Cistanche Deserticola Polysaccharides NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম অ্যাক্টিভেশন বাধা দিয়ে অন্ত্রের বার্ধক্যের উন্নতি করে

 

 

বার্ধক্য একাধিক শারীরবৃত্তীয় ফাংশন ধীরে ধীরে পতনের দিকে পরিচালিত করে এবং বয়স-সম্পর্কিত রোগের ঝুঁকি বাড়ায় [1]। গবেষণায় দেখা গেছে যে বার্ধক্য অন্ত্রের গঠন এবং কার্যকারিতার উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে [২]। হজম, বিপাক এবং ইমিউন ডিফেন্সের মূল অঙ্গ হিসাবে, অন্ত্রের বার্ধক্য পুষ্টির ম্যালাবশোরপশন, বিপাকীয় ব্যাধি এবং প্রতিবন্ধী ইমিউন ফাংশন [3-4] এর কারণ হতে পারে, যার ফলে গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল রোগের সংবেদনশীলতা বৃদ্ধি পায় [5]। দীর্ঘস্থায়ী প্রদাহ অন্ত্রের বার্ধক্যের একটি বৈশিষ্ট্য, তবে এর আণবিক প্রক্রিয়াগুলি এখনও সম্পূর্ণরূপে ব্যাখ্যা করা হয়নি। বর্তমানে, অ্যান্টি-এজিং এজেন্টগুলির মধ্যে প্রধানত বিটা-নিকোটিনামাইড মনোনিউক্লিওটাইড (NMN), র‌্যাপামাইসিন, ডাসাটিনিব প্লাস কোয়ারসেটিন এবং অন্যান্য অন্তর্ভুক্ত রয়েছে [3]। এর মধ্যে, এনএমএন হল অপরিহার্য কোএনজাইম এনএডি+ এর একটি মূল অগ্রদূত, এবং একাধিক গবেষণা নিশ্চিত করেছে যে এটি প্রাকৃতিকভাবে বয়স্ক ইঁদুরের অন্ত্রের বার্ধক্যকে উল্লেখযোগ্যভাবে বিলম্বিত করে; এটি একটি কার্যকরী হস্তক্ষেপ [4-5] হিসাবে ক্ষেত্রে ব্যাপকভাবে স্বীকৃত। অতএব, প্রাসঙ্গিক প্রক্রিয়া এবং হস্তক্ষেপের কৌশলগুলি অন্বেষণ করা অত্যন্ত তাৎপর্যপূর্ণ।

বার্ধক্যজনিত রোগের জন্য সিস্টানচে ওরাল লিকার

এখন যোগাযোগ করুন চীনের সিস্তানচে কৃষকদের সাথে পরিচিত হন

সাপোর্টিভ সার্ভিস অফ ওয়েসিস্তানচে- চীনের বৃহত্তম সিস্টানচে রপ্তানিকারক:
ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

 

 

নিউক্লিওটাইড-বাইন্ডিং অলিগোমারাইজেশন ডোমেন-সদৃশ রিসেপ্টর ফ্যামিলি পাইরিন ডোমেন-ধারণকারী 3 (NLRP3) ইনফ্ল্যামাসোম সহজাত অনাক্রম্যতার একটি মূল নিয়ামক এবং বার্ধক্যজনিত রোগে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। এর সক্রিয়করণের জন্য দুটি সংকেত প্রয়োজন। প্রথম সংকেত: প্যাথোজেন-সম্পর্কিত আণবিক প্যাটার্ন (PAMPs) এবং ক্ষতি-সম্পর্কিত আণবিক প্যাটার্ন (DAMPs) NLRP3 এর অভিব্যক্তি এবং ইন্টারলেউকিন-1 (প্রো-IL-1) এর পূর্বসূরিকে প্ররোচিত করে। দ্বিতীয় সংকেত (যেমন পটাসিয়াম ইফ্লাক্স এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ড্যামেজ) প্রদাহের সমাবেশকে ট্রিগার করে, ক্যাসপেস-1 সক্রিয় করে এবং পরিপক্ক IL-1 এবং IL-18 তৈরি করতে প্রো-IL-1 এবং প্রো-IL-18 ক্লিভ করে, যার ফলে প্রদাহ হয় [6]। বার্ধক্যের সময়, অন্ত্রের হোমিওস্ট্যাসিস ব্যাহত হয়, যার ফলে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি ফ্যাক্টর যেমন লাইপোপলিস্যাকারাইড (এলপিএস) নিঃসৃত হয়, যা ক্রমাগতভাবে NLRP3 প্রদাহকে সক্রিয় করে, দীর্ঘস্থায়ী নিম্ন-গ্রেডের প্রদাহ তৈরি করে। এটি অন্ত্রের বাধা ক্ষতি এবং ডিসবায়োসিসকে আরও বাড়িয়ে তোলে, টাইট জংশন প্রোটিনের অভিব্যক্তিকে পরিবর্তন করে, অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতা বৃদ্ধি করে এবং অন্ত্রের বার্ধক্যকে ত্বরান্বিত করে [7-10]।

