TRP-1 এবং MMP-এর বাধার মাধ্যমে ত্বক ঝকঝকে এবং অ্যান্টি-রিঙ্কলিং-এ সরগাসাম থানবার্গির নির্যাসের প্রভাব

যোগাযোগ: ali.ma@wecistanche.com

দা-হাই গাম 1, জা-হিউন পার্ক 1, জি-উ হং 1, সিওং-জিন জিওন 1, জুন-হি কিম 1 এবং জিন-উ কিম 1,2,*

বিমূর্ত: সরগাসুম থুনবার্গিঐতিহ্যগতভাবে একটি ভোজ্য এবং ঔষধি উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছে প্রাচ্যের দেশগুলিতে। তবেত্বক সাদা করাএবংবিরোধী wrinklingS. Thunbergii-এর প্রভাব এখনও তদন্ত করা হয়নি। এস. থুনবার্গিতে আল্ট্রাসাউন্ড-সহায়ক নিষ্কাশন (ইউএই) ব্যবহার করে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের পাশাপাশি ত্বক-সাদা করা এবং অ্যান্টি-রিঙ্কেল প্রভাব সহ বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলির উৎপাদনের জন্য সর্বোত্তম নিষ্কাশনের শর্ত স্থাপনের জন্য এই গবেষণাটি পরিচালিত হয়েছিল। নিষ্কাশনের সময় (5.30~18.7 মিনিট), নিষ্কাশনের তাপমাত্রা (22.4~79.6 ◦C), এবং ইথানলের ঘনত্ব (0৷{16}}~99.5 শতাংশ), যা এর প্রধান পরিবর্তনশীল সংযুক্ত আরব আমিরাত, একটি কেন্দ্রীয় যৌগিক নকশা ব্যবহার করে অপ্টিমাইজ করা হয়েছে। চতুর্ভুজাকৃতির সমীকরণগুলি পরীক্ষামূলক ডেটার উপর ভিত্তি করে প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং পূর্বাভাসের জন্য উপযুক্ততা প্রদর্শন করে নির্ধারণের একটি উচ্চ সহগ (R2 > 0.85) দেখিয়েছিল। র‌্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাক্টিভিটি (RSA), টাইরোসিনেসিনহিবিটরি অ্যাক্টিভিটি (টিআইএ), এবং কোলাজেনেস ইনহিবিটরি অ্যাক্টিভিটি (সিআইএ) সহ সমস্ত নির্ভরশীল ভেরিয়েবলকে সর্বাধিক করার জন্য সর্বোত্তম সংযুক্ত আরব আমিরাতের শর্তটি 12.0 মিনিটের নিষ্কাশন সময়, 65.2 ◦C এর নিষ্কাশন তাপমাত্রা, এবং ই-থান হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। 53.5 শতাংশ। এই অবস্থার অধীনে, S. Thunbergii নির্যাসের RSA, TIA এবং CIA ছিল যথাক্রমে 86.5 শতাংশ, 88.3 শতাংশ এবং 91.4 শতাংশ৷ আমরা নিশ্চিত করেছি যে এস. থানবার্গির নির্যাস টাইরোসিনেজ-সম্পর্কিত প্রোটিন-1, ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেস-1, এবং ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেস-9 এর mRNA এক্সপ্রেশনে বাধামূলক প্রভাব ফেলেছে, যা মেলানিন হাইড্রোজেন হাইড্রোসিস এবং কোলাজেনের প্রধান জিন। . তরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি এস. থানবার্গির নির্যাসের প্রধান ফেনোলিক যৌগগুলি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং ক্যাফেইক অ্যাসিডকে একটি প্রধান শিখর হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল, যা প্রমাণ করে যে উচ্চ মূল্য সংযোজিত উপাদানগুলিত্বক সাদা করাএবংবিরোধী wrinklingS. Thunbergii থেকে প্রভাব তৈরি করা যেতে পারে এবং প্রসাধনী উপকরণ তৈরির জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

কীওয়ার্ড: এস. থানবার্গি; অপ্টিমাইজেশান;ত্বক সাদা করা; বিরোধী wrinkling; টিআরপি-1; MMP-1; MMP-9

ঝকঝকে ত্বকের জন্য cistanche নির্যাস উপকারিতা ক্লিক করুন

1। পরিচিতি

মেলানোজেনেসিস একটি শারীরবৃত্তীয় প্রক্রিয়া যা মেলানিন রঙ্গকগুলির সংশ্লেষণের দিকে পরিচালিত করে [1]। মেলানিন হল একটি কালো বা বাদামী রঙ্গক যা এপিডার্মিসের বেসাল স্তরে উপস্থিত মেলানোসাইট থেকে নিঃসৃত হয় এবং ত্বক, চোখ এবং চুলের রঙ নির্ধারণ করে মেলানোমাস [৩]। টাইরোসিনেজ, থিমেলানিন জৈবসংশ্লেষণ পথের প্রধান এনজাইম, এল-টাইরোসিনের হাইড্রক্সিলেশনকে এল-ডোপা (এল-3,4-ডাইহাইড্রোক্সিফেনিল্যালানিন) তে উন্নীত করে এবং তারপর এল-ডোপা-এর অক্সিডেশনকে ডোপাক্রোম এবং ডোপাকুইননে প্রচার করে, যা টাইরোসিনেজ-সম্পর্কিত প্রোটিন (TRP-1 এবং 2) দ্বারা অটো-অক্সিডেশন প্রক্রিয়ার মাধ্যমে মেলানিনকে সংশ্লেষিত করে বিভিন্ন পর্যায়ে [4-6]। আজ অবধি, টাইরোসিনেজ-সম্পর্কিত প্রোটিনগুলিকে বাধা দিয়ে মেলানিন গঠনে বাধা দেওয়ার পদ্ধতিগুলি প্রসাধনী শিল্পে ত্বক-সাদা করার এজেন্টগুলির বিকাশের জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে [7,8]। যাইহোক, কোজিক অ্যাসিড, অ্যাজেলাইক অ্যাসিড এবং হাইড্রোকুইনোন, প্রচলিতভাবে ব্যবহৃত হয়ত্বক সাদা করাউপাদানগুলি, এলার্জি প্ররোচিত করার পাশাপাশি ত্বকের বিষাক্ততা এবং ক্যান্সারের কারণ হিসাবে রিপোর্ট করা হয়েছে [9]। অতএব, প্রাকৃতিক উপাদানগুলির উপর ভিত্তি করে একটি নিরাপদ, আরও কার্যকর ত্বক-সাদা করার এজেন্ট তৈরি করা অপরিহার্য বলে বিবেচিত হয় [10]।

কোলাজেন হল একটি এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) প্রোটিন যা ত্বককে শক্তি ও টান দিয়ে রক্ষা করে; এটি বলিরেখা এবং আর্দ্রতা হ্রাস রোধ করে বার্ধক্য প্রক্রিয়া বিলম্বিত করতে সহায়তা করে। ইসিএম ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসেস (এমএমপি) দ্বারা পচে যেতে পারে [১১]। এমএমপি-1, সাধারণত কোলাজেনেস নামে পরিচিত, আংশিকভাবে টাইপ 1 কোলাজেনকে পচিয়ে দেয় যা ত্বককে উর্ধ্বমুখী করে, যেখানে এমএমপি-9, জেলটিনেস নামে পরিচিত, অতিরিক্তভাবে এমএমপি দ্বারা কোলাজেনহাইড্রোলাইজডকে ডিপোলিমারাইজ করে-1 [12]। উপরন্তু, এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এই এনজাইমগুলির সংশ্লেষণকে ত্বরান্বিত করে, যার ফলে ECM এর অবনতি ঘটে এবং শেষ পর্যন্ত, বলি গঠন [13]। তাই, টিআরপি এবং এমএমপিগুলির প্রকাশকে বাধা দিতে পারে এমন প্রাকৃতিক উপাদানগুলি খুঁজে বের করা প্রয়োজন এবং এমন অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট রয়েছে যা ত্বকের পিগমেন্টেশন এবং কুঁচকে যাওয়া কমিয়ে ত্বকের বার্ধক্য রোধ করতে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতিগুলিকে অপসারণ করতে পারে [14]। সম্প্রতি, যেহেতু প্রসাধনীর জন্য কার্যকরী উপাদানগুলি প্রধানত জমির উদ্ভিদে তৈরি করা হয়েছে, নতুন প্রজাতির অন্বেষণ এবং প্রাকৃতিক উপাদানের স্থিতিশীল সরবরাহের ক্ষেত্রে সীমাবদ্ধতা দেখা দিতে শুরু করেছে [15]। ফলস্বরূপ, সামুদ্রিক উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত প্রাকৃতিক উপাদানগুলির প্রতি আগ্রহ এবং চাহিদা বৃদ্ধি পেয়েছে এবং সামুদ্রিক সম্পদ থেকে বিভিন্ন নতুন উপাদান চিহ্নিত করা হয়েছে [16]।

