অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিনে ছেঁটে যাওয়া SARS-CoV-2 স্পাইক প্রোটিন S1 সাবুনিট ইঁদুরের একটি নির্দিষ্ট রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতার দিকে নিয়ে যায়
Dec 12, 2023
অ্যাবস্ট্রাct:একটি কার্যকর এবং নিরাপদ করোনাভাইরাস ডিজিজ 2019 (COVID-19) ভ্যাকসিনের বিকাশ বর্তমান অবস্থার আলোকে গুরুতর তীব্র শ্বাসযন্ত্রের রোগ করোনভাইরাস 2 (SARS-CoV-2) মহামারী পরিচালনার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ পদ্ধতি। এই গবেষণায়, আমরা অপ্টিমাইজ করা SARS-CoV-2 স্পাইক জিনের একটি সংক্ষিপ্ত অংশ তৈরি করেছি (2043 bp, নাম S1) যা একটি ছেঁটে যাওয়া S1 প্রোটিনকে এনকোড করতে সক্ষম হয়েছিল৷ প্রোটিনটি SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে ইঁদুরের কার্যকর ইমিউনাইজেশন তৈরি করতে পারে কিনা তা নির্ধারণ করতে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স এবং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দিয়ে এস 1 প্রোটিনের উপস্থিতি নিশ্চিত করা হয়েছিল। S1 জিন ফ্র্যাগমেন্ট (Ad-S1) বহনকারী একটি অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিন 4 সপ্তাহের মধ্যে চারবার ইঁদুরকে ইন্ট্রামাসকুলারভাবে দেওয়া হয়েছিল। SARS-CoV-2 S1 প্রোটিন হিউমোরাল ইমিউনিটি সমস্ত ইমিউনাইজড ইঁদুরের মধ্যে প্রদর্শিত হয়েছিল। ইমিউনাইজড ইঁদুরের সিরাম ভিট্রোতে চমৎকার সংক্রমণ বিরোধী কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে। Ad-S1 টিকা দেওয়ার পরে ইঁদুরের মধ্যে SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে একটি শক্তিশালী হিউমারাল ইমিউন প্রতিক্রিয়া পরিলক্ষিত হয়েছিল, যা পরামর্শ দেয় যে অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিন SARS-CoV-2 এবং অন্যান্য জেনেটিক্যালি স্বতন্ত্রের বিরুদ্ধে ভ্যাকসিন তৈরিতে সহায়তা করতে পারে ভাইরাস
cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত
কীওয়ার্ড: SARS-CoV-2; টিকা; অ্যাডেনোভাইরাল ভেক্টর; S1 জিন; অনাক্রম্যতা
1। পরিচিতি
করোনাভাইরাস ডিজিজ 2019 (COVID-19) প্রায়ই একাধিক অঙ্গ ব্যর্থতা এবং উচ্চ মৃত্যুর হার [1] এর সাথে যুক্ত এবং বিশ্বব্যাপী জননিরাপত্তার জন্য একটি বড় হুমকি তৈরি করে৷ 15 জুলাই 2022 পর্যন্ত, কোভিড-19 মহামারী বিশ্বব্যাপী টিকে আছে, যার মধ্যে 557,917,904টি নিশ্চিত হওয়া মামলা রয়েছে, যার মধ্যে 6,358,899 জন মারা গেছে, বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা (WHO) কে রিপোর্ট করা হয়েছে। উপরন্তু, 11 জুলাই 2022 পর্যন্ত মোট 12,130,881,147 টি ভ্যাকসিনের ডোজ দেওয়া হয়েছে। তাই, নভেল করোনাভাইরাস (nCoV) ভ্যাকসিনের ডিজাইন এবং বিকাশ অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ এবং শীর্ষ বিশ্ব স্বাস্থ্য অগ্রাধিকারগুলির মধ্যে একটি। এস প্রোটিন হল SARS-CoV-2 গুরুতর তীব্র শ্বাসযন্ত্রের রোগ করোনাভাইরাস 2 (SARS-CoV-2) হোস্ট কোষে প্রবেশের একটি মূল কারণ [2,3]। প্রোটিন হোস্ট রিসেপ্টরের সাথে আবদ্ধ হয় এবং ভাইরাসটিকে হোস্ট কোষে মসৃণভাবে প্রবেশ করতে দেয় [৪]। এন-লিঙ্কযুক্ত গ্লাইকানগুলি ট্রাইমার পৃষ্ঠ থেকে বেরিয়ে আসে এবং এস প্রোটিনকে ব্যাপকভাবে সাজায়, এস প্রোটিন ভাঁজ, হিউমারাল অনাক্রম্যতা এবং