উচ্চ লবণ গ্রহণ এবং বন্য ইঁদুরের প্রাকৃতিক অন্ত্রের মাইক্রোবায়োমের উপর এর প্রভাব

1. ভূমিকা

স্তন্যপায়ী প্রাণীদের অন্ত্র একটি জটিল এবং বৈচিত্র্যময় ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায় দ্বারা উপনিবেশিত হয়, যা হোস্টের সাথে একসাথে একটি সূক্ষ্ম সিম্বিওটিক সম্পর্ক তৈরি করে [1,2]। এই ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায়টি হোস্টের জন্য উপযোগী অনেক ফাংশন প্রয়োগ করে, যার মধ্যে বিপাকীয়, ইমিউনোমোডুলেটিং এবং ট্রফিক ফাংশন [3-7] এবং হোস্টের নির্দিষ্ট চাহিদা এবং শারীরবৃত্তির সাথে সামঞ্জস্য রেখে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার গঠন জীবনকালে পরিবর্তিত হতে পারে [1,8, 9]। অন্ত্রের স্বাস্থ্য-উন্নয়নকারী ব্যাকটেরিয়াগুলির অনেক উপকারী কার্যগুলি অ্যানেরোবিক গাঁজন-উত্পন্ন বিপাক দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয় [10-13] এবং ডিসবায়োটিক অবস্থাগুলি হোস্টের স্বাস্থ্যকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করতে পারে [2,11,14,15]। স্বাস্থ্যের উপর জীবনযাত্রার প্রভাবের জন্য ক্রমবর্ধমান উদ্বেগ অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা জড়িত এবং এর অনুবাদমূলক প্রভাব [16,17] এর প্রতি বৈজ্ঞানিক আগ্রহ বৃদ্ধি করেছে। প্রকৃতপক্ষে, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা বাহ্যিক (উদাহরণস্বরূপ, জীবনধারা, খাদ্য এবং চিকিৎসা) এবং অভ্যন্তরীণ (যেমন, হোস্ট জেনেটিক্স, ইমিউন এবং বিপাকীয় প্রবিধান) কারণগুলি [8,18-20] উভয়ের দ্বারাই তৈরি হয়। এটি সাধারণত স্বীকৃত যে বহিরাগত উপাদানগুলি প্রভাবশালী প্রভাব ফেলতে পারে, খাদ্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা গঠন এবং ফাংশন [1,2,21] প্রভাবিত করার প্রধান অবদানকারী কারণগুলির মধ্যে একটি। পশ্চিমা খাদ্যতালিকাগত উপাদান, যেমন উচ্চ লবণ গ্রহণ, প্রতিরোধ ব্যবস্থাকে প্রভাবিত করে এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং রোগ [18,22-37] পরিবর্তন করে হোস্ট হোমিওস্ট্যাসিসকে আঘাত করতে পরিচিত। মুরিন অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাতে, একটি উচ্চ-লবণ খাদ্য (এইচএসডি) স্বাস্থ্য-উন্নয়নকারী ব্যাকটেরিয়া হ্রাসের সাথে জড়িত যা শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিড (এসসিএফএ) যেমন ল্যাকটোব্যাসিলাস এসপিপি, বিফিডোব্যাকটেরিয়াম, ব্লাউটিয়া এবং ফেকালিবাকুলাম [২৮, 29,38-41], আকারম্যানসিয়ার প্রাচুর্য বৃদ্ধির পাশাপাশি, আরেকটি সুবিধাবাদী এসসিএফএ-প্রযোজক যা বিভিন্ন মডেল সিস্টেমে হোস্ট অনাক্রম্যতা এবং রোগকে প্রভাবিত করতে দেখা গেছে [42,43]। মুরিন পশুর মডেলগুলি প্রায়শই অধ্যয়ন করতে ব্যবহৃত হয় যে কীভাবে খাদ্যতালিকাগত কারণগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা, ইমিউন সিস্টেম এবং রোগকে আকার দিতে পারে [২৯,৪৪-৪৬]। যদিও প্রচলিত ল্যাবরেটরি মাইস (সিএলএম) ব্যবহার এখনও অনেক গবেষণার জন্য একটি বৈধ বিকল্প, এটি কখনও কখনও অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা-কেন্দ্রিক অ্যাপ্লিকেশনগুলি [47-49] সঠিকভাবে অনুবাদ করতে ব্যর্থ হয়। উদাহরণস্বরূপ, প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগ (IBD) এবং স্থূলতার মুরিন মডেলগুলিতে ইমিউনোলজিকাল এবং বিপাকবিদ্যা গবেষণা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা অধ্যয়নের অনুবাদমূলক ফলাফলগুলি খারাপভাবে ভবিষ্যদ্বাণী করতে দেখানো হয়েছিল [50]। এটি এই মডেল সিস্টেমের অনেক অন্তর্নিহিত পার্থক্যের কারণে হতে পারে, যেমন বিভিন্ন অন্ত্রের শারীরস্থান, জেনেটিক্স এবং ফিজিওলজি [16,50]। যাইহোক, মাইক্রোবায়োটা-ইমিউন মিথস্ক্রিয়া অধ্যয়নের জন্য সিএলএম ব্যবহার করার আরেকটি সমস্যা হল সিএলএম-এ অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া গঠনের গৃহপালন, যা বন্য ইঁদুরের তুলনায় সিএলএম অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার জটিলতা এবং স্থিতিস্থাপকতা হ্রাসে প্রতিফলিত হয় [51]। স্যানিটাইজড এবং নিয়ন্ত্রিত পরিবেশের প্রয়োজনীয়তা সম্ভাব্য প্যাথোজেন এবং পরজীবীগুলির উপস্থিতি হ্রাসের সম্মুখীন হয়, যা ফলস্বরূপ বন্য ইঁদুর [51-53] এর তুলনায় CLM-এ একটি কম "শিক্ষিত" ইমিউন সিস্টেমের দিকে পরিচালিত করে বলে বিশ্বাস করা হয়। এই সমস্যাটি মোকাবেলা করার জন্য, ইমিউনোলজিক্যাল-গাট মাইক্রোবায়োটা অধ্যয়নের অনুবাদমূলক সমস্যাটি কাটিয়ে উঠতে, বন্য-উত্পন্ন অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা পেতে বন্য ইঁদুরে C57BL/6 ইঁদুর থেকে প্রাপ্ত ভ্রূণ স্থানান্তর দ্বারা বন্য মুরিন মডেলটি তৈরি করা হয়েছিল [54]। এই মাউস মডেলের সাথে জড়িত সাম্প্রতিক গবেষণাগুলি CLM [54,55] এর তুলনায় পরীক্ষামূলক ইমিউনোথেরাপির অনুবাদমূলক মূল্যের পূর্বাভাস দেওয়ার ক্ষেত্রে উচ্চতর ফলাফল দেখিয়েছে। অধিকন্তু, বন্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা CLM-এর তুলনায় অ্যান্টিবায়োটিক চিকিত্সা এবং উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্যের জন্য আরও প্রতিরোধী এবং স্থিতিস্থাপক ছিল, মানুষের আরও জটিল পরিস্থিতির সাথে তুলনীয় [54,55]। যাইহোক, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা, ইমিউন সিস্টেম এবং CLM-তে বিভিন্ন রোগের মডেলগুলিতে HSD-এর প্রতিষ্ঠিত প্রভাব থাকা সত্ত্বেও, প্রাকৃতিক, বন্য থেকে প্রাপ্ত অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার উপর উচ্চ-লবণ গ্রহণের প্রভাব অজানা। এই গবেষণায়, আমরা বন্য ইঁদুরের তুলনায় বিভিন্ন অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া ইকোসিস্টেম রচনা এবং CLM এর ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশনে HSD-এর প্রভাব মূল্যায়ন করেছি।

