণের জন্য Blast2GO সফ্টওয়্যারে আমদানি করা হয়েছিল। ব্লাস্ট হিট সহ 64 টি জিনের মধ্যে 50 টি অন্যান্য প্রজাতির সমজাতীয় জিনের বর্ণনা অনুসারে টীকা করা হয়েছিল। ব্লাস্ট হিটের বর্ণনা অনুসারে টীকাকৃত জিনের নামকরণ করা হয়েছিল। জিও বিশ্লেষণ (চিত্র 3 সরবরাহ) দেখায় যে এই 50টি জিনের মধ্যে, উদ্দীপকের প্রতিক্রিয়াতে 14টি জিন জড়িত ছিল এবং বিপাকীয় প্রক্রিয়াগুলির সাথে সম্পর্কিত 30টিরও বেশি জিন ছিল (সারণী 1 এবং 2)। এই জিনগুলির মধ্যে, দুটি PeG বায়োসিন্থেসিস পাথওয়ে জিন হোমোলজ প্রত্যাশিতভাবে বিচ্ছিন্ন ছিল: 4-কউমারেট কোএনজাইম এ লিগেস (নাম Cs4CL1: Contig03) এবং সিনামেট 4-হাইড্রোক্সিলেস (নাম CsC4H1: Contig14)। আরও, H2O2 চিকিত্সার পরে লাইব্রেরি থেকে জিনের প্ররোচিত অভিব্যক্তি নিশ্চিত করতে RT-qPCR করা হয়েছিল।

নিশ্চিত করার জন্য যে এসএসএইচ লাইব্রেরি থেকে চিহ্নিত অপরিহার্য জিনগুলি H2O2 চিকিত্সার জন্য প্রতিক্রিয়াশীল ছিল, দুটি PeG-এর অভিব্যক্তি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)বায়োসিন্থেসিস পাথওয়ে-সম্পর্কিত জিন (Cs4CL1, CsC4H1), দুটি ROS প্ররোচিত জিন (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), এবং একটি WRKY ফ্যামিলি ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর-লাইক জিন (CsWRKY1: Contig-RT 07 দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল) H2O2 সহ (চিত্র 1)। CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1, এবং CsWRKY1 এক্সপ্রেশনগুলি H2O2 এর পরে যথাক্রমে 2 ঘন্টা পরে 15-গুণ, 3-গুণ, 45-ভাঁজ, এবং 4-গুণের বেশি আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল চিকিত্সা H2O2 চিকিত্সার পরে CsHSP1 এর অভিব্যক্তি মাত্র 1.8 গুণ পরিবর্তিত হয়েছিল।
H2O2 চিকিত্সার পরে CsWRKY1, CsC4H1, এবং Cs4CL1-এর অভিব্যক্তির সময়-কোর্স RT-qPCR (চিত্র 2) দ্বারা আরও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। CsC4H1 এবং Cs4CL1 এক্সপ্রেশনগুলি 16-ঘন্টা চিকিত্সার পরে অত্যন্ত বৃদ্ধি পেয়েছে (যথাক্রমে 80-গুণ এবং 50-গুণ বেশি) এবং তারপরে 32 ঘন্টা পরে নিম্ন-নিয়ন্ত্রিত হয়েছে। CsWRKY1-এর অভিব্যক্তিটি 4 ঘণ্টায় 20-গুণ বেশি আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল এবং তারপরে 8 ঘণ্টার পরে কমে গিয়েছিল (চিত্র 2)।

চিত্র 2. 80 ug dm-3 H2O2 দিয়ে চিকিত্সার পরে বিভিন্ন সময়ে CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B), এবং Cs4CL1 (C) এর আপেক্ষিক অভিব্যক্তি। অভিব্যক্তি একটি নিয়ন্ত্রণ স্বাভাবিক করা হয়েছে; (জল দিয়ে চিকিত্সা)। মানে প্লাস - তিনটি জৈবিক পুনরাবৃত্তির SD; * - পি < 0.05,="" **="" -="" পি=""><>