Cistanche deserticola, একটি মূল্যবান ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধি এবং খাদ্য-সমজাতীয় ভেষজ যা "মরুভূমির জিনসেং" নামে পরিচিত, এটি কিডনি ইয়াংকে টোনিফাই করে, সার ও রক্তকে পুষ্ট করে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করতে অন্ত্রকে আর্দ্র করে। এর সক্রিয় পলিস্যাকারাইডগুলি অ্যান্টি-এজিং, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং অন্ত্র-প্রতিরক্ষামূলক বৈশিষ্ট্যগুলি প্রদর্শন করে [11-12]। অন্ত্রের সুরক্ষার ক্ষেত্রে, Cistanche deserticola polysaccharides (CDPs) টোল-লাইক রিসেপ্টর 4 (TLR4)/নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর-কাপ্পা বি (NF-κB) পথের সক্রিয়করণকে বাধা দিয়ে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ভারসাম্যকে সংশোধন করতে পারে, যার ফলে LPS স্তরগুলি হ্রাস করে এবং ব্যারিরির 41-3 মেরামত করে। সিডিপিগুলি এএমপি-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস (AMPK)/sirtuin 1 (SIRT1) পথের সক্রিয়করণের মাধ্যমে মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন উন্নত করতে পারে, সেলুলার সেন্সেন্সে বিলম্ব করতে পারে, লিপিড বিপাক নিয়ন্ত্রণ করতে পারে এবং অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে লিপোটক্সিক আঘাতের উপশম করতে পারে [15]।

যদিও সিডিপিগুলির অন্ত্রের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলি প্রদর্শিত হয়েছে, তবে এটি অস্পষ্ট রয়ে গেছে যে তারা এনএলআরপি 3 প্রদাহজনক পথকে দমন করে অন্ত্রের বার্ধক্যকে প্রশমিত করে কিনা। এই অধ্যয়নের লক্ষ্য হল সেই প্রক্রিয়াটি তদন্ত করা যার দ্বারা সিডিপিগুলি NLRP3 প্রদাহজনক সক্রিয়করণকে বাধা দেয়অন্ত্রের বার্ধক্য উন্নত করা.

উপকরণ

 

1.1 পরীক্ষামূলক প্রাণী

পঞ্চাশটি সুস্থ পুরুষ C57BL/6J ইঁদুর (2 মাস বয়সে 10; 20 মাস বয়সে 40) বেইজিং স্পিফু বায়োটেকনোলজি কোং লিমিটেড থেকে কেনা হয়েছিল। উৎপাদন লাইসেন্স: SYXK (বেইজিং) 2023-0011। হেবেই প্রভিন্সিয়াল হসপিটাল অফ ট্র্যাডিশনাল চাইনিজ মেডিসিনের এক্সপেরিমেন্টাল অ্যানিমাল ফ্যাসিলিটিতে প্রাণীদেরকে একটি বাধা পরিবেশে রাখা হয়েছিল: তাপমাত্রা 22 ± 2 ডিগ্রি, আপেক্ষিক আর্দ্রতা 50% ± 10% এবং একটি 12 ঘন্টা আলো/12 ঘন্টা অন্ধকার চক্র। সমস্ত ইঁদুর 1 সপ্তাহের জন্য অভ্যস্ত ছিল। এই অধ্যয়নটি ঐতিহ্যগত চীনা মেডিসিনের হেবেই প্রাদেশিক হাসপাতালের প্রাতিষ্ঠানিক প্রাণী যত্ন এবং ব্যবহার কমিটি (IACUC-HPHCM-2025001) দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।