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1। প্রাণী এবং খাদ্য

বন্য-টাইপ C57BL/6 ইঁদুর (7-8 সপ্তাহ বয়সী মহিলা, n=20) চার্লস নদী থেকে কেনা হয়েছিল এবং স্ট্যান্ডার্ড অবস্থার অধীনে হ্যাসেল্ট বিশ্ববিদ্যালয়ের পশু সুবিধায় রাখা হয়েছিল। বন্য ইঁদুর (C57BL/6 জেনেটিক ব্যাকগ্রাউন্ড, পুরুষ n=12 এবং মহিলা n=11) [54] স্ট্যান্ডার্ড অবস্থার অধীনে UHasselt-এর প্রাণী সুবিধায় রাখা হয়েছিল। হ্যাসেল্ট ইউনিভার্সিটির (ID201618A4V1, ID202235) এথিক্যাল কমিটি অন অ্যানিম্যাল এক্সপেরিমেন্টস (ECAE) দ্বারা পশু অধ্যয়ন অনুমোদিত হয়েছিল। 12:12 ঘন্টা আলো/অন্ধকার আলো চক্রের সাথে তাপমাত্রা-নিয়ন্ত্রিত ঘরে (21-23 ◦C) ইঁদুরগুলিকে (4টি ইঁদুর/খাঁচা) রাখা হয়েছিল। নিম্নলিখিত বিশুদ্ধ খাবারগুলি Ssniff (Soest, জার্মানি) থেকে কেনা হয়েছে: 0.5% NaCl/নিয়ন্ত্রণ খাদ্য (E15430-04), এবং 4% NaCl/HSD (E15431-34)৷ এইচএসডি-র জন্য, পশুদের পানীয় জলে E15431-34 ছাড়াও 1% NaCl খাওয়ানো হয়েছিল, যেমনটি [২৮] এ বর্ণিত হয়েছে। CLM ইঁদুরগুলি কন্ট্রোল গ্রুপ (n=10) এবং HSD (n=10) এর মধ্যে সমানভাবে বিতরণ করা হয়েছিল। বন্য ইঁদুরের জন্য, পুরুষ এবং মহিলা ব্যক্তিদেরও সমানভাবে নিয়ন্ত্রণ এবং এইচএসডি খাদ্যতালিকায় বিতরণ করা হয়েছিল (নিয়ন্ত্রণের জন্য 6 পুরুষ, এইচএসডির জন্য 6 পুরুষ, নিয়ন্ত্রণের জন্য 5 মহিলা এবং এইচএসডির জন্য 6 মহিলা)।

cistanche উদ্ভিদ-বর্ধমান প্রতিরোধ ব্যবস্থা

2.2। ডিএনএ নিষ্কাশন

কিউআইএম্প ফাস্ট ডিএনএ স্টুল মিনি কিট (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) এর একটি পরিবর্তিত প্রোটোকল ব্যবহার করে [২৮] বর্ণনা অনুসারে মাইক্রোবিয়াল ডিএনএ নিষ্কাশন করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, একটি 2-mL Eppendorf-এ মল ছুরি যোগ করা হয়েছিল যাতে রয়েছে 0.5 মিলিমিটার গ্লাস পুঁতি এবং 1.5 মিলি লিসিস বাফার (ASL) (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি)। গুটিকা-পিটান পেলেটগুলির যান্ত্রিক একজাতকরণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সম্পূর্ণ নিষ্কাশনটি ক্ষুদ্র পরিবর্তনের সাথে প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল (প্রোটিনেস কে ইনকিউবেশন সময়কে 70 ◦C তাপমাত্রায় 2 ঘন্টা পর্যন্ত দীর্ঘায়িত করা)। DNA ঘনত্ব একটি NanoDrop ND-1000 স্পেকট্রোফটোমিটার (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA) ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং 16S rRNA জিন পরিবর্ধনের আগে −20 ◦C এ সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

2.3। 16S rRNA জিন পরিবর্ধন এবং সিকোয়েন্সিং

16S rRNA জিন সিকোয়েন্স V4 অঞ্চলের (F515/R806) জন্য নির্দিষ্ট একটি প্রাইমার ব্যবহার করে প্রশস্ত করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [56]। সংক্ষেপে, 98 ◦C তাপমাত্রায় 30 সেকেন্ডের জন্য PCR প্রতিক্রিয়া (30 µL) (KAPA HiFi HotStart ReadyMix, Roche, Basel, CH, USA) প্রতি 25 ng DNA ব্যবহার করা হয়েছিল, তারপরে 25টি চক্র (98 ◦C এ 10 s) C, 55 ◦C তাপমাত্রায় 20 s এবং 72 ◦C তাপমাত্রায় 20 s)। প্রতিক্রিয়াগুলি ত্রি প্রতি সঞ্চালিত হয়েছিল, প্রতি নমুনায় পুল করা হয়েছিল এবং একটি চৌম্বকীয় গুটিকা-ভিত্তিক ক্লিন-আপ সিস্টেম (এজেনকোর্ট এএমপিউর এক্সপি, বেকম্যান কুল্টার, ব্রিয়া, সিএ, ইউএসএ) দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। নেক্সটেরা প্রযুক্তি (Nextera XT Index Kit, Illumina, San Diego, CA, USA) ব্যবহার করে ইনডেক্স করা লাইব্রেরি পেতে একটি সীমিত-সাইকেল PCR দ্বারা লাইব্রেরি প্রস্তুতি সম্পন্ন করা হয়েছিল, তারপরে একটি দ্বিতীয় AMPure XP ম্যাগনেটিক বিডস ক্লিন-আপ ধাপ। সূচীকৃত নমুনাগুলি তারপর 4nM এর একই ঘনত্বে স্বাভাবিক করা হয়েছিল, পুল করা হয়েছিল এবং কোম্পানির প্রোটোকল অনুসারে 2 × 300 bp পেয়ারড-এন্ড প্রোটোকল সহ একটি ইলুমিনা MiSeq প্ল্যাটফর্ম PE300-এ সিকোয়েন্স করা হয়েছিল (Illumina, Inc., San Diego, CA, USA)।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4। 16S rRNA জিন সিকোয়েন্সিং ডেটার প্রক্রিয়াকরণ এবং পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ

একটি QIIME 2 [57] পাইপলাইন ব্যবহার করে কাঁচা ক্রম প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। দৈর্ঘ্য এবং গুণমান ফিল্টারিংয়ের পরে (ডিফল্ট প্যারামিটার), রিডগুলি ফিল্টার করা হয়েছিল এবং DADA2 ব্যবহার করে অপারেশনাল ট্যাক্সোনমিক ইউনিট (OTUs) এ বরাদ্দ করা হয়েছিল [58]। ট্যাক্সোনমিক অ্যাসাইনমেন্ট VSEARCH অ্যালগরিদম (https://github.com/torognes/vsearch; 9 নভেম্বর 2022) এবং সিলভা ডাটাবেস v128 (https://www.arb-silva.de) দ্বারা সম্পাদিত হয়েছিল / 9 নভেম্বর 2{{40}22) এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে। ASV টেবিলটি তখন 6.147 গভীরতায় বিরলতা দ্বারা স্বাভাবিক করা হয়েছিল যাতে প্রতিটি নমুনা বিরল বক্ররেখার শেষে মালভূমিতে পৌঁছে যায়। আলফা-বৈচিত্র্য দুটি ভিন্ন মেট্রিক্স ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল: OTUs সমৃদ্ধি (পর্যবেক্ষিত), Chao1, শ্যানন, সিম্পসন, ইনভার্স সিম্পসন (InvSimpson) পরিবেশগত সূচক। বিটা-বৈচিত্র্যের জন্য, Bray−Curtis অসমতা, জ্যাকার্ডের সাদৃশ্য, এবং ওয়েটেড এবং আনওয়েটেড ইউনিফ্র্যাক মেট্রিক্স [59] গণনা করা হয়েছিল এবং নমুনার মধ্যে প্রকৃত দূরত্ব কল্পনা করার জন্য প্রিন্সিপল কোঅর্ডিনেট অ্যানালাইসিস (PcoA) দ্বারা প্লট করা হয়েছিল। OTU গণনা সারণীকে স্বাভাবিক করার জন্য, প্রতি নমুনা 100 বার 6305 সিকোয়েন্সের গভীরতায় বিরলকরণ করা হয়েছিল। OTU শ্রেণীবিন্যাস অ্যাসাইনমেন্ট থেকে প্রাপ্ত আউটপুট, একটি শ্রেণীবিন্যাস সারণী হিসাবে, শ্রেণীবিন্যাস স্তরের L2 (ফাইলাম), L5 (পরিবার), এবং L6 (জেনাস) এর জন্য সাধারনকৃত OTU টেবিলকে সারণীতে ভেঙে ফেলার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। R (https://www.R-project.org/; 25 নভেম্বর 2022; সংস্করণ 4.2.0) ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। R প্যাকেজ "ভেগান" (সংস্করণ 2৷{28}}) [60] পিসিওএ বা প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ (পিসিএ) দ্বারা গোষ্ঠীর গঠনগত পার্থক্য তুলনা করতে বিটা-বৈচিত্র্য মেট্রিক্স তৈরি করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্যাকেজ এবং ডেটা বিচ্ছেদ ছদ্ম-এফ অনুপাত ("ভেগান"-এ "অ্যাডোনিস" ফাংশন) সহ স্থানান্তর পরীক্ষা দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। গোষ্ঠীগুলির মধ্যে বিটা বৈচিত্র্যের পরিপ্রেক্ষিতে বিচ্ছেদ দূরত্ব ম্যাট্রিসিস ব্যবহার করে বৈচিত্র্যের পারমুটেশনাল মাল্টিভেরিয়েট বিশ্লেষণ দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল (PERMANOVA, "ভেগান"-এ ফাংশন "অ্যাডোনিস"), যখন আন্তঃ-গোষ্ঠী বিচ্ছুরণের জন্য পার্থক্যগুলি গোষ্ঠী বিচ্ছুরণ পরীক্ষা (PERMDISP) দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। , ফাংশন "বেটাডিস্পার" ইন "ভেগান")। অন্তত 4টি নমুনায় যে ট্যাক্সা উপস্থিত ছিল না তা বিশ্লেষণ থেকে বাদ দেওয়া হয়েছিল। ট্যাক্সা আপেক্ষিক প্রাচুর্যের পরিপ্রেক্ষিতে পার্থক্যগুলি প্রথমে 4 টি গোষ্ঠীর মধ্যে প্রাথমিক ক্রুসকাল-ওয়ালিস পরীক্ষার মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং তারপরে নিম্নলিখিত তুলনা জোড়াগুলির মধ্যে উইলকক্সন পরীক্ষার মাধ্যমে আরও মূল্যায়ন করা হয়েছিল: CLM কন্ট্রোল বনাম CLM HSD, wildling Control vs. wildling HSD, CLM কন্ট্রোল বনাম ওয়াইল্ডলিং কন্ট্রোল, সিএলএম এইচএসডি বনাম ওয়াইল্ডলিং এইচএসডি। ওয়াইল্ডলিং এবং সিএলএম-এর মধ্যে শ্রেণীবিন্যাসগত পার্থক্যের মূল্যায়নের জন্য, লিনিয়ার ডিসক্রিমিন্যান্ট অ্যানালাইসিস ইফেক্ট সাইজ (LEfSe: https://huttenhower.sph.harvard.edu/galaxy/; 25 নভেম্বর 2022-এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে) জিনাস স্তরে প্রধান বৈশিষ্ট্যগুলিকে আলাদা করতে ব্যবহার করা হয়েছিল [ 61]। LEfSe ফলাফলগুলিকে তখন বার গ্রাফ হিসাবে দেখানো হয়েছিল, একটি লিনিয়ার ডিসক্রিমিন্যান্ট অ্যানালাইসিস (LDA) স্কোর থ্রেশহোল্ড 1.0-এর চেয়ে বেশি। যখনই প্রয়োজন, একাধিক তুলনার p-মানগুলি বেঞ্জামিনি-হচবার্গ পদ্ধতি দ্বারা সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। একটি মিথ্যা আবিষ্কারের হার (FDR) 0.05 এর কম বা সমানকে পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল: * p 0.05 এর চেয়ে কম বা সমান; ** p 0.01 এর চেয়ে কম বা সমান; *** p 0.001 এর থেকে কম বা সমান। খাদ্যে বিভিন্ন NaCl সামগ্রীর মাইক্রোবায়োমের মধ্যে কার্যকরী পার্থক্যগুলি (0.5% এবং 4% NaCl খাদ্য সামগ্রী) PICRUST2 দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, একটি বায়োইনফরমেটিক্স সফ্টওয়্যার প্যাকেজ যা 16s rDNA জিন সিকোয়েন্সিং ডেটা (https://huttenhower.sph। harvard.edu/picrust/ 29 নভেম্বর 2022 এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে2 2.4.1) [62]। PICRUST2 পাইপলাইনটি DADA2 থেকে প্রতিনিধি সিকোয়েন্স এবং তাদের প্রাচুর্য সারণীতে স্ট্যান্ডার্ড প্যারামিটার ব্যবহার করে প্রয়োগ করা হয়েছিল (https://github.com/ picrust/picrust2/wiki/Full-pipeline-script; 29 নভেম্বর 2022 এ অ্যাক্সেস করা হয়েছে)। সম্পূর্ণ পাইপলাইন আউটপুট থেকে, কেইজিজি অর্থোলজি এবং মেটাসাইক পথের জন্য মেটাজেনমিক ভবিষ্যদ্বাণী টেবিল হিসাবে তৈরি করা হয়েছিল, সারি হিসাবে ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশন এবং কলাম হিসাবে নমুনা, এবং এইচএসডি শাসনে ওয়াইল্ডলিং এবং সিএলএম-এ অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ফাংশন তুলনা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। মাইক্রোবিয়াল সম্প্রদায়ের ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশনগুলি যেগুলি প্রথম (PC1), দ্বিতীয় (PC2) এবং তৃতীয় প্রধান উপাদান (PC3) দ্বারা ওয়াইল্ডলিং এবং CLM-এর মধ্যে তারতম্যের ক্ষেত্রে সবচেয়ে বেশি অবদান রেখেছিল সেগুলি দুটি মডেলের এইচএসডি ব্যবহারের উপর আরও বিশ্লেষণের জন্য নির্বাচিত হয়েছিল। ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশন প্রাচুর্য সহ ম্যাট্রিক্সকে তখন স্বাভাবিক করা হয়েছিল, কেন্দ্রীভূত লগ অনুপাত (CLR) মানগুলিতে রূপান্তরিত করা হয়েছিল এবং wildling এবং CLM উভয়ের জন্য log2mean অনুপাত গণনা করা হয়েছিল (HSD/নিয়ন্ত্রণ)৷ অবশেষে, log2mean অনুপাতগুলি উইলকক্সন-পরীক্ষা দ্বারা গোষ্ঠীগুলির মধ্যে তুলনা করা হয়েছিল এবং একটি কিউনিফর্ম প্লট হিসাবে প্লট করা হয়েছিল। Wilcoxon-test এবং Kruskal-Wallis টেস্ট ফাংশন এবং Holm বা Benjamini-Hochberg পদ্ধতি দ্বারা সামঞ্জস্য করা p মানগুলি ব্যবহার করে R সফ্টওয়্যারে গ্রুপগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলি পরিসংখ্যানগতভাবে তুলনা করা হয়েছিল।

