হার্বা সিস্টানচে এক্সট্র্যাক্ট ইঁদুরের হৃদপিণ্ড এবং H9c2 কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP জেনারেশন বাড়ায়
Mar 04, 2022
যোগাযোগ: অড্রে হুaudrey.hu@wecistanche.com
হোই ইয়ান লিউং এবং কাম মিং কো
এই নিবন্ধটি উদ্ধৃত করতে: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 কোষ, ফার্মাসিউটিক্যাল বায়োলজি, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/138082052080
বিমূর্ত
হার্বাল সিস্তানচে [সিস্তানচে মরুভূমি YC মা (Orobanchaceae) এর শুকনো পুরো উদ্ভিদ] এর "ইয়াং-উদ্দীপক" কর্মের ফার্মাকোলজিকাল ভিত্তি তদন্ত করতে, চীনা ওষুধে, মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি উৎপাদন ক্ষমতার উপর হার্বা সিস্তানচে-এর মিথানল নির্যাসের প্রভাব ছিল। একটি প্রাক্তন ভিভো র্যাট হার্ট মডেল এবং একটি ইন সিটু H9c2 সেল অ্যাস ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছে। হার্বা সিস্তানচে নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা ইঁদুরের ক্ষেত্রে ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে মায়োকার্ডিয়াল মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা বৃদ্ধি করে, যেমন ভিট্রো পরিমাপের দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়। এটিপি উৎপাদন ক্ষমতার উদ্দীপনাটি পাইরুভেট দ্বারা সমর্থিত মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন পরিবহনে সমান্তরাল বর্ধনের সাথে যুক্ত ছিল কিন্তু সাক্সিনেট নয়। হার্বা সিস্তানচে চিকিৎসা মায়োকার্ডিয়াল মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স I এবং জটিল III ক্রিয়াকলাপগুলিকেও বাড়িয়েছে, জটিল I কার্যকলাপে উদ্দীপনার পরিমাণ আরও বড়। Herba Cistanche চিকিত্সা H9c2 কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতার ডোজ-এবং সময়-নির্ভর বৃদ্ধি করেছে। ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সা ইঁদুরের হার্টে মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি তৈরি করতে পারে প্রাক্তন ভিভো এবং সিটুতে H9c2 কোষে, সম্ভবত অক্সিডেটিভ ফসফোরিলেশন বাড়ানোর মাধ্যমে।
কীওয়ার্ড:ATP, Cistanche deserticola, H9c2 কোষ, হৃদয়, মাইটোকন্ড্রিয়া।
ভূমিকা
"ইয়াং ইনভাইগোরেশন", যা চীনা ওষুধে শরীরের কার্যকারিতার সাধারণ বর্ধনকে মূর্ত করে, বিভিন্ন জৈব রাসায়নিক প্রক্রিয়া চালানোর জন্য শক্তির ব্যবহার জড়িত। এই বিষয়ে, এটিপি, যা সেলুলার ফাংশন জ্বালানীতে শক্তির সার্বজনীন মুদ্রা, মূলত মাইটোকন্ড্রিয়ায় অক্সিডেটিভ ফসফোরিলেশনের মাধ্যমে উত্পন্ন হয়। আমরা অনুমান করেছি যে "ইয়াং উদ্দীপক" ভেষজগুলি মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি উৎপাদন ক্ষমতা বৃদ্ধি করার ক্ষমতা রাখে (কো এট আল।, 2004)। এটি আমাদের সাম্প্রতিক অনুসন্ধান দ্বারা সমর্থিত যে "ইয়াং-উদ্দীপক" কিন্তু "ইয়িন-পুষ্টিকর" চাইনিজ টোনিফাইং ভেষজগুলি মাউস হার্ট এক্স ভিভোতে মায়োকার্ডিয়াল এটিপি উৎপাদন ক্ষমতা বাড়াতে পারে (কো এট আল।, 2006)। Herba Cistanche, Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae) এর শুকনো সম্পূর্ণ পরজীবী উদ্ভিদ (ফুল বাদে), ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধে (চেন, 1998) একটি 'ইয়াং-উদ্দীপক' টোনিফাইং ভেষজ হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছে এবং এটি সবচেয়ে জনপ্রিয় হিসাবে প্রদর্শিত হয়। ইয়াং-উদ্দীপনার জন্য ব্যবহৃত চীনা পেটেন্ট ফর্মুলেশনের একটি সংখ্যার উপাদান। চীন এবং জাপানে, হার্বা সিস্তানচে ইয়াং এর অভাবজনিত লক্ষণগুলির চিকিত্সার জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। ফার্মাকোলজিকাল গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে হার্বা সিস্তানচে ফ্রি র্যাডিকেল (জিওং এট আল।, 1996), শ্যাডেটিভ (লু, 1998), অ্যান্টিএজিং (লি এট আল।