সিস্টানচে টিউবুলোসা থেকে বিশুদ্ধ প্রাকৃতিক জৈব সক্রিয় যৌগ ইচিনাকোসাইডের সাধারণ লিভার মেটাবোলাইট সনাক্তকরণ Ⅱ

বিমূর্ত:বিপাক সনাক্তকরণ, প্রাথমিক পর্যায়ে, যৌগের জন্য, আবিষ্কার মূল্যায়ন করা প্রয়োজনওষুধের নিরাপত্তা এবং দক্ষতার ফার্মাসিউটিক্যাল উন্নতির জন্য জ্ঞান। এমনকি ওষুধ হলেওবাজারে ছাড়া হয়েছে, সনাক্তকরণ এবং বিপাক ক্রমাগত মূল্যায়ন হয়বিপণন-পরবর্তী প্রত্যাহারের ঝুঁকি এড়াতে প্রয়োজনীয়। গ্লাইকোসাইড, একটি ঔষধিcistanche, বিস্তৃতভাবে নিউট্রাসিউটিক্যাল সুবিধার নথিভুক্ত করেছে, সহঅ্যান্টি-অক্সিডেন্ট,বিরোধী টিউমার, বিরোধী-বার্ধক্য, হাইপোলিপিডেমিc, এবংগ্যাস্ট্রিক মিউকোসাল সুরক্ষা প্রভাব. সম্প্রতি,echinacosideক রিপোর্ট করা হয়েছেকার্যকরী খাদ্য বিকাশের জন্য HE এর মাইসেলিয়ামে প্রধান প্রাকৃতিক জৈব সক্রিয় যৌগ হিসাবে।স্নায়বিক গবেষণায়, এর ব্যবহারechinacosideএকটি সমৃদ্ধ HE মাইসেলিয়াম তার প্রদর্শন করেউল্লেখযোগ্য নিউট্রাসিউটিক্যাল প্রভাবআলঝেইমার রোগ, পারকিনসন রোগ, এবংইস্চেমিক স্ট্রোক.

Cistanche এ Echinacoside ফাংশন সম্পর্কে আরও তথ্য জানতে এখানে ক্লিক করুন

জন্যপ্রথমবার, আমরা এর বিপাকীয় প্রক্রিয়া অন্বেষণ করেছিechinacosideএকটি অণু এবং তার বিপাক সনাক্তইঁদুর এবং মানুষের লিভার S9 ভগ্নাংশ থেকে। একটি তরল ক্রোমাটোগ্রাফি/ট্রিপল কোয়াড্রপোল ভর ব্যবহার করেপরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য স্পেকট্রোমিটার, আমরা লক্ষ্য করেছি যে 75.44 শতাংশ ইচিনাকোসাইড। A বিপাক হয়েছিলইঁদুরের মধ্যে 60 মিনিটের মধ্যে এবং মানুষের S9-তে 120 মিনিটের মধ্যে ফ্রান্সাইন A-এর 32.34 শতাংশ বিপাক হয়েছিল। ব্যবহারআল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি/কোয়াড্রপোল টাইম-অফ-ফ্লাইট ভর স্পেকট্রোমেট্রি (UPLCQTOF/MS) ফ্রান্সাইন এ-এর বিপাক সনাক্ত করতে, পাঁচটি সাধারণ বিপাক সনাক্ত করা হয়েছিল,এবং তাদের সম্ভাব্য কাঠামো মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ইচিনাকোসাইডের বিপাকীয় প্রক্রিয়া বোঝাএবং এর মেটাবোলাইট প্রোফাইল ডাটাবেস প্রতিষ্ঠা করা নিউট্রাসিউটিক্যাল অ্যাপ্লিকেশন প্রচারে সহায়তা করবে এবংভবিষ্যতে সম্পর্কিত বায়োমার্কারের আবিষ্কার।

