সিরাম অ্যামাইলয়েড পি ডিপোজিশন হল মুখোশযুক্ত আইজিজি কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথির একটি সংবেদনশীল এবং নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্য

যোগাযোগ: emily.li@wecistanche.com

ক্রিস্টোফার পি. লারসেন1, শ্রী জি. শর্মা1, টিফানি এন. ক্যাজা1, ড্যানিয়েল জে. কেনান1, অ্যারন জে. স্টোরি2, রিকি ডি. এডমন্ডসন2, ক্রিশ্চিয়ান হারজোগ2, এবং জন এম. আর্থার2

কীওয়ার্ড:গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস; মুখোশযুক্ত আমানত; ভর বর্ণালিবীক্ষণ; ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি; উপপিথেলিয়াল আমানত

Cistanche কিডনির কার্যকারিতা উন্নত করতে পারে

মুখোশযুক্ত আইজিজি কাপ্পা ডিপোজিট (এমজিএমআইডি) সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি অনন্য হিস্টোপ্যাথোলজি সহ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের একটি সম্প্রতি বর্ণিত প্যাটার্ন। প্যাটার্নটি উপপিথেলিয়াল এবং/অথবা মেসাঞ্জিয়াল দ্বারা চিহ্নিত করা হয়ইমিউনরুটিন ইমিউনোফ্লোরোসেন্স দ্বারা ইমিউনোগ্লোবুলিন স্টেনিংয়ের জন্য "মুখোশ" আমানত কিন্তু প্রোটিজ হজমের পরে আইজিজি এবং কাপ্পা লাইট চেইনের জন্য শক্তভাবে দাগ। গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের এই প্যাটার্নের রোগীরা সাধারণত অল্প বয়স্ক মহিলা যারা প্রোটিনুরিয়া এবং অটোইমিউন রোগের অস্পষ্ট ইতিহাস যেমন লো টাইটার অ্যান্টিনিউক্লিয়ার অ্যান্টিবডি সহ উপস্থিত থাকে। এখানে আমরা নয়টি এমজিএমআইডি রেনাল বায়োপসি থেকে লেজার ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলির ভর স্পেকট্রোমেট্রি প্রোফাইলটিকে আটটি বায়োপসির সাথে ঝিল্লিযুক্ত গ্লোমেরুলোপ্যাথির অন্যান্য নিদর্শনগুলির সাথে তুলনা করেছি। এমজিএমআইডি-তে সর্বাধিক উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পাওয়া প্রোটিনটি ছিল সিরাম অ্যামাইলয়েড পি। ইমিউনোস্টেইনিং দেখায় যে সিরাম অ্যামাইলয়েড পি MGMID-এর গ্লোমেরুলিতে IgG-এর সাথে একত্রিত হয়েছে কিন্তু PLA2R-সম্পর্কিত ঝিল্লিযুক্ত গ্লোমেরুলোপ্যাথির সাথে নয়। সিরাম অ্যামাইলয়েড পি সমস্ত 32টি এমজিএমআইডি বায়োপসির গ্লোমেরুলিতে ইতিবাচক ছিল কিন্তু অন্যান্য ধরণের মেমব্রানাস গ্লোমেরুলোপ্যাথি যেমন PLA2R এবং THSD7A এর সাথে যুক্ত বায়োপসিতে নেতিবাচক। 173টি বায়োপসির মধ্যে গ্লোমেরুলার সিরাম অ্যামাইলয়েড পি স্টেনিং সহ চারটি বায়োপসি ছিল যা এমজিএমআইডি বা অ্যামাইলয়েডোসিসের মানদণ্ড পূরণ করেনি। পজিটিভ সিরাম অ্যামাইলয়েড পি স্টেনিং সহ এই চারটি বায়োপসিতে আইজিজি কাপ্পা জমার সাথে গ্লোমেরুলোপ্যাথির একটি ঝিল্লির প্যাটার্ন ছিল যা শুধুমাত্র "মাস্কিং" এর অভাবের কারণে এমজিএমআইডি থেকে আলাদা ছিল। এইভাবে, সিরাম অ্যামাইলয়েডের জন্য গ্লোমেরুলার ডিপোজিটের মধ্যে ইতিবাচক দাগ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের একটি অনন্য রূপকে চিহ্নিত করে সম্ভবত রোগের একটি সাধারণ প্যাথোফিজিওলজিক প্রক্রিয়া ভাগ করে নেয়।

মুখোশযুক্ত আইজিজি কাপা ডিপোজিট (এমজিএমআইডি) সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি হল 2014 সালে বর্ণিত গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের একটি হিস্টোপ্যাথলজিক প্যাটার্ন, যা ছিল মুখোশযুক্ত গ্লোমেরুলার ডিপোজিট নামে অভিহিত করা প্রথম বর্ণনা। আইজিজি কাপ্পা সীমাবদ্ধতার সাথে আমানত। কৌতূহলজনকভাবে, যদিও কমপ্লিমেন্ট কম্পোনেন্ট 3 (C3) স্টেনিং প্রায়ই হিমায়িত টিস্যুতে রুটিন ইমিউনোফ্লুরোসেন্স দ্বারা স্পষ্ট হয়, Ig স্টেনিং প্রায়শই মাস্ক করে, যার অর্থ এটি রুটিন ইমিউনোফ্লুরোসেন্স দ্বারা মিথ্যা নেতিবাচক স্টেনিং দেখায় কিন্তু ধনাত্মক দাগ দেখায় যখন বারবার প্রোটেড-জেস্টেস প্যারাফিজিন টিস্যুতে পুনরাবৃত্তি হয়। এইভাবে, যদি না প্যাথলজিস্ট এই সত্তার জন্য সন্দেহের উচ্চ সূচক বজায় না রাখেন, এটি C3 গ্লোমেরুলোপ্যাথি হিসাবে ভুল নির্ণয় করা যেতে পারে। গ্লোমেরুলার ডিপোজিটে এই মাস্কিং ঘটনাটি দেখানোর জন্য বর্ণনা করা হয়েছে এমন অন্যান্য সত্ত্বাগুলির মধ্যে রয়েছে মুখোশযুক্ত মনোটাইপিক আইজি ডিপোজিট সহ মেমব্রানোপ্রোলাইফেরেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস এবং ক্রায়োগ্লোবুলিনেমিক গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস। 2,3

বায়োপসিতে এমজিএমআইডি পাওয়া রোগীরা সাধারণত অল্পবয়সী মহিলা<40 years="" of="" age,="" and="" many="" have="" positive=""> serologic study results such as antinuclear antibodies, although few carry a diagnosis of any well-defined autoimmune disease such as lupus.4 Mean proteinuria in a recent case series of 41 patients was 3.5 g/24 h, and mean serum creatinine was found to be 1.4 mg/dl.4 The deposits of all reported cases that could be tested for IgG subclass were of the IgG1 kappa subclass. Despite this monotypic staining on biopsy, the vast majority of patients tested (>95 শতাংশ) সিরাম প্রোটিন ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা মনোক্লোনাল Igs-এর জন্য নেতিবাচক ছিল, এবং অন্তর্নিহিত হেমাটোলজিক ম্যালিগন্যান্সির সাথে কোনও ক্ষেত্রেই দেখা যায়নি।

এটি অনুমান করা হয়েছিল যে এমজিএমআইডি রোগীদের মধ্যে ভাগ করা ক্লিনিকোপ্যাথলজিক ফলাফলগুলি তাদের রোগের চালনাকারী একটি সাধারণ আণবিক প্যাথোফিজিওলজিক প্রক্রিয়ার ইঙ্গিত হতে পারে। এই সত্তাকে প্রথম রিপোর্ট করার আমাদের উদ্দেশ্য ছিল আরও বিশ্লেষণের জন্য একটি দলকে সংজ্ঞায়িত করা। 1 আমরা এখানে এমজিএমআইডি গ্লোমেরুলির জমায় অনন্যভাবে পাওয়া প্রোটিন সিরাম অ্যামাইলয়েড পি কম্পোনেন্ট (এসএপি) এর উপস্থিতি বর্ণনা করি। গ্লোমেরুলার ডিপোজিটে এসএপি-এর জন্য ইমিউনোস্টেইনিং এমজিএমআইডি রোগ নির্ণয়ের জন্য একটি সংবেদনশীল এবং নির্দিষ্ট কৌশল যা প্যাথোজেনিক অন্তর্দৃষ্টিও প্রদান করে।

