নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি এবং পরীক্ষামূলক বৈধতা TNF/PI3K/Akt পাথওয়ের মাধ্যমে এনএএফএলডির চিকিত্সায় সিস্টানচে ফেনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের যান্ত্রিক ভূমিকা প্রকাশ করে

3. ফলাফল

3.1 নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি

3.1.1 সক্রিয় যৌগ এবং সম্ভাব্য লক্ষ্য

প্রকল্প দলের পূর্ববর্তী গবেষণা এবং ডাটাবেস এবং সাহিত্য থেকে তথ্যের ভিত্তিতে, ফার্মাকোলজিকাল কার্যকলাপ সহ দশটি প্রতিনিধি যৌগ নির্বাচন করা হয়েছিল [10-11]:ভার্বাস্কোসাইড, আইসোভারবাস্কোসাইড, ইচিনাকোসাইড, 2′-এসিটাইল-ভার্বাস্কোসাইড, সিস্টানোসাইড এ, সিস্টানোসাইড বি, স্যালিড্রোসাইড, আইসোক্রেনাটোসাইড II, সিস্টানচে গ্লাইকোসাইড এ, এবং সিস্টানচে গ্লাইকোসাইড এফ.

রক্তের লিপিড চিকিত্সার জন্য উচ্চ বিষয়বস্তু ভার্বাসকোসাইড (অ্যাকটিওসাইড) সিস্টানচে নির্যাস

Cistanche নির্যাস চশমা তালিকা

আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন এখন কিনতে

ব্যবহার করেসুইস টার্গেট প্রেডিকশন, 44 টার্গেট প্রাপ্ত হয়েছে;নেটইনফারশীর্ষ 20 লক্ষ্য ভবিষ্যদ্বাণী, ফলন 45 লক্ষ্য;সুপারপ্রেড118টি লক্ষ্য অর্জন করেছে। সদৃশগুলি মার্জ এবং অপসারণের পরে,195টি অনন্য লক্ষ্যচিহ্নিত করা হয়েছিল।

থেকেGSE89632ডেটাসেট, যার মধ্যে 39টি NAFLD নমুনা এবং 24টি সাধারণ নমুনা অন্তর্ভুক্ত ছিল,589 ভিন্নভাবে প্রকাশিত জিনস্ক্রীন করা হয়েছিল। থেকে তথ্য সমন্বয়জিনকার্ডএবংডিজেনেট, 2,315 NAFLD-সম্পর্কিত রোগের জিনঅনুলিপিকরণের পরে প্রাপ্ত হয়েছিল (চিত্র 1A-1B)। যৌগ-সম্পর্কিত লক্ষ্যগুলিকে রোগের লক্ষ্যগুলির সাথে ছেদ করে,77 ওভারল্যাপিং লক্ষ্যএনএএফএলডি (চিত্র 1 সি) এর বিরুদ্ধে সিস্টানচে ফেনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের সম্ভাব্য থেরাপিউটিক লক্ষ্য হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল।

এই লক্ষ্যবস্তুতে আমদানি করা হয়েছিলSTRING database with an interaction threshold >0.400। বিচ্ছিন্ন নোডগুলি সরানো হয়েছিল, এবং নেটওয়ার্কটি ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিলসাইটোস্কেপ, ফলে a75টি নোড এবং 408টি প্রান্ত সহ PPI নেটওয়ার্ক(চিত্র 1D)। সাইটোস্কেপে "এনালাইজ নেটওয়ার্ক" ফাংশন ব্যবহার করে, ডিগ্রী মানের উপর ভিত্তি করে শীর্ষ 10টি লক্ষ্যকে মূল লক্ষ্য হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল:TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1, HIF1A, STAT1, APP, PRKACA, SMAD3.

3.1.2 GO, KEGG, এবং DO সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ

GO সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণে 93টি শর্ত প্রকাশ করা হয়েছেআণবিক ফাংশন (MF), 38 জন্যসেলুলার উপাদান (CC), এবং 989 এর জন্যজৈবিক প্রক্রিয়া (BP). প্রতিটি বিভাগে শীর্ষ 10টি এন্ট্রি ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিল (চিত্র 2)। ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে সিস্টানচে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডগুলি সম্পর্কিত পথগুলির মাধ্যমে এনএএফএলডি-বিরোধী প্রভাব প্রয়োগ করতে পারেপ্রদাহ, সাইটোকাইনস, বিপাক, এবং ইমিউন প্রতিক্রিয়া.

