ELOVL2 রেনাল সেল কার্সিনোমাতে সেল অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দিয়ে ক্যান্সারের অগ্রগতি প্রচার করে

edmund.chen@wecistanche.com

বিমূর্ত. রেনালসেল কার্সিনোমা (RCC) হল একটি আক্রমনাত্মক জিনিটোরিনারি ম্যালিগন্যান্সি যা একটি দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে যুক্ত, বিশেষ করে মেটাস্টেসিসের রোগীদের ক্ষেত্রে, এর প্রধান উপপ্রকার হল পরিষ্কার কোষ RCC(ccRCC), প্যাপিলারি PCC(pRCC), এবং ক্রোমোফোব RCC(chRCC)। অন্তঃকোষীয় লিপিড ড্রপলেট (LDs) এর উপস্থিতি ccRCC-এর একটি বৈশিষ্ট্য হিসাবে বিবেচিত হয়। ccRCC-তে পরিবর্তিত লিপিড বিপাকের গুরুত্ব ব্যাপকভাবে স্বীকৃত হয়েছে। খুব-লং-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিড (ELOVL) এর প্রসারণ ফ্যাটি অ্যাসিডের (FAs) প্রসারণকে অনুঘটক করে, লিপিড গঠনকে সংশোধন করে এবং স্বাভাবিক শারীরিক ক্রিয়াকলাপের জন্য প্রয়োজনীয়। যাইহোক, RCC-তে elongases জড়িত থাকার বিষয়টি এখনও স্পষ্ট নয়। বর্তমান গবেষণায়, ccRCC-তে ELOVL2 এর অভিব্যক্তি পরীক্ষা করা হয়েছিল; বিশেষ করে, প্রাথমিক টিউমারগুলিতে সাতটি ELOVLisozyme-এর উচ্চ মাত্রা পরিলক্ষিত হয়েছে। উল্লেখ্য, ccRCC এবং pRCC এবং chRCC-তে উন্নত ELOVL2 এক্সপ্রেশনের মাত্রা পরিলক্ষিত হয়েছে। উপরন্তু, ELOVL2 এর উচ্চ স্তর ccRCC এবং pRCC রোগীদের দুর্বল পূর্বাভাসের বর্ধিত ঘটনার সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে যুক্ত ছিল। ELOVL2-এর CRISPR/Cas9-মধ্যস্থিত নকডাউনের ফলে লং-চেইন পলিআনস্যাচুরেটেড এফএ-এর প্রসারণ দমন হয় এবং এলডি উৎপাদন বৃদ্ধি পায়রেনালক্যান্সার কোষ. অধিকন্তু, ELOVL2 বিলুপ্তির ফলে ভিট্রোতে অ্যাপোপটোসিস এবং ভিভোতে টিউমার বৃদ্ধির ক্ষয়করণের মাধ্যমে সেলুলার বিস্তারকে দমন করা হয়েছিল। সামগ্রিকভাবে, বর্তমান অধ্যয়নটি লিপিড মেটাবলিজম জড়িত টিউমার বিস্তার প্রক্রিয়ার নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করে এবং পরামর্শ দেয় যে ELOVL2 RCC থেরাপির জন্য একটি আকর্ষণীয় অভিনব লক্ষ্য হতে পারে।

কীওয়ার্ড:রেনাল সেল কার্সিনোমা, লিপিড ফোঁটা, সেলুলার প্রসারণ, কিডনি, রেনাল

ভূমিকা

রেনাল সেল কার্সিনোমা (RCC) হল একটি সাধারণভাবে সম্মুখীন এবং প্রাণঘাতী ম্যালিগন্যান্সি, যা বিশ্বব্যাপী সমস্ত ক্যান্সারের ক্ষেত্রে ~2 শতাংশ এবং সম্পর্কিত মৃত্যুর জন্য দায়ী RCC (RCC)। সমস্ত RCC সাবটাইপগুলির মধ্যে, ccRCC হল সবচেয়ে সাধারণ হিস্টোলজিকাল প্রকাশ এবং এর প্যাথোজেনেসিসটি ভন হিপেল-লিন্ডাউ (VHL) টিউমার দমনকারী জিনের কার্যকারিতার ক্ষতির কারণে হাইপোক্সিয়া-ইনডিউসিবল ফ্যাক্টর (HIFs) গঠনমূলক সক্রিয়করণ দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। (1)। মেটাস্ট্যাটিক রোগের জন্য ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল গ্রোথ ফ্যাক্টর (ভিইজিএফ) বা রেপামাইসিন (এমটিওআর) সিগন্যালিং এবং ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটারের স্তন্যপায়ী লক্ষ্যবস্তুর বিরুদ্ধে বিভিন্ন লক্ষ্যযুক্ত থেরাপি তৈরি করা হয়েছে। যাইহোক, বেশিরভাগ রোগীর (1,2) মধ্যে রোগের অগ্রগতি অনিবার্য।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ডায়ালাইসিস উন্নত করবে

ccRCC-এর একটি বৈশিষ্ট্য হল আন্তঃকোষীয় লিপিড ড্রপলেট (LDs) এর প্রাচুর্য, যা একটি নিরপেক্ষ লিপিড কোর সমন্বিত ট্রাইগ্লিসারাইড (TGs) এবং কোলেস্টেরল-এস্টার (CEs) একটি ফসফোলিপিড মনোলেয়ার (3) দ্বারা বেষ্টিত। এবং স্টোরেজ এবং হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখতে, শক্তি উৎপাদনের সুবিধার্থে এবং বিভিন্ন ধরণের স্ট্রেস থেকে রক্ষা করতে বা বিভিন্ন ধরণের ক্যান্সারে দ্রুত টিউমার কোষ বৃদ্ধির সময় ঝিল্লি বায়োজেনেসিস বজায় রাখতে ব্যবহৃত হয় (4)। আসলে, পূর্ববর্তী গবেষণাগুলি প্রমাণ করেছে যে LDs ccRCC-তে অবদান রাখে। অগ্রগতি (5,6)।

ফ্যাটি অ্যাসিড (FAs) যা লিপিডের প্রধান উপাদান নিয়ে গঠিত তারা শক্তি সঞ্চয়, ঝিল্লি সংশ্লেষণ এবং সিগন্যালিং অণু উৎপাদনের জন্য সাবস্ট্রেট হিসেবে কাজ করে বলে জানা গেছে। প্রসারণ এবং অসম্পূর্ণতা হল লং-চেইন এফএ (এলসি-এফএ) এর নভো সংশ্লেষণের কেন্দ্রীয় পদক্ষেপ, এফএ ফাংশন এবং বিপাকীয় ভাগ্যের নির্ধারক হিসাবে অসম্পৃক্ততার দৈর্ঘ্য এবং মাত্রা (7)। Stearoyl-CoA desaturase 1(SCD1), ফ্যাটি acyl desaturase পরিবারের সদস্য, ccRCC (6.8.9) তে ব্যাপকভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে। এটি প্রমাণিত হয়েছে যে SCD1 এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি কার্যকরতা সমর্থন করে, যখন একটি SCD1 ছোট অণু প্রতিরোধক (A939572) ccRCC (8.9) এ সেলুলার বিস্তারকে দমন করতে দেখানো হয়েছে। তাছাড়া. ইয়াং এট আল (10) দেখিয়েছেন যে স্টেরল রেগুলেটরি এলিমেন্ট-বাইন্ডিং প্রোটিন 1 (SREBP1) এফএ অ্যাসিড ডেস্যাট-ইউরেস 1 (এফএডিএসআই) এর মাধ্যমে লিপিড ডিস্যাচুরেশনকে প্রচার করেছে সিসিআরসিসিতে সেলুলার প্রসারণের প্রচারের জন্য NF-xB সংকেত সক্রিয় করার আগে। যাইহোক, RCC-তে elongases-এর সম্ভাব্য ভূমিকা অস্পষ্ট থাকে।

এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে, স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে, প্রাথমিক এবং হার-নিয়ন্ত্রক এফএ ঘনীভবন বিক্রিয়াগুলিকে অনুঘটক করা হয় এলনগেজ এনজাইমের একটি পরিবার যাকে খুব-লং-চেইন এফএ (ইএলওভিএল) এর প্রসারণ হিসাবে উল্লেখ করা হয়। আজ অবধি, সাতজন ELOVL সদস্যকে চিহ্নিত করা হয়েছে, যেগুলিকে সাধারণত স্যাচুরেটেড এবং মনোস্যাচুরেটেড এফএ (ELOVL1, ELOVL3, ELOVL6 এবং ELOVL7) বা পলিআনস্যাচুরেটেড FAs (PUFAs; ELOVL2, ELOVL4 এবং ELOVL5) এর জন্য নির্দিষ্ট করে ভাগ করা যেতে পারে। লুকারেলি এট আল (9) PUFA-এর একটি উল্লেখযোগ্য সঞ্চয় এবং ccRCC-তে ELOVL2 এবং ELOVL5 এর বর্ধিত অভিব্যক্তি প্রকাশ করেছে। উল্লেখ্য, এটা প্রমাণিত হয়েছে যে সিস্টেমিক ডকোসাহেক্সায়েনোয়িক অ্যাসিড (DHA) অন্তঃসত্ত্বাভাবে উত্পাদিত হয় এবং নভো লাইপোজেনেসিস নিয়ন্ত্রণ করে, পাশাপাশি স্টেরল রেগুলেটরি এলিমেন্ট-বাইন্ডিং ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর 1 (SREBPF1)-স্বতন্ত্র পদ্ধতিতে লিপিড স্টোরেজকে নিয়ন্ত্রণ করে, ELOVL2 এর কারণে। ইঁদুর (11)। অধিকন্তু, ELOVL2 অত্যধিক এক্সপ্রেশন প্রিডিপোসাইট সেল লাইন 3T3-LI এবং F442A কোষ(12) উভয় ক্ষেত্রেই একটি বর্ধিত FA আপটেকের সাথে LD সঞ্চয়কে উন্নীত করতে দেখানো হয়েছে। পূর্ববর্তী ইন ভিট্রো অধ্যয়ন, ডিএইচএ সহ, ক্যান্সার কোষের জন্য বহিরাগতভাবে পরিচালিত হয়েছিল। প্রমাণ করেছে যে ডিএইচএ ক্যান্সার কোষগুলিতে অ্যান্টি-টিউমারিজেনিক, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি এবং প্রো-অ্যাপোপ্টোটিক প্রভাব প্রয়োগ করে (13-15)। যাইহোক, লিপিড মেটাবলিজমের মডুলেশনের মাধ্যমে ccRCC অগ্রগতিতে ELOVL2-এর যেকোনো সম্ভাব্য ভূমিকা অনেকাংশে অনাবিষ্কৃত থেকে যায়।

বর্তমান গবেষণায়, ELOVL2inccRCCprogres-sion-এর ভূমিকাগুলি প্রাথমিক ccRCC এবং স্বাভাবিকের ট্রান্সক্রিপশনাল প্রোফাইলিং সম্পাদন করে অন্বেষণ করা হয়েছিলকিডনিনমুনা, প্রকাশ করে যে ELOVL2 ccRCC-তে অতিমাত্রায় প্রকাশ করা হয়েছে এবং ELOVL আইসোজাইমের মধ্যে অতিরিক্তভাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। উল্লেখ্য, ELOVL2 ccRCC-এর পাশাপাশি pRCC এবং RCC-তেও অতিরিক্ত এক্সপ্রেসড ছিল, এটি উল্লেখযোগ্যভাবে সিসিআর সিসিআর পিআরসিসি রোগীদের দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে যুক্ত। অধিকন্তু, এটি প্রমাণিত হয়েছিল যে ELOVL2 বাধা লিপিড বিপাককে প্রভাবিত করে এবং অ্যাপোপটোসিসের প্রচারের মাধ্যমে কোষের বিস্তারকে দমন করে, অন্তত আংশিকভাবে এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলাম (ইআর) হোমিওস্ট্যাসিসের ব্যাঘাতের মাধ্যমে।রেনাল ক্যান্সারকোষ বর্তমান গবেষণার ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে ELOVL2 RCC চিকিত্সার জন্য একটি সম্ভাব্য অভিনব থেরাপিউটিক লক্ষ্য হতে পারে।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ব্যর্থতার উন্নতি ঘটাবে

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

সেল লাইন এবং সংস্কৃতি। 293T (RCB2202) এবং OS‑RC‑2 (RCB0735) সেল লাইনগুলি RIKEN বায়োরিসোর্স সেন্টার থেকে কেনা হয়েছিল যখন 786‑O এবং ACHN সেল লাইনগুলি ATCC থেকে কেনা হয়েছিল; SK-RC-52 কোষ ছিল DrJ.G.Old (Memorial Sloan Kettering Cancer Center) এর কাছ থেকে এক ধরনের উপহার। RPTEC সেল লাইন, যা মানুষের এপিথেলিয়াল কোষ থেকে প্রাপ্তরেনালপ্রক্সিমাল টিউবুল, লোনজা গ্রুপ, লিমিটেড (CC-2553) থেকে কেনা হয়েছিল। ACHN, 786‑O, SK‑RC‑52 এবং OS‑RC‑2 কোষ RPMI‑1640 মিডিয়ামে 10 শতাংশ ফিটাল বোভাইন সিরাম (FBS) এর সাথে 37˚C তাপমাত্রায় 5 শতাংশ আর্দ্রতাযুক্ত CO2 বায়ুমণ্ডলে পরিপূরক ছিল। 293T কোষগুলি Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগল মিডিয়ামে 10 শতাংশ ফিটাল বোভাইন সিরাম (FBS) এর সাথে 37˚C তাপমাত্রায় 5 শতাংশ আর্দ্রতাযুক্ত CO2 বায়ুমণ্ডলে পরিপূরক ছিল। আরপিটিইসি কোষগুলিকে সংস্কৃত করা হয়েছিলরেনালএপিথেলিয়াল গ্রোথ মিডিয়াম (REGM™) বুলেটকিট™ (CC‑3190; লোনজা বায়োসায়েন্স) 37˚C তাপমাত্রায় 5 শতাংশ আর্দ্র CO2 বায়ুমণ্ডল সহ।

রোগী এবং ccRCC নমুনা। আরসিসি টিস্যু এবং সংলগ্ন স্বাভাবিককিডনি2006 এবং 2015 এর মধ্যে সুকুবা বিশ্ববিদ্যালয়ের নীতিশাস্ত্র কমিটি (অনুমোদন নম্বর H28-104) দ্বারা অনুমোদিত প্রোটোকল অনুসারে, 2006 এবং 2015 এর মধ্যে র্যাডিকাল বা আংশিক নেফ্রেক্টোমি প্রাপ্ত 46 জন রোগীর থেকে টিস্যুগুলি প্রাপ্ত হয়েছিল। সমস্ত রোগী অস্ত্রোপচারের আগে লিখিত অবহিত সম্মতি প্রদান করে। ইউনিয়ন ফর ইন্টারন্যাশনাল ক্যান্সার কন্ট্রোল (16) এর টিএনএম স্টেজিং অনুসারে টিউমারের পর্যায়গুলি বরাদ্দ করা হয়েছিল। প্যাথলজিকাল গ্রেডগুলি শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল, চার-স্তরযুক্ত ফুহরম্যান গ্রেডিং সিস্টেম (17) অনুসারে। সমস্ত রোগীর বৈশিষ্ট্য সারণী এসআই আরএনএ নিষ্কাশন এবং সিডিএনএ সংশ্লেষণে সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে। হিমায়িত টিস্যু থেকে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল এবংরেনালTRIzol® Reagent ব্যবহার করে ক্যান্সার কোষ (Thermo Fisher Scientific, Inc.)। আরএনএ বিশুদ্ধকরণের পরে, প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে, আরএনএকে উচ্চ-ক্ষমতার সিডিএনএ রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন কিট (বিড়াল নং 4368814; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক.) ব্যবহার করে সিডিএনএ-তে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল।

বিপরীত প্রতিলিপি-পরিমাণগত পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (RT-qPCR)। ফাস্ট এসওয়াইবিআর-গ্রিন মাস্টার মিক্স (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক।) সহ একটি 7500 ফাস্ট রিয়েল-টাইম পিসিআর মেশিন ব্যবহার করে জিনের এক্সপ্রেশনের মাত্রা নির্ধারণ করা হয়েছিল। সাইকেল চালানোর শর্তগুলি নিম্নরূপ ছিল: 20 সেকেন্ডের জন্য 95˚C এ প্রাথমিক হোল্ড, 3 সেকেন্ডের জন্য 95˚C এবং 30 সেকেন্ডের জন্য 60˚C তাপমাত্রায় 40টি চক্র, তারপর 15 সেকেন্ডের জন্য 95˚C থেকে 60˚ সেকেন্ডের জন্য একটি গলনা বক্ররেখা। 1 মিনিটের জন্য সি. Hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1) একটি অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। সমস্ত প্রাইমার সিকোয়েন্স সারণি SII এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে। অ্যাপোপটোসিস-সম্পর্কিত জিনগুলি মূল্যায়ন করার জন্য, প্রো-অ্যাপোপ্টোটিক জিনের আপেক্ষিক অভিব্যক্তি স্তর, Bcl-2-সম্পর্কিত X প্রোটিন (BAX), Bcl-2 সমজাতীয় প্রতিপক্ষ/হত্যাকারী (BAK), ফোরবল-12-মাইরিস্টেট3 অ্যাসিটেট-প্ররোচিত প্রোটিন 1 (PMAIP1/NOXA) এবং p53 আপরেগুলেটেড মডুলেটর অফ অ্যাপোপটোসিস (BBC3/PUMA) এবং অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক জিন BCL2 এবং প্ররোচিত মাইলয়েড লিউকেমিয়া সেল ডিফারেন্সিয়েশন প্রোটিন জিন (MCL1) বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। 2‑ΔΔCq পদ্ধতি (18) ব্যবহার করে আপেক্ষিক জিনের অভিব্যক্তির মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছিল।

ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ। পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (19)। কোষগুলি লাইসিস বাফারে (20 মিমি Tris‑HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 শতাংশ SDS এবং প্রোটিজ ইনহিবিটর) এবং বরফের উপর সোনিকেট করা হয়েছিল। লাইসেটগুলিকে 1,000 xg-এ 20 মিনিটের জন্য 4˚C তাপমাত্রায় কেন্দ্রীভূত করা হয়েছিল এবং নমুনা হিসাবে সুপারনাট্যান্টগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল। নমুনার প্রোটিন পরিমাপ কুইক স্টার্ট ব্র্যাডফোর্ড প্রোটিন অ্যাস (বিড়াল নং 5000202JA; Bio-Rad Laboratories, Inc.) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। নমুনাগুলি 10 শতাংশ SDS-PAGE-এর অধীন ছিল এবং পৃথক পণ্যগুলি পরবর্তীকালে PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ইনফেকশনের উন্নতি ঘটাবে

ঘরের তাপমাত্রায় 60 মিনিটের জন্য ইসিএল প্রাইম ব্লকিং এজেন্ট (বিড়াল নং RPN418V; সাইটিভা) দিয়ে ঝিল্লিগুলি ব্লক করা হয়েছিল। তারপরে ঝিল্লিগুলিকে নিম্নলিখিত অ্যান্টিবডিগুলির সাথে 4˚C তাপমাত্রায় রাতারাতি ইনকিউবেট করা হয়েছিল: অ্যান্টি-সেরিন/থ্রেওনাইন-প্রোটিন কিনেস/এন্ডোরিবোনুক্লিজ ইনোসিটল-প্রয়োজন এনজাইম 1 (অ্যান্টি-আইআরই1; 1:200; #3294, সেল সিগন্যাল)। অ্যান্টি-ফসফরিলেটেড আইআরই1 (অ্যান্টি-পি-আইআরই1; 1:200; এনবি100-2323, নোভাস বায়োলজিক্যালস, এলসিসি), অ্যান্টি-সি/ইবিপি হোমোলগাস প্রোটিন (অ্যান্টি-চপ; 1:200; MA1-250, এফএমওসিইশার .) খরগোশ-বিরোধী বা মাউস-বিরোধী ইমিউনোগ্লোবিউলিন G এইচআরপি-লিঙ্কযুক্ত, সম্পূর্ণ গাধা Ab (বিড়াল নং NA934V, NA931VS; GE স্বাস্থ্যসেবা; Cytiva) 1:10,000 সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল। ইমিউনোস্টার® জেটা (ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল কর্পোরেশন) একটি ফুজিফিল্ম LAS‑4000 ইমেজার এবং LAS400IR (FUJIFILM ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল কর্পোরেশন) ব্যবহার করে পশ্চিমা ব্লটগুলিকে কল্পনা করা হয়েছিল। ‑অ্যাক্টিন অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল (1:10,000, বিড়াল নং A5316; সিগমা-অলড্রিচ)।

জিনের অভিব্যক্তি বায়োইনফরমেটিক্স বিশ্লেষণ। ক্যান্সার জিনোম অ্যাটলাস (TCGA) ডাটাবেসে RCC রোগীদের কাছ থেকে সংগৃহীত প্রাথমিক টিউমারের ক্লিনিকাল এবং RNA-সিকোয়েন্সিং (RNA-seq) ডেটা জিনোমিক ডেটা কমন্স (GDC) ডেটা পোর্টাল (20) থেকে ডাউনলোড করা হয়েছিল। মোট 1,005টি (880টি রোগাক্রান্ত এবং 125টি নিয়ন্ত্রণ) নমুনা পরীক্ষা করা হয়েছে, যার মধ্যে 530টি রোগাক্রান্ত এবং 71টি নিয়ন্ত্রণ নমুনা রয়েছেকিডনি রেনালক্লিয়ার সেল কার্সিনোমা কোহর্ট (KIRC; ccRCC), 286টি রোগাক্রান্ত এবং সার্ভিকালের জন্য 31টি সুস্থ নমুনাকিডনি রেনালপ্যাপিলারি সেল কার্সিনোমা কোহর্ট (KIRP; pRCC), এবং কিডনি ক্রোমোফোব কোহর্ট (KICH; chRCC) এর জন্য 64 টি রোগাক্রান্ত এবং 23 টি সুস্থ নমুনা। জেনিটোরিনারি ক্যান্সারের নমুনায় ELOVL2 জিনের অভিব্যক্তি স্বাভাবিক এবং টিউমার টিস্যু (GENT2) এর জিন এক্সপ্রেশন ডাটাবেস ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। জিন এক্সপ্রেশন ডেটা U133 প্লাস 2 (GPL570) প্ল্যাটফর্ম (http://gent2.appex.kr/gent2/) (21) এর জিন এক্সপ্রেশন অমনিবাস (GEO) পাবলিক রিপোজিটরি থেকে ডাউনলোড করা হয়েছিল।

প্লাজমিড এবং লেন্টিভাইরাল ট্রান্সডাকশন। ELOVL2 এর জন্য ছোট হেয়ারপিন RNAs (shRNAs) পূর্ববর্তী গবেষণায় চিহ্নিত করা হয়েছে (22,23) লেন্টিভাইরাল ভেক্টর pLKO.1 (প্লাজমিড #8453; Addgene, Inc.) এ সাবক্লোন করা হয়েছিল। shRNA ভেক্টর নির্মাণে ব্যবহৃত অলিগোনিউক্লিওটাইড ক্রমগুলি সারণি SIII এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে। লেন্টিভাইরাল ভেক্টর (pLKO‑shControl বা pLKO‑shELOVL2), pMDLg/pRRE (প্লাজমিড #12251; Addgene, Inc. #1251; Addgene, #2pRev51), ট্রান্সে চারটি প্লাজমিড সহ-ট্রান্সফেক্ট করে 293T কোষে লেন্টিভাইরাস তৈরি করা হয়েছিল। ; Addgene, Inc.), এবং pMD2.G (প্লাজমিড #12259; Addgene, Inc.) Lipofectamine 2000® ট্রান্সফেকশন রিএজেন্ট (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, Inc.) ব্যবহার করে। ট্রান্সফেকশন-পরবর্তী 48 ঘন্টায়, ভাইরাসযুক্ত সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সংক্রমণের জন্য 0.45‑µm ফিল্টারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল। ভাইরাল ট্রান্সডাকশনের জন্য, pLKO‑shControl বা pLKO‑shELOVL2 লেন্টিভাইরাসগুলিকে 786‑O, ACHN এবং SK‑RC‑52 কোষ দিয়ে রাতারাতি 37˚C তাপমাত্রায় একটি আর্দ্রতাযুক্ত সেল কালচার ইনকিউবেটরে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। সংক্রমণের 24 ঘন্টা পরে পিউরোমাইসিনের উপস্থিতিতে কোষগুলি নির্বাচন করা হয়েছিল। সাবক্লোনগুলিকে স্থিতিশীল করার জন্য, কোষগুলিকে 37˚C তাপমাত্রায় 1 মাসের জন্য পিউরোমাইসিন দিয়ে মাঝারিভাবে একটি আর্দ্র কোষ সংস্কৃতি ইনকিউবেটরে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং বেঁচে থাকা পুলগুলি প্রকাশ এবং বিস্তার বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

