ওষুধ-সংবেদনশীল এবং মাল্টিড্রাগ-প্রতিরোধী ছোট-কোষের ফুসফুসের কার্সিনোমা কোষে চারটি চীনা ভেষজ নির্যাসের প্রভাব

ডেভিড সাদাভাজুলি আহন মেই ঝাঁ মেই-লিন প্যাংজেন ডিংসুসান ই কেন

বিমূর্ত উদ্দেশ্য:আমরা চারটি নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা করা ছোট-কোষের ফুসফুসের কার্সিনোমা কোষের ফার্মাকোলজি, কোষ জীববিজ্ঞান এবং আণবিক জীববিজ্ঞান পরীক্ষা করেছি।চাইনিজ ভেষজ ওষুধ. অনেক ক্যান্সার রোগী এই ওষুধগুলি গ্রহণ করেন, কিন্তু সেলুলার স্তরে তাদের প্রভাবগুলি অনেকাংশে অজানা। আমরা বিশেষ করে ড্রাগ-প্রতিরোধী কোষের প্রভাবে আগ্রহী ছিলাম, কারণ প্রতিরোধ একটি উল্লেখযোগ্য ক্লিনিকাল সমস্যাফুসফুসের ক্যান্সারr পদ্ধতি: ওষুধ-সংবেদনশীল (H69), মাল্টি-ড্রাগ-প্রতিরোধী (H69VP), এবং সাধারণ ফুসফুসের এপিথেলিয়াল কোষ (BEAS-2) চীনা ভেষজ ওষুধে ব্যবহৃত দুটি উদ্ভিদের নির্যাসের সংস্পর্শে এসেছে।ফুসফুসের ক্যান্সার: Glycyrrhiza glabra (GLYC) এবং Olenandria diphusa (OLEN), এবং বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ দুটি সমন্বয়ের নির্যাসচাইনিজ ভেষজ ওষুধ, SPES (15 herbs) এবং PC-SPES (8 herbs)। সাইটোটক্সিসিটি সেল গ্রোথ ইনহিবিশন (IC50) এর পরিপ্রেক্ষিতে পরিমাপ করা হয়েছিল। ভেষজ নির্যাসগুলির সংস্পর্শে আসার পরে ডিএনএ বিভক্তকরণের গতিবিদ্যা BudR লেবেল দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল এবং এর পরে ELISA। অ্যাপোপটোসিস টিউনেল অ্যাস দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল এবং ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা অনুসরণ করা হয়েছিল। অ্যাপোপটোসিস- এবং কোষ চক্র-সম্পর্কিত জিনের অভিব্যক্তি mRNA এর বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল এবং তারপরে প্রোবের অ্যারেতে ফিল্টার হাইব্রিডাইজেশন এবং কেমিলুমিনেসেন্স দ্বারা সনাক্তকরণ দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। ফলাফল: প্রতিটি ক্ষেত্রে, চারটি ভেষজ নির্যাস H69 এবং H69VP-এর জন্য সমানভাবে সাইটোটক্সিক এবং BEAS-2-এর জন্য কম সাইটোটক্সিক ছিল। চারটি নির্যাসই ফুসফুসের কার্সিনোমা কোষে ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশনকে প্ররোচিত করে। গতিবিদ্যা GLYC-উন্মুক্ত সংস্কৃতির মাধ্যমে (নেক্রোসিসের একটি ইঙ্গিত) ডিএনএ খণ্ডগুলিকে প্রকাশ করেছে, কিন্তু OLEN-, SPES- এবং PC-SPES-উন্মুক্ত সংস্কৃতিতে কোষের ভিতরে (অ্যাপোপ্টোসিসের ইঙ্গিত)। TUNEL বিশ্লেষণ নিশ্চিত করেছে যে পরের তিনটি নির্যাসের এক্সপোজার, কিন্তু GLYC-তে নয়, অ্যাপোপটোসিসের দিকে পরিচালিত করে। অপরিশোধিত এবং GLYC-চিকিত্সা করা কোষের তুলনায়, OLEN, SPES এবং PC-SPES-এর সাহায্যে চিকিত্সা করা H69 এবং H69VP কোষগুলি অ্যাপোপটোটিক ক্যাসকেডে জড়িত বেশ কয়েকটি জিনের উচ্চতর অভিব্যক্তি দেখিয়েছে, যা ইটোপোসাইড এবং ভিনক্রিস্টিন দিয়ে চিকিত্সা করা কোষের অনুরূপ।

উপসংহার:দ্যচাইনিজ ভেষজ ওষুধনির্যাস OLEN, SPES এবং PC-SPES ওষুধ-প্রতিরোধী এবং ড্রাগ-সংবেদনশীল উভয়ের জন্য সাইটোটক্সিকফুসফুসের ক্যান্সারকোষ, সাধারণ কোষের উপর তাদের প্রভাবের তুলনায় কিছু টিউমার কোষের নির্দিষ্টতা দেখায় এবং ডিএনএ ব্রেক এবং জিন এক্সপ্রেশন দ্বারা পরিমাপ করা প্রোপোপটোটিক। এই নির্যাসগুলিতে টিউমার কোষগুলির প্রতিক্রিয়া প্রচলিত কেমোথেরাপিউটিক ওষুধের প্রতিক্রিয়ার অনুরূপ ছিল।