সরগাসুম থুনবার্গিগলফউইড পরিবারের অন্তর্গত বাদামী ম্যাক্রোঅ্যালগির একটি প্রজাতি এবং কোরিয়া ও চীনের উপকূলে স্থানীয় [১৭]। এটি একটি সামুদ্রিক দূষণকারী হিসাবে স্বীকৃত যা দ্রবীভূত অক্সিজেন হ্রাস করে সামুদ্রিক শৈবাল এবং মাছের খামারের ক্ষতি করে। 1995 সালে নির্যাস; তারপর থেকে, এটি একটি ম্যাক্রোঅ্যালগি হিসাবে মনোযোগ আকর্ষণ করেছে যা অভিনব বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ তৈরিতে ব্যবহারের জন্য উচ্চ সম্ভাবনা রয়েছে [20]। যান্ত্রিক বহিষ্কার, সুপারক্রিটিকাল নিষ্কাশন, মাইক্রোওয়েভ নিষ্কাশন, এবং অতি-উচ্চ-চাপ নিষ্কাশন সহ প্রচলিত প্রক্রিয়াগুলি ব্যবহার করে জৈব সক্রিয় যৌগগুলির নিষ্কাশন, অতিরিক্ত দ্রাবক ব্যবহার করার প্রয়োজন, কম নিষ্কাশন ফলন এবং উচ্চ শক্তি খরচ [২১] এর মতো সীমাবদ্ধতার সাথে যুক্ত। ম্যাক্রোঅ্যালগি [২২] থেকে বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলি সুরক্ষিত করার জন্য প্রযুক্তিগত উদ্ভাবনের ক্ষেত্রে নতুন নিষ্কাশন পদ্ধতি বিকাশ করা অন্যতম প্রধান চ্যালেঞ্জ। প্রচলিত নিষ্কাশন প্রক্রিয়াগুলির মধ্যে, আল্ট্রাসাউন্ড-সহায়ক নিষ্কাশন (UAE) এর সরলতা, কম সরঞ্জাম খরচ, বিভিন্ন ম্যাট্রিক্স থেকে উচ্চ নিষ্কাশন ফলন, কম শক্তি খরচ, কম পরিমাণে দ্রাবক প্রয়োজন এবং কম সময় [23] এর কারণে বিশেষভাবে আকর্ষণীয়। সংযুক্ত আরব আমিরাত 20-100 kHz উচ্চ-ফ্রিকোয়েন্সি শব্দ তরঙ্গ জড়িত বলে পরিচিত [24]। নিষ্কাশন ফলন আল্ট্রাসাউন্ডকে বাড়িয়ে তুলছে, এবং এটি উদ্ভিদের টিস্যুগুলির ব্যাঘাত, কণার আকার হ্রাস, এবং বারবার অ্যাকোস্টিক ক্যাভিটেশন দ্বারা উত্পাদিত বুদবুদগুলির পতনের ফলে সৃষ্ট দ্রাবকগুলিতে নির্যাসের ভর স্থানান্তরকে দায়ী করা হয় [25,26] . এই সুবিধাগুলির কারণে, সংযুক্ত আরব আমিরাত একটি সস্তা, পুনর্নবীকরণযোগ্য এবং দক্ষ প্রক্রিয়া হিসাবে স্বীকৃত যা খাদ্য শিল্পে স্থলজ জলীয় জৈববস্তু থেকে কার্যকরী উপাদানগুলি বের করতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় [27]।

এইভাবে, এই গবেষণায়, আমরা এস. থানবার্গি থেকে জৈব সক্রিয় যৌগগুলি আহরণের জন্য সংযুক্ত আরব আমিরাত প্রয়োগ করেছি এবং সর্বোত্তম সংযুক্ত আরব আমিরাতের শর্তগুলি অর্জন করেছি যা অ্যান্টিঅক্সিডেন্টগুলির সর্বাধিক নিষ্কাশনের অনুমতি দেয়।ত্বক সাদা করাএবং পরিসংখ্যান-ভিত্তিক অপ্টিমাইজেশান ব্যবহার করে অ্যান্টি-রিঙ্কিং উপাদান, এবং টিআরপি-1, এমএমপি-1, এবং এমএমপি-9এস. থানবার্গির নির্যাস দ্বারা জিন এক্সপ্রেশনের বিভিন্ন প্রতিরোধমূলক প্রভাব ত্বক যাচাই করার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল - সাদা করা এবংবিরোধী wrinklingপ্রাপ্ত বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলির প্রভাব এবং একটি কার্যকরী প্রসাধনী উপাদান হিসাবে S. Thunbergii নির্যাস ব্যবহারের সম্ভাবনা নিশ্চিত করে।

cistanche নির্যাস

2. ফলাফল এবং আলোচনা

2.1। পরীক্ষার ডিজাইন

রেসপন্স সারফেস মেথডলজি (RSM) গাণিতিক মডেলের র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাক্টিভিটি (RSA), টাইরোসিনেজ ইনহিবিটরি অ্যাক্টিভিটি (TIA), এবং কোলাজেনেস ইনহিবিটরি অ্যাক্টিভিটি (CIA) এর পূর্বাভাস দেওয়ার জন্য মডেল ফিট করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ।এস. থানবার্গিনির্যাস. RSM-এর কেন্দ্রীয় যৌগিক নকশা (CCD) একটি পরীক্ষামূলক নকশা পদ্ধতি যা পরিসংখ্যানগতভাবে স্বাধীনভাবে বা প্রতিক্রিয়াগুলিকে প্রভাবিত করে এমন দুটি স্বাধীন ভেরিয়েবলের মিথস্ক্রিয়া দ্বারা উত্পাদিত প্রতিক্রিয়া পৃষ্ঠকে বিশ্লেষণ করে। সর্বোত্তম অবস্থার পূর্বাভাস দিতে কেন্দ্র বিন্দু এবং একাধিক অক্ষীয় বিন্দু ব্যবহার করে কার্যকরভাবে বক্রতা অনুমান করার সুবিধা সিসিডির রয়েছে [২৮–৩0]। এই গবেষণায়, S. Thunbergiiextract-এর RSA, TIA, এবং CIA সহ প্রতিক্রিয়াগুলি সর্বাধিক করার জন্য সর্বোত্তম UAE শর্তগুলির পূর্বাভাস দেওয়ার জন্য CCD প্রয়োগ করা হয়েছিল৷ 5টি স্তর (− , −1, 0, 1, ) কোড করা হয়েছিল, এবং 17টি পরীক্ষামূলক রান সিসিডির ভিত্তি হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল (সারণী 1)। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার উপর ভিত্তি করে, নির্যাস সময় (5.30~18.7 মিনিট), নিষ্কাশন তাপমাত্রা (22.4~79.6 ◦C), এবং ইথানল ঘনত্ব (0~99.5 শতাংশ), নির্ভরশীল ভেরিয়েবলের সর্বোচ্চ স্তর প্রাপ্ত করার জন্য 3টি মূল স্বাধীন ভেরিয়েবল নির্বাচন করা হয়েছিল। [৩১]। চতুর্মুখী রিগ্রেশন মডেলের বিকাশে, পরীক্ষামূলক ভেরিয়েবলগুলি নিম্নলিখিত সমীকরণ অনুসারে কোড করা হয়েছিল।

xi {{0}} (Xi − X0)/∆X (1)

যেখানে Xi পরিবর্তনশীল Xi এর কোডেড মান; X0 হল কেন্দ্র বিন্দুতে X এর মান, এবং ∆X হল ধাপ পরিবর্তনের মান।

নিষ্কাশন সময়, উত্তোলন তাপমাত্রা এবং ইথানল ঘনত্বের পার্থক্য সহ 17 টি অবস্থার জন্য পরীক্ষামূলক মানগুলি সারণি 2 এ দেখানো হয়েছে।