অত্যধিক এক্সপ্রেশন পরীক্ষার জন্য, OSRC‑2 কোষগুলি pCMV6 খালি ভেক্টর (প্লাজমিড #PS100001; Origene Technologies, Inc.) বা pCMV6‑ELOVL2 (প্লাজমিড #RC209232; Origene Technologies, Inc.) hu3˚Ccell সংস্কৃতিতে a3 ˚ মিড্ডিফাইড সেলের মাধ্যমে স্থানান্তরিত হয়েছিল। ইনকিউবেটর, প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে Lipofectamine 3000® ট্রান্সফেকশন রিএজেন্ট (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক.) ব্যবহার করে। কোষগুলি 48 ঘন্টা পোস্ট-ট্রান্সফেকশনে নির্দেশিত অ্যাসের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। CRISPR/Cas9 ডিজাইন এবং ক্লোনিং। pX330‑U6‑Chi‑meric_BB‑CBh‑hSpCas9 (pX330) প্লাজমিড ছিল ফেং ঝাং (Addgene, Inc.; প্লাজমিড #42230) (24) থেকে একটি উপহার। CRISPR ডিজাইন টুল (GE Healthcare Dharmacon, Inc.) ব্যবহার করে ELOVL2-এর জন্য CRISPR একক-গাইড (sg) সিকোয়েন্সগুলিকে বিশেষভাবে ELOVL2-এর exon 2 (sgELOVL2 #1) এবং exon 3 (sgELOVL2 #2 এবং #3) লক্ষ্য করা হয়েছিল;‑discovery.com/gene-editing/crispr‑cas9/crispr‑design‑tool/), pX330 এ ক্লোন করার আগে। সিঙ্গেল-গাইড কন্ট্রোল (sgControl) এর জন্য CRISPR গাইড সিকোয়েন্স পূর্বে ডিজাইন করা হয়েছিল (25)। একক-গাইড RNAs (sgRNAs) এর অলিগোনিউক্লিওটাইড ক্রমগুলি সারণি SIII-এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে

এরপর ACHN কোষগুলিকে 6-ওয়েল প্লেটে (1.4x105টি কোষ/ওয়েল) বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং 2 ঘন্টা পরে 2 µg pX330‑প্রকাশিত sgRNAs এবং 0.2 µg pCI‑neo ভেক্টর (প্রোমেগা কর্পোরেশন; cat. no. E1841) 37˚C তাপমাত্রায় একটি আর্দ্র সেল কালচার ইনকিউবেটরে, FuGENE HD (Promega Corporation; cat. no. E2312) ব্যবহার করে। 24 ঘন্টা পোস্ট-ট্রান্সফেকশনে, 400 μg/ml G418 7 থেকে 10 দিনের জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং কোষগুলিকে 2 বা 3 দিনের জন্য পুনরুদ্ধার করার অনুমতি দেওয়া হয়েছিল। যখন কোষগুলি সঙ্গমের কাছাকাছি চলে আসছিল, তখন সেগুলিকে 10 সেন্টিমিটারের থালায় অল্প পরিমাণে পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল। 2 বা 3 সপ্তাহ পরে, ক্লোনিং ডিস্ক (মিলিপুর সিগমা; বিড়াল নং Z374431‑100EA) ব্যবহার করে স্পষ্ট উপনিবেশগুলিকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। স্বতন্ত্র ক্লোনগুলিকে প্রসারিত করা হয়েছিল এবং লক্ষ্য এলাকার জন্য স্যাঞ্জার সিকোয়েন্সিং দ্বারা নকআউট অবস্থার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ব্যথার উন্নতি ঘটাবে

সেলুলার বিস্তার assays. প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সেল কাউন্টিং কিট-8 (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Inc.) দিয়ে MTT অ্যাস ব্যবহার করে সেলুলার বিস্তার মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, কোষগুলিকে 96‑কূপ প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং 37˚C তাপমাত্রায় 1‑ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে 72 h.OD460 পরিমাপ করার পরে WST-8 এর 10 μl যোগ করা হয়েছিল। সাবকুটেনিয়াস জেনোগ্রাফটিং। BALB/c নগ্ন (nu/nu) মাদি ইঁদুর (n=12; 6-8 সপ্তাহ বয়সী) চার্লস রিভার ল্যাবরেটরিজ, Inc. থেকে কেনা হয়েছিল। ইঁদুরগুলিকে নির্দিষ্ট প্যাথোজেন-মুক্ত অবস্থায় 12‑ অধীনে রাখা হয়েছিল। h আলো/অন্ধকার চক্র, খাদ্য এবং জলের বিজ্ঞাপন লিবিটাম অ্যাক্সেস সহ। সাবকুটেনিয়াস জেনো-গ্রাফ্ট অ্যাসেসের জন্য, 100 μl পিবিএস-এ সাসপেন্ড করা 1x107 কোষগুলিকে 24G সুই ব্যবহার করে ডান দিকের অংশে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং টিউমারের পরিমাণ সপ্তাহে একবার পরিমাপ করা হয়েছিল। টিউমারের পরিমাণ সূত্র দ্বারা গণনা করা হয়েছিল: মিমি3=দৈর্ঘ্য x প্রস্থ x উচ্চতা x 0.52 (26)। 90 দিন পরে, সমস্ত প্রাণী বলি দেওয়া হয়েছিল, এবং জেনোগ্রাফ্ট টিউমারগুলি কেটে ফেলা হয়েছিল। জরায়ুর স্থানচ্যুতি দ্বারা euthanized হওয়ার আগে প্রাণীদের 2 শতাংশ আইসোফ্লুরেন দিয়ে অ্যানেস্থেটাইজ করা হয়েছিল

জেনোগ্রাফ্ট টিউমারের ফরমালিন-ফিক্সড এবং প্যারাফিন-এমবেডেড (এফএফপিই) নমুনাগুলি ডিপারাফিনাইজেশন এবং রিহাইড্রেশনের আগে 4‑µm-পুরু অংশে কাটা হয়েছিল। অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধারের জন্য, বিভাগগুলি সাইট্রিক অ্যাসিড বাফারে 21 মিনিটের জন্য মাইক্রোওয়েভ দ্বারা প্রিট্রিট করা হয়েছিল। অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার পদ্ধতির পরে, 25 মিনিটের জন্য 3 শতাংশ H2O2 দিয়ে অন্তঃসত্ত্বা পেরোক্সিডেস ক্রিয়াকলাপ অবরুদ্ধ করা হয়েছিল এবং স্লাইডগুলিকে কি-67 অ্যান্টিবডি (1:200; ডাকো; অ্যাজিলেন্ট টেকনোলজিস, ইনক.; M7240) রাতারাতি 4˚C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। ক্রোমোজেন হিসাবে ডায়ামিনোবেনজিডিন ব্যবহার করে সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি হিস্টোফাইন সিম্পল স্টেইন ম্যাক্স পিও® (নিচিরেই বায়োসায়েন্সেস, ইনক,; বিড়াল নং 424151) ব্যবহার করে ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল প্রতিক্রিয়াটি কল্পনা করা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণী অধ্যয়ন সুকুবা বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রাণী পরীক্ষা কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল এবং সমস্ত পরীক্ষাগুলি সুকুবা বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রাণী পরীক্ষার রেগুলেশনস (অনুমোদন নম্বর 20-370) এর নির্দেশিকা অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল। Apoptosis assays. ক্যাসপেস-গ্লো® 3/7 অ্যাসে সিস্টেম (প্রোমেগা কর্পোরেশন; বিড়াল নং জি 8090), অ্যানেক্সিন-ভি-ফ্লুওস স্টেনিং কিট (রোচে ডায়াগনস্টিকস; বিড়াল নং 11858777001), এবং জেসি-অনড্রিনাল মিয়্যান্ট্রিয়াল 11858777001 ব্যবহার করে অ্যাপোপটোসিস মূল্যায়ন করা হয়েছিল। অ্যাসে কিট (কেম্যান কেমিক্যাল কোম্পানি; বিড়াল নং 10009172), প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে।

LDs এর দাগ। কোষগুলিকে 60মিমি থালায় কাচের কভারস্লিপগুলিতে বীজ করা হয়েছিল এবং একটি 5 শতাংশ CO 2 ইনকিউবেটরে রাতারাতি 37˚C তাপমাত্রায় ওলিক অ্যাসিড (200 µM)) দিয়ে কালচার করা হয়েছিল। মাঝারিটি তখন অ্যাসপিরেটেড ছিল, এবং ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য 4 শতাংশ ফর্মালডিহাইড (ফুজিফিলম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল কর্পোরেশন) দিয়ে ফিক্সেশনের আগে কোষগুলি পিবিএস দিয়ে দুবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। তারপরে কোষগুলিকে পিবিএস দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয় এবং 37˚C তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য 0.5 µM লিপি-গ্রিন (ডোজিন্ডো মলিকুলার টেকনোলজিস, ইনক.) দিয়ে ইনকিউব করা হয়। তারপরে, কোষগুলি পিবিএস দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং DAPI (ভেক্টর ল্যাবরেটরিজ, ইনক.; বিড়াল নং H‑1200) এর সাথে VECTASHIELD® অ্যান্টিফেড মাউন্টিং মিডিয়াম ব্যবহার করে কাচের স্লাইডে কভারস্লিপগুলি মাউন্ট করা হয়েছিল। দাগযুক্ত কোষগুলির চিত্রগুলি একটি BZ‑X710 ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ (Keyence Corporation) দিয়ে অর্জিত হয়েছিল। HBSS-এ দুবার ধোয়ার আগে 30 মিনিটের জন্য হ্যাঙ্কসের ব্যালেন্সড সল্ট সলিউশনে (HBSS) 0.5 µM Lipi-Green দিয়ে জীবন্ত কোষগুলিকে ইনকিউব করা হয়েছিল, 0.5 শতাংশ BSA সহ 1 mM EDTA/PBS (pH 8.0) তে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল এবং একটি সেল স্ট্রেনার মাধ্যমে পাস করা হয়েছিল। . কোষগুলি একটি গ্যালিওস ফ্লো সাইটোমিটারে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (বেকম্যান-কুলটার, ইনক।) এবং ফ্লোজো v10 সফ্টওয়্যার (ফ্লোজো এলএলসি) ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