, 1990), অ্যান্টিনোসাইসেপটিভ এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব (লিন এট আল।, 2002) তৈরি করতে পারে। ), এবং ইমিউন ফাংশন বাড়ায় (উ এট আল।, 2005)। Herba Cistanche-এর প্রধান সক্রিয় উপাদান হল phenylethanoid glycosides (Ouyang et al., 2003), যেটিতে ব্যাকটেরিয়াল, অ্যান্টিস্ট্রেস এবং অ্যান্টিঅক্সিডেটিভ বৈশিষ্ট্য (Xiong et al., 1998) পাওয়া গেছে, সেইসাথে সংস্কৃতির উপর অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক প্রভাব রয়েছে। নিউরন (Tian & Pu, 2005)। বর্তমান গবেষণায়, হার্বা সিস্তানচে-এর ইয়াং-উদ্দীপক ক্রিয়াকলাপের ফার্মাকোলজিক্যাল ভিত্তি তদন্ত করার জন্য, ইঁদুরের হার্ট এক্স ভিভো থেকে বিচ্ছিন্ন মাইটোকন্ড্রিয়াতে এটিপি উৎপাদন ক্ষমতার উপর হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সার প্রভাব এবং সিটুতে সংস্কৃত H9c2 কার্ডিওমায়োসাইটগুলি পরীক্ষা করা হয়েছিল। এটিপি প্রজন্মের অন্তর্নিহিত জৈব রাসায়নিক প্রক্রিয়াটি অন্বেষণ করতে-বর্ধক ক্রিয়া, মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন পরিবহনের উপর হারবা সিস্তানচে চিকিত্সার প্রভাব এবং ইঁদুরের হৃদয়ে জটিল I-IV কার্যকলাপগুলিও পরীক্ষা করা হয়েছিল।
Cistanche deserticola নির্যাস
উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ
রাসায়নিক, কোষ সংস্কৃতি, এবং ভেষজ পদার্থ ATP, ADP, এবং 3-[4,5-ডাইমেথাইলথিওজল-2-yl]-2,5-ডিফেনাইল-টেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড ( MTT) সিগমা কেমিক্যাল কোং (সেন্ট লুইস, MO, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। Luciferase সমাধান (ATPlite) PerkinElmer (বোস্টন, MA, USA) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগলের মাধ্যম (DMEM) এবং ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (FBS) GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। H9c2 সেল লাইনটি ATTC (রকভিল, MD, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। Herba Cistanche একজন স্থানীয় ভেষজ ব্যবসায়ী (Lee Hoong Kee) সরবরাহ করেছিলেন। ভেষজটি সরবরাহকারী দ্বারা প্রমাণিত হয়েছিল, এবং একটি ভাউচার নমুনা (HKUSTY00301) জৈব রসায়ন বিভাগে জমা করা হয়েছিল, হংকং ইউনিভার্সিটি অফ সায়েন্স অ্যান্ড টেকনোলজি (HKUST)-এ।
ভেষজ নিষ্কাশন
হারবা সিস্তানচে (100 গ্রাম) ছোট ছোট টুকরো করে কেটে 300 মিলি মিথানলে রিফ্লাক্সের নিচে গরম করে বের করা হয়।
2 ঘন্টার জন্য 65◦C তাপমাত্রায়। পদ্ধতিটি দুবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল। পুল করা নির্যাসটি কম চাপে দ্রাবককে বাষ্পীভূত করে শুকানো হয়েছিল, এবং হার্বা সিস্তানচে-এর মিথানল নির্যাস 39 শতাংশ (w/w) ফলনে প্রাপ্ত হয়েছিল। রাসায়নিক বিশ্লেষণে ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে হার্বা সিস্তানচে-এর মিথানল নির্যাসটিতে মোট স্যাপোনিন, মোট ফ্ল্যাভোনয়েড, মোট লিগনান এবং পলিস্যাকারাইড রয়েছে 1.62 শতাংশ (w/w), 0৷{8}}8 শতাংশ, 0.15 শতাংশ, এবং 75.6 শতাংশ, যথাক্রমে।
পশু যত্ন
প্রাপ্তবয়স্ক পুরুষ Sprague-Dawley ইঁদুর (8-10 সপ্তাহ; 250-300g) একটি 12-ঘন্টা অন্ধকার/আলো চক্রের অধীনে একটি বায়ু/আর্দ্রতা-নিয়ন্ত্রিত ঘরে প্রায় 22◦C তাপমাত্রায় রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং খাদ্য ও জলের অনুমতি দেওয়া হয়েছিল পশু যত্ন সুবিধার মধ্যে
HKUST এ পরীক্ষামূলক প্রোটোকলগুলি HKUST এ গবেষণা অনুশীলন কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।
ওষুধের চিকিৎসা
