ইচিনাকোসাইড কোষের বিস্তারকে উদ্দীপিত করে এবং ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর- 1 এক্সপ্রেশনের আপ-নিয়ন্ত্রণ দ্বারা অন্ত্রের এপিথেলিয়াল মোড-কে কোষে কোষের অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধ করে

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

ইয়ামিন জিয়া, কিয়ুনং গুয়ান, ইউহাই গুও এবং কাইগান ডু

বিমূর্ত

Cistanche deserticola MA(C. deserticola) ইরিটেবল বাওয়েল সিনড্রোম বা কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসার জন্য ভেষজ ওষুধে রেচক ভেষজ হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে এবংcistanche থেকে echinacoside(ECH) এই ভেষজটির অন্যতম প্রধান বায়োঅ্যাকটিভ উপাদান। আমাদের লক্ষ্য ছিল অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষের বৃদ্ধি এবং মৃত্যুর উপর ECH এর প্রভাব তদন্ত করা। MODE-K, একটি অন্ত্রের এপিথেলিয়াল সেল লাইন, অন্ত্রের একটি ইন ভিট্রো মডেল হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। কোষের বিস্তার মিথাইল থিয়াজোল টেট্রাজোলিয়াম (এমটিটি) অ্যাস দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। অ্যানেক্সিন-ভি স্টেনিং দিয়ে সেল অ্যাপোপটোসিস নির্ধারণ করা হয়েছিল। এখানে আমরা দেখিয়েছি যে সংস্কৃতিযুক্ত MODE-K কোষগুলিতে, ECH উল্লেখযোগ্যভাবে কোষের বিস্তারকে উদ্দীপিত করে এবং H2O2 বা প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের মিশ্রণের উপস্থিতিতে কোষের অ্যাপোপটোসিস হ্রাস করে, বৃদ্ধির ফ্যাক্টর (TGF) রূপান্তরিত করে- 1 অভিব্যক্তি একটি ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে আপ-নিয়ন্ত্রিত ছিল। TGF- 1 এক্সপ্রেশনের নকডাউন ECH-এর প্রলিফারেটিভ এবং সাইটোপ্রোটেক্টিভ উভয় ক্রিয়াকলাপকে ব্যাহত করেছে, যা অ্যান্টি-TGF- 1 অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে TGF- 1 কার্যকলাপের নিরপেক্ষকরণের মাধ্যমে আরও নিশ্চিত করা হয়েছিল। এই তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে ভেষজ C. deserticola এবং অন্যান্যগুলির জৈব সক্রিয় উপাদানগুলির মধ্যে একটি হিসাবে ECH অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষের বিস্তারকে উদ্দীপিত করে এবং TGF--এর আপ-নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে কোষের মৃত্যু রোধ করে মিউকোসাল টিস্যু মেরামতের উন্নতি করতে পারে।

মূলশব্দ: Cistanche deserticola, অন্ত্রের এপিথেলিয়াম, কোষের বিস্তার, কোষ অ্যাপোপটোসিস, ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর (TGF)-

ভূমিকা

Cistanche deserticola MA(C. deserticola) সাধারণত চীনা ভেষজ ওষুধে Rou Cong Rong নামে পরিচিত এবং এটির চিকিৎসা ব্যবহারের কারণে এটি চীনে একটি নতুন ফসলে পরিণত হয়েছে (1)। দীর্ঘস্থায়ী কোষ্ঠকাঠিন্য (2, 3) সহ অনেক স্বাস্থ্য সমস্যার চিকিৎসায় এর ক্লিনিকাল সুবিধার রিপোর্ট করা হয়েছে এবং এর উপকারী প্রভাবগুলি অন্ত্রে এর রেচক কার্যকলাপের সাথে যুক্ত; এটি মলের আর্দ্রতা বাড়ায়, রোগীদের (4, 5) এবং সেইসাথে প্রাণীর মডেলগুলিতে (6, 7) অন্ত্রের গতি বাড়ায়। আমাদের সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে C. deserticola-এর জলের নির্যাসের মৌখিক প্রয়োগ কোলোরেক্টাল ক্যান্সার-প্রবণ ইঁদুরের অন্ত্রে প্রদাহজনক হাইপারপ্লাসিয়ার সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে (8)।

cistanche থেকে Echinacoside (ECH) is a major component of phenylethanoid glycosides (PhG) (>C. deserticola (9) থেকে বিচ্ছিন্ন মোট PhG-এর 50 শতাংশ এবং C. deserticola-এর মান নিয়ন্ত্রণের জন্য বায়োমার্কার হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছে-এর মধ্যে রেচক ওষুধ Ronggui Tongbian Capsule (10) বা চাষকৃত C. deserticola-এর উৎপাদন মান নিয়ন্ত্রণের জন্য (11)। পারকিনসন্স রোগের প্রাণীর মডেল (12, 13) এবং ফুসফুসের আঘাতের একটি মডেল (14) এবং সংস্কৃতিযুক্ত ফিওক্রোমাসাইটোমা কোষে (PC12) (15, 16) উভয় ক্ষেত্রেই ECH সাইটোপ্রোটেক্টিভ প্রমাণিত হয়েছে; এবং এটি মানব ফাইব্রোব্লাস্টিক কোষের সেলুলার বিভাজন (MRC-5) (17) উন্নত করতে দেখানো হয়েছে। এই সমীক্ষায়, C. deserticola-এর একটি প্রধান জৈব সক্রিয় উপাদান হিসাবে ECH-এর প্রভাব কোষের বিস্তার এবং সংস্কৃত অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষে বেঁচে থাকার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল যাতে C. deserticola-এর ফার্মাকোলজিক্যাল অ্যাকশন বোঝার জন্য- অন্ত্রের রোগের চিকিৎসায় ভেষজ ওষুধ রয়েছে। .

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

সেল সংস্কৃতি

MODE-K হল C3H/HeJ ইঁদুর (18) থেকে প্রাপ্ত একটি অন্ত্রের এপিথেলিয়াল সেল লাইন যা দয়া করে ডাঃ থিওডোর স্টেইনার (ভ্যাঙ্কুভার কোস্টাল হেলথ রিসার্চ ইনস্টিটিউট, ভ্যাঙ্কুভার, কানাডা) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। MODE-K কোষগুলি Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগলস মিডিয়াম (DMEM)-তে সংষ্কৃত করা হয়েছিল, বায়ুমণ্ডলে 5 শতাংশ CO2-এর নীচে 37 ডিগ্রিতে 10 শতাংশ ভ্রূণ বোভাইন সিরাম (FBS) দ্বারা পরিপূরক।

cistanche থেকে echinacoside (ECH) প্রস্তুতি

ECH (cistanche থেকে echinacoside) বাণিজ্যিক সি. টিউবুলোসা নির্যাস (70 শতাংশের চেয়ে বেশি বা সমান ECH, Tianlife TLCT-E70; Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd., Hangzhou, China) থেকে বারবার ইথানল নিষ্কাশনের মাধ্যমে আরও শুদ্ধ করা হয়েছিল, তারপরে বায়ু- একটি রাসায়নিক ধোঁয়া হুড মধ্যে শুকানো. অবশিষ্ট পদার্থটি আরও লাইওফিলাইজেশন দ্বারা শুকানো হয়েছিল। শেষ পণ্যে ECH উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (চিত্র 1) দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল।

ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর (TGF)- 1 এক্সপ্রেশনের নক-ডাউন