3. ফলাফল

3.1। এইচএসডি সিএলএম এবং ওয়াইল্ডলিং গাট মাইক্রোবায়োটার বৈচিত্র্য এবং গঠনকে প্রভাবিত করে

ইঁদুরের মধ্যে বন্য থেকে প্রাপ্ত অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল ইকোসিস্টেমে এইচএসডি-র প্রভাব তদন্ত করতে, আমরা বন্য ইঁদুর এবং সিএলএমকে এইচএসডি বা নিয়ন্ত্রণ ডায়েট খাওয়াই। ইঁদুরগুলিকে দুই সপ্তাহের জন্য খাদ্যতালিকায় রাখা হয়েছিল এবং মল অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা রচনাটি পরবর্তীকালে 14 তম দিনে সংগৃহীত ফেকাল পেলেট থেকে 16S আরএনএ জিন সিকোয়েন্সিং দ্বারা তদন্ত করা হয়েছিল (চিত্র 1A)। পূর্ববর্তী প্রতিবেদনের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, সিএলএম এবং বন্য ইঁদুরের নিয়ন্ত্রণ এবং এইচএসডি গ্রুপের মধ্যে শরীরের ওজনের ক্ষেত্রে কোনও শক্তিশালী পার্থক্য সনাক্ত করা যায়নি [২৯]। বেসলাইনে দুটি মডেল CLM এবং বন্য ইঁদুরের মধ্যে বিভিন্ন অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা আলফা বৈচিত্র্য অনুমান করেছি (অবজার্ভড বা রিচনেস, Chao1, শ্যানন, সিম্পসন, এবং ইনভার্স সিম্পসন সূচক), বিটা বৈচিত্র্য (Bray−Curtis অসমতা), এবং প্রধান ট্যাক্সোনমিক পার্থক্য। পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে সামঞ্জস্য রেখে [৫৪], অন্ত্রের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা বৃহত্তর মাইক্রোবিয়াল সমৃদ্ধি দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল (চিত্র 1B, সমস্ত আলফা বৈচিত্র্য সূচক), সেইসাথে CLM (চিত্র 1C, PERMANOVA p {{9}) এর তুলনায় একটি স্বতন্ত্র এবং আরও ভিন্ন ভিন্ন মাইক্রোবিয়াল গঠন }.001 এবং PERMDISP p=0.0009, ওয়াইল্ডলিং বনাম CLM এবং চিত্র S1)। মাইক্রোবিয়াল স্বাক্ষরের পরিপ্রেক্ষিতে, CLM এবং বন্য ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা বিভিন্ন ব্যাকটেরিয়া ট্যাক্সা (চিত্র S1) দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। Rosshart et al এর সাথে সঙ্গতিপূর্ণ। [৫৪], বন্য ইঁদুরের ব্যাকটেরিয়া ট্যাক্সা ইন্টেস্টিনোমোনাস, ডেসালফোভিব্রিও, তুজেরেলা, অসিলোব্যাক্টর, অরোডিব্যাক্টর এবং প্যাথোজেনিক জেনাস হেলিকোব্যাক্টারের অন্তর্গত, যা এই মডেলের বন্য-উত্পন্ন অ-গৃহপালিত প্রোফাইলকে চিহ্নিত করে (চিত্র S1)।

