রেনাল ফাইব্রোসিস চিকিত্সার জন্য একটি কার্যকর পদ্ধতি

আরো তথ্যের জন্য:ali.ma@wecistanche.com

অংশ Ⅰ:এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলাম প্রোটিন TXNDC5 কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টে TGF- সংকেত প্রয়োগ করে রেনাল ফাইব্রোসিসকে উৎসাহিত করে

ইয়েন-টিং চেন, পেই-ইউ ঝাও এবং অন্যান্য।

ভূমিকা

রেনাল ফাইব্রোসিস, টিউবুলোইনটার্স্টিশিয়াল দ্বারা চিহ্নিতফাইব্রোসিসএবং গ্লোমেরুলার স্ক্লেরোসিস, বেশিরভাগের একটি সাধারণ প্যাথলজিকাল প্রকাশ, যদি সব না হয়,দীর্ঘস্থায়ীকিডনিরোগ(CKD)(1)। এর অগ্রগতিরেনালফাইব্রোসিসCKD রোগীদের মধ্যে ধীরে ধীরে ক্ষতি বাড়েকিডনিফাংশন, যার ফলে শেষ পর্যায়ে রেনাল ডিজিজ (ESRD) হতে পারে যার জন্য ডায়ালাইসিস বাকিডনিপ্রতিস্থাপন (2)। যদিও একাধিক আণবিক নির্ধারক এবং পথ প্রক্রিয়ায় অবদান রাখতে দেখা গেছেকিডনি ফাইব্রোসিস, ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-বিটা (TGF-) কে সাধারণত রেনাল ফাইব্রোজেনেসিস (3) এর প্রধান নিয়ন্ত্রক হিসাবে বিবেচনা করা হয়। একটি আঘাত অনুসরণকিডনি, ড্যাম-এজড টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষ (TECs) G2/M পর্যায়ে আটক হয় এবং প্রচুর পরিমাণে TGF- নিঃসরণ করে, যা সংলগ্ন রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিকে মায়োফাইব্রোব্লাস্টে (4-6) সক্রিয়করণ এবং রূপান্তরিত করে। অ্যাক্টিভেটেড মায়োফাইব্রোব্লাস্ট, একটি-মসৃণ পেশী অ্যাক্টিন (একটি এসএমএ) এর অভিব্যক্তি দ্বারা বৈশিষ্ট্যযুক্ত, অত্যন্ত প্রসারণকারী এবং ফাইব্রিলার কোলাজেন, ইলাস্টিন, ফাইব্রোনেক্টিন এবং CCN2 (সাধারণত সংযোগকারী টিস্যু বৃদ্ধি ফ্যাক-টর নামে পরিচিত, এর মতো এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিস (ECM) প্রোটিন তৈরি করে। CTGF)(7,8)। কিডনি আঘাতের প্রাথমিক পর্যায়ে,ফাইব্রোসিসএকটি অভিযোজিত এবং স্ব-সীমিত শারীরবৃত্তীয় প্রতিক্রিয়া হিসাবে শুরু করা হয়েছিল যা টিস্যু মেরামত করতে এবং কাঠামোগত অখণ্ডতা বজায় রাখতে সহায়তা করে (9)। যাইহোক, দীর্ঘস্থায়ী, বারবার রেনাল ইনজুরির পরে, মায়োফাইব্রোব্লাস্টের সক্রিয়করণ এবং বিস্তার অব্যাহত থাকে, যার ফলে অত্যধিক ECM উত্পাদন এবং জমা হয়, যার ফলে কার্যকরী কিডনি প্যারেনকাইমা নষ্ট হয়ে যায় এবং শেষ পর্যন্ত, কিডনি ব্যর্থতা (1O,11)।

কিডনি রোগের জন্য Cistanche para que sirve-এ ক্লিক করুন

আধুনিক চিকিৎসার অগ্রগতি সত্ত্বেও, কয়েকটি ক্লিনিকাল থেরাপির বিরুদ্ধে কার্যকর প্রমাণিত হয়েছেকিডনি ফাইব্রোসিস. অ্যাঞ্জিওটেনসিন-কনভার্টিং এনজাইম ইনহিবিটরস (ACEIs) এবং এনজিওটেনসিন রিসেপ্টর ব্লকার (ARBs), উদাহরণস্বরূপ, প্রোটিনুরিয়া কমাতে দেখানো হয়েছে।রেনালফাইব্রোসিস, এবং CKD এর অগ্রগতি কমিয়ে দেয় (12,13)। অন্যদিকে পেন্টক্সিফাইলাইন, একটি অ-নির্দিষ্ট ফসফোডিস্টেরেজ ইনহিবিটর, TGF- 1-প্ররোচিত ECM এবং CCN2 এক্সপ্রেশনকে বাধা দিতে দেখা গেছে, যার ফলে টিউবুলোইনটারস্টিশিয়াল ক্ষয়প্রাপ্ত হয়ফাইব্রোসিস(14)। ACEI এবং ARB-এর ব্যবহার অবশ্য তাদের হাইপোটেনসিভ প্রভাব এবং হাইপারক্যালেমিয়ার মতো সম্ভাব্য প্রতিকূল প্রভাব দ্বারা সীমাবদ্ধ। উপরন্তু, এসিএল/এআরবি বা পেন্টক্সিফাইলাইন চিকিত্সার অগ্রগতি থামাতে পারে নারেনালফাইব্রোসিসএবং CKD(15,16)। অতএব, প্যাথোজেনেসিসের জন্য গুরুত্বপূর্ণ অভিনব মধ্যস্থতাকারী বা পথগুলি সনাক্ত করা অপরিহার্যরেনালফাইব্রোসিসCKD এর বিরুদ্ধে কার্যকর থেরাপিউটিক বিকাশ করাদীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগ).