MODE-K কোষে TGF- 1 এক্সপ্রেশনটি বিশেষভাবে TGF- 1 ট্রান্সক্রিপ্ট (19) এর বিরুদ্ধে shRNA এর স্থিতিশীল অভিব্যক্তি দ্বারা নক-ডাউন হয়েছিল। সংক্ষেপে, মাউস TGF- 1 mRNA (5′-AAC CAA GGA GAC GGA ATA CAG-3′) এবং অ-নির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণ (scrambled) (5′-AAT CGC) লক্ষ্য করে shRNA তৈরির জন্য অলিগোনিউক্লিওটাইড ক্রম ATA GCG TAT GCC GTT-3′) পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছিল (19, 20), এবং সেগুলি ইন্টিগ্রেটেড ডিএনএ টেকনোলজিস ইনক (কোরালভিল, আইএ, ইউএসএ) দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছিল। প্রতিটি ক্রম একটি pHEX-siRNA ভেক্টর (21) এর সাথে সংযুক্ত ছিল। প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসরণ করে ভেক্টরগুলিকে Lipofectamine2000 (Invitrogen-Gibco, Carlsbad, CA, USA) ব্যবহার করে MODE-K কোষে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল। অ্যান্টি-টিজিএফ- 1 shRNA-ট্রান্সফেক্টেড (MODE-Ktgfb) এবং স্ক্র্যাম্বলড shRNA-ট্রান্সফেক্টড (MODE-Kscr) কোষ উভয়ই জিওসিন (500 ug/mL পর্যন্ত) (ইনভিট্রোজেন-গিবকো) এর উপস্থিতিতে জন্মেছিল এবং নির্বাচিত হয়েছিল গ্রীন ফ্লুরোসেন্স প্রোটিন (GFP) এর জন্য ফ্লো সাইটোমেট্রি ব্যবহার করে সেল সাজানোর মাধ্যমে। 95 শতাংশেরও বেশি স্থানান্তরিত কোষ ফ্লো সাইটোমেট্রি বা মাইক্রোস্কোপিতে শক্তিশালী সবুজ প্রতিপ্রভ দেখায়।

মিথাইলথিয়াজল টেট্রাজোলিয়াম (এমটিটি) অ্যাস

MTT অ্যাস সংস্কৃতিতে কোষের বিস্তার বা কার্যকারিতা পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। কূপ মাইক্রোপ্লেটে প্রতি কূপ 2500 হারে কূপ বপন করা হয়েছিল, এবং প্রতিটি অবস্থা অন্তত চারগুণে পরীক্ষা করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, 10 μL 0.5 mg/ mL এর 3-(4,5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-yl)-2,5-ডিফেনাইলটেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড (MTT; সিগমা- Aldrich Canada, Oakville, ON, Canada) প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল এবং 4 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল। কার্যকরী কোষে ফর্মাজান স্ফটিকগুলি তখন ডাইমিথাইল সালফক্সাইডের 100 μL/কূপে দ্রবীভূত হয়েছিল (DMSO, সিগমা-অলড্রিচ কানাডা)। ELx808 আল্ট্রা মাইক্রোপ্লেট রিডার (BioTek, Winooski, VT, USA) ব্যবহার করে 560 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে প্রতিটি কূপের রঙের শোষণকে শোষণ ইউনিট (AU) হিসাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। ড্রাগ-চিকিত্সাহীন নিয়ন্ত্রণের বিরুদ্ধে ওষুধ-চিকিত্সা সংস্কৃতিতে কোষের বিস্তারের পরিবর্তনের শতাংশ নিম্নরূপ গণনা করা হয়েছিল: শতাংশ=(ড্রাগ-চিকিত্সা − নিয়ন্ত্রণ) / নিয়ন্ত্রণ × 100 শতাংশ। বৃদ্ধির হার নিম্নরূপ গণনা করা হয়েছিল: বৃদ্ধির হার (AU/দিন)=(AUend − AUbegin) / সময় (দিন), যেখানে সময় পরীক্ষার সময়কে প্রতিনিধিত্ব করে, AUend পরীক্ষার শেষে শোষণ ইউনিটগুলিকে প্রতিনিধিত্ব করে , এবং AU শুরু পরীক্ষার শুরুতে শোষণ ইউনিটের প্রতিনিধিত্ব করে।

ফ্লুরোসেন্স-অ্যাক্টিভেটেড সেল বাছাই (FACS) অ্যাপোপটোসিসের বিশ্লেষণ

অ্যানেক্সিন-ভি–ফাইকোয়েরিথ্রিন (অ্যানেক্সিন-ভি-পিই) এবং 7-অ্যামিনো-অ্যাক্টিনোমাইসিন ডি (7-এএডি) স্টেনিংয়ের সাথে এফএসিএস বিশ্লেষণ সেল অ্যাপোপটোসিস নির্ধারণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল (অ্যানেক্সিন-ভি পজিটিভ: প্রারম্ভিক অ্যাপোপটোসিস ; 7-AAD: দেরী apoptosis/necrotic) প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসরণ করে (BD Biosciences, San Jose, CA, USA)। এইভাবে, FACS গ্রাফে, কার্যকর কোষগুলি নীচের বাম চতুর্ভুজায় ছিল, উপরের বাম চতুর্ভুজটির দেরিতে অ্যাপোপটোটিক কোষগুলি (7-শুধুমাত্র AAD পজিটিভ), উপরের ডান চতুর্ভুজে অ্যাপোপটোটিক কোষগুলি (উভয় অ্যানেক্সিন-ভি এবং {{) 10}}এএডি পজিটিভ), এবং নীচের ডান চতুর্ভুজায় প্রাথমিক অ্যাপোপটোটিক কোষ (শুধু অ্যানেক্সিন-ভি পজিটিভ)। সংক্ষেপে, চিকিত্সার পরে, কোষগুলিকে ট্রিপসিন-ইডিটিএ দ্রবণ (সিগমা অ্যালড্রিচ কানাডা) দিয়ে সংক্ষিপ্ত ইনকিউবেশনের মাধ্যমে মুক্তি দেওয়া হয়েছিল এবং তারপরে 15 মিনিটের জন্য 1 × বাইন্ডিং বাফারে অ্যানেক্সিন-ভি-পিই দিয়ে ইনকিউবেশন করা হয়েছিল। সেগুলি পিবিএস দিয়ে ধোয়ার পরে, কোষগুলি 7-এএডি দিয়ে দাগযুক্ত হয়েছিল৷ অ্যাপোপটোটিক কোষের ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা ফ্লো সাইটোমেট্রি ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং CELLQUEST (BD Biosciences) বা FlowJo (Tree Star, Inc., Ashland, OR, USA) সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ব্যাকগ্রাউন্ড কন্ট্রোলের তুলনায় বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

আধা-মাত্রাগত বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন-পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (RT-PCR)

TGF{{0}} এর mRNA স্তরগুলি RT-PCR কিটগুলি (ইনভিট্রোজেন, কার্লসবাদ, CA, USA) ব্যবহার করে অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে গ্লিসারালডিহাইড-3- ফসফেট ডিহাইড্রোজেনেস (GAPDH) এর তুলনায় আধা-পরিমাণগতভাবে নির্ধারিত হয়েছিল ) পূর্বে বর্ণিত হিসাবে (19)। একই সিডিএনএ প্রস্তুতিতে উভয় TGF- 1 এবং GAPDH ট্রান্সক্রিপ্ট PCR দ্বারা 1 মিনিটের জন্য 94 ডিগ্রির 35টি চক্র, 1 মিনিট এবং 15 সেকেন্ডের জন্য 57 ডিগ্রি এবং প্রাথমিকের পরে 1 মিনিট এবং 30 সেকেন্ডের জন্য 72 ডিগ্রি দ্বারা প্রসারিত হয়েছিল। 1 মিনিটের জন্য 94 ডিগ্রীতে বিকৃতকরণের ধাপ। 10 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রিতে একটি চূড়ান্ত এক্সটেনশন ধাপ যোগ করা হয়েছে। TGF- 1 এবং GAPDH-এর জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার জোড়া পূর্ববর্তী রিপোর্ট (19) (mTGF- 1 থেকে নেওয়া হয়েছে: অর্থ, 5′-TAC TAT GCT AAA GAG GTC ACC CGC, এবং অ্যান্টি-সেন্স, 5 ′- CTG TAT TCC GTC TCC TTG GTT CAG; mGAPDH: অর্থ, 5′-ATC ACT GCC ACC CAG AAG ACT G, এবং অ্যান্টি-সেন্স, 5′-CCC TGT TGC TGT AGC CGT ATT C)। ফলস্বরূপ পিসিআর পণ্য (25 μL) ট্রিস-অ্যাসিটেট-ইডিটিএ (TAE) বাফারে 0.5 ug/mL ইথিডিয়াম ব্রোমাইড ধারণকারী একটি 1 শতাংশ অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরসিসের শিকার হয়েছিল এবং UV আলোর অধীনে কল্পনা করা হয়েছিল। TGF- 1-এর অভিব্যক্তি স্তরগুলি GAPDH-এর তুলনায় অর্ধ-পরিমাণগতভাবে ছিল৷