চিত্র 1|সিরাম অ্যামাইলয়েড পি–কম্পোনেন্ট (এসএপি) মুখোশযুক্ত আইজিজি কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি রোগীদের মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে সমৃদ্ধ হয়। পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য MaxQuant (ম্যাক্স প্ল্যাঙ্ক ইনস্টিটিউট অফ বায়োকেমিস্ট্রি, প্লেনেগ, জার্মানি) থেকে স্বাভাবিককৃত তীব্রতা-ভিত্তিক পরম পরিমাণ নির্ধারণের মানগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। ড্যাশ করা লাইনগুলি ভাঁজ পরিবর্তন এবং পি-মানের জন্য হিউরিস্টিক কাটঅফগুলিকে চিত্রিত করে। (a) একটি আগ্নেয়গিরির প্লট যা 3টি ফসফোলিপেস A2 রিসেপ্টর (PLA2R)-পজিটিভ মেমব্রেনাস কেস অন্যদের সাথে তুলনা করে 2টি প্রোটিন চিহ্নিত করে যা উপরের ডান চতুর্ভুজায় স্পষ্ট বহির্মুখী। (b) আগ্নেয়গিরির প্লট 2 থ্রম্বোস্পন্ডিন টাইপ 1 ডোমেন-ধারণকারী 7A (THSD7A)-এর সাথে তুলনা করে – পজিটিভ মেমব্রানাস কেস অন্যদের সাথে 2টি প্রোটিন সনাক্ত করে যা THSD7A এর সাথে সবচেয়ে বেশি ভাঁজ পরিবর্তন দেখায়। (c) একটি আগ্নেয়গিরির প্লট ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথির নমুনার সাথে মুখোশযুক্ত IgG কাপ্পা জমার সাথে অন্যান্য সমস্ত ধরণের ঝিল্লির ক্ষেত্রে 6টি প্রোটিন সনাক্ত করে যা উপরের ডান চতুর্ভুজ অংশে স্পষ্ট বহিরাগত। C6, পরিপূরক উপাদান 6; C7, পরিপূরক উপাদান 7; CFHR1, পরিপূরক ফ্যাক্টর-এইচ-সম্পর্কিত প্রোটিন 1; HP1BP3, heterochromatin প্রোটিন 1 বাঁধাই প্রোটিন 3; HPRT1, hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1; IGHG3, Ig ভারী ধ্রুবক গামা 3.

ফলাফল

লেজার-ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলির ভর স্পেকট্রোমেট্রি

এমজিএমআইডি-র 9টি ক্ষেত্রে লেজার-ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলির ভর স্পেকট্রোমেট্রি বিশ্লেষণকে মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথি (এমজি) এর 8টি ক্ষেত্রের সাথে তুলনা করা হয়েছে যার মধ্যে 3টি ফসফোলিপেস এ2 রিসেপ্টর (পিএলএ2আর)-পজিটিভ এমজি, থ্রম্বোস্পনডিন টাইপ 7-এ ডোমেন-এর 2টি কেস রয়েছে। THSD7A)-পজিটিভ এমজি, এবং লুপাস এমজির 3টি ক্ষেত্রে। এই বিশ্লেষণে মোট 1695টি প্রোটিন সনাক্ত করা হয়েছিল। এমজি রোগের প্যাথোজেনেসিসের সাথে জড়িত প্রোটিনগুলি ভর স্পেকট্রোমেট্রি দ্বারা সনাক্ত করা যায় কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য একটি প্রুফ-অফ-প্রিন্সিপল বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি পরিচিত ঝিল্লির ধরণের জন্য, প্রোটিন ডিফারেনশিয়াল প্রাচুর্যকে স্বাভাবিককৃত তীব্রতা-ভিত্তিক পরম পরিমাণ নির্ধারণ (iBAQ) মান ব্যবহার করে অবশিষ্ট গোষ্ঠীগুলির সাথে তুলনা করা হয়েছিল। ওয়েলচের টি-টেস্ট ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, এবং ফলাফলগুলি একটি আগ্নেয়গিরির প্লটে কল্পনা করা হয়েছিল। PLA2R-এর সাথে যুক্ত MG-এর ক্ষেত্রে PLA2R উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি পরিমাণে ছিল এবং সবচেয়ে শক্তিশালী ভাঁজ পরিবর্তন দেখিয়েছিল (চিত্র 1a)। THSD7A THSD7A-সংশ্লিষ্ট MG-তে সবচেয়ে শক্তিশালী ভাঁজ পরিবর্তনগুলি প্রদর্শন করেছে, যদিও এই গোষ্ঠীতে নমুনার আকার কম হওয়ার কারণে একটি বৃহত্তর P-মান রয়েছে (n ¼ 2; চিত্র 1b)। সামগ্রিকভাবে, এই প্রুফ-অফ-প্রিন্সিপল অ্যানালাইসিস ডেমনটি দেখিয়েছে যে লেজার-ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলির ভর স্পেকট্রোমেট্রি ঝিল্লিযুক্ত গ্লোমেরুলোপ্যাথিতে রোগের প্যাথোজেনেসিসের জন্য গুরুত্বপূর্ণ প্রোটিন সনাক্ত করতে পারে।

আমরা পরবর্তীতে এই পদ্ধতি ব্যবহার করে এমজিএমআইডি প্যাথোজেনেসিসে সম্ভাব্যভাবে জড়িত প্রোটিনগুলি সনাক্ত করার চেষ্টা করেছি। এমজিএমআইডি নমুনাগুলিতে অন্যান্য গোষ্ঠীর তুলনায় মোট 6 টি প্রো টিন উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি পরিমাণে ছিল (সারণী 1)। সর্বোচ্চ ভাঁজ পরিবর্তন সহ প্রোটিনটি ছিল এসএপি (চিত্র 1 সি)। অবশিষ্ট প্রোটিনগুলির মধ্যে রয়েছে IgG Kappa, 3টি পরিপূরক প্রোটিন এবং heterochromatin প্রোটিন 1–বাইন্ডিং প্রোটিন 3 (HP1BP3)। এসএপি শীর্ষ প্রার্থী হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল কারণ এটি সমস্ত এমজিএমআইডি নমুনায় সনাক্ত করা হয়েছিল এবং নন-এমজিএমআইডি নমুনার তুলনায় প্রাচুর্যের মধ্যে সর্বাধিক পার্থক্য দেখিয়েছিল। IgG কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথির ক্ষেত্রে লেজার-ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলিতে ভর স্পেকট্রোমেট্রি দ্বারা চিহ্নিত সমস্ত Igs পরিপূরক সারণী S1-এ দেখানো হয়েছে। সমস্ত প্রোটিনের নমুনা দ্বারা বর্ণালী গণনা যা MGMID নমুনায় $1 log2 বর্ধিত প্রাচুর্য দেখিয়েছে এবং একটি P-মান #0.1 পরিপূরক সারণি S2 এ দেখানো হয়েছে।

সিস্তানচেউন্নত করতে পারেনকিডনিফাংশন

ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথির ক্ষেত্রে এসএপি স্টেনিং

এসএপি প্রোটিনের বিরুদ্ধে একটি পলিক্লোনাল খরগোশের অ্যান্টিবডি (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ) এমজিএমআইডি-র ক্ষেত্রে গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন বরাবর শক্তিশালী ইতিবাচক দাগ দেখায় যা কনফোকাল বিশ্লেষণের মাধ্যমে IgG-এর সাথে একত্রিত হয়। এসএপি পিএলএ2আর-সম্পর্কিত এমজি (চিত্র 2) থেকে গ্লোমেরুলিতে আইজিজি-র সাথে একত্রিতকরণ দেখায়নি। HP1BP3 এর বিরুদ্ধে একটি পলিক্লোনাল খরগোশের অ্যান্টিবডি এমজিএমআইডি-র সাথে 4টি বায়োপসিতে পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং 4টি ক্ষেত্রেই গ্লোমেরুলার জমাতে নেতিবাচক দাগ দেখা গেছে।

