HPLC দ্বারা Cistanche Herba জলের নির্যাস মধ্যে Echinacoside নির্ধারণ

বিমূর্ত:

উদ্দেশ্য এর জন্য একটি HPLC পদ্ধতি প্রতিষ্ঠিত হয়েছিলইচিনাকোসাইড নির্ধারণমধ্যেCistanche এর জল নির্যাসherba

পদ্ধতি Echinacoside HPLC দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। গ্রেডিয়েন্ট ইলিউশন দ্বারা অ্যাসিটোনিট্রিল(A) এবং 0.4% ফসফরিক অ্যাসিড দ্রবণ(B) সমন্বিত একটি মোবাইল ফেজ সহ Inertsil ODS-SP C18 কলামে পৃথকীকরণ করা হয়েছিল। সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য 333 nm সেট করা হয়েছিল, এবং কলামের তাপমাত্রা ছিল 30 ডিগ্রি। প্রবাহের হার ছিল 1.0 mL·min-1 এবং ইনজেকশনের পরিমাণ ছিল 10 μL। ফলাফল 44 এর ঘনত্ব সীমার মধ্যে ইচিনাকোসাইডের রৈখিক সম্পর্ক।{11}}। পুনরুদ্ধারগুলি ছিল 94.59%-105.31% (RSD= 2.93%, n=9)। সিস্তানচে ভেষজের জলের নির্যাসে ইচিনাকোসাইডের উপাদান ছিল 15.527,7.347,12.267 mg·g-1। উপসংহার ভাল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা সহ প্রতিষ্ঠিত HPLC পদ্ধতিটি সঠিক, সহজ এবং সম্ভাব্য। এটি Cistanche herba এর জলের নির্যাসে ইচিনাকোসাইড নির্ণয়ের জন্য উপযুক্ত।

কীওয়ার্ড:এইচপিএলসি;Cistanche herba জল নির্যাস; echinacoside; বিষয়বস্তু নির্ধারণ

Cistanche deserticola একটি টনিক ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধ যা সাধারণত ক্লিনিকাল অনুশীলনে ব্যবহৃত হয় এবং এটি "মরুভূমি জিনসেং" [1] নামে পরিচিত। চাইনিজ ফার্মাকোপিয়ার 2015 সংস্করণে রেকর্ড করা সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা হল সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা ওয়াইসি মা বা সিস্তানচে টিউবুলোসা (শেঙ্ক) উইটের আঁশযুক্ত পাতা সহ শুকনো মাংসল কাণ্ড। এটি উষ্ণ, মিষ্টি এবং নোনতা এবং কিডনি এবং বড় অন্ত্রের মেরিডিয়ানে ফিরে আসে। এটি কিডনি ইয়াংকে পুষ্টিকর, সারাংশ এবং রক্তকে পুনরায় পূরণ করার এবং অন্ত্র এবং জোলাপকে ময়শ্চারাইজ করার প্রভাব রয়েছে [2]। "শেন নং এর মেটেরিয়া মেডিকা," বলে যে এটি "মাঝকে টোনিফাই করতে পারে, পাঁচটি অভ্যন্তরীণ অঙ্গকে পুষ্ট করতে পারে, ইয়িনকে শক্তিশালী করতে পারে এবং সারাংশকে পুষ্ট করতে পারে"। Cistanche deserticola প্রধানত phenylethanoid glycosides, iridoids এবং তাদের গ্লাইকোসাইড, lignans এবং তাদের গ্লাইকোসাইড, পলিস্যাকারাইড, এস্টার যৌগ এবং অ্যালকালয়েড [3] ধারণ করে। ফেনিলেথানল গ্লাইকোসাইড হল সিস্তানচে ডেজার্টিকোলার প্রধান সক্রিয় উপাদান। তাদের মধ্যে, ইচিনাকোসাইড এবং ভার্বাস্কোসাইড চীনা ফার্মাকোপিয়াতে সিস্তানচে মরুভূমিতে তালিকাভুক্ত।