চিত্র 1. CLM (n=10/group) এবং বন্য ইঁদুরের ব্যাকটেরিয়া সংমিশ্রণে HSD প্রভাব (ctrl-এর জন্য n=11 এবং বন্য HSD-এর জন্য n=12)। (ক) পরীক্ষামূলক নকশা। C57BL/6 CLM বা বন্য ইঁদুরকে 0.5% NaCl (নিয়ন্ত্রণ, Ctrl) বা উচ্চ লবণ 4% NaCl (HSD) এবং 16S rRNA জিন অ্যামপ্লিকন সিকোয়েন্সিং দ্বারা চিহ্নিত অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায়ের অন্ত্রে খাওয়ানো হয়েছিল। (B) CLM এবং wildling এর fecal gat microbiota এর আলফা বৈচিত্র্যের জন্য সূচক; বাম থেকে ডানে, নিম্নলিখিত সূচকগুলি দেখানো হয়েছে: পর্যবেক্ষণ করা (আউট সমৃদ্ধি), Chao1, শ্যানন, সিম্পসন, সিম্পসন (বিপরীত সিম্পসন)। উইলকক্সন-পরীক্ষা দ্বারা গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্য পরিসংখ্যানগতভাবে মূল্যায়ন করা হয়। (C) CLM বনাম ওয়াইল্ডলিং (শীর্ষ), সিএলএম কন্ট্রোল বনাম সিএলএম এইচএসডি (নীচে বাম), এবং ওয়াইল্ডলিং কন্ট্রোল বনাম ওয়াইল্ডলিং এইচএসডি (নীচে ডানে) এর মধ্যে Bray−Curtis অমিলের মেট্রিক থেকে বিটা বৈচিত্র্য সমন্বয়ের প্রধান সমন্বয় বিশ্লেষণ প্লট; গ্রুপগুলির মধ্যে বিচ্ছেদ এবং একজাতীয়তা যথাক্রমে PERMANOVA এবং PERMDISP পরীক্ষা দ্বারা গণনা করা হয়েছিল। * p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{14}}৫; ** p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{24}}1; **** p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{31}}001. চিত্র 1. CLM (n=10/group) এবং বন্য ইঁদুরের ব্যাকটেরিয়া সংমিশ্রণে HSD প্রভাব (n=11 বন্য Ctrl এর জন্য এবং n=12 বন্য HSD-এর জন্য)। (ক) পরীক্ষামূলক নকশা। C57BL/6 CLM বা বন্য ইঁদুরকে 0.5% NaCl (নিয়ন্ত্রণ, Ctrl) বা উচ্চ লবণ 4% NaCl (HSD) এবং 16S rRNA জিন অ্যামপ্লিকন সিকোয়েন্সিং দ্বারা চিহ্নিত অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায়ের অন্ত্রে খাওয়ানো হয়েছিল। (B) CLM এবং wildling এর fecal gat microbiota এর আলফা বৈচিত্র্যের জন্য সূচক; বাম থেকে ডানে, নিম্নলিখিত সূচকগুলি দেখানো হয়েছে: পর্যবেক্ষণ করা (আউট সমৃদ্ধি), Chao1, শ্যানন, সিম্পসন, সিম্পসন (বিপরীত সিম্পসন)। উইলকক্সন পরীক্ষা দ্বারা গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্য পরিসংখ্যানগতভাবে মূল্যায়ন করা হয়। (C) CLM বনাম ওয়াইল্ডলিং (শীর্ষ), সিএলএম কন্ট্রোল বনাম সিএলএম এইচএসডি (নীচে বাম), এবং ওয়াইল্ডলিং কন্ট্রোল বনাম ওয়াইল্ডলিং এইচএসডি (নীচে ডানে) এর মধ্যে Bray−Curtis অমিলের মেট্রিক থেকে বিটা বৈচিত্র্য সমন্বয়ের প্রধান সমন্বয় বিশ্লেষণ প্লট; গ্রুপগুলির মধ্যে বিচ্ছেদ এবং একজাতীয়তা যথাক্রমে PERMANOVA এবং PERMDISP পরীক্ষা দ্বারা গণনা করা হয়েছিল। * p 0.05 এর চেয়ে কম বা সমান; ** p 0.01 এর চেয়ে কম বা সমান; **** p 0.0001 এর থেকে কম বা সমান।

এইচএসডি ব্যাকটেরিয়া বৈচিত্র্য (চিত্র 1B, সমস্ত আলফা বৈচিত্র্য সূচক) এবং সেইসাথে CLM (চিত্র 1C, PERMANOVA p=0.001, PERMDISP p=0 গঠনে একটি উল্লেখযোগ্য অণুজীব পরিবর্তনকে প্ররোচিত করেছে .1, CLM Ctrl বনাম CLM HSD)। বিপরীতে, বন্য ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এইচএসডি (চিত্র 1B, পর্যবেক্ষণ এবং Chao1 সূচক) এর উপর উচ্চ বৈচিত্র্য দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল, CLM থেকে ভিন্ন, এবং তারা CLM (চিত্র 1C, চিত্র 1C) এর তুলনায় এইচএসডি-তে কম উচ্চারিত মাইক্রোবিয়াল কম্পোজিশন পরিবর্তন দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। PERMANOVA p=0.001, PERMDISP p=0.5, ওয়াইল্ডলিং Ctrl বনাম ওয়াইল্ডলিং HSD)।

3.2। বন্য ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল কম্পোজিশন CLM-এর তুলনায় HSD-এর প্রতি বেশি প্রতিরোধী

ওয়াইল্ডলিং এবং সিএলএম-এর মধ্যে ব্যাকটেরিয়াল রচনাগত পার্থক্যগুলি আরও শ্রেণীবিন্যাসগতভাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। ফাইলাম স্তরে, আপেক্ষিক প্রাচুর্যের পরিপ্রেক্ষিতে সর্বাধিক প্রচুর ফাইলা ছিল: ফার্মিক্যুটস (সিএলএম: 52 ± 12%, বন্য: 32 ± 34%), ব্যাকটেরয়েডোটা (সিএলএম: 24 ± 23%, বন্য: 57 ± 19%), অ্যাক্টিনোব্যাক্টেরিওটা (CLM: 1{{10}} ± 7%, বন্যপ্রাণী: 0.7 ± 1.3%) এবং Verrucomicrobiota (CLM: 24 ± 23%, wildling: 0%/শনাক্ত হয়নি) (চিত্র 2)। অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল প্রোফাইল বন্য ইঁদুর এবং সিএলএম (চিত্র 2) এর মধ্যে মল নমুনাগুলিতে সনাক্ত করা সমস্ত ফাইলার জন্য আরও বিভিন্ন প্রাচুর্য দেখিয়েছে। বিশেষত, কোর মাইক্রোবায়োটা ফাইলা ফার্মিকিউটস, ব্যাকটেরয়েডোটা এবং ভেরুকোমিক্রোবায়োটা দুটি মডেলের মধ্যে উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা ছিল (চিত্র 2)। আরও বিশেষভাবে, পারিবারিক স্তরে, ল্যাকটোব্যাসিলাসি, ক্লোস্ট্রিডিয়াসি, পেপ্টোস্ট্রেপ্টোকক্কাসি এবং আকারম্যানসিয়াসি (চিত্র3) সহ পূর্বে এইচএসডি সংবেদনশীল [২৮] হিসাবে রিপোর্ট করা বেশিরভাগ ব্যাকটেরিয়াগুলির জন্য বন্য বনাম সিএলএম অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাতে একটি ভিন্ন অবদান পরিলক্ষিত হয়েছিল। এর সাথে সামঞ্জস্য রেখে, উল্লিখিত পরিবারের প্রধান সদস্যদের জন্য বন্য এবং CLM নমুনার মধ্যে জেনাস স্তরে অনুরূপ প্রবণতা নিশ্চিত করা হয়েছিল; এদের মধ্যে সবচেয়ে বেশি প্রতিনিধি ছিলেন ল্যাকটোব্যাসিলাস, রোজবুরিয়া, টুজেরেলা, ফেকালিবাকুলাম এবং আকারম্যানসিয়া (চিত্র S1 এবং 4)। CLM এবং ওয়াইল্ডলিং গাট মাইক্রোবায়োটা কম্পোজিশনে HSD-এর প্রভাবকে আরও চিহ্নিত করার জন্য, আমরা বিভিন্ন শ্রেণিবিন্যাস স্তরে খাদ্যতালিকাগত পদ্ধতির প্রভাবও বিশ্লেষণ করেছি। ফাইলাম স্তরে, এইচএসডি-চিকিত্সা করা সিএলএম অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ফার্মিক্যুটগুলির উল্লেখযোগ্য হ্রাস এবং ভেরুকোমিক্রোবায়োটা (চিত্র 2) সমৃদ্ধকরণ দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল, তবে বন্য নমুনাগুলিতে এইচএসডি দ্বারা প্রধান ফাইলাগুলির কোনওটিই প্রভাবিত হয়নি (চিত্র 2)। পারিবারিক স্তরে, CLM অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ল্যাকটিক অ্যাসিড-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া যেমন ল্যাকটোব্যাসিলাসেই, সেইসাথে পেপ্টোস্ট্রেপ্টোকক্কাসি এবং ক্লোস্ট্রিডিয়াসি (চিত্র 3) এর মতো এসসিএফএ-উৎপাদকদের উল্লেখযোগ্য হ্রাস দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। অতিরিক্তভাবে, এইচএসডি-ফেড সিএলএম-এ, আমরা আকারম্যানসিয়াসি, সাটারেলাসি, ডিফ্লুভিটালেসি এবং এগারথেলাসি (চিত্র 3) বৃদ্ধি লক্ষ্য করেছি। বিপরীতে, এইচএসডি বন্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাতে বিভিন্ন ব্যাকটেরিয়া পরিবারকে প্রভাবিত করেছে, তাদের মধ্যে দুটি উচ্চ-প্রচুর মুরিবাকুলাসি এবং প্রিভোটেলাসি, উভয়ই এইচএসডি (চিত্র 3) এর উপর বৃদ্ধি পেয়েছে। ব্যাকটেরিয়া মডুলেশন যা CLM-তে HSD-প্রভাবে সবচেয়ে বেশি অবদান রাখে তার মধ্যে রয়েছে আকারম্যানসিয়া, প্যারাসুটেরেলা এবং এন্টারোহ্যাবডাসের বংশবৃদ্ধি, সেইসাথে ল্যাকটোব্যাসিলাস, রোজবুরিয়া, তুজেরেলা, (ইউব্যাক্টেরিয়াম) অক্সিডোরেডুসেন গ্রুপ, মুরিবাকুলাম (অ্যানারোভোরিএক্স4) এর হ্রাস। রোজবুরিয়া ব্যতীত, পূর্বোক্ত জেনারের কেউই বন্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাতে এইচএসডি দ্বারা প্রভাবিত হয়নি, যখন অ্যানারোভোরাক্স CLM (চিত্র 4) এর থেকে বিপরীত প্রবণতা দেখায়।