সম্প্রতি, আমরা 5 (TXNDC5), একটি ইআর-নিবাসী, ফাইব্রোব্লাস্ট-সমৃদ্ধ প্রোটিন ধারণকারী থিওরেডক্সিন ডোমেন সনাক্ত করেছি যা একটি প্রোটিন ডাইসালফাইড আইসোমারেজ (পিডিআই) এর এনজাইম কার্যকলাপ সহ কার্ডিয়াকের একটি গুরুত্বপূর্ণ মধ্যস্থতাকারী হিসাবে।ফাইব্রোসিস(17)। আমরা দেখিয়েছি যে অত্যধিক TXNDC5 কার্ডিয়াকের বিকাশকে উৎসাহিত করেফাইব্রোসিসরেডক্স-নির্ভর কার্ডিয়াক ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন এবং ইসিএম উত্পাদনের মাধ্যমে। Txndc5 এর জেনেটিক অপসারণ কার্ডিয়াককে উন্নত করেফাইব্রোসিসএবং ইঁদুরের অ্যাগোনিস্ট দ্বারা সংকোচনশীল কর্মহীনতা (17)। মায়োকার্ডিয়াল ফাইব্রোজেনেসিসে TXNDC5-এর পর্যবেক্ষণ করা অপরিহার্য ভূমিকার উপর ভিত্তি করে, আমরা অনুমান করেছি যে TXNDC5 টিস্যুর বিকাশে সমালোচনামূলকভাবে অবদান রাখতে পারে।ফাইব্রোসিসননকার্ডিয়াক অঙ্গে, বিশেষ করেকিডনি ফাইব্রোসিস.

বর্তমান সমীক্ষায়, আমরা দেখিয়েছি যে TXNDC5 মানব এবং মাউস উভয় ফাইব্রোটিক কিডনিতে বিশেষত কোলাজেন-নিঃসরণকারী রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে অত্যন্ত আপ-নিয়ন্ত্রিত ছিল। Txndc5 এর গ্লোবাল ডিলিটেশন এর পরিধিকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছেরেনালফাইব্রোসিসকিডনির আঘাতের একাধিক মাউস মডেলে। যান্ত্রিকভাবে, আমরা দেখিয়েছি যে অত্যধিক TXNDC5, TGF দ্বারা প্ররোচিত- 1 ATF6-নির্ভর ER স্ট্রেস পাথওয়ের মাধ্যমে, বৃদ্ধি করেরেনালফাইব্রোসিসপোস্টট্রান্সলেশনাল স্ট্যাবিলাইজেশন এবং TGF- রিসেপ্টর টাইপ I(TGFBR1) আপগ্র্যুলেশনের মাধ্যমে কিডনি ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন/প্রসারণ এবং ECM উৎপাদনের প্রচার করে। গুরুত্বপূর্ণভাবে, আমরা দেখিয়েছি যে Txndc5 এর ফাইব্রোব্লাস্ট-নির্দিষ্ট অপসারণ প্ররোচিত করা কার্যকরভাবে এর বিকাশ এবং অগ্রগতিকে উন্নত করেছে।কিডনি ফাইব্রোসিসইঁদুরের বিভিন্ন ধরণের আঘাতের দ্বারা প্ররোচিত, পরামর্শ দেয় যে TXNDC5 টার্গেট করা একটি অভিনব এবং চিকিত্সার জন্য শক্তিশালী পদ্ধতি হতে পারেরেনালফাইব্রোসিসএবং সংরক্ষণ করুনকিডনিফাংশন.

চিত্র 1. TXNDC5 উল্লেখযোগ্যভাবে মাউস ফাইব্রোটিক কিডনি এবং CKD রোগীদের কিডনি নমুনাগুলিতে উন্নীত করা হয়েছিল( দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগ).