সিস্তানচে, একটি মূল্যবানচাইনিজ ভেষজ ওষুধ, অনাক্রম্যতা বৃদ্ধির প্রভাব আছে এবংফুসফুসের ক্যান্সার. Cistanche ঔষধি ব্যবহারের একটি দীর্ঘ ইতিহাস আছে. এটি প্রথম "শেন নং এর মেটেরিয়া মেডিকা" এ রেকর্ড করা হয়েছিল। Shennong সব ধরনের ভেষজ স্বাদ. কিডনিকে প্রাণবন্ত করতে এবং পুষ্টিকর সারাংশ, ক্লান্তি দূর করতে, অন্ত্র ও মলত্যাগকে আর্দ্র করতে, ইয়াং এবং ইয়িনকে পুষ্টিকর করতে ইত্যাদিতে সিস্তানচে-এর কার্যকারিতা এবং ভূমিকা উল্লেখযোগ্য, তাই এটি বইটিতে লিপিবদ্ধ করা হয়েছে। তাং রাজবংশ-পরবর্তী সময়ে, সিস্তানচে নয়টি চীনা পরী ধরণের ঘাসের একটি হিসাবে তালিকাভুক্ত করা হয়েছিল। এটির উপর আধুনিক গবেষণা 60 বছরেরও বেশি সময় ধরে করা হয়েছে। , অ্যান্টি-এজিং, স্মৃতিশক্তি এবং রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা বাড়াতে সাহায্য করে ইত্যাদি।

কীওয়ার্ড:ফুসফুসের ক্যান্সার, মাদক প্রতিরোধের,চাইনিজ ভেষজ ওষুধ,cistanche

যোগাযোগ:joanna.jia@wecistanche.com

ভূমিকা

ছোট-কোষফুসফুসের ক্যান্সার(SCLC) প্রায় 20 শতাংশের জন্য দায়ীফুসফুসের ক্যান্সারএবং আক্রমনাত্মক, 5-বছরের বেঁচে থাকার হার 10 শতাংশের কম [19]। রোগীরা সাধারণত ছড়িয়ে পড়া রোগে উপস্থিত থাকে, এবং তাই কেমোথেরাপির মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়, যার মধ্যে সাধারণত সিসপ্ল্যাটিন, ইটোপোসাইড, ডক্সোরুবিসিন, 5-ফ্লুওরোরাসিল এবং ট্যাক্সোল [12] যুক্ত থাকে। দুর্ভাগ্যবশত, এই চিকিত্সাটি শেষ পর্যন্ত অকার্যকর হয়ে যায় কারণ বেশিরভাগ SCLC টিউমার মাল্টিড্রাগ প্রতিরোধের বিকাশ করে [18]। যেহেতু অনেক প্রতিরোধের প্রক্রিয়া রয়েছে [15], প্রতিরোধকে অতিক্রম করা একটি প্রধান ক্লিনিকাল চ্যালেঞ্জ।

উপশমকারী যত্নের সম্মুখীন হয়ে, অনেক ক্যান্সার রোগী হার্বাল থেরাপি সহ বিকল্প ওষুধ ব্যবহার করে [6, 23]। এই থেরাপির মধ্যে, ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ সম্ভবত সেরা প্রতিষ্ঠিত এবং কোডকৃত, যা কয়েক হাজার বছর আগের। এই চিকিৎসা ব্যবস্থার তাত্ত্বিক ভিত্তি ইয়িন এবং ইয়াং এর বিরোধী শক্তি, উৎপাদক এবং ধ্বংসাত্মক চক্র, এবং একটি জীবনী শক্তি বা কিউই [2] নিয়ে উদ্বেগ প্রকাশ করে। নির্দিষ্ট ভেষজ নির্যাস, এবং সংমিশ্রণ, ক্যান্সার সহ নির্দিষ্ট রোগের চিকিত্সার জন্য তৈরি করা হয়েছে [11, 27]। যদিও কিছু অভিজ্ঞতামূলক প্রমাণ রয়েছে যে ভেষজগুলি ক্যান্সারের চিকিৎসায় কার্যকর, সেলুলার স্তরে তাদের কার্যপ্রণালীগুলি মূলত অজানা। এটি অতিরিক্ত গুরুত্ব নেয় যদি রোগীরা তাদের ব্যবহারকে প্রচলিত কেমোথেরাপির সাথে একত্রিত করে। এছাড়াও, ওষুধের প্রতিরোধের উপর ভেষজ নির্যাসের প্রভাব রিপোর্ট করা হয়নি।