পশ্চিম ফোঁটার

TGF- 1 এর সেলুলার স্তরগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল (19)। ব্লটে TGF- 1 প্রোটিন ব্যান্ডগুলিকে মনোক্লোনাল অ্যান্টি– TGF- 1 (A75-3) (BD বায়োসায়েন্সেস) দিয়ে চিহ্নিত করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনায় লোড করা প্রোটিনের নিশ্চিতকরণের জন্য অ্যান্টি-অ্যাক্টিন আইজিজি (সিগমা-অলড্রিচ কানাডা) ব্যবহার করে একই দাগটি পুনরায় পরীক্ষা করা হয়েছিল।

এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) কালচার সুপারন্যাট্যান্টে নিঃসৃত TGF- 1 এর মাত্রা ELISA দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। MODE-K কোষগুলি (1.8 × 105 কোষ/0.5 মিলি ডিএমইএম মাধ্যমের ভাল) 24- ট্রিপ্লিকেটের কূপ প্লেটগুলি রাতারাতি বৃদ্ধি পায়, তারপরে ইসিএইচের অনুপস্থিতি বা উপস্থিতিতে ইনকিউবেশন হয়(cistanche থেকে echinacoside). 24 ঘন্টা চিকিত্সার পরে কালচার সুপারনাট্যান্টগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং TGF- 1 প্রকাশের পরিমাণ নির্ণয় করা হয়েছিল TGF 1 Emax® ImmunoAssay সিস্টেম ব্যবহার করে নির্মাতার প্রোটোকল (Promega, Madison, WI, USA) অনুসরণ করে।

পরিসংখ্যানিক বিশ্লেষণ

একমুখী বা দ্বিমুখী বিশ্লেষণের ভিন্নতা (ANOVA) গোষ্ঠীর মধ্যে তুলনা করার জন্য উপযুক্ত হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল। পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য প্রতিটি গবেষণায় 3 থেকে 4টি পৃথক পরীক্ষা থেকে ডেটা সংগ্রহ করা হয়েছিল। 0.05 এর চেয়ে কম বা সমান একটি P-মান তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল৷

ফলাফল

MODE-K কোষ সংস্কৃতিতে কোষের বিস্তারের উদ্দীপনা

কোষের বিস্তার টিস্যু মেরামতের জন্য অপরিহার্য। ECH এর প্রভাব(cistanche থেকে echinacoside)কোষের বিস্তারের উপর সংস্কৃতিযুক্ত MODE-K কোষগুলিতে পরীক্ষা করা হয়েছিল। চিত্র 2A-তে দেখানো হয়েছে, ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে MTT অ্যাস ব্যবহার করে কোষের কার্যক্ষমতা বৃদ্ধির দ্বারা পরিমাপ করা ECH উদ্দীপিত কোষের বিস্তারের সংযোজন। ওষুধ-চিকিত্সাহীন সংস্কৃতির কোষের সংখ্যার তুলনায়, ECH-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে কোষের সংখ্যা 25.6 শতাংশ ± 14.82 শতাংশ বেড়েছে যার 6.26 ug/mL ECH, 33.6 শতাংশ ± 14৷{14}} শতাংশ 25। ECH এর ug/mL, 64.4 শতাংশ ± 9। 48-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে ECH এর mL (P < 0৷{46}}{{50}}01)।="" এই="" পর্যবেক্ষণটি="" আরও="" নিশ্চিত="" করার="" জন্য,="" একটি="" {{30}}="" দিনের="" সময়ের="" মধ্যে="" mode-k="" কোষের="" বৃদ্ধি="" বক্ররেখার="" উপর="" ech-এর="" প্রভাব="" পরীক্ষা="" করা="" হয়েছিল।="" যেমন="" চিত্র="" 2b-তে="" দেখানো="" হয়েছে,="" ech-এর="" অপ্টিমাইজ="" করা="" 10="" ug/ml="" যোগ="" করার="" ফলে="" ইনকিউবেশনের="" সময়="" পরবর্তী="" কার্যকরী="" কোষের="" সংখ্যা="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" বৃদ্ধি="" পায়="" যা="" ওষুধ-চিকিত্সাহীন="" সংস্কৃতির="" তুলনায়="" (একটি="" বেসাল="" নিয়ন্ত্রণ),="" দ্বারা="" নির্দেশিত="" ech="" চিকিৎসার="" শুরুতে="" 0.3{{70}}="" ±="" 0.02="" থেকে="" ech="" সহ="" সংস্কৃতির="" জন্য="" au="" বৃদ্ধি="" (0-টাইম="" পয়েন্ট)="" থেকে="" ইনকিউবেশনের="" 2="" দিন="" পরে="" 1.49="" ±="" 0.08="" এবং="" ইনকিউবেশনের="" 4="" দিন="" পরে="" 2.20="" ±="" 0.11,="" যেখানে="" ওষুধ-চিকিত্সা="" না="" করা="" সংস্কৃতির="" জন্য="" (শুধুমাত্র="" মাঝারি)="" বৃদ্ধি="" ছিল="" 0.24="" ±="" 0.01="" থেকে="" শুরুতে="" 1.22="" ±="" 0.12="" এবং="" .22="" ±="" 0.12="" পরে="" .281="" দিন।="" 4="" দিন="" পর="" (মাঝারি="" বনাম="" ech,="" p="">< 0.0001)।="" এই="" দুটি="" সংস্কৃতির="" বৃদ্ধির="" হার,="" বৃদ্ধির="" বক্ররেখার="" (চিত্র="" 2b)="" উপর="" ভিত্তি="" করে="" গণনা="" করা="" হয়েছে,="" ইঙ্গিত="" দেয়="" যে="" ech="" উভয়="" দিনেই="" সংস্কৃতিতে="" বৃদ্ধির="" হারকে="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" বৃদ্ধি="" করেছে="" (ech="" চিকিত্সা="" করা="" সংস্কৃতিতে="" 0.56="" বনাম="" ওষুধ-চিকিত্সা="" নিয়ন্ত্রণে="" 0.35)="" এবং="" দিন="" 3="" (ইসিএইচ-চিকিত্সা="" সংস্কৃতিতে="" 0.43="" বনাম="" ওষুধ-চিকিত্সা="" নিয়ন্ত্রণে="" 0.22)="" (চিত্র="" 2c)।="" একসাথে="" নেওয়া,="" এই="" তথ্যগুলি="" নির্দেশ="" করে="" যে="" ech="" সংস্কৃতিযুক্ত="" অন্ত্রের="" এপিথেলিয়াল="" কোষগুলিতে="" কোষের="" বিস্তারকে="" উদ্দীপিত="">