1। পরিচিতি

লিভারকে শরীরের দ্বিতীয় বৃহত্তম অঙ্গ হিসেবে বিবেচনা করা হয়।1]। খাবার এবং ওষুধের পরেমৌখিক গহ্বরের মাধ্যমে গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্টে প্রবেশ করুন, গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল পিলি শোষণ করবেপরিপাক পুষ্টি এবং ওষুধ। পোর্টাল শিরা সিস্টেম সংগৃহীত রক্ত ​​​​প্রবাহ গ্রহণ করবেগ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্ট দ্বারা এবং পুষ্টির প্রাথমিক চিকিত্সার জন্য লিভারে প্রবেশ করুন,বিপাক এবং ওষুধের অণু [2,3]। মেটাবলিজমকে প্রায়শই ক-এর দুটি পর্যায়ে বিভক্ত করা হয়জৈব রাসায়নিক প্রতিক্রিয়া। প্রথম ধাপে এনজাইম দ্বারা জারণ, হ্রাস বা হাইড্রোলাইসিস জড়িতশরীর. দ্বিতীয় পর্যায় ছোট অন্তঃসত্ত্বা পদার্থের সাথে সংমিশ্রণে জড়িত, বাঁকএগুলি অত্যন্ত দ্রবণীয় বিপাকীয় পদার্থে পরিণত হয়, যা বিপাককে সাইনুতে রপ্তানি করতে সক্ষম করেরেনাল ক্লিয়ারেন্সের জন্য সোডাল সঞ্চালন, বা পিত্তে, যা পরে শরীর থেকে নির্গত হয়প্রস্রাব বা মল মাধ্যমে [4–6]। ওষুধ আবিষ্কারের প্রাথমিক পর্যায়ে মেটাবোলাইট সনাক্তকরণফার্মাসিউটিক্যাল সম্পত্তি, নিরাপত্তা, এবং উন্নত করার জন্য জ্ঞান মূল্যায়ন করা প্রয়োজনবায়োঅ্যাকটিভ অণুর কার্যকারিতা। বিপাক এবং প্রতিক্রিয়াশীল মধ্যবর্তী সনাক্তকরণএড়াতে তদন্তমূলক যৌগগুলিতে কাঠামোগত পরিবর্তনের প্রয়োজনীয়তার পরামর্শ দেয়পরবর্তী বিষাক্ত পরিণতি। ওষুধ বাজারে থাকলেও শনাক্তকরণতাদের বিপণন পরবর্তী ঝুঁকি এড়াতে বিপাক ও মূল্যায়ন প্রয়োজনউত্তোলন [7,8]। অতএব,ভিট্রোতে, S9 ভগ্নাংশ বিশ্লেষণ বিভিন্ন সুবিধা প্রদান করেসময় গ্রাসকারী তুলনায়ভিভোতেঅধ্যয়ন: (1) তারা উচ্চ থ্রুপুটের জন্য উপযুক্তস্ক্রীনিং এবং অটোমেশন;(2) ব্যবহার করেS9 ভগ্নাংশ বৃহৎ পরিমাণের পরীক্ষার জন্য অনুমতি দেয়অল্প সময়ের মধ্যে ওষুধ আবিষ্কারের জন্য যৌগ; (৩) পশুর ব্যবহার কমাতে সাহায্য করে9]. 

ইচিনাকোসাইড একটি ভোজ্য cistanche যে পাহাড়ী এলাকায় বসবাস করেএশিয়ার উত্তর-পূর্ব অঞ্চলগুলি [10], ইউরোপ এবং উত্তর আমেরিকা [11]। তিনি এর অন্তর্গতব্যাসিডিওমাইকোটা (ফাইলাম), অ্যাগারিকোমাইসেটিস (শ্রেণি), রুসুলেস (অর্ডার), হেরিসিয়াসি (পরিবার),এবং হেরিকিয়াম (জেনাস)। বিস্তৃত পরিসরের উপকারী প্রদর্শনের জন্য HE নথিভুক্ত করা হয়েছেঅ্যান্টি-অক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-টিউমার, অ্যান্টি-এজিং, হাইপোলিপিডেমিক এবং গ্যাস্ট্রিক মিউকোসাল সহ বৈশিষ্ট্যগুলিসুরক্ষা প্রভাব [12–14]। 1994 সালে, কাওয়াগিশি এট আল। ডিটারপেনয়েড আবিষ্কার করেনechinacosideA, B, এবং C, HE এর মাইসেলিয়ামে, স্টেলেটের উৎপাদনকে উন্নীত করতে পারেইঁদুরের মস্তিষ্কে সেল লাইন এবং স্নায়ু বৃদ্ধির ফ্যাক্টর (এনজিএফ) সংশ্লেষণের উদ্দীপনা [15]. echinacosideA নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব প্রদান করতে পারে এবং এর বিরুদ্ধে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হ্রাস করতে পারেস্ট্রোক [16], আলঝেইমার রোগ [17], পারকিনসন রোগ [18], ইস্কেমিক স্ট্রোক, এবং বিষণ্নতা ভিভোতে[19,20]। অধিকন্তু, ইচিনাকোসাইড এ রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করতে পারেনিউরো স্বাস্থ্যের উন্নতির জন্য একটি কার্যকরী খাদ্য হিসাবে HE মাইসেলিয়ার বিকাশকে সমর্থন করার জন্য ইঁদুর [21]। এই ভোজ্য সিস্টানচে মাইসেলিয়াম গবেষকদের কাছে একটি গরম সমস্যা হয়ে উঠেছেকেন্দ্রীয় এবং পেরিফেরাল স্নায়ুর বিকাশে এর গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা বোঝার চেষ্টা করা, পার্থক্য, বৃদ্ধি, এবং পুনর্জন্ম [22]। সাম্প্রতিক গবেষণাও দেখিয়েছেযে echinacoside A সমৃদ্ধ HE এর আল্জ্হেইমার এবং পারকিনের চিকিৎসায় সম্ভাব্য সুবিধা রয়েছেছেলের রোগ [23–25]। যাইহোক, কোন গবেষণায় ইচিনাকোসাইড এ এর ​​সম্ভাব্য বিপাক নিয়ে আলোচনা করা হয়নিবায়োমার্কার যা এই নিউট্রাসিউটিক্যাল প্রভাবে অবদান রাখতে পারে।