 

1.2 যন্ত্র এবং বিকারক

 

Cryostat (থার্মো ফিশার; CryoStar NX50)

লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ (নিকন; এএক্স)

রিয়েল-টাইম পিসিআর সিস্টেম (থার্মো ফিশার; 7500)

মাল্টিমোড প্লেট রিডার (টেকান; স্পার্ক)

বিটা-নিকোটিনামাইড মনোনিউক্লিওটাইড (বন্টাক, চীন; বিড়াল। BT05N120A005)

SA- -গাল স্টেনিং কিট (সোলারবিও, বেইজিং; বিড়াল. 250003003)

মাউস LPS ELISA কিট (CUSABIO/Huamei, Wuhan; Cat. CSB-E13066m)

ট্রান্সজল আপ প্লাস আরএনএ কিট (ট্রান্সজেন বায়োটেক, বেইজিং; ক্যাট। ER501-01-V2)

MonAmp ChemoHS qPCR মিক্স (Monad; Cat. MQ00501S)

Lgr5 পলিক্লোনাল অ্যান্টিবডি (উহান স্যানিং; বিড়াল. 30007-1-এপি)

ZO-1 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি, NLRP3 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি, ক্যাসপেস-1 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি, ASC মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি, GAPDH মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি, Ki67 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (Abcam; বিড়াল। ab307799, ab263899, ab1795915, ab30549, ab305458)

পদ্ধতি

 

2.1 Cistanche deserticola পলিস্যাকারাইডের প্রস্তুতি

Cistanche উপাদান (50 গ্রাম) 8-গুণ পরিমাণ জল, প্রতিবার 1 ঘন্টা সঙ্গে ক্বাথ দ্বারা দুবার নিষ্কাশন করা হয়েছিল। ফিল্টারগুলিকে একত্রিত করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা করা হয়েছিল। বৃষ্টিপাতের জন্য 80% এর চূড়ান্ত ঘনত্বে অ্যানহাইড্রাস ইথানল যোগ করা হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, সুপারনাট্যান্টটি বাতিল করা হয়েছিল। বর্ষণটি পানিতে দ্রবীভূত করা হয়েছিল, ডায়ালাইজ করা হয়েছিল, তারপর নমুনা পাওয়ার জন্য লাইওফিলাইজ করা হয়েছিল।

 

2.2 প্রাণীদের গ্রুপিং এবং প্রশাসন

অভিযোজনের পরে, চল্লিশ 20 মাস বয়সী C57BL/6J ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে বরাদ্দ করা হয়েছিল: প্রাকৃতিক বার্ধক্য গ্রুপ, কম-ডোজ CDP গ্রুপ (2.5 g·kg−1), উচ্চ-ডোজ CDP গ্রুপ (5.0 g·kg−1), এবং NMN গ্রুপ (200 mg·kg−1)। একটি অতিরিক্ত দশটি 2 মাস বয়সী SPF C57BL/6J ইঁদুর একটি তরুণ নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী হিসাবে কাজ করেছে। কম এবং উচ্চ সিডিপি ডোজ মৌখিক গ্যাভেজ দ্বারা যথাক্রমে 2.5 g·kg−1 এবং 5.0 g·kg−1 দেওয়া হয়েছিল। শরীরের উপরিভাগের এলাকা রূপান্তর এবং 12 [16] এর একটি মানব-থেকে-মাউস রূপান্তর ফ্যাক্টর ব্যবহার করে, এগুলি প্রাপ্তবয়স্ক ক্লিনিকাল সমতুল্য ডোজ প্রায় 1× এবং 2× এর সাথে মিলে যায়। NMN গ্রুপ গ্যাভেজ দ্বারা NMN 200 mg·kg−1 পেয়েছে। তরুণ নিয়ন্ত্রণ এবং প্রাকৃতিক বার্ধক্য গোষ্ঠী সমান পরিমাণে শারীরবৃত্তীয় স্যালাইন (10 mL·kg−1) পেয়েছে। চিকিত্সা 2 মাস ধরে একটানা পরিচালিত হয়।

 