ER ট্র্যাকার স্টেনিং। ACHN কোষগুলি (ACHN/sgControl, ACHN/sgELOVL2‑1 এবং ACHN/sgELOVL2‑2) 6{{20}‑মিমি খাবারে কাচের কভারস্লিপে বীজ করা হয়েছিল এবং 48 ঘন্টার জন্য 37˚C তাপমাত্রায় সংষ্কৃত হয়েছিল একটি 5 শতাংশ CO 2 ইনকিউবেটর। মাধ্যমটিকে তখন অ্যাসপি-রেট করা হয়েছিল, এবং ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য 4 শতাংশ ফর্মালডিহাইড (ফুজিফিলম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল কর্পোরেশন) দিয়ে ফিক্সেশন করার আগে কোষগুলিকে HBSS দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। তারপরে কোষগুলিকে HBSS দিয়ে দুবার ধুয়ে 500 nM ER ট্র্যাকার রেড (Thermo Fisher Scientific, Inc.; cat. no. E34250) দিয়ে 37˚C তাপমাত্রায় অন্ধকারে 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, কোষগুলি পিবিএস দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং কভারস্লিপগুলি কাচের স্লাইডে মাউন্ট করা হয়েছিল। দাগযুক্ত কোষগুলির চিত্রগুলি একটি BZ‑X710 ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ (Keyence Corporation) দিয়ে অর্জিত হয়েছিল। HBSS-এ দুবার ধোয়ার আগে 30 মিনিটের জন্য HBSS-এ 500 nM ER ট্র্যাকার দিয়ে লাইভ কোষগুলিকে ইনকিউবেট করা হয়েছিল, 0.5 শতাংশ BSA সহ 1 mM EDTA/PBS (pH 8.0) তে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল এবং একটি সেল স্ট্রেইনারের মধ্য দিয়ে পাস করা হয়েছিল। কোষগুলি গ্যালিওস ফ্লো সাইটোমিটারে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং ফ্লোজো ভি 10 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি (GC-MS)। সেল পেলেট থেকে মোট লিপিড নিষ্কাশন পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সম্পাদিত হয়েছিল (27)। এফএ মিথাইল এস্টার (এফএএমইএস) এর নির্যাসগুলির হাইড্রোলাইসিস এবং ডেরিভেটাইজেশন করা হয়েছিল। কনজুগেটেড এফএ-এর অভ্যন্তরীণ মানের জন্য, C20:4 (ω‑6), C20:5 (ω‑3), C22:5 (ω‑6), C22:5 (ω‑3) এবং C22 :6 (ω‑3) মিলিপুর সিগমা বা কেম্যান কেমিক্যাল কোম্পানি থেকে FAME কেনা হয়েছিল। ওমেগাওয়াক্স® ক্যাপিলারি জিসি কলাম (মিলিপুরসিগমা; বিড়াল নং 24136) সহ একটি GCMS-TQ8040 (Shimadzu Corporation) ব্যবহার করে GC-MS বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। তাপমাত্রা গ্রেডিয়েন্ট প্রাথমিকভাবে প্রতি মিনিটে 20˚C হারে 70 থেকে 150˚C এবং প্রতি মিনিট 8˚C হারে 150 থেকে 280˚C হারে 280 থেকে 200˚C কমার আগে 15 হারে বৃদ্ধি করা হয়েছিল। ˚C প্রতি মিনিট। 1.0 μl নমুনা ইনজেকশন সহ স্প্লিটলেস মোডে নমুনা ইনজেকশন সঞ্চালিত হয়েছিল। এমএস বিশ্লেষণের জন্য, আয়ন উত্স এবং ইন্টার-ফেস তাপমাত্রা যথাক্রমে 200˚ এবং 270˚C এ সেট করা হয়েছিল। আয়নাইজেশন ভোল্টেজের 70 eV এর অধীনে সম্পূর্ণ স্ক্যান মোডে (30-600 m/z) ডেটা অর্জিত হয়েছিল। FAMEগুলিকে ধরে রাখার সময় এবং ইলেক্ট্রন আয়নাইজেশন-এমএস (EI-MS) রেফারেন্স FAME স্ট্যান্ডার্ডের সাথে মিলিত বর্ণালী অনুসারে চিহ্নিত করা হয়েছিল। FAME-এর আপেক্ষিক পরিমাণ প্রতি নমুনা ভরের গড় পিক এলাকা তুলনা করে গণনা করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনা স্বাধীনভাবে তিনবার পরিমাপ করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ. ডেটা গড় ± SD হিসাবে প্রকাশ করা হয়। সমস্ত পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ JMP 10 সফ্টওয়্যার (SAS Institute, Inc.), GraphPad Prism8 (GraphPad Software, Inc.) বা R প্যাকেজ (সংস্করণ 4.0.2; RStudio, Inc.) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। দুটি গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যের তাত্পর্যটি আনপেয়ারড স্টুডেন্টস টি-টেস্ট বা মান-হুইটনি পরীক্ষা ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। তিন বা ততোধিক গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যের তাত্পর্য একমুখী ANOVA ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল পোস্ট-হক তুলনার সাথে Dunnett's test বা Kruskal-Wallis টেস্ট ব্যবহার করে তারপরে Bonferroni সংশোধন সহ Dunn's post hoc টেস্ট। সারভাইভাল কার্ভগুলি কাপলান-মিয়ার পদ্ধতি ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল এবং লগ-র্যাঙ্ক পরীক্ষা ব্যবহার করে বক্ররেখাগুলির মধ্যে পার্থক্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল। মিডিয়ান এক্সপ্রেশন মানগুলির কাটঅফ ব্যবহার করে রোগীদের দুটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল, একটি নিম্ন অভিব্যক্তি বা উচ্চ অভিব্যক্তি গ্রুপ। পৃ<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

ফলাফল

ELOVL2 RCC-তে অত্যন্ত মাত্রাতিরিক্ত। সংশ্লিষ্ট স্বাভাবিক এবং টিউমার টিস্যুতে সাতটি ELOVL আইসোজাইমের প্রাচুর্য প্রথমে বর্তমান দলে পরীক্ষা করা হয়েছিল, যা প্রকাশ করে যে ELOVL1, ELOVL2, ELOVL5 এবং ELOVL7 অভিব্যক্তি স্তরগুলি ccRCC টিস্যুতে উন্নত ছিল (চিত্র 1A)। এই ফলাফলগুলিকে যাচাই করার জন্য, TCGA ডাটাবেস (KIRC কোহর্ট) ব্যবহার করে সংশ্লিষ্ট স্বাভাবিক এবং টিউমার টিস্যুতে ELOVL আইসোজাইম জিনের অভিব্যক্তি পরীক্ষা করা হয়েছিল। এটা নিশ্চিত করা হয়েছে যে ELOVL2 mRNA এক্সপ্রেশন ccRCC টিস্যুতে সবচেয়ে বেশি এবং উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত ছিল (চিত্র 1B; P<0.0001). subsequently,="" elovl2="" mrna="" expression="" was="" investigated="" further="" among="" three="" major="" histological="" subtypes="" of="" rcc="" using="" tcga="" database="" (kirc,="" kirp="" and="" kich="" cohorts).="" this="" revealed="" that="" elovl2="" was="" overexpressed="" in="" the="" prcc="" and="" chrcc="" tissues;="" however,="" its="" expression="" in="" ccrcc="" tissues="" was="" the="" highest="" among="" the="" histological="" subtypes="" (fig.="" 1c).="" moreover,="" the="" elovl2="">