এই গবেষণায়,echinacosideইচিনাকোসাইড A সমৃদ্ধ HE থেকে একটি যৌগ শুদ্ধ করা হয়েছিলমাইসেলিয়াম এবং দুটি ভিন্ন লিভার S9 ভগ্নাংশ ব্যবহার করে বিপাক করা হয়েছিল: ইঁদুর এবং মানুষ। ব্যবহারকোয়ানের জন্য লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি/ট্রিপল কোয়াড্রপোল ভর স্পেকট্রোমিটার (HPLC-QQQ/MS)ইচিনাকোসাইড এ, এবং আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি/কোয়াড্রপোল-এর টাইটেটিভ বিশ্লেষণইচিনাকোসাইডের বিপাক শনাক্ত করতে টাইম-অফ-ফ্লাইট ভর স্পেকট্রোমেট্রি (UPLC-QTOF/MS)প্রতিটি সময় বিন্দুতে A. আমরা ইচিনাকোসাইড এ-এর বিপাকীয় হার বুঝতে এবং প্রতিষ্ঠা করার লক্ষ্য রাখিএর মেটাবোলাইট প্রোফাইল ডাটাবেস নিউট্রাসিউটিক্যাল সাপ্লিমেন্টের প্রয়োগকে উন্নীত করতে সাহায্য করেএবং ভবিষ্যতে সম্ভাব্য ওষুধের গবেষণা।

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1। উপাদান এবং বিকারক

HE স্ট্রেন (BCRC 35669) বায়োরিসোর্সেস সংগ্রহ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবংখাদ্য শিল্প গবেষণা ও উন্নয়ন ইনস্টিটিউটের গবেষণা কেন্দ্র, সিনচু, তাইওয়ান।আলু ডেক্সট্রোজে স্থানান্তরিত হওয়ার আগে স্ট্রেনটি প্রথম বয়সের তির্যক অবস্থায় জন্মানো হয়েছিল26 এ আগর প্লেট◦C 15 দিনের জন্য। 15 তম দিনে, HE সংস্কৃতিগুলি 1.3 L-এ স্থানান্তরিত হয়েছিলতরল মাঝারি (2 এল ফ্লাস্কে)। তরল সংস্কৃতি 120 রেভ/মিনিট 25 এ কাঁপানো হয়েছিল◦জন্য গ5 দিন. এরপর, তারা 500 L, 20-টন ফার্মেন্টারে 5 দিন এবং 12 দিনের জন্য মাপানো হয়েছিল,যথাক্রমে সংস্কৃতির মাধ্যমটি pH 4.5 এ সমন্বয় করা হয় এবং এতে 4.5 শতাংশ গ্লুকোজ থাকে, 0.5 শতাংশসয়াবিন গুঁড়া, {{0}}.25 শতাংশ খামির নির্যাস, 0.25 শতাংশ পেপটোন, এবং 0.05 শতাংশ MgSO4৷ অবশেষে, এইচ.ইমাইসেলিয়া 20-টন গাঁজন প্রক্রিয়ার শেষে কাটা হয়েছিল। এসব কাঁচামাললাইওফিলাইজড, পাউডারে গ্রাউন্ডেড এবং ডেসিকেটরে সংরক্ষণ করা হয়। তখন ইচিনাকোসাইড এ ছিলHE থেকে আহরিত এবং পূর্ববর্তী গবেষণা অনুযায়ী পরিমাপ করা হয়েছে [26]। মিথানল (এলসি-এমএসগ্রেড) Merck (Darmstadt, Germany) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল; অ্যাসিটোনিট্রিল (এলসি-এমএস গ্রেড), ফর্মিকঅ্যাসিড (এফএ, এলসি-এমএস গ্রেড, 98 শতাংশ বিশুদ্ধতা), এবং অ্যামোনিয়াম অ্যাসিটেট (98 শতাংশ বিশুদ্ধতা) প্রাপ্ত হয়েছিলহানিওয়েল থেকে (হানিওয়েল বার্ডিক এবং জ্যাকসন, মুস্কেগন, এমআই, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)। ইঁদুরের লিভার S9ভগ্নাংশটি মোলটক্স (বুন, এনসি, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। মানুষের যকৃতের S9 ভগ্নাংশ ছিলথার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক (রকফোর্ড, আইএল, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত।