আমরা চারটির প্রভাব তদন্ত করেছিচাইনিজ ভেষজ ওষুধতিনটি কোষ লাইনে: SCLC, মাল্টিড্রাগ-প্রতিরোধী SCLC, এবং স্বাভাবিক ফুসফুসের এপিথেলিয়াম। চারটির মধ্যে দুটি নির্যাস ছিল একক উদ্ভিদ থেকে যা প্রায়ই ফুসফুসের ক্যান্সারের জন্য নির্ধারিত হয়, গ্লাইসিরিজা গ্লাব্রা (GLYC) এবং ওলেনান্দ্রিয়া ডিফ-ফুসা (OLEN)। অন্য দুটি ছিল SPES এবং PC- SPES নামক ভেষজগুলির বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ সংমিশ্রণ থেকে। OLEN (চীনা নাম বাই হুয়া সে কাও) এর অ্যান্টিটিউমার, অ্যান্টিমিউটাজেনিক এবং ইমিউনোস্টিমুলেটিং কার্যকলাপ রয়েছে [1, 25, 29]। GLYC (চীনা নাম গ্যান কার) হল অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি, অ্যান্টিটিউমোরিজেনিক এবং অ্যান্টিমিউটাজেনিক [7, 11]। BotanicLabs (Brea, Calif.) দ্বারা বিকশিত SPES, 15টি চীনা ভেষজ উদ্ভিদের লাইওফিলাইজড নির্যাস ধারণকারী ক্যাপসুল আকারে এবং উন্নত ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীদের ব্যথা কমাতে দেখা গেছে [14]। SPES-এর ভেষজগুলির মধ্যে রয়েছে রোগ প্রতিরোধক উদ্দীপকসিস্তানচেdeserticola, অ্যান্টিটিউমার এজেন্ট Rabdosia rubescens, এবং অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি এজেন্ট Zanthoxylum iridium [1, 11]। পিসি-এসপিইএস, বোটানিকল্যাব দ্বারাও প্রস্তুত করা হয়েছে, এতে আটটি ভেষজ রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে অ্যান্টিঅ্যান্ড্রোজেনিক সেরেনোয়া রেপেনস যা প্রোস্ট্যাটিক হাইপারপ্লাসিয়াকে বাধা দেয় [২১], প্রোটিন কিনেস সি ইনহিবিটর স্কুটেলারিয়া বাইকালেনসিস [১৩], অ্যান্টিটিউমার এজেন্ট প্যানাক্স জিনসেং [৩০], এবং গ্লাইব্রাজি (গ্লাসিব্রাজি)। উপরে দেখুন). GLYC, OLEN এবং SPES-এর ক্লিনিকাল অ্যান্টিটিউমার কার্যকারিতার জন্য কঠোর প্রমাণের অভাব থাকলেও, PC-SPES-এর কার্যকারিতার কিছু প্রমাণ রয়েছে। প্রোস্টেট ক্যান্সার কোষ এবং পশুর মডেল উভয় ক্ষেত্রেই, PC-SPES হল প্রোপোপটোটিক এবং সাইটোটক্সিক [8, 9, 10, 28]। ক্লিনিকাল ট্রায়ালগুলি ইঙ্গিত করেছে যে এটি প্রোস্টেট-নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেনের মাত্রা কমাতে এবং অ্যান্ড্রোজেন-নির্ভর এবং অ্যান্ড্রোজেন-স্বাধীন প্রোস্টেট ক্যান্সার [৪, ৫, ১৭, ২০, ২৬] উভয় ক্ষেত্রেই টিউমার বৃদ্ধি বন্ধ করতে কার্যকর।

যদিও ক্যান্সারের রোগীরা নিঃসন্দেহে ভেষজ নির্যাস ব্যবহার করেন, তবে SCLC-তে এই নির্যাসের প্রভাব সম্পর্কে খুব কম প্রাক-ক্লিনিক্যাল বা ক্লিনিকাল ডেটা রয়েছে। আমাদের লক্ষ্য ছিল ওষুধ-সংবেদনশীল এবং ড্রাগ-প্রতিরোধী SCLC কোষে ফার্মাকোলজি (সাইটোটক্সিসিটি), কোষের জীববিজ্ঞান (কোষের মৃত্যুর পদ্ধতি), এবং আণবিক জীববিজ্ঞান (জিন এক্সপ্রেশন) পরীক্ষা দিয়ে এই বিশ্লেষণ শুরু করা।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

নির্যাস এবং রাসায়নিক

GLYC এবং OLEN শুকনো উদ্ভিদ হিসাবে জেন-অন মেডিকেল গ্রুপ (মন্টেরি পার্ক, ক্যালিফ) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। একটি নির্যাস তৈরির জন্য, 0.5 গ্রাম একটি মর্টার এবং পেস্টেল দিয়ে একটি সূক্ষ্ম পাউডারে ভুনা হয়েছিল এবং 30 মিলি পাতিত জলে ঝুলিয়ে দেওয়া হয়েছিল। চীনা ওষুধে, উদ্ভিদের নির্যাস গরম করার পরে চা হিসাবে খাওয়া হয়। অতএব, সাসপেনশনটি 18 ঘন্টার জন্য 70 ডিগ্রীতে ঝাঁকুনি দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। 10 মিনিটের জন্য 1500 গ্রাম সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, একটি সিরিঞ্জ ব্যবহার করে 0{9}}lm ফিল্টার দিয়ে ফিল্টার করে সুপারনাট্যান্টকে জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ নির্যাসটি পাতিত জলের সাথে 17 মিলিগ্রাম/মিলি মূল উদ্ভিদ উপাদানের উপর ভিত্তি করে সমন্বয় করা হয়েছিল। নির্যাসগুলি ব্যবহার না করা পর্যন্ত 1 সপ্তাহ পর্যন্ত 4 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

SPES এবং PC-SPES বোটানিকল্যাবস (Brea, Calif.) থেকে ক্যাপসুল হিসাবে প্রাপ্ত হয়েছিল। ব্যবহৃত নিষ্কাশন পদ্ধতি এই প্রস্তুতির পূর্ববর্তী গবেষণায় নিযুক্ত করা হয়েছে [8, 9, 10]। একটি ক্যাপসুলের (320 মিলিগ্রাম) বিষয়বস্তু 1 মিলি 95 শতাংশ ইথানলে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং সাসপেনশনটি 1 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রিতে ঝাঁকুনি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। 10 মিনিটের জন্য 3000 গ্রাম সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, উপরের মতো সুপারনাট্যান্টকে ফিল্টার-জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল। মূল উদ্ভিদ উপাদানের উপর ভিত্তি করে চূড়ান্ত ঘনত্ব ছিল 300 mg/ml। নির্যাসগুলি ব্যবহার না করা পর্যন্ত 1 সপ্তাহ পর্যন্ত -20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