প্রাণীদের এলোমেলোভাবে দলে বিভক্ত করা হয়েছিল, প্রতিটিতে পাঁচ থেকে ছয়টি প্রাণী ছিল। চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলিতে, ইঁদুরগুলিকে 3 দিনের জন্য প্রতিদিনের ডোজ ({{0}}.031–0.5 গ্রাম/কেজি) বৃদ্ধিতে হার্বা সিস্তানচে (জলে দ্রবীভূত/ঝুলিয়ে দেওয়া) মিথানল নির্যাস দিয়ে ইন্ট্রাগাস্ট্রিকভাবে পরিচালিত হয়েছিল। নিয়ন্ত্রিত প্রাণী শুধুমাত্র জল পেয়েছি. শেষ ডোজ দেওয়ার চব্বিশ ঘন্টা পরে, হার্ট ফেনোবারবিটাল-অ্যানেথেসাইজ করা প্রাণী থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং জৈব রাসায়নিক বিশ্লেষণের শিকার হয়েছিল।
মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশের প্রস্তুতি এবং এটিপি উৎপাদন ক্ষমতা (এটিপি-জিসি) এক্স ভিভোর পরিমাপ
হার্টের বাম ভেন্ট্রিকুলার টিস্যুর নমুনাগুলিকে বরফ-ঠাণ্ডা আইসোটোনিক বাফার (0.32 এম সুক্রোজ, 1 মিমি ইডিটিএ, 50 মিমি ট্রিস/এইচসিএল, পিএইচ 7.4) দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। কার্ডিয়াক মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশগুলি 4◦C তাপমাত্রায় আইসোটোনিক বাফারে ডিফারেনশিয়াল সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল। একটি 10 শতাংশ (w/v) কার্ডিয়াক হোমোজেনেট 20-30 সম্পূর্ণ স্ট্রোকের জন্য 4000 rpm-এ টেফলন-গ্লাস হোমোজেনাইজার দিয়ে কিমা করা ভেন্ট্রিকুলার টিস্যুকে একত্রিত করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। নিউক্লিয়াস এবং কোষের ধ্বংসাবশেষ অপসারণের জন্য হোমোজেনেটকে 10 মিনিটের জন্য 600 গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। মাইটোকন্ড্রিয়া পলল করার জন্য সুপারনাট্যান্টকে 8000 গ্রাম 30 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল (ইভান, 1992)। পেলেটগুলি আইসোটোনিক বাফারের 1 এমএল-এ পুনরায় স্থগিত করা হয়েছিল এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশগুলিকে পুনর্গঠন করা হয়েছিল। চিকিত্সাবিহীন প্রাণীদের মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি-জিসি লেউং এট আল এর পদ্ধতি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। (2005)।
মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন পরিবহনের পরিমাপ
বিচ্ছিন্ন মাইটোকন্ড্রিয়ায় ইলেক্ট্রন পরিবহনের পরিমাপ, যা এমটিটি হ্রাসের উপর ভিত্তি করে, কোহেন এট আল দ্বারা বর্ণিত হিসাবে সম্পাদিত হয়েছিল। (1997)। মাইটোকন্ড্রিয়া একটি ইনকিউবেশন বাফার (250 mM সুক্রোজ, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4) সহ 1 mg/mL প্রোটিন ঘনত্বে প্রস্তুত করা হয়েছিল . মাইটোকন্ড্রিয়ার একটি অ্যালিকোট (40 µL) 100 µL প্রতিটি 15 mM পাইরুভেট বা 0.5 mM সাকিনেট এবং 0.42 mg/mL MTT এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। প্রতিক্রিয়া মিশ্রণটি 37◦C তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য মৃদু ঝাঁকুনি দিয়ে সেদ্ধ করা হয়েছিল। ইনকিউবেশনের পরে, 100 μL লাইসিস বাফার (10 শতাংশ, w/v, সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট, এবং 45 শতাংশ ডাইমেথাইলফর্মাইড, গ্লাসিয়াল অ্যাসিটিক অ্যাসিডের সাথে pH 4.7 এ সামঞ্জস্য করা) যোগ করে প্রতিক্রিয়া মিশ্রণটি বন্ধ করা হয়েছিল। 5 মিনিটের জন্য দাঁড়িয়ে থাকার পরে, প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের শোষণ রিডিং একটি মাইক্রোটাইটার প্লেট রিডার (বায়ো-র্যাড, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) দিয়ে নেওয়া হয়েছিল এবং 570 এনএম এবং 630 এনএমের মধ্যে পার্থক্য হিসাবে রিপোর্ট করা হয়েছিল। ডেটা নিয়ন্ত্রণের গড় মানের শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল (অর্থাৎ, হারবা সিস্তানচে-অচিকিৎসা করা) গ্রুপ।
সেল সংস্কৃতি
