সিস্টানচে: এন্ডোথেলিয়াল কোষে ইচিনাকোসাইড-প্ররোচিত নাইট্রিক অক্সাইড উৎপাদন: এন্ড্রোজেন রিসেপ্টর এবং PI3K-Akt পাথওয়ের ভূমিকা

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

লি গু, ডানহং লিয়ান, ইমেই ঝেং, ওয়েই ঝু, জিনলেই গু এবং জিন লিউ

ভূমিকা

সিস্তানচেহফমগ। Et Link হল Orobanchaceae পরিবারের একটি বংশের বহুবর্ষজীবী পরজীবী ভেষজ। হারবাসিস্তানচে, এর কান্ডসিস্তানচে মরুভূমিY. গ. এমএ এবংসিস্তানচে টিউবুলোসা(Schenk) R. ওজন, কিডনির ঘাটতি, পুরুষত্বহীনতা, রোগাক্রান্ত লিউকোরিয়া এবং বার্ধক্যজনিত কোষ্ঠকাঠিন্য (1), যা এর অ্যান্ড্রোজেন-সদৃশ বা যৌন হরমোন নিয়ন্ত্রক প্রভাব (2) এর কারণে হতে পারে চিকিত্সার জন্য একটি টনিক এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছে।ইচিনাকোসাইড(EcH; c35H46O20;

আণবিক ওজন, 786.73; চিত্র 1), হেরবার ডালপালা থেকে বিচ্ছিন্ন ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডগুলির মধ্যে একটি (PhGs)সিস্তানচে, এবং অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-এজিং, অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি, হেপাটোপ্রোটেকটিভ এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব সহ একাধিক জৈবিক বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে (3)। আধুনিক ফার্মাকোলজি গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে হারবার বিভিন্ন উপাদানসিস্তানচে, EcH, অ্যাক্টিওসাইড, কানকানোস, কানকানোসাইড এফ এবং সিস্টানোসাইড এফ সহ, ভ্যাসোরেলেক্স্যান্ট কার্যকলাপ প্রদর্শন করে (4)।

এন্ডোথেলিয়াম হল ভাস্কুলেচারের একটি গুরুত্বপূর্ণ নিয়ন্ত্রক, এবং নাইট্রিক অক্সাইড (NO) হল এন্ডোথেলিয়াল কোষ দ্বারা নির্গত একটি গুরুত্বপূর্ণ শিথিল উপাদান। মসৃণ পেশী কোষে ছড়িয়ে পড়ার মাধ্যমে, NO গুয়ানাইলেট সাইক্লেজ সক্রিয় করে, সাইক্লিক গুয়ানোসিন মনোফসফেট (cGMP) এর মাত্রা বাড়ায় এবং তারপর মসৃণ পেশী শিথিলকরণের জন্য cGMP-নির্ভর প্রোটিন কিনেস (PKGs) সক্রিয় করে (5)। এটি পূর্বে প্রমাণিত হয়েছিল যে 350-400 µM এ EcH সরাসরি ভাস্কুলার মসৃণ পেশীতে কাজ করে এবং ইঁদুরের পালমোনারি ধমনী মসৃণ পেশী কোষগুলিতে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত বিস্তারকে বাধা দেয় (6), যেখানে 30-300 µM EcH এন্ডোথেলিয়ামে তীব্র ভাসোরেলেক্সেশন ঘটায়। ঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে অক্ষত রিং, এবং ফেনাইলেফ্রিন (7) দ্বারা সংকুচিত মহাধমনী রিংয়ের কর্পাস ক্যাভারনোসাম মসৃণ পেশীতে বর্ধিত সিজিএমপি উত্পাদন। মসৃণ পেশী কোষগুলিতে NO-cGMP-PKG-BKca চ্যানেলগুলি খোলার মাধ্যমে, 100 বা 300 µM EcH ইঁদুরের পালমোনারি ধমনীতে, বিশেষত এন্ডোথেলিয়াম-ডিনুডেড রিংগুলিতে (8) নোরাড্রেনালিন-প্ররোচিত সংকোচনকে দমন করে। এন্ডোথেলিয়াল কোষ হল কার্ডিওভাসকুলার ফাংশনের মূল নিয়ন্ত্রক এবং বেশ কিছু ক্ষেত্রে দেখা গেছে যে এন্ডোথেলিয়াল-নির্ভর শিথিলতা একটি স্থানান্তরযোগ্য পদার্থ, যেমন NO, এন্ডোথেলিয়াম (9) থেকে নিঃসৃত হওয়ার কারণে হয়েছিল। যাইহোক, ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষে EcH-প্ররোচিত NO উত্পাদনের আপস্ট্রিম আণবিক প্রক্রিয়াটির জন্য আরও তদন্তের প্রয়োজন।

ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়ামে, কোন প্রজন্ম প্রাথমিকভাবে এন্ডোথেলিয়াল NO সিন্থেস (eNOS) দ্বারা মধ্যস্থতা করে না। বেশ কয়েকটি গোষ্ঠী প্রমাণ করেছে যে ফসফ্যাটিডাইলিনোসিটল 3-কাইনেস (PI3K) পথ সেরিন থ্রোনাইন প্রোটিন কিনেস বি (আক্ট) সক্রিয় করে, যা সেরিন 1177 (Ser1177) (10) এ সরাসরি eNOS ফসফোরিলেশন ঘটায়। এন্ড্রোজেন রিসেপ্টর (এআর) হল নিউক্লিয়ার রিসেপ্টর সাবফ্যামিলি s3 এর সদস্য, যা জিনের অভিব্যক্তিকে আদর্শিকভাবে পরিবর্তন করে। কোষের ঝিল্লিতে ক্যাভিওলাতে এআর স্থানীয়করণ জড়িত