ACHN, 786‑O এবং SK‑RC‑52 সেল লাইনগুলিতে অভিব্যক্তির মাত্রাগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত ছিল, যদিও OS-RC-2 সেল লাইনে mRNA এক্সপ্রেশন স্তরগুলি RPTEC সেল লাইনের তুলনায় কম ছিল (চিত্র 1D) . পরবর্তীকালে, বিভিন্ন ধরণের ক্যান্সারে ELOVL2 জিনের প্রকাশের ক্যান্সার-সম্পর্কিত পরিবর্তন GENT2 ডাটাবেস (চিত্র 1E) ব্যবহার করে তদন্ত করা হয়েছিল। স্বাভাবিক টিস্যুর সাথে তুলনা করে, ELOVL2 এক্সপ্রেশন উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি পাওয়া গেছেকিডনি, প্রোস্টেট, ফুসফুস এবং কোলন ক্যান্সার, যেখানে ELOVL2 এক্সপ্রেশন মূত্রাশয় বা স্তন ক্যান্সারে একই রকম ছিল। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে ELOVL আইসোজাইমের ভূমিকা ক্যান্সারের ধরন দ্বারা পৃথক এবং ELOVL2 অত্যধিক এক্সপ্রেশন RCC এর কার্সিনোজেনেসিস বা রোগের অগ্রগতির সাথে যুক্ত হতে পারে, বিশেষ করে ccRCC।

ELOVL2 ওভার এক্সপ্রেশন RCC এর অগ্রগতির সাথে যুক্ত। ccRCC-তে ELOVL2-এর ক্লিনিকাল তাত্পর্য স্পষ্ট করার জন্য KIRC কোহর্টে ELOVL2 এবং টিউমার-নোড-মেটাস্টেসিস (TNM) পর্যায়ের জিনের অভিব্যক্তির মধ্যে সম্পর্ক পরীক্ষা করা হয়েছিল। স্থানীয়ভাবে উন্নত এবং মেটাস্ট্যাটিক রোগে ELOVL2 এক্সপ্রেশন বেশি ছিল, যদিও এর অভিব্যক্তি লিম্ফ নোড মেটাস্ট্যাসিস স্ট্যাটাসের সাথে যুক্ত ছিল না (চিত্র 2A‑C)। সম্মিলিতভাবে, ELOVL2 এক্সপ্রেশন ক্লিনিকাল পর্যায় (চিত্র 2D) অনুযায়ী বৃদ্ধি করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, CCRCC-এর ক্লিনিকাল প্রভাব ব্যাখ্যা করার জন্য, ELOVL2-এর অভিব্যক্তি এবং RCC-এর রোগীদের পূর্বাভাসের মধ্যে সংযোগ মূল্যায়ন করা হয়েছিল। Kaplan-Meier বিশ্লেষণ অনুসারে, এটি প্রকাশিত হয়েছিল যে ELOVL2 এর উচ্চ অভিব্যক্তিটি বর্তমান দলে একটি দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে যুক্ত ছিল (P=0.0015, চিত্র 2E)। এই ফলাফলগুলি যাচাই করার জন্য, ELOVL2 এর অভিব্যক্তি এবং ccRCC রোগীদের পূর্বাভাসের মধ্যে সংযোগটি KIRC কোহর্টে আরও পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং এটি প্রদর্শিত হয়েছিল যে, একইভাবে, ELOVL2 এর উচ্চ অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে একটি দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে যুক্ত ছিল (P<0,01, fig.="" 2f).="" moreover,="" a="" high="" expression="" of="" elovl2="" was="" significantly="" associated="" with="" a="" poor="" prognosis="" of="" patients="" with="" prcc=""><0.0001, fig.="" 2g).="" however,="" this="" was="" not="" observed="" in="" patients="" with="" chrcc="" (fig.="" 2h).="" in="" total,="" the="" aforementioned="" results="" indicated="" that="" elovl2="" may="" mediate="" ccrcc="" and="" prcc="" disease="" progression,="" at="" least="">

ELOVL2 রেনাল ক্যান্সার কোষের বিস্তারকে উৎসাহিত করে। RCC কোষের বিস্তারে ELOVL2 এর কার্যকারিতা মূল্যায়ন করার জন্য, 786‑O, ACHN এবং SK‑RC‑52 কোষে ELOVL2 এর shRNA নকডাউন করা হয়েছিল। প্রতিটি shRNA এর প্রভাব RT-qPCR ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং ELOVL2 এক্সপ্রেশনে একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস নিশ্চিত করা হয়েছিল (চিত্র 3A)। সেলুলার বিস্তারের উপর ELOVL2 নকডাউনের প্রভাবগুলি পরীক্ষা করার জন্য এমটিটি অ্যাসেস করা হয়েছিল। এটা দেখা গেছে যে ELOVL2 এর নকডাউন নিয়ন্ত্রণ shRNA (চিত্র 3B) দ্বারা স্থানান্তরিত কোষের তুলনায় সমস্ত কোষের বিস্তারকে বাধা দেয়।

বিপরীতে, ELOVL2 অত্যধিক এক্সপ্রেশন OS-RC-2 কোষে প্ররোচিত হয়েছিল, ELOVL2 এর নিম্ন বেসাল এক্সপ্রেশন সহ একটি সেল লাইন। RT‑qPCR ব্যবহার করে ট্রান্সফেকশন কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং ELOVL2 এর উল্লেখযোগ্যভাবে বর্ধিত অভিব্যক্তি নিশ্চিত করা হয়েছিল (চিত্র 3C)। এমটিটি অ্যাসেস প্রকাশ করেছে যে ELOVL2-ওভার এক্সপ্রেসিং কোষের বিস্তার উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নীত হয়েছিল, নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের (চিত্র 3D) সাথে তুলনা করে, ইঙ্গিত করে যে ELOVL2 এর বিস্তারের প্রবর্তক হতে পারেরেনালক্যান্সার কোষ.

ELOVL2 অ্যাবলেশন ভিভোতে টিউমার বৃদ্ধি, PUFA-এর সংশ্লেষণ এবং LDs উৎপাদনকে দমন করেরেনালক্যান্সার কোষ. RCC অগ্রগতিতে ELOVL2 এর ভূমিকা আরও স্পষ্ট করার জন্য, একটি ELOVL2-নকআউট ACHN সেল লাইন প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল, একটি CRISPR/Cas9 সিস্টেম (sgELOVL2‑1 এবং sgELOVL2‑2) (চিত্র S1) ব্যবহার করে। ভিট্রোতে, ACHN কোষে ELVOVL2 অ্যাবলেশনের মাধ্যমে সেলুলার বিস্তার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র S1)। আরও গুরুত্বপূর্ণ, ELOVL2-এর CRISPR/Cas9-মধ্যস্থতা বিলুপ্তি টিউমারের বৃদ্ধিকে দমন করে যখন কোষগুলিকে ইঁদুরের মধ্যে সাবকুটেনিয়াসভাবে রোপণ করা হয় (চিত্র 4A)। বলির দিনে ACHN/নিয়ন্ত্রণ এবং ACHN/sgELOVL2‑2-এ সাবকুটেনিয়াস জেনোগ্রাফ্ট টিউমারের সর্বাধিক পরিমাণ ছিল যথাক্রমে 241 এবং 109 mm3। উল্লেখ্য, ACHN/sgELOVL2‑1 গ্রুপের সমস্ত জেনোগ্রাফ্ট টিউমার প্রতিস্থাপনের 14 দিনে স্বতঃস্ফূর্তভাবে প্রত্যাবর্তন করে এবং নিষ্কাশনের সময় সনাক্ত করা যায়নি। Ki‑67 সূচকটি নিয়ন্ত্রণ বা sgELOVL2 দ্বারা স্থানান্তরিত জেনোগ্রাফ্ট টিউমারগুলিতেও পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং এটি দেখা গেছে যে ACHN/sgELOVL2‑2 কোষগুলি ACHN/নিয়ন্ত্রণ কোষগুলির তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম Ki‑67 সূচক প্রদর্শন করেছে (চিত্র 4B এবং C) . এই ফলাফলগুলি ELOVL2 ভিভোতে টিউমার বৃদ্ধির সম্ভাবনাকে আরও সমর্থন করে। যেহেতু ELOVL2 ক্রোমোজোম 6p24.2-এ অবস্থিত এবং C20–C24 PUFAs (7) এর প্রসারণ নিয়ন্ত্রণ করে একটি এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলাম ট্রান্সমেমব্রেন প্রোটিনের জন্য এনকোড করে, তখন মোট এফএ স্তরগুলি ACHN/sgControl এবং ACHN/sgELOVLCS‑ কোষ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। (চিত্র S2)। LC-PUFA স্তরের পরিবর্তন চিত্র 4D-এ দেখানো হয়েছে। ELOVL2 হল ডোকোসাহেক্সাইনয়িক অ্যাসিড (DHA, C22:6 n‑3) (28,29) এর অন্তঃসত্ত্বা উৎপাদনে একটি অপরিহার্য এনজাইম এবং, যেমনটি প্রত্যাশিত, DHA মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছেরেনালক্যান্সার কোষ. তাছাড়া, দ