চিত্র 2. ECH দ্বারা সংস্কৃত অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষে কোষের বৃদ্ধির উদ্দীপনা। MODE-K কোষগুলি (2,500 কোষ/কূপ) রাতারাতি 96-কূপ প্লেটে বীজ করা হয়েছিল, তারপরে ECH উপস্থিতি বা অনুপস্থিতিতে ইনকিউবেশন হয়৷ সংস্কৃতিতে কার্যকর কোষের সংখ্যা MTT অ্যাস দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। ক) সংস্কৃতিগুলিকে 48 ঘন্টার জন্য ECH এর বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল। ECH-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে কোষের সংখ্যা বৃদ্ধি (শতাংশ) একটি বেসাল রেফারেন্স হিসাবে ননড্রাগ-চিকিত্সা সংস্কৃতির উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়েছিল। P < 0.0001="" (একমুখী="" anova)।="" খ)="" সংস্কৃতিগুলিকে="" 4="" দিনের="" জন্য="" 10="" ug/ml="" ech="" দিয়ে="" চিকিত্সা="" করা="" হয়েছিল।="" ech="" চিকিত্সা="" বনাম="" ননড্রাগ-চিকিত্সা="" সংস্কৃতির="" বৃদ্ধির="" বক্ররেখা="" (শুধুমাত্র="" মাঝারি)="" এমটিটি="" পরীক্ষায়="" 560="" এনএম="" এ="" শোষণ="" ইউনিট="" (au)="" দ্বারা="" নির্ধারিত="" হয়েছিল।="" p="">< 0.0001="" (মাঝারি="" বনাম="" ech,="" দ্বিমুখী="" আনোভা)।="" ডেটা="" স্বাধীন="" পরীক্ষার="" গড়="" ±="" স্ট্যান্ডার্ড="" ডেরিভেশন="" (sd)="" হিসাবে="" উপস্থাপিত="" হয়।="" গ)="" বৃদ্ধির="" হার="" (au="" পরিবর্তন/দিন)="" বৃদ্ধির="" উপর="" ভিত্তি="" করে="" গণনা="" করা="">e, প্রতিটি দিনের গড় সংখ্যা।

অ্যাপোপটোসিস থেকে MODE-K কোষগুলির সুরক্ষা

অ্যাপোপটোসিস থেকে কোষকে রক্ষা করা আরও টিস্যু ক্ষতি প্রতিরোধ করার একটি প্রক্রিয়া। ECH এর সাইটোপ্রোটেকটিভ কার্যকলাপ(cistanche থেকে echinacoside)হাইড্রোজেন পারক্সাইড (H2O2) বা প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন মিশ্রণ (TNF- এবং IFN-) দিয়ে উদ্দীপিত কালচারড MODE-K কোষে পরীক্ষা করা হয়েছিল। H2O2 হল একটি প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি যা অক্সিডেটিভ বিপাক দ্বারা উত্পন্ন হয় এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের একটি দৃশ্যের প্রতিনিধিত্ব করে, অন্যদিকে TNF- এবং IFN- হল সক্রিয় ইমিউন কোষ দ্বারা উত্পাদিত বিশিষ্ট সাইটোকাইন যা ইমিউন-মধ্যস্থ প্রদাহের অধীনে পরিস্থিতি প্রতিফলিত করে। চিত্র 3-তে যেমন দেখানো হয়েছে, ECH (50 ug/mL) এর সংযোজন H2O2 এর সাথে চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে এর বেসাল স্তর সহ অ্যাপোপটোসিসকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, যা 5.3 এর বেসাল স্তর থেকে অ্যাপোপটোসিস হ্রাস দ্বারা প্রমাণিত হয়েছে। }} শতাংশ ± 1.24 শতাংশ ননড্রাগ-চিকিত্সা সংস্কৃতিতে 3.76 শতাংশ ± 1৷{51}}ইসিএইচ চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 1 শতাংশ, 26.93 শতাংশ ± 1 থেকে৷{27}} ননড্রাগ-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 14.08 শতাংশ ± 14.08 শতাংশ H2O2 এর 0.3 μM এর উপস্থিতিতে ECH-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 1.30 শতাংশ এবং ড্রাগ-চিকিত্সাহীন সংস্কৃতিতে 38.90 শতাংশ ± 1.76 শতাংশ থেকে 19.88 শতাংশ ± 1.02 শতাংশ পর্যন্ত ECH চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 0.6 μM এর H2O200P উপস্থিতিতে , মাঝারি/ননড্রাগ-চিকিত্সা বনাম ECH-চিকিত্সা করা)। সাইটোকাইন মিশ্রণ (চিত্র 4) দ্বারা উদ্দীপিত সংস্কৃতিতে ECH এর অনুরূপ সাইটোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব দেখা গেছে; ECH (মাঝারি/ননড্রাগ-ট্রিটেড কন্ট্রোল) যোগ না করে সংস্কৃতিতে অ্যাপোপটোসিস (51.5 শতাংশ ± 6.30 শতাংশ) ইসিএইচ-চিকিত্সা করা সংস্কৃতির (পি=0.0204) তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (38.50 শতাংশ ± 5.60 শতাংশ) মাঝারি/ননড্রাগ-ট্রিটেড বনাম ইসিএইচ-চিকিত্সা), পরামর্শ দেয় যে ইসিএইচ মোড-কে কোষকে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস থেকে রক্ষা করে। একত্রে নেওয়া, ECH-এর H2O2 অক্সিডেশনের পাশাপাশি প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের সাইটোটক্সিসিটি দ্বারা প্ররোচিত কোষ অ্যাপোপটোসিসের বিরুদ্ধে সাইটোপ্রোটেকটিভ কার্যকলাপ রয়েছে।

সংস্কৃত MODE-K কোষে TGF- অভিব্যক্তির আপ-নিয়ন্ত্রণ

সাহিত্যে প্রমাণ পাওয়া যায় যে TGF- 1 টিস্যুর আঘাত এবং মেরামত (22, 23) এবং কোলাইটিস বা প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগ (24) থেকে গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্ট পুনরুদ্ধারের ক্ষেত্রে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। TGF- 1 ইসিএইচ-প্ররোচিত কোষের বিস্তারে ভূমিকা পালন করে কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য উপরে প্রদর্শিত হিসাবে সংস্কৃত অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে সাইটোপ্রোটেকশনে, ECH-এর প্রভাব(cistanche থেকে echinacoside)TGF{{0}}-এ সংস্কৃত মোড-কে কোষে অভিব্যক্তি পরীক্ষা করা হয়েছিল। TGF- 1-এর ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরগুলি অর্ধ-পরিমাণমূলক RT-PCR দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল, যখন এর প্রোটিন স্তরগুলি ওয়েস্টার্ন ব্লটিং (মোট সেলুলার স্তর) বা ELISA (নিঃসৃত প্রোটিন স্তর) দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। চিত্র 5A-তে দেখানো হয়েছে, TGF- 1 mRNA স্তরের ডোজ-নির্ভর আপ-নিয়ন্ত্রণ ECH সংযোজনের পরে 24 এবং 48 ঘন্টা উভয় সময়ে ECH দিয়ে চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে দেখা গেছে। কোষের ভিতরে TGF{{10}} প্রোটিনের মাত্রা বৃদ্ধির অনুরূপ প্রবণতা পশ্চিমা ব্লটিং বিশ্লেষণ (চিত্র 5বি) দ্বারা প্রদর্শিত হয়েছিল। ECH এর বিভিন্ন ঘনত্ব সহ 0.5 mL কালচার মিডিয়ামে 24-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পর, TGF- 1 এর নিঃসৃত মাত্রাও ডোজ-স্বাধীন পদ্ধতিতে বৃদ্ধি করা হয়েছিল; 186.4 ± 18.39 pg/mL ননড্রাগ-ট্রিটেড কালচারে (বেসাল লেভেল) থেকে 186.4 ± 18.39 pg/mL সংস্কৃতিতে 25 ug/mL ECH সহ, 263.4 ± 14.14 pg/mL এর সাথে 50 ECH±4 ± L2. 15.56 pg/mL সঙ্গে 100 ug/mL ECH (P <0.0001)। এই="" সমস্ত="" তথ্য="" স্পষ্টভাবে="" নির্দেশ="" করে="" যে="" ech="" সংস্কৃতিতে="" অন্ত্রের="" এপিথেলিয়াল="" কোষে="" tgf-="" 1="" উৎপাদন="">

