Caco-2 সেল মনোলেয়ার মডেল জুড়ে সিস্টানচে ডেজার্টিকোলা থেকে ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড-সমৃদ্ধ নির্যাসের অন্ত্রের পরিবহনের মূল্যায়ন

ভূমিকা

ক্যাকো-2 কোষ রেখা, যা মানুষের কোলন অ্যাডেনোকার্সিনোমাস থেকে উদ্ভূত, এন্টারোসাইটের মতো বৈশিষ্ট্যগুলি প্রদর্শন করে। স্বাভাবিক অবস্থায়, Caco-2 কোষগুলি পরিপক্ক কোষ থেকে স্বতঃস্ফূর্তভাবে আলাদা হয়ে যায় এবং অক্ষত মনোলেয়ার গঠন করে [1]। সংলগ্ন কোষগুলি মনোলেয়ারের এপিকাল পাশে গঠিত শক্ত সংযোগের মাধ্যমে মেনে চলে, যা এপিথেলিয়াল স্তর [২] জুড়ে নিষ্ক্রিয়ভাবে এবং সক্রিয়ভাবে পরিবহন করা ওষুধগুলিকে বৈষম্য করতে পারে। সাধারণ এন্টারোসাইটের সাথে রূপগত এবং জৈব রাসায়নিক সাদৃশ্যের কারণে, Caco-2 কোষ মনোলেয়ারগুলি অন্ত্রের শোষণ সম্ভাবনা এবং ওষুধের পরিবহন বৈশিষ্ট্য অধ্যয়নের জন্য একটি ভাল-স্বীকৃত ইন ভিট্রো মডেল হিসাবে কাজ করে [3, 4]।

রাসায়নিকের বিপরীতে, উদ্ভিদের নির্যাস (PE) হল এমন মিশ্রণ যার জৈবিক কার্যকলাপ এবং সক্রিয় উপাদানগুলি প্রায়শই ভালভাবে চিহ্নিত করা যায় না [5]। অধিকন্তু, PE এর অন্ত্রের পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি, এর উপাদানগুলির বৈশিষ্ট্যগুলির বিপরীতে, ক্লিনিকাল ব্যবহারের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। একটি Caco-2 সেল মনোলেয়ার জুড়ে একটি পরীক্ষার নমুনার জন্য ফ্লাক্স পরিমাপ সাধারণত রাসায়নিক পদ্ধতিগুলিকে অন্তর্ভুক্ত করে, যেমন HPLC, LC/MS, ইত্যাদি৷ যদিও এই পদ্ধতিগুলি শক্তিশালী হাতিয়ার, সেগুলি জটিল, সময় সাপেক্ষ, ব্যয়বহুল এবং মাঝে মাঝে অত্যাধুনিক যন্ত্রপাতি প্রয়োজন। আরও গুরুত্বপূর্ণ, একটি একক বা সংখ্যালঘু উপাদান উভয়ই সামগ্রিকভাবে PE প্রতিফলিত করতে পারে না। এইভাবে, PE-এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি সনাক্ত এবং মূল্যায়ন করার জন্য উপাদানগুলির সংকল্পের থেকে স্বাধীন একটি অভিনব পদ্ধতির প্রতিষ্ঠা করা দরকার।