(A) IHC স্টেনিং (n=3) এবং (B) ইমিউনোব্লটস (n=6) দেখায় যে TXNDC5 এর প্রোটিন এক্সপ্রেশন UUO বা uIRI দ্বারা প্ররোচিত মাউস ফাইব্রোটিক কিডনিতে আপ-রেগুলেটেড ছিল, বিপরীত কিডনির তুলনায় (CL) . স্কেল বার: 50 μm।

(C) পরিমাণগত RT-PCR দেখিয়েছে যে Txndc5 ট্রান্সক্রিপ্ট UUO এবং uIRI (n=4–7) দ্বারা প্ররোচিত মাউস ফাইব্রোটিক কিডনিতে আপ-রেগুলেট করা হয়েছে।

(D) CKD (GSE66494) রোগীদের কাছ থেকে মানব কিডনির নমুনাগুলির মাইক্রোয়ারে ডেটার পুনঃবিশ্লেষণে দেখা গেছে যে TXNDC5, COL3A1, এবং FN1 উল্লেখযোগ্যভাবে CKD রোগীদের কিডনি টিস্যুতে নিয়ন্ত্রণ করা হয়েছে (স্বাস্থ্য নিয়ন্ত্রণ n=8, CKD n {{ 6}})। A-C-এর জন্য, ডেটা 3 বা তার বেশি স্বাধীন পরীক্ষামূলক প্রতিলিপিগুলির প্রতিনিধি।

সমস্ত প্যানেলের জন্য, ডেটা গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। *P < {{0}}৷{4}}5,="" **p="">< 0.01,="" ***p="">< 0.001="" by="" 2-="" পার্শ্বযুক্ত="" টি-টেস্ট="" (a–c)="" বা="" মান-="" হুইটনি="" পরীক্ষা="">

ফলাফল

TXNDC5 মানব এবং মাউস ফাইব্রোটিক কিডনিতে উল্লেখযোগ্যভাবে আপ-রেগুলেটেড ছিল। এর প্যাথোজেনেসিসে TXNDC5 এর সম্ভাব্য জড়িত থাকার তদন্ত করাকিডনি ফাইব্রোসিস, আমরা প্রথমে একতরফা ইউরেটারাল অবস্ট্রাকশন (UUO), একতরফা ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন ইনজুরি (uIRI), বা ফলিক অ্যাসিড (FA) প্রশাসনের দ্বারা প্ররোচিত ফাইব্রোটিক মাউস কিডনি টিস্যুতে এর প্রোটিন প্রকাশের মাত্রা নির্ধারণ করেছি। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি অধ্যয়নগুলি প্রকাশ করেছে যে সমস্ত 3টি মাউস মডেল থেকে কিডনি বিভাগে TXNDC5 স্টেনিংয়ের তীব্রতা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে।রেনালফাইব্রোসিস(চিত্র 1A এবং পরিপূরক চিত্র 1A; এই নিবন্ধটির সাথে অনলাইনে সম্পূরক উপাদান উপলব্ধ; https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1)। ইমিউনোব্লটিং এবং পরিমাণগত বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন PCR(RT-PCR) এছাড়াও ফাইব্রোটিক মাউস কিডনিতে TXNDC5 এর প্রোটিন (চিত্র 1B) এবং ট্রান্সক্রিপ্ট (চিত্র 1C এবং পরিপূরক চিত্র 1B) এক্সপ্রেশন স্তরের উল্লেখযোগ্য আপগ্র্যুলেশন দেখিয়েছে। এই ফলাফলগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, CKD(GSE66494)(18) রোগীদের রেনাল বায়োপসি নমুনা থেকে প্রাপ্ত মাইক্রোয়ারে ডেটার পুনঃবিশ্লেষণে দেখা গেছে যে TXNDC5 এর অভিব্যক্তি মাত্রা (2.24 গুণ, পি)<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">কিডনি ফাইব্রোসিসযেমন COL3A1 এবং FN, স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের (চিত্র 1D এবং পরিপূরক চিত্র 1C) তুলনায় CKD আক্রান্ত রোগীদের কিডনি নমুনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। একসাথে নেওয়া, ফাইব্রোটিক মানব/মাউস কিডনিতে TXNDC5/Txndc5 এক্সপ্রেশনের পরিলক্ষিত আপগ্র্যুলেশন এবং ফাইব্রোজেনিক ইসিএম প্রোটিন জিনের সাথে এর ইতিবাচক সম্পর্ক প্যাথোজেনেসিসে TXNDC5 এর সম্ভাব্য ভূমিকার পরামর্শ দেয়।কিডনি ফাইব্রোসিস.

চিত্র 2. টিএক্সএনডিসি5 রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টে অত্যন্ত উন্নীত ছিল, তবে ফাইব্রোটিক কিডনির TEC, এন্ডোথেলিয়াল কোষ বা পডোসাইটগুলিতে নয়।

(A এবং C) IF Col1a তে UUO দ্বারা প্ররোচিত ফাইব্রোটিক কিডনির অংশে TXNDC5 (লাল) এর দাগ দেখায়1-GFPTg ইঁদুরে TXNDC5 প্রধানত কোলাজেন-নিঃসরণকারী রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টে (সবুজ), উভয় রেনাল কর্টেক্স এবং মেডুলায় প্রকাশিত হয়েছিল। (n=6)। কোষের নিউক্লিয়াস DAPI (নীল) দিয়ে দাগযুক্ত ছিল। স্কেল বার: 100 μm।

(B) যদি Cdh16-Cre, NPHS2-Cre, এবং Tie2-Cre/ERT2 tdTomato ইঁদুরে UUO দ্বারা প্ররোচিত ফাইব্রোটিক কিডনির অংশে TXNDC5 (সবুজ) এর দাগ। কোষের নিউক্লিয়াস DAPI (নীল) দিয়ে দাগযুক্ত ছিল। স্কেল বার: 100 μm।