2.2। আরএসএ-তে সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার প্রভাব

17 শর্ত অনুযায়ী নিষ্কাশন প্রয়োগ করা হয়এস. থানবার্গিUAE ব্যবহার করে, RSA ছিল 2.37~89.9 শতাংশ, যার সর্বোচ্চ মান ছিল 12৷{5}} মিনিট নিষ্কাশন সময়, 51৷{7}} ◦C নিষ্কাশন তাপমাত্রা, এবং 50৷{11} } শতাংশ ইথানল ঘনত্ব এবং সর্বনিম্ন মান 12৷{13}} মিনিট নিষ্কাশন সময়, 51৷{24}} ◦C নিষ্কাশন তাপমাত্রা, এবং 99.5 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব; এটি নির্দেশ করে যে ইথানলের ঘনত্ব RSA (সারণী 2) তে সর্বাধিক প্রভাব ফেলেছিল। ডিজাইন-বিশেষজ্ঞ সফ্টওয়্যার দ্বারা প্রস্তাবিত, একটি দ্বিঘাত রিগ্রেশন সমীকরণ নির্বাচন করা হয়েছিল এবং তিনটি স্বাধীন ভেরিয়েবল এবং প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য লাগানো হয়েছিল। কোডেড মানের পরিপ্রেক্ষিতে, RSA, TIA এবং CIA-এর পূর্বাভাসিত প্রতিক্রিয়াগুলি একাধিক রিগ্রেশন বিশ্লেষণের মাধ্যমে দ্বিঘাত রিগ্রেশন সমীকরণ ব্যবহার করে প্রকাশ করা যেতে পারে (সারণী 3)। সারণী 4-এ সংক্ষিপ্ত চতুর্ভুজ প্রত্যাবর্তন মডেলগুলির প্রতিক্রিয়া ভেরিয়েবলের জন্য সিসিডি মডেলের সহগগুলিকে বৈচিত্র্যের বিশ্লেষণ (ANOVA) ব্যবহার করে যাচাই করা হয়েছিল। যদি সংকল্পের সহগ (R2), যা পরীক্ষামূলক এবং পূর্বাভাসিত মানগুলির মধ্যে চুক্তির প্রতিনিধিত্ব করে, তা 1-এর কাছাকাছি, ইঙ্গিত করে উপযুক্ত গ্রহণযোগ্য ধার্মিকতা [32]. RSA এর সাথে সর্বোত্তম UAE অবস্থার ভবিষ্যদ্বাণী করার জন্য দ্বিঘাত রিগ্রেশন সমীকরণের R2 ছিল 0.8554, এটি প্রতিষ্ঠিত করে যে ফলাফলের পূর্বাভাসিত মানের 85.5 শতাংশের চেয়ে বৃহত্তর বা সমান সম্পূর্ণরূপে ব্যাখ্যা করা যেতে পারে, এইভাবে দ্বিঘাত রিগ্রেশন সমীকরণের উপযুক্ততা স্বীকৃতি দেয় (টেবিল 3)।

প্রতিটি মডেল ভেরিয়েবলের তাত্পর্য p মান ব্যবহার করে নির্ধারিত হয়েছিল; একটি পি-মান<0.05 indicates="" significance="" whereas="" a="" p-value="" of="">0.05 RSA [৩৩] তে তুচ্ছতা নির্দেশ করে৷ অপ্টিমাইজেশান স্টাডির ANOVA ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে মডেল wassignificant (p=0.0283), যা সেট তাৎপর্য স্তরের চেয়ে কম ছিল, নির্দেশ করে যে তাত্পর্য 5 শতাংশের মধ্যে স্বীকৃত হয়েছিল। অতএব, ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে মডেলগুলি দক্ষতার সাথে এস. থানবার্গির নির্যাসের RSA, TIA এবং CIA-এর ভবিষ্যদ্বাণী করতে পারে যখন স্বাধীন পরিবর্তনশীলগুলি এখানে চিত্রিত সীমার মধ্যে ছিল। প্রতিটি স্বাধীন পরিবর্তনশীলের তাৎপর্য পরীক্ষা করার পর, আমরা দেখতে পেলাম যে ইথানলের ঘনত্ব RSA(p=0.0025) এর উপর সবচেয়ে বেশি প্রভাব ফেলেছে, যেখানে নিষ্কাশনের সময় (p=0.7418) এবং তাপমাত্রার প্রভাব (p)=0.1622) ছিল নগণ্য (সারণী 4)।

নির্ভরশীল ভেরিয়েবলের উপর প্রতিটি স্বাধীন ভেরিয়েবলের প্রভাব মূল্যায়ন করার জন্য, নিষ্কাশনের সময়, নিষ্কাশন তাপমাত্রা, এবং ইথানল ঘনত্বের প্লট (চিত্র 1A) অনুযায়ী RSA-এর পরিবর্তনকে আমরা প্রকাশ করেছি।

ফলস্বরূপ, সর্বোচ্চ মান নিষ্কাশন সময় 14.1 মিনিটে উপস্থিত হয়েছিল এবং তারপরে হ্রাস পেয়েছে; নিষ্কাশন তাপমাত্রা এবং ইথানল ঘনত্বের জন্য যথাক্রমে সর্বোচ্চ মান 60.7 ◦C এবং 46.2 শতাংশে নিশ্চিত করা হয়েছিল। যাইহোক, যখন ত্রিমাত্রিক প্রতিক্রিয়া পৃষ্ঠের বক্ররেখা ব্যবহার করে ভেরিয়েবলের মধ্যে মিথস্ক্রিয়াগুলির কারণে RSA-তে পরিবর্তনের হার কল্পনা করা হয়, তখন নিষ্কাশন সময় এবং তাপমাত্রার পরিবর্তন RSA-তে সামান্য প্রভাব ফেলেছিল, যেখানে ইথানল ঘনত্বের একটি উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল (চিত্র 2A, B)

এটি কিম এট আল দ্বারা গবেষণার ফলাফলের অনুরূপ ছিল। Gynostemma pentaphyllum নির্যাস [34] এর RSA উপর দ্রাবক ঘনত্বের প্রভাব সনাক্ত করা। RSA সর্বাধিক বৃদ্ধির প্রবণতা দেখায় এবং তারপরে ইথানল ঘনত্বের সাথে হ্রাস পায়, ইথানল ঘনত্বের 48.1 শতাংশে সর্বাধিক মান দেখায়। পাতিত জল এবং ইথানলের মিশ্রণের কারণে নিষ্কাশন দ্রবণের পোলারিটি পরিবর্তন জি-এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাবকে বৃদ্ধি করে। pentaphyllum এবং S. Thunbergii নির্যাস। উপরন্তু, এটি ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে শৈবাল থেকে গরম-পানি নিষ্কাশন দ্বারা উত্পাদিত জল-দ্রবণীয় জৈব সক্রিয় যৌগগুলি কম অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ দেখায় এবং যে নির্যাসগুলি 50 শতাংশ ইথানল ব্যবহার করে উচ্চতর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ দেখায়, পরামর্শ দেয় যে একটি বাইনারি দ্রাবক (জল এবং ইথানল) বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ উৎপন্ন করা নিষ্কাশন ফলন [৩৫,৩৬] বৃদ্ধিতে উপকারী।

2.3। টিআইএ-তে সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার প্রভাব

এর TIAএস. থানবার্গিপরীক্ষার জন্য প্রয়োগ করা 17টি UAE শর্ত অনুসারে নির্যাসগুলি সারণি 2-এ দেখানো হয়েছে৷ সর্বাধিক TIA মান 92.6 শতাংশ চিহ্নিত করা হয়েছিল 12৷{5}} মিনিট, 79.6 ডিগ্রি , এবং 50৷{13} } শতাংশ এবং 55.3 শতাংশের সর্বনিম্ন মান 12 এ পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছিল৷{15}} মিনিট, 51৷{16}} ডিগ্রি , এবং 0৷{20}} শতাংশ নিষ্কাশন যথাক্রমে সময়, নিষ্কাশন তাপমাত্রা, এবং ইথানল ঘনত্ব। ফলস্বরূপ, নিষ্কাশন তাপমাত্রা এবং ইথানল ঘনত্ব টিআইএ-তে একটি উল্লেখযোগ্য প্রভাব রয়েছে বলে নিশ্চিত করা হয়েছিল। পরীক্ষামূলক ফলাফলের ভিত্তিতে, আমরা সিসিডি ব্যবহার করে একটি চতুর্মুখী রিগ্রেশন সমীকরণ প্রাপ্ত করেছি এবং সর্বোত্তম সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার পূর্বাভাস দিতে এটি ব্যবহার করেছি (সারণী 3)। R2 ছিল 0.8591, যা পূর্বাভাসিত মডেল এবং পরীক্ষামূলক ডেটার মানগুলির মধ্যে একটি 85.91 শতাংশ মিল নির্দেশ করে এবং বোঝায় যে চতুর্মুখী রিগ্রেশন সমীকরণ টিআইএ পূর্বাভাসের জন্য উপযুক্ত। RSA, TIA, এবং CIA-এর প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য, মডেলগুলি অত্যন্ত তাৎপর্যপূর্ণ ছিল যখন গণনাকৃত F-মানগুলি সারণিকৃত F-মানের চেয়ে বেশি এবং সম্ভাব্যতার মানগুলি কম ছিল (p <0.001); এটি="" নির্দেশ="" করে="" যে="" প্রতিটি="" প্রতিক্রিয়া="" মডেলের="" পৃথক="" পদগুলি="" মিথস্ক্রিয়া="" প্রভাবের="" ক্ষেত্রে="" উল্লেখযোগ্য="" ছিল="" [37]।="" চতুর্মুখী="" রিগ্রেশন="" সমীকরণের="" উল্লেখযোগ্য="" প্রভাব="" পরিসংখ্যানগতভাবে="" মূল্যায়ন="" করতে="" anova="" প্রয়োগ="" করা="" হয়েছিল।="" পরীক্ষামূলক="" মডেলটি="" তাৎপর্যপূর্ণ="" ছিল="" (p="0.0262)," 5="" শতাংশের="" মধ্যে="" তাত্পর্যের="" একটি="" স্তর="" নির্দেশ="" করে="" (সারণী="">