H9c2 কোষ, কার্ডিয়াক মাই-ওব্লাস্ট (Hescheler et al., 1991) থেকে প্রাপ্ত একটি স্থায়ী কোষ রেখা, DMEM-এ 10 শতাংশ (v/v) FBS এর সাথে সম্পূরক হিসাবে মনোলেয়ার হিসাবে সংস্কৃতি করা হয়েছিল। মাধ্যমটিতে রয়েছে গ্লুকোজ (4.5 g/L) এবং গ্লুটামিন (4.5 mM), NaHCO3 (17 mM), পেনিসিলিন (100 IU/mL), এবং স্ট্রেপ্টোমাইসিন (100 µg/mL) এর সাথে সম্পূরক। সমস্ত কোষ 37◦C তাপমাত্রায় বাতাসে 5 শতাংশ (v/v) CO2 এর বায়ুমণ্ডলে জন্মেছিল। মাধ্যমটি প্রতি 2 বা 3 দিনে তাজা মাধ্যম দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল। কোষের একটি স্টক একটি 75 সেমি 2 কালচার ফ্লাস্কে জন্মানো হয়েছিল এবং 1:10 এর উপচাষ অনুপাতে সঙ্গমের আগে বিভক্ত হয়েছিল। ATP-GC অ্যাস-এর জন্য, H9c2 কোষগুলিকে 25 104 কোষ/কূপে একটি 24-ওয়েল প্লেটের ঘনত্বে বসানো হয়েছিল৷ কোষ সংযুক্তির পরে, হার্বা সিস্টানচে নির্যাস (ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে দ্রবীভূত; পিবিএস) মাঝারিভাবে প্রয়োগ করা হয়েছিল, এবং কোষগুলি ক্রমবর্ধমান সময়ের জন্য (2-16 ঘন্টা) সময়ের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। নিয়ন্ত্রণ (চিকিত্সাহীন) কোষগুলিকে কেবল পিবিএস দেওয়া হয়েছিল।
ATP-GC-এর পরিমাপ
ক্রমবর্ধমান ঘনত্ব (5{{10}}–300 µg/mL) হার্বা সিস্তানচে নির্যাস দিয়ে ইনকিউবেশনের নির্দেশিত সময়ের পরে, ATP-GC অ্যাস করা হয়েছিল। মাধ্যমটি অ্যাসপিরেটেড ছিল এবং কোষগুলিকে একটি ইনকিউবেশন বাফারে ডিজিটোনিন (50 µg/mL) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0.1 mM MgCl2, 0.5 শতাংশ BSA, p3H) 37◦C এ মিনিট। ডিজিটোনিনকে উচ্চাকাঙ্খিত করার পরে, গ্লুটামেট (5 মিমি), ম্যালেট (5 মিমি), এবং এডিপি (60µM) মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি জেনারেশনের জন্য কোষগুলিতে যুক্ত করা হয়েছিল, যা 0 থেকে 15 মিনিটের মধ্যে ক্রমবর্ধমান সময়ের ব্যবধানে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। 60 µL পার্ক্লোরিক অ্যাসিড (30 শতাংশ , w/v) যোগ করার মাধ্যমে প্রতিক্রিয়াটি বন্ধ করা হয়েছিল এবং প্রতিক্রিয়া মিশ্রণগুলি 4◦C তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য 600g এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। নিরপেক্ষকরণের জন্য 1.4 M KHCO3 এর 90 µL সাথে সুপারনাট্যান্টের একটি অ্যালিকোট (120 µL) মিশ্রিত করা হয়েছিল। মিশ্রণগুলিকে আবার 600 গ্রাম 4◦C তাপমাত্রায় কেন্দ্রীভূত করা হয়েছিল, এবং সুপারন্যাট্যান্টগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে এটিপি সামগ্রীর জন্য পরিমাপ করা হয়েছিল। অপরিশোধিত কোষগুলির ATP-GC অনুমান করা হয়েছিল গ্রাফের বক্ররেখার অধীনে এলাকা গণনা করে (AUC1) সময়ের (0-15 মিনিট) বিপরীতে ATP উৎপন্ন (nmol/mg প্রোটিন) প্লট করে এবং নির্বিচারে এককগুলিতে প্রকাশ করা হয়েছিল। Herba Cistanche-চিকিত্সা করা কোষগুলির জন্য, ক্রমবর্ধমান ইনকিউবেশন সময়ের (3, 5, 7, 10 এবং 15 মিনিট) AUC1 মানগুলি চিকিত্সা না করা নমুনাগুলি থেকে একটি স্বতন্ত্র গড় নিয়ন্ত্রণ মানতে স্বাভাবিক করা হয়েছিল এবং শতাংশ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। তারপরে, ইনকিউবেশন সময়ের (3-15 মিনিট) বিপরীতে গ্রাফ প্লটিং শতাংশ নিয়ন্ত্রণ মানগুলির বক্ররেখার (AUC2) অধীনে এলাকা গণনা করা হয়েছিল এবং নির্বিচারে এককে চাপানো হয়েছিল। Herba Cistanche-চিকিত্সা করা গোষ্ঠীগুলির ডেটা সমীকরণ থেকে নিয়ন্ত্রণের শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল:
[AUC2(HerbaCistanche - চিকিত্সা করা)/AUC2(অচিকিৎসা করা)]×100 শতাংশ।
জটিল I–IV এবং সাইট্রেট সিন্থেস কার্যকলাপের পরিমাপ
মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন ট্রান্সপোর্ট চেইন (ETC) কমপ্লেক্স I–III কার্যক্রমগুলি বর্ণালী-নির্দিষ্ট সাবস্ট্রেট ব্যবহার করে স্পেকট্রোফটোমেট্রিক পদ্ধতি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল (জটিল I-এর জন্য NADH, জটিল II-এর জন্য succinate, এবং জটিল III-এর জন্য decylubiquinol) বর্ণনা করা হয়েছে (Grad & Lemire, 2004; Hsu et আল।, 2005; মার্ক এট আল।, 2001)। জটিল IV কার্যকলাপ সিগমা থেকে একটি সাইটোক্রোম সি অক্সিডেস অ্যাস কিট ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। মাইটোকন্ড্রিয়াল সাইট্রেট সিন্থেস কার্যকলাপ Srere (1969) পদ্ধতি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল।