হোস্ট সেল প্রোটিজ প্রক্রিয়াকরণকে প্রভাবিত করে [5]। SARS-CoV-2 S প্রোটিনের এন-লিঙ্কযুক্ত গ্লাইকান ঘনত্ব অন্যান্য মানব প্যাথোজেনিক করোনাভাইরাস-প্ররোচিত এস প্রোটিনের তুলনায় কম। অতএব, এস প্রোটিন অত্যন্ত ইমিউনোজেনিক হতে পারে এবং অ্যান্টিবডি নিরপেক্ষ করার একটি প্রধান লক্ষ্য। এস প্রোটিনের তিনটি কাঠামোগত ডোমেন রয়েছে, যার মধ্যে এস 1 ডোমেন হল সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ এস প্রোটিন পৃষ্ঠের অ্যান্টিজেন [4]। বৃহৎ রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন তৈরি করতে অসুবিধার কারণে (প্রোটিন এস এর বহির্মুখী ডোমেন প্রায় 1300 অ্যামিনো অ্যাসিড) এবং সংক্রমণের অ্যান্টিবডি-নির্ভর বর্ধিতকরণ (ADE) ঝুঁকি, S1 (প্রায় 700 অ্যামিনো অ্যাসিড) এবং এর রিসেপ্টর-বাইন্ডিং ডোমেন (RBD, প্রায় 200 অ্যামিনো অ্যাসিড) ব্যাপকভাবে একটি করোনভাইরাস ভ্যাকসিনের জন্য সবচেয়ে আকর্ষণীয় সম্ভাব্য লক্ষ্য হিসাবে বিবেচিত হয় [7,8]। হিউম্যান অ্যাডেনোভাইরাস সেরোটাইপ 5(HAdV-C5) একটি জিন থেরাপি এবং ভ্যাকসিন ডেলিভারি ভেক্টর হিসাবে মৌলিক ভাইরোলজিতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় [9]। HAdV-C5 এর প্রাকৃতিক বৈচিত্র্য রয়েছে এবং এটি বেশিরভাগ হোস্টকে পরজীবী করতে পারে, যা প্রাণী পরীক্ষাগুলির বিকাশের ভিত্তি তৈরি করে। HAdV-C5 থেকে নির্মিত প্রতিলিপিযোগ্যতা এবং প্রতিলিপি ত্রুটি সহ রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টরগুলি ভ্যাকসিন বিতরণ এবং জিন থেরাপিতে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে [9,10]। বর্তমানে, অ্যাডিনোভাইরাসগুলি তীব্র শ্বাসযন্ত্রের সংক্রমণের বিরুদ্ধে ভ্যাকসিন হিসাবে অনুমোদিত হয়েছে এবং এই জাতীয় ভ্যাকসিনের অনেক পরীক্ষা হয়েছে, যেমন ম্যালেরিয়া এবং এইচআইভি-1 [৯]। এই কাগজে, আমরা একটি SARS-CoV-2 মানুষের প্রতিলিপি-ঘাটতি অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টর ভ্যাকসিন এবং এর প্রস্তুতি এবং প্রয়োগের বর্ণনা দিই। এই গবেষণায়, অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিনটি নিম্নরূপ তৈরি করা হয়েছিল: ভেক্টরটি ছিল মানব প্রতিলিপি-ত্রুটিপূর্ণ অ্যাডেনোভাইরাস HAdV-C5 যার সাথে E1 এবং E3 মুছে ফেলা হয়েছিল, কঙ্কালের প্লাজমিডটি ছিল pBHGlox∆E1,3Cre এর সাথে রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস, কোষের প্যাকেজিং ছিল KHE33 কোষ। এবং টার্গেট জিন ছিল SARS-CoV-2 এর ছেঁটে ফেলা S1 প্রোটিন জিন। ভ্যাকসিনে S1 প্রোটিন এক্সপ্রেশন ওয়েস্টার্ন ব্লট এবং ইমিউনোফ্লোরেসেন্স অ্যাসে দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। স্পাইক-ভিত্তিক ভ্যাকসিন প্রার্থীদের দ্বারা প্ররোচিত ইমিউন প্রতিক্রিয়ার গুণমান নির্ধারণের জন্য, টিকা-পরবর্তী অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া বিশদভাবে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ভ্যাকসিনের ইমিউন সুবিধা একটি বাঁধাই অ্যান্টিবডি পরীক্ষা (এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস [ELISA]) এবং নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি পরীক্ষার মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। আমাদের অনুসন্ধানগুলি S1 প্রোটিনের উপর ভিত্তি করে COVID-19 ভ্যাকসিন এবং চিকিত্সাগুলির বিকাশ এবং মূল্যায়নের ভিত্তি প্রদান করে।