কোষ সংস্কৃতি এবং সাইটোটক্সিসিটি পরিমাপ

NCI-H69 SCLC কোষগুলি AIM-V সিরাম-মুক্ত মাধ্যম (লাইফ টেকনোলজিস, গ্র্যান্ড আইল্যান্ড, এনওয়াই) এ সাসপেনশন হিসাবে 5 শতাংশ CO2 ধারণকারী বায়ুমণ্ডলে 37 ডিগ্রীতে বেড়েছে। ইটোপোসাইড [16] এ নির্বাচিত একটি মাল্টিড্রাগ-প্রতিরোধী সেল লাইন (H69VP) এছাড়াও AIM-V তে জন্মানো হয়েছিল এবং ইটোপোসাইড (9-ভাঁজ), ডক্সোরুবিসিন (20- ভাঁজ), এবং ভিনক্রিস্টিনের ক্রস-প্রতিরোধ দেখায়। (10-ভাঁজ) (ডেটা দেখানো হয়নি)। এই কোষগুলিতে মাদক প্রতিরোধের একাধিক প্রক্রিয়া রয়েছে, যার মধ্যে টপোইসোমারেজ II এর পরিবর্তন এবং মেমব্রেন পাম্পের প্রকাশ, MDR1 এবং MRP অন্তর্ভুক্ত। BEAS-2 স্বাভাবিক ফুসফুসের এপিথেলিয়াল কোষগুলি [22] DMEM-F12 তে 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরামের সাথে সম্পূরক হয়ে বেড়ে ওঠে।

সাইটোটক্সিসিটি পরীক্ষার জন্য, 6000 কোষ/মিলি সমন্বিত 1-মিলি সংস্কৃতিতে লগারিদমিকভাবে ক্রমবর্ধমান কোষে নির্দেশিত নির্যাস যোগ করা হয়েছিল। 4 দিন একটানা এক্সপোজারের পর, একটি Coulter Z-1 কাউন্টারে কোষ গণনা করা হয়েছিল। ট্রিপ্যান নীল দিয়ে দাগ দেওয়ার পরে হিমোসাইটোমিটার দ্বারা গণনাগুলি মাইক্রোস্কোপিকভাবে যাচাই করা হয়েছিল। সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা তিন প্রতিলিপিতে করা হয়েছিল এবং কমপক্ষে তিনবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল। IC50 মানগুলি, নির্যাসের ঘনত্ব হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছে যা 4 দিনে কোষের সংখ্যা 50 শতাংশ কমিয়েছে, দ্রাবক নিয়ন্ত্রণের তুলনায় গণনা করা হয়েছিল। সেই নির্যাসের জন্য তিনটি সেল লাইনের জন্য ANOVA দ্বারা গড় মানগুলি গণনা করা হয়েছিল এবং তুলনা করা হয়েছিল৷

কোষ মৃত্যুর assays

সাইটোটক্সিসিটির প্রক্রিয়াটি সেলুলার ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশনের গতিবিদ্যা দ্বারা তদন্ত করা হয়েছিল (বোহরিংগার-ম্যানহাইম কিট, ইন্ডিয়ানাপোলিস, ইন্ডা.)। সংক্ষেপে, 10 lM BudR ধারণকারী AIM-V মিডিয়ামে 5 শতাংশ CO2 ধারণকারী বায়ুমণ্ডলে 37 ডিগ্রিতে 5·105 কোষ/মিলি 16 ঘন্টার জন্য ধূপিত করা হয়েছিল। কোষগুলিকে 105/ml বুডআর-মুক্ত মাধ্যমে ধুয়ে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল, এবং এই কালচারের 200 লিলি ভেষজ নির্যাস দিয়ে 2·IC50 এ নির্দেশিত সময়ের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল, তারপরে ডিএনএর পরিমাণ নির্ণয়ের জন্য 100 লিটার কালচার মিডিয়াম অপসারণ করা হয়েছিল। ELISA দ্বারা টুকরা. এটি কোষ নেক্রোসিসের একটি পরিমাপ। কোষের মধ্যে ডিএনএ টুকরা, অ্যাপোপটোসিস দ্বারা উত্পন্ন, বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (BSA)/ Tween 20-এ 21 ডিগ্রিতে 30 মিনিটের জন্য সেল লাইসিসের পরে পরিমাপ করা হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, লাইসেটটি এলিসার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল।

ELISA রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে অ্যান্টি-ডিএনএ অ্যান্টিবডি (মাউস অ্যান্টি-হিউম্যান ডিএনএ মনোক্লোনাল, ক্লোন এমসিএ-33) দিয়ে লেপযুক্ত একটি গোলাকার নীচের মাইক্রোটাইটার প্লেটে সঞ্চালিত হয়েছিল। BSA-এর সাথে ব্লক করার পরে, 100 ll লেবেলযুক্ত ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্ট দ্রবণ প্রলিপ্ত কূপে যোগ করা হয়েছিল এবং তারপরে 21 ডিগ্রিতে 90 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন করা হয়েছিল। ডিএনএ 5 মিনিটের জন্য 500 ওয়াটে মাইক্রোওয়েভ বিকিরণ দ্বারা স্থির এবং বিকৃত করা হয়েছিল। মাউস অ্যান্টি-বুডআর (মাউস মনোক্লোনাল BMG 6HB) পেরোক্সিডেসের সাথে সংযুক্ত করা হয়েছিল এবং 21 ডিগ্রিতে 120 মিনিটের জন্য অন্ধকারে ইনকিউবেশনের পরে, 500 ll ঘনীভূত H2SO4 যোগ করে প্রতিক্রিয়া বন্ধ করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ রঙটি 450 এনএম-এ শোষণ দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। নিষ্কাশন-চিকিত্সা করা নমুনাগুলিকে পটভূমি হিসাবে চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণগুলির সাথে তুলনা করা হয়েছিল।