DO সমৃদ্ধকরণ চিহ্নিত করা হয়েছে833 রোগলক্ষ্যের সাথে যুক্ত, শীর্ষ 25টি ভিজ্যুয়ালাইজড (চিত্র 4) সহবিপাকীয়, ইমিউন, কার্ডিওভাসকুলার, স্থূলতা-সম্পর্কিত এবং হেপাটিক রোগ, সমস্ত NAFLD এর সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত।

3.1.3 "কম্পাউন্ড-টার্গেট-পাথওয়ে" নেটওয়ার্ক

KEGG সমৃদ্ধি ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, ক"যৌগ-লক্ষ্য-পথ" নেটওয়ার্কব্যবহার করে নির্মিত হয়েছিলসাইটোস্কেপ 3.9.1. সবুজ বর্গক্ষেত্রগুলি সক্রিয় যৌগগুলিকে প্রতিনিধিত্ব করে, নীল বৃত্তগুলি লক্ষ্যগুলিকে প্রতিনিধিত্ব করে এবং কমলা V- আকৃতির নোডগুলি পথগুলিকে প্রতিনিধিত্ব করে (চিত্র 5)৷ এটি ব্যাখ্যা করে যে Cistanche phenylethanoid glycosides এর মাধ্যমে NAFLD-বিরোধী প্রভাব প্রয়োগ করেএকাধিক যৌগ, লক্ষ্য এবং পথ, সঙ্গেechinacoside এবং verbascosideএর 2020 সংস্করণে সর্বাধিক প্রচুর এবং তালিকাভুক্ত মার্কার যৌগচাইনিজ ফার্মাকোপিয়া.

3.1.4 আণবিক ডকিং

পিপিআই নেটওয়ার্কের শীর্ষ পাঁচটি মূল লক্ষ্য (TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1) সক্রিয় যৌগগুলির সাথে ডক করা হয়েছিল এবং তাদের ন্যূনতম বাঁধাই শক্তিগুলি গণনা করা হয়েছিল (চিত্র 6)। সব ডকিং স্কোর কম ছিল-6 কিলোক্যালরি/মোল, শক্তিশালী বাঁধাই সম্বন্ধ নির্দেশ করে।TNF দৃঢ় সখ্যতা প্রদর্শন করেছে. কিছু ডকিং ফলাফল ব্যবহার করে কল্পনা করা হয়েছিলপাইমল(চিত্র 7)।

3.2 কোষ পরীক্ষা

3.2.1 HepG2 কোষে লিপিড জমে FFA এর প্রভাব

যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 8, 0.5 থেকে 2 mmol/L পর্যন্ত FFA ঘনত্ব বৃদ্ধির ফলে লাল লিপিড ফোঁটা বৃদ্ধি পায়, যা বৃহৎ লিপিড ফোঁটায় মিশে যায়, যা সফল লিপিড লোডিং নির্দেশ করে।

3.2.2 কোষের কার্যক্ষমতার উপর FFA এবং Cistanche Phenylethanoid Glycosides এর প্রভাব

যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 9A, FFA এর ঘনত্ব1 mmol/L এবং নীচেকোষের কার্যক্ষমতার উপর কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না (P > 0.05); এইভাবে,1 mmol/Lমডেলিংয়ের জন্য বেছে নেওয়া হয়েছিল। যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 9B, Cistanche phenylethanoid glycosides পর্যন্ত200 μg/mLউল্লেখযোগ্যভাবে কার্যকারিতা প্রভাবিত করেনি (P > 0.05), কিন্তু400 μg/mLউল্লেখযোগ্যভাবে বাধাপ্রাপ্ত কার্যক্ষমতা (P <0.01)। অতএব,25, 50, এবং 100 μg/mLচিকিত্সার জন্য কম, মাঝারি এবং উচ্চ ডোজ হিসাবে নির্বাচন করা হয়েছিল।