সনাক্তকরণ এবং বিষয়বস্তু নির্ধারণের জন্য নির্দেশক উপাদান। ফার্মাকোলজিকাল স্টাডিজ [৪] দেখায় যে Cistanche deserticola এর বিভিন্ন ফার্মাকোলজিক্যাল প্রভাব রয়েছে যেমন রেচক, লিভার সুরক্ষা, অ্যান্টি-অস্টিওপরোসিস, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-এজিং এবং অ্যান্টি-ক্লান্তি। Cistanche deserticola জলীয় নির্যাস ইঁদুরের অস্টিওব্লাস্টে হাড়ের মরফোজেনেটিক প্রোটিন 2 জিনের প্রকাশকে উন্নীত করতে পারে, টারট্রেট-প্রতিরোধী অ্যাসিড ফসফেটেস, ডিম্বাশয়ে ইঁদুরের সিরামে অস্টিওক্যালসিন এবং Smad1, mad5 জিন, ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-, ইত্যাদি। , এর অস্টিওপরোসিস-বিরোধী প্রভাব রয়েছে [5-6]।

ইচিনেসিয়া অস্টিওব্লাস্টের বিস্তারকে উন্নীত করতে পারে এবং অস্টিওব্লাস্টে [7-9] ভিট্রোতে সংষ্কৃত অস্থি মজ্জা মেসেনকাইমাল স্টেম কোষের পার্থক্যকে প্রচার করতে পারে। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, Cistanche deserticola ইথানল নির্যাস এবং এর যৌগ প্রস্তুতি [10-12]-এ echinacoside এবং verbascoside-এর বিষয়বস্তু নির্ধারণের বিষয়ে অনেক গবেষণা প্রতিবেদন রয়েছে, কিন্তু Cistanche deserticola-এ সূচক উপাদানগুলির বিষয়বস্তু নির্ধারণের বিষয়ে খুব কম রিপোর্ট রয়েছে। জলীয় নির্যাস। এই গবেষণায়, উচ্চ-কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) Cistanche deserticola এর জলীয় নির্যাসে ইচিনেসাইডের বিষয়বস্তু নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

1 উপাদান

1.1 যন্ত্র

এলসি-20এটি হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি, এসপিডি-20একটি ডিটেক্টর, এসআইএল-20একটি অটোস্যাম্পলার, সিটিও-10এএসভিপি কলাম ওভেন, এলসি সলিউশন লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি ওয়ার্কস্টেশন, শিমাদজু কর্পোরেশন জাপান; MES125P-OCE-DU ইলেকট্রনিক বিশ্লেষণাত্মক ব্যালেন্স, সার্টোরিয়াস কোম্পানি, জার্মানি; SHZ-D (Ⅲ) জল সঞ্চালন বহু-উদ্দেশ্য ভ্যাকুয়াম পাম্প, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 রোটারি ইভাপোরেটর কুলিং সার্কুলেশন সিস্টেম, RV 10 D S96 রোটারি ইভাপোরেটর, IKA কোম্পানি, জার্মানি; DK-S26

বৈদ্যুতিক ধ্রুবক তাপমাত্রা জল স্নান, সাংহাই Jinghong পরীক্ষামূলক সরঞ্জাম কোং, লিমিটেড; ইউপিআর সিরিজের আল্ট্রাপিউর ওয়াটার মেশিন, সিচুয়ান ইউপু আল্ট্রাপিউর টেকনোলজি কোং, লিমিটেড।

1.2 ঔষধি উপকরণ এবং বিকারক

Cistanche deserticola ঔষধি উপাদান গুয়াংঝো লিংনান ট্র্যাডিশনাল চাইনিজ মেডিসিন পিস কোং, লিমিটেড, ব্যাচ নম্বর থেকে ক্রয় করা হয়েছিল: 1801001, 1806001, 181001। গুয়াংঝো ইউনিভার্সিটির চীনা বিশ্ববিদ্যালয়ের তৃতীয় অধিভুক্ত হাসপাতালের প্রধান ঐতিহ্যবাহী চীনা ফার্মাসিস্ট তু জিংমিং চিহ্নিত করেছেন Cistanche deserticola YCMa এর আঁশযুক্ত পাতা সহ শুকনো মাংসল কান্ড। নমুনাটি গুয়াংজু ইউনিভার্সিটি অফ চাইনিজ মেডিসিনের তৃতীয় অনুমোদিত হাসপাতালের ড্রাগ টেস্টিং রুমে সংরক্ষণ করা হয়; ইচিনেসিয়া গ্লাইকোসাইড রেফারেন্স পদার্থ, বিষয়বস্তু 89.7%, চায়না ইনস্টিটিউট অফ ফুড অ্যান্ড ড্রাগ কন্ট্রোল, ব্যাচ নম্বর: 111670-

