ইচিনাকোসাইড ROS উৎপাদন হ্রাস করার মাধ্যমে PC12 কোষে হাইড্রক্সিডোপামিন-প্ররোচিত মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিসফাংশন এবং প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলির বিরুদ্ধে সুরক্ষা দেয়

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

ইউ-হুয়া ওয়াং, 1,2 ঝাও-হং জুয়ান, 3 শুও তিয়ান, 1 এবং গুয়ান-হুয়া দু1,2

পারকিনসন্স ডিজিজ (PD) হল একটি নিউরোডিজেনারেটিভ ডিসঅর্ডার যা ডোপামিনার্জিক (DA) নিউরনের প্রগতিশীল ক্ষতি দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা এবং প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া পিডিতে কোষের ক্ষতির প্রক্রিয়ার সাথে জড়িত। 6-হাইড্রক্সিডোপামিন (6-ওএইচডিএ), একটি ডোপামিন অ্যানালগ, বিশেষভাবে ডোপামিনার্জিক নিউরনকে ক্ষতিগ্রস্ত করে।ইচিনাকোসাইড(ECH) হল একটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড যা এর কান্ড থেকে বিচ্ছিন্নসিস্তানচে সালসা, পূর্ববর্তী গবেষণায় বিভিন্ন নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব দেখাচ্ছে। বর্তমান অধ্যয়নটি ছিল 6-ওএইচডিএ-প্ররোচিত নিউরোটক্সিসিটি এবং PC12 কোষে সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলির বিরুদ্ধে এর প্রভাব তদন্ত করা। ফলাফলগুলি দেখায় যে 6-OHDA কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস করেছে, অক্সিডেশন-হ্রাস কার্যকলাপ হ্রাস করেছে, মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনা হ্রাস করেছে, এবং অপরিশোধিত PC12 কোষের তুলনায় মাইটোকন্ড্রিয়া-মধ্যস্থ অ্যাপোপটোসিস প্ররোচিত করেছে। যাহোক,echinacosideচিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে এই পরিবর্তনগুলিকে 6-OHDA দ্বারা প্ররোচিত করেছে৷ এছাড়াও,echinacosideএছাড়াও উল্লেখযোগ্যভাবে 6-OHDA দ্বারা প্ররোচিত প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলি উপশম করতে পারে৷ আরও গবেষণায় দেখা গেছে যেechinacosidePC12 কোষে 6-OHDA-প্ররোচিত ROS উৎপাদন কমাতে পারে। এই ফলাফল প্রস্তাব যে অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াechinacoside6-OHDA-প্ররোচিত নিউরোটক্সিসিটির বিরুদ্ধে ROS উত্পাদন হ্রাস করে মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা এবং প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলি হ্রাস করার সাথে জড়িত হতে পারে।

1। পরিচিতি

পারকিনসন রোগ (PD)একটি নিউরোডিজেনারেটিভ ডিসঅর্ডার যা সাবস্ট্যান্টিয়া নিগ্রা পার্স কমপ্যাক্টা [১]-এ ডোপামিন নিউরনের ধীরে ধীরে প্রগতিশীল অবক্ষয় দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। যদিও পিডির নিউরোপ্যাথলজিকাল হলমার্কগুলি ভালভাবে বর্ণনা করা হয়েছে, তবে এটিওলজি এখনও অনির্ধারিত রয়ে গেছে। উল্লেখযোগ্যভাবে, বেশ কয়েকটি পর্যবেক্ষণ পরামর্শ দেয় যে মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা পিডির প্যাথোজেনেসিস এবং ডোপামিনার্জিক নিউরনগুলির অবক্ষয়ের সাথে জড়িত [2, 3]। মাইটোকন্ড্রিয়াতে অনেক রেডক্স এনজাইম থাকে এবং প্রাকৃতিকভাবে অক্সিডেটিভ ফসফোরিলেশনের অকার্যকারিতা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) তৈরি করে [৪]। সম্প্রতি, মানব এবং প্রাণীর গবেষণা থেকে ক্রমবর্ধমান প্রমাণ পরামর্শ দিয়েছে যে নিউরোইনফ্লেমেশনও পিডি [5] তে নিউরোনাল ক্ষতির জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ অবদানকারী।