Cistanche deserticola YC Ma (CD), হলোপ্যারাসাইটিক উদ্ভিদ, একটি সাধারণ ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ যা প্রধানত কিডনির ঘাটতি, শরীরের দুর্বলতা এবং কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসার জন্য ব্যবহৃত হয়, এবং এই ব্যবহারগুলি আনুষ্ঠানিকভাবে চীনা ফার্মাকোপিয়াতে রেকর্ড করা হয়েছে [6]। Phenylethanoid glycosides (PhGs), সহechinacoside (EC), acteoside (AC) এবং isoacteoside(IS), ইত্যাদি হল পলিফেনলিক যৌগের একটি শ্রেণি [7]। তারা প্রধান এক বিবেচনা করা হয়Cistanche প্রজাতির জৈব সক্রিয় উপাদান[৮]। ফার্মাকোলজিকাল গবেষণায় দেখা গেছে যে PhG-এর জৈব সক্রিয়তা বৈচিত্র্যময় এবং এতে অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ [9], অ্যান্টি-ফাটিগ [10], হেপাটোপ্রোটেকটিভ [11], ইমিউনোমোডুলেটরি [12], অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি [7, 13], এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব রয়েছে। 14]। যাইহোক, পিএইচজিগুলির অন্ত্রের পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি তদন্ত করা হয়নি। এই গবেষণায়, আমরা অন্বেষণসিডি থেকে PhG-সমৃদ্ধ নির্যাস (PRE) এর অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতাএকটি ইন্টিগ্রেটেড সিস্টেম হিসেবে এবং ডিফারেনিয়েটেড Caco-2 কোষে তিনটি প্রধান PhGs (AC, IS, এবং EC) এর ব্যাপ্তিযোগ্যতা। আমাদের ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে পিআরই প্রাথমিকভাবে প্রবাহ ছাড়াই একটি ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্টের নিচে দুর্বলভাবে শোষিত প্যাসিভ ডিফিউশনের মাধ্যমে পরিবাহিত হয়, যা সিডিতে পিএইচজিগুলির ক্লিনিকাল প্রয়োগের জন্য ফার্মাকোকিনেটিক ভিত্তি প্রদান করে।

ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা সিস্টানচে হার্বস PHGS75% ECH 30% ACT 12%

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

উপকরণ

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98%) মাস্ট বায়োটেকনোলজি কোং (চেংদু, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগলের মাধ্যম (DMEM), ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (FBS), এবং অ-প্রয়োজনীয় অ্যামিনো অ্যাসিড (NEAA) Gibco BRL (Grand Island, NY, USA) দ্বারা উত্পাদিত হয়েছিল। 6-ওয়েল ট্রান্সওয়েলটিএম প্লেট (ঢিল্লি বৃদ্ধির ক্ষেত্র 4.67 সেমি 2 ) কর্নিং (কোস্টার) ইনক (টেক্সবারি, এমএ, ইউএসএ) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ইঁদুর-টেইল কোলাজেন সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, এমও, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। এইচপিএলসি বিশ্লেষণের জন্য সমস্ত বিকারক এবং রাসায়নিক বিশ্লেষণাত্মক গ্রেডের ছিল।

সিডি থেকে পিআরই প্রস্তুতি

বাতাসে শুকনো সিডি উপাদান গুঁড়ো করা হয়েছিল এবং 70% ইথানল দিয়ে ছিদ্র করে বের করা হয়েছিল। পিএইচজি-সমৃদ্ধ ভগ্নাংশটি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রস্তুত করা হয়েছিল [10] এবং জল-স্যাচুরেটেড এন-বাটিল অ্যালকোহল দিয়ে বের করা হয়েছিল। নির্যাস মদ ঘনীভূত এবং হ্রাস চাপ অধীনে শুকানো ছিল. ম্যাক্রোপোরাস রজন-ইউভি স্পেকট্রোফোটোমেট্রি [১৫] 78.4% পিএইচজি বিষয়বস্তু পরিমাপ করেছে। চূড়ান্ত নমুনা শুষ্ক ওজন দ্বারা কাঁচামালের 1.75% ফলন উপস্থাপন করে। প্রাপ্ত নমুনা পরবর্তী ব্যবহার না হওয়া পর্যন্ত −20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

HPLC দ্বারা AC, IS, এবং EC নির্ধারণ

LC সমাধান সফ্টওয়্যার দিয়ে সজ্জিত একটি Shimadzu HPLC সিস্টেম PRE-তে AC, IS, এবং EC-এর বিষয়বস্তু পরীক্ষা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। একটি বিপরীত ফেজ ইন্টারসিল C18 কলাম (4.6 মিমি × 250 মিমি, 5 μm) ঘরের তাপমাত্রায় ব্যবহৃত এবং রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল। ভ্রাম্যমাণ পর্যায়গুলি ছিল অ্যাসিটোনিট্রিল এবং জলে 0.1% ফসফরিক অ্যাসিড (v/v) 1.0 মিলি/মিনিট প্রবাহ হারে গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন (সারণী 1) সহ। UV স্পেকট্রোফোটোমিটার ডিটেক্টর 334 এনএম সেট করা হয়েছিল। AC এবং IS এর ফ্লাক্স সঠিকভাবে নির্ধারণ করতে, আমরা একটি অভিনব HPLC-ফ্লুরোসেন্স ডিটেকশন (HPLC-FLD) পদ্ধতি তৈরি করেছি। একটি কাঠামোগত বিশ্লেষণ এবং ফ্লুরোসেন্স তরঙ্গদৈর্ঘ্য স্ক্যান করার পরে (ডেটা দেখানো হয়নি), আমরা AC (যেমন: 338 nm, Em: 448 nm) এবং IS (উদাহরণ: 320 nm, Em: 434 nm) এর জন্য সর্বোত্তম ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণ শর্তগুলি পেয়েছি।