(D) UUO-প্ররোচিত ফাইব্রোটিক কিডনিতে বিভিন্ন ধরণের কিডনি কোষে TXNDC5 প্লাস কোষের অনুপাত চিত্রিত করার জন্য একটি পাই চার্ট।

ডেটা 3 বা তার বেশি স্বাধীন পরীক্ষামূলক প্রতিলিপিগুলির প্রতিনিধি। C-তে ডেটা গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপিত হয়।

TXNDC5 ফাইব্রোটিক কিডনিতে কোলাজেন-নিঃসরণকারী রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে অত্যন্ত সমৃদ্ধ ছিল। কিডনি ফাইব্রোজেনেসিস প্রক্রিয়ায় একাধিক ধরণের কিডনি কোষ জড়িত। কিডনির আঘাতের পরে, রেসিডেন্ট (19) এবং পেরিভাসকুলার (20) রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিকে সক্রিয় মায়োফাইব্রোব্লাস্টের মধ্যে পার্থক্য দেখানো হয়েছে এবং এর ফলে ইসিএম জমেছে। টিইসি এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলিও এর বিকাশে অবদান রাখে বলে জানা গেছেকিডনি ফাইব্রোসিসএপিথেলিয়াল- এবং এন্ডোথেলিয়াল-থেকে-মেসেনকাইমাল ট্রানজিশনের মাধ্যমে, যথাক্রমে (10,21)। কোষের প্রকারগুলি নির্ধারণ করতে যেখানে রেনাল প্রক্রিয়া চলাকালীন TXNDC5 প্রকাশ করা হয়েছিলফাইব্রোসিস, একাধিক রিপোর্টার মাউস লাইন যা রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টের ফ্লুরোসেন্স লেবেলিংয়ের অনুমতি দেয়(কোলা1-GFP', GFP দ্বারা চালিত Collal enhancer/promoter, ref.22), TECs(Cdh16-Cre ROSA26- tdTomato), এন্ডোথেলিয়াল কোষ (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato), এবং পডোসাইটস (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) UUO, uIRI, বা এফএ চিকিত্সা প্ররোচিত করাকিডনি ফাইব্রোসিস. এই প্রাণীদের কিডনি অংশে ইমিউনোফ্লুরেসেন্স (IF) দাগ দেওয়া থেকে জানা যায় যে TXNDC5 স্পষ্টভাবে আপ-রেগুলেটেড এবং UUO (81 শতাংশ) (চিত্র 2) দ্বারা প্ররোচিত ফাইব্রোটিক মাউস কিডনিতে GFP-পজিটিভ, কোলাজেন-সিক্রেটিং রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টের সাথে একত্রিত হয়েছে। , uIRI (76.8 শতাংশ), এবং এফএ চিকিত্সা (73.4 শতাংশ) (পরিপূরক চিত্র2, A এবং B)। UUO-প্ররোচিত ফাইব্রোটিক কিডনিতে, TXNDC5 শুধুমাত্র TECs (5.94 শতাংশ), পডোসাইট (0.63) তে বিক্ষিপ্তভাবে প্রকাশ করা হয়েছিল শতাংশ ), এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষ (2.05 শতাংশ) (চিত্র 2, B এবং D)। UUO-এর অধীন মাউস কিডনি থেকে বিচ্ছিন্ন ফাইব্রোব্লাস্টগুলির ফ্লোসাইটোমেট্রি বিশ্লেষণে TXNDC5* কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টগুলির একটি উল্লেখযোগ্য বিস্তৃতি এবং সেইসাথে এই কোষগুলিতে TXNDC5 এর একটি উল্লেখযোগ্য আপগ্রেশন প্রকাশ করেছে। বিপরীতমুখী নিয়ন্ত্রণ কিডনি (পরিপূরক চিত্র 2C) এর সাথে তুলনা করে। ফাইব্রোটিকের রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টে TXNDC5 এর শক্তিশালী সমৃদ্ধি লক্ষ্য করা যায় যে TXNDC5 অবদান রাখতে পারেকিডনি ফাইব্রোসিসএই কোলাজেন-নিঃসরণকারী ফাইব্রোজেনিক কোষগুলির কার্যকলাপ/আচরণ নিয়ন্ত্রণ করে।