প্রোটিন পরীক্ষা
মাইটোকন্ড্রিয়াল ভগ্নাংশ এবং সেল লাইসেটগুলির প্রোটিনের ঘনত্ব একটি বায়োরাড প্রোটিন অ্যাস কিট ব্যবহার করে বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিনকে স্ট্যান্ডার্ড হিসাবে ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল ({{0}}.038–0.600 mg/mL)৷
পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ
সমস্ত ডেটা গড় (SEM) এর গড় মান ত্রুটি হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। এগুলি বৈচিত্র্যের একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পোস্ট-হক একাধিক তুলনা এলএসডির সাথে করা হয়েছিল। পি মান<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
ফলাফল
ইঁদুরের মায়োকার্ডিয়াল মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি-জিসি-তে হার্বা সিস্টানচে চিকিত্সার প্রভাব
চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে, হার্বা সিস্টানচে এক্সট্র্যাক্টের সাথে 0.5 গ্রাম/কেজি পর্যন্ত ডোজে চিকিত্সা ইঁদুরের ক্ষেত্রে ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে মায়োকার্ডিয়াল মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP-GC বৃদ্ধি করে, উদ্দীপনার মাত্রা 89 শতাংশ 0.5 গ্রাম/কেজি ডোজ এ।
ইঁদুরের হৃদয়ে মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন পরিবহনে হারবা সিস্টানচে চিকিত্সার প্রভাব
বিচ্ছিন্ন মাইটোকন্ড্রিয়ায় ইলেকট্রন পরিবহনের পরিমাণ এমটিটি হ্রাস পর্যবেক্ষণ করে পরিমাপ করা হয়েছিল। পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত সাবস্ট্রেটটি হয় পাইরুভেট বা সাক্সিনেট ছিল। চিত্র 2a তে দেখানো হয়েছে, হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সা ডোজ-নির্ভরভাবে ইঁদুরের হৃদয়ে পাইরুভেট দ্বারা সমর্থিত মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেকট্রন পরিবহনের পরিমাণ বাড়িয়েছে, সর্বোত্তম উদ্দীপনা 0.5 গ্রাম/কেজি ডোজগুলিতে পর্যবেক্ষণযোগ্য। যাইহোক, হার্বা সিস্তানচে-চিকিত্সা করা ইঁদুরের হার্টে (চিত্র 2বি) সাক্সিনেট দ্বারা সমর্থিত মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন পরিবহনের পরিমাণে কোনও উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন সনাক্ত করা যায়নি।
ইঁদুরের হৃৎপিণ্ডে মাইটোকন্ড্রিয়াল শ্বাসযন্ত্রের জটিল ক্রিয়াকলাপে হারবা সিস্টানচে চিকিত্সার প্রভাব
চিত্র 3-তে দেখানো হয়েছে, হার্বা সিস্টানচে চিকিত্সার সর্বোত্তম মাত্রায় 0.5 গ্রাম/কেজি ইঁদুরের হৃদয়ে জটিল I (34 শতাংশ) এবং জটিল III (22 শতাংশ) কার্যকলাপ উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। ট্রাইকারবক্সিলিক অ্যাসিড চক্রের জন্য একটি মূল এনজাইম সাইট্রেট সিন্থেসের ক্রিয়াকলাপ, হারবা সিস্টানচে চিকিত্সা (চিত্র 3) দ্বারা প্রভাবিত হয়নি। ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ ইঙ্গিত দেয় যে জটিল I এবং III এর প্রোটিন স্তর হারবা সিস্টানচে চিকিত্সা দ্বারা প্রভাবিত হয়নি (ডেটা দেখানো হয়নি)।
H9c2 কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP-GC-তে Herba Cistanche-প্ররোচিত-পরিবর্তনের সময়কাল
ATP-GC-তে পরিবর্তনগুলি 2 থেকে 16 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে হার্বা সিস্তানচে- চিকিত্সা করা কোষগুলিতে (50 এবং 150 μg/mL) পরীক্ষা করা হয়েছিল। চিত্র 4-এ দেখানো হয়েছে, হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সা H9c2 কোষে সময়-নির্ভর এবং বাইফাসিক পদ্ধতিতে ATP-GC বৃদ্ধি করেছে, উভয় ওষুধের ঘনত্বের জন্য 8 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে সর্বাধিক উদ্দীপনা (যথাক্রমে 44 শতাংশ এবং 89 শতাংশ) পর্যবেক্ষণযোগ্য। যখন ইনকিউবেশন সময় 16 ঘন্টা প্রসারিত হয় তখন এটিপি-জিসি চিকিত্সাবিহীন নিয়ন্ত্রণ মানগুলিতে ফিরে আসে। এর আগে উদ্দীপনার সূচনা ঘটেছিল যখন কোষগুলিকে হারবা সিস্তানচে নির্যাস উচ্চতর ঘনত্ব (150 µg/mL) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল।