6-Hydroxydopamine (6-OHDA) ইন্ট্রাস্ট্রিয়াটাল ইঁদুর মডেল এবং কিছু কোষে [6-11] ডোপামিনার্জিক নিউরনের জন্য নির্দিষ্ট। PC12 সেল PD গবেষণার জন্য একটি জনপ্রিয় সেল মডেল হয়ে উঠেছে কারণ এই সেল লাইনে DAergic নিউরনের অনেক বৈশিষ্ট্য রয়েছে। এটি পিডি অধ্যয়নের জন্য এবং প্রতিরক্ষামূলক এবং থেরাপিউটিক এজেন্টগুলির প্রভাব নির্ধারণের জন্য একটি ইন ভিট্রো মডেল হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছে। ইচিনাকোসাইড (চিত্র 1) হল একটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড যা স্টেমসফ থেকে বিচ্ছিন্ন এবং বিশুদ্ধ।সিস্তানচে সালসা[১২], উত্তর-পশ্চিম চীনের স্থানীয় একটি পরজীবী উদ্ভিদ, যা 6-OHDA- induceddamageinPC12 কোষের বিরুদ্ধে ইচিনাকোসাইডের অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়া হিসাবে ব্যবহৃত হয়।

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1। উপকরণ। ইচিনাকোসাইড ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট ফর ফুড অ্যান্ড ড্রাগ কন্ট্রোল (বেইজিং, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। RPMI-1640 এবং ভ্রূণের বোভাইন সিরাম Gibco থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল৷

(গ্র্যান্ড আইল্যান্ড, এনওয়াই, ইউএসএ)। 6-ওএইচডিএ, এমটিটি, 2,7-ডিক্লোরোডিহাইড্রোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট, প্রপিডিয়াম আয়োডাইড (পিআই), এবং রেজাজুরিন সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল। এটিপি বায়োলুমিনেসেন্ট অ্যাসে কিটটি প্রোমেগা (ম্যাডিসন, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। 5,5,6,6 -টেট্রাক্লোরো-1,1,3,3 -টেট-রাইথাইল বেনজিমিডাজোল কার্বোসায়ানাইন আয়োডাইড (জেসি-1) অ্যাস কিট বেয়োটাইম ইনস্টিটিউট অফ বায়োটেকনোলজি থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল (হাইমেন, জিয়াংসু, চীন)। সাইটোক্রোম সি এলিসা কিট এবং ফ্লুরোজেনিক সাবস্ট্রেট এসি-ডিভিডি-এএমসি ইনভিট্রোজেন (কার্লসব্যাড, সিএ, ইউএসএ) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। IL-1 এবং IL-6 ELISA কিটগুলি বোস্টার বায়ো-ইঞ্জিনিয়ার লিমিটেড কোম্পানি (উহান, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল৷ স্পেকট্রাম্যাক্স এম 5 মাইক্রোপ্লেট রিডার মলিকুলার ডিভাইস কোম্পানি (সানিভেল, সিএ, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল।

2.2। কোষ সংস্কৃতি এবং চিকিত্সা. PC12 কোষগুলি RPMI-1640 তে 10 শতাংশ ঘোড়ার সিরাম এবং 5 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরামের সাথে সম্পূরক হয়ে জন্মেছিল৷ 5 শতাংশ CO2 [19] ধারণকারী একটি আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 37∘C এ অবস্থা বজায় রাখা হয়েছিল। কোষগুলিকে 2 × 105 কোষ/mL ঘনত্বে 96-ওয়েল প্লেটে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল৷ 80 শতাংশ সঙ্গমের পরে, কোষগুলিকে 1 ঘন্টার জন্য সিরাম-মুক্ত RPMI-1640 মাধ্যমে ইচিনাকোসাইডের বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে প্রিঙ্কুবেট করা হয়েছিল। তারপর, 6- OHDA 100 M এর চূড়ান্ত ঘনত্বে কূপের সাথে যোগ করা হয়েছিল এবং অন্যের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল চিকিত্সার পরে, একটি অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নীচে রূপগত পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। কোষের কার্যকারিতা এমটিটি অ্যাস দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল [19]। সংক্ষেপে, চিকিত্সার পরে, প্রতিটি কূপে 0.5 mg/mL এর চূড়ান্ত ঘনত্বে MTT যোগ করা হয়েছিল এবং 37∘C তাপমাত্রায় 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল।