TXNDC5 কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টগুলির সক্রিয়করণ, প্রসারণ এবং ECM উত্পাদন প্ররোচিত করার জন্য প্রয়োজনীয় এবং যথেষ্ট ছিল। এর পরে, আমরা কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে TXNDC5 এর কার্যকরী ভূমিকা নির্ধারণ করেছি। TGF- 1(10 ng/mL) দিয়ে উদ্দীপিত প্রাথমিক মানব কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টগুলি (HKFs) TXNDC5 এর প্রোটিন (চিত্র 3A) এবং ট্রান্সক্রিপ্ট (চিত্র 3B) এক্সপ্রেশন লেভেলের পাশাপাশি ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন মার্কার পেরিওস্টিনে শক্তিশালী আপগ্রিগুলেশন দেখায়। এবং ECM প্রোটিন (COL1Al, fibronectin, এবং CCN2)। shRNA এর সাথে TXNDC5-এর নকডাউন উল্লেখযোগ্যভাবে ক্ষয়প্রাপ্ত TGF{10}}প্রেরিত প্রোটিন/mRNA পেরিওস্টিনের আপগ্র্যুলেশন এবং HKFs-এ একাধিক ECM প্রোটিন (চিত্র 3, A এবং B)। উপরন্তু, TGF1 চিকিত্সা HKF-এর প্রসারণমূলক কার্যকলাপকে উন্নত করেছে, যা TXNDC5 নকডাউন (চিত্র 3D) দ্বারা সম্পূর্ণরূপে বাতিল করা হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে TGF- 1-প্ররোচিত HKF সক্রিয়করণ, বিস্তার, এবং ECM উৎপাদনের জন্য TXNDC5 অপরিহার্য। অন্যদিকে, TXNDC5-এর অত্যধিক এক্সপ্রেশনের ফলে, পেরিওস্টিন, COL1A1 এবং ফাইব্রোনেক্টিন (চিত্র 3C) এবং সেইসাথে HKF-তে প্রসারিত কার্যকলাপ (চিত্র 3E) বৃদ্ধি পেয়েছে। সমষ্টিগতভাবে, এই ফলাফলগুলি দেখায় যে TXNDC5, TGF- 1-এর নিচের দিকে, কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টগুলির সক্রিয়করণ, বিস্তার, এবং ECM উত্পাদন প্রচারের জন্য প্রয়োজনীয় এবং যথেষ্ট।

চিত্র 3. TXNDC5 এর নকডাউন অ্যাটেনুয়েটেড TGF- 1–প্ররোচিত HKF সক্রিয়করণ এবং ECM উত্পাদন; TXNDC5 এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন HKF অ্যাক্টিভেশন এবং ECM উত্পাদন ট্রিগার করার জন্য যথেষ্ট ছিল।

(A) প্রোটিন এবং (B) ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন মার্কার (পেরিওস্টিন) এবং ECM প্রোটিন (COL1A1, fibronectin, এবং CCN2) এর ট্রান্সক্রিপ্ট এক্সপ্রেশন মাত্রা TGF- 1 (10 ng/mL) অনুসরণ করে নিয়ন্ত্রণে (স্ক্র্যাম্বল) HKFs বৃদ্ধি করা হয়েছিল চিকিত্সা TXNDC5-এর নকডাউন HKFs (n=5–10) তে TGF- 1 দ্বারা প্ররোচিত এই ফাইব্রোজেনিক মার্কারগুলির আপগ্র্যুলেশনকে কমিয়েছে।

(C) HKFs (n=3–10) এ ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন মার্কার (পেরিওস্টিন) এবং ইসিএম প্রোটিন (সিওএল1এ1, ফাইব্রোনেকটিন) আপগ্র্যুলেশনের জন্য TXNDC5-এর ওভার এক্সপ্রেশন যথেষ্ট ছিল।

(D) TGF- 1 (10 ng/mL) এর চিকিত্সা HKF-এর সেলুলার প্রসারণ কার্যকলাপ বৃদ্ধি করে, যা TXNDC5 নকডাউন দ্বারা বাতিল করা হয়েছিল।

(ই) TXNDC5 এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন এইচকেএফগুলির সেলুলার প্রসারণ কার্যকলাপ বাড়িয়েছে। D এবং E, n=10-এ। ডেটা 3 বা তার বেশি স্বাধীন পরীক্ষামূলক প্রতিলিপিগুলির প্রতিনিধি।

সমস্ত প্যানেলের জন্য, ডেটা গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। 2টি গোষ্ঠীর জন্য পার্থক্যের পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য একটি 2-পার্শ্বযুক্ত টি-পরীক্ষা দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল এবং 3 বা ততোধিক গোষ্ঠীর মধ্যে এটি 1-পথ ANOVA ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল, সিডাকের পোস্ট-হক পরীক্ষা দ্বারা অনুসরণ করা হয়েছিল। *P < 0।{7}}5,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>

কিডনির বিরুদ্ধে সুরক্ষিত Txndc5 এর বিশ্বব্যাপী মুছে ফেলা খ. এর বিকাশে TXNDC5 এর প্রয়োজনীয়তা নির্ধারণ করতেকিডনি ফাইব্রোসিসভিভোতে, WT এবং Tndc5-/ইঁদুরগুলিকে UUO, uIRI, এবং FA চিকিত্সা করা হয়েছিল৷ কিডনির অংশে পিক্রোসিরিয়াস লাল এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম দাগ ব্যাপকভাবে দেখা গেছেরেনালফাইব্রোসিসWT ইঁদুরে UUO (চিত্র 4A), uIRI (চিত্র 5A), এবং FA (পরিপূরক চিত্র 3A) এর প্রশাসন অনুসরণ করে। Txndc5 এর গ্লোবাল মুছে ফেলার পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছেরেনালফাইব্রোসিসসমস্ত 3টি কিডনি আঘাতের মডেলে (চিত্র 4A, চিত্র 5A, এবং পরিপূরক চিত্র 3A)।