আলোচনা

হাইড্রোজেন পারক্সাইড একটি সুপরিচিত উদ্ভিদ ইলিসিটর যা উদ্ভিদের উপর বিভিন্ন প্রভাব দেখায়। ROS-এর মতো, এটি সুপারঅক্সাইড ডিসমুটেজ, ক্যাটালেস, পারক্সিডেস ইত্যাদির সমন্বয়ে গঠিত ROS স্ক্যাভেঞ্জিং সিস্টেমকে প্ররোচিত করতে পারে এবং এটি লবণ, অসমোটিক এবং ডিহাইড্রেশনের নিম্নধারার সংকেত হিসাবে কাজ করে।

চাপ (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014)। এটি পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল যে উদ্ভিদে H2O2 প্রজন্মের সাথে প্ররোচিত সেকেন্ডারি-মেটাবোলাইট জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচেসালসাসেল সংস্কৃতি. প্রত্যাশিত হিসাবে, আমাদের ফলাফল প্রকাশ করে যে PeGs(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে জৈবসংশ্লেষণসিস্তানচে সালসাকোষ সংস্কৃতি H2O2 চিকিত্সার পরে প্ররোচিত হয়েছিল (সারণী 1)। তিনটি প্রধান PeG-এর বিষয়বস্তু(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)H2O2 চিকিত্সার পরে বেড়েছে যা PeGs জৈব সংশ্লেষণে এর প্রধান ভূমিকা নির্দেশ করে। এসএসএইচ লাইব্রেরিতে সমৃদ্ধ জিনগুলি আরও পেজিগুলিতে এর প্রভাবের পরামর্শ দিয়েছে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে জৈব সংশ্লেষণ আনয়নসিস্তানচে সালসা.

অনেক পরিচিত H2O2-প্রতিক্রিয়াশীল জিন, যেমন ascorbate peroxidase (CISTH069, Karyotou and Donaldson 2005), h-quinone oxidoreductase (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Al.41}), এবং রোগ প্রতিরোধের প্রতিক্রিয়া জিন (Contig10, Nanda, et al. 2010), SSH লাইব্রেরিতে সমৃদ্ধ হয়েছিল (টেবিল 3, টেবিল 2 সাপ্লি।)। H2O2 চিকিত্সার পরে একটি প্ররোচিত অভিব্যক্তি সহ এই সাধারণ ROS প্রতিক্রিয়াশীল জিনগুলির মধ্যে কিছু RT-qPCR (চিত্র 1 এবং 2) দ্বারা আরও নিশ্চিত করা হয়েছিল যে এখানে একটি যোগ্য SSH লাইব্রেরি তৈরি করা হয়েছিল। দুটি PeG বায়োসিন্থেসিস পাথওয়ে জিন, CsC4H1 এবং Cs4CL1, এই লাইব্রেরিতেও পাওয়া গিয়েছিল এবং এই দুটি জিনের অভিব্যক্তি H2O2 চিকিত্সার দ্বারা সময়-নির্ভর পদ্ধতিতে প্ররোচিত হয়েছিল (চিত্র 2)। এটি পরামর্শ দেয় যে H2O2 চিকিত্সা পিজিগুলিকে প্ররোচিত করেছে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)PAL পাথওয়ে জিনগুলির নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে জেনেটিক স্তরে জৈব সংশ্লেষণ। যাইহোক, PAL এবং অন্যান্য নিম্নধারার PeGs বায়োসিন্থেসিস জিন (Wang et al. 2012) SSH লাইব্রেরিতে চিহ্নিত করা হয়নি; এটি হতে পারে কারণ লাইব্রেরিটি পর্যাপ্তভাবে ক্রমানুসারে করা হয়নি। CsC4H1 এবং Cs4CL1 প্ররোচিত অভিব্যক্তি এবং H2O2 চিকিত্সার পরে একটি বর্ধিত PeGs বায়োসিন্থেসিসের মধ্যে একটি সম্পর্ক আরও বিশ্লেষণের মাধ্যমে স্পষ্ট করা উচিত।