2.2। ইঁদুর এবং মানুষের লিভার S9 ভগ্নাংশ

কিট সুপারিশ করতে. প্রস্তুত সমাধান 4 এ রাখা হয়েছিল◦সি ইচিনাকোসাইড এ পর্যন্তযৌগ (10µM) যোগ করা হয়েছে, তারপরে একটি 37 এ সক্রিয়করণ করা হয়েছে◦সি জল স্নান. যখনবিপাকীয় সময় তার টাইম পয়েন্টে পৌঁছেছিল, 150µসমাধানের L থেকে প্রত্যাহার করা হয়েছিলস্টক সমাধান এবং বরফ ঠান্ডা ACN দুই ভলিউম যোগ করে quenched. থেমে গেলসমাধানটি পরবর্তী বিপাক বিশ্লেষণের জন্য QTOF-এ স্থানান্তরিত হয়।

2.3। ইন্সট্রুমেন্টেশন এবং শর্তাবলী

HPLC-QQQ/MS বিশ্লেষণ একটি Agilent 1100 সিরিজ HPLC সিস্টেমে সম্পাদিত হয়েছিল (Agilent, Palo Alto, CA, USA) একটি API 3000 ট্রিপল কোয়াড্রপোল ভর স্পেকট্রোমিটার সহ(অ্যাপ্লাইড বায়োসিস্টেম, ওয়ারিংটন, ইউকে), একটি টার্বো-সহায়তা আয়ন স্প্রে (ESI) আয়নকরণ সহএকটি ইতিবাচক ionization মোডে উত্স. ক্রোমাটোগ্রাফিক বিচ্ছেদ একটি উপর পরিচালিত হয়Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 মিমি× 100 মিমি× 3.5 µমি)। কলাম তাপমাত্রা ছিল22 এ বজায় রাখা হয়েছে◦C. মোবাইল পর্বে জল থাকে 0.1 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিড(A) এবং মিথানল (B)। গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন ব্যবহার করা হয়েছিল, 70 শতাংশ বি থেকে শুরু করে, 100 শতাংশ পর্যন্ত বৃদ্ধি পেয়েছে5 মিনিটের মধ্যে B, 90 শতাংশ B সহ 3 মিনিট ধরে রাখা, 0.1 মিনিটের মধ্যে B থেকে 70 শতাংশ কমে যাওয়া, এবং2.9 মিনিটের জন্য 70 শতাংশ B-এ পুনরায় ভারসাম্য। 350 এর সহকর্মী হারµL/min প্রয়োগ করা হয়েছে, এবং একটি ভলিউম10 এরµএল ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।

প্লাস 4500 V এর আয়নাইজিং ভোল্টেজ দিয়ে সনাক্তকরণ করা হয়েছিল। আয়ন উত্স তাপমাত্রা350 এ সেট করা হয়েছিল◦C, কার্টেন গ্যাস হিসাবে অতি উচ্চ-বিশুদ্ধতা নাইট্রোজেন সহ (7 psi)। নেবুলাইজার গ্যাস ছিল8 psi। অন্যান্য ভর-নির্ভর পরামিতি, যেমন declustering সম্ভাব্য (DP), প্রবেশদ্বারসম্ভাব্য (EP), ফোকাসিং পটেনশিয়াল (FP), এবং প্রতিটি যৌগের জন্য সংঘর্ষ শক্তি (CE) ছিলস্ট্যান্ডার্ড সমাধান ব্যবহার করে ইতিবাচক মোডে নির্ধারিত। একাধিক প্রতিক্রিয়া পর্যবেক্ষণ(এমআরএম) নাইট্রোজেনকে সংঘর্ষের গ্যাস (2 পিএসআই) হিসাবে ব্যবহার করে এবং বাস করার সময় নিয়ে করা হয়েছিলপ্রতিটি ট্রানজিশনের জন্য 200 ms ইচিনাকোসাইড এ ট্রানজিশন পর্যবেক্ষণ করে সনাক্ত করা হয়েছিলm/z 443.200 → 301.200, 283.200। বিশ্লেষক 1.4.2 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (প্রযুক্তবায়োসিস্টেম, কনকর্ড, অন, কানাডা) এবং গ্রাফপ্যাড (প্রিজম 8৷{1}}৷{2}}।)৷