চিত্র 4. UUO দ্বারা প্ররোচিত Txndc5 অ্যাটেনুয়েটেড রেনাল ফাইব্রোসিস মুছে ফেলা।

(A) UUO-এর 10 দিন পরে WT এবং Txndc5-7মাউস থেকে কিডনি বিভাগের পিক্রোসিরিয়াস লাল দাগ (শীর্ষ 2 প্যানেল) এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেনিং (নীচের 2 প্যানেল)। পিক্রোসিরিয়াস রেড এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেইনিং এলাকার পরিমাণগত ফলাফলের বার গ্রাফ ডানদিকে দেখানো হয়েছে (n=5-10)।স্কেল বার∶ 100 μm।

(B) UUO এর 10 দিন পর WT এবং Txndc5-/ইঁদুর থেকে কিডনি বিভাগের SHG ছবি। SHG-পজিটিভ এলাকার পরিমাণগত ফলাফল WT-তে ফাইব্রিলার কোলাজেন (সবুজ) বৃদ্ধি পেয়েছে কিন্তু আঘাতের পর Txndc5 মাইস কিডনিতে নয়।

SHG-এর জন্য চিত্রিত প্রতিটি কিডনি বিভাগের জন্য, TPEF ইমেজিং স্ক্যান করা টিস্যুর প্রোফাইল দেখানোর জন্য প্রাপ্ত হয়েছিল (নীচের প্যানেলে লাল রঙ)(n=3)।স্কেল বার: 50 um। (C)ইমিউনোব্লটগুলি UUO (n= 3-6) এর 10 দিন পরে WT এবং Txndc5-/ইঁদুর থেকে সম্পূর্ণ কিডনি নির্যাসে ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন মার্কার (Periostin) এবং ECM (COL1A1) প্রোটিনের প্রকাশের মাত্রা দেখিয়েছে। ডেটা 3 বা আরও বেশি স্বাধীন পরীক্ষামূলক প্রতিলিপিগুলির প্রতিনিধি।

সমস্ত প্যানেলের জন্য, ডেটা গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। 3 বা ততোধিক গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যের পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য নির্ধারণ করা হয়েছিল 1-পথ ANOVA ব্যবহার করে, তারপরে সিডাকের পোস্ট-হক পরীক্ষা।**P<><>

প্যাথোজেনিক ফাইব্রিলার কোলাজেন (টাইপ I এবং II) নির্দিষ্টভাবে পরিমাপ করতে এবং ঐতিহ্যগত স্টেনিং পদ্ধতির সাহায্যে ফাইব্রোটিক এলাকার অত্যধিক মূল্যায়ন এড়াতে, দ্বিতীয় হারমোনিক জেনারেশন (SHG) মাইক্রোস্কোপি, একটি অভিনব অপটিক্যাল টিস্যু ইমেজিং সিস্টেম যা ফাইব্রিলারের ভিজ্যুয়ালাইজেশনের অনুমতি দেয়, কিন্তু নন-ফাইব্রিলার নয়, ফাইব্রোটিক অঙ্গগুলিতে কোলাজেন (23,24), এর পরিমাণ নির্ধারণের জন্য নিযুক্ত করা হয়েছিলফাইব্রোসিসআঘাতের পরে WT এবং Tndc5 প্লাস মাউস কিডনিতে। উল্লিখিত ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, SHG মাইক্রোস্কোপি UUO(চিত্র 4B), uIRI (চিত্র 5B), এবং এফএ চিকিত্সা (পরিপূরক চিত্র 3B) অনুসরণ করে WTকিডনিতে ফাইব্রিলার কোলাজেন জমার লক্ষণীয় বৃদ্ধি দেখিয়েছে, যার পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে কমে গেছে{101} 4}}/ ইঁদুর (চিত্র 4B, চিত্র 5B, এবং পরিপূরক চিত্র 3B)।

ইমেজিং স্টাডির দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা Txndc5mouse কিডনিতে ক্ষয়প্রাপ্ত পোস্টইনজুরি ফাইব্রোটিক প্রতিক্রিয়ার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, Tendc5 মুছে ফেলার ফলে আঘাতের পরে মাউসের কিডনিতে Collar, Eln, Fnl, এবং Ccn2 সহ ECM প্রোটিন জিনের আপগ্রিগুলেশন প্রশমিত হয়েছে (পরিপূরক, F3CE)। পুরো কিডনি টিস্যু লাইসেটগুলির ইমিউনোব্লটগুলিও UUO এবং uIRI (চিত্র 4C এবং চিত্র 5C) অনুসরণ করে WT ইঁদুরের তুলনায় Txndc5-/ইঁদুরে ECM(COLIA1) এবং ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন মার্কার (পেরিওস্টিন) এর প্রোটিনের মাত্রা হ্রাস করেছে।