Apoptosis TUNEL বিশ্লেষণ দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। লগারিদমিকভাবে ক্রমবর্ধমান কোষগুলি 3 ঘন্টার জন্য 1·IC50 এ ভেষজ নির্যাসের সংস্পর্শে এসেছে। তারপরে তারা 1 শতাংশ BSA ধারণকারী ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে (PBS) দুবার ধুয়ে এবং 5·105 কোষ/ml এ PBS/BSA-তে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়। 500 ll কোষে, 100 ll 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড যোগ করা হয়েছিল এবং কোষগুলি 1 ঘন্টার জন্য 21 ডিগ্রিতে স্থির করা হয়েছিল। পিবিএস-এ ধোয়ার পরে, কোষগুলিকে 100 ll কোল্ড পারমিবিলাইজেশন বাফারে (0.1 শতাংশ ট্রাইটন X-100, 0.1 শতাংশ সোডিয়াম সাইট্রেট) 4 ডিগ্রিতে 2 মিনিটের জন্য পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল৷ কোষগুলি পিবিএস-এ দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরে টার্মিনাল ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওটাইড-আইডিল ট্রান্সফারেজ (টিডিটি) এবং ফ্লুরেসসিন-ডিইউটিপি (বোহরিঙ্গার-ম্যানহাইম কিট) ধারণকারী 50 লিটার টুনেল মিশ্রণে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল। 1 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রীতে অন্ধকারে ইনকিউবেশনের পরে, কোষগুলিকে প্রপিডিয়াম আয়োডাইড দিয়ে প্রতিস্থাপন করা হয়েছিল এবং ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ

লগারিদমিকভাবে ক্রমবর্ধমান কোষের সংস্কৃতি (6 মিলি) (5·105 কোষ/মিলি) 1·IC50-তে ভেষজ নির্যাস ধারণ করে একটি বায়ুমণ্ডলে 37 ডিগ্রীতে 3 ঘন্টার জন্য 5 শতাংশ CO2 ধারণ করে সেদ্ধ করা হয়েছিল। পিবিএস-এ দুবার ধোয়ার পরে, কোষের বৃক্ষগুলি রাতারাতি -70 ডিগ্রিতে হিমায়িত হয়েছিল। আরএনএকে RNeasy মিনি প্রোটোকল (কিয়াজেন, ভ্যালেন্সিয়া, ক্যালিফোর্নিয়া) দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। সাধারণত, এই পদ্ধতিতে 0.5 এলজি আরএনএ পাওয়া যায়। এই পরিমাণ আরএনএ সিডিএনএ-তে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল এবং বায়োটিন-ডিইউটিপি দিয়ে লেবেল করা হয়েছিল, এবং ফিল্টারগুলিতে অ্যাপোপটোসিস- এবং কোষ চক্র-সম্পর্কিত জিনগুলিতে বিকৃত প্রোবগুলিতে সংকর করা হয়েছিল। একটি কেমিলুমিনেসেন্ট সাবস্ট্রেট, CDP-স্টার (SuperAr-ray, Bethesda, Md.) ব্যবহার করে cDNA-তে ক্ষারীয় ফসফেটেস-স্ট্রেপ্টাভিডিন আবদ্ধ করে হাইব্রিডাইজেশন সনাক্ত করা হয়েছিল, তারপরে এক্স-রে ফিল্মের সংস্পর্শে আসে, সাধারণত 1-2 মিনিটের জন্য।

প্রতিটি ফিল্টারে নিয়ন্ত্রণ জিন লক্ষ্যগুলি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে বি-অ্যাক্টিন এবং জিএপি-ডিএইচ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে pUC18 অন্তর্ভুক্ত করে। নিম্নলিখিত কোষ চক্র- এবং অ্যাপোপটোসিস-সম্পর্কিত জিনগুলি হাইব্রিডাইজেশন লক্ষ্যমাত্রা ছিল: খারাপ, bcl-2, BCL-w, BCL-x, caspases 1–10, c-myc, E2F, fas, fas ligand, gadd45, iNOS , mdm2, NFkB, p21Waf1, p53, pig7, pig8, Rb, DR5, trail, Casper, CRADD, DAXX, IAP-1, IAP-2, NIK, TNFR2, TRAF2, TRAF3, TRAF5, এবং DR5। তীব্রতাইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের ক্ষেত্রে ফিল্টারে টেন্ডেম ডুপ্লিকেট দাগে হাইব্রিডাইজেশনের স্কোর করা হয়েছিল।

ফলাফল

আমাদের প্রাথমিক পরীক্ষাগুলি ওষুধ-সংবেদনশীল এবং ড্রাগ-প্রতিরোধী SCLC কোষগুলির পাশাপাশি সাধারণ ফুসফুসের উপকূল কোষগুলিতে চীনা ভেষজ উদ্ভিদের নির্যাসের সাইটোটক্সিসিটি পরীক্ষা করেছে। সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে, চারটি ভেষজ নির্যাস কম ঘনত্বে সাইটোটক্সিক ছিল। এই ফলাফলগুলি অন্যান্য টিউমার সেল লাইনগুলিতে SPES এবং PC-SPES-এর জন্য পাওয়াগুলির অনুরূপ [8]। প্রতিটি ক্ষেত্রে, মাল্টিড্রাগ-প্রতিরোধী কোষগুলির (H69VP) জন্য IC50 মানগুলি ড্রাগ-সংবেদনশীল কোষগুলির (H69) থেকে আলাদা ছিল না। এছাড়াও, সাধারণ ফুসফুসের এপিথেলিয়াল কোষগুলির জন্য IC50 মানগুলি টিউমার কোষের লাইনগুলির তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল।