UPLC-QTOF/MS বিশ্লেষণ একটি Agilent 1290 Infinity II UPLC সিস্টেমে সম্পাদিত হয়েছিল(Agilent, Palo Alto, CA, USA), একটি Agilent 6546 কোয়াড্রপোল টাইম-অফ-ফ্লাইট ভর সহস্পেকট্রোমেট্রি (Agilent, Palo Alto, CA, USA)। ক্রোমাটোগ্রাফিক বিচ্ছেদ পরিচালিত হয়েছিলএকটি ফেনোমেনেক্স কাইনেটেক্সে® C18 LC কলাম (3 মিমি× 100 মিমি× 1.7 µমি)। কলামতাপমাত্রা 40 এ বজায় রাখা হয়েছিল◦C. মোবাইল ফেজ A-তে পানি থাকে0.1 শতাংশ (v/v) পজিটিভ মোডে ফরমিক অ্যাসিড, 0.1 শতাংশ (v/v) ফর্মিক অ্যাসিড, এবং 10 মিমি সিএইচ3COONH4 নেতিবাচক মোডে। মোবাইল ফেজ বি ছিল অ্যাসিটোনিট্রাইল। গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন ব্যবহার করা হয়েছিল, শুরু করে5 শতাংশ B সহ এবং 0.5 মিনিট ধরে ধরে, 5.5 মিনিটের মধ্যে 50 শতাংশ B-এ বৃদ্ধি, 100 শতাংশে বৃদ্ধি10 মিনিটের মধ্যে B, এবং 6 মিনিটের জন্য ধরে রাখুন। 400 এর সহকর্মী হারµL/min প্রয়োগ করা হয়েছিল, এবং a2 এর আয়তনµএল ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।

এজিলেন্ট 6546 কোয়াড্রপোল টাইম-অফ-ফ্লাইট ভর স্পেকট্রোমেট্রি একটি ইলেক দিয়ে সজ্জিত ছিলট্রস্প্রে আয়নাইজেশন (ইএসআই) উত্স। ডেটা অধিগ্রহণটি ম্যাস হান্টারের নিয়ন্ত্রণে ছিলওয়ার্কস্টেশন সফ্টওয়্যার। ধনাত্মক এবং ঋণাত্মক আয়নে সাধারণ অপারেটিং উত্স শর্তESI মোড নিম্নরূপ অপ্টিমাইজ করা হয়েছে: আয়ন স্প্রে ভোল্টেজ (ESIপ্লাস/ইএসআই−) ছিল4000 V/3000 V; গ্যাসের তাপমাত্রা ছিল 320◦গ; শুকানোর গ্যাসের সহকারীর হার ছিল 8 এল/মিনিট; নেবুলাইজার চাপ ছিল45 psi; খাপ গ্যাসের তাপমাত্রা ছিল 350◦গ; শেথ গ্যাস ফেলো রেট ছিল 12 এল/মিনিট; সংঘর্ষশক্তি ছিল 10, 20, 40 এবং 60 V। Agilent MassHunter ব্যবহার করে বিপাক শনাক্ত করা হয়েছিলবায়োট্রান্সফরমেশন সফ্টওয়্যার (সংস্করণ B.04।{1}}) (সান্তা ক্লারা, CA, USA)। ক্রোমাটোগ্রামএবং অভিভাবকের ভর স্পেকট্রা এবং চিহ্নিত বিপাকগুলি Agilent ব্যবহার করে বের করা হয়েছিলMassHunter গুণগত বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার (সংস্করণ B.05।{1}}) (সান্তা ক্লারা, CA, USA)।

আরো জন্য অনুরোধ:

ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp প্লাস 86 15292862950