201706; অ্যাসিটোনিট্রিল ক্রোমাটোগ্রাফিকভাবে বিশুদ্ধ (মার্ক, জার্মানি); মিথানল এবং ফসফরিক অ্যাসিড বিশ্লেষণাত্মকভাবে বিশুদ্ধ (তিয়ানজিন ফুইউ ফাইন কেমিক্যাল কোং লিমিটেড); জল অতি বিশুদ্ধ জল।

2 পদ্ধতি এবং ফলাফল

2.1 Cistanche deserticola এর জল নির্যাস প্রস্তুতি

Cistanche deserticola ঔষধি উপাদানের মোটা পাউডার নিন, পাতিত জলের 10 গুণ পরিমাণ যোগ করুন, উত্তাপ এবং রিফ্লাক্স নিষ্কাশনের জন্য দুইবার, প্রতিবার 1 ঘন্টা, ফিল্টার করুন, ফিল্টারটি একত্রিত করুন এবং একটি ঘূর্ণমান বাষ্পীভবন দিয়ে ফিল্টারকে ঘনীভূত করুন 0.100 g·mL-1 একটি অপরিশোধিত ওষুধের সামগ্রীতে, এবং পরে ব্যবহারের জন্য এটি 4 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করুন।

2.2 ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা এবং সিস্টেমের উপযুক্ততা

ক্রোমাটোগ্রাফিক কলাম: Inertsil ODS SP C18 কলাম (150 মিমি × 4.6 মিমি, 5 μm); মোবাইল ফেজ: acetonitrile (A)-0.4% ফসফরিক অ্যাসিড দ্রবণ (B), গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন: 0 ~ 5 মিনিট, 17%

ক; 5 ~ 25 মিনিট, 20% A; 25 ~ 30 মিনিট, 17% এ; সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য: 333 এনএম; কলাম তাপমাত্রা: 30 ডিগ্রী; প্রবাহের হার: 1.0 mL·min-1;

ইনজেকশন ভলিউম: 10 μL। এই ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থার অধীনে, ইচিনাকোসাইড এবং সংলগ্ন উপাদানের শিখরগুলির মধ্যে বিচ্ছেদ 1.5-এর বেশি এবং ইচিনাসাইড শিখরের উপর ভিত্তি করে তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা 4,000-এর কম হওয়া উচিত নয়৷ ক্রোমাটোগ্রামটি চিত্র 1 এ দেখানো হয়েছে।

2.3 সমাধানের প্রস্তুতি

2.3.1 রেফারেন্স পদার্থের সমাধান একটি উপযুক্ত পরিমাণ ইচিনাকোসাইড রেফারেন্স পদার্থের ওজন করুন, এটি সঠিকভাবে ওজন করুন, এটি একটি 10 ​​মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে রাখুন, এটিকে দ্রবীভূত করার জন্য মিথানল যোগ করুন এবং একটি রেফারেন্স পদার্থের দ্রবণ প্রস্তুত করুন যাতে প্রতি মিলি প্রতি 898.794 ইউজি ইচিনাকোসাইড, 4 ডিগ্রি। পরবর্তী ব্যবহারের জন্য সংরক্ষণ করুন।

2.3.2 পরীক্ষা সমাধান

সুনির্দিষ্টভাবে পরিমাপ করুন 2.0 মিলি সিস্তানচে মরুভূমির জলীয় নির্যাস, জলের স্নানে শুষ্কতায় বাষ্পীভূত করুন, দ্রবীভূত করার জন্য মিথানল যোগ করুন, 10 মিলি ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে ভলিউমে পাতলা করুন, ভালভাবে ঝাঁকান এবং ফিল্টার করুন প্রাপ্ত করার জন্য একটি 0.22 μm মাইক্রোপোরাস ঝিল্লি।