H2O2 চিকিত্সা দ্বারা প্ররোচিত PAL পাথওয়ে জিনগুলি ছাড়াও, SSH লাইব্রেরিতে দুটি WRKY ফ্যামিলি ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর (CsWRKY1, CsWRKY2) পাওয়া গেছে (সারণী 3 এবং টেবিল 2 সাপ্লি।), এবং একটি CsWRKY1 প্ররোচিত অভিব্যক্তি-আরটিপিসিআর দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল . এর অভিব্যক্তি দুটি PAL পাথওয়ে জিন, Cs4CL1 এবং CsC4H1 (চিত্র 2) এর অভিব্যক্তির আগে H2O2 চিকিত্সার জন্য প্রতিক্রিয়াশীল ছিল। পূর্ববর্তী গবেষণা থেকে, কিছু WRKY ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর এবং PAL পাথওয়ে জিনের সহ-অভিব্যক্তি ধানে পরিলক্ষিত হয়েছে (Gupta et al. 2012)। অধিকন্তু, PAL জিনের অভিব্যক্তি একটি OsWRKY03 ওভার-এক্সপ্রেশন মিউট্যান্টে আপ-নিয়ন্ত্রিত হয় (Liu et al. 2005)। উপরে উল্লিখিত দুটি WRKY ফ্যামিলি ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরও PeG-তে জড়িত থাকতে পারে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচেসালসা. মজার বিষয় হল, ডিহাইড্রেশন-সম্পর্কিত ESTs (CISTH067, CISTH064) SSH লাইব্রেরিতে পাওয়া গেছে, যা পরামর্শ দিতে পারে যে H2O2 চিকিত্সাটি ডিহাইড্রেশন প্রতিক্রিয়াশীল জিনের প্রকাশের সাথে সম্পর্কিত ছিলসিস্তানচেসালসাযেমনটি অন্যান্য উদ্ভিদে দেখা যায় (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013)। একটি জিবেরেলিন (GA) সিগন্যালিং-সম্পর্কিত জিন, জিবেরেলিন রিসেপ্টর gid1b-এর মতো (CISTH092), এসএসএইচ লাইব্রেরিতে চিহ্নিত করা হয়েছিল যা GA সিগন্যালিং এবং H2O2 চিকিত্সার সংযোগ বোঝায়।সিস্তানচেসালসা, যা বার্লিতেও রিপোর্ট করা হয়েছিল (Bahin et al. 2011)। যাইহোক, এই জিনগুলি PeG-এর সাথে সম্পর্কিত কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য আরও গবেষণা প্রয়োজন(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)জৈব সংশ্লেষণ উপরে উল্লিখিত জিনগুলি ছাড়া, এখানে নির্মিত SSH লাইব্রেরিটি BLAST হিট সহ বা ছাড়াই জিনগুলি উপস্থাপন করে। এটি C. সালসার উপর H2O2 প্রভাব সম্পর্কে আমাদের বোঝার উন্নতি করে এবং প্রথমে PeGs জৈব সংশ্লেষণে জড়িত এর জিনের তথ্য সরবরাহ করে।

উপসংহারে, আমরা পেজিগুলিতে H2O2 এর প্রভাব মূল্যায়ন করেছি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে আনয়নসিস্তানচেসালসাসেল সংস্কৃতি. SSH লাইব্রেরি H2O2 চিকিত্সার পরে নির্মিত হয়েছিল, এবং নির্বাচিত জিনের অভিব্যক্তি RT-qPCR দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। দুটি PeG বায়োসিন্থেসিস পাথওয়ে-সম্পর্কিত জিন এবং অন্যান্য H2O2-প্রতিক্রিয়াশীল জিন সনাক্ত করা হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি H2O2-প্রেরিত PeGs সম্পর্কে আমাদের বোঝার প্রসারিত করবে(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)মধ্যে জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচেসালসাআণবিক স্তরে, জিন ম্যানিপুলেশনের জন্য তথ্য প্রদান করেসিস্তানচেসালসাPeGs উন্নত করতে কোষ সংস্কৃতি(phenylethanoidগ্লাইকোসাইড)উত্পাদন

থেকে: 'সিস্তানচে সালসা কোষ সংস্কৃতিতে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড জৈব সংশ্লেষণে জড়িত হাইড্রোজেন পারক্সাইড প্রতিক্রিয়াশীল ESTগুলির সনাক্তকরণ'জে চেন এট আল।

--- বায়োলজিয়া প্লান্টারাম 59 (4): 695-700, 2015 জে. চেন এবং অন্যান্য। DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