c-Src/PI3K/Akt ক্যাসকেড ট্রিগার করে এন্ডোথেলিয়াল সেল ফাংশন বা জিন এক্সপ্রেশনের নন-জিনোমিক নিয়ন্ত্রণ, যা শেষ পর্যন্ত ইএনওএস ফসফোরিলেশন এবং NO উত্পাদন (11) এর ফলাফল করে। মানব মহাধমনী এন্ডোথেলিয়াল কোষে, টেস্টোস্টেরন PI3K/Akt সংকেত সক্রিয় করে এবং কার্ডিওভাসকুলার সিস্টেমে AR এবং PI3K-এর p85 সাবইউনিটের সরাসরি মিথস্ক্রিয়ার কারণে দ্রুত NO উত্পাদন প্ররোচিত করে বলে জানা গেছে (12)। এটি রিপোর্ট করা হয়েছিল যে EcH হরমোনের ঘাটতি-সম্পর্কিত লক্ষণগুলিকে বাড়িয়ে তোলে এবং টেস্টোস্টেরনের পরিবর্তে এআর-এর সাথে প্রতিযোগিতামূলক আবদ্ধ হওয়ার কারণে এর অ্যান্ড্রোজেনের মতো প্রভাবগুলি প্রয়োগ করে (2)। অতএব, বর্তমান গবেষণায় অনুমান করা হয়েছে যে PI3K/Akt পাথওয়ে EcH দ্বারা প্ররোচিত AR-নির্ভর eNOS ফসফোরিলেশনের মাধ্যমে NO উৎপাদনে জড়িত থাকতে পারে। বর্তমান অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল EcH এর নিম্নলিখিত প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করা: i) NO উত্পাদন এবং eNOS ফসফোরিলেশনের আনয়ন; ii) eNOS ফসফোরিলেশনে AR-এর সম্পৃক্ততা; এবং iii) মানুষের নাভির শিরা এন্ডোথেলিয়াল কোষে PI3K/Akt পথের সক্রিয়করণ (HUVEcs), এন্ডোথেলিয়াল কোষের কার্যকারিতা এবং এনজিওজেনেসিস (13) নিয়ন্ত্রণ অধ্যয়নের জন্য একটি সুপরিচিত পরীক্ষামূলক মডেল।

উপকরণ এবং পদ্ধতি

রাসায়নিক এবং বিকারকEcH (বিশুদ্ধতা, 92.5 শতাংশ) ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট ফর দ্য ফুড অ্যান্ড ড্রাগ কন্ট্রোলের জাতীয় ড্রাগ রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। p-Akt (Ser473; cat. no. ab8805), Akt (cat. no. ab81283), p-eNOS (Ser1177; cat. no. ab184154) এবং eNOS (বিড়াল নং. ab76198) অ্যাবক্যাম থেকে কেনা হয়েছিল। নিলুটামাইড এবং আইসিআই 182780 এর ইনহিবিটারগুলি সিগমা-অলড্রিচ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল; মার্ক কেজিএএ। L-NAME কেনা হয়েছিল Adamas-Beta, Ltd. থেকে, এবং wortmannin কেনা হয়েছিল Pribolab থেকে৷

সেল সংস্কৃতি এবং ড্রাগ চিকিত্সাHUVEcs সায়েন্সেল রিসার্চ ল্যাবরেটরিজ ইনকর্পোরেটেড থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং 5 শতাংশ (v/v) ভ্রূণ বোভাইন সিরাম (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) এবং 1 শতাংশ এন্ডোথেলিয়াল কোষের মাধ্যমে এন্ডোথেলিয়াল সেল মিডিয়াম (EcM; Sciencell Research Laboratories) এ সংস্কৃত করা হয়েছিল। বৃদ্ধির পরিপূরক (ECGS) 37˚C (5 শতাংশ CO2 এবং 95 শতাংশ আর্দ্রতা) (14)। সঙ্গমে পৌঁছানোর পরে, কোষগুলিকে ট্রিপসিন দিয়ে হজম করা হয়েছিল এবং 1 শতাংশ FBS এবং 1 শতাংশ EcGS দিয়ে EcM-তে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষার জন্য, HUVEcs 1x104/ml এর ঘনত্বে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং সঙ্গমে পৌঁছানো পর্যন্ত বৃদ্ধি করা হয়েছিল। EcH বা অন্যান্য উদ্দীপক দিয়ে চিকিত্সার আগে, কোষগুলিকে প্ররোচিত করার জন্য 6 ঘন্টার জন্য FBS এবং EcGS ছাড়াই ফেনল রেড-মুক্ত EcM-এ incubated করা হয়েছিল।

বৃদ্ধি গ্রেফতার প্রতিরোধমূলক পরীক্ষা-নিরীক্ষায়, HUVEcs 10 µM নিলুটামাইড, 10 µM IcI 182780, 0.5 mM L-NAME বা 5 µM wortmannin সহ বিভিন্ন প্রতিপক্ষ বা ইনহিবিটরগুলির সাথে প্রাক-ইনকিউবেট করা হয়েছিল। ECH সহ বা ছাড়া, 37˚C তাপমাত্রায়। নিয়ন্ত্রণ সহ সমস্ত গোষ্ঠীতে, ডিএমএসও 0.001 শতাংশের সমান ঘনত্বে দ্রাবক হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

পরিমাপ অন্তঃকোষীয় কোন উৎপাদন.

HUVEcs-এ সাইটোসোলিক NO ঘনত্বের আপেক্ষিক পরিবর্তনগুলি ফ্লুরোসেন্ট NO প্রোব DAF-FM (কেম্যান কেমিক্যাল কোম্পানি) ব্যবহার করে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছিল (12)। সংক্ষেপে, একটি কালো মাইক্রোটাইটার প্লেটে 37˚C তাপমাত্রায় 20 মিনিটের জন্য কোষগুলি 5 µM DAF‑FM ডায়াসেটেট দিয়ে লোড করা হয়েছিল এবং PBS (pH 7.4) দিয়ে কয়েকবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোপ্লেট রিডার (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) এবং একটি কমপ্যাক্ট ইনভার্টেড মাইক্রোস্কোপ (Nikon eclipse Ts2R; Nikon Corporation) ব্যবহার করে যথাক্রমে 495 এবং 515 nm-এর উত্তেজনা এবং নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্যে ফ্লুরোসেন্স নির্ধারণ করা হয়েছিল।