TGF- 1 এক্সপ্রেশনের জেনেটিক নকডাউন দ্বারা ইচিনাকোসাইডের বৃদ্ধির উদ্দীপনা এবং সাইটোপ্রোটেকশনের ক্ষতি

TGF- 1 ECH বৃদ্ধির উদ্দীপনা এবং অ্যাপোপটোসিস হ্রাসে অবদান রেখেছে কিনা তা স্পষ্ট করার জন্য(cistanche থেকে echinacoside)-চিকিত্সা করা কোষ, MODE-K কোষে TGF- 1 অভিব্যক্তিকে স্থিরভাবে অ্যান্টি-TGF- 1 shRNA প্রকাশ করে নকডাউন করা হয়েছিল, যার মাধ্যমে একটি নতুন সেল লাইন MODE-Ktgfb তৈরি হয়েছিল। MODE-Kscr কোষের তুলনায় TGF- 1 প্রোটিন এক্সপ্রেশনটি MODE-Ktgfb কোষে অনেকাংশে হ্রাস পেয়েছে যা স্থিরভাবে স্ক্র্যাম্বলড shRNA (চিত্র 6A) প্রকাশ করছিল। চিত্র 6বি-তে দেখানো হয়েছে, মোড-কেটিজিএফবি কোষে ECH-এর প্রসারিত উদ্দীপনা উল্লেখযোগ্যভাবে প্রতিবন্ধী ছিল; প্যারেন্টাল MODE-K কোষে ECH-এর প্রসারিত প্রতিক্রিয়ার অনুরূপ (চিত্র 2), ECH উদ্দীপনার পরে MODE-Kscr কোষে কার্যকর কোষ সংখ্যা বৃদ্ধি পেয়েছে, 25 ug/mL ECH সহ সংস্কৃতিতে 28.3 শতাংশ ± 12.4 শতাংশ বৃদ্ধি পেয়েছে, ECH এর 5{{30}} ug/mL এর সাথে 54.2 শতাংশ ± 6.8 শতাংশ বৃদ্ধি, এবং 100 ug/mL ECH সহ সংস্কৃতিতে 122.7 শতাংশ ± 20.8 শতাংশ বৃদ্ধি পেয়েছে৷ বিপরীতে, MODE Ktgfb সেল কালচারে ECH এর উপস্থিতিতে সেল সংখ্যা হ্রাস পেয়েছে, 25 ug/mL ECH সহ সংস্কৃতিতে 12.0 শতাংশ ± 5.0 শতাংশ হ্রাস পেয়েছে, 50 ug/mL ECH এর সাথে 18.3 শতাংশ ± 4.1 শতাংশ হ্রাস পেয়েছে এবং 100 ug/mL ECH এর সাথে 30.4 শতাংশ ± 3.3 শতাংশ কমেছে। দ্বি-মুখী আনোভা সহ পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ এই দুটি গ্রুপের (পি <0.0001) মধ্যে="" ech-তে="" প্রসারিত="" প্রতিক্রিয়ার="" উল্লেখযোগ্য="" পার্থক্য="" নির্দেশ="" করে।="" এই="" তথ্যগুলি="" পরামর্শ="" দেয়="" যে="" অন্ত্রের="" এপিথেলিয়াল="" কোষগুলিতে="" tgf-="" 1="" অভিব্যক্তি="" হ্রাস="" ech="" এর="" বৃদ্ধির="" উদ্দীপনাকে="" ব্যাহত="">

ECH এ আপ-নিয়ন্ত্রিত TGF- 1 এক্সপ্রেশন আছে কিনা তা আরও পরীক্ষা করার জন্য(cistanche থেকে echinacoside)-চিকিত্সা করা কোষগুলির ফলে অ্যাপোপটোসিস হ্রাস পায়, ECH-এর অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক কার্যকলাপ MODE-Ktgfb কোষ বনাম MODE-Kscr কোষগুলিতে পরীক্ষা করা হয়েছিল। চিত্র 6C-তে দেখানো হয়েছে, MODE-Kscr কোষের সংস্কৃতির তুলনায়, সাইটোকাইনের অনুপস্থিতিতে MODE-Ktgfb কোষের সংস্কৃতিতে অ্যাপোপটোসিসের মাত্রা বেশি ছিল (11.2 শতাংশ ± 0.42 শতাংশ MODE-Ktgfb বনাম 9.6 শতাংশ ± 0.99 শতাংশ MODE-Kscr-এ এবং সাইটোকাইনের উপস্থিতিতে (20.95 শতাংশ ± 0৷{39}}MODE-তে 7 শতাংশ MODE-Kscr-এ Ktgfb বনাম 15.4 শতাংশ ± 1.56 শতাংশ) (P=0৷{57}}{{60}}13), পরামর্শ দিচ্ছে যে TGF- 1 একটি অ্যান্টি -মোড কে কোষে অ্যাপোপটোটিক ফ্যাক্টর। MODE-Kscr কোষের সংস্কৃতিতে ECH (50 ug/mL) যোগ করার ফলে অ্যাপোপটোসিসের বেসাল স্তরগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (9.6 শতাংশ ± 0.99 শতাংশ ননড্রাগ চিকিত্সা বনাম 8.3 শতাংশ ± 0.43 শতাংশ ECH-চিকিত্সায়) এবং 30.2 শতাংশ অ্যাপোপটোসিস হ্রাস সাইটোকাইনস-উদ্দীপিত সংস্কৃতিতে পাওয়া গেছে (15.4 শতাংশ ± 1.56 শতাংশ ননড্রাগ চিকিত্সা বনাম 10.75 শতাংশ ± 1.05 শতাংশ ECH-চিকিত্সা করা হয়েছে)। যাইহোক, MODE-Ktgfb কোষের সংস্কৃতিতে, ECH অ্যাপোপটোসিসের বেসাল মাত্রা কমায়নি (ননড্রাগ-চিকিত্সায় 11.2 শতাংশ ± 0.42 শতাংশ বনাম ইসিএইচ-চিকিত্সায় 12.0 শতাংশ ± 0.43 শতাংশ), এবং অ্যাপোপটোসিস হ্রাসের মাত্র 16.71 শতাংশ। MODE-Kscr কোষের সংস্কৃতিতে 30.2 শতাংশ, সাইটোকাইনস-উদ্দীপিত সংস্কৃতিতে দেখা গেছে (20.95 শতাংশ ± 0.07 শতাংশ ননড্রাগ চিকিত্সা বনাম 17.45 শতাংশ ± 0.35 শতাংশ ECH-চিকিত্সা করা হয়েছে)। এই তথ্যগুলি নির্দেশ করে যে অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে TGF- 1 অভিব্যক্তির নকডাউন অ্যাপোপটোসিসকে আরও খারাপ করে এবং ECH এর সাইটোপ্রোটেক্টিভ কার্যকলাপকে হ্রাস করে৷

বৃদ্ধির উদ্দীপনা এবং ECH এর সাইটোপ্রোটেকশনের ক্ষতি(cistanche থেকে echinacoside)অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে TGF- 1 কার্যকলাপের নিরপেক্ষকরণের মাধ্যমে