HPLC বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি নিম্নলিখিত কর্মক্ষমতা বৈশিষ্ট্য ব্যবহার করে যাচাই করা হয়েছিল: স্থায়িত্ব, রৈখিকতা, সংবেদনশীলতা, নির্ভুলতা (অন্তঃ- এবং আন্তঃ-দিনের পরিবর্তনশীলতা), এবং নির্ভুলতা। পরিবহন বাফারের বিশ্লেষণগুলি 24 ঘন্টার জন্য অন্ধকারে 25 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল এবং তাদের স্থিতিশীলতা পরিমাপ করা হয়েছিল। ভিটামিন সি (0.4%) এর উপস্থিতিতে বিশ্লেষকগুলি অত্যন্ত স্থিতিশীল ছিল কারণ শিখর এলাকায় আপেক্ষিক মান বিচ্যুতি (RSD) মান <3.5% ছিল। রৈখিক রিগ্রেশন সমীকরণ, পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ, রৈখিকতার পরিসর, AC, IS এবং EC এর জন্য LOD, এবং LOQ সারণি 2 এ দেখানো হয়েছে। LODs (18–30 nM) এবং LOQs (60–100 nM) মানগুলি ব্যাখ্যা করে যে HPLC-FLD এবং HPLC-UV পদ্ধতিগুলি অত্যন্ত সংবেদনশীল। RSD মানগুলি যেগুলি পদ্ধতির নির্ভুলতা প্রকাশ করে সেগুলি সমস্তই ছিল <2% ইন্ট্রা- এবং ইন্টার-ডে পরিবর্তনশীলতার জন্য, যা ভাল নির্ভুলতা নির্দেশ করে। পুনরুদ্ধারের মূল্যায়নের জন্য, AC, IS, এবং EC তিনটি (উচ্চ, মাঝারি এবং নিম্ন) ঘনত্বের মাত্রা প্রদানের জন্য পরিবহন বাফারে যোগ করা হয়েছিল। বিশ্লেষকদের জন্য পদ্ধতির পুনরুদ্ধারের মানগুলি সারণী 3-এ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে। গড় পুনরুদ্ধারগুলি 90.0% থেকে 96.4% পর্যন্ত ছিল, যা ভাল নির্ভুলতা নির্দেশ করে। উপসংহারে, ট্রান্সপোর্ট বাফারে AC, IS, এবং EC-এর পরিমাপের জন্য রৈখিকতা, সংবেদনশীলতা, নির্ভুলতা এবং নির্ভুলতার জন্য প্রতিষ্ঠিত HPLC পদ্ধতিগুলি সন্তোষজনক।

ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা এক্সট্র্যাক্ট PHGS75% ECH 30% ACT 12%