SAP স্টেনিং মোট 211 তে সঞ্চালিত হয়েছিলকিডনিবায়োপসিগ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস সহ (সারণী 2)। ইমিউন-টাইপ ডিপোজিট সহ মোট 36 টি ক্ষেত্রে SAP এর জন্য ইতিবাচক দাগ রয়েছে। যে সমস্ত ক্ষেত্রে ইতিবাচক দাগ রয়েছে সেগুলির মধ্যে কিছু নির্দিষ্ট হিস্টোপ্যাথলজিক বৈশিষ্ট্য রয়েছে যার মধ্যে রয়েছে আইজিজি কাপ্পা সীমাবদ্ধতার সাথে মেসাঞ্জিয়াল এবং সাবপিথেলিয়াল জমার উপস্থিতি এবং হালকা মাইক্রোস্কোপির মাধ্যমে কোনও এন্ডোক্যাপিলারি বা মেমব্রানোপ্রোলাইফেরেটিভ পরিবর্তন নেই। সমস্ত ক্ষেত্রে এসএপি নেতিবাচক ছিল, মুখোশযুক্ত আমানত যা এমজিএমআইডি ছিল না, যার মধ্যে 3টি ক্রায়োগ্লোবুলিনেমিক গ্লোমেরুলোনেফ্রাইটিস এবং 3টি মুখোশযুক্ত মেমব্রানোপ্রোলাইফেরেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস। মোনোক্লোনাল আইজি ডিপোজিট (পিজিএনএমআইডি) সহ প্রলিফারেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের 19 টি ক্ষেত্রেও এটি নেতিবাচক ছিল, যার মধ্যে আইজিজি1 কাপ্পা (4টি ক্ষেত্রে), আইজিজি2 ল্যাম্বডা (1টি ক্ষেত্রে), আইজিজি 3 কাপ্পা (8টি ক্ষেত্রে), এবং আইজিজি3 ল্যাম্বডা (6টি ক্ষেত্রে) রয়েছে। ) পলিক্লোনাল মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথির (PLA2R, THSD7A, লুপাস এবং সেগমেন্টাল) 30 টি ক্ষেত্রেই SAP-এর জন্য নেতিবাচক ছিল। গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের অতিরিক্ত রূপগুলিও অধ্যয়ন করা হয়েছিল এবং নেতিবাচক ছিল। সংক্রমণ-সম্পর্কিত গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের মধ্যে, আইজিজি স্টেনিংয়ের জন্য 7টি ইতিবাচক এবং 6টিতে সাবপিথেলিয়াল কুঁজ জমার প্রমাণ ছিল। প্রত্যাশিত হিসাবে, অ্যামাইলয়েডোসিসের সমস্ত 6 টি ক্ষেত্রেই অ্যামাইলয়েড জমাতে ইতিবাচক দাগ দেখা গেছে। যাইহোক, জমার ময়লা প্যাটার্নটি এমজিএমআইডি-র ক্ষেত্রে উপস্থিত দানাদার দাগের সম্পূর্ণ বিপরীত ছিল। বিভিন্ন ধরণের রেনাল রোগ থেকে এসএপি দাগের উপর গ্লোমেরুলির প্রতিনিধি ফটোমাইক্রোগ্রাফগুলি পরিপূরক চিত্র S1 এ দেখানো হয়েছে।

এমজিএমআইডি হিসাবে পূর্বে শনাক্ত করা সমস্ত 32 টি ক্ষেত্রেই এসএপির জন্য ইতিবাচক ছিল। এছাড়াও, মেমব্রানাস গ্লোমেরুলোপ্যাথির 25 টি ক্ষেত্রে 4 টি থেকে গ্লোমেরুলিতে এসএপি-এর জন্য ইতিবাচক দাগ ছিল একঘেয়ে IgG ডিপোজিশন যা রুটিন অনুসারে মাস্ক করেনি।

ইমিউনোফ্লুরোসেন্স, IgG1 কাপ্পা সহ 13 টি ক্ষেত্রে 4 টি, IgG1 ল্যাম্বডা সহ 2 টি ক্ষেত্রে 0, IgG2 কাপ্পা সহ 5 টি ক্ষেত্রে 0, IgG3 কাপ্পা সহ 4 টি ক্ষেত্রে 0 সহ, এবং {{ IgG4 কাপ্পা সহ 1 টি ক্ষেত্রে 12}}। সামগ্রিকভাবে, 36 টির মধ্যে 32 (89 শতাংশ) SAP- পজিটিভ গ্লোমেরুলোপ্যাথি মুখোশযুক্ত এবং এমজিএমআইডি ক্যাটাগরিতে ফিট ছিল, যেখানে 36 টির মধ্যে বাকি 4টি (11 শতাংশ) মুখোশমুক্ত ছিল এবং আইজিজি1 কাপা জমার সাথে এমজি হিসাবে নির্ণয় করা হয়েছিল। মোনোটাইপিক মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথির রোগী যারা মুখোশ পরেননি কিন্তু SAP এর জন্য ইতিবাচক ছিলেন তাদের গড় বয়স ছিল 33 বছর, মহিলা-থেকে-পুরুষ অনুপাত 4:0। মোনোটাইপিক মেমব্রানাস গ্লোমেরুলোপ্যাথির ক্ষেত্রে যেগুলি মুখোশ ছিল না কিন্তু SAP-এর জন্য নেতিবাচক ছিল তাদের গড় বয়স ছিল 59.3 বছর এবং মহিলা-থেকে-পুরুষ অনুপাত 15:4।

টেবিল 1|রোগীদের গ্লোমেরুলিতে প্রোটিন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথিমুখোশযুক্ত IgG কাপ্পা আমানত সহ, যেমন ভর স্পেকট্রোমেট্রি দ্বারা দেখানো হয়েছে

এসএপি-তে সিরাম প্রতিক্রিয়াশীলতা

এমজিএমআইডি আক্রান্ত 22 রোগীর সেরা, PLA2R-পজিটিভ মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথির 12 জন এবং 6টি স্বাভাবিক নিয়ন্ত্রণ এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) দ্বারা SAP-এর IgG প্রতিক্রিয়ার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। যদিও প্রতিটি গোষ্ঠীর রোগীদের মধ্যে কিছু পরিবর্তনশীলতা বিদ্যমান ছিল, তবে গ্রুপগুলির মধ্যে SAP এর দিকে IgG প্রতিক্রিয়াতে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না (পরিপূরক চিত্র S2)।

চিত্র 2|আইজিজি এবং সিরাম অ্যামাইলয়েড পি-কম্পোনেন্ট (এসএপি) এর একত্রীকরণ। (a–c) মুখোশযুক্ত IgG কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি নির্ণয় করা রোগীর রেনাল বায়োপসি নমুনায় ইমিউনোফ্লোরোসেন্স পরীক্ষাগুলি (a) SAP এবং (b) IgG এর জন্য দানাদার গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেনের দাগ দেখায়। (c) গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন ডিপোজিটে SAP এবং IgG এর শক্তিশালী সমষ্টিকরণ রয়েছে। (d–f) 3টি ফসফোলিপেসেস A2 রিসেপ্টর-পজিটিভ মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথি সহ রোগীর রেনাল বায়োপসি নমুনায় সম্পাদিত ইমিউনোফ্লোরোসেন্স পরীক্ষাগুলি দেখায় (d) SAP-এর জন্য নেতিবাচক গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন স্টেনিং এবং (e) পজিটিভ গ্রানুলার গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন IG-এর জন্য। (f) 3টি ফসফোলিপেসেস A2 রিসেপ্টর-সম্পর্কিত মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথি সহ এই রোগীর মধ্যে সমষ্টিকরণের অভাব রয়েছে। এই ইমেজ দেখার অপ্টিমাইজ করার জন্য, সারণি 2|এ নিবন্ধটির অনলাইন সংস্করণ দেখুন রেনাল বায়োপসিতে সিরাম অ্যামাইলয়েড পি কম্পোনেন্ট (এসএপি) স্টেনিংয়ের ফলাফল