আরও নিশ্চিত করার জন্য যে ECH এর বৃদ্ধির উদ্দীপনা এবং সাইটোপ্রোটেকশনের জন্য TGF- 1 প্রয়োজন হতে পারে(cistanche থেকে echinacoside)উপরে বর্ণিত অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে (চিত্র 6), ইসিএইচ-মধ্যস্থতায় অ্যান্টি-টিজিএফ- 1 অ্যান্টিবডি (ক্লোন 9016; R&D সিস্টেমস ইনক। মিনিয়াপোলিস, এমএন, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) নিরপেক্ষ করার প্রভাব কোষের বিস্তার এবং বেঁচে থাকা মোড-কে কোষ সংস্কৃতিতে পরীক্ষা করা হয়েছিল। চিত্র 7A-তে দেখানো হয়েছে, ECH (25 ug/mL) সংযোজন অ্যান্টিবডি-চিকিত্সাহীন নিয়ন্ত্রণে কোষের সংখ্যায় 44.3 শতাংশ ± 8.2 শতাংশ বৃদ্ধিকে উদ্দীপিত করেছে, কিন্তু অ্যান্টি-টিজিএফ- 1 অ্যান্টিবডির উপস্থিতিতে , 11.3 শতাংশ ± 9.10 শতাংশ কোষ সংখ্যার ক্ষতি একই ECH চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে দেখা গেছে, যা পরামর্শ দেয় যে TGF- 1 কার্যকলাপকে নিরপেক্ষ করা অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে ECH এর বৃদ্ধির উদ্দীপনাকে হ্রাস করে। পরবর্তী পরীক্ষাগুলি দেখায় যে অ্যান্টি-TGF- 1 অ্যান্টিবডিও MODE-K কোষের সংস্কৃতিতে ECH-এর সাইটোপ্রোটেক্টিভ কার্যকলাপকে নিরপেক্ষ করে; ECH এর সংযোজন ওষুধ-চিকিৎসাহীন সংস্কৃতিতে 4.37 শতাংশ ± 1.19 শতাংশ থেকে 1.72 শতাংশ ± {{50}.01 শতাংশে হ্রাস পেয়েছে ECH-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 24 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে এবং 11.13 শতাংশ ± থেকে 1.12 শতাংশ ননড্রাগ-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 9.13 শতাংশ ± 0.02 শতাংশ ইসিএইচ-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে 48 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে (ননড্রাগ/মাঝারি বনাম ইসিএইচ, দ্বিমুখী আনোভা, পি=0.0001)। যাইহোক, অ্যান্টি-টিজিএফ- 1 অ্যান্টিবডির উপস্থিতিতে ইসিএইচ-চিকিত্সা করা সংস্কৃতিতে অ্যাপোপটোসিস (24-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে 2.88 শতাংশ ± 0.01 শতাংশ; 48-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে 12.58 শতাংশ ± 0.02 শতাংশ ) নিয়ন্ত্রিত সংস্কৃতির (ননড্রাগ-ট্রিটেড) থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা ছিল না (টু-ওয়ে অ্যানোভা, পি=0.9427), যা বোঝায় যে অ্যান্টি-টিজিএফ- 1 অ্যান্টিবডি অন্ত্রে ECH-মধ্যস্থিত বেঁচে থাকার ক্ষেত্রে হস্তক্ষেপ করে। এপিথেলিয়াল কোষের.

আলোচনা

ECH(cistanche থেকে echinacoside)ভেষজ Cistanche spp এর নির্যাস শুধুমাত্র একটি প্রধান PhG নয়। কিন্তু অন্যান্য অনেক ঔষধি গাছেও পাওয়া যায় যেমন Echinacea spp. (25, 26)। এই প্রাকৃতিক যৌগটির ভিট্রো এবং ভিভোতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ রয়েছে বলে জানা গেছে (13, 27, 28)। যাইহোক, এর ক্রিয়াকলাপের প্রক্রিয়া(গুলি) অজানা রয়ে গেছে। বর্তমান অধ্যয়ন থেকে আমাদের ফলাফলগুলি প্রথমবারের মতো একটি ইন ভিট্রো মডেলে দেখায় যে ECH অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষের বিস্তার এবং বেঁচে থাকাকে উদ্দীপিত করে, যা TGF- 1 এর উপর নির্ভরশীল।

ECH এর সংযোজন(cistanche থেকে echinacoside)H2O2- বা প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন মিশ্রণ (TNF- এবং IFN-)- চিকিত্সা করা MODE-K কোষে (Figs. 3 এবং 4) এবং অন্যান্য কোষের প্রকারেও (16, 29) কোষের অ্যাপোপটোসিস হ্রাস করে এবং TGF- 1 অভিব্যক্তির নকডাউন বা এর কার্যকলাপকে অবরুদ্ধ করার ফলে এটির অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক কার্যকলাপ (চিত্র 6 এবং 7) বাতিল হয়ে যায়, ইঙ্গিত করে যে ECH এর সাইটোপ্রোটেকশন TGF- 1 উৎপাদনের উপর নির্ভর করে (চিত্র 5)। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে TGF- 1 অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক Bcl-2 অভিব্যক্তিকে প্ররোচিত করে এবং রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে TNF- মধ্যস্থতাকারী অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধ করে (19)। অনুরূপ ফলাফল অন্যান্য কোষের প্রকারে রিপোর্ট করা হয়েছে; কালচারড পালমোনারি আর্টারি এন্ডোথেলিয়াল কোষে TGF- 1 সংযোজন Bcl-2-এর বেসলাইন লেভেলকে আপ-নিয়ন্ত্রিত করে এবং সিরাম বঞ্চনা এবং ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল গ্রোথ ফ্যাক্টর (VEGF)-রিসেপ্টর ব্লকেড (30); এবং কালচারড নিউরাল প্রোজেনিটর কোষে (NPCs), এটি H2O2 চিকিত্সার বিরুদ্ধে কোষের বেঁচে থাকার (প্রায় 76 শতাংশ) বৃদ্ধি করে, যা Bcl-2 এক্সপ্রেশনের আপ-নিয়ন্ত্রণের সাথে সম্পর্কযুক্ত (31)। যদিও MODE-K কোষে Bcl-2 অভিব্যক্তিতে ECH-এর প্রভাব এই গবেষণায় পরীক্ষা করা হয়নি, TNF-তে ECH-এর অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক কার্যকলাপের সাথে Bcl-2 আপ-রেগুলেশনের পারস্পরিক সম্পর্ক রিপোর্ট করা হয়েছে। -চিকিৎসাকৃত SHSY5Y নিউরোনাল কোষ (29) বা H2O2-চিকিত্সা করা PC12 কোষ (15)। একত্রে নেওয়া, এই ডেটাগুলি পরামর্শ দেয় যে ECH-এর অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক কার্যকলাপ একটি Bcl-2 পথের মাধ্যমে TGF- 1 দ্বারা মধ্যস্থতা করা যেতে পারে।