যখন আমরা অন্যান্য ভেরিয়েবলের মান ঠিক করার সময় একটি একক ভেরিয়েবলের পরিবর্তনের সাথে TIA পরিবর্তনের হার কল্পনা করি, তখন ইথানল ঘনত্বের কারণে TIA পরিবর্তনটি সবচেয়ে বড় ছিল, যার সর্বাধিক TIA 76.8 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব পাওয়া যায় (চিত্র 1B)। স্বাধীন ভেরিয়েবলের মিথস্ক্রিয়াগুলি একই সাথে দুটি ভেরিয়েবল পরিবর্তন করে ত্রি-মাত্রিক প্রতিক্রিয়া পৃষ্ঠের বক্ররেখা ব্যবহার করে কল্পনা করা হয় (চিত্র 3)।

নিষ্কাশনের তাপমাত্রা এবং সময় বৃদ্ধির সাথে সাথে টিআইএ প্রাথমিকভাবে বৃদ্ধি পায়; যাইহোক, পরিবর্তনের পরিসর বড় নয়, তাই আমরা পুনরায় নিশ্চিত করেছি যে নিষ্কাশন তাপমাত্রা এবং সময়ের ইন্টারেক্টিভ প্রভাব উল্লেখযোগ্য নয়, যেমন ANOVA (চিত্র 3A) ব্যবহার করে নির্ধারিত হয়েছে। বিপরীতভাবে, টিআইএ ইথানল ঘনত্বের সাথে আবার বেড়েছে এবং হ্রাস পেয়েছে, সর্বোচ্চ টিআইএ 75.6 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব (চিত্র 3B) হওয়ার পূর্বাভাস দিয়েছে। এই ফলাফলটি পার্ক, এট আল-এর গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, যা দেখিয়েছে যে 70 ~ 80 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব বন্য চালের নির্যাস থেকে জৈব সক্রিয় যৌগগুলি নিষ্কাশনে জলের তুলনায় উচ্চতর TIA-এর দিকে পরিচালিত করে [38]। এই গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে যে ইথানল ঘনত্ব টিআইএ-তে একটি প্রধান পরিবর্তনশীল এবং ইথানল ঘনত্বের অনুপাতে পরিবর্তিত হতে থাকে।

2.4। সিআইএ-তে সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার প্রভাব

যখন আমরা 17টি অবস্থার প্রতিটির অধীনে CIA পরিমাপ করি, তখন আমরা দেখতে পাই যে 16-এ সর্বাধিক CIA মান ছিল 92.3 শতাংশ৷{4}} মিনিট, 63৷{6}} ডিগ্রি , এবং 80৷{{ 12}} শতাংশ এবং সর্বনিম্ন CIA ছিল 48.1 শতাংশ 12 এ। এবং ইথানল ঘনত্ব, যথাক্রমে (সারণী 2)। নিষ্কাশনের সময়, তাপমাত্রা এবং ইথানলের ঘনত্ব অনুসারে তৈরি হওয়া চতুর্মুখী রিগ্রেশন সমীকরণের একটি R2 ছিল 0.9237, যা বোঝায় যে 92.37 শতাংশের নমুনা বৈচিত্রটি স্বাধীন ভেরিয়েবলের জন্য দায়ী করা হয়েছে, এবং মোট বৈচিত্রের মাত্র 7.63 শতাংশ ব্যাখ্যা করা যায়নি। মডেল (সারণী 3)। এটি সিআইএর পূর্বাভাসিত এবং পরীক্ষামূলক মানগুলির মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্কের একটি ভাল ডিগ্রি নির্দেশ করে এবং পরীক্ষামূলক মডেলের পূর্বাভাস দেওয়ার ক্ষেত্রে এর উপযুক্ততাকে স্বীকৃতি দেয় [39]। ANOVA পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য (p=0.0037) 1 শতাংশের একটি তাত্পর্য স্তরের নীচে প্রদর্শন করেছে এবং নিশ্চিত করেছে যে নিষ্কাশন তাপমাত্রা (p=0.0030) এবং ইথানল ঘনত্ব (p=0.0006) রৈখিক পদগুলির মধ্যে ছিল স্বাধীন ভেরিয়েবল যা উল্লেখযোগ্যভাবে সিআইএকে প্রভাবিত করেছিল (সারণী 4)।

সিআইএ-তে প্রতিটি স্বাধীন ভেরিয়েবলের প্রভাব মূল্যায়ন করতে, আমরা সিআইএকে একটি বিক্ষিপ্ত প্লট (চিত্র 1C) ব্যবহার করে একটি পরিবর্তনশীল পরিবর্তনের সাথে তুলনা করেছি। স্বাধীন পরিবর্তনশীল বৃদ্ধির সাথে সাথে, সিআইএ প্রাথমিকভাবে সর্বাধিক মূল্যে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং ইথানলের ঘনত্ব সবচেয়ে প্রভাবশালী বলে দেখা গেছে। ত্রিমাত্রিক প্রতিক্রিয়া পৃষ্ঠের বক্ররেখা সিআইএ পরিবর্তনের প্রতিনিধিত্ব করে স্বাধীন ভেরিয়েবলের ইন্টারেক্টিভ প্রভাবের কারণে, যা নিষ্কাশনের সময় এবং ইথানল ঘনত্বের সাথে বৃদ্ধি এবং হ্রাস করার প্রবণতা ছিল। ক্রমবর্ধমান নিষ্কাশন সময় এবং ইথানল ঘনত্বের সাথে সিআইএ বৃদ্ধি পেয়েছে, সর্বোচ্চ সিআইএ 12.1 মিনিট নিষ্কাশন সময় এবং 73.6 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব দেখাচ্ছে। একটি ধ্রুবক নিষ্কাশন সময়ে নিষ্কাশন তাপমাত্রা এবং ইথানল ঘনত্বের সাথে সিআইএ-তে পরিবর্তনগুলিও একই রকম হতে থাকে; যাইহোক, ইথানল ঘনত্বের সাথে সিআইএ-তে বৈচিত্রগুলি আরও তাৎপর্যপূর্ণ বলে নিশ্চিত করা হয়েছিল (চিত্র 4বি)।

সিসিডি দ্বারা পূর্বাভাসিত সিআইএর সর্বোচ্চ মান ছিল 93.8 শতাংশ যার নিষ্কাশন সময় 14.5 মিনিট, নিষ্কাশন তাপমাত্রা 65.1 ◦C এবং একটি ইথানল ঘনত্ব 69.3 শতাংশ। এটি পূর্ববর্তী একটি গবেষণায় পাওয়া সবুজ চা এবং সাদা চা-পানির নির্যাসের জন্য সিআইএর 39.4 শতাংশ এবং 40.3 শতাংশের দ্বিগুণেরও বেশি ছিল [40]। উপসংহারে, দএস. থানবার্গিনির্যাসকে বলিরেখা কমাতে কার্যকরী প্রসাধনী উপাদান হিসাবে ব্যবহার করতে সক্ষম বলে মনে করা হয়, কারণ এটি কোলাজেনেসের কার্যকলাপকে নিয়ন্ত্রণ করে।

2.5। UAE প্রক্রিয়ার অপ্টিমাইজেশান

এর নিষ্কাশন জন্য সর্বোত্তম সংযুক্ত আরব আমিরাত শর্ত সনাক্ত করতেত্বক সাদা করাএবং এস. থানবার্গির নির্যাস থেকে অ্যান্টি-রিঙ্কেল বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ, আমরা আরএসএ, টিআইএ এবং সিআইএ-এর পৃথক প্রতিক্রিয়া পৃষ্ঠগুলিকে ওভারল্যাপ করে নির্ভরশীল ভেরিয়েবলগুলিকে সর্বাধিক করার জন্য একটি সর্বোত্তম পয়েন্ট পেয়েছি (চিত্র 5)।