চিত্র 2. CLM (n=10/group) এর অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা থেকে ব্যাকটেরিয়া ফাইলার উপর HSD-এর প্রভাব এবং বন্য ইঁদুরের জন্য (n=11 বন্য Ctrl এবং n=12 বন্য HSD-এর জন্য)। ফাইলা আপেক্ষিক প্রাচুর্যের পরিপ্রেক্ষিতে মোট গঠন প্রতিটি ব্যক্তি (শীর্ষ) প্রতি বার প্লট এবং নির্দিষ্ট ফাইলা (নীচের) জন্য বক্সপ্লট দ্বারা দেখানো হয়; উইলকক্সন-পরীক্ষা দ্বারা গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল। * p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{8}}৫; ** p {{10}} এর থেকে কম বা সমান।01; *** p 0.001 এর থেকে কম বা সমান; **** p 0.0001 এর থেকে কম বা সমান।

চিত্র 3. CLM (n=10/গ্রুপ) এবং বন্য ইঁদুরের ব্যাকটেরিয়া পরিবারের উপর উচ্চ-লবণ খাদ্য গ্রহণের প্রভাব (ctrl-এর জন্য n=11 এবং বন্য HSD-এর জন্য n=12)। পারিবারিক স্তরে মোট রচনা প্রতিটি ব্যক্তির জন্য বার প্লট দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয় (উপরে) এবং নির্দিষ্ট পরিবারের জন্য বক্সপ্লট (নীচে); উইলকক্সন-পরীক্ষা দ্বারা গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল। * p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{8}}৫; ** p {{10}} এর থেকে কম বা সমান।01; *** p 0.001 এর থেকে কম বা সমান; **** p 0.0001 এর থেকে কম বা সমান।

চিত্র 4. CLM (n=10/group) এবং বন্য ইঁদুরের ব্যাকটেরিয়া জেনারে পরিবর্তন (n=11 বন্য Ctrl এর জন্য এবং n=12 বন্য HSD-এর জন্য)। জিনাস স্তরে সামগ্রিক আপেক্ষিক প্রাচুর্যের অবদান প্রতিটি ব্যক্তির জন্য একটি বৃত্তাকার বার প্লট হিসাবে প্লট করা হয় (উপরে) এবং নির্দিষ্ট জেনার (নীচে) জন্য একটি বক্সপ্লট; উইলকক্সন-পরীক্ষা দ্বারা গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল। * p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{7}}৫; ** p 0 এর থেকে কম বা সমান৷{11}}1; *** p 0.001 এর থেকে কম বা সমান; **** p 0.0001 এর থেকে কম বা সমান।

3.3। এইচএসডি CLM-তে ভবিষ্যদ্বাণীমূলক মাইক্রোবিয়াল ফাংশনগুলিকে প্রভাবিত করে কিন্তু বন্য ইঁদুরগুলিতে নয়