চিত্র 5. ulRI দ্বারা প্ররোচিত Txndc5 উন্নত রেনাল ফাইব্রোসিস মুছে ফেলা।

(A) পিক্রোসিরিয়াস রেড স্টেনিং (শীর্ষ 2 প্যানেল) এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেনিং (নীচের 2 প্যানেল) কিডনি বিভাগ থেকে WT এবং Txndc5-7মাউসের 28 দিন পর ulRI. বার গ্রাফের পরিমাণগত ফলাফলের পিক্রোসরিস রেড এবং ম্যাসট্রিক দাগের জায়গাগুলি ডানদিকে দেখানো হয়েছে (n=6)। স্কেল বার∶ 100 μm।

(B) ULRI এর 28 দিন পরে WT এবং Txndc5-মাউস থেকে কিডনি বিভাগের SHG ছবি। SHG-পজিটিভ এলাকার পরিমাণগত ফলাফল WT-তে ফাইব্রিলার কোলাজেন (সবুজ) বৃদ্ধি পেয়েছে কিন্তু আঘাতের পর Txndc5 মাইস কিডনিতে নয়। SHG-এর জন্য চিত্রিত প্রতিটি কিডনি বিভাগের জন্য, TPEF ইমেজিং স্ক্যান করা টিস্যুর প্রোফাইল দেখানোর জন্য প্রাপ্ত হয়েছিল (নীচের প্যানেলে লাল রঙ)（n=3）.স্কেল বার∶50 μm।

(C) ইমিউনোব্লটগুলি ulRI (n=5-9) এর 28 দিন পরে WT এবং Txndc5/ইঁদুর থেকে পুরো কিডনি নির্যাসে ফাইব্রোব্লাস্ট অ্যাক্টিভেশন মার্কার (Periostin) এবং ECM (COL1A1) এর প্রোটিন এক্সপ্রেশন মাত্রা দেখিয়েছে। ডেটা 3 বা তার বেশি স্বাধীন পরীক্ষামূলক প্রতিলিপিগুলির প্রতিনিধি।

সমস্ত প্যানেলের জন্য, ডেটা গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। 3 বা ততোধিক গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যের পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য নির্ধারণ করা হয়েছিল ANOVA পদ্ধতিতে, সিডাকের পোস্ট-হক পরীক্ষাগুলি অনুসরণ করে।*P<><><>

TXNDC5 অন্যান্য রেনাল কোষ যেমন TECs, পডোসাইটস এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলিতে প্রকাশ করার সম্ভাবনাকে বাদ দিতে এখনও এর বিকাশে অবদান রাখতে পারেরেনালফাইব্রোসিস, আমরা TECs (Cdh16-cre*Txcndc5i, বা Txndc5Epeko), পডোসাইটস (NPHS2-cre*Txndc5/n, বা Tendc5Podxko), এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলির জন্য নির্দিষ্ট Txndc5 শর্তসাপেক্ষ নকআউট মাউস তৈরি করেছি (টাই{{{ 7}cre/ERT2*Tendc5/, বা Txndc5Endo.eko। Txndc5Pieko এবং Txndc5 Poio-cko ইঁদুর ব্যবহার করে পরীক্ষায়, Txndc5Wmice কন্ট্রোল হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছে; Txndc5EMio-eko ইঁদুরের উপর পরীক্ষা-নিরীক্ষায়, চিত্র 9A-তে বর্ণিত ট্যামক্সিফেন ব্যবহার করে Txndc5 অপসারণ প্ররোচিত হয়েছিল, যেখানে ট্যামক্সিফেন-চিকিত্সা করা টাই{{20}Cre/ERT2 ইঁদুরগুলি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল। TECs, পডোসাইটস, বা এন্ডোথেলিয়াল কোষে Txndc5 এর টার্গেটেড মুছে ফেলা, তবে, এর পরিমাণকে প্রভাবিত করেনিকিডনি ফাইব্রোসিসUUO বা FA দ্বারা প্ররোচিত (পরিপূরক চিত্র 6, BE)। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে TXNDC5 টিইসি, পডোসাইট এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলিতে প্রকাশিত রোগের রোগজনিত ক্ষেত্রে সামান্য অবদান রাখে, যদি থাকে।কিডনিফাইব্রোসিস.

কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টে Txndc5 মুছে ফেলা কিডনির আঘাতের প্রতিক্রিয়ায় TEC অ্যাপোপটোসিস থেকে রক্ষা করে। প্রক্রিয়া মধ্যেরেনালফাইব্রোসিস, আহত TEC গুলি মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশন এবং এপিকোবাসাল পোলারিটি হারায়, এর পরে অ্যাপোপটোসিস এবং কোষের মৃত্যু (30) হয়। Txndc5 মুছে ফেলা হলে আঘাতের প্রতিক্রিয়া হিসাবে TECs-এর অ্যাপোপটোসিসকে প্রভাবিত করে কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা WT এবং Txndc5-মাউস কিডনিতে TUNEL স্টেনিং পরিচালনা করেছি। UUO এর 10 দিন পর বিভাগ। WT ইঁদুরের UUO-প্ররোচিত ফাইব্রোটিক কিডনিতে অ্যাপোপটোটিক TEC-এর সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যেখানে Txndc5 মুছে ফেলার ফলে TECapoptosis এর পরিমাণ হ্রাস পেয়েছে। এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে সক্রিয় কিডনি ফাইব্রোব্লাস্টগুলি প্যারাক্রাইন প্রভাব (31) এর মাধ্যমে TEC অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করতে পারে। যেহেতু Tendc5 সবেমাত্র TEC-তে প্রকাশ করা হয়, তাই সম্ভবত UUO অনুসরণ করে Txndc5-7 ইঁদুরের মধ্যে পরিলক্ষিত কমে যাওয়া TEC অ্যাপোপটোসিস কোষ-স্বায়ত্তশাসিত প্রভাব নয় বরং হ্রাসকৃত আন্তঃস্থায়ী প্রভাবের জন্য গৌণ ছিল।ফাইব্রোসিসএবং তাই আশেপাশের কিডনি ফাইব্রোব্লাস্ট থেকে কম-প্রোপোপটোটিক সংকেত। এই অনুমানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, Txndc5 (Tendc5kO) এর ফাইব্রোব্লাস্ট-নির্দিষ্ট মুছে ফেলার ফলে UUO(পরিপূরক) এর 10 দিন পর Txndc5-/ইঁদুরে পরিলক্ষিত হওয়ার মতো পরিমাণে TEC অ্যাপোপটোসিস হ্রাস পেয়েছে। F4/80-ধনাত্মক ম্যাক্রোফেজ এবং CD31-পজিটিভ এন্ডোথেলিয়াল কোষের সংখ্যা WT এবং Txndc5-মাউস কিডনিতে, UUO সহ বা ছাড়াই তুলনীয় ছিল, পরামর্শ দেয় যে Txndc5 মুছে ফেলা ম্যাক্রোফেজ অনুপ্রবেশকে প্রভাবিত করে না বা মাউস কিডনিতে পেরিটুবুলার কৈশিক ঘনত্ব। একত্রে নেওয়া, এই ডেটাগুলি পরামর্শ দেয় যে Txndc5 মুছে ফেলার রেনো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলি হ্রাসকৃত টিউবুলার ইন্টারস্টিশিয়াল থেকেফাইব্রোসিসএবং টিইসি অ্যাপোপটোসিস, রেনাল কৈশিক ঘনত্ব বা ম্যাক্রোফেজগুলিকে প্রভাবিত না করে।

রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টে Tendc5 এর প্ররোচিত মোছা প্রতিষ্ঠিত অগ্রগতি হ্রাস করেছেকিডনি ফাইব্রোসিস. কিডনিতে Txndc5 টার্গেট করা প্রতিষ্ঠিত ক্ষেত্রে উপকারী হতে পারে কিনা তা নির্ধারণ করতেরেনালফাইব্রোসিস, রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টে Txndc5 মুছে ফেলা Txndc5eko ইঁদুরে UUO এর 10 দিন পরে প্ররোচিত হয়েছিল, একটি সময় বিন্দু যখন ব্যাপক।রেনালফাইব্রোসিসলক্ষ্য করা যায়। এই পরীক্ষাগুলিতে, ট্যামোক্সিফেন-চিকিত্সা করা কোলা2-Cre ইঁদুরগুলি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল। যেমন দেখানো হয়েছে, Colla2-Cre এবং Tcndc5eko ইঁদুরের একই পরিমাণ ছিলরেনালফাইব্রোসিসট্যামোক্সিফেন চিকিত্সার আগে UUO এর 10 দিন পরে। ট্যামোক্সিফেন ইনজেকশনের এগারো দিন পরে, তবে, রেনাল ফাইব্রোসিসের মাত্রা নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের মধ্যে অগ্রগতি অব্যাহত থাকে (ফাইব্রোটিক এলাকা 5.1 শতাংশ থেকে 10.6 শতাংশে বৃদ্ধি পেয়েছে), যেখানে এর অগ্রগতিকিডনিফাইব্রোসিসTxndc5eko ইঁদুরে প্রায় থেমে গেছে (ফাইব্রোটিক এলাকা 5.3 শতাংশ থেকে 6.9 শতাংশে পরিবর্তিত হয়েছে)। ইমিউনোব্লটিং UUO-এর পরে D10 এবং D21-এর মধ্যে নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের তুলনায় Txndc5eko ইঁদুরে CCN2, পেরিওস্টিন এবং TGFBR1-এর উল্লেখযোগ্যভাবে ক্ষয়প্রাপ্ত আপগ্র্যুলেশনও দেখিয়েছে। এই ফলাফলগুলি দেখায় যে রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে Txndc5 এর হস্তক্ষেপমূলক মুছে ফেলার অগ্রগতি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়।কিডনি ফাইব্রোসিস, পরামর্শ দিচ্ছে যে Vivo-এ TXNDC5-এর লক্ষ্যবস্তু উন্নতির জন্য একটি অভিনব এবং শক্তিশালী থেরাপিউটিক পদ্ধতি হতে পারেকিডনিফাইব্রোসিসএবং CKD এর অগ্রগতি মন্থর করতে।

অংশ Ⅱ করতে এখানে ক্লিক করুন