যখন স্বাধীন ভেরিয়েবলের পরিসর 5.30~18.7 মিনিট, নিষ্কাশনের তাপমাত্রা 22.4~79.6 ◦C, এবং ইথানলের ঘনত্ব 0~99.5 শতাংশের মধ্যে সীমাবদ্ধ ছিল, তখন সর্বোত্তমUAE অবস্থার পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছিল 12.0 মিনিট নিষ্কাশন সময়, 65.2 ◦C নিষ্কাশন তাপমাত্রা এবং 53.5 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব। সর্বোত্তম UAE শর্তটি নিষ্কাশন সময় কমানোর মানদণ্ডের উপর ভিত্তি করে উদ্ভূত হয়েছিল কারণ একটি সংক্ষিপ্ত প্রক্রিয়া সময় প্রক্রিয়া খরচ কমাতে উপকারী। সর্বোত্তম UAE অবস্থার অধীনে, যথাক্রমে, 86.5 শতাংশ, 88.3 শতাংশ, এবং 91.4 শতাংশ RSA, TIA, এবং CIA, পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছিল। পূর্ববর্তী গবেষণায়, ইউয়ান এট আল। রিপোর্ট করা হয়েছে যে এস. থানবার্গি থেকে জৈব সক্রিয় যৌগ নিষ্কাশনের জন্য সর্বোত্তম শর্তগুলি নিম্নরূপ: 120 মিলি/জি একটি তরল থেকে কঠিন অনুপাত, 210 মিনিটের নিষ্কাশন সময় এবং 97 ◦C [41] উত্তোলন তাপমাত্রা। যখন ইউয়ান এট আল। বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলি নিষ্কাশনের জন্য গরম জল নিষ্কাশনের শর্তগুলি অপ্টিমাইজ করা হয়েছে, বর্তমান গবেষণায়, জৈব সক্রিয় যৌগগুলি নিষ্কাশনের জন্য সংযুক্ত আরব আমিরাতের শর্তগুলি অপ্টিমাইজ করা হয়েছিল। অতএব, সংক্ষিপ্ত নিষ্কাশন সময় এবং নিম্ন তাপমাত্রার অধীনে সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থাগুলি পূর্ববর্তী গরম-পানি নিষ্কাশন প্রক্রিয়াগুলির তুলনায় একটি কার্যকর নিষ্কাশন প্রক্রিয়া ফরবায়োঅ্যাকটিভ যৌগ হিসাবে প্রমাণিত হয়েছিল।

ফলাফলগুলি যাচাই করার জন্য, সিসিডি মডেল দ্বারা পূর্বাভাস অনুসারে সর্বোত্তম অবস্থায় তিনটি প্রতিলিপি সহ একটি নিশ্চিতকরণ পরীক্ষা পরিচালিত হয়েছিল। যখন RSA, TIA, এবং CIA-এর পরীক্ষামূলক মানগুলি সর্বোত্তম অবস্থার অধীনে মূল্যায়ন করা হয়েছিল, তখন তারা ছিল 88.9 শতাংশ ± 3.11 শতাংশ, 85.1 শতাংশ ± 2.76 শতাংশ, এবং 89.7 শতাংশ ± 4৷{12}}9 শতাংশ, যথাক্রমে, এবং একটি দেখিয়েছে ভবিষ্যদ্বাণীমূলক মডেল মানগুলির সাথে শক্তিশালী চুক্তি (p > 0.05)। অতএব, পরীক্ষামূলক মানগুলি পূর্বাভাসিত মানগুলির সাথে ভাল সম্মত ছিল, যা UAE অপ্টিমাইজেশন ফলাফলগুলির নির্ভরযোগ্যতা প্রমাণ করে।

2.6। TRP-1, MMP-1, এবং MMP-9 এর mRNA এক্সপ্রেশন

TRP-1 5 হিসাবে কাজ করে,6-ডাইহাইড্রোক্সিইন্ডোল-2-কারবক্সিলিক অ্যাসিড অক্সিডেস, যা ত্বকের পিগমেন্টেশনের প্রধান কারণ হিসাবে পরিচিত যা এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে টাইরোসিনেজ উদ্দীপনা এবং ইউমেলানিনসিন্থেসিস দ্বারা কাজ করে [42]। বিপরীতে, এমএমপি-1 এবং এমএমপি-9 টাইপ 1কোলাজেনকে ভেঙে দেয়, যা ত্বকের স্তরের 90 শতাংশ তৈরি করে, যার ফলে কোলাজেনের অবক্ষয়, স্থিতিস্থাপকতা হ্রাস এবং ত্বকের বার্ধক্য [43]।

এই গবেষণায়,এস. থানবার্গিনির্যাসটি পরিসংখ্যানভিত্তিক অপ্টিমাইজেশনের মাধ্যমে প্রতিষ্ঠিত সর্বোত্তম UAE শর্তগুলি ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল, এবং নির্যাসটি মূল্যায়নের জন্য B{{0}}F0 সেল লাইনে পরীক্ষা করা হয়েছিলত্বক সাদা করাএবংবিরোধী wrinklingTRP{{0}}, MMP-1, এবং MMP-9 এর আরএনএ এক্সপ্রেশন স্তরের তুলনা করে বৈশিষ্ট্যগুলি। TRP-1-এর অভিব্যক্তি স্তর, মেলানিন সংশ্লেষণের সাথে সম্পর্কিত একটি প্রধান জিন, inS ঘনত্ব-নির্ভর বলে পাওয়া গেছে। thunbergii নির্যাস এবং 1 এবং 2 mg/mL নির্যাস নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ (p <0.05) (চিত্র="" 6a)="" এর="" তুলনায়="" চিকিত্সার="" পরে="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="">

আমরা আরও দেখতে পেয়েছি যে MMP{{{{10}}}} এবং MMP-9 এর অভিব্যক্তিগুলি S. Thunbergii নির্যাস ঘনত্বের (চিত্র 6B, C) সাথে আনুপাতিকভাবে হ্রাস পেয়েছে। বিশেষত, MMP-1 এবং MMP-9-এর এক্সপ্রেশন স্তরগুলি যথাক্রমে 58.6 শতাংশ এবং 78.8 শতাংশ দ্বারা নিষেধ করা হয়েছিল, গোষ্ঠীতে 2 মিলিগ্রাম/মিলি এস. থানবার্গি নির্যাস দ্বারা নিয়ন্ত্রিত গ্রুপগুলির তুলনায় (পি < 0.05)।="" উপরের="" ফলাফলগুলি="" থেকে,="" এটি="" নিশ্চিত="" করা="" হয়েছে="" যে="" সর্বোত্তম="" uae="" শর্তের="" অধীনে="" উত্পাদিত="" s.="" thunbergii="" নির্যাস="" কার্যকরভাবে="" trp-1,="" mmp-1,="" এবং="" mmp-9="" inb="" এর="" mrna="" প্রকাশকে="" বাধা="" দিতে="" পারে16-="" f0="" সেল="" লাইন,="" যার="" ফলে="" মেলানিন="" উৎপাদন="" এবং="" কোলাজেন="" পচন="" বাধা="">

2.7। S. Thunbergii এক্সট্র্যাক্টে ক্যাফেইক অ্যাসিডের সনাক্তকরণ

পূর্ববর্তী একটি পরীক্ষায়, সংযুক্ত আরব আমিরাতের শর্তাদি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, ত্বক সাদা করা এবংবিরোধী wrinklingS. Thunbergii নির্যাসের প্রভাব অপ্টিমাইজ করা হয়েছে; যাইহোক, নির্যাসের বায়োঅ্যাকটিভ উপাদানগুলি অন্বেষণ করার জন্য আরও গবেষণার প্রয়োজন ছিল। অতএব, থেকে phenolic যৌগএস. থানবার্গিতরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি (এলসি-এমএস/এমএস) ব্যবহার করে নির্যাস সনাক্ত করা হয়েছিল, কারণ এই প্রযুক্তিটি কাঠামোগত বৈশিষ্ট্য সহ ফেনোলিক যৌগগুলির সঠিক সনাক্তকরণ এবং প্রাকৃতিক উত্সগুলিতে ক্ষুদ্র অণু সনাক্ত করতে সক্ষম করে। শিখরগুলির সনাক্তকরণটি ধরে রাখার সময় (RT), পূর্ববর্তী আয়ন এবং মানগুলির সম্পর্কিত খণ্ড আয়নগুলির উপর ভিত্তি করে ছিল। এলসি-এমএস/এমএসসিস্টেমে, ক্যাফেইক অ্যাসিড RT এর 1.95 মিনিটে সর্বোচ্চ দেখায় (চিত্র 7)।