PICRUST 2 আউটপুট ATP-নির্ভর হেলিকেসের জন্য recG জিনে এইচএসডি-প্ররোচিত বর্ধিত ফাংশনের ব্যতিক্রম ছাড়া, কেইজিজি অর্থোলজি এবং মেটাসাইক পাথওয়ে টীকা উভয়ের জন্য বন্য এইচএসডি বনাম চিকিত্সাবিহীন বন্য ইঁদুরের জীবাণু সম্প্রদায় ফাংশনের মধ্যে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য সনাক্ত করতে পারেনি। KEGG অর্থবিদ্যা (চিত্র 5A)। CLM-এর উপর HSD-এর প্রভাব KEGG অর্থবিদ্যার জন্য ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশনগুলির উল্লেখযোগ্য হ্রাস দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল, তাদের মধ্যে জিন spp (সুক্রোজ-6-ফসফেটেস) এবং pfkA (ফসফোফ্রুক্টোকিনেস 1), উভয়ই স্টার্চ এবং সুক্রোজ বিপাকের সাথে জড়িত, যা সঙ্গতিপূর্ণ। পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের সাথে [28] (চিত্র 5A)। এছাড়াও, HSD-fed CLM-এর অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ঝিল্লি পরিবহনে জড়িত জিনের ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশন হ্রাস দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল (আয়রন ট্রান্সপোর্টের জন্য feoB, AB 2P AB 2 permease প্রোটিন, AB 2A AB 2 ATP বাইন্ডিং প্রোটিন), গ্লুটামিন বায়োসিন্থেসিস (glnA) , LacI ফ্যামিলি ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেটর (lacI, galR) এবং transketolase (tktA, tktB) (চিত্র 5A)। মেটাসাইক পাথওয়ের জন্য, এইচএসডি নাইট্রেট হ্রাস (ডিনিট্রিফিকেশন পাথওয়ে), গ্যালাকটোজ অবক্ষয় (ডি-গ্যালাকটরেট ডিগ্রেডেশন, ডি-গ্লুকারেটের সুপার পাথওয়ে এবং ডি-গ্যালাকটরেট ডিগ্রেডেশন), ফ্যাট-প্রোপ্যানট্যাল-প্রপাথওয়ের সাথে যুক্ত ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশনগুলির CLM অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে উল্লেখযোগ্যভাবে সমৃদ্ধ করেছে। অ্যাসিড উদ্ধার, বুটানোয়িক অ্যাসিড এবং অ্যামিনো অ্যাসিডের অবক্ষয় (সুগন্ধযুক্ত অ্যামাইন অবক্ষয়, এল-লিউসিনের অবক্ষয়) (চিত্র 5 বি)। তদ্ব্যতীত, পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্য রেখে [২৮], CLM-তে HSD অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা অ্যামিনো অ্যাসিড বায়োসিন্থেসিস (এল-অ্যালানাইন জৈব সংশ্লেষণের সুপার পাথওয়ে, এল-লাইসিন বায়োসিন্থেসিস), মিশ্র অ্যাসিড গাঁজন, এন-এর মতো অতিরিক্ত নভেল স্বাক্ষর সহ ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশন হারিয়েছে। acetylglucosamine/N-acetyl-mannosamine/N-acetylneuraminate অবক্ষয় এবং deoxyribonucleosides অবক্ষয় (pyrimidine এবং purine degradation, inosine5phosphate biosynthesis III) (চিত্র 5B)।

চিত্র 5. চলমান।

চিত্র 5. CLM (n=10/group) এবং wildling (wildling Ctrl-এর জন্য n=11 এবং ওয়াইল্ডলিং HSD-এর জন্য n=12) অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাতে অন্ত্রের ভবিষ্যদ্বাণীমূলক মেটাজেনমিক ফাংশনে HSD-এর প্রভাব৷ PICRUST2 আউটপুট HSD বনাম Ctrl নমুনার মধ্যে ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশন গণনার log2 গড় অনুপাত হিসাবে প্রকাশিত KEGG অর্থবিদ্যা টীকা (A) এবং MetaCyc পথের (B) জন্য কিউনিফর্ম প্লট হিসাবে প্লট করা হয়েছে। উইলকক্সন-পরীক্ষা দ্বারা Ctrl বনাম HSD গ্রুপের মধ্যে সমস্ত পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল।

4. আলোচনা

জটিল এবং বৈচিত্র্যময় বন্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা নির্দিষ্ট রোগের মডেল [51] এবং খাদ্যতালিকাগত ব্যবস্থাগুলির জন্য আরও স্থিতিস্থাপক হিসাবে পরিচিত, যেমন উচ্চ-চর্বি গ্রহণ [54,55]। যাইহোক, পূর্ববর্তী কোন গবেষণায় মুরিন বন্য থেকে প্রাপ্ত অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার উপর উচ্চ সোডিয়াম গ্রহণের প্রভাব মূল্যায়ন করা হয়নি। এখানে, আমরা প্রথমবারের মতো তদন্ত করেছি কীভাবে এইচএসডি সিএলএমের তুলনায় অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে প্রভাবিত করে। মজার বিষয় হল, আমাদের ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে CLM-এর তুলনায়, বন্য মাইক্রোবায়োম রচনামূলক এবং ভবিষ্যদ্বাণীমূলক কার্যকরী উভয় স্তরেই এইচএসডি ঝামেলার জন্য বেশি প্রতিরোধী। এটি সুপ্রতিষ্ঠিত যে উচ্চ লবণ গ্রহণ অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম গঠন এবং ইমিউন হোমিওস্টেসিস [25,29,31,34,63-65] পরিবর্তন করে কার্ডিওভাসকুলার বা অটোইমিউন রোগের মতো বিভিন্ন রোগের ঝুঁকি বাড়িয়ে তুলতে পারে। পূর্ববর্তী প্রতিবেদনের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, সিএলএম-এ অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটায় এইচএসডি-প্ররোচিত স্থানান্তরগুলি মাইক্রোবায়াল বৈচিত্র্য, রচনা এবং ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ফাংশনে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল [২৮]। স্বাস্থ্য-উন্নয়নকারী ব্যাকটেরিয়া যেমন Peptostreptococcaceae পরিবার এবং genera Lactobacillus, Roseburia, এবং Tuzzerella CLM-তে আপেক্ষিক প্রাচুর্যের পরিপ্রেক্ষিতে হ্রাস পেয়েছে, অন্যদিকে HSDfed গোষ্ঠীতে আকেরম্যানসিয়া উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। আমরা Defluvitaleaceae, Enterorhabdus এবং Parasutterella-এ HSD-এর উচ্চতর আপেক্ষিক প্রাচুর্যও শনাক্ত করেছি। মজার বিষয় হল, প্যারাসুটেরেলা জিনাস হল সিএলএম এবং মানুষের উভয়ের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার একটি মূল উপাদান, যেখানে এটি অ্যাসাকারোলাইটিক এবং সাক্সিনেটের উত্পাদনকারী হিসাবে আচরণ করে [66]। Eggerthellaceae পরিবারের Enterorhabdus এবং Sutterellaceae পরিবারের Parasutterella উভয়ই IBD [67,68] রোগীদের মধ্যে সমৃদ্ধ বলে পরিচিত, যা আরও নির্দেশ করে যে কীভাবে HSD রোগের বিকাশকে প্রভাবিত করতে পারে। যাইহোক, মজার বিষয় হল, বন্য ইঁদুরগুলি এইচএসডি-প্ররোচিত মাইক্রোবিয়াল শিফ্ট যেমন CLM-এর অনুরূপ সত্তা দেখায়নি। তা সত্ত্বেও, পর্যবেক্ষণ করা OTUs এবং Chao1 মেট্রিক্সের জন্য এইচএসডিতে বন্য বৈচিত্র্য উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং বন্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার এইচএসডি ব্যাঘাতের সাথে শুধুমাত্র কয়েকটি ট্যাক্স জড়িত ছিল, তাদের মধ্যে অ্যানারোভোরাক্সের বৃদ্ধি, এর সাথে এরিসিপেলাটোক্লোস্ট্রিডিয়াম, রোজবুরিয়া এবং ল্যাচনোস্পাইরাসিয়া হ্রাস পেয়েছে। UCG-004 জেনাস। এইচএসডি-ফেড সিএলএম এখনও এইচএসডি-খাওয়া বন্য ইঁদুরের তুলনায় এই ব্যাকটেরিয়ার উচ্চতর প্রাচুর্য দ্বারা চিহ্নিত হওয়া সত্ত্বেও, রোজবুরিয়াই একমাত্র ব্যাকটেরিয়ার স্বাক্ষর ছিল যা সাধারণত সংশ্লিষ্ট নিয়ন্ত্রণের তুলনায় এইচএসডি গ্রুপের মধ্যে ভাগ করা হয়। লক্ষণীয়, রোজবুরিয়ার মতো বুটিরেট-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়াগুলি আলসারেটিভ কোলাইটিস রোগীদের মধ্যে কম আপেক্ষিক প্রাচুর্য দেখায় [69] এবং এই হ্রাসটি মানুষের বিষয়গুলির আইবিডি জেনেটিক ঝুঁকির সাথে সম্পর্কযুক্ত বলেও দেখা গেছে [70]। এটি পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, যেখানে রোজবুরিয়া বা ল্যাকটোব্যাসিলাসের মতো ব্যাকটেরিয়া বংশের পরিবর্তনগুলি উচ্চ রক্তচাপের ঝুঁকির সাথে যুক্ত পাওয়া গেছে, সম্ভবত একটি পশ্চিমা খাদ্য [71] দ্বারা প্রচারিত। অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া সংমিশ্রণটি অন্ত্রের গতিশীলতা এবং শারীরবৃত্তির সাথেও যুক্ত [72]।