2.3. PC12 কোষের রূপগত পরিবর্তন এবং কার্যকারিতা পরীক্ষা। চিকিত্সার পরে, আকারগত পরিবর্তনগুলি একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। কোষের কার্যকারিতা এমটিটি অ্যাস দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল [19]। সংক্ষেপে, চিকিত্সার পরে, প্রতিটি কূপে 0.5 mg/mL এর চূড়ান্ত ঘনত্বে MTT যোগ করা হয়েছিল এবং 37∘C তাপমাত্রায় 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। তারপরে, সুপারনাট্যান্টটি সরানো হয়েছিল এবং একটি মাইক্রোটাইটার প্লেট শেকারে 15 মিনিট নাড়ার সাথে 100 L ডাইমিথাইল সালফক্সাইডে ফর্মাজান পণ্যটি দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং একটি স্পেকট্রাম্যাক্স M5 মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে শোষণ 570 এনএম এ পড়া হয়েছিল। প্রমাণ-ভিত্তিক পরিপূরক এবং বিকল্প ঔষধ

2.4। অন্তঃকোষীয় এটিপি স্তরের পরীক্ষা। সেলুলার ATP স্তর নির্মাতার নির্দেশ অনুসারে একটি ATP বায়োলুমিনেসেন্ট অ্যাস কিট দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল। 100 L লুসিফেরিন এবং লুসিফেরেজ [20] যোগ করার পরে লুমিনেসেন্স মোডে একটি মাইক্রোপ্লেট রিডারে লুমিনেসেন্স পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

2.5। রেজাজুরিন দ্বারা মাইটোকন্ড্রিয়া অক্সিডেশন-হ্রাস কার্যকলাপ পরিমাপ। চিকিত্সার পরে, 5 M এর চূড়ান্ত ঘনত্বে রেজাজুরিন কূপগুলিতে যুক্ত করা হয়েছিল এবং 530 এনএম এবং 590 এনএম নির্গমনে ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা পরীক্ষা করা হয়েছিল।

2.6। JC-1 দ্বারা মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল পরিমাপ। নির্মাতার নির্দেশ অনুসারে JC-1 অ্যাস কিট ব্যবহার করে মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতা পরিমাপ করা হয়েছিল। চিকিত্সার পরে, কালচার মিডিয়ামটি সরিয়ে ফেলা হয়েছিল এবং অন্ধকারে 37∘C তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য JC-1 দ্রবণ দিয়ে লোড করা হয়েছিল। লাল/সবুজ অনুপাতের ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা যথাক্রমে 490 এনএম এবং 530 এনএম (সবুজ ফ্লুরোসেন্ট মনোমার) এবং 590 এনএম (লাল ফ্লুরোসেন্ট এগ্রিগেট) এর নির্গমনে নির্ধারিত হয়েছিল [22]।

2.7। সাইটোক্রোম সি রিলিজের পরিমাণ। সাইটোসোলিক সাইটোক্রোম সি স্তরগুলি নির্মাতার নির্দেশাবলী অনুসারে একটি ELISA কিট ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল [23]। সংক্ষিপ্তভাবে, চিকিত্সার পরে, কোষগুলি 15 মিনিটের জন্য 1000 গ্রাম এ লাইসড এবং সেন্ট্রিফিউগেট করা হয়েছিল, এবং তারপরে সুপারনাট্যান্টকে সাইটোপ্লাজমিক ভগ্নাংশ হিসাবে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সাইটোক্রোম সি রিলিজ পরিমাপের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

2.8। ক্যাসপেস-3 কার্যকলাপের নির্ণয়। ক্যাসপেস-3 ক্রিয়াকলাপটি পরিবর্তন সহ রেফারেন্স অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল [24]। সংক্ষিপ্তভাবে, চিকিত্সার পরে, লাইসিস বাফারটি ভালভাবে যোগ করা হয়েছিল এবং তারপরে 10 মিনিটের জন্য 12 000 গ্রাম সেন্ট্রিফিউগেশন করা হয়েছিল। ক্যাসপেস-3 কার্যকলাপটি ফ্লুরোজেনিক সাবস্ট্রেট Ac-DVD-AMC-এর প্রোটিওলাইটিক ক্লিভেজ পরিমাপ করে 380 এনএম একটি উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং 460 এনএম একটি নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য পরিমাপের মাধ্যমে সুপারনেট্যান্টের ফলাফলে পরীক্ষা করা হয়েছিল।