এটা সম্ভব যে ECH এর সাইটোপ্রোটেকশন(cistanche থেকে echinacoside)ইনকিউবেশনের শেষে স্বতঃস্ফূর্ত কোষের মৃত্যু হ্রাস করে কার্যকর কোষের সংখ্যায় সামান্য বৃদ্ধিতে অবদান রাখতে পারে, কিন্তু ECH (100 ug/mL) যোগ করা প্রায় 48-ঘন্টা চিকিত্সার পরে কার্যকর কোষকে দ্বিগুণ করে (চিত্র 2A) , পরামর্শ দেয় যে ECH প্রকৃতপক্ষে কোষের বিস্তারকে উদ্দীপিত করে যা চিত্র 2, B এবং C-এর ডেটা দ্বারা আরও নিশ্চিত করা হয়েছে। মানব ফাইব্রোব্লাস্টিক কোষগুলিতে ECH-এর অনুরূপ প্রভাব রিপোর্ট করা হয়েছে, MRC-5 (17): MRC{ {6}} কোষের সংস্কৃতি, ECH কোষ চক্রকে G1 ফেজ থেকে S ফেজ এবং G2 ফেজে প্ররোচিত করে সেলুলার সেন্সেন্সকে স্থগিত করতে পারে। ECH-এর অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক ক্রিয়াকলাপের মতো, ECH-এর প্রসারণমূলক কার্যকলাপ TGF- 1 (চিত্র 6 এবং 7) এর উপর নির্ভরশীল যা একটি বহুমুখী সাইটোকাইন (32, 33) হিসাবে ভালভাবে নথিভুক্ত করা হয়েছে। TGF- কোষের বিস্তারকে উদ্দীপিত করতে পারে বা কোষের ধরন বা বহির্কোষীয় মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের উপর নির্ভর করে বৃদ্ধি আটকাতে পারে; এটি Smads এবং নন-Smads (যেমন, মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কাইনেস) (34, 35) সহ একাধিক সিগন্যালিং পথ সক্রিয় করে, কিন্তু কোন পথটি MODE-K কোষে ECH/TGF--উদ্দীপিত কোষের বিস্তারের মধ্যস্থতা করে তা আরও তদন্তের প্রয়োজন।

আজ অবধি, ECH এর লক্ষ্য প্রোটিন(গুলি) সম্পর্কে খুব কমই জানা যায়(cistanche থেকে echinacoside)বা সংকেত পথ(গুলি) এটি নিয়ন্ত্রণ করে। একটি সমীক্ষা দেখায় যে ECH চিকিত্সা এন্ডোথেলিয়াল কোষে সাইক্লিক গুয়ানোসিন মনোফসফেট (cGMP) এর সেলুলার স্তর বৃদ্ধি করে (36), এবং 8-Bromo-cGMP যোগ করলে কার্ডিয়াক ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে TGF- 1 অভিব্যক্তি পরিমিতভাবে বৃদ্ধি পায় (37) ) যাইহোক, ECH চিকিত্সা cGMP কে উন্নত করে কিনা এবং যার দ্বারা ECH সংস্কৃত অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে TGF- 1 অভিব্যক্তিকে আরও তদন্তের প্রয়োজন হয়।

উপসংহারে, আমাদের গবেষণা দেখায় যে ECH(cistanche থেকে echinacoside)TGF- 1 উৎপাদনকে প্ররোচিত করে যা কোষের বিস্তার এবং সংষ্কৃত অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষে কোষের বেঁচে থাকার মধ্যস্থতা করে। ডেক্সট্রান সালফেট সোডিয়াম-ইনডিউসড কোলাইটিস (38) সহ ইঁদুরের মিউকোসাল ইনজুরি মেরামত বা নিরাময়ের জন্য অন্ত্রের এপিথেলিয়ামে TGF- সংকেত প্রয়োজন, এটি পরামর্শ দেয় যে ECH, সম্ভবত ECH-যুক্ত ভেষজ সি. ডেসার্টিকোলা বা অন্যদের, মিউকোসকে উন্নীত করার জন্য থেরাপিউটিক সম্ভাবনা থাকতে পারে। রোগীদের মধ্যে মেরামত।

স্বীকৃতি

YJ চায়না স্কলারশিপ কাউন্সিল, চীন থেকে স্নাতক ছাত্র বৃত্তি দ্বারা সমর্থিত ছিল।

তথ্যসূত্র

1 Xu R, Chen J, Chen SL, Liu TN, Zhu WC, Xu J. Cistanche deserticola Ma চীনে একটি নতুন ফসল হিসাবে চাষ করা হয়। জেনেট রিসোর ক্রপ ইভোল। 2009;56:137-142।

2 জিয়াং ওয়াই, টু পিএফ। Cistanche প্রজাতির রাসায়নিক উপাদান বিশ্লেষণ. জে ক্রোমাটোগ্র এ. 2009;1216:1970–1979।

3 Tu PF, Wang B, Deyama T, Zhang ZG, Lou ZC। [RP-HPLC দ্বারা Herba Cistanchis-এর phenylethanoid glycosides বিশ্লেষণ]। ইয়াও জুয়ে জুয়ে বাও (অ্যাক্টা ফার্ম সিন)। 1997; 32:294-300। (ইংরেজি বিমূর্ত সহ চীনা ভাষায় পাঠ্য)

4 হুয়াং এক্স, লি জেড। [স্ট্রোকের পরে কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসায় সিস্টানচে-ধারণকারী সমাধানের ক্লিনিকাল কার্যকারিতা]। Zhongguo Zhang Xi Yi Jie He Za Zhi (চিন জে ইন্টিগ্রেটেড ট্রেড ওয়েস্ট মেড)। 2002; 22:622-623। (চাইনিজে)

5 ঝাং বি, লু এক্স, ঝাং আর, লি এল, লি সি। ঝং ইয়াও কাই (জে চিন মেড মেটার)। 1992; 15:33-35। (চাইনিজে)

6 Tu P, Li S, Li Z, Wang C, Lou Z. [অন্ত্রকে আর্দ্র করা এবং হার্বা সিস্টাঞ্চেসের ল্যাক্সেশনের উপর তুলনা]। Nat Prod Res Dev. 1997; 11:48-51। (ইংরেজি বিমূর্ত সহ চীনা ভাষায় পাঠ্য)

7 ঝাং বি, ঝাও এক্স, চেন এস, লিউ এল, চেং এইচ। Zhongguo Zhongyiyao Xinxi Zazhi (চিন জে ইনফর্ম ট্রেড চিন মেড)। 2003; 10:31-32। (ইংরেজি বিমূর্ত সহ চীনা ভাষায় পাঠ্য)

8 জিয়া ওয়াই, গুয়ান কিউ, গুও ওয়াই, ডু সি। সিস্তানচে ডেজার্টিকোলার জলের নির্যাস দ্বারা কোলন ক্যান্সার-প্রবণ ইঁদুরের অন্ত্রে প্রদাহজনক হাইপারপ্লাসিয়া হ্রাস। Phytother Res. প্রেসে.

9 Cai RL, Yang MH, Shi Y, Chen J, Li YC, Qi Y. Cistanche deserticola থেকে ফেনাইলেথানয়েড-সমৃদ্ধ নির্যাসের অ্যান্টিফ্যাটিগ কার্যকলাপ। Phytother Res. 2010;24:313-315।

10 জিং এম, সং এস, লি জে। [রংগুই টংবিয়ান ক্যাপসুল নিষ্কাশন এবং পরিশোধন প্রক্রিয়ার উপর অধ্যয়ন]। আধুনিক চিন মেড। 2009; 11: 18-20। (ইংরেজি বিমূর্ত সহ চীনা ভাষায় পাঠ্য)

11 Wu Y, Shi HM, Bao Z, Wang MY, Tu PF, Li XB. চাষকৃত Cistanche deserticola এর উৎপাদন মানের পূর্বাভাস দিতে আণবিক মার্কার প্রয়োগ। Biol ফার্ম ষাঁড়. 2010;33:334-339।

12 Geng X, Tian X, Tu P, Pu X। পারকিনসন রোগের মাউস MPTP মডেলে ইচিনাকোসাইডের নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব। ইউর জে ফার্মাকল। 2007;564:66-74।

13 Zhao Q, Gao J, Li W, Cai D. পারকিনসন্স রোগের সাবএকিউট MPTP মাউস মডেলে ইচিনাকোসাইডের নিউরোট্রফিক এবং নিউরোরেস্কু প্রভাব। মস্তিষ্ক রেস. 2010;1346:224-236।