অ্যারাকিডোনিক অ্যাসিড (AA, C20:4 n-6), ইকোসাপেন্টাইনয়িক অ্যাসিড (ইপিএ) এবং ডোকোসাপেন্টাইনয়িক অ্যাসিড (ডিপিএ) সহ অন্যান্য LC-PUFA প্রজাতির পরিমাণও উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। অন্যদিকে, ACHN/sgELOVL2 কোষে DPA-এর উৎপাদন ধারাবাহিকভাবে পরিবর্তিত হয়নি। ACHN কোষে DPA-এর পরিমাণ খুবই কম ছিল এবং বেশ কয়েকটি নমুনায় (চিত্র S2) সনাক্ত করা যায়নি। যেহেতু পূর্ববর্তী গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে ELOVL2 DHA (11,12) উৎপাদনের মাধ্যমে LDs সঞ্চয়কে উৎসাহিত করে, তাই নিরপেক্ষ লিপিড স্টেনিং ব্যবহার করে এলডি-র সঞ্চয়স্থান আরও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। উল্লেখ্য, ACHN/sgELOVL2 কোষে LDs-এর প্রাচুর্য ACHN/sgControl কোষের (চিত্র 4E‑4G) তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যে পরামর্শ দেয় যে ELOVL2 অত্যধিক এক্সপ্রেশন দ্বারা লিপিড বিপাকের পরিবর্তন RCC কোষের বিস্তারকে প্রভাবিত করতে পারে।

ELOVL2 অ্যাবলেশন এর অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করেরেনালক্যান্সার কোষ. পূর্ববর্তী গবেষণায় প্রকাশিত হয়েছে যে অন্তঃকোষীয় এলডি-র উত্পাদন চাপযুক্ত টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট (4) এর অধীনে অ্যাপোপটোসিসকে উত্সাহ দেয়। অতএব, বর্তমান গবেষণায়, ACHN/sgControl বা ACHN/sgELOVL2 কোষে অ্যাপোপটোসিস মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং ACHN/sgELOVL2 কোষে (চিত্র 5A) ক্যাসপেস 3/7 এর একটি উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত কার্যকলাপ সনাক্ত করা হয়েছিল। একইভাবে, ACHN/sgControl কোষের তুলনায় অধিক সংখ্যক apoptotic ACHN/sgELOVL2 কোষ শনাক্ত করা হয়েছিল, যা Annexin V/PI স্টেনিং (চিত্র 5B) দ্বারা প্রমাণিত। সেলুলার স্ট্রেসের উপর নির্ভর করে, অভ্যন্তরীণ অ্যাপোপটোসিস (30) মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্য ক্ষতির দিকে পরিচালিত করে; এইভাবে, বর্তমান গবেষণায় ফ্লুরোসেন্ট JC-1 ব্যবহার করে ACHN/sgControl বা ACHN/sgELOVL2 কোষের মাইটোকন্ড্রিয়াল ট্রান্সমেমব্রেন বৈদ্যুতিক সম্ভাবনার মূল্যায়ন করা হয়েছে। ACHN/sgELOVL2 কোষে (চিত্র 5C) সামগ্রিক/মনোমার অনুপাত উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যা মাইটোকন্ড্রিয়াল ট্রান্সমেমব্রেন পোলারাইজেশনের প্রচার এবং ELOVL2 অ্যাবলেশনের মাধ্যমে অভ্যন্তরীণ অ্যাপোপটোটিক পাথওয়ের সক্রিয়করণকে নির্দেশ করে। আরও স্পষ্টভাবে বললে, প্রো-অ্যাপোপ্টোটিক জিন (BAX, BAK, PUMA এবং NOXA) এক্সপ্রেশনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যখন অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক জিন (BCL2 এবং MCL1) এক্সপ্রেশন লেভেল উল্লেখযোগ্যভাবে কমে গেছে ELOVL2 অ্যাবলেশনের কারণে (চিত্র 5D)। এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে ELOVL2 রেনাল ক্যান্সার কোষগুলির অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধের মাধ্যমে সেলুলার বেঁচে থাকার জন্য অবদান রাখে

এলডি আকারে লিপিড স্টোরেজ ক্ষমতার অবনতি ইআর হোমিওস্ট্যাসিসের পতনের দিকে নিয়ে যেতে পারে, উদ্ভূত প্রোটিন প্রতিক্রিয়া (ইউপিআর) এবং সেলুলার অ্যাপোপটোসিস (4,5) ট্রিগার করে। অতএব, ER হোমিওস্টেসিসে ELOVL2 এক্সপ্রেশনের জড়িত থাকার অনুমানকে সমর্থন করার জন্য, ER ট্র্যাকার স্টেনিং ACHN/sgControl বা ACHN/sgELOVL2 কোষে সঞ্চালিত হয়েছিল। পরবর্তী ER ইমেজিং (Fig. 5E) এবং ফ্লো সাইটোমেট্রি (চিত্র 5F এবং G) ব্যবহার করে পরিমাণ নির্ধারণ ER চাপের কারণে ACHN/sgELOVL2 কোষে ER সম্প্রসারণ নির্দেশ করে। অতিরিক্তভাবে, ELOVL2 অ্যাবলেশন IRE1 এর ফসফোরিলেশনকে উন্নীত করেছে, যা UPR সেন্সরগুলির একটি অ্যাক্টিভেটর (চিত্র 5H), যখন এর অভিব্যক্তিCHOP, যা ER স্ট্রেস-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিসে একটি প্রধান ভূমিকা পালন করে, ELOVL2 অ্যাবলেশন (চিত্র 5H) দ্বারা আপনিয়ন্ত্রিত হয়েছিল। সমষ্টিগতভাবে, এই ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে ELOVL2 মধ্যস্থতা-লিপিড বিপাক কোষের অ্যাপোপটোসিসকে দমন করে।রেনালক্যান্সার কোষ এবং প্রস্তাবিত যে ইআর হোমিওস্ট্যাসিসের ব্যাঘাত আনয়নের একটি সম্ভাব্য প্রক্রিয়া হতে পারে।

আলোচনা

বর্তমান গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে ELVOL2 লিপিড বিপাক পরিবর্তন করতে পারে এবং রেনাল ক্যান্সার কোষের অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধের মাধ্যমে টিউমার বৃদ্ধিকে উন্নীত করতে পারে। অধিকন্তু, এটি লক্ষ্য করা গেছে যে RCC টিস্যুতে ELOVL2 অভিব্যক্তি উন্নত ছিল এবং

ELOVL2 এর উচ্চতর অভিব্যক্তি RCC রোগীদের দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে যুক্ত ছিল। ক্যান্সারের অগ্রগতিতে (22,31,32) ELOVL2 এর ভূমিকা নিয়ে সীমিত গবেষণা পাওয়া যায় এবং তাদের ফলাফল বিতর্কিত। সিম্পল এট আল (22) দেখিয়েছে যে ELOVL2 LC-PUFA সংশ্লেষণকে উন্নীত করে, দক্ষ EGFR সংকেত এবং গ্লিওব্লাস্টোমা স্টেম কোষের বিস্তারকে সমর্থন করে। বিপরীতে, কাং এট আল (31) রিপোর্ট করেছেন যে ELOVL2 বিলুপ্তি কোষের স্থানান্তর এবং স্তন ক্যান্সার কোষের উপনিবেশ গঠনকে উন্নীত করতে পারে এবং প্রকাশ করেছে যে ELOVL2 এক্সপ্রেশন হ্রাস স্তন ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীদের দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে যুক্ত ছিল। তদ্ব্যতীত, ডিং এট আল (32) রিপোর্ট করেছেন যে ELOVL2 নিউরোব্লাস্টোমা কোষের বিস্তারকে দমন করে এবং অনুকূল বেঁচে থাকার হারের সাথে যুক্ত ছিল। পূর্ববর্তী গবেষণায় রিপোর্ট করা বিরোধপূর্ণ ফলাফল অনুসারে, ক্যান্সারের অগ্রগতিতে ELOVL2-এর জন্য একটি বহু-ভুমিকা ফাংশন প্রদর্শিত হয়েছে, যা স্পষ্টভাবে ক্যান্সারের ধরন অনুসারে পরিবর্তিত হয়।

একটি পরিবর্তিত লিপিড বিপাক ক্যান্সারের অগ্রগতিকে ব্যাপকভাবে প্রভাবিত করে, বর্তমান গবেষণার ফলাফলে পরিলক্ষিত একটি প্রভাব, গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, যা এলসি-পিইউএফএ-এর প্রসারণ প্রক্রিয়ার প্রাথমিক নিয়ামক এবং DHA জৈব সংশ্লেষণে একটি গুরুত্বপূর্ণ এনজাইম হিসাবে ELOVL2-এর ভূমিকাকে চিত্রিত করেছে। 7)। বর্তমান গবেষণায়, এটি প্রদর্শিত হয়েছিল যে অন্তঃসত্ত্বা এলসি-পিইউএফএ,