2.9। PC12 কোষে ফ্লো সাইটোমেট্রি অ্যাস। চিকিত্সার পরে, কোষগুলিকে ট্রিপসিনাইজ করা হয়েছিল, পিবিএস দিয়ে দুবার ধুয়ে, 5 মিনিটের জন্য 1000 r/মিনিট সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, এবং তারপর 4∘C তাপমাত্রায় রাতারাতি 70 শতাংশ ইথানল দিয়ে স্থির করা হয়েছিল। কোষগুলিকে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং পিবিএস দিয়ে দুবার ধোয়া হয়েছিল, পিবিএস (50 g/mL RNaseA ধারণ করে) তে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল, অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য 10 M এর চূড়ান্ত ঘনত্বে PI দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং 488 এ একটি ফ্লো সাইটোমিটারে পড়া হয়েছিল। nm উত্তেজনা [10]।

2.10। ELISA Assay দ্বারা IL-1 এবং IL-6 স্তরের পরিমাপ। সংষ্কৃত PC12 কোষের মাধ্যম চিকিত্সার পরে সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং IL-1 এবং IL-6 ঘনত্বগুলি বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ ELISA কিট দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল মানব-উত্পাদকের প্রোটোকল অনুসারে৷

2.11। অন্তঃকোষীয় প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির স্তর নির্ধারণ। 6-OHDA এর সাথে ইনকিউবেশনের পরে, অন্ধকারে 37∘C তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য 10M H2DCFH-DA দিয়ে কোষগুলি লোড করা হয়েছিল৷ DCF এর ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা একটি উত্তেজনায় পরিমাপ করা হয়েছিল

প্রমাণ-ভিত্তিক পরিপূরক এবং বিকল্প ওষুধের তরঙ্গদৈর্ঘ্য 495 এনএম এবং একটি মাইক্রোপ্লেট রিডারে 530 এনএম নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য [25]।

2.12। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ. সমস্ত ডেটা গড় ± SD হিসাবে প্রকাশ করা হয়। ফলাফলের পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ একমুখী বৈকল্পিক বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল, তারপরে -পরীক্ষা। পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য < 0.05="" এ="" গৃহীত="">

3। ফলাফল

3.1। 6-OHDA দ্বারা ক্ষতিগ্রস্ত PC12 কোষে ইচিনাকোসাইডনমরফোলজি এবং কোষের কার্যক্ষমতার প্রভাব৷ চিত্র 2(A) তে যেমন দেখানো হয়েছে, PC12 কোষের কার্যক্ষমতার জন্য ইচিনাকোসাইড চিকিত্সার 0.1∼10 M ঘনত্বে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না।

24 ঘন্টা। চিত্র 2(B) তে দেখানো হয়েছে, শুধুমাত্র 6-OHDA-এর সাথে চিকিত্সার 24 ঘন্টার মধ্যে, PC12 কোষগুলির বেশিরভাগই ঝিল্লির ব্লিবিং এবং কোষের সংকোচনের মতো আকারগত পরিবর্তনের মধ্য দিয়ে গেছে। ইচিনাকোসাইডের সাথে চিকিত্সা কোষগুলিকে 6-OHDA ক্ষতি থেকে রক্ষা করে। MTT পরীক্ষায় দেখা গেছে যে শুধুমাত্র 6-OHDA-এর সাহায্যে PC12 কোষের চিকিত্সার ফলে 24 ঘণ্টার মধ্যে কোষের বেঁচে থাকার আনুমানিক 25 শতাংশ হ্রাস পাওয়া যায়, যেখানে {{10}} এর সাথে চিকিত্সার ফলে 1 M, 1 M, এবং 10 এম ইচিনাকোসাইড 6-ওএইচডিএ-মধ্যস্থ সাইটোটক্সিসিটির হ্রাস দেখিয়েছে (সমস্ত <0.01, চিত্র="">