নেতিবাচক-আয়ন মোডে, m/z 179.10 আয়ন, যা ভর বর্ণালীতে দুটি আয়ন শিখরের মধ্যে একটিকে দেখায়, ক্যাফেইক অ্যাসিডের আণবিক সূত্র এবং m/z 135.56-এর পৃথকীকৃত খণ্ড আয়নের সাথে মিলে যায়। সাধারণত, সংঘর্ষ-জনিত বিচ্ছিন্নতার পরে, ফেনোলিক যৌগগুলি কার্বক্সিলিক অ্যাসিড গ্রুপ থেকে CO2 (44 Da) হারানোর দ্বারা চিহ্নিত একটি খণ্ড আয়ন তৈরি করে। এই ক্ষতির কারণে, পরবর্তীকালে m/z 179.10 এ থিয়ন থেকে 44-Da CO2 এর বিভাজন m/z 135.56 এ আয়ন দেয়। ক্যাফেইক অ্যাসিড হল একটি C6-C3 ফেনোলিক যৌগ যা উদ্ভিদ দ্বারা সেকেন্ডারি মেটাবলিজমের শিকিমেট পথের মাধ্যমে ফেনিল্যালানাইন বা টাইরোসিন থেকে উৎপন্ন হয় এবং এটি সিনামিক অ্যাসিড (বা ফিনাইলপ্রোপ্যানয়েড) শ্রেণীর প্রতিনিধি। এটি বিভিন্ন শাকসবজি এবং ফলের মাধ্যমে মানুষের খাদ্যে প্রবেশ করে [৪৪]। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, অসংখ্য গবেষণায় দেখা গেছে যে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যগুলির কারণে ক্যাফেইক অ্যাসিডের ব্যবহারে অসংখ্য স্বাস্থ্য উপকারিতা রয়েছে যা অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সাথে যুক্ত বিভিন্ন রোগ প্রতিরোধে সহায়তা করে [৪৫]। সুতরাং, ফেনোলিক যৌগগুলির উপর এই গবেষণাটি খুবই উপযোগী এবং মান নিয়ন্ত্রণ প্রক্রিয়া এবং এস. থানবার্গিয়াস এর ভবিষ্যত অন্বেষণে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারেত্বক সাদা করাএবংবিরোধী wrinklingবৈশিষ্ট্য

3. উপকরণ এবং পদ্ধতি

3.1। উপকরণ এবং বিকারক

এস. থানবার্গিকোরিয়ার জেজু দ্বীপের দক্ষিণ উপকূল থেকে 2019 অক্টোবরে সংগ্রহ করা হয়েছিল প্যারা জেজুতে (জেজু, কোরিয়া)। পরীক্ষা-নিরীক্ষার আগে, S. Thunbergii একটি গ্রাইন্ডার (HMF-3000S, Hanil Co., Wonju, Korea) ব্যবহার করে 0.42 মিমি নীচে পাউডার করা হয়েছিল এবং −5◦C তাপমাত্রায় রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। দ্রাবক নিষ্কাশনের জন্য ইথানল সামচুন কেমিক্যাল কোং থেকে কেনা হয়েছিল (95.0 v/v শতাংশ , Pyungtaek, Korea)। অ্যাসকরবিক অ্যাসিড (ভিটামিন সি), আরবুটিন, অ্যান্ডকোজিক অ্যাসিড নিয়ন্ত্রণ পরীক্ষার মান হিসাবে ব্যবহৃত সিগমা-অলড্রিচ কোং, লিমিটেড (সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল। এই পরীক্ষায় ব্যবহৃত অন্যান্য সমস্ত রাসায়নিক বিশ্লেষণাত্মক গ্রেড ছিল।

3.2। সংযুক্ত আরব আমিরাতের প্রক্রিয়া

নমুনার শুকনো পাউডার (1 গ্রাম) একটি চাপের পাত্রে (XF100, AntonPaar Co., Ltd., Graz, Austria) 10 মিলি দ্রাবক দিয়ে রাখা হয়েছিল এবং 1 মিনিটের জন্য একটি ঘূর্ণি মিক্সার (VM-10, Daihan sci. Co., Wonju, Korea) ব্যবহার করে মিশ্রিত করুন। এই নমুনাগুলি 5.30~18.7 মিনিট, নিষ্কাশনের সময় 22.4~79.6 ◦C, এবং 0.0~99.5 শতাংশ ইথানল ঘনত্ব সহ সিসিডি থেকে প্রাপ্ত 17টি পৃথক সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার অধীনে নিষ্কাশিত হয়েছিল। UAE একটি আল্ট্রাসাউন্ড ডিভাইস (SD-D250H, Sungdong Co., Seoul, Korea) ব্যবহার করে 200 W এর বৈদ্যুতিক শক্তি এবং 40 kHz ফ্রিকোয়েন্সি একটি ডিজিটাল টাইমার এবং তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রক দিয়ে সজ্জিত করা হয়েছিল। নিষ্কাশনের পরে, একটি সেন্ট্রিফিউজ (1236R, Labogene Co., Daejeon, Korea) ব্যবহার করে 10,000 rpm-এ সুপারনাট্যান্টকে 10 মিনিটের জন্য আলাদা করা হয়েছিল। তারপরে সমাধানটি 0.45 µm ছিদ্রযুক্ত সেলুলোজ অ্যাসিটেট ডিস্ক ফিল্টারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং RSA, TIA এবং CIA বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল (চিত্র 8)।

3.3। এক্সপেরিমেন্ট ডিজাইন

ডিজাইন-বিশেষজ্ঞ সফ্টওয়্যার (Ver. 8.0, Stat-Ease, Minneapolis, MN, USA) থেকে জৈব সক্রিয় যৌগগুলিকে সর্বাধিক নিষ্কাশন করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিলএস. থানবার্গিসিসিডি ব্যবহার করে সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার অপ্টিমাইজেশনের মাধ্যমে। স্বাধীন ভেরিয়েবল হিসাবে, নিষ্কাশন সময় (X1), নিষ্কাশন তাপমাত্রা (X2), এবং ইথানল ঘনত্ব (X3) সহ মূল ভেরিয়েবলগুলি নির্বাচন করা হয়েছিল, এবং সেগুলি 5 (−1.68, −1, 0, 1, 1.68) স্তরে কোড করা হয়েছিল। , সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে। RSA, TIA, এবং CIA প্রধান স্বাধীন ভেরিয়েবল দ্বারা প্রভাবিত নির্ভরশীল ভেরিয়েবল হিসাবে সেট করা হয়েছিল। CCD দ্বারা উত্পন্ন 17টি শর্তের অধীনে পরীক্ষামূলক মান প্রাপ্ত করা হয়েছিল, এবং প্রতিটি স্বাধীন এবং নির্ভরশীল ভেরিয়েবলের পারস্পরিক সম্পর্ক একটি চতুর্ভুজাকৃতি সমীকরণ ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। [৪৬]। স্বাধীন ভেরিয়েবলের পরিবর্তন অনুসারে নির্ভরশীল পরিবর্তনশীল মান গণনা করতে নিম্নলিখিত দ্বিঘাত রিগ্রেশন সমীকরণ ব্যবহার করা হয়েছিল:

Y = β0 + k ∑ i = 1 βiXi + k ∑ i = 1 βiiX 2 i + k ∑ i>1 ijXiXj(2)

যেখানে Y নির্ভরশীল চলকের (RSA, TIA, CIA) প্রতিনিধিত্ব করে, 0 হল একটি ধ্রুবক সহগ, এবং k হল একটি পরীক্ষা চলক৷ i, ii, এবং ij হল যথাক্রমে রৈখিক, দ্বিঘাত এবং মিথস্ক্রিয়া পদগুলির জন্য রিগ্রেশন সহগ।

স্বাধীন ভেরিয়েবলের উপর ভবিষ্যদ্বাণীকৃত মডেলের মূল্যায়ন করার জন্য, নিষ্কাশন তাপমাত্রা, সময় এবং ইথানল ঘনত্ব সহ প্রতিটি পরিবর্তনশীলের প্রভাব মূল্যায়ন করার জন্য 95 শতাংশ আত্মবিশ্বাসের স্তরের সাথে বৈকল্পিক (ANOVA) একটি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। এছাড়াও, রিগ্রেশন সহগ (R2), রিগ্রেশন মডেলের পি-মান, রিগ্রেশন মডেলের ফিটনেস নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল [47]।