বায়োসাই পদ্ধতি দ্বারা PRE নির্ধারণ

বায়োঅ্যাসে (মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতা) এফআরএপি (ফেরিক রিডুসিং/অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট পাওয়ার) অ্যাসের উপর ভিত্তি করে ছিল যা আমরা পূর্বে বর্ণনা করেছি [16] এবং রৈখিকতা এবং নির্ভুলতা (অন্তঃ- এবং আন্তঃ-দিনের পরিবর্তনশীলতা) পরিপ্রেক্ষিতে যাচাই করা হয়েছিল। বায়োসাই পদ্ধতির রৈখিকতা ক্রমাঙ্কন বক্ররেখার উপর ভিত্তি করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। রৈখিকতার ঘনত্বের পরিসীমা ছিল 0৷{16}}625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996)৷ প্রতিষ্ঠিত বায়োসাই পদ্ধতির নির্ভুলতা PRE (10.0 ug/ml) বিশ্লেষণের জন্য ইন্ট্রা- এবং আন্তঃ-দিনের পরিবর্তনশীলতার পরিপ্রেক্ষিতে নির্ধারিত হয়েছিল। পদ্ধতির আন্তঃ-দিনের পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা একই দিনে পরপর পাঁচটি সংকল্পের ভিত্তিতে নির্ধারিত হয়েছিল। তিনটি ভিন্ন দিনে পরপর পাঁচটি নির্ধারণের ভিত্তিতে আন্তঃদিনের পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা পরিমাপ করা হয়েছিল। পদ্ধতির নির্ভুলতার জন্য RSD মানগুলি ছিল যথাক্রমে 1.014% এবং 4.72% আন্তঃ- এবং আন্তঃ-দিনের পরিবর্তনশীলতার জন্য, যা ভাল নির্ভুলতা নির্দেশ করে। এইভাবে, একটি পরিবহন বাফারে PRE-এর পরিমাণ নির্ণয়ের জন্য রৈখিকতা, নির্ভুলতা এবং নির্ভুলতার জন্য প্রতিষ্ঠিত বায়োঅ্যাসে পদ্ধতিটি সন্তোষজনক।

সেল সংস্কৃতি

Caco{{0}} কোষগুলি 37 ডিগ্রী এবং 95% আপেক্ষিক আর্দ্রতায় 5% CO2 এবং DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% এল-গ্লুটামিন, পেনিসিলিন সমন্বিত একটি মাধ্যম রয়েছে (100 U/ml), এবং streptomycin (100 ug/ml)। কোষের বৃদ্ধি এবং পার্থক্যের সময় মাধ্যমটি প্রতি অন্য দিন পরিবর্তিত হয়েছিল। কোষগুলিকে 75-cm2 প্লাস্টিকের ফ্লাস্কে জন্মানো হয়েছিল এবং প্রতি 3-5 দিনে 0.05% EDTA-trypsin দিয়ে কাটা হয়। পরিবহন পরীক্ষা-নিরীক্ষার জন্য, কোষগুলিকে কোলাজেন দিয়ে প্রলিপ্ত ট্রান্সওয়েল সন্নিবেশে 1×105 কোষ/cm2 এর ঘনত্বে বীজ দেওয়া হয়েছিল। বীজ বপনের প্রায় 21 দিন পরে, মোনোলেয়ারগুলি পরিবহন পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA) দ্বারা সজ্জিত একটি EVOM সহ মনোলেয়ার জুড়ে ট্রান্স-এপিথেলিয়াল ইলেকট্রিকাল রেজিস্ট্যান্স (TEER) পরিমাপের মাধ্যমে তাদের অখণ্ডতা নির্ধারণ করা হয়েছিল। Caco-2 সেল মনোলেয়ারের TEER মান 500 O∙cm2 অতিক্রম করতে হবে।

পরিবহন পরীক্ষা

monolayer পরিবহন বাফার (10 মিমি HEPES, 1 mM সোডিয়াম পাইরুভেট, 10 mM গ্লুকোজ, 3 mM CaCl2, এবং 145 mM NaCl, pH 7.4 সমন্বিত P-বাফার) দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপর 20-এর জন্য প্রি-ইনকিউব করা হয়েছিল। 37 ডিগ্রিতে। ট্রান্সপোর্ট বাফার অপসারণের পরে, পরীক্ষার নমুনা ধারণকারী তাজা ট্রান্সপোর্ট বাফারটি এপি-তে এপিকাল (এপি) চেম্বারে (1.5 মিলি) যোগ করা হয়েছিল বাসোলেটারাল (বিএল) দিকনির্দেশক অধ্যয়ন বা বিএল থেকে এপি দিকনির্দেশক অধ্যয়নের বিএল চেম্বার (2.5 মিলি)। এইচপিএলসি ব্যবহার করে এসি, আইএস এবং ইসি অ্যাসের জন্য, প্রতিটি রিসিভার চেম্বার থেকে বিভিন্ন সময়ের ব্যবধানে একটি অ্যালিকোট (300 উল) সরানো হয়েছিল (30, 60, 90 এবং 120 মিনিট)। প্রতিটি নমুনা নেওয়ার পরে রিসিভার চেম্বারটি একই পরিমাণ তাজা প্রিহিটেড (37 ডিগ্রি) পরিবহন বাফার দিয়ে পুনরায় পূরণ করা হয়েছিল। সংগৃহীত নমুনাগুলি আরও ব্যবহারের জন্য −20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। বায়োঅ্যাসে ব্যবহার করে পূর্বনির্ধারণের জন্য, শুধুমাত্র 120 মিনিটে নমুনা নেওয়া হয়েছিল। PRE, AC, IS, এবং EC এর অস্থিরতার কারণে, 0.4% (w/v) ভিটামিন সি ছিল