আমরা তখন অ্যাপোপটোসিস (কোষের মধ্যে ধীরে ধীরে তৈরি হওয়া টুকরোগুলি) বা নেক্রোসিস (ক্ষতিগ্রস্ত কোষ থেকে দ্রুত গঠিত এবং মুক্ত হওয়া) এর ইঙ্গিত হিসাবে ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশনের গতিবিদ্যা ব্যবহার করে সাইটোটক্সিসিটির প্রক্রিয়াটি তদন্ত করেছি। কোষগুলি 30 মিনিট থেকে 8 ঘন্টার মধ্যে ভেষজ নির্যাসে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং তারপরে ডিএনএ খণ্ডগুলি ELISA দ্বারা সংস্কৃতি মাধ্যম এবং কোষ লাইসেট উভয় ক্ষেত্রেই অনুমান করা হয়েছিল। চিত্র 1 90 মিনিটের জন্য চারটি নির্যাসের সংস্পর্শে আসা H69 কোষগুলির জন্য প্রতিনিধি ডেটা দেখায়। তিনটি নির্যাস (SPES, PC-SPES, OLEN) দিয়ে, বেশিরভাগ ডিএনএ খণ্ড কোষের (লাইসেটস) থেকে এসেছে, যা অ্যাপোপটোসিস নির্দেশ করে। যাইহোক, GLYC এর সাথে, টুকরোগুলি ক্ষতিগ্রস্ত কোষ থেকে মাঝারিতে ছেড়ে দেওয়া হয়েছিল, যা নেক্রোসিস নির্দেশ করে। H69VPcells (ডেটা দেখানো হয়নি) দিয়ে অনুরূপ ফলাফল পাওয়া গেছে।

এই সাইটোটক্সিসিটি পরীক্ষাগুলি TUNEL অ্যাসেস দ্বারা DNA ব্রেক ইন সিটু অনুসরণ করা হয়েছিল। চিকিত্সাবিহীন নিয়ন্ত্রণের তুলনায় (চারটি পরীক্ষায় 1-3 শতাংশ অ্যাপোপটোটিক কোষ), SPES (58-85 শতাংশ), PC-SPES (63–77 শতাংশ), এবং OLEN (49–81 শতাংশ) দ্বারা চিকিত্সা করা SCLC কোষগুলি TUNEL ইতিবাচকতা দেখিয়েছিল, যখন GLYC দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলি (1-2 শতাংশ) হয়নি (চিত্র 2)। H69VPcells এর সাথে অনুরূপ ফলাফল প্রাপ্ত হয়েছিল (ডেটা দেখানো হয়নি)।

আমরা GeneArrays ব্যবহার করে ভেষজ নির্যাসের প্রতিক্রিয়া হিসাবে জিন প্রতিলিপি বিশ্লেষণ করেছি। এই অ্যারেগুলিতে কোষ চক্র এবং অ্যাপোপটোসিসের সাথে সম্পর্কিত জিনগুলি একত্রিতভাবে সাজানো হয়েছে। আমরা একই ফলাফলের সাথে এই পরীক্ষাগুলি দুবার সঞ্চালিত করেছি। চিত্র 3 ইটোপোসাইড বা এসপিইএস-এর সংস্পর্শে থাকা H69 কোষের প্রতিনিধি অ্যারায়াউটোর ডায়াগ্রাম দেখায়। H69 কোষের জন্য আমাদের ফলাফলগুলি সারণী 2-এ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে। যদিও চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণে অধ্যয়ন করা জিনের মাত্র কয়েকটি সনাক্তযোগ্য অভিব্যক্তি ছিল, প্রচলিত কেমোথেরাপিউটিক ওষুধ (ইটোপোসাইড এবং ভিনক্রিস্টিন) দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলি কোষ চক্রের সাথে জড়িত বেশ কয়েকটি জিনের জন্য শক্তিশালী সংকেত দেখিয়েছিল। নিয়ন্ত্রণ এবং অ্যাপোপটোসিস। OLEN, SPES এবং PC-SPES দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলি দুটি ওষুধের সাথে প্রাপ্তদের অনুরূপ একটি প্যাটার্ন দেখায়। সাধারণভাবে, GLYC দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলি এই ট্রান্সক্রিপশন প্যাটার্নটি দেখায়নি, এবং পরিবর্তে অ্যান্টিঅ্যাপোপ্টোসিস জিন, BCL-2 এর শক্তিশালী অভিব্যক্তি দেখায়।

আলোচনা

আমরা দুটি কারণে এই গবেষণা গ্রহণ করেছি। প্রথমত, চীনা ভেষজ ওষুধের একটি প্রাচীন ঐতিহ্য রয়েছে যা তার নিজস্ব তত্ত্ব এবং দর্শনের উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে [২], এবং আমরা পাশ্চাত্য চিকিৎসা পরিভাষায় ভেষজ প্রতিকারের প্রভাব বুঝতে শুরু করতে চেয়েছিলাম। এই ভেষজগুলি মিশ্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়, এবং যদিও তাদের পৃথক রাসায়নিক উপাদানগুলিতে ভাঙ্গার ক্ষেত্রে কিছু অগ্রগতি হয়েছে[11], আমাদের গবেষণাগুলি তাদের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছে কারণ তারা ঐতিহ্যগত অনুশীলনে ব্যবহৃত হয়। আমাদের দ্বিতীয় প্রেরণা ছিল যে অনেক ক্যান্সার রোগী প্রচলিত চিকিত্সার সাথে এই ভেষজগুলি ব্যবহার করেন [6, 23], এবং ভেষজগুলির সেলুলার প্রভাবগুলি বোঝা ক্লিনিকাল সিদ্ধান্ত নেওয়ার জন্য গুরুত্বপূর্ণ তথ্য সরবরাহ করতে পারে।