হারবার ঘনত্ব-নির্ভরতা
H9c2 কোষে ATP-GC-তে Cistanche-প্ররোচিত বৃদ্ধি
H9c2 কোষগুলিকে 4 ঘন্টার জন্য হার্বা সিস্তানচে নির্যাস ক্রমবর্ধমান ঘনত্ব (50– 300 μg/mL) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। চিত্র 5 দেখায় যে হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সা ঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে ATP- GC বৃদ্ধি করেছে, সর্বাধিক উদ্দীপনা (82 শতাংশ) 300 µg/mL ঘনত্বে পর্যবেক্ষণযোগ্য।
Cistanche নির্যাস ATP উৎপাদন বৃদ্ধি
আলোচনা
দেহের কার্যকারিতা যেমন পেশী সংকোচন এবং ইয়াং উদ্দীপনা দ্বারা অনাক্রম্য প্রতিক্রিয়া বৃদ্ধির জন্য সেলুলার ক্রিয়াকলাপগুলিকে উন্নীত করার জন্য এটিপি-এর ব্যবহার বৃদ্ধির প্রয়োজন হয়, যা মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ ফসফোরিলেশন দ্বারা সমর্থিত। বর্তমান সমীক্ষায়, হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সা ডোজ-নির্ভরভাবে ইঁদুরের হৃদয়ে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা এক্স ভিভো বৃদ্ধি করতে পাওয়া গেছে। এই পর্যবেক্ষণটি আমাদের পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে ইয়াং-উজ্জীবিত চীনা টোনিফাইং ভেষজগুলির মধ্যে, হার্বা সিস্তানচে চিকিত্সা মাউস হার্টে মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি প্রজন্মের উপর তুলনামূলকভাবে বৃহত্তর পরিমাণে উদ্দীপনা তৈরি করেছে (কো এট আল।, 2006)। মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি জেনারেশনের বৃদ্ধি পাইরুভেট দ্বারা চালিত মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন পরিবহন বৃদ্ধির সমান্তরাল ছিল কিন্তু সাক্সিনেট নয়, যেমন MTT হ্রাস দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছে। মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স I–IV-এর গতিগত পরিমাপ থেকে প্রাপ্ত ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে হারবা সিস্টানচে-চিকিত্সা করা হার্টে কমপ্লেক্স I এবং III উভয়ের ক্রিয়াকলাপ বৃদ্ধি পেয়েছে, জটিল I কার্যকলাপে উদ্দীপনার পরিমাণ জটিল III এর চেয়ে বড়। যেহেতু ট্রাইকারবক্সিলিক অ্যাসিড চক্রের একটি মূল এনজাইম, সাইট্রেট সিন্থেসের কার্যকলাপ প্রভাবিত হয়নি, তাই হার্বা সিস্টানচে চিকিত্সার মাধ্যমে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা বৃদ্ধিকে প্রধানত জটিল I এবং/অথবা III কার্যকলাপের উদ্দীপনার জন্য দায়ী করা যেতে পারে। হার্টের বেশিরভাগ ATP প্রয়োজনীয়তা মাইটোকন্ড্রিয়া দ্বারা পূরণ করা হয়, যা প্রায় সম্পূর্ণরূপে ফ্যাটি অ্যাসিড এবং গ্লুকোজের জটিল I (NADH)-সংযুক্ত অক্সিডেশনের উপর নির্ভর করে (স্ট্যানলি এট আল।, 1997; টেগটমেয়ার, 1998)। কমপ্লেক্স I, যা অন্যান্য শ্বাসযন্ত্রের কমপ্লেক্সের তুলনায় কম কার্যকলাপ প্রদর্শন করে, অক্সিডেটিভ ফসফোরিলেশন নিয়ন্ত্রণে একটি গুরুত্বপূর্ণ ফ্যাক্টর হিসাবে বিবেচিত হয়। এইভাবে, জটিল I ক্রিয়াকলাপের উদ্দীপনা বা বাধা কার্ডিয়াক শক্তির উপর একটি বড় প্রভাব ফেলতে পারে। যদিও ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ এই দুটি কমপ্লেক্সের প্রোটিন স্তরের কোন পরিবর্তন প্রকাশ করেনি (ডেটা দেখানো হয়নি), প্রোটিন থিওল স্ট্যাটাস এবং/অথবা লিপিড পরিবেশের পরিবর্তনের ফলে এনজাইমের বর্ধিত কার্যকলাপ হতে পারে (ডেভি এট আল।, 1998; প্যারাডিস) এট আল।, 2004)।