2. উপকরণ এবং পদ্ধতি
2.1। কোষ এবং প্রাণী
এই গবেষণায় HEK293 এবং ভেরো E6 বানর কিডনি সেল লাইন ব্যবহার করা হয়েছিল। উভয় কোষ লাইনই ডালবেকোর পরিবর্তিত ঈগলস মিডিয়ামে (DMEM) 2% ফেটাল বোভাইন সিরাম (FBS) এবং 1% পেনিসিলিন এবং স্ট্রেপ্টোমাইসিন 37 ◦C তাপমাত্রায় 5% CO2 এবং স্যাচুরেটেড আর্দ্রতার সাথে সম্পূরক হয়েছিল। কুড়িটি মহিলা C57BL/6 ইঁদুর (6-8 সপ্তাহ) ঝেজিয়াং প্রদেশের ঝেজিয়াং অ্যানিমাল এক্সপেরিমেন্টাল সেন্টার থেকে কেনা হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপে 10টি ইঁদুরের সাথে ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে দুটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল। একটি দলকে টিকা দেওয়া হয়েছিল (100 μL ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন) একটি Ad5 ভেক্টর দিয়ে যা SARS-CoV-2 স্পাইক প্রোটিন (Ad5-S) প্রকাশ করে এবং অন্যটিকে নিয়ন্ত্রণ হিসাবে PBS (100 μL ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন) দিয়ে। ভাইরাসের মোট পরিমাণ ছিল 5 × 109 VP সমস্ত ইঁদুরকে D0/D14 ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন [11,12] দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল। D14 এ, 100 μL এর পেরিফেরাল রক্ত নেওয়া হয়েছিল, সিরাম আলাদা করা হয়েছিল এবং রক্ত সংগ্রহের দুই ঘন্টা পরে দ্বিতীয় ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। D28 এ, রেট্রো-অরবিটাল পাংচার দ্বারা রক্ত সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সিরাম আলাদা করা হয়েছিল। বাইন্ডিং অ্যান্টিবডিগুলি প্রতিটি রক্ত সংগ্রহের 3 দিন পরে সনাক্ত করা হয়েছিল, প্রতিটি রক্ত সংগ্রহের 7 দিন পরে নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডিগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল এবং দ্বিতীয় রক্ত সংগ্রহের 7 দিন পরে সাইটোকাইনগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল। সমস্ত ইঁদুর euthanized ছিল; সমস্ত পরীক্ষা "গণপ্রজাতন্ত্রী চীনের পরীক্ষামূলক প্রাণীর যত্ন ও ব্যবহারের নির্দেশিকা" এবং ঝেজিয়াং শুরেন ইউনিভার্সিটি এথিকাল কাউন্সিল দ্বারা অনুমোদিত কঠোরভাবে পরিচালিত হয়েছিল।
2.2। টিকা
এই গবেষণায় ব্যবহৃত সমস্ত SARS-CoV-2 স্ট্রেনগুলি সম্মতি সহ COVID-19 রোগীদের কাছ থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল৷ সংক্রামক রোগের নির্ণয় ও চিকিত্সার জন্য স্টেট কী ল্যাবরেটরি SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে একটি অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিন (ভেরো সেল, উহান স্ট্রেন, জিআইএসএআইডি নম্বর: ইপিআই_আইএসএল_415711) তৈরি করেছে এবং তারপরে ভ্যাকসিনটি একটি বায়োসেফটি লেভেল (BSL)-এর সাথে সঙ্গতিপূর্ণ সেটিংয়ে তৈরি করা হয়েছিল। ভ্যাকসিনের স্পেসিফিকেশন হল 0.5 মিলি/ডোজ এবং এতে রয়েছে Tris, NaCl, বেতের চিনি, MgCl2.6H2O, C6H9N3O2, পরম ইথানল, এবং SARS-CoV-2 S1 প্রোটিন।
2.3। রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস নির্মাণ