সাইটোটক্সিসিটি ডেটা (টেবিল 1) দেখায় যে চারটি ভেষজ নির্যাস প্রকৃতপক্ষে টিউমার কোষের জন্য সাইটোটক্সিক ছিল, সাধারণ ফুসফুসের এপিথেলিয়াল কোষের তুলনায় ডোজ ভিত্তিতে, কিছু টিউমার নির্দিষ্টতা এবং সম্ভবত একটি অনুকূল থেরাপিউটিক সূচক নির্দেশ করে। ড্রাগ-সংবেদনশীল এবং মাল্টিড্রাগ-প্রতিরোধী কোষের মধ্যে IC50-এর মিলগুলি নির্দেশ করে যে এই নির্যাসগুলি H69VPcells-এ প্রদর্শিত ড্রাগ প্রতিরোধের প্রক্রিয়া দ্বারা প্রভাবিত হয় না, যার মধ্যে দুটি ওষুধ পরিবহনকারী, MDR1 এবং MRP-এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন রয়েছে।

ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশনের গতিবিদ্যা দেখায় যে নির্যাস SPES, PC-SPES এবং OLEN ছিল প্রোঅ্যাপোপ্টোটিক, যখন GLYC ছিল প্রন ইরোটিক (চিত্র 1)। এটি TUNEL স্টেনিং ইন সিটু (চিত্র 2) দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। বেশিরভাগ প্রচলিত কেমোথেরাপিউটিক ওষুধগুলি হল প্রোপোপটোটিক [৩], এবং ওষুধের প্রতিক্রিয়া হিসাবে অ্যাপোপটোটিক এবং কোষ চক্র নিয়ন্ত্রক জিনের একটি গ্রুপ কোষগুলিতে আপগ্রেড করা হয় [২৪]। আমরা দেখতে পেয়েছি যে ভেষজ নির্যাসের তিনটি প্রো অ্যাপের প্রতিক্রিয়ায় প্রকাশিত কিছু জিনের প্রকাশের ধরণটি প্রচলিত কেমোথেরাপিউটিক ওষুধের সংস্পর্শে আসার পরে এই কোষগুলিতে পর্যবেক্ষণ করা অনুরূপ ছিল (চিত্র 3, টেবিল 2)। শুধুমাত্র GLYC এর প্রতিক্রিয়া ভিন্ন বলে মনে হয়েছিল, অন্তত এই পরীক্ষাগুলিতে বিশ্লেষণ করা সময়-বিন্দুতে। মজার বিষয় হল, GLYC হল PC SPES-এর অংশ, যা ছিল প্রোপোপটোটিক, যখন GLYC একা ছিল না। সম্ভবত PC-SPES-এর অন্যান্য উপাদানগুলি এর proapoptotic কার্যকলাপের জন্য দায়ী। যদিও এই ফলাফলগুলি দেখায় না যে কীভাবে ভেষজ কোষগুলি ক্ষতিগ্রস্থ হয়, তারা পরামর্শ দেয় যে H69 কোষগুলি আণবিক (ট্রান্সক্রিপশন) এবং সেলুলার (অ্যাপোপ্টোসিস) স্তরে ক্ষতির প্রতিক্রিয়া দেয় কেমোথেরাপিতে তাদের প্রতিক্রিয়ার মতো।

আমাদের অধ্যয়নগুলি SCLC, বিশেষত ড্রাগ-প্রতিরোধী রোগের চিকিত্সায় এই চীনা ভেষজ নির্যাসের সম্ভাব্য উপযোগিতা নির্দেশ করে।

স্বীকৃতিআমরা সহকর্মী সাইটোমেট্রির সাথে অমূল্য সহায়তার জন্য এল. ব্রাউনকে এবং আণবিক জীববিজ্ঞান প্রোটোকলগুলিতে সহায়তার জন্য আর. লিঙ্গম্যানকে ধন্যবাদ জানাই৷ BEAS-2 কোষগুলি উদারভাবে সরবরাহ করেছিলেন ড. I. Laird-Offringa, University of Southern California, Norris Cancer Center. SPES এবং PC-SPES ছিল ডাঃ এস চেন, নিউ ইয়র্ক মেডিকেল কলেজের উপহার। এই গবেষণাটি প্রিটজকার ফ্যামিলি ফাউন্ডেশন এবং WM KeckFoundation দ্বারা সমর্থিত ছিল।

একটি চাইনিজ ভেষজ ওষুধ হিসাবে সিস্তানচে রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা উন্নত করতে পারে এবং ক্যান্সারের বিরুদ্ধে লড়াই করতে পারে, আরও জানতে এখানে ক্লিক করুন

তথ্যসূত্র

1. Boik J (1996) ক্যান্সার এবং প্রাকৃতিক ওষুধ: মৌলিক বিজ্ঞান এবং ক্লিনিকাল গবেষণার একটি পাঠ্যপুস্তক। ওরেগন মেডিকেল প্রেস, প্রিন্সটন, পি 221

2. চ্যান কে (1995) ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধে অগ্রগতি। ট্রেন্ডস ফার্মাকোল সাই 16:182–187

3. চু ই, ডেভিটা ভি জুনিয়র (2001) ক্যান্সার ব্যবস্থাপনার নীতি: কেমোথেরাপি। ইন: ডেভিটা ভি জুনিয়র, হেলম্যান এস, রোজেনবার্গ এসএ (এডিএস) ক্যান্সার: অনকোলজির নীতি ও অনুশীলন। লিপিনকট উইলিয়ামস এবং উইলকিন্স, ফিলাডেলফিয়া, পৃষ্ঠা 289–306