3.2। PC12 কোষে 6-OHDA দ্বারা প্ররোচিত মাইটোকন্ড্রিয়া কর্মহীনতার উপর ইচিনাকোসাইডের প্রভাব। 100M 6-OHDA সহ 24 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে সেলুলার ATP স্তরগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যেখানে 1 Mand 10 M ইচিনাকোসাইড সহ চিকিত্সার ফলে হ্রাস পেয়েছে 6-OHDA-মধ্যস্থ ATP PC12 কোষে অ্যানাবলিক পরিবর্তনগুলি হ্রাস করেছে . ফলাফলগুলি দেখায় যে ইচিনাকোসাইডের 1 মান্ড 10 এম সহ চিকিত্সা 6-OHDA (উভয় < 0.05="" এবং="" চিত্র="" 3(b))="" দ্বারা="" প্ররোচিত="" মাইটোকন্ড্রিয়া="" অক্সিডেশন-হ্রাস="" কার্যকলাপের="" বৈকল্যকে="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" করতে="">

চিত্র 3(c) তে দেখানো হয়েছে, 24 ঘন্টার জন্য 100 M 6- OHDA দিয়ে চিকিত্সার ফলে চিকিত্সা না করা গ্রুপের তুলনায় মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাবনা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে ( < {="" {11}}.01)।="" যাইহোক,="" 6-="" ohda="" দ্বারা="" প্ররোচিত="" মাইটোকন্ড্রিয়াল="" ঝিল্লি="" সম্ভাবনার="" হ্রাস="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" 0.1="" m,="" 1="" m,="" এবং="" 10="" m="" ইচিনাকোসাইড="" (সমস্ত="">< 0.01)="" দিয়ে="" কোট্রিটমেন্টের="" মাধ্যমে="" হ্রাস="">

3.3। 6-OHDA নিউরোটক্সিসিটির বিরুদ্ধে PC12 কোষে এচিনাকোসাইডের অ্যান্টি-মাইটোকন্ড্রিয়া-মধ্যস্থ অ্যাপোপটোসিস। ফলাফলগুলি দেখায় যে 6-OHDA এক্সপোজারের ফলে সাইটোসোলিক সাইটোক্রোম সি 167 শতাংশ বৃদ্ধি পায় অপরিবর্তিত গ্রুপের ( < 0৷{10}}1)৷="" 0.1="" m,="" 1="" m,="" এবং="" 10m="" এর="" ডোজ="" এচিনাকোসাইড="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" সাইটোক্রোম="" সি="" রিলিজকে="" 6-="" ohda="" (="">< 0.05,="">< 0.01,="" এবং)="" দ্বারা="" প্ররোচিত="" সাইটোসোলে="" হ্রাস="" করতে="" পারে="">< 0.01,="" রেসপি.;="" চিত্র="">

ক্যাসপেস{{0}} কার্যকলাপ প্রায় 3 বৃদ্ধি পেয়েছিল৷{2}} 6-ওএইচডিএ এক্সপোজার ( < 0৷{21}}১="" এর="" পরে="" চিকিত্সা="" না="" করা="" গোষ্ঠীর="" সাথে="" তুলনা="" করা="" হয়েছিল৷="" )="" বিপরীতে,="" ইচিনাকোসাইডের="" 1="" m="" এবং="" 10="" m="" সহ="" চিকিত্সা="" যথাক্রমে="" 6-ohda-চিকিত্সা="" করা="" কোষগুলির="" তুলনায়="" ক্যাসপেস-3="" কার্যকলাপে="" উল্লেখযোগ্য="" হ্রাস="" দেখায়="" (উভয়="">< 0.05="" এবং="" চিত্র="" 4(="" b)).pi="" হল="" ঝিল্লি="" ব্যাপ্তিযোগ্যতা="" এবং="" সাধারণত="" কার্যকর="" কোষ="" থেকে="" বাদ="" দেওয়া="" হয়।="" তাই="" এটি="" সাধারণত="" জনসংখ্যার="" মৃত="" কোষ="" সনাক্ত="" করতে="" ব্যবহৃত="" হয়।="" ফলাফলগুলি="" দেখায়="" যে="" 100="" m="" 6-="" ohda="" এর="" সাথে="" 24="" ঘন্টা="" ইনকিউবেশনের="" পরে="" অ্যাপোপটোসিস="" হার="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" বৃদ্ধি="" পেয়েছিল,="" যেখানে="" 1="" এবং="" 10="" m="" ইচিনাকোসাইড="" সহ="" চিকিত্সা="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" করেছে="" 6-ওএইচডিএ-প্ররোচিত="" অ্যাপোপটোসিস="" (=""><0.05,><0.01, resp.,="" চিত্র="">