HPLC দ্বারা AC, IS, এবং EC বিষয়বস্তু নির্ধারণের জন্য নমুনাগুলিকে স্থিতিশীল করার জন্য যোগ করা হয়েছে এবং PRE জৈবসারের নমুনাগুলি নমুনা নেওয়ার পরপরই পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনার আপাত ব্যাপ্তিযোগ্যতা সহগ (Papp বা 'Papp) মান গণনা করা হয়েছিল।

তথ্য বিশ্লেষণ

AC, IS, এবং EC-এর AP BL বা BLAP নির্দেশাবলীতে Papp মানগুলি নিম্নলিখিত সমীকরণের উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়েছিল: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), যেখানে Papp হল আপাত ব্যাপ্তিযোগ্যতা সহগ (cm/s) HPLC দ্বারা নির্ধারিত। (4Q/4t) হল পরীক্ষার যৌগ (AC, IS বা EC) রিসিভার সাইডে (μmol/s); A হল সন্নিবেশের পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল (cm2); C0 হল প্রাথমিক পরীক্ষার যৌগিক ঘনত্ব দাতার দিকে (μmol/ml)। বিশেষভাবে, যখন 'Papp মানগুলি গণনা করা হয়েছিল তখন "μmol" এর পরিবর্তে ভর ইউনিট "ug" ব্যবহার করা হয়েছিল। তথ্য ± SD হিসাবে প্রকাশ করা হয়.

ফলাফল

CD থেকে PRE-তে AC, IS, এবং EC-এর কম্পোজিশন

কারণ এসি, আইএস এবং ইসি প্রধান বায়োঅ্যাকটিভ হিসাবে বিবেচিত হয়Cistanche প্রজাতির PhGs[৮], আমরা HPLC-UV এর মাধ্যমে PRE তে তাদের বিষয়বস্তু বিশ্লেষণ করেছি। প্রতিনিধি ক্রোমাটোগ্রাম চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে। এই উপাদানগুলির সনাক্তকরণটি 334 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে প্রামাণিক মানগুলির সাথে ধরে রাখার সময় এবং UV বর্ণালী তুলনা করার উপর ভিত্তি করে ছিল। PRE-তে AC, IS, এবং EC-এর বিষয়বস্তু যথাক্রমে 26.60%, 1.84% এবং 32.83%। সুতরাং, এই তিনটি যৌগ PRE এর 61.27% জন্য দায়ী; অধিকন্তু, উপরের ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে PRE-তে PhG বিষয়বস্তু 78.4%। তাই, AC, IS, এবং EC PRE-তে প্রায় 80% PhG-এর জন্য দায়ী।

কিডনির কার্যকারিতা উন্নত করার জন্য ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা PHGS75% ECH 30% ACT 12%