এএ, অ্যামাইলয়েড এ; AL, amyloid লাইট চেইন; C3, পরিপূরক উপাদান 3; জিবিএম, গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন; এমজি, ঝিল্লিযুক্ত গ্লোমেরুলোপ্যাথি; MGMID, মুখোশযুক্ত IgG কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি; MPGN, membranoproliferative; গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস; PGMNID, মনোক্লোনাল আইজিজি কাপ্পা জমা সহ প্রলিফারেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস; PLA2R, phospholipase A2 রিসেপ্টর; THSD7A, থ্রম্বোস্পন্ডিন টাইপ 1 ডোমেইন-সম্বলিত 7A।

আলোচনা

MGMID হল গ্লোমেরুলোপ্যাথির একটি সম্প্রতি বর্ণিত এবং অনন্য প্যাটার্ন যা উপপিথেলিয়াল এবং মেসাঞ্জিয়াল ডিপোজিট দ্বারা চিহ্নিত করা হয় যা প্যারাফিন IF (চিত্র 3) দ্বারা IgG কাপাকে দাগ দেয়। গ্লোমেরুলোপ্যাথির এই প্যাটার্নের রোগীরা কম বয়সী মহিলা (বয়স<40 years)="" and="" often="" have="" vague="" autoimmune="" phenomena.="" we="" report="" here="" the="" discovery="" by="" mass="" spectrometry="" of="" increased="" sap="" in="" the="" glomeruli="" of="" these="" patients="" and="" show="" positive="" staining="" for="" this="" protein="" in="" the="" glomerular="" deposits="" of="" 100%="" of="" cases="" diagnosed="" as="" mgmid.="" positive="" staining="" for="" sap="" was="" also="" tested="" in="" a="" wide="" variety="" of="" igmediated="" glomerulonephritis="" types="" and="" found="" to="" be="" present="" in="" 4="" of="" the="" 173="" cases="" tested="" that="" were="" not="" diagnosed="" as="" mgmid="" or="" amyloidosis.="" all="" of="" these="" cases="" that="" stained="" positive="" for="" sap="" but="" were="" not="" diagnosed="" as="" mgmid="" shared="" histopathologic="" fifindings="" with="" mgmid,="" including="" the="" pattern="" of="" immune="" deposition="" and="" igg1="" kappa="" restriction,="" only="" differing="" by="" the="" fact="" that="" they="" did="" not="" mask="" by="" routine="" immunofluorescence.="" additionally,="" these="" patients="" were="" demographically="" similar="" to="" mgmid="" patients="" in="" that="" they="" tended="" to="" be="" young="">

SAP হল পেন্ট্রাক্সিন পরিবারের মধ্যে একটি 25-kDa পেন্টামেরিক প্রোটিন যা APCS জিন দ্বারা এনকোড করা হয় এবং এটি প্রচুর পরিমাণে সিরামে এবং গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেনের একটি উপাদান হিসাবে থাকে৷5 যদিও SAP এর সঠিক কার্যকারিতা অস্পষ্ট, এটি জানা যায় পরিপূরক উপাদান, এপোলিপোপ্রোটিন এবং জমাট এবং প্রোটিওলাইসিসের নিয়ন্ত্রক সহ বিভিন্ন ধরণের প্রোটিনের সাথে প্লাজমাতে মিথস্ক্রিয়া করতে।6 এটি প্রোটিন, লাইপোপ্রোটিন এবং ডিএনএ সহ লিগান্ডগুলির সাথে স্থিতিশীল ক্যালসিয়াম-নির্ভর মিথস্ক্রিয়া গঠন করে, তাদের অবক্ষয়ের বিরুদ্ধে রক্ষা করে। SAP একটি দ্রবণীয় প্যাটার্ন-স্বীকৃতির অণু হিসাবে কাজ করে যা সহজাত ইমিউন প্রতিক্রিয়ার সাথে জড়িত, বিভিন্ন ধরণের প্যাথোজেন- এবং ক্ষতি-সম্পর্কিত আণবিক নিদর্শনগুলিকে স্বীকৃতি দেয়, যার মধ্যে মাইক্রোবিয়াল উপাদান এবং অ্যাপোপটোটিক কোষের ধ্বংসাবশেষ রয়েছে। প্যাটার্নগুলি কমপ্লিমেন্ট কম্পোনেন্ট 1q (C1q) এর সাথে সরাসরি আবদ্ধ করে এবং ক্লাসিক্যাল কমপ্লিমেন্ট পাথওয়ের সক্রিয়করণের মাধ্যমে অ্যাপোপটোটিক কোষের ধ্বংসাবশেষের পরিপূরক-মধ্যস্থতা প্রচার করে। পরিপূরক সক্রিয়করণ সত্ত্বেও, এসএপি ইমিউনোরেগুলেশন প্রদানের জন্য পরিচিত, নিউট্রোফিলিক হ্রাস করেপ্রদাহএন্ডোথেলিয়াল আনুগত্য হ্রাসের মাধ্যমে টিস্যুগুলির মধ্যে, 8 হ্রাস ইলাস্টেস ফাংশন, 9 এবং টিস্যুতে হোমিং হ্রাস।

রোগের ক্ষেত্রে, এসএপি অ্যামাইলয়েডোসিসের আমানতের অংশ হিসেবে সবচেয়ে বেশি পরিচিত। যদিও কম ভালভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে, তবে এমনও প্রমাণ রয়েছে যে এটি অটোইমিউন রোগের মানব এবং প্রাণী মডেলগুলিতে ভূমিকা রাখতে পারে। রোগীদের মধ্যে এসএপি অ্যান্টিবডি সনাক্ত করা হয়েছেঅটোইমিউনরোগ, এবং হ্রাস SAP অভিব্যক্তি প্রচার দেখানো হয়েছেঅটোইমিউনিটিমুরিন মডেলে। SAP-এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডিগুলি সিস্টেমিক লুপাস এরিথেমাটোসাস রোগীদের 44 শতাংশের মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছে, অ্যান্টিবডি টাইটারগুলি রোগের কার্যকলাপের সাথে সম্পর্কযুক্ত। প্রবণ 129/Sv ইঁদুর যখন C57BL/ 6 ইঁদুর (129/Sv x C57BL/6 F2)13 দিয়ে অতিক্রম করা হয় তবে শুধুমাত্র 129/Sv স্ট্রেনে নয়, এটি পরামর্শ দেয় যে অটোইমিউনিটি প্ররোচিত করার জন্য SAP ঘাটতির জন্য অন্তর্নিহিত জেনেটিক সংবেদনশীলতার প্রয়োজন হতে পারে।14 ইঁদুর অ্যান্টিনিউক্লিয়ার অ্যান্টিবডি, অ্যান্টি-সিঙ্গেল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ, অ্যান্টি-ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ অ্যান্টিবডি এবং রিউমাটয়েড ফ্যাক্টরগুলির উত্পাদন দেখায়। তারা একটি proliferative বিকাশইমিউনজটিল-মধ্যস্থিত গ্লোমেরুলোনেফ্রাইটিস, প্রায়শই মহিলাদের মধ্যে।13 লুপাস নেফ্রাইটিসের একটি মুরিন মডেলে যেখানে সিরামে সক্রিয় স্ব-ডিএনএ ইনজেকশনের মাধ্যমে গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস প্ররোচিত হয়, প্লাজমিড ভেক্টর দ্বারা এসএপি জিন থেরাপি অ্যান্টি-ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ অ্যান্টিবডিগুলির উত্পাদন হ্রাস করে। , ইমিউন জটিল জমা, এবং কিডনি প্রদাহ, এবং লুপাস নেফ্রাইটিসের সূত্রপাত প্রতিরোধ করে।15