3.4। PC12 কোষে ইচিনাকোসাইডের প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব 6-OHDA দ্বারা প্ররোচিত। ফলাফলগুলি দেখায় যে 6-OHDA exposureresultedinanincreaseinIL-1 স্তর চিকিত্সা না করা গোষ্ঠীর তুলনায় ( < 0৷{13}}5;="" চিত্র="" 4(a))৷="" যাইহোক,="" 10="" m="" ইচিনাকোসাইড="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" 6-ohda="" (=""><0.05; চিত্র="" 5(a))="" দ্বারা="" প্ররোচিত="" il-1="" রিলিজ="" কমাতে="">

IL{{0}} স্তরটিও চিকিত্সা না করা গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে ( < 0৷{10}}1)৷="" যাইহোক,="" ইচিনাকোসাইডের="" 0.1,="" 1,="" এবং="" 10="" m="" সহ="" চিকিত্সার="" ফলে="" 6-ohda-চিকিত্সা="" করা="" কোষগুলির="" তুলনায়="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" il-6="" রিলিজ="" হ্রাস="" পেয়েছে="" (উভয়=""><0.05 এবং="" চিত্র="">

3.5। PC12 কোষে 6-OHDA দ্বারা প্ররোচিত ROS উৎপাদনে ECH-এর প্রভাব। 6-OHDA দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলি চিকিত্সা না করা কোষগুলির তুলনায় আন্তঃকোষীয় ROS-এর একটি উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি (প্রায় 14-গুণ) দেখিয়েছে ( < 0৷{9}}1)৷="" এই="" বৃদ্ধি="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" 0.1,="" 1,="" এবং="" 10="" এম="" ইচিনাকোসাইড="" (="">< 0.05,="">< 0.01,="" এবং="">< 0.01,="" রেসপি.;="" চিত্র="" 6)="" এর="" সাথে="" একত্রিত="" হওয়ার="" দ্বারা="" হ্রাস="" পেয়েছে="">

4। আলোচনা

ইচিনাকোসাইড হল ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের প্রধান উপাদানগুলির মধ্যে একটি যা একটি বিখ্যাত ঐতিহ্যগত রিপোর্ট করা ইচিনাকোসাইডের নিউরোডিজেনারেটিভ রোগে অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ বৈশিষ্ট্য রয়েছে [18]। ভিভো গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে যে এমপিটিপি-প্ররোচিত ডোপামিনার্জিক নিউরোনাল ক্ষতির মাউস মডেলে ইচিনাকোসাইডের নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব এবং আচরণগত উন্নতি হয়েছে, যখন আরও তদন্তে জানা গেছে যে ইচিনাকোসাইড এমপিপি প্লাসে ক্যাসপেস-3 এবং ক্যাসপেস-8 অ্যাক্টিভেশনের অবনতি ঘটায়। -সেরিবেলার গ্রানুল নিউরনের প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস [16]। ভিভোর আরেকটি গবেষণায় 6-OHDA [১৭] দ্বারা আহত স্ট্রাইটাল ডোপামিনার্জিক নিউরনে ইচিনাকোসাইডের নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবের কথা জানানো হয়েছে। যাইহোক, সেলুলার এবং আণবিক প্রক্রিয়াগুলি যা এই ক্রিয়াগুলিকে অন্তর্নিহিত করে তা সম্পূর্ণরূপে বোঝা যায় না, বিশেষত মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন এবং প্রদাহ প্রতিক্রিয়াগুলির উপর তাদের প্রভাবের জন্য। সুতরাং আমাদের বর্তমান অধ্যয়নটি পিডির বিরুদ্ধে এর প্রক্রিয়াটি ব্যাখ্যা করার জন্য মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন এবং প্রদাহ প্রতিক্রিয়াগুলিতে ইচিনাকোসাইডের প্রভাবগুলি তদন্ত করেছে। ফলাফলগুলি প্রথম দেখায় যে ইচিনাকোসাইড মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন এবং প্রদাহ বিরোধী সুরক্ষার মাধ্যমে PC12 কোষে উল্লেখযোগ্যভাবে 6-OHDA-প্ররোচিত নিউরোটক্সিসিটি হ্রাস করেছে।

মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা দীর্ঘকাল ধরে পারকিনসন্স রোগ এবং এর পরীক্ষামূলক মডেলগুলিতে নিগ্রোস্ট্রিয়াটাল ডোপামিনার্জিক নিউরনের মৃত্যুর সাথে জড়িত ছিল [26]। মাইটোকন্ড্রিয়া নিউরোডিজেনারেটিভ রোগে শ্বাসযন্ত্রের চেইনের ইলেকট্রন বাহকের মাধ্যমে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির (আরওএস) উৎপাদনে গভীরভাবে জড়িত। জৈবিক ব্যবস্থায় স্বাভাবিক বিপাকের সময় বিভিন্ন ধরনের ROS উত্পাদিত হয়, কিন্তু তাদের জমা হয়

প্রয়োজনীয় পরিমাণ লিপিড, প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিডের ক্ষতি করতে পারে।

6-ওএইচডিএ, একটি ক্যাটেকোলামাইন অ্যানালগ, উপাদান নিগ্রা নিউরনের নির্দিষ্ট অবক্ষয় ঘটায়। 6- OHDA দ্বারা প্ররোচিত নিউরোটক্সিসিটি, আংশিকভাবে, ROS [২৮–৩২] উৎপাদনের কারণে।

ওএইচডিএ মাইটোকন্ড্রিয়া ফাংশনকে প্রভাবিত করে নিউরোনাল মৃত্যুর দিকে নিয়ে যায়, যার মধ্যে এটিপি উত্পাদন হ্রাস, ROS বিপাকের ব্যাঘাত এবং অ্যাপোপটোসিস [10, 33, 34] অন্তর্ভুক্ত। বর্তমান সমীক্ষায়, আমাদের ফলাফলগুলিও দেখায় যে 6-OHDA মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ-রিডাকশন ফাংশনকে ক্ষতিগ্রস্থ করেছে, মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনা হ্রাস করেছে, মাইটোকন্ড্রিয়া-মধ্যস্থ অ্যাপোপটোসিস প্ররোচিত করেছে এবং PC12 কোষে ROS উত্পাদন বৃদ্ধি করেছে।

রেজাজুরিন হল একটি ফ্লুরোসেন্ট সূচক যা শুধুমাত্র আণবিক অক্সিজেন এবং সাইটোক্রোম অক্সিডেসের চূড়ান্ত হ্রাসের মধ্যে মধ্যবর্তী। অতএব, রেজাজুরিনের অক্সিডেটিভ-হ্রাস সম্ভাবনা শ্বাসযন্ত্রের চেইনকে প্রায় সমাপ্তির কাজ করতে দেয়, যা মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশনের আরও সঠিক এবং সংবেদনশীল ইঙ্গিত প্রদান করবে। JC-1 হল একটি ঝিল্লি সম্ভাব্য-সংবেদনশীল প্রোব যা অভ্যন্তরীণ মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লিতে স্থানীয়করণ করে যেখানে এটি মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতার উপর ভিত্তি করে মনোমার (সবুজ) বা সমষ্টি (লাল) গঠন করে। সুতরাং, resazurin এবং JC-1 হল মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন পরীক্ষা করার জন্য মূল্যবান বিশ্লেষণাত্মক সরঞ্জাম [35]। বর্তমান গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ-রিডাকশন কার্যকলাপ এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্য হ্রাস 6-OHDA- প্ররোচিত ডোপামিনার্জিক নিউরোটক্সিসিটিতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারে। আমাদের ফলাফলটি মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ-হ্রাস কার্যকলাপ এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনাও দেখিয়েছে। এই ফলাফলগুলি সরবরাহ করে যে মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতার উন্নতি সাধারণত PD এর সাথে যুক্ত প্রগতিশীল ডোপামিনার্জিক নিউরোডিজেনারেশনকে ধীর করার একটি ভাল উপায় হতে পারে।