তথ্যসূত্র

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি এবং হরমোন সংকেত পথের মধ্যে ক্রসস্টাল বার্লিতে শস্যের সুপ্ততা নিয়ন্ত্রণ করে। - উদ্ভিদ কোষ পরিবেশ। 34: 980-993, 2011।
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: হিট শক প্রোটিন (Hsp) দ্বারা উত্পন্ন প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি Hsp70 উৎপাদন এবং Hsp{{1}তে অবদান রাখে }প্যাথোজেনিক ভাইব্রিওসের বিরুদ্ধে আর্টেমিয়া ফ্রান্সিসকানায় মধ্যস্থতামূলক প্রতিরক্ষামূলক অনাক্রম্যতা। - দেব। Comp. ইমিউনল। 46: 470-479, 2014।
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H এর অভিব্যক্তি: HeLa কোষে কুইনোন অক্সিডোরেডাক্টেস 1  হাইড্রোজেন পারক্সাইড এবং বৃদ্ধি পর্যায়ের ভূমিকা। - জে. বায়োল। কেম। 276: 44379-44384, 2001।
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR এবং RT-qPCR এর প্রমিতকরণ। - জেনেট। ইঞ্জি. বায়োটেকনোল। সংবাদ 29: 40-43, 2009।
চেং, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:সিস্তানচেdeserticola সেল সাসপেনশন সংস্কৃতি:phenylethanoidগ্লাইকোসাইডজৈব সংশ্লেষণ এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ। - প্রক্রিয়া বায়োকেম। 40: 3119-3124, 2005।
চেং, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ এর উন্নতিphenylethanoidগ্লাইকোসাইডমধ্যে জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচেchitosan elicitor দ্বারা deserticola সেল সাসপেনশন কালচার। - জে. বায়োটেকনোল 121: 253-260, 2006।
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: অ্যাবসিসিক অ্যাসিড জলের চাপ দ্বারা প্ররোচিত চিনাবাদামে হাইড্রোজেন পারক্সাইড উৎপাদনের মধ্যস্থতা করে। - বিওল। উদ্ভিদ। 57: 555-558, 2013।
গুপ্ত, এসকে, রা,আই এ কে, কানওয়ার, এসএস, চাঁদ, ডি., সিং, এনকে, শর্মা, টিআর: একক কার্যকরী বিস্ফোরণ প্রতিরোধী জিন Pi54 চালের মধ্যে একটি জটিল প্রতিরক্ষা ব্যবস্থা সক্রিয় করে। - J. exp. বট. 63: 757-772, 2012।
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: থেকে ফেনাইল্যালানিন অ্যামোনিয়া-লাইজ জিনের আণবিক বৈশিষ্ট্যসিস্তানচেমরুভূমি - মোল। বায়োল Rep. 38: 3741-3750, 2011।
কর, আরকে: জলের চাপে উদ্ভিদের প্রতিক্রিয়া: প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির ভূমিকা। - উদ্ভিদ সংকেত আচরণ 6: 1741-1745, 2011।
ক্যারিওটু, কে., ডোনাল্ডসন, আরপি: অ্যাসকরবেট পারক্সিডেস, গ্লাইঅক্সিসোমাল ঝিল্লিতে হাইড্রোজেন পারক্সাইডের স্ক্যাভেঞ্জার। - অর্ক জ. বায়োকেম। বায়োফিস। 434: 248-257, 2005।
কোবায়াশি, এইচ., কারাসাওয়া, এইচ., মিয়াসে, টি., ফুকুশিমা, এস.: এর উপাদানগুলির উপর অধ্যয়নcistancheভেষজ হয়। 4. 2টি নতুন ফিনাইলপ্রোপ্যানয়েড গ্লাইকোসাইড, সিস্টানোসাইড-সি, এবং সিস্টানোসাইড-ডি-এর বিচ্ছিন্নতা এবং গঠন। - কেম। ফার্ম। ষাঁড়. 32: 3880-3885, 1984।