চিত্র 3|মুখোশযুক্ত আইজিজি কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথিতে রেনাল বায়োপসি ফাইন্ডিং। চিত্র 2 এ দেখানো বায়োপসি থেকে ফটোমাইক্রোগ্রাফ এখানে দেখানো হয়েছে। (ক) জোন্স মেথেনামাইন সিলভার স্টেন (আসল বিবর্ধন × 400) দ্বারা সেগমেন্টাল স্পাইকগুলি গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন বরাবর উপস্থিত থাকে। (b) ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেন বরাবর উপস্থিত সাবপিথেলিয়াল ডিপোজিট প্রকাশ করে (আসল বিবর্ধন×12,000)। (গ) তাজা টিস্যুতে রুটিন ইমিউনোফ্লুরোসেন্স (সরাসরি ইমিউনোফ্লুরোসেন্স; আসল বিবর্ধন×400) দ্বারা গ্লোমেরুলির দাগ IgG-এর জন্য নেতিবাচক। (d) প্রোটিজ হজমের পরে প্যারাফিন-এম্বেডেড টিস্যুতে একই কেস থেকে গ্লোমেরুলি ইতিবাচক দাগ দেয় (সরাসরি ইমিউনোফ্লুরোসেন্স; আসল বিবর্ধন×400)। (ঙ) গ্লোমেরুলি কাপ্পা এবং (f) প্রোটিজ-পাচনযুক্ত প্যারাফিন-এমবেডেড টিস্যুতে ল্যাম্বডা নয় (সরাসরি ইমিউনোফ্লফ্লুরেসেন্স; আসল বিবর্ধন × 400) এর জন্য দাগ দেখায়। এই ছবিটি দেখার অপ্টিমাইজ করার জন্য, অনুগ্রহ করে www এ এই নিবন্ধটির অনলাইন সংস্করণ দেখুন।কিডনি-international.org.

বায়োপসিতে হালকা শৃঙ্খল-সীমাবদ্ধতা দেখা সত্ত্বেও, এই সত্তাটি অন্তর্নিহিত লিম্ফোপ্রোলাইফেরেটিভ ডিসঅর্ডার বা সঞ্চালন মনোক্লোনাল আইজিএসের সাথে যুক্ত হওয়ার কোন প্রমাণ নেই। সুতরাং, এমজিএমআইডিকে রেনাল তাত্পর্যের মনোক্লোনাল গ্যামোপ্যাথির স্পেকট্রামের মধ্যে বিবেচনা করা উচিত নয়। সময় এসএপি অটোঅ্যান্টিবডিগুলির ভূমিকাও অনিশ্চিত। PLA2R-সম্পর্কিত রোগের মতো বিশেষভাবে ইমিউন ডিপোজিটে প্রোটিন সহ মেমব্রানাস গ্লোমেরুলোপ্যাথির অন্যান্য রূপের বিপরীতে, 16 MGMID SAP-এর বিরুদ্ধে পরিচালিত অটোঅ্যান্টিবডি দ্বারা চালিত বলে মনে হয় না, কারণ আমরা MGMID রোগীদের মধ্যে SAP-এর বিরুদ্ধে সিরাম অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া সনাক্ত করতে ব্যর্থ হয়েছি। . একটি বিকল্প ব্যাখ্যা হল যে আইজিজি কাপ্পা একটি অটোইমিউন অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি মিথস্ক্রিয়া না হয়ে এই 2টি প্রোটিনের মধ্যে স্বাভাবিক মিথস্ক্রিয়ার ফলে উপস্থিত থাকে, কারণ আইজি কাপা চেইন সিরাম SAP-এর স্বাভাবিক ইন্টারঅ্যাকটোমের একটি অংশ হিসাবে পরিচিত। যদিও এই সত্তার টিস্যু ডায়াগনস্টিকসের জন্য উপযোগী, সিরামে এসএপি অ্যান্টিবডিগুলির জন্য পরীক্ষা এই সময়ে একটি নন-ইনভেসিভ ডায়াগনস্টিক হিসাবে কাজ করে না এবং এই রোগের অন্তর্নিহিত ড্রাইভার একটি রহস্য রয়ে গেছে।

এমজিএমআইডি-তে ক্লিনিকাল ফলাফলগুলি অত্যন্ত পরিবর্তনশীল, স্বতঃস্ফূর্ত মওকুফ থেকে অগ্রগতি থেকে শেষ-পর্যায় পর্যন্তকিডনিরোগট্রান্সপ্ল্যান্টের পুনরাবৃত্তি সহ। পূর্ববর্তী বিশ্লেষণে ব্যবহৃত চিকিত্সা এবং ক্লিনিকাল ফলাফলের মধ্যে কোনো সম্পর্ক দেখাতে ব্যর্থ হয়েছে। এসএপিকে সরাসরি টার্গেট করা চিকিত্সাগুলি অ্যামাইলয়েডোসিসের চিকিত্সার প্রাথমিক প্রতিশ্রুতি দেখিয়েছে৷ 17,18 উপরন্তু, ভর স্পেকট্রোমেট্রি ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে পরিপূরক ক্যাসকেডকে লক্ষ্য করে থেরাপিগুলি এই ধরনের গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের চিকিত্সার ক্ষেত্রে উপযোগী হতে পারে, এই কারণে যে বেশিরভাগ প্রোটিনগুলি বৃদ্ধি পেয়েছে। এমজিএমআইডিতে গ্লোমেরুলি পরিপূরক সম্পর্কিত। এই রোগের ক্রিয়াকলাপের বায়োমার্কার সনাক্ত করার জন্য অতিরিক্ত অধ্যয়নের প্রয়োজন, সেইসাথে থেরাপি।

রুটিন ইমিউনোফ্লুরোসেন্সে এমজিএমআইডি বায়োপসিতে ইমিউন ডিপোজিট মাস্ক করার কারণটি একটি রহস্য রয়ে গেছে। আমানতগুলিতে SAP-এর উপস্থিতি MGMID-এর ক্ষেত্রে এই ঘটনার জন্য নতুন সম্ভাব্য ব্যাখ্যা উত্থাপন করে। উদাহরণস্বরূপ, SAP প্রোটিনের মিথস্ক্রিয়াগুলি অত্যন্ত Ca2þ-নির্ভর,6 হিসাবে পরিচিত এবং ইমিউনোফ্লফ্লুরেসেন্সের জন্য রেনাল বায়োপসি টিস্যু প্রক্রিয়াকরণে ব্যবহৃত অনেক পরিবহন মাধ্যম এবং বাফারগুলি Ca2þ বর্জিত। এটি Ca2þ-এর ভিট্রো অনুপস্থিতির ফলে ইমিউন জমার ব্যাঘাত ঘটতে পারে যাতে হিমায়িত টিস্যুতে ইমিউনোফ্লুরোসেন্স দ্বারা সনাক্তকরণের জন্য সেগুলি আর পাওয়া যায় না। ইমিউন কমপ্লেক্স ডিপোজিট ফরমালিন-স্থির টিস্যুতে সনাক্তকরণের জন্য উপলব্ধ থাকবে, তবে, টিস্যুতে প্রোটিনের মধ্যে ফরমালিন-প্ররোচিত সমযোজী রাসায়নিক বন্ধনের ফলে।

আমরা এখানে বর্ণনা করছি, প্রথমবারের মতো, MGMID-এর গ্লোমেরুলার ডিপোজিটে SAP-এর অনন্য উপস্থিতি। উপরন্তু, আমরা যে staining দেখানকিডনিবায়োপসিএসএপি রুটিন ইমিউনোফ্লুরোসেন্সের মাধ্যমে মাস্কিং ছাড়াই এমজিএমআইডি-র মতো ক্লিনিকোপ্যাথলজিক বৈশিষ্ট্যযুক্ত কেস সনাক্ত করে। এই ফলাফলের পরিপ্রেক্ষিতে, আমরা বিশ্বাস করি যে এসএপি-র জন্য গ্লোমেরুলার ডিপোজিটের মধ্যে ইতিবাচক দাগ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসের একটি অনন্য রূপকে চিহ্নিত করে যা রোগের একটি সাধারণ প্যাথোফিজিওলজিক প্রক্রিয়া ভাগ করে। এমজিএমআইডি-র সাম্প্রতিক বিবরণ পর্যন্ত, এই কেসগুলি C3 গ্লোমেরুলোপ্যাথি থেকে সংক্রমণ-সম্পর্কিত গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস থেকে অ্যাটিপিকাল মেমব্রানাস গ্লোমেরুলোপ্যাথি পর্যন্ত অসংখ্য আলাদা বিভাগে নির্ণয় করা হয়েছিল। ইমিউন-মধ্যস্থিত গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসে প্যাথোফিজিওলজিক অন্তর্দৃষ্টি প্রদানের জন্য স্পেকট্রোমেট্রি।