Herba Cistanche নির্যাসএটিপি জেনারেশন-বর্ধক প্রভাব তৈরি করতে পারে সিটুতে সংস্কৃত H9c2 কোষে। Herba Cistanche চিকিত্সার দ্বারা উত্পাদিত উদ্দীপক ক্রিয়াটির তুলনামূলকভাবে প্রাথমিক সূচনা, বিশেষ করে উচ্চ মাত্রায়, প্রাক্তন ভিভো গবেষণার পর্যবেক্ষণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যা নির্দেশ করে যে জটিল I এবং III প্রোটিনের সংশ্লেষণ ATP প্রজন্মের সাথে জড়িত - বৃদ্ধি করার সম্ভাবনা কম। কর্ম. হার্বা সিস্টানচে-প্ররোচিত বর্ধনের প্রদর্শনীতে ATP জেনারেশন সিটু অবস্থায় এই ধারণাটিকে সমর্থন করে যে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা বৃদ্ধি, যেমন প্রাক্তন ভিভো পরিমাপ দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছে, শুধুমাত্র ভিভো অবস্থায় ওষুধের চিকিত্সার দ্বারা উত্পাদিত একটি সমান্তরাল প্রভাব প্রতিফলিত করতে পারে। বিচ্ছিন্ন মাইটোকন্ড্রিয়া এবং সাবস্ট্রেট হিসাবে ম্যালেট এবং গ্লুটামেট ব্যবহার করে কালচারড কোষে এটিপি জেনারেশনের পরিমাপ হল স্টেট 3 মাইটোকন্ড্রিয়াল রেসপিরেশনের একটি পরোক্ষ পরিমাপ (চেন এট আল।, 2003)। একই বায়োলুমিনেসেন্ট এটিপি অ্যাস ব্যবহার করে, চিকিত্সা না করা ইঁদুরের বিভিন্ন টিস্যুতে মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি তৈরির হার, যেমনটি আগে আমাদের পরীক্ষাগারে রিপোর্ট করা হয়েছিল (লিউং এট আল।, 2005), সম্প্রতি প্রকাশিত ডেটার সাথে ভাল চুক্তিতে ছিল (ড্রু এবং লিউয়েনবার্গ, 2003) ) এটিপি উত্পাদন ক্ষমতা প্রাক্তন ভিভো এবং সিটু অ্যাসেস উভয় ক্ষেত্রেই এটিপি স্তরে সময়-নির্ভর পরিবর্তনের দুই-পদক্ষেপ একীকরণ দ্বারা অনুমান করা হয়েছিল। পর্যবেক্ষিত ড্রাগ-প্ররোচিত উদ্দীপক প্রভাব তাই তুলনা করার জন্য বড় করা হয়েছিল। ইঁদুরের হার্ট মাইটোকন্ড্রিয়া এক্স ভিভোতে হার্বা সিস্টানচে চিকিত্সার মাধ্যমে এটিপি উত্পাদন ক্ষমতা বৃদ্ধি করাটি সিটুতে H9c2 কোষে এটিপি উত্পাদনের উদ্দীপনা দ্বারা সমান্তরাল ছিল। মাউস হার্ট এক্স ভিভো (কো এট আল।, 2006)-এ ইয়াং-উজ্জীবিত' চাইনিজ টোনিফাইং ভেষজ, যার মধ্যে হারবা সিস্তানচেও রয়েছে ATP প্রজন্ম-বর্ধক কার্যকলাপের উপস্থিতির পরিপ্রেক্ষিতে, ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে H9c2 কোষে এটিপি উৎপাদন ক্ষমতা পরিমাপ সিটু ইয়াং-উদ্দীপক চীনা টোনিফাইং হার্বস বা ভেষজ সূত্রের জন্য ফার্মাকোলজিক্যাল পরীক্ষা হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।
উপসংহারে, হার্বা সিস্টানচে নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা ইঁদুরের হার্ট এক্স ভিভো এবং সিটুতে H9c2 কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা বাড়াতে পারে। ফলাফলগুলি আমাদের অনুমানকে সমর্থন করে যে ইয়াং-ইনভাইগোরেশনের ফার্মাকোলজিক্যাল ভিত্তি মাইটোকন্ড্রিয়াল এটিপি উত্পাদনকে উদ্দীপিত করার মাধ্যমে শরীরের কার্যকারিতা বৃদ্ধির সাথে জড়িত।
Herba Cistanche নির্যাস মাইটোকন্ড্রিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা বাড়ায়
তথ্যসূত্র
চেন পি (1998): টনিক হার্বস। উন্নত TCM সিরিজ। বেইজিং, চীন, সায়েন্স প্রেস, পৃষ্ঠা 233-320।
চেন Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): মাইটোকন্ড্রিয়া দ্বারা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির উৎপাদন: জটিল III এর কেন্দ্রীয় ভূমিকা। J Biol Chem 278: 36027– 36031।
কোহেন জি, ফারুকি আর, কেসলার এন (1997): পারকিনসন রোগ: মনোমাইন অক্সিডেস এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন প্রবাহের মধ্যে একটি নতুন লিঙ্ক। Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
ডেভি জিপি, পিউচেন এস, ক্লার্ক জেবি (1998): মস্তিষ্কের মাইটোকন্ড্রিয়ায় শক্তির থ্রেশহোল্ড। নিউরোডিজেনারেশনে সম্ভাব্য সম্পৃক্ততা। J Biol Chem 273: 12753–12757।
ড্রু বি, লিউয়েনবার্গ সি (2003): বিচ্ছিন্ন মাইটোকন্ড্রিয়ায় এটিপি উৎপাদন পরিমাপের পদ্ধতি: বয়স এবং ক্যালরির সীমাবদ্ধতা সহ ফিশার ইঁদুরের মস্তিষ্ক এবং লিভার মাইটোকন্ড্রিয়ায় এটিপি উৎপাদন। Am J Physiol Regul Integr Comp Phys-iol 285: R1259–R1267.