4. De la Taille A, Hayek OR, Buttyan R, Bagiella E, Burchart M, Katz AE (1999) প্রোস্টেট ক্যান্সারের উপর একটি ফাইটোথেরাপিউটিক এজেন্ট, PC-SPES এর প্রভাব। BJU Int 84:845–850

5. DiPaola RS, Zhang H, Lambert G, Meeker R, Licitra E, Rafi M, Spaulding H, Goodin S, Toledano M, Gallo M (1998) প্রোস্টেটে ইস্ট্রোজেনিক ভেষজ সংমিশ্রণের (PC-SPES) ক্লিনিক্যাল এবং বায়োলজিক কার্যকলাপ ক্যান্সার New Engl J Med 339:785–791

6. আইজেনবার্গ ডিএম, ডেভিস আরবি, এটনার এসএল (1998) মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে বিকল্প ওষুধ ব্যবহারের প্রবণতা: 1990-1997: একটি ফলো-আপ জাতীয় সমীক্ষার ফলাফল। JAMA 280:1569-1575

7. Fenwick GR, Lutomski J, Nieman C (1990) Glycyrrhiza glabra: রচনা, ব্যবহার এবং বিশ্লেষণ। খাদ্য রসায়ন 38:119-143

8. Halicka HD, Ardelt B, Juan G, Mittleman A, Chen S, Traganos F, Darzynkiewicz Z (1997) চীনা ভেষজ প্রস্তুতি PC-SPES এর নির্যাস দ্বারা প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস এবং কোষ চক্রের প্রভাব। ইন্টি জে অনকল 11:437-448

9. Hsieh T, Chen SS, Wang X, Wu J (1997) চীনা ভেষজ প্রস্তুতি PC-SPES-এর ইথানোলিক নির্যাস দ্বারা অ্যান্ড্রোজেন-প্রতিক্রিয়াশীল মানব প্রোস্টেট LNCaPcells-এ অ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টর এবং প্রোস্টেট-নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেন এক্সপ্রেশনের নিয়ন্ত্রণ। Biochem Mol Biol Int 42:535–544

10. Hsieh T, Ng C, Chang, C, Chen SS, Mittleman, A, Wu J (1998) চীনা ভেষজ সম্পূরকের ইথানোলিক নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা করা Mutu কোষে অ্যাপোপটোসিস এবং BCL-6 এর ডাউন-নিয়ন্ত্রণ আনয়ন PC-SPES. Int J Oncol 13:1199-1202

11. হুয়াং কেসি (1999) চীনা ভেষজগুলির ফার্মাকোলজি, 2^ndedn সিআরসি প্রেস, বোকা রাটন

12. কালেমকেরিয়ান জিপি, ওয়ার্ডেন এফপি (2000) SCLC-তে থেরাপিউটিক অগ্রগতি। বিশেষজ্ঞের মতামত ইনভেস্ট ড্রাগস 9:65-79

13. কিমুরা ওয়াই, ওকুদা এইচ, ইয়োকিও কে, মাতসুশিতা এন (1997) ইন্টারলেউকিন 1বি-এবং টিএনএফ-প্ররোচিত টিস্যু প্লাজমিনোজেন অ্যাক্টিভেটর এবং প্লাজমিনোজেন অ্যাক্টিভেটর ইনহিবিটর থেকে বিচ্ছিন্ন বাইক্যালিনের প্রভাবগুলি কোষের সংস্কৃতিতে শেষ হয়। . Phytother Res 11:363–367

14. লিন সি (1996) ক্যান্সারের ব্যথা উপশম করতে কেমোথেরাপি এবং ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধের সম্মিলিত ব্যবহারের উপর একটি পর্যবেক্ষণ। জে ট্রেডিট চিন মেড 16:267–269

15. ম্যাটার জে, ভলম এম (1995) মানুষের ফুসফুসের ক্যান্সারে প্রতিরোধের প্রক্রিয়া। আক্রমণ মেটাস্টেসিস 15:81-94

16. মিনাটো কে, কানজাওয়া এফ, নিশিও কে, নাকাগাওয়া কে, ফুজিওয়ারা ওয়াই, সাইজো এন (1990) একটি ইটোপোসাইড-প্রতিরোধী মানব ছোট কোষের ফুসফুসের ক্যান্সার লাইনের বৈশিষ্ট্য। ক্যান্সার কেমোদার ফার্মাকোল 26:313–327

17. Moyad MA, Pienta KJ, Montie JE (1999) PC-SPES এর ব্যবহার, প্রোস্টেট ক্যান্সারের জন্য একটি বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ সম্পূরক, হরমোন-নিষ্পাপ রোগে আক্রান্ত রোগীর মধ্যে। ইউরোলজি 54:319-324

18. নিশিও কে, নাকামুরা টি, কোহ ওয়াই, সুজুকি এইচ, ফুকুমোটো এন, সাইজো এন (1999) ফুসফুসের ক্যান্সারে ড্রাগ রেজিস্ট্যান্স। কার ওপিন অনকল 11:109-115

19. পাস এইচ, মিচেল জেবি, জনসন ডিএইচ, তুরিসি এটি, মিন্না জে (2000) ফুসফুসের ক্যান্সার: নীতি এবং অনুশীলন। লিপিনকট, ফিলাডেলফিয়া

20. Pfeifer BL, Pirani JF, Hamann SR, Klippel KF (2000) PC SPES: হরমোন-অবাধ্য প্রোস্টেট ক্যান্সারের চিকিত্সার জন্য একটি খাদ্যতালিকাগত সম্পূরক। BJU Int 85:481–485