এটি সাধারণত গৃহীত হয় যে 6- OHDA দ্বারা প্ররোচিত কোষ অ্যাপোপটোসিস মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতার মধ্যস্থতা করে, সাইটোক্রোম সি রিলিজ এবং ক্যাসপেস-3 সক্রিয়করণ [৩৬] দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। একটি অ্যাপোপটোটিক উদ্দীপনা মাইটোকন্ড্রিয়া থেকে সাইটোক্রোম সি-এর প্রকাশকে সাইটোসোলে ট্রিগার করে যেখানে এটি ক্যাসপেস-3 এবং অন্যান্য ডাউনস্ট্রিম ক্যাসপেসগুলিকে সক্রিয় করে। বর্তমান সমীক্ষায়, ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে PC12 কোষগুলি 6-OHDA বর্ধিত সাইটোক্রোম সি রিলিজ এবং ক্যাসপেস নির্ভরশীলভাবে সাইটোক্রোম সি রিলিজ এবং ক্যাসপেস- 3 অ্যাক্টিভেশনের 100 M এর সংস্পর্শে এসেছে। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ইচিনাকোসাইড মাইটোকন্ড্রিয়া থেকে সাইটোসোল এবং ক্যাসপেস-3 সক্রিয়করণে সাইটোক্রোম সি রিলিজ হ্রাস করে মাইটোকন্ড্রিয়া-মধ্যস্থ অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দিতে পারে।

প্রদাহ হল পারকিনসোনিয়ান মস্তিষ্কের একটি নিউরোপ্যাথলজিকাল বৈশিষ্ট্য এবং রোগের পরীক্ষামূলক মডেলেও। প্রদাহ হ্রাস করার জন্য এবং এই প্রদাহজনক কারণগুলির উত্পাদনকে বাধা দেওয়ার দিকে তৈরি থেরাপিউটিক কৌশলগুলি পারকিনসন রোগ এবং সম্পর্কিত অবস্থার চিকিত্সার জন্য একটি প্রতিশ্রুতিবদ্ধ নিউরোপ্রোটেক্টিভ কৌশল হতে পারে [37]। সেরিব্রোস্পাইনাল ফ্লুইড এবং পারকিনসোনিয়ান রোগীদের পোস্টমর্টেম বিশ্লেষণের সময় বেশ কিছু গবেষণায় দেখা গেছে যে ইন্টারলিউকিন-1 (IL-1) এবং ইন্টারলিউকিন-6 (IL{{4}) এর মতো সাইটোকাইনের মাত্রা বেড়েছে }), অ্যাপ্রোইনফ্ল্যামেটরি রেসপন্স সক্রিয় করার পরামর্শ দেয়[38, 39]। বর্তমান সমীক্ষায়, ফলাফলে দেখানো হয়েছে যে PC12 কোষে 100 Mof6-OHDA প্ররোচিত IL-1 এবং IL-6 রিলিজ। যাইহোক, ইচিনাকোসাইডের সাথে চিকিত্সা ডোজ-নির্ভরশীলভাবে IL-1 এবং IL-6 প্রকাশকে 6-OHDA দ্বারা প্ররোচিত করতে বাধা দিতে পারে। ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া হ্রাস করাও ইচিনাকোসাইডের প্রক্রিয়াগুলির সাথে জড়িত 6-ওএইচডিএ-প্ররোচিত নিউরোটক্সিসিটির বিরুদ্ধে।

উপসংহারে, এই গবেষণার ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে ইচিনাকোসাইড পিসি12 কোষে 6-ওএইচডিএ-প্ররোচিত নিউরোটক্সিসিটি ব্লক করতে সক্ষম হয়েছিল, এবং প্রক্রিয়াগুলি ROS উত্পাদন হ্রাস করার মাধ্যমে মাইটোকন্ড্রিয়াল সুরক্ষা এবং প্রদাহ বিরোধীতার সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। এই কাজের দ্বারা প্রদত্ত তথ্য অ্যান্টি-পিডি-র জন্য ইচিনাকোসাইডের প্রক্রিয়াটি ব্যাখ্যা করতে কার্যকর হবে। এটি উপসংহারে পৌঁছেছে যে পিডি প্রতিরোধ এবং চিকিত্সার জন্য ইচিনাকোসাইড একটি প্রতিশ্রুতিবদ্ধ থেরাপিউটিক বিকল্প হতে পারে।

স্বার্থ দ্বন্দ্ব

লেখক কোন স্বার্থের দ্বন্দ্ব ঘোষণা করেছেন

স্বীকৃতি

এই কাজটি চীনের ন্যাশনাল ন্যাচারাল সায়েন্স ফাউন্ডেশন (81473383) এবং জাতীয় বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি প্রধান প্রকল্প (2012ZX09103101-078; 2013ZX09103-001-008; এবং 2013ZX09102106) থেকে অনুদান দ্বারা সমর্থিত ছিল।