PRE, AC, IS, এবং EC এর মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতা

CD থেকে PhG-এর অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ কার্যকলাপের গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে [9], এবং AC, IS, এবং EC PRE-তে প্রায় 80% PhG-এর জন্য দায়ী। এইভাবে, PRE, AC, IS, এবং EC-এর মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্যাপাসিটি এফআরএপি মান (× 10-6 mmol) ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং প্রকাশ করা হয়েছিল। চিত্র 2-তে দেখানো হয়েছে, যখন FRAP মান ছিল 8 × 10–6 mmol, PRE, AC, IS, এবং EC-এর চূড়ান্ত ঘনত্ব ছিল 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml, এবং 4.89 ug /ml, যথাক্রমে, নির্দেশ করে যে এই চারটি নমুনার মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতা নিম্নরূপ: AC > EC > PRE > IS৷ PRE এর জৈব সক্রিয়তা এর সক্রিয় উপাদান গ্রুপ (AIG) এর জন্য দায়ী করা হয়। প্রায় 60% PRE, AC এবং EC PRE এবং IS এর তুলনায় শক্তিশালী মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ কার্যকলাপ দেখিয়েছে। যেহেতু IS (1.84%) PRE-এর খুব ছোট ভগ্নাংশ গঠন করে, অন্যান্য উপাদান যেমন দুর্বলভাবে অ্যান্টিঅক্সিডেটিভ IS, PRE-তেও স্পষ্টভাবে সক্রিয়। আশ্চর্যজনকভাবে, এসি এবং এর আইসোমার আইএস-এর মধ্যে মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্রিয়াকলাপ প্রায় 7-গুণে আলাদা, যা নির্দেশ করে যে শুধুমাত্র ফেনোলিক হাইড্রক্সিল গ্রুপের সংখ্যাই নয় [৯] অণুতে ফেনোলিক হাইড্রক্সিল গ্রুপের অবস্থানও প্রভাবিত করে। অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ প্রভাব।

Caco-2 monolayers এর বৈধতা

Caco-2 সেল মনোলেয়ার সিস্টেমকে যাচাই করার জন্য, প্রোপ্রানোলল (একটি ভাল-পরিবহনযোগ্য মার্কার) এবং লুসিফার হলুদ (একটি খারাপভাবে পরিবহন করা মার্কার) এর প্যাপ মানগুলি AP থেকে BL পর্যন্ত Caco-2 মনোলেয়ার জুড়ে ছিল যথাক্রমে 1.51 × 10–5 cm/s এবং 2.8 × 10–7 cm/s হিসাবে নির্ধারিত, এবং এই মানগুলি পূর্ববর্তী প্রতিবেদনগুলিতে প্রকাশিত [17, 18] এর সাথে একমত। ক্ষারীয় ফসফেটেস অ্যাকটিভিটি অ্যাসেও নিশ্চিত করেছে যে Caco{13}} কোষের মনোলেয়ারগুলি ছোট অন্ত্রের এপিথেলিয়ামের সাথে গুণগতভাবে তুলনীয় ছিল [19]।

AC, IS, এবং EC এর ব্যাপ্তিযোগ্যতা

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1।< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2 [20]. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

PRE এর ব্যাপ্তিযোগ্যতা

উপরের ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে PRE-এর মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতা PRE থেকে AIG-এর 61.27% এর কারণে। এইভাবে, আমরা মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতার ঘনত্ব-প্রভাব বক্ররেখার উপর ভিত্তি করে PRE-এর TR মূল্যায়ন করেছি এবং PRE-এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি প্রতিফলিত করার জন্য 'Papp মানগুলি গণনা করেছি। AP!BL এবং BL!AP-এর জন্য PRE-এর Papp মানগুলি ছিল (2.16 ± 0.26) × 10–7 সেমি/সে এবং (3.13 ± 0.29) × 10–7 সেমি/ s, যথাক্রমে, নির্দেশ করে যে এই যৌগটি খারাপভাবে প্রবেশযোগ্য ছিল। অধিকন্তু, প্রবাহ বা সক্রিয় পরিবহন স্পষ্ট ছিল না কারণ PRE-এর জন্য 'Papp BL থেকে AP / 'Papp AP থেকে BL-এর অনুপাত ছিল 1.45 [20]। অধিকন্তু, PRE-এর দ্বিমুখী TR প্রায় 300 এবং 900 ug/ml (চিত্র 5) এর মধ্যে রৈখিকভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। ফলাফলের দিকনির্দেশক পছন্দের অভাব পরামর্শ দেয় যে প্যাসিভ ডিফিউশন হল PRE এর প্রধান পরিবহন ব্যবস্থা।