14 ঝাং ওয়াই, জিং জে, এআই টি, ওয়েন টি, গুয়ান এল, ঝাও জে। ইঁদুরের ওলিক অ্যাসিড দ্বারা সৃষ্ট তীব্র ফুসফুসের আঘাতের বিরুদ্ধে ইচিনাকোসাইডের সুরক্ষা। ফ্রি রেডিক রেস 2007;41:798-805।

15 কুয়াং আর, সান ওয়াই, ইউয়ান ডব্লিউ, লেই এল, ঝেং এক্স। পিসি12 কোষে H2O2- প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটিতে ইচিনাকোসাইডের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব, একটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড। প্লান্টা মেড। 2009;75: 1499-1504।

16 কুয়াং আর, সান ওয়াই, ঝেং এক্স। H2O2-প্ররোচিত PC12 কোষের আঘাতে ইচিনাকোসাইডের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবে নিহিত নাইট্রিক অক্সাইডের দমন। ন্যাট প্রোড কমিউন। 2010; 5:571-574।

17 Xie H, Zhu H, Cheng C, Liang Y, Wang Z. ইচিনাকোসাইড মানব ফাইব্রোব্লাস্টিক কোষ MRC-5 এর সেলুলার সেন্সেসেন্সকে রিটার্ড করে। ফার্মাজি। 2009;64:752-754।

18 ভিডাল কে, গ্রোসজিন আই, ইভিলার্ড জেপি, গেসপাচ সি, কায়সারলিয়ান ডি। এসভি40- বড় টি জিন দ্বারা ইঁদুরের অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষের অমরকরণ। MODE-K সেল লাইনের ফেনোটাইপিক এবং ইমিউন বৈশিষ্ট্য। জে ইমিউনল পদ্ধতি। 1993; 166:63-73।

19 গুয়ান কিউ, এনগুয়ান সিওয়াই, ডু সি. রূপান্তরকারী বৃদ্ধির ফ্যাক্টর-বিটা১ এর অভিব্যক্তি রেনাল ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন আঘাতকে সীমাবদ্ধ করে। প্রতিস্থাপন। 2010;89:1320-1327।

20 Hwang M, Kim HJ, Noh HJ, Chang YC, Chae YM, Kim KH, et al. TGF-beta1 siRNA মূত্রনালী বাধার কিডনিতে টিউবুলোইনটার্স্টিশিয়াল ফাইব্রোসিসকে দমন করে। এক্স মোল পথোল। 2006;81: 48-54।

21 Du C, Wang S, Diao H, Guan Q, Zhong R, Jevnikar AM. shRNA থেরাপি দ্বারা টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষের অ্যাপোপটোসিসের প্রতিরোধ ক্ষমতা বৃদ্ধি করা রেনাল ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন আঘাতকে কমিয়ে দেয়। আমি জে ট্রান্সপ্লান্ট। 2006;6:2256-2267।

22 ডগলাস এইচ.ই. ক্ষত নিরাময়ে TGF-ss: একটি পর্যালোচনা। জে ক্ষত যত্ন. 2010;19:403-406।

23 গ্র্যান্ডে জেপি। টিস্যু আঘাত এবং মেরামত বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-বিটা রূপান্তর ভূমিকা. Proc Soc Exp Biol Med. 1997;214:27-40।

24 Monteleone G, Boirivant M, Pallone F, MacDonald TT. IBD এর নিয়ন্ত্রণে TGF beta1 এবং Smad7। মিউকোসাল ইমিউনল। 2008;1 সরবরাহ 1:S50–S53।

25 Bauer R, Foster S. Echinacea simulate এবং E. paradoxa root থেকে অ্যালকামাইডস এবং ক্যাফেইক অ্যাসিড ডেরিভেটিভের বিশ্লেষণ। প্লান্টা মেড। 1991;57:447-449।

26 পেরি এনবি, বার্গেস ইজে, গ্লেনি ভিএল। ইচিনেসিয়া প্রমিতকরণ: ফেনোলিক যৌগগুলির জন্য বিশ্লেষণমূলক পদ্ধতি এবং ঔষধি প্রজাতির সাধারণ স্তর। জে এগ্রিক ফুড কেম। 2001;53:849-857।

27 Pellati F, Benvenuti S, Magro L, Melegari M, Soragni F. ফেনোলিক যৌগগুলির বিশ্লেষণ এবং Echinacea spp-এর র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ। জে ফার্ম বায়োমেড পায়ূ। 2004;35:289-301।

28 উ ওয়াই, লি এল, ওয়েন টি, লি ওয়াইকিউ। ইঁদুরের কার্বন টেট্রাক্লোরাইড-প্ররোচিত হেপাটোটক্সিসিটির উপর ইচিনাকোসাইডের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব। টক্সিকোলজি। 2007; 232:50-56।

29 ডেং এম, ঝাও জেওয়াই, তু পিএফ, জিয়াং ওয়াই, লি জেডবি, ওয়াং ওয়াং। Echinacoside TNFalpha-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস থেকে SHSY5Y নিউরোনাল কোষগুলিকে উদ্ধার করে। ইউর জে ফার্মাকল। 2004;505:11-18।

30 Lu Q. ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-beta1 ALK5 এর মাধ্যমে পালমোনারি আর্টারি এন্ডোথেলিয়াল সেল অ্যাপোপটোসিস থেকে রক্ষা করে। অ্যাম জে ফিজিওল ফুসফুসের কোষ মোল ফিজিওল। 2008;295:L123–L133।

31 পার্ক SM, Jung JS, Jang MS, Kang KS, Kang SK. ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-বিটা 1 সংস্কৃতিযুক্ত মেরুদন্ড থেকে প্রাপ্ত নিউরাল প্রোজেনিটর কোষের ভাগ্য নিয়ন্ত্রণ করে। সেল প্রোলিফ। 2008;41:248-264।

32 Massague J. কোষ কিভাবে TGF-বিটা সংকেত পড়ে। ন্যাট রেভ মোল সেল বিওল। 2000;1:169-178।

33 রাহিমি র, লিওফ ইবি। টিজিএফ-বিটা সিগন্যালিং: দুটি প্রতিক্রিয়ার গল্প। জে সেল বায়োকেম। 2007;102:593-608।

34 Moustakas A, Heldin CH. নন-Smad TGF-বিটা সংকেত। জে সেল সাই. 2005;118:3573-3584।

35 Schmierer B, Hill CS. TGF বিটা-SMAD সিগন্যাল ট্রান্সডাকশন: আণবিক নির্দিষ্টতা এবং কার্যকরী নমনীয়তা। ন্যাট রেভ মোল সেল বিওল। 2007; 8:970-982।

36 He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ, Tu PF. ইচিনাকোসাইড একটি NO-cGMP পথের মাধ্যমে ইঁদুরের মহাধমনী রিংগুলিতে এন্ডোথেলিয়াম-নির্ভর শিথিলতা অর্জন করে। প্লান্টা মেড। 2009;75:1400-1404।

37 আবদেলাজিজ এন, কলম্বো এফ, মার্সিয়ার আই, ক্যালডেরোন এ। নাইট্রিক অক্সাইড অস্থিতিশীলতার মাধ্যমে ইঁদুর কার্ডিয়াক ফাইব্রোব্লাস্টে গ্রোথ ফ্যাক্টর-বিটা3 এমআরএনএ রূপান্তরিত করার অভিব্যক্তিকে কমিয়ে দেয়। উচ্চ রক্তচাপ। 2001;38:261-266।

38 বেক পিএল, রোজেনবার্গ আইএম, জেভিয়ার আরজে, কোহ টি, ওং জেএফ, পোডলস্কি ডিকে। ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-বিটা এপিথেলিয়াল কোষের মাধ্যমে ভিট্রো এবং ভিভোতে অন্ত্রের নিরাময় এবং আঘাতের সংবেদনশীলতা মধ্যস্থতা করে। আমি জে পাঠাল। 2003;162:597-608।