লিউ, সিজেড, চেং, এক্সওয়াই: এর বর্ধিতকরণphenylethanoidগ্লাইকোসাইডএর কোষ সংস্কৃতিতে জৈব সংশ্লেষণসিস্তানচেঅসমোটিক চাপ দ্বারা deserticola. - উদ্ভিদ কোষ প্রতিনিধি 27: 357-362, 2008।
লিউ, জেওয়াই, গুও, জেডজি, জেং, জেডএল: উন্নত সঞ্চয়phenylethanoidগ্লাইকোসাইডএর সাসপেনশন সংস্কৃতির অগ্রদূত খাওয়ানোর দ্বারাসিস্তানচেসালসা. - বায়োকেম। ইঞ্জি. J. 33: 88-93, 2007।
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, একটি রাইস ট্রান্সক্রিপশনাল অ্যাক্টিভেটর যা OsNPR1 এর উজানে ডিফেন্স সিগন্যালিং পাথওয়েতে কাজ করে। - সেল রেস 15: 593-603, 2005।
মুরাশিগে, টি., স্কুগ, এফ.: তামাক টিস্যু কালচারের সাথে দ্রুত বৃদ্ধি এবং জৈবসারের জন্য একটি সংশোধিত মাধ্যম। - ফিজিওল। উদ্ভিদ। 15: 473-497, 1962।
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:ফেনাইলেথানয়েডগ্লাইকোসাইডএর ডালপালা থেকে বিরোধী প্রদাহজনক কার্যকলাপ সহসিস্তানচেতারিম মরুভূমিতে মরুভূমির চাষ। - Fitoterapia 89: 167-174, 2013।
নন্দা, একে, আন্দ্রিও, ই., মারিনো, ডি., পাওলি, এন., ডুন্যান্ড, সি.: উদ্ভিদ-অণুজীবের প্রাথমিক মিথস্ক্রিয়া চলাকালীন প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি। - J. Integr. উদ্ভিদ Biol. 52: 195-204, 2010।
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: এর বর্ধিত উৎপাদনphenylethanoid গ্লাইকোসাইডএর কোষ সংস্কৃতির জন্য অগ্রদূত খাওয়ানোর দ্বারাসিস্তানচেমরুভূমি - প্রক্রিয়া বায়োকেম। 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: উন্নত উৎপাদনphenylethanoidগ্লাইকোসাইডদ্বারাসিস্তানচেসিফটার রাইজার সহ একটি অভ্যন্তরীণ লুপ এয়ারলিফ্ট বায়োরিয়াক্টরে মরুভূমির কোষগুলিকে সংষ্কৃত করা হয়। - এনজাইম মাইক্রোবায়োল। প্রযুক্তি. 36: 982-988, 2005 খ.
সালসেডো-মোরালেস, জি., জিমেনেজ-অ্যাপারিসিও, এআর, ক্রুজ-সোসা, এফ., ট্রেজো-টাপিয়া, জি: ক্যাস্টিলেজা টেনুইফ্লোরার শিকড় থেকে ইন ভিট্রো হাস্টোরিয়ামের শারীরবৃত্তীয় এবং হিস্টোকেমিক্যাল বৈশিষ্ট্য। - বিওল। উদ্ভিদ। 58: 164-168, 2014।
সাথিয়ারাজ, জি., শ্রীনিবাসন, এস., কিম, ওয়াইজে, লি, ওআর, পারভিন, এস., বালুসামি, এসআর, খোরোলরাগচা, এ., ইয়াং, ডিসি: হাইড্রোজেন পারক্সাইডের আনুষঙ্গিকতা প্রতিরক্ষা-সম্পর্কিত প্রোটিন সক্রিয় করে লবণ সহনশীলতা বাড়ায় প্যানাক্স জিনসেং সিএ মেয়ার। - মোল। বায়োল Rep. 41: 3761-3771, 2014।
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, বি.: লবণের চাপের প্রাথমিক প্রতিক্রিয়ার সময় লবণাক্ত ERF1 প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি-নির্ভর সংকেত নিয়ন্ত্রণ করে
ভাতে - উদ্ভিদ কোষ 25: 2115-2131, 2013।
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:সিস্তানচেdeserticola YC Ma, "মরুভূমি জিনসেং": একটি পর্যালোচনা। - আমের। জে চিন। মেড. 40: 1123-1141, 2012।
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS লবণের চাপে ধানের পাতার খাপে হাইড্রোজেন পারক্সাইড জমা করার প্যাটার্ন। - বিওল। উদ্ভিদ। 50: 469-472, 2006।
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 খরার চাপের প্রতিক্রিয়া এবং নীল আলো-প্ররোচিত স্টমাটাল খোলার নিয়ন্ত্রণ করে অ্যারাবিডোপসিসে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির সঞ্চয়কে বাধা দেয়। - প্ল্যান্ট ফিজিওল। 162: 1030-1041, 2013।