আলোচনা

অত্যন্ত বিশুদ্ধ ওষুধের পণ্যের সাথে তুলনা করে, PE সাধারণত এমন মিশ্রণ যা ব্যাপকভাবে বিভিন্ন ভৌত রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য সহ শত শত উপাদান নিয়ে গঠিত। অতএব, PE তাদের জটিল AIG [21] এর কারণে পদ্ধতিগত, মাল্টিটার্গেট এবং মাল্টিচ্যানেল সিনারজিস্টিক অ্যাকশন প্রয়োগ করে, যা PE এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যের বিশ্লেষণকে বাধা দেয়। আরও বৈজ্ঞানিকভাবে PE এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি মূল্যায়ন করার জন্য, কিছু গবেষক PE [22-24]-এ একটি একক উপাদানের পরিবর্তে একাধিক উপাদান চিহ্নিত করেছেন। তবুও, সীমিত সংখ্যক উপাদান সামগ্রিকভাবে PE কে প্রতিফলিত করতে পারে না। যাইহোক, PE-তে সমস্ত উপাদান নির্ধারণ করা অসম্ভব। অধিকন্তু, যদি PE-তে বিভিন্ন উপাদান সম্পূর্ণ ভিন্ন পরিবহন বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে, তাহলে PE-এর সামগ্রিক পরিবহন বৈশিষ্ট্য সনাক্ত করা কঠিন হবে।

1990-এর দশকে, বায়োসাই সিস্টেমগুলি অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল এজেন্টগুলির টিআর মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল [25]। 2005 সাল নাগাদ, এগুচি এবং তার সহকর্মীরা [26] ভিন্ন ভিন্ন ক্যাকো-2 কোষ থেকে বিএল মিডিয়া ব্যবহার করে গাজরের নির্যাসের অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ কার্যকলাপের মূল্যায়ন করেছিলেন; এই পদ্ধতিটি ভিভো পরিস্থিতিতে প্রতিফলিত করার জন্য আরও উপযুক্ত।

পিএইচজিগুলির কার্যকলাপের উপর পূর্ববর্তী প্রতিবেদনের উপর ভিত্তি করে [৯] এবং আমাদের ফলাফল (চিত্র 2), রিসিভার চেম্বারে মাধ্যমের মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতা নির্ধারণ করে PRE-তে AIG-এর TR মূল্যায়ন করা যেতে পারে। পরিবহন পরীক্ষা-নিরীক্ষার পর, আমরা দেখতে পেলাম যে PRE-এর TR উভয় দিকেই একই রকম, এবং এই পরিবহনটি অসম্পৃক্ত এবং খারাপভাবে শোষিত ছিল ('Papp < ​​1.0 × 10–6 সেমি/সে) [3], এবং এটি ইফ্লাক্স নির্দেশ করে না, পরামর্শ দেয় যে একটি ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্টের নিচে প্যাসিভ ডিফিউশন হল PRE এর প্রধান পরিবহন ব্যবস্থা (চিত্র 5)। অধিকন্তু, PRE-এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি AC, IS, এবং EC-এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, কার্যকর উপাদান যা PRE-তে অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ কার্যকলাপ প্রদর্শন করে (চিত্র 4 এবং টেবিল 4)। এই ফলাফলটি প্রত্যাশিত এবং নির্দেশিত ছিল যে বর্তমান বায়োঅ্যাসে সিস্টেমটি ডিফারেনিয়েটেড Caco-2 কোষে PRE-তে AIG-এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যের মূল্যায়নের জন্য উপযুক্ত এবং নির্ভরযোগ্য।