3.4। র‌্যাডিক্যাল স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাকটিভিটি (RSA) অ্যাসে

এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাবএস. থানবার্গি1,1-ডিফেনাইল-2-পিক্রিলহাইড্রাজিল (ডিপিপিএইচ, সিগমা-অলড্রিচ) অ্যামোডিফাইড ডিপিপিএইচ অ্যাস ব্যবহার করে মুক্ত র্যাডিকেলের উপর ভিত্তি করে নির্যাস মূল্যায়ন করা হয়েছিল [48]। স্টক সলিউশনটি মিথানলের সাথে 0.1 M DPPH দ্রবীভূত করে এবং তারপর ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। মিথেনলের সাথে মিশ্রিত ডিপিপিএইচ দ্রবণটি 10 ± 0 শোষণ পাওয়ার জন্য প্রস্তুত করা হয়েছিল। . ডিপিপিএইচ দ্রবণের একটি 1.25 মিলি অ্যালিকোট 0.25 মিলি মিশ্রিত এস. থানবার্গি নির্যাস (50-500 মিলিগ্রাম/মিলি) এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 20 মিনিটের জন্য অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় দাঁড়াতে দেওয়া হয়েছিল। শোষণের পরিবর্তন 517 এনএম এ পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং RSA নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল:

RSA ( শতাংশ )={1 −Abs (নমুনা) / Abs (নিয়ন্ত্রণ)} × 100 (3)

যেখানে Abs(নিয়ন্ত্রণ) হল নিয়ন্ত্রণের শোষণ এবং Abs(নমুনা) হল নির্যাসের শোষণ। অ্যাসকরবিক অ্যাসিডের একই ঘনত্ব (50-500 mg/mL) অ্যাপজিটিভ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

3.5। টাইরোসিনেজ ইনহিবিটরি অ্যাকটিভিটি (টিআইএ) অ্যাস

ইয়াগি [49] দ্বারা রিপোর্ট করা পদ্ধতি অনুসারে টিআইএ পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রতিক্রিয়া মিশ্রণে রয়েছে 0.4 মিলি সোডিয়াম ফসফেট বাফার (67 মিমি, পিএইচ 6.8), 0.2 মিলি 10 mM3,{{10}} ডাইহাইড্রক্সি ফেনিল্যালানাইন (এল-ডোপা, সিগমা-অলড্রিচ), 0.2 মিলি মাশরুম টাইরোসিনেজ (125 ইউনিট/মিলি, সিগমা-অলড্রিচ), এবং 0.2 মিলি নির্যাস দ্রবণ। প্রতিক্রিয়াটি 30 মিনিটের জন্য 25 ◦C তাপমাত্রায় বাহিত হয়েছিল। প্রতিক্রিয়ার পরে, শোষণ 475 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি নিয়ন্ত্রণের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। নীচের সমীকরণ অনুযায়ী টিআইএ গণনা করা হয়েছিল:

TIA ( শতাংশ )={1 −Abs (নমুনা) / Abs (নিয়ন্ত্রণ)}× 100 (4)

যেখানে Abs(নিয়ন্ত্রণ) হল নিয়ন্ত্রণের শোষণ এবং Abs(নমুনা) হল নির্যাসের শোষণ।

cistanche tyrosinase কার্যকলাপ হ্রাস

3.6। কোলাজমেজ ইনহিবিটরি অ্যাকটিভিটি (সিআইএ) অ্যাস

সিআইএ পরীক্ষাটি Wünsch এবং Heindrich [50] দ্বারা রিপোর্ট করা পদ্ধতি অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল। কোলাজেনেস (0.2 mg/mL, Sigma-Aldrich) 0.1 M Tris–HCl(pH 7.5) এ দ্রবীভূত হয়েছিল। সাবস্ট্রেট, 4-ফেনিলাজোবেনজাইলোক্সাইকার্বনিল-প্রো-লিউ-গ্লাই-প্রো-আর্গ (0.4 মিগ্রা/মিলি, সিগমা-অলড্রিচ), 0.1 এম ট্রিস–এইচসিএল-এ দ্রবীভূত হয়েছিল (pH 7.5) 4 mM CaCl2 ধারণকারী। কোলাজেন হাইড্রোলাইসিস মূল্যায়নের জন্য প্রতিক্রিয়া মিশ্রণে রয়েছে কোলাজেনেস (75 μL), নমুনা (50 μL), এবং সাবস্ট্রেট সমাধান (125 μL)। কন্ট্রোল গ্রুপের জন্য, 50 μL পাতিত জল নির্যাসের পরিবর্তে প্রতিক্রিয়া মিশ্রণে যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে 30 মিনিটের জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় সেবন করার অনুমতি দেওয়া হয়েছিল এবং এনজাইম বিক্রিয়া বন্ধ করার জন্য 25 mM সাইট্রিক অ্যাসিডের 0.25 mL যোগ করা হয়েছিল। ইথাইল অ্যাসিটেটের সাথে মেশানোর পরে, সুপারনাট্যান্ট আলাদা করা হয়েছিল, এবং শোষণ 320 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল। নিষেধাজ্ঞার শতাংশ নিম্নলিখিত সূত্র অনুসারে গণনা করা হয়েছিল:

CIA ( শতাংশ ) ={1 −Abs (নমুনা)/Abs (নিয়ন্ত্রণ)}× 100 (5)

যেখানে Abs(নিয়ন্ত্রণ) হল নিয়ন্ত্রণের শোষণ এবং Abs(নমুনা) হল নির্যাসের শোষণ।

3.7। মডেলের বৈধতা

সংযুক্ত আরব আমিরাতের জন্য অপ্টিমাইজ করা শর্তগুলি (নিষ্কাশনের সময়, নিষ্কাশনের তাপমাত্রা, এবং ইথানল ঘনত্ব) অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের ইন ভিট্রো মূল্যায়নের সাথে যাচাই করা হয়েছিল,ত্বক সাদা করা, এবং সিসিডি থেকে প্রাপ্ত মান অনুযায়ী অ্যান্টি-রিঙ্কেল প্রভাব (RSA, TIA, এবং CIA)। সমস্ত প্রতিক্রিয়া আবার সংযুক্ত আরব আমিরাতের অপ্টিমাইজড অবস্থার অধীনে নির্ধারিত হয়েছিল। পরীক্ষামূলক মানগুলি এর বৈধতা মূল্যায়ন করার জন্য মডেল দ্বারা ভবিষ্যদ্বাণীকৃত মানগুলির সাথে তুলনা করা হয়েছিল। এলসি-এমএস/এমএস বিশ্লেষণ সর্বোত্তম অবস্থার অধীনে উৎপন্ন নির্যাসের উপর সঞ্চালিত হয়েছিল মূল উপাদানগুলি খুঁজে পেতেএস. থানবার্গিনির্যাস.

3.8। সেল সংস্কৃতি

বি , MD, USA) 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম এবং 1 শতাংশ পেনিসিলিন (থার্মো ফিশার সাই. ইনক., ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) সহ সামগ্রী৷ কোষগুলি 37 ◦C তাপমাত্রায় 5 শতাংশ CO2 (MCO-5AC, Sanyo Co., Ltd., Tokyo, Japan) সহ ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং 25 cm2cultureflasks-এ monolayer হিসাবে বেড়ে ওঠে। যখন একটি কোষ রেখা প্রায় 80 শতাংশ সঙ্গমে পৌঁছেছিল, তখন কোষগুলির সঠিক বৃদ্ধি এবং স্বাস্থ্য নিশ্চিত করার জন্য একক কোষ পেতে ট্রিপসিন-ইডিটিএ দিয়ে চিকিত্সা করে সাবকালচারিং করা হয়েছিল।

3.9। রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (RT-PCR)