SARS-CoV-2 S1 প্রোটিন সিকোয়েন্স (নং. QRU91950.1) PubMed থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল৷ জিনের অবক্ষয় অনুসারে, স্তন্যপায়ী কোষের অভিব্যক্তির জন্য উপযুক্ত অপ্টিমাইজ করা কোডন নিউক্লিওটাইড ক্রমটি এই ভিত্তির উপর ভিত্তি করে ডিজাইন করা হয়েছিল যে SARS-CoV-2 S1 প্রোটিন দ্বারা এনকোড করা প্রোটিনের অ্যামিনো অ্যাসিড ক্রম অপরিবর্তিত ছিল। মোট দৈর্ঘ্য ছিল 2043 bp। 50 অগ্রদূত ক্রম টিস্যু প্লাজমিনোজেন অ্যাক্টিভেটর (tPA) এবং সিকোয়েন্স এনকোডিং SARS-CoV-2 S1 অ্যামিনো অ্যাসিড 2–688 দিয়ে সংশ্লেষিত হয়েছিল এবং টিপিএ পূর্বসূরি ক্রমটি লিগেটেড ছিল। স্টার্ট কোডনের সামনে একটি Kozak সিকোয়েন্স এবং SpeI সীমাবদ্ধতা সাইট যোগ করা হয়েছে এবং XbaI সীমাবদ্ধতা সাইটটি টারমিনেশন কোডনের পরে যোগ করা হয়েছে। উপরের জিনের নিউক্লিওটাইড সিকোয়েন্সগুলি সংশ্লেষিত হয়েছিল এবং সিন্থেটিক জিনের ক্লোন প্লাজমিড পাওয়ার জন্য সানগন বায়োটেক দ্বারা pUC18 এ ক্লোন করা হয়েছিল। সংশ্লেষিত S1 জিন ক্রম এবং ভেক্টর pDC316 সীমাবদ্ধ endonucleases SpeI এবং XbaI দিয়ে হজম করা হয়েছিল। টার্গেট ফ্র্যাগমেন্ট এবং ভেক্টর জেল থেকে পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল এবং একটি শাটল প্লাজমিড গঠনের জন্য সংযুক্ত হয়েছিল। SARS-CoV-2 শাটল প্লাজমিড HEK293 কোষের সহ-ট্রান্সফেকশনের মাধ্যমে AdMax অ্যাডেনোভাইরাস সিস্টেম কঙ্কাল প্লাজমিড pBHGloxd∆E1 এবং 3Cre দিয়ে প্যাকেজ করা হয়েছিল। প্রাথমিক ভাইরাস সমাধানটি বারবার ফ্রিজ-গলানো এবং সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং প্লাক পরিশোধনের পরে ভাইরাসটি প্রশস্ত এবং সংষ্কৃত হয়েছিল।
পুরুষদের জন্য cistanche উপকারিতা-প্রতিরোধ ক্ষমতা শক্তিশালী করে
Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন
【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.4। অ্যাডেনোভাইরাস টাইটার নির্ধারণ
সুস্বাস্থ্যের HEK293 কোষগুলিকে নির্বাচন করা হয়েছিল এবং একটি 5 প্রস্তুত করতে পুনরায় স্থগিত করা হয়েছিল৷{2}} × 105 কোষ/mL সেল সাসপেনশন, যা একটি 24-ওয়েল প্লেটে (1 mL/ওয়েল) বীজ করা হয়েছিল ) এবং 5% CO2 পরিবেশে 37 ◦C তাপমাত্রায় চাষ করা হয়। নমুনাটি ধারাবাহিকভাবে দশগুণ পাতলা করা হয়েছিল এবং 10−5 থেকে 10−8 কোষের একটি পাতলা নমুনা (0.1 মিলি) একটি 24-কূপ প্লেটে টিকা দেওয়া হয়েছিল . তারপর, প্লেটগুলি 48 ঘন্টার জন্য 5% CO2 সহ 37 ◦C তাপমাত্রায় সংক্রমণের সংস্পর্শে এসেছিল। পরবর্তীকালে, সংস্কৃতির মাধ্যমটি সরানো হয়েছিল, প্রি-কুলড মিথানল (0.5 মিলি) যোগ করা হয়েছিল, এবং নমুনাগুলি 20 মিনিটের জন্য −20 ◦C এ স্থির করা হয়েছিল। স্থিরকরণের পরে, নমুনাগুলি ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন (PBS) দিয়ে ধুয়ে এবং 1% বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (BSA, 0.2 mL) দিয়ে 37 ◦C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ব্লক করা হয়েছিল। এর পরে, প্রাথমিক (মাউস অ্যান্টি-অ্যাডিনোভাইরাস হেক্সন, AbD Serotec 04000079, 1:2000) এবং মাধ্যমিক (Goat pAb থেকে MS IgG2a(HRP), Abcam ab97245, 1:1000) অ্যান্টিবডিগুলি যোগ করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য বিএস ইনকিউব করা হয়েছিল, যার সময় ধোয়ার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ইনকিউবেশনের পরে, একটি নতুন প্রস্তুত