ইভান ডাব্লুএইচ (1992): ঝিল্লি এবং কোষের অর্গানেলগুলির বিচ্ছিন্নতা এবং বৈশিষ্ট্য। ইন: রিকউড ডি, এড। প্রস্তুতিমূলক সেন্ট্রিফিউগেশন: একটি ব্যবহারিক পদ্ধতি। নিউ ইয়র্ক, অক্সফোর্ড ইউনিভার্সিটি প্রেস, পৃষ্ঠা 223-270।
Grad LI, Lemire BD (2004): Caenorhabditis elegans-এ মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স I মিউটেশন সাইটোক্রোম সি অক্সিডেসের ঘাটতি, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং ভিটামিন-প্রতিক্রিয়াশীল ল্যাকটিক অ্যাসিডোসিস তৈরি করে। হিউম্যান মোল জেনেটিক্স 13: 303–314।
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): ইঁদুরের হৃৎপিণ্ড থেকে একটি ক্লোনাল কোষ (H9c2) লাইনের রূপগত, জৈব রাসায়নিক এবং ইলেক্ট্রোফিজিওলজিকাল বৈশিষ্ট্য। সার্ক রেস 69: 1476–1486।
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): ডোপামিনার্জিক কোষে সিলেক্টিভ মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স I নিষেধের ফলে গ্লুটাথিয়ন হ্রাস পেরোক্সিনাইট্রাইট জড়িত নয় এমন একটি NO-মধ্যস্থ পথের মাধ্যমে হয়: পারকিনসন রোগের জন্য প্রভাব। জে নিউরোকেম 92: 1091–1103।
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): চাইনিজ টোনিফাইং ভেষজ 'ইয়াং-উদ্দীপক' এর একটি বৈশিষ্ট্যগত ফার্মাকোলজিক্যাল অ্যাকশন: মায়োকার্ডিয়াল ATP উৎপাদন ক্ষমতা বৃদ্ধি। ফাইটোমেডিসিন 13: 636– 642।
কো কেএম, ম্যাক ডিএইচ, চিউ পিওয়াই, পুন এমকেটি (2004): চীনা ওষুধে 'ইয়াং-ইনভিগোরেশন' এর ফার্মাকোলজিকাল ভিত্তি। ট্রেন্ডস ফার্মাকোল সাই 25: 3–6।
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Cistanche deserticola Ma-এর অ্যান্টি-এজিং ইফেক্ট নিয়ে গবেষণা। সাংহাই জে ট্রেড চিন মেড 11: 22-23।
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): কুকুরের গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনালের হারবা সিস্টাঞ্চ থেকে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের বিপাকীয় নিয়ন্ত্রণ। Yao Xue Xue Bao 36: 432– 435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): একটি ইয়াং- উদ্দীপক চীনা ভেষজ সূত্র পুরুষ ও মহিলা ইঁদুরের বিভিন্ন টিস্যুতে মাইটোকন্ড্রিয়াল কার্যকরী ক্ষমতা এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা বাড়ায়। রিজুভেন রেস 8: 238-247।
লিন LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): ইঁদুরের মধ্যে Cistanche deserticola দ্বারা সৃষ্ট অ্যান্টিনোসাইসেপ্টিভ এবং অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি কার্যকলাপ। J Ethnopharmacol 83: 177– 182।
লু এমসি (1998): সিস্তানচে ডেসার্টিকোলার নিরাময়কারী প্রভাবের উপর অধ্যয়ন। J Ethnopharmacol 59: 161–165।
মার্ক এ, বার্চ এম, ডগলাস এমটি (2001): মানব কোষ এবং টিস্যু থেকে বিচ্ছিন্ন মাইটোকন্ড্রিয়ায় মাইটোকন্ড্রিয়াল শ্বাসযন্ত্রের জটিল কার্যকলাপ পরীক্ষা করা। মেথ সেল বায়োল 65: 97-117।
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Cistanche deserticola কোষের বৃদ্ধি এবং phenylethanoid glycosides উৎপাদনের উপর বিরল পৃথিবীর উপাদানের প্রভাব। জে বায়োটেক 102: 129–134।
প্যারাডিস জি, পেট্রোসিলো জি, পিস্টোলেস এম, ডি ভেনোসা এন, ফেদেরিকি এ, রুগিরো এফএম (2004): ইস্কেমিক/রিপারফিউজড ইঁদুরের হার্টে মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স I কার্যকলাপের হ্রাস: প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি এবং কার্ডিওলিপিনের জড়িত হওয়া। সার্ক রেস 94: 53– 59।
Srere PA (1969): সাইট্রেট সিন্থেস। সাইট্রিক এসিড চক্র. মেথ এনজাইমল 13: 3-11।
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): স্বাভাবিক এবং ইস্কেমিক অবস্থার অধীনে মায়োকার্ডিয়াল কার্বোহাইড্রেট বিপাক নিয়ন্ত্রণ। ফার্মাকোলজিকাল হস্তক্ষেপের জন্য সম্ভাব্য। কার্ডিওভাস্ক রেস 33: 243–257।
Taegtmeyer H (1998): ইস্কেমিক এবং reperfused হৃদযন্ত্রের পেশীতে ফার্মাকোথেরাপির লক্ষ্য হিসাবে শক্তি সাবস্ট্রেট বিপাক। হার্ট মেটাব 1: 5-9।
Tian XF, Pu XP (2005): Cistanches salsa থেকে পাওয়া ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড নিউরনে 1-মিথাইল-4- ফেনাইলপাইরিডিনিয়াম আয়ন দ্বারা প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দেয়। J Ethnopharmacol 97: 59–63।
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Cistanche deserticola-এর ডালপালা থেকে বিচ্ছিন্ন একটি অ্যারাবিনোগাল্যাক্টান সংস্কৃত লিম্ফোসাইটের বিস্তারকে প্ররোচিত করে। Int J Biol Macromol 37: 278–282।
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Cistanche deserticola থেকে phenylethanoids এর হেপাটোপ্রোটেকটিভ কার্যকলাপ। Planta Med 64: 120– 125।
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Cistanche deserticola থেকে phenylethanoids এর অ্যান্টিঅক্সিডেটিভ প্রভাব। বিওল ফার্ম বুল 19: 1580-1585।