পদ্ধতি

রেনাল বায়োপসি প্রক্রিয়াকরণ কৌশল

আলো, ইমিউনোফ্লুরোসেন্স এবং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি সহ স্ট্যান্ডার্ড রেনাল বায়োপসি প্রক্রিয়াকরণ কৌশলগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল৷ 19,20 সমস্ত হালকা মাইক্রোস্কোপি নমুনাগুলি হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন, জোন্স মেথেনামাইন সিলভার, ম্যাসন ট্রাইক্রোম এবং পর্যায়ক্রমিক অ্যাসিড-শিফ বিকারক দিয়ে দাগযুক্ত ছিল৷ সমস্ত সরাসরি ইমিউনোফ্লুরোসেন্স বিভাগগুলি 4 মিমি কাটা হয়েছিল এবং IgG, IgA, IgM, C3, C1q, ফাইব্রিনোজেন, এবং k-, এবং l-আলো চেইনগুলিতে ফ্লফ্লুরোসেসিন-ট্যাগযুক্ত পলিক্লোনাল খরগোশের অ্যান্টি-হিউম্যান অ্যান্টিবডিগুলির সাথে প্রতিক্রিয়া দেখায় (ডাকো, কার্পেনটেরিয়া, সিএ) 1 ঘন্টার জন্য, এবং ধুয়ে; জলীয় মাউন্টিং মিডিয়া ব্যবহার করে একটি কভারস্লিপ প্রয়োগ করা হয়েছিল। IgG1, IgG2, IgG3, এবং IgG4 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) তে ফ্লফ্লুরেসসিন-ট্যাগযুক্ত পলিক্লোনাল মাউস অ্যান্টি-হিউম্যান অ্যান্টিবডিগুলির জন্য নির্বাচিত কেসগুলিকে দাগ দেওয়া হয়েছিল। প্যারাফিন ইমিউনোফ্লোরোসেন্স পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রোটিজ হজমের পরে সঞ্চালিত হয়েছিল। 2,3 মোট 9টি এমজিএমআইডি বায়োপসি এবং 8টি অন্যান্য ধরণের মেমব্রানোস গ্লোমেরুলোপ্যাথি সহ তুলনামূলক নিয়ন্ত্রণ বায়োপসি ভর স্পেকট্রোমেট্রি বিশ্লেষণের জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল। অধ্যয়ন প্রোটোকলটি সলিউশন ইনস্টিটিউশনাল রিভিউ বোর্ড দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল এবং হেলসিঙ্কি নীতির ঘোষণার সাথে সঙ্গতিপূর্ণ ছিল।

Cistanche পারেনটোনিফাইকিডনি

লেজার-ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলির ভর স্পেকট্রোমেট্রি

ফরমালিন-ফিক্সড প্যারাফিন-এমবেডেড টিস্যু থেকে রেনাল বায়োপসি টিস্যু লাইকা পিইটি-মেমব্রেন ফ্রেম স্লাইডে (লাইকা, ওয়েটজলার, জার্মানি) 10 মিমি পুরুত্বে কাটা হয়েছিল। এই স্লাইডগুলি তখন হেমাটোক্সিলিন দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। লাইকা DM60{{20}}0B মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে গ্লোমেরুলিগুলিকে মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউবে মাইক্রোডিসেক্ট করা হয়েছিল। মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলিকে 2 শতাংশ সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট এবং 0.1M ডিথিওথ্রিটল 99 ডিগ্রিতে 1 ঘন্টার জন্য লাইজ করা হয়েছিল এবং ফিল্টার-সহায়ক নমুনা প্রস্তুতি (FASP) দ্বারা প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। , গটিংজেন, জার্মানি)। সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট 0.1 এম ট্রিস (হাইড্রোক্সিমিথাইল)-এমিনোমেথেন/সিএল, পিএইচ 8.5-এ 8 এম ইউরিয়া দিয়ে বারবার ধোয়ার মাধ্যমে অপসারণ করা হয়েছিল; তারপরে নমুনাগুলি 0.05 এম আয়োডোসেটামাইড দিয়ে অ্যালকাইলেট করা হয়েছিল। Iodoacetamide 8 M ইউরিয়া/0.1 M tris(hydroxymethyl)- aminomethane/Cl, pH 8.5 দিয়ে 3টি ধোয়ার মাধ্যমে 0.05 M অ্যামোনিয়াম বাইকার্বোনেট দিয়ে 3টি ধোয়ার মাধ্যমে অপসারণ করা হয়। প্রোটিনগুলি ট্রিপসিন (সিকোয়েন্সিং গ্রেড, প্রোমেগা, ম্যাডিসন, WI) দিয়ে 40:1 w/w অনুপাতে 37 ডিগ্রিতে 16 ঘন্টা ধরে হজম করা হয়েছিল। পেপটাইডগুলি সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সি18-স্টেজ টিপস (থার্মো সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ) এ ডিসল্ট করা হয়েছিল।

থার্মো অরবিট্র্যাপ ফিউশন লুমোস ভর স্পেকট্রোমিটার (থার্মো সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে ন্যানোএলসি-ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি দ্বারা হজমকৃত পেপটাইডগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পেপটাইডগুলি একটি বিপরীত ফেজ ট্র্যাপ কলামে (ইন্টিগ্রা-ফ্রিট, নিউ অবজেক্টিভ, ওবার্ন, এমএ) লোড করা হয়েছিল যাতে 2.5 মিমি ওয়াটারস এক্সসিলেক্ট (ওয়াটার্স কর্পোরেশন, মিলফোর্ড, এমএ) চার্জযুক্ত পৃষ্ঠের হাইব্রিড রজন 150 মিমি যুক্ত থাকে X 0৷{14}}75 মিমি বিশ্লেষণাত্মক কলাম যাতে একই বিপরীত ফেজ রজন থাকে যা ফাঁদে ব্যবহৃত হয়৷ একটি ন্যানোঅ্যাক্যুইটি আল্ট্রাপারফরমেন্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম (ওয়াটার্স কর্পোরেশন) তখন 98:2 থেকে 60:40 বাফার A: B অনুপাত (বাফার A ¼ 0.1 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিডের মধ্যে একটি 60-মিনিট গ্রেডিয়েন্ট তৈরি করতে ব্যবহৃত হয়েছিল , 0.5 শতাংশ অ্যাসিটোনিট্রাইল; বাফার বি ¼ 0.1 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিড, 99.9 শতাংশ অ্যাসিটোনিট্রাইল)।

পেপটাইডগুলি একটি সমন্বিত স্প্রে টিপ (পিকোফ্রিট, নতুন উদ্দেশ্য) সহ কলাম থেকে নির্গত করা হয়েছিল এবং ইলেক্ট্রোস্প্রে (20 kV) দ্বারা আয়নিত করা হয়েছিল এবং তারপরে উচ্চ শক্তির সংঘর্ষ-প্ররোচিত বিচ্ছিন্নতা (HCD) ব্যবহার করে ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি বিশ্লেষণের মাধ্যমে। পেপটাইড অগ্রদূতের সমীক্ষা স্ক্যানগুলি 240K রেজোলিউশনে (400 m/z এ) 5×10⁵ আয়ন গণনা লক্ষ্যের সাথে সঞ্চালিত হয়েছিল। ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি 1.6 তম কোয়াড্রপোলের সাথে বিচ্ছিন্নতা দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল, 30 এর একটি স্বাভাবিক সংঘর্ষের শক্তির সাথে এইচসিডি ফ্র্যাগমেন্টেশন এবং আয়ন ফাঁদে দ্রুত স্ক্যান ভর স্পেকট্রোমেট্রি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রাপ্ত ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি ডেটা সাম্প্রতিক ইউনিপ্রট হিউম্যান ডাটাবেসের বিরুদ্ধে অনুসন্ধান করা হয়েছিল যাতে সুইস প্রোট এবং ট্রেম্বল এন্ট্রি উভয়ই রয়েছে