2.3 হিমায়িত বিভাগের প্রস্তুতি

সোডিয়াম পেন্টোবারবিটাল (30 mg·kg−1) এর ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দ্বারা ইঁদুরকে অবেদন দেওয়া হয়েছিল এবং euthanized করা হয়েছিল। পেটটি দ্রুত খোলা হয়েছিল, মেসেন্টারি আলাদা করা হয়েছিল এবং হিমায়িত অংশগুলির জন্য 5 μm এ ileal টিস্যু সংগ্রহ এবং বিভাগ করা হয়েছিল [17]।

 

2.4 SA- -অন্ত্রের গ্যালাকটোসিডেস কার্যকলাপের জন্য গ্যাল অ্যাস

SA- -গাল কিট নির্দেশাবলী অনুযায়ী স্টেনিং করা হয়েছিল। ইনকিউবেশনের পরে, স্টেনিং দ্রবণটি সরানো হয়েছিল এবং বিভাগগুলি পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। একটি উল্টানো মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে চিত্রগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল।

 

2.5 বার্ধক্য-সম্পর্কিত সিক্রেটরি ফেনোটাইপ (SASP) এর জন্য রিয়েল-টাইম পিসিআর

ট্রান্সজল আপ প্লাস কিট ব্যবহার করে ইলিয়াল টিস্যু থেকে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল। নিম্নোক্ত শর্তে GoScript সিস্টেমের সাথে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল: 15 মিনিটের জন্য 42 ডিগ্রি, 15 মিনিটের জন্য 70 ডিগ্রি, 10 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রি। নিম্নলিখিত সাইক্লিং সহ MonAmp ChemoHS qPCR মিক্স ব্যবহার করে রিয়েল-টাইম পিসিআর পরিচালিত হয়েছিল: 95 ডিগ্রি 10 মিনিট; তারপর 95 ডিগ্রি 15 সেকেন্ডের 40টি চক্র, 60 ডিগ্রি 1 মিনিট। গলিত বক্ররেখা: 95 ডিগ্রী 15 সেকেন্ড, 60 ডিগ্রী 15 সেকেন্ড, 95 ডিগ্রী 15 সেকেন্ড। GAPDH অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স হিসাবে কাজ করেছে, এবং আপেক্ষিক পরিমাণ নির্ধারণ 2^-ΔΔCt পদ্ধতি ব্যবহার করেছে। প্রাইমারগুলি প্রোমেগা থেকে কেনা হয়েছিল। প্রাইমার সিকোয়েন্সগুলি সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে।

 

2.6 ZO-1 এক্সপ্রেশনের জন্য ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং

ইলিয়াল টিস্যু 4% প্যারাফর্মালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল এবং 5 μm এ প্যারাফিন-বিভাগ করা হয়েছিল। বিভাগগুলি 0.3% ট্রাইটন X-100 দিয়ে 15 মিনিটের জন্য ব্যাপ্ত করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য 10% ছাগলের সিরাম দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল। ZO-1 (1:200) এর বিরুদ্ধে প্রাথমিক অ্যান্টিবডি 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি প্রয়োগ করা হয়েছিল। পিবিএস ধোয়ার পরে, সাই 3-কঞ্জুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (1:500) অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। নিউক্লিয়াসকে 5 মিনিটের জন্য DAPI এর সাথে কাউন্টারস্টেইন করা হয়েছিল। স্লাইডগুলি অ্যান্টিফেড মাধ্যম দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছিল এবং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা চিত্রিত হয়েছিল। ইমেজ-প্রো সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.7 Ki67 এবং Lgr5 এক্সপ্রেশনের জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি

Ileal বিভাগগুলি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি Ki67 (1:1000) এবং Lgr5 (1:200) দিয়ে রাতারাতি 4 ডিগ্রীতে IHC কিট প্রোটোকল অনুসরণ করে, তারপর সংশ্লিষ্ট সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল। DAB ক্রোমোজেনিক বিকাশের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। ফলাফলগুলি হালকা মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ইমেজ-প্রো সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে গড় অপটিক্যাল ঘনত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল।

 