AA এবং DHA সহ, রেনাল ক্যান্সার কোষে ELOVL2 বিলুপ্তির কারণে হ্রাস পেয়েছে। এর সাথে সম্পর্কিত, এটি পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছে যে lipoxygenase (LOX) ইনহিবিটর দ্বারা AA পথের প্রতিবন্ধকতা apoptosis প্ররোচিত করে এবং এর কার্যকারিতা হ্রাস করে।রেনালভিট্রোতে ক্যান্সার কোষ (33,34)। যদিও বর্তমান অধ্যয়নের ELOVL2 ওভার এক্সপ্রেশন ফলাফলগুলি এই যান্ত্রিক ফলাফলগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, তবে এটি পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছে যে DHA প্রশাসন ভিট্রোতে রেনাল ক্যান্সার কোষের বিস্তার এবং আক্রমণকে বাধা দিতে পারে (35,36)। যাইহোক, এলসি-পিইউএফএগুলি ক্যান্সারের অগ্রগতিতে স্বতন্ত্র এবং বিপরীত প্রভাব রয়েছে বলে পরিচিত। অতএব, ELOVL2-এর বাধার কারণে বিভিন্ন ধরনের LC-PUFA-এর মধ্যে একটি সূক্ষ্ম ভারসাম্যের পরিবর্তন বিভিন্ন ধরনের ক্যান্সারে পরিলক্ষিত বিভিন্ন ফেনোটাইপের সাথে যুক্ত হতে পারে। পূর্ববর্তী গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে ইঁদুরের (11,12) মধ্যে ELOVL2 দ্বারা DHA এর অন্তঃসত্ত্বা উৎপাদনের মাধ্যমে LDs বৃদ্ধি পায়। একইভাবে, এটি প্রকাশিত হয়েছিল যে ELOVL2 অ্যাবলেশন রেনাল ক্যান্সার কোষে DHA এবং LDs-এর উত্পাদনকে দমন করতে পারে, পরামর্শ দেয় যে ELOVL2 ওভার এক্সপ্রেশন RCC-তে অন্তঃসত্ত্বা DHA উত্পাদনের মাধ্যমে LD উত্পাদনকে উন্নীত করতে পারে। ক্যান্সার কোষগুলি প্রায়শই কঠোর পরিবেশগত (ম্যাক্রো এবং মাইক্রো) অবস্থাতে পাওয়া যায়, যার মধ্যে হাইপোক্সিয়া এবং পুষ্টির বঞ্চনা রয়েছে, তবুও, এই ধরনের গুরুতর চাপের মধ্যে দ্রুত বৃদ্ধি পায়। সেলুলার স্ট্রেসের অবস্থার অধীনে এলডি-র কার্যাবলী, যেমন শক্তির রক্ষণাবেক্ষণ এবং রেডক্স হোমিওস্ট্যাসিস, অটোফ্যাজি নিয়ন্ত্রণ, ইআর হোমিওস্ট্যাসিসের রক্ষণাবেক্ষণ এবং লিপোটক্সিসিটির বিরুদ্ধে সুরক্ষা, প্রদর্শিত হয়েছে (4)।

অ্যাকারম্যান এট আল (6) প্রকাশ করেছেন যে এলডি হাইপোক্সিয়ার সময় বিষাক্ত, স্যাচুরেটেড লিপিড জমা হতে বাধা দেয় ccRCC-তে TG-আবাসিক অসম্পৃক্ত FA-এর বিনিময়ের মাধ্যমে সেলুলার লিপিড স্যাচুরেশনের বাফারিং দ্বারা। পালমিটেট (C16:0) সহ স্যাচুরেটেড FAs (SFA) এর কারণে সেলুলার লাইপোটক্সিসিটি অ্যাপোপটোসিস হতে পারে, যা ক্যান্সার কোষের মৃত্যু (37,38) হতে পারে। সম্প্রতি, ELOVL2 কে একটি সমালোচনামূলক প্রো-সারভাইভাল এনজাইম হিসাবে মনোনীত করা হয়েছিল, যা গ্লুকোলিপোটক্সিসিটি-প্ররোচিত ‑সেল অ্যাপোপটোসিস (39) প্রতিরোধে সহায়তা করে। উল্লেখ্য, ELOVL2/DHA অক্ষ-সংশোধিত লিপিড পার্টিশনের ফলে একটি CPT1-নির্ভর প্রক্রিয়ার মাধ্যমে FA অক্সিডেশনের (FAO) জন্য মাইটোকন্ড্রিয়ায় পরিবহনের পক্ষে SFA palmitate-এর একটি অ-বিষাক্ত ব্যবহার হয়। অতিরিক্তভাবে, বালাবান এট আল দেখিয়েছেন যে C4-2B প্রোস্টেট ক্যান্সার কোষ এবং MCF-7 স্তন ক্যান্সার কোষগুলি মাইটোকন্ড্রিয়াল FAO (37,38) দ্বারা পালমিটেট-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস থেকে সুরক্ষিত। পালমিটেট-প্ররোচিত লাইপোটক্সিসিটির সময়, BCL-2 বা MCL-1 সহ অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক প্রোটিনের সেলুলার স্তর হ্রাস পেয়েছে (40,41) যখন PUMA বা NOXA সহ প্রো-অ্যাপোপ্টোটিক প্রোটিনের মাত্রা রিপোর্ট করা হয়েছে। বাড়ানো হবে (42,43)। বর্তমান সমীক্ষায় এটি প্রকাশিত হয়েছিল যে ELOVL2 অ্যাবলেশন প্রচার করতে পারেরেনালএকই পদ্ধতিতে প্রো-এবং অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক জিনের পরিবর্তনের মাধ্যমে ক্যান্সার সেল অ্যাপোপটোসিস। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ELOVL2 আরসিসিতে টিউমার বৃদ্ধির জন্য লিপোটক্সিসিটি-চালিত অ্যাপোপটোসিসের বিরুদ্ধে কোষগুলিকে রক্ষা করতে পারে।

অতিরিক্তভাবে, এটা প্রমাণিত হয়েছিল যে RCC-তে ELOVL2 অ্যাবলেশন ER স্ট্রেস এবং CHOP আপগ্র্যুলেশনকে উন্নীত করতে পারে, BCL-2 এবং MCL-1-কে নিয়ন্ত্রণ করে, BAK এবং BAX-কে আপ-রেগুলেট করার সময়, মাইটোকন্ড্রিয়া-নির্ভর পথের মাধ্যমে (44)। প্রকৃতপক্ষে, বর্তমান অধ্যয়নের ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে প্রো-এবং অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক জিনগুলি একইভাবে ELOVL2 অ্যাবলেশন দ্বারা পরিবর্তিত হয়েছিল। Qui et al (5) এর গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, যিনি রিপোর্ট করেছেন যে HIF2 /PLIN2-নির্ভর LDs ইআর স্ট্রেস এবং ccRCC-তে কোষের বেঁচে থাকার বিরুদ্ধে প্রতিরোধের প্রচার করে, এই সমষ্টিগত ফলাফলগুলি ELOVL2 দ্বারা সেলুলার অ্যাপোপটোসিস প্রচারকারী ER স্ট্রেসের সমর্থনে। মধ্যে নির্মূলরেনালক্যান্সার কোষ, LDs হ্রাস করে এবং বিষাক্ত লিপিডের বিরুদ্ধে সেলুলার বাফার অপসারণ করে।

উপসংহারে, বর্তমান অধ্যয়নটি আমাদের সর্বোত্তম জ্ঞান অনুসারে প্রথমবারের মতো প্রমাণ করেছে যে, ELOVL2 PUFAs এর প্রসারিত হওয়ার মাধ্যমে অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধের মাধ্যমে টিউমার বৃদ্ধিকে উৎসাহিত করে, অন্তত আংশিকভাবে ER হোমিওস্টেসিস বজায় রাখার মাধ্যমেরেনালক্যান্সার কোষ. একসাথে নেওয়া, এটি পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল যে RCC-তে সেলুলার স্ট্রেসের বিরুদ্ধে একাধিক প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের কারণে ELOVL2-প্ররোচিত LDs ক্যান্সারের অগ্রগতিতে অবদান রাখতে পারে। অধিকন্তু, এটি পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল যে ELOVL2 RCC রোগীদের জন্য একটি আকর্ষণীয় সম্ভাব্য থেরাপিউটিক লক্ষ্য হতে পারে।