পাশ্চাত্য দাগ বিশ্লেষণপূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছে (15), বরফ-ঠান্ডা পিবিএস-এ কোষের মিলিত মনোলেয়ারগুলিকে দুবার ধুয়ে RIPA বাফার (P0013d; বেয়োটাইম ইনস্টিটিউট অফ বায়োটেকনোলজি) দিয়ে লাইস করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্টে প্রোটিনের ঘনত্ব বিসিনকোনিনিক অ্যাসিড অ্যাস পদ্ধতি (16) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, প্রতি লেনে 30 µg প্রোটিন লোড করা হয়েছিল, 10 শতাংশ পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেল ব্যবহার করে আলাদা করা হয়েছিল এবং পলিভিনিলাইডিন ডাইফ্লুরাইড ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 25˚C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য 5 শতাংশ স্কিমড দুধ দিয়ে ঝিল্লিগুলিকে অবরুদ্ধ করা হয়েছিল। আকট (1:1,000 তরলীকরণ), p-Akt (1:500 dilution), eNOS (1:2,000 dilution), অথবা p-eNOS (1) এর বিরুদ্ধে মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউবেশনের পরে :1,000 ডিলিউশন) রাতারাতি 4˚C তাপমাত্রায়, ঝিল্লিগুলি TBST (0.1 শতাংশ টুইন রয়েছে-20) দিয়ে 4 বার ~15 মিনিটের জন্য 25˚C তাপমাত্রায় ধোয়া হয়৷ পরবর্তীকালে, ঝিল্লিগুলি হর্সরাডিশ পেরোক্সিডেস-কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (1:5,000 ডিলিউশন; অ্যান্টি-মাউস অ্যান্টিবডি, বিড়াল নং A0216, বা অ্যান্টি-র্যাবিট অ্যান্টিবডি, বিড়াল নং A0208, বেয়োটাইম ইনস্টিটিউট) দিয়ে ক্ষরণ করা হয়েছিল বায়োটেকনোলজির) 25˚C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য, এবং একটি উন্নত কেমিলুমিনেসেন্স কিট ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছে (বিড়াল নং 32209, থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক।)। ইমেজ জে জেল বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার, সংস্করণ 1.8 ব্যবহার করে ব্যান্ডের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল৷{43}} (ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ হেলথ)৷

ছোট হস্তক্ষেপ (si) আরএনএ প্রস্তুতি এবং স্থানান্তরদীর্ঘ ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড আরএনএগুলি AR এবং ইস্ট্রোজেন রিসেপ্টর (ER) এর লক্ষ্য এমআরএনএ দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছিল সারণি I-তে দেখানো সিকোয়েন্সের সাথে। siRNA নকডাউনের শর্তে 70 শতাংশ সংগমে HUVECs স্থানান্তরিত করা জড়িত ছিল নন-অ্যান্টিমাইক্রোবিয়ালে বজায় রাখা 60 মিমি কোলাজেন-প্রলিপ্ত সংস্কৃতির খাবারে সংস্কৃতির মাধ্যম। 5 nM AR-siRNA বা 10 nM ER-siRNA লিপোফেক্টামাইন 3000 রিএজেন্ট (ইনভিট্রোজেন; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক.) সহ প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসারে পৃথকভাবে সঞ্চালিত হয়েছিল। ট্রান্সফেকশন দক্ষতা বিপরীত প্রতিলিপি পরিমাণগত-পিসিআর বিশ্লেষণ (RT-qPcR) দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছিল (17)। থার্মো-সাইক্লিং শর্তগুলি নিম্নরূপ ছিল: 95˚C তাপমাত্রায় 10 মিনিট; 5 সেকেন্ডের জন্য 95˚C এবং 1 মিনিটের জন্য 60˚C এর 40টি চক্র এবং 15 সেকেন্ডের জন্য 95˚C, 1 মিনিটের জন্য 60˚C এবং 15 সেকেন্ডের জন্য 95˚C তাপমাত্রায় একটি গলনাঙ্কের বক্ররেখা; প্রতিটি নমুনার জন্য তিনটি স্বাধীন জৈবিক প্রতিলিপি করা হয়েছিল। পরবর্তী পরীক্ষাগুলি স্থানান্তরের 48 ঘন্টা পরে পরিচালিত হয়েছিল। প্রাইমার পেয়ারগুলিকে প্রাইমার প্রিমিয়ার v5.0 সফ্ট-ওয়্যার (প্রিমিয়ার বায়োসফ্ট) ব্যবহার করে নিম্নলিখিত ক্রমগুলির সাথে ডিজাইন করা হয়েছিল: AR ফরোয়ার্ড, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' এবং বিপরীত, 5'-GAcTTGTAGAGAGAcAGGGTAGA-3'; ER ফরোয়ার্ড, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' এবং বিপরীত, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; এবং GAPdH ফরোয়ার্ড, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' এবং বিপরীত, 5'-GGGTGGAATcATATTGGAAcATGT-3'।

পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণসমস্ত ডেটা গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি হিসাবে উপস্থাপিত হয়। একাধিক তুলনার জন্য তুকির পোস্ট হক পরীক্ষার সাথে ক্রুসকাল-ওয়ালিস পরীক্ষা বা দ্বি-মুখী আনোভা ব্যবহার করে গ্রুপগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল। পৃ<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

ফলাফল

ECH প্ররোচিত করে না উত্পাদন এবং eNOSphosphorylation.যেমন চিত্র 2A এবং B-তে দেখানো হয়েছে, 1 µM ECH নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ কোষের তুলনায় HUVEcs-এ আন্তঃকোষীয় NO উত্পাদন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করেছে, যখন EcH-এর উদ্দীপক প্রভাব L-NAME-এর সাথে প্রিট্রিটমেন্টের মাধ্যমে নিয়ন্ত্রণ স্তরে হ্রাস পেয়েছে। সর্বোত্তম ঘনত্ব প্রাপ্ত করার জন্য, ঘনত্বে EcH এর সাথে চিকিত্সার পরে 60 মিনিটে eNOS ফসফোরিলেশন পরীক্ষা করা হয়েছিল

{{0}}, 0৷{7}}1, 0.1, 1 এবং 10 μM৷ ফলাফলগুলি প্রকাশ করেছে যে 0.01‑10 µM ঘনত্বে EcH একটি ঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে Ser 1177-এ উল্লেখযোগ্যভাবে eNOS ফসফোরিলেশন প্ররোচিত করতে পারে, সর্বাধিক eNOS ফসফোরিলেশন 10 µM EcH আনয়ন (চিত্র এবং 2c) এ পরিলক্ষিত হয়। তদ্ব্যতীত, Ser1177-এ eNOS ফসফোরিলেশন 1 μM EcH দিয়ে ইনকিউবেশনের পরে 0, 5, 15, 30, 60 এবং 120 মিনিটে পশ্চিমী ব্লট বিশ্লেষণ দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। এটি দেখা গেছে যে 5 মিনিটে EcH দ্বারা eNOS ফসফোরিলেশন দ্রুত ট্রিগার হয়েছিল এবং 30 মিনিটের ইনকিউবেশন পর্যন্ত বাড়তে থাকে (চিত্র 2E এবং F)। পরবর্তীকালে, EcH চিকিত্সা সত্ত্বেও, eNOS ফসফোরিলেশনের আপেক্ষিক মাত্রা 30 মিনিটের পর থেকে স্থিতিশীল ছিল; অতএব, EcH মোট eNOS অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করেনি (চিত্র 2c এবং E)।

এআর মধ্যস্থতা করে ECH-প্ররোচিত না উত্পাদন এবং eNOSবর্তমান গবেষণায় AR-siRNA-1 এবং ER-siRNA-2-এর হস্তক্ষেপকারী প্রভাবগুলি HUVEcs-এ AR এবং ER-এর প্রকাশকে বাধা দেওয়ার ক্ষেত্রে সবচেয়ে সফল ছিল (চিত্র 3)। পরবর্তীকালে, EcH-প্ররোচিত eNOS অ্যাক্টিভেশন এবং NO উত্পাদনে AR-এর সম্পৃক্ততা মূল্যায়ন করার জন্য AR ইনহিবিশন-অফ-ফাংশন বিশ্লেষণ এবং AR লস-অফ-ফাংশন বিশ্লেষণের জন্য siRNA-এর প্রতিপক্ষকে প্রয়োগ করা হয়েছিল। চিত্র 4A-তে দেখানো হয়েছে, 1 µM ECH উল্লেখযোগ্যভাবে HUVEcs-এ কোন উৎপাদন বৃদ্ধি করেছে (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH সক্রিয় করে দ্য PI3K/Akt পথবর্তমান গবেষণায়, Ser473-এ Akt ফসফোরিলেশন পরীক্ষা করা হয়েছিল 60 মিনিট পর EcH ইনকিউবেশনের ঘনত্বে 0, 0৷{9}}1, 0.1 , 1 এবং 10 µM। ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে EcH (0.{10}} µM) তাৎপর্যপূর্ণভাবে Akt ফসফোরিলেশন প্ররোচিত করতে পারে। P-Akt-এর আপেক্ষিক অভিব্যক্তির মাত্রা EcH চিকিত্সার 1 এবং 10 µM-এ পৌঁছেছে (চিত্র 5A এবং B)। তদ্ব্যতীত, HUVEc সংস্কৃতিতে 1 μM EcH যোগ করার পরে 0, 5, 15, 30, 60 এবং 120 মিনিটে পশ্চিমা ব্লট বিশ্লেষণের দ্বারা Akt ফসফোরিলেশন পরীক্ষা করা হয়েছিল। যেমন চিত্র 5c এবং d-এ দেখানো হয়েছে, EcH 5 মিনিটের ইনকিউবেশনের পরে আক্‌ট ফসফরিলেশনকে দ্রুত বৃদ্ধি করেছে, এবং p-Akt-এর সর্বাধিক প্রোটিন স্তর 60 মিনিটে পরিলক্ষিত হয়েছে। বিপরীতে, EcH মোট Akt অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করেনি (চিত্র 5A এবং c)। তদুপরি, eNOS ফসফোরিলেশনে PI3K পথের সম্ভাব্য প্রভাব তদন্ত করতে, HUVEcs-কে EcH প্রয়োগের আগে PI3K ইনহিবিটর ওয়ার্টম্যানিনের সাথে প্রাক-চিকিত্সা করা হয়েছিল। Wortmannin EcH-প্ররোচিত NO উৎপাদনকে বেসলাইন স্তরে কমাতে পাওয়া গেছে (চিত্র 5E)। EcH-প্ররোচিত DAF-FM ফ্লুরোসেন্স (চিত্র 5F) পরীক্ষা করার সময় ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে একটি অনুরূপ ঘটনা পরিলক্ষিত হয়েছিল। অধিকন্তু, ওয়ার্টম্যানিনের HUVEcs (চিত্র 5G এবং H) দ্রুত ইএনওএস ফসফোরিলেশন বাতিল করার ক্ষমতা থাকতে পারে। পূর্বোক্ত ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে EcH PI3K/Akt পথের মাধ্যমে eNOS ফসফোরিলেশন এবং NO উত্পাদন সক্রিয় করতে পারে।

আলোচনা

EcH হার্বা থেকে বিচ্ছিন্ন একটি প্রাকৃতিক যৌগসিস্তানচে, বিভিন্ন ফার্মাকোলজিকাল বৈশিষ্ট্য সহ। এটি পূর্বে প্রদর্শিত হয়েছিল যে EcH রক্তনালীর মসৃণ পেশী কোষগুলিতে NO-cGMP-PKG-BKca চ্যানেলগুলি খোলার মাধ্যমে একটি এন্ডোথেলিয়াম-নির্ভর ভাস্কুলার শিথিলকরণ প্রভাব প্রয়োগ করেছে (7,8)। বর্তমান অনুসন্ধানগুলি প্রমাণ দেয় যে ECH ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষে PI3K/Akt সিগন্যালিং পাথওয়ের সাথে জড়িত থাকার সাথে NO উত্পাদন প্ররোচিত করার জন্য eNOS-এর AR-নির্ভর সক্রিয়করণ প্রয়োগ করেছে।

জাহাজের প্রাচীরের সবচেয়ে অভ্যন্তরীণ স্তর হিসাবে, এন্ডোথেলিয়াম দ্রুত অনুধাবন করতে পারে এবং রক্ত ​​প্রবাহের পরিবর্তনে প্রতিক্রিয়া জানাতে পারে, ফলস্বরূপ ভাস্কুলার টোন (18) নিয়ন্ত্রণ করার জন্য অন্তর্নিহিত মসৃণ পেশী কোষগুলিতে সংকেত প্রেরণ করে। এটি ব্যাপকভাবে রিপোর্ট করা হয়েছে যে একাধিক এন্ডোথেলিয়াল থেকে প্রাপ্ত ভাসোডিলটরি যৌগ বিদ্যমান, যার মধ্যে সবচেয়ে প্রোটোটাইপিকাল পদার্থ রয়েছেNO হওয়ায়, eNOS এর এন্ডোথেলিয়াল আইসোফর্ম থেকে গঠিত, যার ফলে ফসফোরিলেশন (19) হয়। সাধারণ অবস্থার অধীনে, ক্যাভিওলিনের সাথে আবদ্ধ হলে eNOS নিষ্ক্রিয় থাকে এবং এন্ডোথেলিয়ালের নিম্নলিখিত ঘটনাগুলির সাথে সক্রিয় হয়কোষ: i) eNOS caveolin থেকে বিচ্ছিন্ন হয়-1 এবং ca2 প্লাস /caM এর সাথে যুক্ত হয়; ii) হিট শক প্রোটিন (HSP)90 eNOS প্রচার করেdimerization এবং Akt নিয়োগের জন্য একটি স্টেরিক গঠনের পক্ষে; এবং iii) ক্যালসিনুরিন ডিফসফোরিলেটস Thr495 সক্রিয়করণ অবস্থাকে শক্তিশালী করতে (20)। বর্তমান সমীক্ষায়, 1 µM ECH দিয়ে চিকিত্সা করা HUVEC-তে কোনও উত্পাদন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়নি। এই ঘটনাটি পূর্ববর্তী ফলাফলের অনুরূপ ছিল, যেখানে EcH NO রিলিজ বৃদ্ধি করেছে এবং ইঁদুর বক্ষঃ মহাধমনী রিংগুলিতে cGMP এর সংশ্লেষণকে উদ্দীপিত করেছে (7)। তদ্ব্যতীত, দুটি ফসফরিলেশন সাইট, Ser1177 এবং Thr495, eNOS কার্যকলাপ (20) নিয়ন্ত্রণের জন্য বিশেষভাবে গুরুত্বপূর্ণ বলে মনে হচ্ছে, এবং বর্তমান গবেষণায় প্রকাশ করা হয়েছে যে EcH একটি ঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে Ser1177 এ তীব্র eNOS ফসফোরিলেশনকে প্ররোচিত করেছে। উপরন্তু, eNOS প্রোটিন স্তরের উপর প্রভাবের সাথে যুক্ত উদ্দীপনা প্রধানত eNOS mRNA স্থায়িত্ব নির্ধারণ করে, এবং যদি উদ্দীপনাটি দীর্ঘ সময়ের জন্য বজায় রাখা হয়, eNOS mRNA ট্রান্সক্রিপশনটি মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস এবং নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর κB (20) এর মাধ্যমে ঘটে। একসাথে নেওয়া, এই পর্যবেক্ষণগুলি নির্দেশ করে যে Ser1177 এ eNOS সক্রিয়করণ EcH দ্বারা প্ররোচিত কোন সংশ্লেষণের জন্য দায়ী।

তদ্ব্যতীত, ক্রমবর্ধমান সংখ্যক গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে AR অনেকগুলি মানব টিস্যুতে এন্ডোথেলিয়াল কোষে প্রকাশ করা হয়, যা এন্ড্রোজেন এবং তাদের অ্যানালগগুলির জন্য একটি সম্ভাব্য ভূমিকার পরামর্শ দেয়, যা এআর-মধ্যস্থ প্রক্রিয়ার মাধ্যমে কাজ করে, মানুষের এন্ডোথেলিয়াল মডুলেশনে। সেল হোমিওস্টেসিস (21)। নন-ক্লাসিক্যাল PI3K/Akt পাথওয়েতে, AR সরাসরি PI3K রেগুলেটরি সাবুনিট p85 (22) এর সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করে PI3K সক্রিয় করতে পারে। বর্তমান গবেষণায় দেখা গেছে যে একজন AR বিরোধী বা AR siRNA HUVEcs-এ EcH দ্বারা প্ররোচিত NO উৎপাদন এবং eNOS ফসফোরিলেশনকে হ্রাস করেছে। এটি পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছে যে ইস্ট্রোজেনগুলি ইএনওএস ফসফোরিলেশনকে প্ররোচিত করে এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলিতে ক্লাসিক ER অ্যাক্টিভেশনের মাধ্যমে NO উত্পাদনকে উদ্দীপিত করে (23), এবং ECH এর প্রশাসন জরায়ুতে ER-এর প্রকাশকে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করে (24)। যাইহোক, বর্তমান গবেষণায়, EcH-প্ররোচিত eNOS অ্যাক্টিভেশন এবং NO উত্পাদনে ER এর তুলনায় AR-এর প্রভাব আরও বিশিষ্ট ছিল। উপরন্তু, এটি দেখা গেছে যে EcH HUVEcs-এ AR- জড়িত eNOS অ্যাক্টিভেশনের মাধ্যমে মিনিটের মধ্যে তীব্র NO উত্পাদন ঘটায়, যা এন্ডোথেলিয়াল কোষে প্রতিক্রিয়ার অ-জিনোমিক প্রকৃতির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। AR সাইটোপ্লাজমে HSP90, HSP70 এবং kinase Src সহ স্ক্যাফোল্ডিং প্রোটিনের সাথে যুক্ত, এবং এটি টেস্টোস্টেরন চিকিত্সার (23) 5 মিনিটের মধ্যে AR কমপ্লেক্স থেকে ঝিল্লিতে পরিবহন করা যেতে পারে। 'টার্গেট ফিশিং' কৌশলের উপর ভিত্তি করে, HSP90 কে PhGs-কাপলড টার্গেট হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল, যা ইঙ্গিত দেয় যে EcH স্ক্যাফোল্ডিং প্রোটিন (25) থেকে AR-এর বিচ্ছিন্নকরণকে সহজতর করতে পারে। আরেকটি সমীক্ষায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে, হাইপোথ্যালামাসে, EcH অ্যামিনো অ্যাসিড মেট-894 এবং Val-713 এ এআর পকেটের সাথে একত্রিত হতে পারে এবং নিউক্লিয়াসে সাইটোপ্লাজমিক এআর পরিবহনকে বাধা দিতে পারে (26)। যাইহোক, অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়া যার মাধ্যমে EcH ঝিল্লিতে সাইটোপ্লাজমিক এআর ট্রান্সলোকেশনের মধ্যস্থতা করে তার জন্য আরও তদন্তের প্রয়োজন। অতএব, EcH যে পদ্ধতির মাধ্যমে AR-নির্ভর eNOS অ্যাক্টিভেশন অর্জন করে এবং কীভাবে এটি ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষে HSP90 এর সাথে আবদ্ধ হওয়ার সাথে যুক্ত হতে পারে তা ব্যাখ্যা করার জন্য আরও গবেষণা প্রয়োজন।

PI3K/Akt পাথওয়ে হল সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ সিগন্যালিং ক্যাসকেডগুলির মধ্যে একটি, যেটির সক্রিয়করণ ফসফ্যাটিডাইলিনোসিটল-3,4,5-ট্রাইসফসফেট তৈরি করে Ser/-এর N-টার্মিনাল প্লেকস্ট্রিন হোমোলজি ডোমেনকে আবদ্ধ করার জন্য প্ররোচিত হয় থ্র কেনসে আকত। এটি রক্তরস ঝিল্লি (27) এ আকট নিয়োগের সুবিধা দেয়। PI3K/Akt পাথওয়ে EcH দ্বারা প্ররোচিত NO-নির্ভর শিথিলকরণ নিয়ন্ত্রণে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারে।

বর্তমান সমীক্ষায় প্রকাশ করা হয়েছে যে যখন কোষগুলি PI3K ইনহিবিটর ওয়ার্টম্যানিন দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল তখন EcH-প্ররোচিত NO উত্পাদন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছিল। পূর্ববর্তী একটি প্রতিবেদনে দেখানো হয়েছে যে 15 মিলিগ্রাম/কেজি EcH 5-ফ্লোরোরাসিল-দমন করা অস্থি মজ্জা কোষে PI3K/Akt সংকেত পথকে সক্রিয় করেছে (28)। বর্তমান গবেষণায়, PI3K ইনহিবিটাররা Ser1177 এ EcH-প্ররোচিত eNOS ফসফোরিলেশন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। অধিকন্তু, Akt কার্যকলাপ প্রধানত আপস্ট্রিম নিয়ন্ত্রক পথ দ্বারা নিয়ন্ত্রিত ছিল, বিশেষ করে Ser473 (20) এ PI3K-নির্ভর ফসফোরিলেশন। বর্তমান গবেষণায়, EcH ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে Ser473-এ Akt ফসফোরিলেশনকে প্ররোচিত করেছে; একইভাবে, পূর্ববর্তী একটি গবেষণায় দেখা গেছে যে 5, 10 বা 20 μM EcH সম্ভাব্যভাবে p-Akt এবং SLc8A3 (29) কে আপগ্রেগুলেট করে ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে অ্যানোক্সিয়া/রিপারফিউশন চিকিত্সার বিরুদ্ধে একটি কার্ডিওপ্রোটেক্টিভ প্রভাব প্রয়োগ করেছে। আকট জিনের ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেশন অনেকাংশে অজানা (30); তাই, বর্তমান অধ্যয়নটি Akt-এর উপর EcH-এর পোস্ট-ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেটরি প্রভাবের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে। পূর্বোক্ত ফলাফলগুলিকে বিবেচনায় নিয়ে, এটি অনুমান করা হয়েছিল যে HUVEcs-এ EcH প্রয়োগের ফলে PI3K/Akt পথ সক্রিয় হতে পারে, যা ইএনওএসকে ফসফরিলেট করে এবং পরবর্তীকালে, NO উত্পাদন বৃদ্ধি করে।

উপসংহারে, EcH হল একটি প্রাকৃতিক পণ্য যা মূলত হার্বা থেকে বিচ্ছিন্নসিস্তানচে।এন্ডোথেলিয়াল কোষে EcH-প্ররোচিত NO উত্পাদনের অন্তর্নিহিত সম্ভাব্য প্রক্রিয়ার মধ্যে নিম্নলিখিতগুলি অন্তর্ভুক্ত থাকতে পারে (চিত্র 6): i) EcH AR এর একটি কার্যকরী লিগ্যান্ড হিসাবে কাজ করে যা কোষের ঝিল্লিতে ক্যাভিওলায় স্থানীয়করণ করা হয়; ii) PI3K Ser473-এ Akt-এর হাইড্রোফোবিক ডোমেনের সাথে আবদ্ধ হয় এবং কোষের ঝিল্লিতে Akt নিয়োগের সুবিধা দেয়; iii) PI3K/Akt ক্যাসকেডের নিয়োগ AR-নির্ভর eNOS ফসফোরিলেশনকে ট্রিগার করে; এবং iv) এন্ডোথেলিয়াল কোষে NO এর প্রজন্ম eNOS দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়। পর্যবেক্ষণ যে EcH PI3K/Akt পথের সম্পৃক্ততার সাথে eNOS-এর AR-নির্ভর ফসফোরিলেশনের মাধ্যমে NO উত্পাদনকে প্ররোচিত করে তা EcH-এর ভাসোরেলেক্স্যান্ট প্রভাবগুলিকে আরও বোঝার জন্য অবদান রাখতে পারে। তদ্ব্যতীত, এন্ডোথেলিয়াল থেকে প্রাপ্ত NO পথগুলিকে লক্ষ্য করে EcH অ-জিনোমিক প্রভাবের কারণে হতে পারে। অতএব, বর্তমান অধ্যয়নটি সেই প্রক্রিয়াগুলিকে ব্যাখ্যা করতে সাহায্য করতে পারে যার মাধ্যমে EcH কার্ডিওভাসকুলার রোগ প্রতিরোধে তার ফার্মাকোলজিক্যাল প্রভাব প্রয়োগ করে।

স্বীকৃতি

প্রযোজ্য নয়।

অর্থায়ন

বর্তমান গবেষণাটি চীনের ন্যাশনাল ন্যাচারাল সায়েন্স ফাউন্ডেশন (অনুদান নম্বর 81503333) দ্বারা সমর্থিত ছিল।