3.2.3 লিপিড জমার উপর প্রভাব

যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 10, মডেল গ্রুপ কন্ট্রোল গ্রুপের (পি <0.01) তুলনায় উল্লেখযোগ্য লাল লিপিড ফোঁটা জমা প্রদর্শন করেছে, সফল মডেলিং নিশ্চিত করেছে। দিয়ে চিকিৎসা50 এবং 100 μg/mLCistanche phenylethanoid glycosides উল্লেখযোগ্যভাবে লিপিড ফোঁটা গঠন হ্রাস (P <0.01)। ইনচিত্র 11, মডেল গ্রুপে (পি <0.01) টিজি এবং টিসি স্তরগুলি উন্নত করা হয়েছিল, যখন সমস্ত চিকিত্সা গোষ্ঠী মডেল গ্রুপের (পি <0.01) তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস স্তর দেখিয়েছিল।

3.2.4 মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতির উপর প্রভাব

JC-1 ডাই সুস্থ মাইটোকন্ড্রিয়াতে জমা হয় এবং লাল প্রতিপ্রভ নির্গত করে; ক্ষতিগ্রস্ত মাইটোকন্ড্রিয়ায়, এটি মনোমেরিক আকারে থাকে এবং সবুজ প্রতিপ্রভ নির্গত করে। যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 12, কন্ট্রোল গ্রুপে লাল ফ্লুরোসেন্স প্রাধান্য পেয়েছে, যখন মডেল গ্রুপে সবুজ ফ্লুরোসেন্স বিশিষ্ট ছিল। চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলি সবুজ ফ্লুরোসেন্স হ্রাস এবং লাল ফ্লুরোসেন্স বৃদ্ধি করেছে, যা উন্নত মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনা নির্দেশ করে।

3.2.5 অন্তঃকোষীয় ROS স্তরের উপর প্রভাব

যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 13, মডেল গোষ্ঠীটি উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধিপ্রাপ্ত ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা (P <0.01) প্রদর্শন করেছে, যা উন্নত ROS নির্দেশ করে। Cistanche phenylethanoid গ্লাইকোসাইডের সাথে চিকিত্সা সমস্ত ঘনত্বে উল্লেখযোগ্যভাবে ROS মাত্রা হ্রাস করে (P <0.01)।

3.2.6 অ্যাপোপটোসিসের উপর প্রভাব

Hoechst 33342 স্টেন নিউক্লিয়াস, যেখানে অ্যাপোপটোটিক নিউক্লিয়াস উজ্জ্বল নীল, ঘনীভূত বা খণ্ডিত আকারবিদ্যা দেখায়। যেমন দেখা যায়চিত্র 14, কন্ট্রোল গ্রুপে ন্যূনতম উজ্জ্বল ফ্লুরোসেন্স ছিল, যেখানে মডেল গ্রুপ প্রচুর উজ্জ্বল নীল অ্যাপোপটোটিক নিউক্লিয়াস দেখিয়েছিল। চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলি হ্রাস ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা প্রদর্শন করেছে, যা হ্রাসকৃত অ্যাপোপটোসিস নির্দেশ করে।

3.2.7 TNF/PI3K/Akt সিগন্যালিং পাথওয়ে এবং ব্যাক্স এক্সপ্রেশনের উপর প্রভাব

যেমন দেখানো হয়েছেচিত্র 15, নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায়, মডেল গ্রুপ উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত অভিব্যক্তি দেখিয়েছেTNF-α, PI3K p85, Akt, এবং Baxপ্রোটিন (P <0.05, P <0.01)। চিকিত্সার উপর:

সমস্ত সিস্টানচে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড গ্রুপগুলি হ্রাস পেয়েছেTNF-αঅভিব্যক্তি (P <0.01),

দ50 μg/mLগ্রুপ কম দেখানো হয়েছেPI3K p85অভিব্যক্তি (P <0.01),

দ100 μg/mLগ্রুপ কম দেখানো হয়েছেআকট ও বক্সঅভিব্যক্তি (P <0.05)।

4. আলোচনা

এনএএফএলডি একটি জটিল লিভারের রোগ যা বিপাকীয় ব্যাধিগুলির সাথে জড়িতলিপিড বিপাক ভারসাম্যহীনতা, ইনসুলিন প্রতিরোধের, এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস[১২]। সাম্প্রতিক বছরগুলোতে,ঐতিহ্যগত চীনা ঔষধ (TCM)NAFLD এর চিকিৎসায় উল্লেখযোগ্য প্রতিশ্রুতি দেখিয়েছে।