ম্যাক্সকোয়ান্ট (ম্যাক্স প্ল্যাঙ্ক ইনস্টিটিউট অফ বায়োকেমিস্ট্রি, প্লেনেগ, জার্মানি)। স্ক্যাফোল্ড v4.6 (প্রোটিওম সফটওয়্যার, পোর্টল্যান্ড, বা) ব্যবহার করে ডেটার ভিজ্যুয়ালাইজেশন করা হয়েছিল। পেপটাইড-থেকে-স্পেকট্রাম ম্যাচের জন্য মিথ্যা আবিষ্কারের হার 1 শতাংশে সেট করা হয়েছিল। MaxQuant থেকে সাধারণ iBAQ মানগুলি পরিমাপের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনার জন্য iBAQ ডিস্ট্রিবিউশনগুলি লোডিংয়ের পার্থক্যগুলির জন্য নিয়ন্ত্রণের জন্য মধ্যম-সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। শূন্যের সমান iBAQ মানগুলি ডেটা সেট থেকে সরানো হয়েছে৷ পরিসংখ্যানগত হাইপোথিসিস পরীক্ষার জন্য, একটি 2- নমুনা ওয়েলচের টি-পরীক্ষা 2টি গোষ্ঠীর জন্য স্বাভাবিক iBAQ মান ব্যবহার করে প্রতিটি প্রোটিনের জন্য করা হয়েছিল। যদি একটি প্রোটিন শুধুমাত্র একটি গ্রুপে শনাক্ত করা হয়, একটি 1-নমুনা ওয়েলচের টি-পরীক্ষা করা হয়েছিল, নাল হাইপোথিসিস হিসাবে ক্ষুদ্রতম সনাক্ত করা iBAQ মান ব্যবহার করে।

এসএপি স্টেনিং

ফরমালিন-স্থির প্যারাফিন-এম্বেডেড বিভাগগুলি, 3 মিমি কাটা, ডিপ্যারাফিফাইনাইজ করা হয়েছিল, এবং অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার 99 ডিগ্রিতে সঞ্চালিত হয়েছিল। বিভাগগুলি খরগোশের পলিক্লোনাল অ্যান্টি-এসএপি পলিক্লোনাল অ্যান্টিবডি (1:400; থার্মোফিশার, ওয়ালথাম, এমএ) দ্বারা প্রতিক্রিয়া করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি রোডামাইন রেড এক্স-কনজুগেটেড গোট অ্যান্টি-র্যাবিট সেকেন্ডারি যা মানুষের সাথে ন্যূনতম ক্রস-প্রতিক্রিয়া নিশ্চিত করার জন্য কঠিন-ফেজ শোষণ করা হয়েছিল। IgG (1:100; জ্যাকসন ইমিউনো রিসার্চ ল্যাবরেটরিজ, ওয়েস্ট গ্রোভ, PA)। প্রতিটি কেস ইতিবাচক এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের সাথে চালানো হয়েছিল। স্ট্যান্ডার্ড ইমিউনোফ্লফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি দ্বারা দাগটি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। গ্লোমেরুলিতে ধনাত্মক দানাদার কৈশিক লুপ দাগ থাকলে এটি ইতিবাচক এবং কৈশিক লুপ না থাকলে নেতিবাচক বলে বিচার করা হয়েছিল।

গ্লোমেরুলিতে দাগ। গ্লোমেরুলার বেসমেন্ট মেমব্রেনে আইজিজি এবং এসএপির একত্রিতকরণ একটি জিস এলএসএম 880 কনফোকাল লেজার স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপ (জিস মাইক্রোস্কোপি, জেনা, জার্মানি) ব্যবহার করে কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। এই বিশ্লেষণের জন্য, পলিক্লোনাল (ফ্লফ্লুরেসসিন আইসোথিওসায়ানেট–কনজুগেটেড) খরগোশের মানব-বিরোধী IgG (1:40; Agilent, Santa Clara, CA) উপরে বর্ণিত SAP-এর জন্য দাগ দেওয়ার পরে তাপ পুনরুদ্ধার করা টিস্যুর সাথে প্রতিক্রিয়া করা হয়েছিল। প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি বাদ দিয়ে অ্যান্টিবডি নির্দিষ্টতা নিশ্চিত করতে নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণগুলি সঞ্চালিত হয়েছিল। এমজিএমআইডির চারটি ক্ষেত্রে ইমিউনোপেরক্সিডেস স্টেনিং দ্বারা HP1BP3 (1:100; থার্মো ফিশার, ওয়ালথাম, এমএ) উপস্থিতির জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল।

এসএপি-তে সিরাম অ্যান্টিবডি পরীক্ষা করা

SAP প্রোটিন (R&D Systems, Minneapolis, MN; {{0}}SAB-050) কার্বনেট-বাইকার্বোনেট বাফারে (pH 9.6) 3 ng/ml তে পাতলা করা হয়েছিল এবং একটি {{ এর উপর প্রলিপ্ত হয়েছিল 6}}ওয়েল ইমুলোন H2 প্লেট (থার্মো সায়েন্টিফিক) রাতারাতি ৪ ডিগ্রিতে। 200 মিলি ওয়াশিং বাফার (1×ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন এবং 0.05 শতাংশ টুইন) ব্যবহার করে প্লেটগুলি x3 ধোয়া হয়েছিল এবং ব্লকিং বাফার (1×ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন, 0.05 শতাংশ) দিয়ে 2 ঘন্টা অবরুদ্ধ করা হয়েছিল। tween, 1 শতাংশ মাছ জেলটিন)। প্লেটগুলি তারপর 200 মিলি ওয়াশ বাফার দিয়ে ×3 ধুয়ে ফেলা হয়। পাতলা সিরামের বিশ মাইক্রোলিটার (ওয়াশিং বাফারে 1:100) প্রতি কূপে যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য সেঁকানো হয়েছিল। প্লেটগুলিকে 200 মিলি ওয়াশ বাফার দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরে সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি, অ্যান্টি-হিউম্যান আইজিজি-এইচআরপি (জ্যাকসন ইমিউনো রিসার্চ ল্যাবরেটরিস; 309-035-003) যোগ করা হয়েছিল। 200 মিলি ওয়াশ বাফার দিয়ে প্লেটগুলি ধুয়ে × 7। এর পরে, 3,3',5,5'-টেট্রামেথাইলবেনজিডাইন পারক্সিডেস সাবস্ট্রেট এবং পেরক্সিডেস সাবস্ট্রেট সল বি 1:1 অনুপাতে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং প্লেটে 100 মিলি যোগ করা হয়েছিল। 2M H2SO4 এর 100 মিলি যোগ করে প্রতিক্রিয়া বন্ধ করা হয়েছিল, 450 এনএম এ পড়ার আগে 20 মিনিটের জন্য বেঞ্চে রেখে দেওয়া হয়েছিল। SAP প্রোটিন প্লেটের সাথে আবদ্ধ রয়েছে তা নিশ্চিত করার জন্য, আমরা খরগোশ-বিরোধী SAP (Invitrogen, Carlsbad, CA; PA1-28361) একটি সিরিয়াল ডিলিউশনে ব্যবহার করেছি যার পরে অ্যান্টি-র্যাবিট IgG-HRP (জ্যাকসন ইমিউনো রিসার্চ ল্যাবরেটরিজ) ; 111-035-144)। নিয়ন্ত্রণটি 0.95 এর গড় R-বর্গ মান সহ অ্যান্টিবডি এবং শোষণের মধ্যে একটি ভাল সম্পর্ক দেখিয়েছিল।

উন্নতির জন্য Cistancheকিডনিফাংশন

প্রকাশ

সমস্ত লেখক কোন প্রতিযোগিতামূলক আগ্রহ ঘোষণা করেছেন।

পরিপূরক

ম্যাটেরিয়াল সাপ্লিমেন্টারি ফাইল (পিডিএফ)