2.4 রৈখিক সম্পর্কের তদন্ত

সঠিকভাবে পরিমাপ করুন {{0}}.25, 0.50, 1৷{5}}, 2৷{7}}, 2.50, 3.{11}} আইটেম 2.3.1 এর অধীনে রেফারেন্স সলিউশনের mL, এটিকে একটি 5 mL ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে রাখুন, ভলিউম পর্যন্ত মেথানল যোগ করুন এবং 44 এর গ্রেডিয়েন্ট ঘনত্ব পেতে ভালভাবে ঝাঁকান৷{17} }, ৮৯৷{19}}৷ 179। 2.2 এর অধীনে ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা অনুযায়ী পরিমাপ করুন এবং সর্বোচ্চ এলাকা রেকর্ড করুন। আবসিসা (X, ug·mL-1) হিসাবে রেফারেন্স পদার্থের ভর ঘনত্বের সাথে রৈখিক রিগ্রেশন সঞ্চালন করুন এবং অর্ডিনেট (Y) হিসাবে শিখর এলাকা, এবং রিগ্রেশন সমীকরণ প্রাপ্ত হয়: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0৷{39}}৷ ফলাফলগুলি দেখায় যে ইচিনেসিয়ার ঘনত্ব 44 এর মধ্যে একটি ভাল রৈখিক সম্পর্ক রয়েছে৷{41}} ~ 539৷{43}} ug·mL-1৷

2.5 নির্ভুলতা পরীক্ষা

539 নিন। ফলাফলগুলি দেখায় যে ইচিনাকোসাইড পিক এলাকার RSD ছিল 1.81%, যা ভাল যন্ত্রের নির্ভুলতা নির্দেশ করে।

2.6 স্থিতিশীলতা পরীক্ষা

সঠিকভাবে পরিমাপ করুন 2। 7}}.22 μm মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন, আইটেম 2.2 এর অধীনে ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা অনুসরণ করুন এবং যথাক্রমে 0 এবং 2 এ রাখুন। , 4, 8, 12, 24 ঘন্টা ইনজেকশন পরিমাপ, সর্বোচ্চ এলাকা রেকর্ড করুন। ফলাফলগুলি দেখায় যে ইচিনাকোসাইড পিক এলাকার RSD ছিল 1.16%, যা নির্দেশ করে যে পরীক্ষার সমাধানটি 24 ঘন্টার মধ্যে ভাল স্থিতিশীলতা ছিল।

2.7 পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা পরীক্ষা

সুনির্দিষ্টভাবে 2. 2.2 এর অধীনে ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা অনুযায়ী পরিমাপের জন্য নমুনাগুলি ইনজেকশন করুন এবং সর্বোচ্চ এলাকা রেকর্ড করুন। ফলাফলে দেখা গেছে যে আরএসডিechinacosideভর ঘনত্ব ছিল 1.28%, পদ্ধতির ভাল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা নির্দেশ করে।

2.8 নমুনা পুনরুদ্ধার পরীক্ষা

সুনির্দিষ্টভাবে 1।{2}} মিলি সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা জলের নির্যাসের 9 অংশ পরিমাপ করুন, যোগ করুন 0.8, 1.0, এবং 1.2 মিলি রেফারেন্স দ্রবণ (1.552 mg·mL{{11) }}) যথাক্রমে, একটি জল স্নানে শুষ্কতা বাষ্পীভূত, দ্রবীভূত করার জন্য মিথানল যোগ করুন, এবং একটি 10 মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কের সাথে সামঞ্জস্য করুন; ভালোভাবে ঝাঁকান এবং উচ্চ, মাঝারি এবং নিম্ন ঘনত্বের পরীক্ষার সমাধান প্রস্তুত করতে 0.22 μm মাইক্রোপোরাস ঝিল্লির মাধ্যমে ফিল্টার করুন। সমান্তরালভাবে প্রতিটি ঘনত্বের 3 কপি প্রস্তুত করুন। 2.2 এর অধীনে ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা অনুযায়ী পরিমাপ করুন। সর্বোচ্চ এলাকা রেকর্ড করুন এবং নমুনা পুনরুদ্ধার গণনা করুন। হার ফলাফল সারণী 1 এ দেখানো হয়েছে।

2.9 নমুনা বিষয়বস্তু নির্ধারণ

সুনির্দিষ্টভাবে 2 এর 3 অংশ পরিমাপ করুন। একটি 0.22 μm মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন, এবং 2.2 এর অধীনে ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা অনুযায়ী পরিমাপ করুন। সর্বোচ্চ এলাকা রেকর্ড করুন এবং ইচিনেসাইড সামগ্রী গণনা করুন। ফলাফল সারণি 2 দেখানো হয়.

টেবিল 1 ইচিনাকোসাইডের পুনরুদ্ধার পরীক্ষার ফলাফল

সারণি 2 সিস্তানচে হার্বা জলের নির্যাসে ইচিনাকোসাইডের বিষয়বস্তু নির্ধারণের ফলাফল