LPS স্তরের জন্য 2.8 ELISA

স্ট্যান্ডার্ড এবং নমুনাগুলি (কূপ প্রতি 100 μL) প্লেটে যোগ করা হয়েছিল এবং 1.5 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করা হয়েছিল। এইচআরপি-কঞ্জুগেটেড স্ট্রেপ্টাভিডিন দ্রবণ (কূপ প্রতি 100 μL) তারপর যোগ করা হয়েছিল এবং 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। সাবস্ট্রেটটি হালকা-সুরক্ষিত অবস্থায় যুক্ত করা হয়েছিল এবং 30 মিনিটের জন্য প্রতিক্রিয়া জানানো হয়েছিল। প্রতিক্রিয়া স্টপ দ্রবণ দিয়ে বন্ধ করা হয়েছিল, এবং শোষণ 450 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল।

 

NLRP3, Caspase-1, এবং ASC-এর জন্য 2.9 ওয়েস্টার্ন ব্লট

প্রায় 30 মিলিগ্রাম ইলিয়াল টিস্যু তরল নাইট্রোজেনে স্থল ছিল। প্রোটেজ/ফসফেটেস ইনহিবিটর ধারণকারী RIPA লাইসিস বাফার যোগ করা হয়েছিল; লাইসেটগুলিকে 30 মিনিটের জন্য বরফের উপর সেঞ্চিত করা হয়েছিল এবং সুপারন্যাট্যান্ট সংগ্রহের জন্য 15 মিনিটের জন্য 12,000 × g, 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। প্রোটিনের ঘনত্ব BCA অ্যাস দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল এবং 2 ug/μL এ সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। সমান পরিমাণ প্রোটিন (20-40 ug) SDS-PAGE দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল এবং PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য 5% ননফ্যাট দুধ দিয়ে মেমব্রেনগুলিকে ব্লক করা হয়েছিল, প্রাথমিক অ্যান্টিবডি (NLRP3 1:1000, ক্যাসপেস-1 1:500, ASC 1:1000) দিয়ে রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে, তারপর HRP-সংযোজিত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় h01 (1:5)। TBST ধোয়ার পরে, সংকেত তৈরি করা হয়েছিল। ব্যান্ডের তীব্রতা GAPDH-এ স্বাভাবিক করা হয়েছিল।

 

2.10 পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ

ডেটা গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি হিসাবে প্রকাশ করা হয়। পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ এবং গ্রাফিং যথাক্রমে SPSS 26.0 এবং গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8.0.2 ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। একমুখী ANOVA গ্রুপের মধ্যে পার্থক্য মূল্যায়ন করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল, তারপরে Tukey-এর পোস্ট-হক পরীক্ষা। পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য P <0.05 এ সেট করা হয়েছিল।

 

অন্ত্রের গতিশীলতা এবং পরিপূরক বিকাশে আগ্রহী পাঠকদের জন্য ব্যবহারিক নোট

 

Cistanche deserticola এর কার্যকরী ফোকাস: ঐতিহ্যগতভাবে অন্ত্রকে আর্দ্র করতে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করতে ব্যবহৃত হয়; আধুনিক ডেটা সমর্থন বাধা সমর্থন, প্রদাহ মডুলেশন (TLR4/NF-κB), এবং AMPK/SIRT1 এর মাধ্যমে মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন।

সম্ভাব্য অ্যান্টি-এজিং গাট মেকানিজম এখানে অন্বেষণ করা হয়েছে: NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম অ্যাক্টিভেশনের দমন; LPS-চালিত নিম্ন-গ্রেড প্রদাহ হ্রাস; টাইট জংশন সংরক্ষণ (যেমন, ZO-1); এপিথেলিয়াল প্রসারণ / স্টেমনেস মার্কারগুলির রক্ষণাবেক্ষণ (Ki67, Lgr5)।

ইঁদুরের সাধারণ পরীক্ষামূলক মৌখিক ডোজ: 2.5-5.0 g·kg−1 CDPs 2 মাসের জন্য; ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে NMN 200 mg·kg−1।

অনুবাদমূলক সতর্কতা: মাউস ডোজ সরাসরি মানুষের সুপারিশ নয়। গবেষণায় শরীরের পৃষ্ঠের এলাকা স্কেলিং ব্যবহার করা হয়; পণ্য বিকাশের আগে মানব-সমতুল্য গঠন এবং নিরাপত্তা, পরিচয় পরীক্ষা এবং জিএমপি উত্পাদন প্রয়োজন।