ক্যানোনিকাল Papp মানের বিপরীতে, যা সাধারণত একটি একক যৌগের পরিবহণ প্রতিফলিত করতে ব্যবহৃত হয়, 'ঘনত্ব-প্রভাব বক্ররেখার উপর ভিত্তি করে TR থেকে প্রাপ্ত Papp মান শুধুমাত্র অক্ষত কাঠামোর সাথে মনোলেয়ারে প্রবেশ করে এমন উপাদানগুলিকে প্রতিফলিত করতে পারে না কিন্তু লক্ষ্য ক্রিয়াকলাপের সাথে সম্পর্কিত অন্যান্য কারণগুলিও জড়িত, যেমন উপাদানগুলির বিপাক, রাসায়নিকভাবে ক্ষয়প্রাপ্ত পণ্য এবং এমনকি উদ্দীপনার প্রতিক্রিয়া হিসাবে Caco-2 কোষ থেকে নিঃসৃত কিছু সাইটোকাইন যা লক্ষ্য জৈব সক্রিয়তাকে প্রভাবিত করতে পারে। সুতরাং, শুধুমাত্র পরিবাহিত অক্ষত উপাদানগুলির পরিবর্তে উপরে উল্লিখিত মাল্টিফ্যাক্টর 'প্যাপ মান' নির্ধারণ করে। অতএব, 'প্যাপ ক্যানোনিকাল প্যাপ মানের তুলনায় ভিভো পরিস্থিতিতে আরও দৃঢ়ভাবে সম্পর্কযুক্ত হতে পারে [26]। এই সমীক্ষায়, আমরা PRE এর প্যাসিভলি বিচ্ছুরিত এবং খারাপভাবে শোষিত প্রকৃতিকে এর 'Papp মানের উপর ভিত্তি করে স্পষ্ট করেছি, এবং এই প্রকৃতিটি সিডি [27] এর উচ্চ ডোজ এবং দীর্ঘ ক্লিনিকাল চিকিত্সার সময়ের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। তবুও, এই ফলাফলগুলি সিডির প্রয়োগে চিকিত্সকদের জন্য আরও পদ্ধতিগত দিকনির্দেশনা প্রদান করবে যখন কেবলমাত্র পিএইচজি নয়, সিডিতে বেশিরভাগ AIG-এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি চিহ্নিত করা হয়েছে।

ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা সিস্টানচে এক্সট্রাক্ট PHGS75% ECH 30% ACT 12%

যাইহোক, নির্বাচিত বায়োঅ্যাকটিভিটি আইটেমটি রিসিভার চেম্বারের মাধ্যমে সনাক্ত করার জন্য যথেষ্ট সংবেদনশীল হতে হবে, যা PE এর পরিবহন বৈশিষ্ট্যগুলি মূল্যায়ন করার জন্য একটি বায়োঅ্যাসে সিস্টেম প্রতিষ্ঠার জন্য একটি চ্যালেঞ্জ উপস্থাপন করে। তদ্ব্যতীত, বায়োঅ্যাক্টিভিটি যতটা সম্ভব উপাদানগুলির উপর নির্ভর করবে। আমাদের গবেষণায়, মোট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ ক্ষমতা অ্যাস অন্যান্য বেশ কয়েকটি পদ্ধতির (S1 চিত্র) চেয়ে বেশি উপযুক্ত ছিল। কিন্তু তবুও, আমাদের অ্যাস শুধুমাত্র 120 মিনিটে PRE এর TR সনাক্ত করতে পারে।

সমষ্টিগতভাবে, বর্তমান অধ্যয়নটি ভিন্ন ভিন্ন ক্যাকো-2 কোষে পিআরই-এর অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতা মূল্যায়নের জন্য একটি অভিনব জৈবসার ব্যবস্থা প্রতিষ্ঠা করেছে। প্রাপ্ত ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে প্রবাহ ছাড়াই ঘনত্বের গ্রেডিয়েন্টের নীচে একটি খারাপভাবে শোষিত প্যাসিভ ডিফিউশন হল PRE (চিত্র 5) এর প্রধান পরিবহন প্রক্রিয়া, যা সিডিতে PhG-এর ক্লিনিকাল প্রয়োগের জন্য ফার্মাকোকিনেটিক ভিত্তি প্রদান করে। টিআর মূল্যায়নের জন্য একটি অভিনব বায়োসাই পদ্ধতির ব্যবহার এবং এর মাধ্যমে মূল্যায়নের জন্য 'প্যাপ মানগুলি গণনা করা।অন্ত্রের পরিবহন সম্পত্তিPEs এ AIG এর সম্ভাব্যতা। উপযুক্ত বায়োঅ্যাকটিভিটি দেওয়া অন্যান্য PE-র জন্যও এই পদ্ধতি উপযুক্ত হতে পারে।