পুরুষদের জন্য cistanche উপকারিতা-প্রতিরোধ ক্ষমতা শক্তিশালী করে

অ্যানারোভোরাক্স জিনাসটি ইঁদুরের মধ্যে অস্বাভাবিক অন্ত্রের শারীরবৃত্তীয়তা এবং কম গতিশীলতা [73] সহ পূর্বে দেখা গেছে; যাইহোক, বন্য ইঁদুরের জন্য HSD-তে Anaerovorax এর সমৃদ্ধি অন্ত্রের হোমিওস্ট্যাসিস এবং সঠিক কার্যকারিতার পরিপ্রেক্ষিতে এই ট্যাক্সার একটি ভিন্ন ভূমিকার দিকে নিয়ে যেতে পারে। পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, আমরা সিএলএম [২৮] এর এইচএসডি গ্রুপে আকারম্যানসিয়া জেনাসের বৃদ্ধি লক্ষ্য করেছি, যখন বন্য ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এই জিনাসের হ্রাস পেয়েছে, যা এই মডেলের পূর্ববর্তী গবেষণার সাথেও সামঞ্জস্যপূর্ণ। 53-55]। যদিও আক্কেরম্যানসিয়া জিনাস একটি সম্ভাব্য প্রোবায়োটিক কারণ এটি হোস্ট ইমিউনোলজিক্যাল এবং বিপাকীয় প্রোফাইলের উন্নতিতে ইতিবাচক প্রভাব ফেলে (যেমন, স্থূলতা এবং টাইপ 2 ডায়াবেটিসে) [৪২,৭৪-৭৭], এর নেতিবাচক কারণে এই বংশের ভূমিকা এখনও অস্পষ্ট। কোলোরেক্টাল ক্যান্সার [৭৮], পারকিনসন রোগ [৭৯,৮০] এবং একাধিক স্ক্লেরোসিস রোগীদের [৮১] ক্লিনিকাল ফলাফলের সাথে সম্পর্ক। MetaCyc পথের সাথে প্রাপ্ত আমাদের পূর্ববর্তী ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [28], HSD-এর উপর CLM কেইজিজি অর্থবিদ্যার জন্য স্টার্চ এবং সুক্রোজ বিপাকের সাথে সম্পর্কিত ভবিষ্যদ্বাণীমূলক মাইক্রোবিয়াল ফাংশন হ্রাস করেছে। যাইহোক, এইচএসডি খাওয়ানো বন্য ইঁদুরের অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া সংমিশ্রণে ছোটখাটো পরিবর্তনগুলি ভবিষ্যদ্বাণীমূলক ব্যাকটেরিয়াল ফাংশনে কোনও উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন আনতে ব্যর্থ হয়, যা নির্দেশ করে যে বন্য থেকে প্রাপ্ত অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং বিপাকীয়/পরিবেশগত নেটওয়ার্কগুলি অনেক বেশি স্থিতিশীল এবং আরও সহজে মানিয়ে নিতে পারে। CLM অন্ত্রের বাস্তুতন্ত্রের তুলনায় এইচএসডি-প্ররোচিত খাদ্যতালিকাগত বৈচিত্র্য, যা আরও তদন্তের নিশ্চয়তা দেয়। ডিফারেনশিয়াল ডায়েটারি রেজিমগুলির উপর অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া নেটওয়ার্কে অন্ত্রের ছত্রাক সম্প্রদায়ের সম্ভাব্য প্রভাবও উল্লেখ করার মতো। পূর্ববর্তী গবেষণাগুলি ইতিমধ্যেই পরামর্শ দিয়েছে যে কীভাবে ব্যাকটেরিয়া এবং ছত্রাকের মধ্যে সম্ভাব্য মিথস্ক্রিয়া হোস্ট ইমিউন সিস্টেম হোমিওস্ট্যাসিস এবং রোগের বিকাশে জড়িত [82-85]। এই প্রসঙ্গে, বন্য ইঁদুরের তুলনায় CLM তাদের নিম্ন ব্যাকটেরিয়া জটিলতার দ্বারা সীমাবদ্ধ, যা একটি বৈচিত্র্যময় অন্ত্রের মাইকোবিওটা [54] প্রতিষ্ঠায় বাধা দিতে পারে। ভবিষ্যত অধ্যয়নগুলি বন্য মডেল ব্যবহার করে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং হোস্ট অনাক্রম্যতার সেটিংসে অন্ত্রের ছত্রাক সম্প্রদায়ের অবদান নির্ধারণ করতে সক্ষম হবে। সংক্ষেপে, আমাদের অধ্যয়ন সিএলএম-এর একটি গৃহপালিত অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায়ের তুলনায় প্রাকৃতিক, বন্য থেকে প্রাপ্ত অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল ইকোসিস্টেমকে কীভাবে প্রভাবিত করে সে সম্পর্কে ডেটা সরবরাহ করে। আমাদের গবেষণায় দেখা গেছে যে এইচএসডি বন্য ইঁদুরের ব্যাকটেরিয়া ট্যাক্সা এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে প্রভাবিত করে না যেমন এটি CLM থেকে গৃহপালিত অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার ক্ষেত্রে করে। এই ভিন্নতা, যেমন পূর্বে উচ্চ-চর্বিযুক্ত ডায়েট [54,55] অন্যান্য খাদ্যতালিকাগত নিয়মাবলী বা অবস্থার জন্য বলা হয়েছে, ইঙ্গিত করে যে আরও জটিল অন্ত্রের বাস্তুতন্ত্রের উপর খাদ্যতালিকাগত হস্তক্ষেপের প্রভাব পুনর্নির্মাণ এবং অনুমান করার জন্য প্রাকৃতিক মুরিন মডেল সিস্টেমে ভবিষ্যতে গবেষণা প্রয়োজন, মানুষের মত।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত