বিটা ভালগারিস রুব্রা এল. (বিটরুট) পিল মিথানল এক্সট্র্যাক্ট অক্সিডেটিভ স্ট্রেস কমায় এবং H2O2 প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেসড হিউম্যান এমবিলিকাল ভেইন এন্ডোথেলিয়াল কোষে ভিইজিএফ এক্সপ্রেশন বৃদ্ধির মাধ্যমে কোষের বিস্তারকে উদ্দীপিত করে

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

বিমূর্ত:খাদ্যতালিকায় উপস্থিত পলিফেনল এবং ফ্ল্যাভোনয়েডের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির (ROS) বিকাশকে আটকাতে এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস/প্ররোচিত নেক্রোসিস থেকে এন্ডোথেলিয়াল মসৃণ পেশী কোষগুলিকে রক্ষা করতে সহায়তা করে। বিটরুট (বিটা ভালগারিস ভার। রুব্রা এল.; বিভিআর) একটি সাধারণভাবে খাওয়া সবজি যা অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের সমৃদ্ধ উৎসের প্রতিনিধিত্ব করে। বিটরুটের খোসার বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ এবং মানুষের নাভির শিরার এন্ডোথেলিয়াল কোষে (HUVECs) তাদের ভূমিকা নিয়ে এখনও গবেষণা করা হয়নি। বর্তমান গবেষণায়, বিটরুট পিল মিথানল এক্সট্র্যাক্ট (বিপিএমই) প্রস্তুত করা হয়েছিল, এবং এর জৈব-কার্যকারিতা, পারমাণবিক অখণ্ডতা, মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতা, ভাস্কুলার কোষের বৃদ্ধি এবং ইমিউনোরেগুলেশন-সম্পর্কিত জিন এক্সপ্রেশন লেভেলের উপর প্রভাব ছিল প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সহ HUVECs-এ। . গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি-ম্যাস স্পেকট্রোস্কোপি (GC-MS) ফলাফল নিশ্চিত করেছে যে BPME-এ রয়েছে 5-হাইড্রোক্সিমিথিলফারফুরাল (32.6 শতাংশ), মিথাইল পাইরুভেট (15.13 শতাংশ), ফুরফুরাল (9.98 শতাংশ), এবং 2,3-ডাইহাইড্রো{{{13} 14}},5-ডাইহাইড্রক্সি-6-মিথাইল-4এইচ-পাইরান-4-একটি (12.4 শতাংশ)। BPM নির্যাস কার্যকরভাবে কোষের বিস্তারকে উন্নত করেছে এবং MTT পরীক্ষা দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছে; পারমাণবিক অখণ্ডতা প্রপিডিয়াম আয়োডাইড （PI） স্টেনিং অ্যাস দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল; মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল (Aψm) JC-1 স্টেনিং অ্যাস দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল৷ অ্যানেক্সিন ভি অ্যাসে নিশ্চিত করেছে যে বিপিএমই-চিকিত্সা করা এইচইউভিইসিগুলি 99 শতাংশ কার্যকর কোষ দেখিয়েছে, তবে কেবলমাত্র H2O2 দিয়ে চিকিত্সা করা HUVECগুলিতে মাত্র 39.8 শতাংশ কার্যকারিতা দেখানো হয়েছে। এছাড়াও, 48 ঘন্টার জন্য HUVEC-এর BPME চিকিত্সা লিপিড পারক্সাইড (LPO) এর mRNA প্রকাশ হ্রাস করে এবং NOS-3, Nrf-2, GSK-3, GPX, এন্ডোথেলিয়াল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস (eNOS) বৃদ্ধি করে ), এবং ভাস্কুলার সেল গ্রোথ ফ্যাক্টর (VEGF) mRNA এক্সপ্রেশন লেভেল। আমরা দেখতে পেয়েছি যে বিপিএমই চিকিত্সা প্রইনফ্ল্যামেটরি হ্রাস করেছে (নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর-কে (এফকে), টিস্যু নেক্রোসিস ফ্যাক্টর- (টিএনএফ-), টোল-লাইক রিসেপ্টর-4(টিএলআর-4), ইন্টারলিউকিন-1 ( IL-1 ))এবং ভাস্কুলার প্রদাহ (অন্তঃকোষীয় আনুগত্য অণু (ICAM), ভাস্কুলার কোষ আনুগত্য অণু (VCAM), EDN, IL-1)-সম্পর্কিত mRNA অভিব্যক্তি। উপসংহারে, বীটরুটের খোসার চিকিত্সা কার্যকরভাবে ভাস্কুলার মসৃণ কোষের বৃদ্ধির কারণ এবং মাইক্রোটিউবিউলের বিকাশ বৃদ্ধি করে, যেখানে এটি ভাস্কুলার প্রদাহ নিয়ন্ত্রককে হ্রাস করে। BPM ভাস্কুলার মসৃণ কোষের পুনর্জন্ম, টিস্যু মেরামত এবং অ্যান্টি-এজিং সম্ভাবনার জন্য উপকারী হতে পারে।

কীওয়ার্ড:beetroot; অক্সিডেটিভ স্ট্রেস; মাইটোকন্ড্রিয়া; এনজিওজেনেসিস; প্রদাহ

1। পরিচিতি

অ্যাঞ্জিওজেনেসিস হল শরীরের বিদ্যমান ভাস্কুলেচার থেকে ভাস্কুলোজেনেসিসের শারীরবৃত্তীয় প্রক্রিয়া। এটি শুধুমাত্র ভ্রূণের বিকাশ এবং প্রজননের জন্যই নয়, কোষ চক্র এবং টিস্যু মেরামতের জন্যও প্রয়োজনীয় [2,3]। যাইহোক, এটি বিভিন্ন রোগের প্যাথোজেনেসিসের সাথে যুক্ত, যেমন টিউমার বৃদ্ধি, রিউমাটয়েড আর্থ্রাইটিস এবং বিভিন্ন ইস্কেমিক এবং প্রদাহজনিত রোগ [3-5]। ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াম রক্তনালীর স্বন এবং অনাক্রম্যতা এবং প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে ভাস্কুলার হেমোস্ট্যাসিস বজায় রাখতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে [6,7]।পিউরিটান ভিটামিন সিএন্ডোথেলিয়াল কোষ (ECs) হল পাতলা এককোষী স্তর যা রক্তনালীগুলির সমস্ত অভ্যন্তরীণ পৃষ্ঠকে লাইন করে এবং বিভিন্ন ধরনের অণু তৈরি করে যা স্থানীয়ভাবে বা দূরবর্তী স্থানে কাজ করে [7]। এন্ডোথেলিয়াম শরীরের হোমিওস্টেসিসের জন্য মৌলিক, এবং এন্ডোথেলিয়াম কোষের প্রতিক্রিয়ার কোনো পরিবর্তন প্রদাহজনক এবং ভাস্কুলার রোগের প্রক্রিয়াগুলির প্রাথমিক ঘটনাগুলির দিকে পরিচালিত করে, যেমন এথেরোস্ক্লেরোসিস এবং উচ্চ রক্তচাপ [6,8,9]। এই রোগগুলি অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সৃষ্টি করে, যা ইসি গঠন এবং ফাংশনের অখণ্ডতাকে পরিবর্তন করে এবং এন্ডোথেলিয়াল কর্মহীনতার দিকে পরিচালিত করে [9]। হিউম্যান এমবিলিকাল ভেইন ইসি (এইচইউভিইসি) মানুষের ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াম-সম্পর্কিত গবেষণার মডেল হিসেবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে। তদুপরি, তারা এন্ডোথেলিয়াম ফাংশনের সাথে জড়িত প্রধান জৈবিক পথগুলি অধ্যয়নের জন্য একটি দরকারী মডেল উপস্থাপন করে [10]।

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ এবং ফাইটোকেমিক্যাল প্রচুর পরিমাণে ফল, শাকসবজি, সবুজ ভেষজ এবং অনেক উদ্ভিদে পাওয়া যায়, যা অনেক স্বাস্থ্য উপকারিতা প্রদর্শন করে, যেমন প্রদাহ বিরোধী, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টিকার্সিনোজেনিক এবং অ্যাঞ্জিওজেনিক বৈশিষ্ট্য [11-13]। এই বিষয়ে, লাল বিটরুট (বিটা ভালগারিস ভার। রুব্রা এল.; বিভিআর) অ্যামরানথাসি পরিবারের অন্তর্গত এবং উচ্চ মাত্রার অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের অন্যতম সেরা উৎস হিসেবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয় [14,15। বিশেষত, এতে একাধিক ফাইটোকেমিক্যাল রয়েছে যা জৈবিকভাবে সক্রিয়, যার মধ্যে রয়েছে বেটালাইনস, ফ্ল্যাভোনয়েড, পলিফেনল, থেরাপিউটিক এনজাইম, অ্যাসকরবিক অ্যাসিড, ডিহাইড্রোয়াসকরবিক অ্যাসিড (ডিএইচএএ), এবং অজৈব নাইট্রেট (NO3)[16-18]। অধিকন্তু, এটি মূল্যবান প্রয়োজনীয় পুষ্টি সরবরাহ করে, যেমন পটাসিয়াম, ক্যালসিয়াম, ম্যাগনেসিয়াম, সোডিয়াম, আয়রন, জিঙ্ক, ফসফরাস, তামা এবং ম্যাঙ্গানিজ [১৯]। বেশ কিছু গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে যে লাল বিটরুটের নির্যাস (মূল) এর হাইপোগ্লাইসেমিক, লিপিড-হ্রাসকারী, প্রদাহরোধী, অ্যান্টিহাইপারটেনসিভ এবং অ্যান্টিপ্রোলিফারেটিভ বৈশিষ্ট্যের কারণে অনেক উপকারী প্রভাব রয়েছে [20-22]।sistancheএই উপকারী বৈশিষ্ট্যগুলিকে বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলির ফ্রি র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতার সাথে যুক্ত করা যেতে পারে। এইভাবে, লাল বিটরুট খাওয়ার সাথে অনেক পুষ্টি এবং স্বাস্থ্য উপকারিতা যুক্ত করা হয়েছে। এর পুষ্টির মানের কারণে, এটি অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বিরুদ্ধে কার্যকরী খাদ্য উত্স হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে যা দীর্ঘস্থায়ী বিপাকীয় রোগকে প্ররোচিত করে, যেমন টাইপ 2 ডায়াবেটিস এবং কার্ডিওভাসকুলার রোগ [২৩]।

সাহিত্য পর্যালোচনার উপর ভিত্তি করে, বিটা ভালগারিস শক্তিশালী অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, ইমিউনোরেগুলেটরি এবং অ্যাঞ্জিওজেনিক বৈশিষ্ট্যের অধিকারী। বীট পাতায় Apigenin পাওয়া গেছে; এটির লিভার এবং অন্ত্রের কোষগুলিতে অ্যান্টিপ্রোলিফারেটিভ প্রভাব রয়েছে এবং এটি AMPK অ্যাক্টিভেশন [24,25] এর মাধ্যমে উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য-প্ররোচিত স্থূলতা কমোরবিডিটি উন্নত করতে পারে। ডি সিলভা এট আল।, (2020) [26] সনাক্ত করেছে যে বিটা ভালগারিস বাহ্যিকভাবে প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে ভাস্কুলার ইসিকে রক্ষা করে, যা এই উদ্ভিদে উপস্থিত বেশ কয়েকটি বায়োঅ্যাকটিভ যৌগের সম্মিলিত প্রভাবের কারণে হতে পারে। এখন পর্যন্ত, বিটা ভালগারিস রুট পিলের ইসি প্রসারণ এবং অ্যাঞ্জিওজেনেসিস প্রভাবের জন্য যান্ত্রিক ক্রিয়াটি কম-গবেষণা করা হয়েছে। তাই, আমরা বর্তমান অধ্যয়নটি পরিচালনা করার লক্ষ্য নিয়েছিলাম ভাস্কুলার কোষের বিস্তার, মাইক্রোটিউবুল ডেভেলপমেন্ট, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং এইচইউভিইসি-তে সেলুলার রূপবিদ্যা এবং জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ ব্যবহার করে বিটা ভালগারিস রুট পিলের সাথে সম্পর্কিত অ্যাঞ্জিওজেনেসিস ক্ষমতা পরীক্ষা করার জন্য। মানুষের ভাস্কুলার ইসি-তে পারমাণবিক অখণ্ডতা, মাইক্রোটিউবুল ডেভেলপমেন্ট, মাইটোকন্ড্রিয়াল দক্ষতা এবং কোষ চক্র উদ্দীপনার সাথে যুক্ত লাল বিটরুটের খোসার মিথানল নির্যাসের অ্যাঞ্জিওজেনিক প্রভাবগুলি অন্বেষণ করা হয়েছে।

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1.বিটরুট (বিটা ভালগারিস রুব্রা এল.) মিথানল নির্যাস তৈরি

তাজা বিটরুটের নমুনা (বিটা ভালগারিস ভার। রুব্রা এল.; বিভিআর) প্রাথমিকভাবে সৌদি আরবের রিয়াদ রাজ্যে (কেএসএ) সবজির দোকান থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ডালপালা এবং দূষকগুলি দূর করতে তাজা বিটরুটগুলি পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। বাইরের চামড়া খোসা ছাড়ানো এবং ছোট টুকরা করা হয়. নমুনাগুলিকে একটি গরম বাতাসের চুলায় 40 ডিগ্রিতে শুকানো হয়েছিল এবং তারপরে একটি ইলেকট্রনিক ব্লেন্ডার ব্যবহার করে পাউডারে গ্রাউন্ড করা হয়েছিল। তারপরে, 500 গ্রাম পাউডারটি একটি জীবাণুমুক্ত বোতলে 1 লিটার মিথানল (সিগমা, সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) 24 ঘন্টার জন্য শেকারে ঘরের তাপমাত্রায় বের করা হয়েছিল এবং তিনবার পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল। পরবর্তীতে, নির্যাস ফিল্টার করতে একটি হোয়াটম্যান ফিল্টার (হোয়াটম্যান, ক্লিফটন, এনজে, ইউএসএ) ব্যবহার করা হয়েছিল। অবশেষে, চাপ কমিয়ে, নির্যাস থেকে দ্রাবককে আলাদা করা হয়েছিল এবং মিথানলের বাষ্পীভবনের পরে নির্যাসটি একটি কঠিন শুষ্ক পদার্থ হিসাবে সংগ্রহ করা হয়েছিল। নিষ্কাশিত নমুনাটি পরবর্তী ব্যবহার না হওয়া পর্যন্ত 4C তাপমাত্রায় একটি রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

2.2। গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি এবং ভর স্পেকট্রোস্কোপি বিশ্লেষণ

বীটরুট পিল মিথানল নির্যাস (BPME) GC-MS যন্ত্রের (Agilent 6890N/5973I) একটি সিলিকা কৈশিক কলামে (30 m×0.25 মিমি ID×0.25 um ফিল্ম পুরুত্ব) ইনজেক্ট করা হয়েছিল , ক্যালিফোর্নিয়া, CA, USA) রাসায়নিক সংমিশ্রণ সনাক্ত করতে একটি গণ নির্বাচনী ডিটেক্টর সহ। যন্ত্রটির তাপমাত্রা প্রাথমিক 70 ডিগ্রী হিসাবে সেট করা হয়েছিল, 2 মিনিট ধরে, 20 ডিগ্রী / মিনিটে 305 ডিগ্রী ধরে, তারপরে 1 মিনিট ধরে রাখা হয়েছিল। হিলিয়াম গ্যাস (99.999 শতাংশ) ক্যারিয়ার গ্যাস (1.2 মিলি/মিনিট একটি ধ্রুবক প্রবাহের হার), ইনজেক্টর তাপমাত্রা হিসাবে 250 ডিগ্রি এবং আয়ন উত্স তাপমাত্রা হিসাবে 230 ডিগ্রি সহ মোট GC চলমান সময় 45 মিনিটে সেট করা হয়েছিল। GC-MS স্পেকট্রামের উপর ভিত্তি করে, সংশ্লিষ্ট উপাদানের আপেক্ষিক শতাংশ গণনা করা হয়েছিল, এবং ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ স্ট্যান্ডার্ড অ্যান্ড টেকনোলজিতে উপলব্ধ পরিচিত 62,{22}} প্যাটার্নগুলির সাথে তুলনা করে অজানা উপাদানের ভর বর্ণালী চিহ্নিত করা হয়েছিল কম্পিউটার লাইব্রেরি (NIST08)।

Cistanche বিরোধী বার্ধক্য করতে পারেন

2.3। কোষ সংস্কৃতি উপকরণ এবং রাসায়নিক

HUVECs আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন (ATCC, Manassas, VA, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। সেল কালচারের উপকরণ যেমন Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), EDTA, ট্রিপসিন এবং অন্যান্যগুলি Gibco (Paisley, UK) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন (পিএস) এবং ফেটাল বোভাইন সিরাম (এফবিএস) হাইক্লোন ল্যাবরেটরিজ, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র থেকে কেনা হয়েছিল।cistanche কিআণবিক জীববিজ্ঞান পরীক্ষায় ব্যবহৃত রাসায়নিকগুলি সিগমা-অলড্রিচ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল, বিশেষ করে, এমটিটি [3-(4,5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-ইএল)-2,5- diphenyltetrazolium bromide], PI, এবং JC-1 দাগ। এসওয়াইবিআর গ্রিন পিসিআর মাস্টার মিক্স এবং সিডিএনএ সংশ্লেষণ কিট কিয়াগেন (হিলডেন, জার্মানি) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।

2.4.HUVECs

HUVEC গুলিকে DMEM-এ সংস্কৃত করা হয়েছিল এবং 1 শতাংশ PS এবং 10 শতাংশ FBS কমপ্লেক্সের সাথে সম্পূরক ছিল৷ কোষগুলি একটি আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 37C, 5 শতাংশ CO, এবং প্রায় প্রতি 3 দিনে উপ-সংস্কৃতির মধ্যে ক্ষয়প্রাপ্ত হয়।

2.5। এমটিটি অ্যাসে দ্বারা কোষের কার্যক্ষমতা এবং কোষের বিস্তার

HUVECs(1×104টি কোষ/ওয়েল) একটি রক্ষণাবেক্ষণের মাধ্যম দিয়ে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং একটি 96-ওয়েল কালচার প্লেটে রাতারাতি লেগে থাকতে দেওয়া হয়েছিল৷ তারপর, মাধ্যমটিকে একটি নতুন সংস্কৃতি মাধ্যম দিয়ে প্রতিস্থাপিত করা হয়েছিল যাতে BPME(0,0৷{8}}5,{{10}}.1,0.2 এর ক্রমবর্ধমান ঘনত্ব রয়েছে 0.4,0.8,1.6 এবং 3.2ug/mL) MTT অ্যাস প্লেট ম্যাপ অনুযায়ী এবং 24 এবং 48 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়; চিকিত্সা না করা কোষগুলি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। ইনকিউবেশন পিরিয়ডের পরে, পরীক্ষামূলক কোষগুলিকে 20 μL/ওয়েল 5 mg/mL MTT （3-【4,5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-yl】-2 দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, 5-ডাইফেনিল্টেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড যা ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO)) দ্রবীভূত হয়েছিল এবং অতিরিক্তভাবে 37 ডিগ্রিতে 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। তারপরে, মাধ্যমটি বাতিল করা হয়েছিল, এবং উত্পাদিত বেগুনি ফর্মাজানটি 100 শতাংশ DMSO এর 100μL এ দ্রবীভূত হয়েছিল। 570 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (থার্মো সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে দ্রবণের শোষণ পরিমাপ করা হয়েছিল। কোষের বিস্তারের শতাংশ (শতাংশ) নিম্নলিখিত সমীকরণ দ্বারা গণনা করা হয়েছিল: (নমুনার শোষণ/নিয়ন্ত্রণের গড় শোষণ) × 100।

2.6। পরীক্ষামূলক অলঙ্করণ

বর্তমান কোষের প্রসারণ পরীক্ষায় BPME ({{0}}.1 এবং 0.2 ug/mL) কম ঘনত্ব পরীক্ষা করা হয়েছে এবং বিষাক্ততা ছাড়াই প্রসারিত HUVECs এবং মাইক্রোটিউবিউল মরফোলজি দেখায়। BPME এর ভলিউম 0.1 এবং 0.2 ug/mL ডোজ নির্বাচন করা হয়েছিল এবং সাধারণ HUVECs এবং 10 mM H, O,-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ-স্ট্রেসড HUVECs 48 ঘন্টার জন্য কোষের প্রসারণ, অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি নির্ধারণের জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল। , এনজিওজেনিক এবং অ্যাপোপটোটিক সম্ভাবনা (চিত্র 1)। উভয় গ্রুপে 48 ঘন্টার জন্য যানবাহন নিয়ন্ত্রণও বজায় রাখা হয়েছিল। Quercetin （10 μM） উভয় পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীতে একটি রেফারেন্স নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।এন্টি বার্ধক্য cistancheইনকিউবেশনের পরে, বিডিএম মাইটোস্ক্রিন (সি-1)কিট ব্যবহার করে কোষ এবং নিউক্লিয়ার আকারবিদ্যা এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতার জন্য চিকিত্সা না করা এবং পরীক্ষামূলক কোষগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল; ফ্লো সাইটোমেট্রিতে অ্যানেক্সিন ভি/অ্যাপোপ্টোসিস-ভিত্তিক সেল বাছাই পদ্ধতি দ্বারা অ্যাপোপটোসিস নির্ধারণ করা হয়েছিল। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, এবং প্রোইনফ্ল্যামেটরি এবং অ্যাঞ্জিওজেনেসিস-সম্পর্কিত জিন এক্সপ্রেশন স্তরগুলি তদন্ত করা হয়েছিল।

2.7.পারমাণবিক ক্ষতির জন্য প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড স্টেনিং অ্যাস

HUVEC তে {{0}}.1 এবং BPME এর 0.2 ug/mL (H, O2 সহ বা ছাড়া) চিকিত্সার পরে বৈশিষ্ট্যযুক্ত পারমাণবিক ক্ষতি, পাইকনোসিস বা অ্যাপোপটোটিক মরফোলজিকাল পরিবর্তনের জন্য সেলুলার আকারবিদ্যাগুলি পিআই স্টেনিং বিশ্লেষণ ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল ইনভার্টেড ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির অধীনে, যেমন লেইট এট আল দ্বারা বর্ণিত। [২৭]।

2.8. JC-1 ডাই স্টেনিং দ্বারা মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল （△中m） এর পরীক্ষা

মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন (△!m) এর সম্ভাব্যতা JC{{{0}} অ্যাস দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল যানবাহন নিয়ন্ত্রণে মাইটোকন্ড্রিয়াল দক্ষতা এবং 0.1 এবং 0.2 ug/mL BPME-চিকিত্সা করা HUVECs এর মূল্যায়নের জন্য (H2O2 সহ এবং ছাড়া)। সংক্ষেপে, JC-1 স্টেনিং দ্রবণটিকে একই ধরনের কালচার মিডিয়ামের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং তারপরে পরীক্ষামূলক HUVEC-তে যোগ করা হয়েছিল এবং 37 ডিগ্রিতে 20 মিনিটের জন্য অন্ধকারে সেঁকানো হয়েছিল। তারপরে, 4 ডিগ্রিতে 200 μL JC-1 স্টেনিং ওয়াশ বাফার ব্যবহার করে আনবাউন্ড JC-1 রঞ্জক আলতোভাবে দুইবার ধোয়া হয়। পরবর্তীতে, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপির অধীনে JC-1 স্টেনিংয়ের বিরুদ্ধে জে-এগ্রিগেটেডের জমে দেখা গিয়েছিল, এবং ছবিগুলি ক্যাপচার করা হয়েছিল৷ উপরন্তু, BDIM MitoScreen (JC-1) কিট ব্যবহার করে ফ্লো সাইটোমেট্রিতে মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেনের সম্ভাব্যতা পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.9। Annexin Vlapoptosis বিশ্লেষণ ফ্লো সাইটোমেট্রি ব্যবহার করে

ফ্লো সাইটোমেট্রি-ভিত্তিক অ্যানেক্সিন ভি/পিআই সনাক্তকরণ কিট (সিগমা কেমিক্যালস, ইউএসএ) পদ্ধতিটি কার্যকরী, প্রোপোপটোটিক, প্রারম্ভিক অ্যাপোপটোটিক এবং নেক্রোটিক কোষের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-প্ররোচিত এইচইউভিইসি (1×10 ডিগ্রি /ওয়েল) 24-ওয়েল প্লেটে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং BPME（0.1 এবং 0.2 ug/mL）অথবা যানবাহন নিয়ন্ত্রণের সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল 48 ঘন্টা। ইনকিউবেশনের পরে, কোষগুলিকে 5 μL অ্যানেক্সিন ভি-ফ্লুরোসেসিন আইসোথিওসায়ানেট （FITC） এর 400 μL এবং 5 μL PI এর মধ্যে বাইন্ডিং বাফার রয়েছে; এটি অনুসরণ করে, ঘরের তাপমাত্রায় (আরটি) অন্ধকারে 15 মিনিটের জন্য কোষগুলি রাখা হয়েছিল। কোষগুলি ফ্লো সাইটোমেট্রি (বিডি বায়োসায়েন্সেস, সান জোসে, সিএ, ইউএসএ) দ্বারা অ্যাপোপটোটিক (পিনেগেটিভ এবং অ্যানেক্সিন ভি পজিটিভ) এবং দেরী অ্যাপোপটোটিক (পিআই-পজিটিভ এবং অ্যানেক্সিন ভি পজিটিভ) কোষগুলি সনাক্ত করতে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল [২৮]।

2.10। পরিমাণগত রিয়েল-টাইম পিসিআর বিশ্লেষণ

ফাস্টলেন @ সেল থেকে সিডিএনএ কিট (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) একটি পরিমাণগত PCR (qPCR) সেমিঅটোমেটেড ইন্সট্রুমেন্ট (অ্যাপ্লাইড বায়োসিস্টেম) ব্যবহার করে যানবাহন নিয়ন্ত্রণ, BPME-চিকিত্সা করা HUVECs (H-O2 সহ এবং ছাড়া) থেকে মোট RNA বের করতে এবং সিডিএনএ সংশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। , ফস্টার সিটি, CA, USA)। অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের এক্সপ্রেশন লেভেলের মধ্যে রয়েছে (লিপিড পারক্সাইড, NOS-3), অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট (Nrf-2, GSK-3 , এবং GPx), প্রোইনফ্ল্যামেটরি (পারমাণবিক ফ্যাক্টর-কে (NF-k), টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর- (TNF-), ইন্টারলিউকিন-1 (IL-1), ভাস্কুলার সেল গ্রোথ ফ্যাক্টর (VEGF), টোল-লাইক রিসেপ্টর-4(TLR-4), এবং ভাস্কুলার প্রদাহ (ইন্ট্রাসেলুলার অ্যাডেসন মলিকিউল (আইসিএএম), ভাস্কুলার সেল অ্যাডেসন মলিকিউল (ভিসিএএম), ইডিএন 1 এবং এন্ডোথেলিয়াল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস (ইএনওএস))-সম্পর্কিত জিন এবং রেফারেন্স জিন, -অ্যাক্টিন, এইচইউভিইসি এবং পদ্ধতি দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ইউয়ান এবং অন্যান্য।

2.11.পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ

সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষার প্রতিলিপি করা হয়েছিল, এবং ফলস্বরূপ ডেটা গড় মান ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। SPSS সফ্টওয়্যার (সংস্করণ 28.5, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) ব্যবহার করে গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলির পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ এক-তরফা বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা সম্পাদিত হয়েছিল।cistanche উপকারীতারপরে, উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পাওয়া গেলে Tukey এর একাধিক তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছিল। সমস্ত ফলাফল প্রতিটি গ্রুপে ছয়টি প্রতিলিপির জন্য গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল। একটি পি-মান < 0.05="" তাৎপর্যপূর্ণ="" [৩০]="" বলে="" বিবেচিত="">

3। ফলাফল

3.1.BPME-তে জৈব সক্রিয় অণু

BPME এর রাসায়নিক উপাদানগুলি GC-MS(Turbomass, PerkinElmer) ব্যবহার করে নিশ্চিত করা হয়েছিল বীটরুট খোসার নির্যাসের রাসায়নিক গঠন ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ স্ট্যান্ডার্ড অ্যান্ড টেকনোলজি (এনআইএসটি) স্পেকট্রাল ডাটাবেসের সাথে উপলব্ধ ভর স্পেকট্রা তুলনা করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। GC-MS ফলাফল নিশ্চিত করেছে যে BPME-তে হাইড্রোক্সিয়াসিটোন (8.18), 5-হাইড্রোক্সিমেথিলফারফুরাল (32.6 শতাংশ), মিথাইল পাইরুভেট (15.13 শতাংশ), বিটা-ডি-অ্যালোপাইরানোজ (1.48 শতাংশ), ফারফুরাল (9.98 শতাংশ), {15}হাইড্রক্সি-গামা-বুটিরোল্যাকটোন (1.32 শতাংশ), এবং 2,3-ডাইহাইড্রো-3।{23}}ডাইহাইড্রোক্সি-6-মিথাইল-4এইচ-পাইরান{ {27}}একটি (12.4 শতাংশ ;চিত্র 2a, সারণী 1)।

3.2.কোষ বিস্তার

HUVEC-এর বিরুদ্ধে BPME-এর ইন-ভিট্রো সেল বিস্তারের সম্ভাবনা চিত্র 2b-এ উপস্থাপিত হয়েছে। যানবাহন নিয়ন্ত্রণের তুলনায় পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীগুলিতে কোনও উল্লেখযোগ্য কোষ বৃদ্ধির বাধা পরিলক্ষিত হয়নি। বর্তমান সমীক্ষা দ্বারা এটি নিশ্চিত করা হয়েছে যে HUVEC-এর সাথে চিকিত্সা করা BPME এর ঘনত্ব বৃদ্ধির ফলে 24 ঘন্টা (103 শতাংশ) চিকিত্সার তুলনায় 48 ঘন্টা (112 শতাংশ) পরে কোষের বিস্তার এবং কার্যকারিতা বৃদ্ধি পায়। উপরন্তু, 48 ঘন্টা পর BPME-চিকিত্সা করা HUVEC-এর হালকা মাইক্রোস্কোপিক চিত্রগুলি অনুগত কোষের রূপবিদ্যার অভিন্ন আকৃতির সাথে স্বাভাবিক কোষগুলিকে নিশ্চিত করেছে, কোনো ক্ষতি ছাড়াই প্রসারিত (প্রতিলিপি) কোষের সংখ্যা বৃদ্ধি পাওয়া স্পষ্ট ছিল (চিত্র 2c)।

3.3.কোষ এবং পারমাণবিক রূপবিদ্যা, মাইক্রোটিউবিউল গঠন, এবং JC-1 HUVECS-এ থাকার বিশ্লেষণ

চিত্র 3 ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপিক চিত্রগুলিতে মাইক্রোটিউবুলের বিকাশের রূপবিদ্যা দেখায়। H2O2-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ-স্ট্রেসড এইচইউভিইসি নিয়ন্ত্রণ HUVEC-এর তুলনায় অনুগত কোষগুলির দুর্বল বিস্তার এবং অনিয়মিত আকারবিদ্যা দেখায়। BPME এর 0.2 ug/mL দিয়ে চিকিত্সা করা সাধারণ HUVECগুলি মাইক্রোটিউবিউল মরফোলজির সাথে প্রতিলিপি বা নিওজেনেসিসের মাধ্যমে প্রসারিত কোষ দেখায়। ইতিমধ্যে, 0.1 ug/mL বিপিএমই চিকিত্সা করা কোষগুলির ডোজ 1{{10}0 শতাংশ অনুগামী কোষগুলিকে মাইক্রোটিউবুলসের প্রাথমিক পর্যায়ে দেখায়৷ অক্সিডেটিভ-স্ট্রেসড এইচইউভিইসিগুলি 0.2 ug/mL BPME দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছে মাইক্রোটিউবিউল মরফোলজি সহ প্রসারিত নতুন কোষ সনাক্ত করেছে এবং অক্সিডেটিভ সেলুলার ক্ষতি হ্রাস পেয়েছে। এছাড়াও, BPME এর 0.1 ug/mLও প্রসারিত কোষের সাথে স্বাভাবিক ভাস্কুলার কোষের মরফোলজি বাড়িয়েছে।

চিত্র 4a নিয়ন্ত্রণ এবং BPME（0.1 বা 0.2 ug/mL）-চিকিত্সা করা HUVECs-এ একটি গোলাকার আকৃতি সহ পারমাণবিক কাঠামোর স্বাভাবিক রূপবিদ্যা দেখায়। চিত্র 4b H, O দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সহ HUVEC-এর স্বাভাবিক এবং HUVEC-এর PI স্টেনিংয়ের চিত্রগুলি দেখায়। } মিনিট যাইহোক,0.2 ug/mL অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের অধীনে এইচইউভিইসিগুলির জন্য বিপিএমই চিকিত্সা স্বাভাবিক অঙ্গসংস্থানবিদ্যার সাথে বৃত্তাকার নিউক্লিয়াস দেখায়। BPME নির্যাসের 0.2 ug/mL এর সাথে তুলনা করে, 0.1 ug/ml BPME-এর H2O2-জনিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বিরুদ্ধে কম প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ছিল HUVECs-এ।

চিত্র 5a কন্ট্রোল এবং BPME-চিকিত্সা কোষ সহ HUVEC-এর জন্য JC-1 স্টেনিং ফলাফল দেখায়; চিত্রটি সক্রিয় মাইটোকন্ড্রিয়া সহ স্বাস্থ্যকর কোষগুলিকে চিত্রিত করে, যেমনটি এক্সট্রামাইটোকন্ড্রিয়াল লিপোফিলিক ক্যাটানিক JC-1(সবুজ রঙ) এবং জে-অ্যাগ্রিগেটগুলির নেতিবাচক চার্জযুক্ত মাইটোকন্ড্রিয়া গ্রহণ দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছে যা লাল রঙের ইন্ট্রামাইটোকন-র সাথে রূপান্তরিত হয়েছে৷ চিত্র 5b H2O2 দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সহ HUVEC-তে পরিচালিত BPME-এর 0.2 ug/mL-এর জন্য JC-1 স্টেনিং ফলাফল দেখায়; ফলাফলগুলি নিশ্চিত করেছে যে প্রায় 94 শতাংশ নেতিবাচক চার্জযুক্ত মাইটোকন্ড্রিয়া লাইপোফিলিক ক্যাটানিক JC-1(সবুজ রঙ) কে লাল রঙের J-সমষ্টিতে রূপান্তরিত করেছে যখন 0.1 ug/mL BPME (61.4 শতাংশ) চিকিত্সার সাথে তুলনা করা হয়েছে বা

HUVEC-তে HO,-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস (2 শতাংশ)। মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল (এমএমপি) রেফারেন্স ড্রাগ কোয়ারসেটিনের তুলনায় বিপিএমই-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে বেশি লক্ষ্য করা গেছে।

3.4। এফএসিএস-সহায়তা মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল (△pm; BD MitoScan) এবং HUVEC-তে অ্যানেক্সিন ভি/অ্যাপোপ্টোসিস বিশ্লেষণ

Figure 6 shows the mitochondrial membrane potential capacity in BD MitoScan analysis after 0.2 ug/mL of BPME treatment of normal HUVECs and HUVECs with oxidative stress induced by H>O, আমরা দেখেছি যে BPME চিকিত্সার 0.2 ug/mL MMP(Aum) কে 92.7 শতাংশ ± 3.7 শতাংশে বাড়িয়েছে যখন শুধুমাত্র HO2 এর সাথে চিকিত্সা করা HUVEC-এর সাথে তুলনা করা হয়েছে (27.9 শতাংশ ±7.2 শতাংশ)৷ বিপরীতে, কোয়ারসেটিন-চিকিত্সা করা কোষগুলি শুধুমাত্র BPME এবং H2O2 বা H2O2 এর সাথে চিকিত্সা করা HUVEC-এর সাথে তুলনা করলে A41.4 শতাংশ ±1.6 শতাংশ বৃদ্ধি MMP (Aum) এর শতাংশ দেখায়।

3.5। এইচইউভিইসি-তে জিন এক্সপ্রেশন লেভেলের পরিমাণ

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস (LPO3), অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট (NOS-3, Nrf-2, GSK-3 , এবং GPX), প্রোইনফ্ল্যামেটরি (IL-1 , TNF- , NF-ব্যান্ড TLR{ {7}}), এবং ভাস্কুলার প্রদাহ (VCAM, ICAM, EDN, eNOS)-সম্পর্কিত এবং VEGF mRNA এক্সপ্রেশন স্তরগুলি যানবাহন নিয়ন্ত্রণে পরিমাপ করা হয়েছিল, 0.1 এবং 0.2 ug/mL BPME এবং quercetin （10 μM）-চিকিত্সা করা HUVECs 48 ঘন্টা পর （চিত্র 8）। আমরা উল্লেখযোগ্যভাবে খুঁজে পেয়েছি (পি<0.001) increased="" levels="" of="" lpo,="" nos-3,="" and="" nf-kb.il-1.tnf-α,="" vcam,="" icam,="" edn,="" and="" enos="" expression="" and="" decreased="" nrf-2,="" gsk-3β,="" and="" gpx="" levels="" in="" ho,-induced="" huvecs.="" treatment="" with="" 0.2="" ug/ml="" of="" bpme="" significantly="" decreased="" oxidative="" stress="" and="" vascular="" inflammation="" and="" increased="" antioxidant="" factor-related="" mrna="" expression="" when="" compared="" with="" oxidative-stressed="" huvecs.="" vegf="" expression="" levels="" showed="" a="" significant="" two-fold="" increase="" in="" 0.2="" ug/ml="" of="" bpme-treated="" cells="" only="" when="" compared="" to0.1="" ug/ml="" of="" bpme.="" vegf="" expression="" was="" not="" detected="" in="" huvecs="" with="" oxidative="" stress="" induced="" by="" h2o2.="" the="" observed="" effect="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" 0.1="" ug/ml="" bpme="" or="" quercetin="" (10="">

4। আলোচনা

বহির্মুখী বা অন্তঃকোষীয় চাপের উপর, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (আরওএস) জৈব উপলভ্যতা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষাকে ছাড়িয়ে যায় এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস রেডক্স সংকেত এবং নিয়ন্ত্রণকে ব্যাহত করে [৩১]। অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বিকাশ দীর্ঘস্থায়ী ব্যাধিগুলির রোগজীবাণুগুলির সাথে সম্পর্কিত, যেমন নিউরোডিজেনারেটিভ রোগ, ডায়াবেটিস এবং এথেরোস্ক্লেরোসিস। যেমন, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এন্ডোথেলিয়াল কর্মহীনতার সূচনা করে এবং ম্যাক্রোফেজগুলির সিস্টেমিক প্রদাহ এবং নিয়োগের প্রচার করে [32]। সক্রিয় ইমিউন কোষগুলি ভাস্কুলেচারে স্থানান্তরিত হয় এবং মসৃণ পেশী কোষের রক্তনালীগুলির সংকোচন এবং পুনর্নির্মাণের সাথে যুক্ত সাইটোকাইন এবং কেমোকাইনগুলি ছেড়ে দেয় এবং ভাস্কুলার মসৃণ পেশী কোষ এবং ভাস্কুলার প্রাচীরকে প্রভাবিত করে প্রদাহ [৩৩]। বর্ধিত ভাস্কুলার অক্সিডেটিভ স্ট্রেস ভাস্কুলার ক্ষতি, মসৃণ পেশী কোষের দৃঢ়তা এবং কাঠামোগত ইলাস্টিন অস্বাভাবিকতার সাথে শেষ হয়। উপরন্তু, পেরিভাসকুলার অ্যাডিপোজ টিস্যুতে NADPH অক্সিডেস (NOX-2) কার্যকলাপ বৃদ্ধির কারণে, ভাস্কুলার অক্সিডেটিভ স্ট্রেস অন্যান্য রোগগত অবস্থাতে উদ্দীপিত হয়েছে, যেমন ভিসারাল স্থূলতা বা এথেরোস্ক্লেরোসিস [34]। ভাস্কুলার অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বার্ধক্যের সময় প্রধান এপিজেনেটিক পরিবর্তন ঘটায় এবং এটি একটি প্রাথমিক বার্ধক্য প্রক্রিয়ার সাথে শেষ হয় [35]।

জৈবিক ব্যবস্থায় ROS উত্পাদন এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বিকাশ মূলত মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতার উপর নির্ভর করে, NOX-2, এন্ডোথেলিয়াল জ্যান্থাইন অক্সিডেস, অসংলগ্ন eNOS, এবং lipoxygenase [36] ছাড়াও। খাদ্যতালিকাগত এজেন্টগুলির অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যগুলি বর্ধিত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতার মাধ্যমে ROS প্রজন্মকে নিরপেক্ষ করতে পারে [26]। জিঙ্কগো বিলোবা নির্যাস অক্সিএলডিএল-প্ররোচিত এন্ডোথেলিয়াল কর্মহীনতায় ROS জেনারেশন এবং লিপক্সিজেনেস কার্যকলাপ হ্রাস করে এথেরোস্ক্লেরোসিসের বিকাশের বিরুদ্ধে রক্ষা করে [৩৭]। এছাড়াও, ভোজ্য গাছপালা এবং শস্য থেকে বিভিন্ন ফেনোলিক যৌগ এবং ফ্ল্যাভানয়েডগুলির ROS এবং লিপিড পারক্সিডেশন [৩৮] স্ক্যাভেঞ্জ করার সম্পত্তি রয়েছে। বীটরুটের খোসা (বিটা ভালগারিস) মিথেনোলিক নির্যাসে উচ্চ ফাইবার, অ্যান্থোসায়ানিন এবং ফ্ল্যাভোনয়েড যেমন ভিটেক্সিন এবং বেটানিনের প্রাপ্যতার কারণে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনা রয়েছে [৩৯]। বর্তমান গবেষণায়, মাইটোকন্ড্রিয়াল-নির্ভর যান্ত্রিক পদ্ধতির সনাক্তকরণের জন্য BPME-কে নির্বাচিত করা হয়েছিল মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতা, এলপিও নিভে যাওয়া, এবং ভাস্কুলার প্রদাহ-সম্পর্কিত mRNA এক্সপ্রেশন স্তরের উপর এর প্রভাব আবিষ্কার করার জন্য।

MTT পরীক্ষা নিশ্চিত করেছে যে BPME কোষের বিস্তারকে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করেছে, যেমনটি PI স্টেনিং-এ বর্ধিত পারমাণবিক অখণ্ডতা দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছে {{0}}.2 ug/mL BPME বনাম পরীক্ষিত 0 এর কার্যকর ডোজ। BPME এর 1 ug/mL। কম ঘনত্ব এবং সর্বোচ্চ কার্যকলাপ সহ একটি কার্যকর ডোজ সনাক্তকরণ শারীরবৃত্তীয়ভাবে নিরাপদ হিসাবে বিবেচিত হতে পারে। আমরা JC-1-এর ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপিক স্টেনিং খুঁজে পেয়েছি, এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্যতা স্বাভাবিক এবং HO উভয় ক্ষেত্রেই পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল, - BPME চিকিত্সার 0.2 ug/mL পরে বাহ্যিকভাবে উদ্দীপিত অক্সিডেটিভ-স্ট্রেসড HUVECs। মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিসফাংশন অক্সিডেটিভ ফসফোরিলেশনকে পরিবর্তন করে, যা অক্সিজেন (O,.-) র্যাডিকেলকে H, O, এবং H, Oby glutathione peroxidase-এ রূপান্তর করতে ব্যর্থ হয়। অপর্যাপ্ত ROS ডিটক্সিফিকেশন বা অনিয়ন্ত্রিত ROS উত্পাদনের কারণে, বর্ধিত মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এথেরোস্ক্লেরোসিসের সাথে যুক্ত [40]। বীটরুটের খোসার নির্যাস কার্যকরভাবে মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেনের সম্ভাবনা পুনরুদ্ধার করেছে, যা সফলভাবে ROS ডিটক্সিফিকেশন এবং H2O2 প্রজন্মকে বাড়িয়েছে। অ্যানেক্সিন V/PI স্টেনিং বিশ্লেষণ নিশ্চিত করেছে যে BPME চিকিত্সা কার্যকর কোষের শতাংশ বজায় রাখে এবং HO দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সহ স্বাভাবিক HUVEC এবং HUVECs উভয় ক্ষেত্রেই কোষের বিস্তারের স্তরকে উন্নত করে। এই প্রসঙ্গে, চু এট আল। [৪১] নিশ্চিত করেছেন যে অত্যধিক ROS বা exogenous HO তৈরির পর, ইস্কেমিক সাইটে, ট্রান্স-প্লান্টেড মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (MSCs) স্ব-প্রসারণ এবং বহু-বংশীয় ক্ষমতাকে ক্ষতিগ্রস্ত করতে পারে। রিজেনারেটিভ মেডিসিনে, ভাস্কুলার মসৃণ পেশী কোষ হল ধমনী পেরিফেরাল রেজিস্ট্যান্স, রক্তচাপ নিয়ন্ত্রক, রক্ত ​​প্রবাহ, এবং ধমনীগুলির মেরামত বজায় রাখার মাধ্যমে সংকোচনশীল টোন ধমনীর প্রধান নিয়ন্ত্রক [৪২]। উপরন্তু, ইসি-এর বয়স-প্ররোচিত ফেনোটাইপ মডুলেশন। সেলুলার সংকোচন হ্রাস এবং কোষের সেন্সেন্স বৃদ্ধির সাথে সম্পর্কিত। ক্রমাগত চাপের কারণে বা যান্ত্রিক সংবেদনশীলতা হ্রাসের কারণে, বয়স্ক মসৃণ পেশী কোষগুলিতে মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট সংকেতগুলির হ্রাসপ্রাপ্ত অভিযোজন সনাক্ত করা হয় [43]। বর্তমান ফলাফলগুলি নিশ্চিত করেছে যে বিপিএমই চিকিত্সা কার্যকর কোষের জনসংখ্যা বজায় রেখেছে, যেমন অ্যাঞ্জিওজেনেসিস ক্ষমতা দ্বারা প্রমাণিত।

HUVECs-এ BPME-এর চিহ্নিত প্রসারণ ক্ষমতা LPOexpression হ্রাস এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিন এক্সপ্রেশন বৃদ্ধির দ্বারা সমর্থিত হয়েছে। ROS এবং LPO প্রাথমিকভাবে কোষের বিস্তার বা পার্থক্যের সময় মাইটোকন্ড্রিয়াল কমপ্লেক্স (I এবং I) এবং NOX-4 থেকে তৈরি হয় [44]। অত্যধিক ROS জৈব অণুগুলির প্রতিক্রিয়া এবং ক্ষতি করে, বিশেষ করে জিনোমিক ডিএনএর অখণ্ডতা পরিবর্তন করে, যা সেলুলার বিস্তার এবং ফাংশনগুলির জন্য গুরুত্বপূর্ণ [৪৫]। যাইহোক, এটি নিশ্চিত করা হয়েছে যে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট পলিফেনলগুলির খাদ্যতালিকাগত গ্রহণ, যেমন এপিগালোক্যাচিন এবং টোকোফেরল, কোষগুলিকে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে এবং বিস্তার ক্ষমতা বাড়ায় [46]। আমাদের গবেষণায়, LPO-এর mRNA এক্সপ্রেশনের মাত্রা কমেছে, এবং NOS-3, Nrf-2, এবং eNOS HUVEC-তে Hoo দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সাথে দ্বিগুণ বৃদ্ধি পাওয়া গেছে। eNOS হল NOS-এর প্রধান আইসোফর্ম, মসৃণ পেশী কোষ এবং ভাস্কুলার টিস্যুতে বেশিরভাগ NO. পণ্যগুলির জন্য দায়ী। না। সকল প্রকার ভাস্কুলার ভেসেল প্রসারিত করে এবং ECs-এ প্লেটলেট একত্রিতকরণ এবং লিউকোসাইট আনুগত্য রক্ষা করে[47]। এই পর্যন্ত, কার্ডিওভাসকুলার ঝুঁকির কারণগুলি সম্পর্কে অনেক বিরোধপূর্ণ প্রতিবেদন রয়েছে এবং এন্ডোথেলিয়াল কর্মহীনতা eNOS এক্সপ্রেশন হ্রাস বা বৃদ্ধির সাথে যুক্ত করা হয়েছে [48]। ভাস্কুলার রোগের উপর eNOS-এর উন্নত অভিব্যক্তি পরিলক্ষিত হয়েছিল, যা H-Oz-এর অতিরিক্ত উত্পাদনের পরিণতি হতে পারে। O2-7, একটি বিচ্ছিন্নকরণ পণ্য, ট্রান্সক্রিপশনাল এবং পোস্ট-ট্রান্সক্রিপশনাল মেকানিজমের মাধ্যমে eNOS এক্সপ্রেশন বাড়াতে পারে [49]। ভাস্কুলার রোগের প্যাথোজেনেসিস NO এর ত্বরিত অবক্ষয় দ্বারা অনুষঙ্গী হয়। O2-7-এর সাথে প্রতিক্রিয়ার পরে, এবং অবশেষে, ONOO- ফর্ম, যা eNOS আনকপলিং এবং NOX এনজাইমের কর্মহীনতার দিকে পরিচালিত করে [50]। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম দ্বারা দমন করা হয়েছে, এবং BPME চিকিত্সার পরে GSK-3 এবং GPX-এর mRNA মাত্রা বৃদ্ধি করা হয়েছে। বিপিএমই-তে একাধিক ফাইটোকেমিক্যাল রয়েছে যা জৈবিকভাবে সক্রিয়, যার মধ্যে রয়েছে বেটালাইনস, ফ্ল্যাভোনয়েড, পলিফেনল, থেরাপিউটিক এনজাইম, অ্যাসকরবিক অ্যাসিড, ডিহাইড্রোয়াসকরবিক অ্যাসিড (ডিএইচএএ), এবং অজৈব নাইট্রেট (এনওজি), এবং এগুলি HUVEC-এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা বৃদ্ধিতে জড়িত হতে পারে। এই প্রসঙ্গে, চা এট আল। (2014) [51] রিপোর্ট করেছে যে ক্লোরোজেনিক অ্যাসিড মানব কেরাটিনোসাইটগুলিতে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-প্ররোচিত ডিএনএ ক্ষতির বিরুদ্ধে কার্যকরভাবে রক্ষা করে।

এন্ডোথেলিন-1 (Edn-1), একটি এন্ডোথেলিয়াম থেকে প্রাপ্ত ভাসোকনস্ট্রিক্টর, মসৃণ পেশী কোষের স্থানান্তর সঞ্চালন করে এবং নাইট্রিক অক্সাইড-প্ররোচিত চাপ [52,53] সহ কোষগুলিতে একটি অ্যান্টিঅ্যাপোপ্টোটিক ফ্যাক্টর হিসাবে কাজ করে। ভাস্কুলার রিমডেলিং, মাইগ্রেশন, প্রসারণ এবং এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স সঞ্চয়ের প্রক্রিয়াগুলি Edn-1 এবং NO [54,5] উভয় দ্বারা উদ্দীপিত হয়েছে। আমরা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সহ HUVEC-তে BPME চিকিত্সার পরে Edn-1 এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি লক্ষ্য করেছি। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বা এলপিও জমা হওয়ার পরে, ভাস্কুলার প্রদাহের প্রাথমিক পর্যায়ে লিউকোসাইটের এন্ডোথেলিয়াল মসৃণ পেশী কোষগুলির সাথে আনুগত্য হয়, এটি ইস্কেমিয়া এবং এথেরোস্ক্লেরোসিসের গুরুতর ঘটনাগুলির জন্য বিশিষ্ট। এটি VCAM এবং ICAM অভিব্যক্তি দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়; এটি অনেক কেমোকাইন এবং কেমোট্যাক্সিস এজেন্ট দ্বারা উদ্দীপিত হয়েছে, যেমন NF-kB, IL-1 , এবং TNF- এক্সপ্রেশন[57]। আইএল-1 অ্যাক্টিভেশনের বাধা এবং আনুগত্য অণুর অভিব্যক্তি খাদ্যতালিকাগত ফেনোলিক যৌগ এলাজিক অ্যাসিড [58] দ্বারা অর্জন করা হয়েছে। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সহ বাহ্যিকভাবে উদ্দীপিত HUVEC-এর সাথে BPME-এর চিকিত্সা ভাস্কুলার কোষ-নির্দিষ্ট প্রোইনফ্ল্যামেটরি ফ্যাক্টরগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, যেমন VCAM, ICAM, NF-KB, IL-1 এবং TNF-x এক্সপ্রেশন লেভেল। এই প্রসঙ্গে, Crespo et al. [৫৯] রিপোর্ট করেছে যে কেম্পফেরল এবং কোয়ারসেটিন যথাক্রমে VCAM, ICAM, NF- kB এবং IL-1 অভিব্যক্তির মতো প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি জিনগুলিকে বাধা দেয়। সামগ্রিকভাবে, বিপিএমই-এর অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং ভাস্কুলার প্রদাহ-সম্পর্কিত জিন এক্সপ্রেশন সম্ভাবনার বাধা ভাস্কুলার কোষের বৃদ্ধির কারণ এবং সম্ভাব্য সাহায্যকারী ভাস্কুলার কোষের বিস্তার এবং বৃদ্ধির অভিব্যক্তির পক্ষে।

5। উপসংহার

বর্তমান অনুসন্ধানগুলি নিশ্চিত করে যে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিনের বর্ধিত অভিব্যক্তি অক্সিডেটিভ স্ট্রেস নিবারণের সাথে যুক্ত ছিল, যা HUVEC বিস্তার এবং এনজিওজেনেসিসের দুর্বলতা কাটিয়ে উঠতে সহায়তা করে। হাইড্রোক্সিমেথিলফারফুরাল ধারণকারী কালো রসুন HUVEC-তে TNF-প্ররোচিত মনোসাইট কোষের আনুগত্যের প্রদাহজনক প্রভাবকে দমন করে এবং আরও ROS জেনারেশন, VCAM-1 এক্সপ্রেশন, এবং NF-kB সক্রিয়করণ [60] দমন করে। উপরন্তু, তিনি এট আল. [৬১] নিশ্চিত করেছেন যে হাইড্রোক্সিমিথিলফারফুরাল হাইপোক্সিয়া থেকে রক্ষা করার ক্ষমতা রাখে। বিটরুটের খোসায় ফ্ল্যাভোনয়েড, ফুরান এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট উপাদানগুলিও চিহ্নিত করা হয়েছে, যেমন 5-হাইড্রোক্সিমিথিলফারফুরাল, মিথাইল পাইরুভেট, ফারফুরাল, এবং 2,3-ডাইহাইড্রো-3,5- ডাইহাইড্রক্সি-6-মিথাইল-4এইচ-পাইরান-4-একটি; এই উপাদানগুলি বর্ধিত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা এবং প্রোইনফ্ল্যামেটরি ভাস্কুলার মসৃণ পেশী কোষের আনুগত্য অণুগুলির দমনের জন্য দায়ী। বীটরুটের খোসা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট পুলের জন্য উদ্দীপক হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছে বাহ্যিক উদ্দীপনা বা পেরোক্সিডেটিভ সেলুলার স্ট্রেসের অভ্যন্তরীণ প্যাথলজিকাল উদ্দীপনা নিবারণের জন্য। আমাদের অনুসন্ধানগুলি প্রমাণ করেছে যে বীটরুটের উপাদানগুলি এইচইউভিইসিগুলিতে বিপাকীয় চাপ এবং প্রদাহ কমাতে সহায়তা করে, যা ভাস্কুলার কোষের বিস্তার এবং অ্যাঞ্জিওজেনেসিসের জন্য উপকারী হতে পারে।

এই নিবন্ধটি জিন 2021, 12, 1380 থেকে নেওয়া হয়েছে। https://doi.org/10.3390/genes12091380 https://www.mdpi.com/journal/genes