চিত্র S1। বিভিন্ন রেনাল রোগ থেকে গ্লোমেরুলার এসএপি স্টেনিংয়ের প্রতিনিধি চিত্র।

চিত্র S2। এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস দ্বারা অ্যান্টি-এসএপি সেরোঅ্যাকটিভিটি অধ্যয়ন।

টেবিল S1. সমস্ত Igs লেজার-ক্যাপচার মাইক্রোডিসেক্টেড গ্লোমেরুলিতে ভর স্পেকট্রোমেট্রি দ্বারা চিহ্নিত করা হয় IgG কাপ্পা জমার সাথে ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথির ক্ষেত্রে।

টেবিল S2। সমস্ত প্রোটিনের নমুনা দ্বারা বর্ণালী গণনা MGMID নমুনায় $1 log2 বর্ধিত প্রাচুর্য এবং একটি P-মান # 0.1 দেখায়।

তথ্যসূত্র

1. Larsen CP, Ambruzs JM, Bonsib SM, et al. মুখোশযুক্ত IgG কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথি।কিডনিint. 2014;86: 154–161।

2. মেসিয়াস এনসি, ওয়াকার পিডি, লারসেন সিপি। রেনাল প্যাথলজি পরীক্ষাগারে প্যারাফিন ইমিউনোফ্লুরোসেন্স: একটি উদ্ধার কৌশলের চেয়ে বেশি। মোড পথোল। 2015;28:854–860।

3. লারসেন সিপি, মেসিয়াস এনসি, ওয়াকার পিডি, এট আল। মুখোশযুক্ত মনোটাইপিক ইমিউনোগ্লোবুলিন জমা সহ মেমব্রানোপ্রোলাইফেরেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস। কিডনি Int. 2015;88:867–873।

4. Larsen CP, Boils CL, Cossey LN, et al. মুখোশযুক্ত আইজিজি কাপ্পা জমা সহ ঝিল্লির মতো গ্লোমেরুলোপ্যাথির ক্লিনিকোপ্যাথলজিক বৈশিষ্ট্য। কিডনি আন্তর্জাতিক প্রতিনিধি 2016;1:299–305।

5. Emsley J, White HE, O'Hara BP, et al. পেন্টামেরিক হিউম্যান সিরাম অ্যামাইলয়েড পি উপাদানের গঠন। প্রকৃতি। 1994;367:338-345।

6. Poulsen ET, Pedersen KW, Marzeda AM, et al. সিরাম অ্যামাইলয়েড পি কম্পোনেন্ট (এসএপি) মানুষের প্লাজমাতে শারীরবৃত্তীয় ক্যালসিয়ামের মাত্রা ধারণকারী ইন্টারঅ্যাটোম। বায়োকেমিস্ট্রি। 2017;56:896–902।

7. আগরওয়াল এ, সিং পিপি, বোটাজ্জি বি, এবং অন্যান্য। pentraxins দ্বারা প্যাটার্ন স্বীকৃতি. অ্যাডভ এক্সপ্রেস মেড বায়োল। 2009;653:98-116।

8. Bottazzi B, Inforzato A, Messa M, et al. পেনট্রাক্সিন PTX3 এবং SAP সহজাত অনাক্রম্যতা, প্রদাহ নিয়ন্ত্রণ এবং টিস্যু পুনর্নির্মাণে। জে হেপটল। 2016;64:1416–1427।

9. লি জেজে, ম্যাকঅ্যাডাম কেপি। হিউম্যান অ্যামাইলয়েড পি উপাদান: একটি ইলাস্টেস ইনহিবিটার। স্ক্যান্ড জে ইমিউনল। 1984;20:219-226।

10. কক্স এন, পিলিং ডি, গোমার আরএইচ। সিরাম অ্যামাইলয়েড পি: সহজাত ইমিউন প্রতিক্রিয়ার একটি পদ্ধতিগত নিয়ন্ত্রক। জে লিউকোক বায়োল। 2014;96:739–743।

11. ক্রাভিটজ এমএস, পিটাশনি এম, শোয়েনফেল্ড ওয়াই। প্রতিরক্ষামূলক অণু—সি-রিঅ্যাকটিভ প্রোটিন (সিআরপি), সিরাম অ্যামাইলয়েড পি (এসএপি), পেনট্রাক্সিন3 (পিটিএক্স3), ম্যানোজ-বাইন্ডিং লেকটিন (এমবিএল), এবং অ্যাপলিপোপ্রোটিন এ1 (এপো এ1), এবং তাদের অটোঅ্যান্টিবডি: অটোইমিউনিটিতে ব্যাপকতা এবং ক্লিনিকাল তাত্পর্য। জে ক্লিন ইমিউনল। 2005;25:582-591।

12. জ্যান্ডম্যান-গডার্ড জি, ব্ল্যাঙ্ক এম, ল্যাঙ্গেভিটজ পি, এট আল। সিস্টেমিক লুপাস এরিথেমাটোসাস রোগীদের মধ্যে অ্যান্টি-সিরাম অ্যামাইলয়েড উপাদান পি অ্যান্টিবডিগুলি রোগের কার্যকলাপের সাথে সম্পর্কযুক্ত। Ann Rheum Dis. 2005;64:1698-1702।

13. Bickerstaff MC, Botto M, Hutchinson WL, et al. সিরাম অ্যামাইলয়েড পি উপাদান ক্রোমাটিনের অবক্ষয় নিয়ন্ত্রণ করে এবং অ্যান্টিনিউক্লিয়ার অটোইমিউনিটি প্রতিরোধ করে। ন্যাট মেড। 1999;5:694-697।

14. Gillmore JD, Hutchinson WL, Herbert J, et al. সিরাম অ্যামাইলয়েড পি কম্পোনেন্ট জিনের লক্ষ্যবস্তু মুছে ফেলার সাথে ইঁদুরের অটোইমিউনিটি এবং গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস: এসএপি ঘাটতি বা স্ট্রেন সংমিশ্রণ? ইমিউনোলজি। 2004;112:255-264।

15. ঝাং ডব্লিউ, উ জে, কিয়াও বি, এট আল। সিরাম অ্যামাইলয়েড পি কম্পোনেন্ট জিন থেরাপির মাধ্যমে লুপাস নেফ্রাইটিস রোগের বিভিন্ন পর্যায় থেকে ভিন্ন ভিন্ন প্রক্রিয়ার মাধ্যমে উপশম করা। PloS ওয়ান। 2011;6:e22659।

16. বেক LH, Bonegio RG, Lambeau G, et al. ইডিওপ্যাথিক মেমব্রানাস নেফ্রোপ্যাথিতে টার্গেট অ্যান্টিজেন হিসাবে এম-টাইপ ফসফোলিপেস A2 রিসেপ্টর। এন ইংলিশ জে মেড। 2009;361:11-21।

17. Richards DB, Cookson LM, Berges AC, et al. সিরাম অ্যামাইলয়েড পি উপাদানের অ্যান্টিবডি দ্বারা অ্যামাইলয়েডের থেরাপিউটিক ক্লিয়ারেন্স। এন ইংলিশ জে মেড। 2015;373:1106–1114।

18. Richards DB, Cookson LM, Barton SV, et al. সিস্টেমিক অ্যামাইলয়েডোসিস রোগীদের সিরাম অ্যামাইলয়েড পি কম্পোনেন্ট ক্লিয়ার অ্যামাইলয়েড জমার জন্য অ্যান্টিবডির ডোজ পুনরাবৃত্তি করুন। Sci Transl Med. 2018;10।

19. ওয়াকার পিডি, ক্যাভালো টি, বনসিব এসএম। রেনাল বায়োপসি জন্য অনুশীলন নির্দেশিকা. মোড পথোল। 2004;17:1555-1563।

20. ওয়াকার পিডি। রেনাল বায়োপসি। আর্চ পাথোল ল্যাব মেড. 2009;133:181-188।

21. Wisniewski JR, Zougman A, Nagaraj N, et al. প্রোটিওম বিশ্লেষণের জন্য সর্বজনীন নমুনা প্রস্তুতির পদ্ধতি। ন্যাট পদ্ধতি। 2009;6: 359–362।