RT-PCR সম্পাদনের জন্য, 10 × 10একটি কূপ প্লেটের প্রতি 6টি কোষ প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। TotalRNA একটি AccuPrep ইউনিভার্সাল RNA নিষ্কাশন কিট (BioneerCo., Daejeon, Korea) সহ কোষ থেকে বের করা হয়েছিল। amfiRivert cDNA সংশ্লেষণ প্ল্যাটিনাম মাস্টার মিক্স (GenDEPOTCo., TX, USA) ব্যবহার করে মোট RNA forcDNA সংশ্লেষণের 0.5 µg দিয়ে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল। প্রতিটি প্রাইমারের সাথে cDNA প্রশস্ত করা হয়েছিল, যেমন TRP-1, MMP-1, MMP-9, এবং -actin (সারণী 5)। পিসিআর 1 μL cDNA, 10 μLTaq প্রিমিক্স (জেনেট বায়ো, ডেজিয়ন, কোরিয়া), এবং 9 μL ডায়থাইলপাইরোকার্বনেট (DEPC) ধারণকারী একটি 20 μL ভলিউমে সঞ্চালিত হয়েছিল। পিসিআর শর্তগুলি নিম্নরূপ ছিল: 5 মিনিটের জন্য 94 ◦C, তারপরে 5 সেকেন্ডের জন্য 95 ◦C এ 25টি চক্র, 31 সেকেন্ডের জন্য 60 ◦C (TRP-1) বা 30 s-এর জন্য 55 ◦C (MMP-1) {26}}) বা 30 সেকেন্ডের জন্য 59 ◦C (MMP-9 এর জন্য), এবং 30 সেকেন্ড এক্সটেনশনের জন্য 72 ◦C। প্রতিটি পিসিআর পণ্য 1 শতাংশ অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরস করা হয়েছিল এবং জেল ডক টিএম এক্সআর প্লাস সিস্টেম এবং কোয়ান্টিটি ওয়ান সফ্টওয়্যার (বায়ো-র্যাড কোং, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিল। হাউসকিপিং জিন হিসাবে -অ্যাক্টিন টিআরপি-1, এমএমপি-1, এবং এমএমপি-9-এর এক্সপ্রেশন স্তরগুলিকে স্বাভাবিক করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

3.10। এলসি-এমএস/এমএস বিশ্লেষণ

S. Thunbergii নির্যাসের ক্রোমাটোগ্রাফিক বিচ্ছেদ ফিনি গ্যান সার্ভেয়ার প্লাস HPLC সিস্টেম (থার্মো ইলেক্ট্রন কর্পোরেশন, সান জোসে) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। 150 মিমি কলামের দৈর্ঘ্য, 3 মিমি অভ্যন্তরীণ ব্যাস এবং 3 µm কণা আকার (RESTEK Co., Bellefonte, PA, USA) সহ একটি ROC C18 কলাম ব্যবহার করে 0.1 এর গ্রেডিয়েন্টেল্যুশন ব্যবহার করে বিচ্ছেদ অর্জন করা হয়েছিল পানিতে শতাংশ ফরমিক অ্যাসিড (মোবাইল ফেজ এ) এবং 0. 1 শতাংশ ফর্মিক অ্যাসিড অ্যাসিটোনিট্রিলে (মোবাইল ফেজ বি) প্রবাহ হারে 0.2 মিলি/মিনিট, নিম্নরূপ: 5 শতাংশ থেকে 11 মিনিটের জন্য 100 শতাংশ মোবাইল ফেজ B, 4 মিনিটের জন্য 100 শতাংশ থেকে 5 শতাংশ মোবাইল ফেজ B, 2 মিনিটের জন্য 37 শতাংশ মোবাইল ফেজ B, 0.1 মিনিটের জন্য 37 শতাংশ থেকে 10 শতাংশ মোবাইল ফেজ B এবং 2.4 মিনিটের জন্য 10 শতাংশ মোবাইল ফেজ বি . ইনজেকশন ভলিউম ছিল 10 µL, এবং কলামটি 30 ◦C এ বজায় রাখা হয়েছিল। একটি থার্মো ফিনিগান টিএসকিউ কোয়ান্টাম আল্ট্রা ইএমআর ট্রিপল কোয়াড্রুপোলেমাস স্পেকট্রোমিটার (থার্মো ফিশার বিজ্ঞান ইনক।, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে ভর স্পেকট্রোমেট্রিক পরীক্ষা করা হয়েছিল। S. Thunbergii নিষ্কাশনটি ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন (ESI) ব্যবহার করে নেতিবাচক আয়ন ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, বিশেষত টার্বো আয়ন স্প্রে মোড ব্যবহার করে। নেতিবাচক মোডে এস. থানবার্গি নিষ্কাশনের আয়নকরণের জন্য ESI উৎস সেটিংস ছিল নিম্নরূপ: গ্যাস তাপমাত্রা, 270 ◦C;গ্যাস প্রবাহ, 19 L/min; খাপ গ্যাস তাপমাত্রা, 400 ◦C; খাপ গ্যাস প্রবাহ, 10 এল/মিনিট; কৈশিক ভোল্টেজ, 3000 V; অগ্রভাগের ভোল্টেজ, 1000 V. ভর স্পেকট্রা 100 থেকে 500 m/z এর মধ্যে নেতিবাচক আয়নমোডে রেকর্ড করা হয়েছিল সংঘর্ষের গ্যাস হিসাবে নাইট্রোজেন ব্যবহার করে। মধ্যে প্রধান উপাদান বিশ্লেষণএস. থানবার্গিপ্রাপ্ত আণবিক এবং LC-MS/MS ফলাফলের ফ্র্যাগমেন্টেশন প্যাটার্নের সাথে সাহিত্য থেকে তথ্য এবং স্ট্যান্ডার্ড যৌগগুলির জন্য একটি ভর গ্রন্থাগারের সাথে তুলনা করে নির্যাস পরিচালিত হয়েছিল।

4। উপসংহার

এই গবেষণায় সংযুক্ত আরব আমিরাত প্রক্রিয়ার জন্য সর্বোত্তম অবস্থার প্রস্তাব করা হয়েছে যা অ্যান্টিঅক্সিডেন্টকে সর্বাধিক করতে পারে,ত্বক সাদা করা, এবংবিরোধী wrinklingS. Thunbergii থেকে মূল্য সংযোজন জৈব-অ্যাকটিভ যৌগগুলির উৎপাদনের জন্য প্রভাব, যা দক্ষিণ-পূর্ব এশিয়ার উপক্রান্তীয় উপকূলে বিস্তৃত, যা সামুদ্রিক দূষণ এবং পরিবেশগত বিপর্যয় ঘটায়। সংযুক্ত আরব আমিরাতের অপ্টিমাইজেশান সম্পাদনের ক্ষেত্রে সবচেয়ে প্রভাবশালী পরিবর্তনশীল ছিল ইথানল ঘনত্ব, যা নিশ্চিত করেছে যে জল এবং ইথানল সমন্বিত বাইনারি দ্রাবকগুলির ব্যবহার এবং ঘনত্ব নির্ধারণ সংযুক্ত আরব আমিরাতের একটি গুরুত্বপূর্ণ বিবেচনা ছিল। RSA, TIA, এবং CIA-এর একযোগে অপ্টিমাইজেশনের জন্য প্রতিটি প্রতিক্রিয়া পৃষ্ঠকে ওভারল্যাপ করার সময়, একটি নিষ্কাশন সময় 12।{2}} মিনিট, 65.2 ◦C এর সংযোজন তাপমাত্রা এবং 53.5 শতাংশ ইথানলের ঘনত্ব পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছিল, যে পরিস্থিতিতে RSA 86.5 শতাংশের মান, 88.3 শতাংশের TIA মান এবং 91.4 শতাংশের CIA মান চিহ্নিত করা হয়েছে।

যখন অভিব্যক্তিতে TRP-1, MMP-1, এবং MMP-9 এর প্রভাবগুলিকে এমআরএনএ স্তরে মূল্যায়ন করা হয়েছিল S. Thunbergii নির্যাস ব্যবহার করে সর্বোত্তম সংযুক্ত আরব আমিরাতের অবস্থার অধীনে উত্পাদিত, তখন এটি নিশ্চিত করা হয়েছিল যে S. Thunbergii নির্যাস TRP-1, MMP-1, এবংMMP-9 এর mRNA মাত্রা হ্রাস করতে পারে এবং এর ফলে মেলানিন উৎপাদনের পাশাপাশি ত্বকের কোলাজেন পচন রোধ করতে পারে।

এইভাবে,এস. থানবার্গিপ্রসাধনী, খাদ্য এবং ওষুধের জন্য কার্যকরী উপাদানের উৎপাদনে মেরিনবায়োমাস থেকে এক্সট্র্যাক্টকে একটি নতুন উৎস হিসেবে ব্যাপকভাবে ব্যবহার করা হবে বলে আশা করা হচ্ছে। উপরন্তু, সংযুক্ত আরব আমিরাত ব্যবহার করে বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ নিষ্কাশনের প্রক্রিয়াটি প্রক্রিয়ার বিকাশে মৌলিক তথ্য সরবরাহ করে বলে মনে করা হয়। S.thunbergii এবং অন্যান্য macroalgae থেকে নতুন কার্যকরী উপাদান উৎপাদনে সর্বোত্তম নিষ্কাশন অবস্থার নির্ধারণ।