উপস্থিতি এর তথ্য এবং উপকরণ

বর্তমান গবেষণার সময় উত্পন্ন এবং বিশ্লেষণ করা ডেটা সেটগুলি যুক্তিসঙ্গত অনুরোধে সংশ্লিষ্ট লেখকের কাছ থেকে পাওয়া যায়।

লেখকদের অবদানসমূহ

এলজি এবং এক্সএল গর্ভধারণ করেছে এবং পরীক্ষাগুলি ডিজাইন করেছে। ডিএল এবং ওয়াইজেড পরীক্ষাগুলি সম্পাদন করেছে। ডাব্লুজেড এবং জেজি ডেটা বিশ্লেষণ করেছে। এলজি পাণ্ডুলিপির খসড়া তৈরি করেছে। XL পাণ্ডুলিপি পর্যালোচনা ও সম্পাদনা করেছে। সব লেখক পড়া এবং চূড়ান্ত পাণ্ডুলিপি অনুমোদিত।

1202 GUইত্যাদি আল: এআর-ডিপেনডেন্ট PI3K/AKT পাথওয়ে দ্বারা ইচিনাকোসাইড নাইট্রিক অক্সাইড উৎপাদনকে প্ররোচিত করে

নৈতিকতা অনুমোদন এবং সম্মতি প্রতি অংশগ্রহণ

প্রযোজ্য নয়।

রোগী সম্মতি জন্য প্রকাশনা

প্রযোজ্য নয়।

প্রতিযোগীতা স্বার্থ

লেখকরা ঘোষণা করেছেন যে, তাদের প্রতিদ্বন্দ্বীতার আগ্রহ নেই।

তথ্যসূত্র

1. চীনা ফার্মাকোপিয়া কমিশন:সিস্তানচেহারবা। ইন: ফার্মাকোপিয়া অফ দ্য পিপলস রিপুলিক অফ চায়না 1. চিন। মেড. বিজ্ঞান প্রেস, বেইজিং, পিপি 135, 2015।

2. জিয়াং জেড, ওয়াং জে, লি এক্স এবং ঝাং এক্স: ইচিনাকোসাইড এবংসিস্তানচে টিউবুলোসা(শেঙ্ক)গোনাড অক্ষ নিয়ন্ত্রিত স্টেরয়েডোজেনিক এনজাইমের মাধ্যমে ইঁদুরে বিসফেনল এ-প্ররোচিত টেস্টিকুলার এবং শুক্রাণুর ক্ষতি কমিয়ে দেয় আর. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016।

3. লিউ জে, ইয়াং এল, ডং ওয়াই, ঝাং বি এবং মাএ এক্স: ইচিনাকোসাইড, স্নায়বিক এবং অন্যান্য রোগের চিকিৎসায় একটি অমূল্য প্রাকৃতিক পণ্য। অণু 23: piiE1213, 2018।

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S এবং Muraoka O: ফেনাইলেথানয়েড অলিগোগ্লাইকোসাইডস এবং অ্যাসিলেটেড অলিগোসুগার যার ভ্যাসোরেল্যাক্স্যান্ট কার্যকলাপ রয়েছেসিস্তানচে টিউবুলোসা. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S এবং Murad F: নাইট্রিক অক্সাইড গুয়ানিলেট সাইক্লেজ সক্রিয় করে এবং বিভিন্ন টিস্যু প্রস্তুতিতে গুয়ানোসিন 3':5'-চক্রীয় মনোফসফেটের মাত্রা বাড়ায়। Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977।

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y এবং Ge RL: হাইপোক্সিয়ার অধীনে ইঁদুরের পালমোনারি ধমনী মসৃণ পেশী কোষগুলিতে ইচিনাকোসাইডের অ্যান্টিপ্রোলিফেরেটিভ প্রভাব। J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014।

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ এবং Tu PF: Echinacoside একটি NO-cGMP পথের মাধ্যমে ইঁদুর মহাধমনী রিংগুলিতে এন্ডোথেলিয়াম-নির্ভর শিথিলতা অর্জন করে। Planta Med 75: 1400-1404, 2009।

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y এবং Ge RL: Echinacoside NO-cGMP-PKG- খোলার মাধ্যমে ইঁদুরের পালমোনারি ধমনী ভাসোরেলেক্সেশন প্ররোচিত করে। BKca চ্যানেল এবং অন্তঃকোষীয় ca2 প্লাস মাত্রা হ্রাস করা। Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015।

9. মারুহাশি টি, কিহারা ওয়াই এবং হিগাশি ওয়াই: এন্ডোথেলিয়াম-স্বাধীন ভাসোডিলেশনের মূল্যায়ন: পদ্ধতি থেকে ক্লিনিকাল দৃষ্টিকোণ পর্যন্ত। জে হাইপারটেনস 36: 1460-1467, 2018।

10. আহমেদ কেএ, জে এইচ, চেন জে, খান এফইউ, চেন এক্স, জু জে এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-প্ররোচিত আঘাতের বিরুদ্ধে মানব নাভির শিরা এন্ডোথেলিয়াল কোষের উপর ডেরিভেটিভ: অ্যান্টিঅক্সিডেশন এবং PI3k/Akt/eNOS/NO সংকেত পথের জড়িত। বায়োমেড ফার্মাকোথার 106: 1734-1741, 2018।

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y এবং Okabe T: Src kinase-mediates androgen receptor-নির্ভর সিগন্যালিং ক্যাসকেডের নন-জিনোমিক অ্যাক্টিভেশন যা এন্ডোথেলিয়াল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেসের দিকে পরিচালিত করে . বায়োকেম বায়োফ রেস কমিউন 424: 538-543, 2012।

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y এবং Okabe T: ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষে এন্ডোথেলিয়াল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেসের এন্ড্রোজেন রিসেপ্টর-নির্ভর সক্রিয়করণ: ফসফ্যাটিডিলিনোসিটলের ভূমিকা {{3} }kinase/Akt pathway. Endocrinology 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F এবং Reno F: HUVEc-তে ভিটামিন ডি দ্বারা প্ররোচিত NO-নির্ভর বিস্তার এবং স্থানান্তর। জে স্টেরয়েড বায়োকেম 149: 35-42, 2015।

14. He Y, Luan Z, Fu X এবং Xu X: আনকপলিং প্রোটিন 2-এর অতিরিক্ত এক্সপ্রেশন মানুষের নাভির শিরা এন্ডোথেলিয়াল কোষের উচ্চ গ্লুকোজ-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দেয়। Int J Mol Med 37: 631-638, 2016।

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z এবং Bing S: Icariin হোমোসিস্টাইন-প্ররোচিত এন্ডোথেলিয়াল সেলুলার সেন্সেন্স বিলম্বিত করে যার সাথে PI3K/AKT-eNOS সিগন্যালিং পাথের সক্রিয়করণ জড়িত। ফার্ম বায়োল 51: 433-440, 2013।

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ এবং Klenk dc: বিসিনকোনিনিক অ্যাসিড ব্যবহার করে প্রোটিনের পরিমাপ। অ্যানাল বায়োকেম 150: 76-85, 1985।

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H এবং Liu X: ট্রাইটারপেনয়েড জৈব সংশ্লেষণ এবং নিমজ্জিত গাঁজনে নাইট্রিক অক্সাইড দ্বারা উদ্ভূত ট্রান্সক্রিপশনাল প্রতিক্রিয়াগ্যানোডার্মা লুসিডাম. প্রক্রিয়া বায়োকেম 60: 19-26, 2017।

18. এলিনসওয়ার্থ ডিসি, স্যান্ডো এসএল, শুক্লা এন, লিউ ওয়াই, জেরেমি জেওয়াই এবং গুটারম্যান ডিডি: এন্ডোথেলিয়াম থেকে প্রাপ্ত হাইপারপোলারাইজেশন এবং করোনারি ভাসোডিলেশন: ইপোক্সি-আইকোস্যাট্রিয়েনোইক অ্যাসিড, হাইড্রোজেন পারজানশন এবং গ্যাপ এর বিভিন্ন এবং সমন্বিত ভূমিকা। মাইক্রোসার্কুলেশন 23: 15-32, 2016।

19. ফ্রিড জেকে এবং গুটারম্যান ডিডি: যোগাযোগের মূল বিষয়: ভাসোডিলেশনে আন্তঃকোষীয় সংকেতের প্রক্রিয়া। জে কার্ডিওভাস্ক ফার্ম 69: 264-272, 2017।

20. কুইলন এ, ফ্রোমি বি এবং ডেব্রেট আর: এন্ডোথেলিয়াম মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট সেন্সিং যা নাইট্রিক অক্সাইড মধ্যস্থিত ভাসোডিলেশনের দিকে পরিচালিত করে: স্নায়বিক এবং বায়োমেকানিকাল সংকেতগুলির একটি পর্যালোচনা। নাইট্রিক অক্সাইড 45: 20-26, 2015।

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS এবং Smith GJ: মানুষের এন্ডোথেলিয়াল কোষে এন্ড্রোজেন রিসেপ্টর। J Endocrinol 224: 131-137, 2015।

22. deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H এবং Gui YT: অ্যান্ড্রোজেনের নন-জিনোমিক ক্রিয়া দ্রুত ফসফোরিলেশন এবং অ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টর পাচারের নিয়ন্ত্রণ দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়। সেল ফিজিওল বায়োকেম 43: 223-236,2017।

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, Costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP এবং Ghedini Pc: PI3K/Akt পাথওয়ের সক্রিয়করণ ইস্ট্রোজেন রিসেপ্টর দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়েছে। সিজিএমপি সিগন্যালিং এর ভাস্কুলার অ্যাক্টিভেশন। ভাস্কুল ফার্মাকোল 110: 42-48, 2018।

24. লি এফ, ইয়াং এক্স, ইয়াং ওয়াই, গুও সি, ঝাং সি, ইয়াং জেড এবং লি পি: ডিম্বাশয় ইঁদুরের ইচিনাকোসাইডের অ্যান্টিওস্টিওপোরোটিক কার্যকলাপ। ফাইটোমেডিসিন 20: 549-557, 2013।

25. জেং কেডব্লিউ, লিয়াও এলএক্স, ওয়ান ওয়াইজে, জিয়াং ওয়াই এবং তু পিএফ: ফার্মাকোলজিকাল লক্ষ্য সনাক্তকরণ এবং এর থেকে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের কার্যকারিতা বিশ্লেষণসিস্তানচহারবা 'টার্গেট ফিশিং' কৌশলের উপর ভিত্তি করে। চিন ট্র্যাডিট ভেষজ ওষুধ 49: 173-178, 2018।

26. জিয়াং জেড, ঝোউ বি, লি এক্স, কিরবি জিএম এবং ঝাং এক্স: ইচিনাকোসাইড হাইপোথ্যালামিক অ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টরকে লক্ষ্য করে ইঁদুরের শুক্রাণুর পরিমাণ বাড়ায়। Sci Rep 8: 3839-3850, 2018।

27. কফার পিজে, জিন জে এবং উডজেট জেআর: প্রোটিন কিনেস বি (সি-আক্ট): ফসফ্যাটিডিলিনোসিটল 3-কাইনেস অ্যাক্টিভেশনের একটি বহুমুখী মধ্যস্থতাকারী। বায়োকেম জে 335, 1-13, 1998।

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y এবং Qian J: Echinacoside 5- FU-প্ররোচিত মাইলোসপ্রেশন ইঁদুরে হেমাটোপয়েটিক ফাংশন উন্নত করে৷ জীবন বিজ্ঞান 123: 86-92, 2015।

29. চেন এম, ওয়াং এক্স, হু বি, ঝোউ জে, ওয়াং এক্স, ওয়েই ডব্লিউ এবং ঝোউ এইচ: পি-একেটি এবং এসএলসি8এ3 আপ-নিয়ন্ত্রিত করার মাধ্যমে H9c2 কোষে অ্যানোক্সিয়া/রিপারফিউশন আঘাতের বিরুদ্ধে ইচিনাকোসাইডের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব। বায়োমেড ফার্মাকোথার 104: 52-59, 2018।

30. আবেরাথনা পি এবং সু ওয়াই: কার্ডিওভাসকুলার ফাংশনে আকটের গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা। ভাস্কুল ফার্মাকোল 74: 38-48, 2015।