আধুনিক গবেষণায় এমনটাই জানা গেছেCistanche থেকে phenylethanoid glycosidesলিভারে লিপিড এবং গ্লুকোজ বিপাক নিয়ন্ত্রণ করতে পারে এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, প্রদাহ এবং ফাইব্রোসিস [13-15] প্রতিরোধ করতে পারে। লিভার ব্যবহার করেβ-অক্সিডেশনফ্যাটি অ্যাসিড বিপাক এবংCYP7A1লিপিড হোমিওস্টেসিসের জন্য কোলেস্টেরলকে পিত্ত অ্যাসিডে রূপান্তর করতে [16-18]। উচ্চ-চর্বিযুক্ত পরিবেশে, বিপাকীয় ভারসাম্যহীনতা লিপিড জমা এবং এনএএফএলডি [19] এর দিকে পরিচালিত করে।

এই গবেষণাটি তা নিশ্চিত করেছেFFA-প্ররোচিত HepG2 কোষবর্ধিত লিপিড ফোঁটা এবং উন্নত TC এবং TG মাত্রা দেখিয়েছে। Cistanche phenylethanoid glycosides দিয়ে চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে লিপিড ড্রপলেট গঠন এবং TC/TG মাত্রা হ্রাস করে, হেপাটিক স্টেটোসিস উন্নত করে।

মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা β-অক্সিডেশন, অত্যধিক ROS উত্পাদন এবং লিপিড পারক্সিডেশন [20] হ্রাসের দিকে পরিচালিত করে। আরওএস মাইটোকন্ড্রিয়াকে আরও ক্ষতি করে, স্টেটোসিসকে আরও খারাপ করে [২১]। আমাদের ফলাফল দেখায় যে Cistanche phenylethanoid glycosidesROS হ্রাস করুন, উন্নতিমাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনা, এবং উপশমঅক্সিডেটিভ স্ট্রেস, যার ফলে চর্বি জমে প্রশমিত হয়।

নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি নির্দেশ করে যে এনএএফএলডি-বিরোধী প্রভাব একাধিক জড়িতবিপাকীয় এবং অ্যাপোপটোসিস-সম্পর্কিত পথ. আণবিক ডকিং বিশেষত সক্রিয় যৌগ এবং লক্ষ্যগুলির মধ্যে শক্তিশালী বাঁধাই সম্বন্ধ দেখায়টিএনএফ, এর কেন্দ্রীয় ভূমিকার পরামর্শ দিচ্ছে।

দTNF পথকোষ সংকেত মধ্যে গুরুত্বপূর্ণ. TNF-α আবদ্ধTNFR1, ডেথ রিসেপ্টর পাথওয়ে সক্রিয় করে এবং অ্যাপোপটোসিস প্ররোচিত করে [22]। এটি সক্রিয় করেPI3K/Akt পথপ্যারাক্রাইন সংকেতের মাধ্যমে [২৩-২৪]। অস্বাভাবিক PI3K/Akt সংকেত NAFLD [25]-এ লিপিড জমা, প্রদাহ এবং ফাইব্রোসিসের সাথে যুক্ত। আমাদের তথ্য দেখায় যে Cistanche phenylethanoid glycosidesঅ্যাপোপটোসিস বাধা দেয়এবং এর অভিব্যক্তি হ্রাস করুনTNF-α, PI3K, Akt, এবংবাক্স, নেটওয়ার্ক পূর্বাভাসের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, এর গুরুত্ব নিশ্চিত করেTNF/PI3K/Akt পথ.

উপসংহার

Cistanche phenylethanoid glycosides মাধ্যমে NAFLD নিয়ন্ত্রণ করেএকাধিক প্রক্রিয়া এবং পথ, সহ:

লিপিড জমা কমানো,

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বাধা দেয়,

মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতি কমানো,

অ্যাপোপটোসিস দমন।

এই প্রভাবগুলি ঘনিষ্ঠভাবে সংযুক্ত হতে পারেTNF/PI3K/Akt সিগন্যালিং পাথওয়ে. এই গবেষণাটি NAFLD চিকিত্সায় Cistanche phenylethanoid glycosides প্রয়োগের জন্য শুধুমাত্র বৈজ্ঞানিক সহায়তা প্রদান করে না বরং নতুন থেরাপিউটিক ওষুধের বিকাশ এবং ক্লিনিকাল গবেষণার জন্য একটি রেফারেন্সও প্রদান করে।