কাজের সমাধান (0.2 মিলি) যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 5-10 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। তারপরে, কার্যকরী সমাধানটি বাতিল করা হয়েছিল, নমুনাগুলি পিবিএস দিয়ে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল এবং পিবিএস (1 এমএল) আবার যুক্ত করা হয়েছিল। মাইক্রোস্কোপিক ক্ষেত্রের ধনাত্মক কোষের গড় সংখ্যা (বিড়াল। CKX53, OLYMPUS Research Inverted System Microscope) গণনা করা হয়েছিল, যেখানে দৃশ্যের ক্ষেত্রে 5-50 পজিটিভ কোষ সহ একটি গ্রেডিয়েন্ট নির্বাচন করা হয়েছিল এবং গণনার জন্য এলোমেলোভাবে অন্তত পাঁচটি এলাকা নির্বাচন করা হয়েছিল। . কূপ প্লেটের প্রতিটি কূপের ভিজ্যুয়াল ফিল্ডের সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল। তারপরে, নিম্নলিখিত সূত্র (1) অনুসারে ভাইরাস টাইটার গণনা করা হয়েছিল:
2.5। রিয়েল-টাইম পিসিআর
ভাইরাল সংক্রমণের পরে HEK293 সেল mRNA এক্সপ্রেশন সনাক্ত করতে, আমরা TRIzol অপারেটিং নির্দেশাবলী (Invitrogen, Waltham, MA, USA) অনুযায়ী মধ্যবর্তী আরএনএ বের করেছি। TRIzol ব্যবহার করে মোট RNA বের করা হয়েছিল এবং অবশিষ্ট DNA নির্মূল করতে RQ1 RNase-মুক্ত DNase I (Promega, Madison, WI, USA) দিয়ে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। পরিপূরক ডিএনএ (সিডিএনএ) জিডিএনএ ইরেজার কিট (টাকারা, কুসাতসু, জাপান) সহ প্রাইমারস্ক্রিপ্ট™ আরটি রিএজেন্ট কিট ব্যবহার করে নিষ্কাশিত আরএনএর বিপরীত প্রতিলিপি দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। টার্গেট জিনের (S1) নির্দিষ্ট প্রাইমার P1 (50 -GGTGATTCTTCTCTTCAGGTTGGA-30 ) এবং P2 (50 - GTTTCTGAGAGAGGGGTCAAGTG-30 ) দিয়ে ডিএনএ খণ্ডগুলি তৈরি করা হয়েছিল। জিনটি অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ (GAPHD) হিসাবে প্রাইমার P3 (50 -GTCTTCACCACCATGGAGAA-30 ) এবং P4 (50 -TAAGCAGTTGTGGTGCAG-30 ) দিয়ে প্রশস্ত করা হয়েছিল।
2.6। পশ্চিম ফোঁটার
সেল লাইসেট এবং সুপারনাট্যান্টকে সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট-পলিয়াক্রাইলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (এসডিএস-পেজ) দিয়ে আলাদা করা হয়েছিল এবং তারপরে পলিভিনিলাইডিন ফ্লোরাইড (পিভিডিএফ) ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল। ব্লটগুলি ওয়েস্টার্ন ব্লট ইমেজিং সরঞ্জাম (বায়ো-র্যাড, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) দিয়ে কল্পনা করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, ঝিল্লি TBST (50 mL Tris-HCl, pH 7.5, 8 g NaCl [0.5 mL], 0.2 g KCl, 0.5 mL Tween-এ স্থানান্তরিত হয়েছিল -20) 5% নন-ফ্যাট শুকনো দুধের গুঁড়া দিয়ে এবং 1 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় একটি বিবর্ণ শেকারে ঝাঁকান। পরীক্ষামূলক এবং নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর মেমব্রেনগুলিকে সিলিং দ্রবণ থেকে সরানো হয়েছিল এবং প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল: [SARS-CoV-2 (2019-nCoV) স্পাইক অ্যান্টিবডি (1:5000, বিড়াল। #40591- T62, সিনো বায়োলজিক্যাল, বেইজিং, চীন)] ঘরের তাপমাত্রায়। প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি 4 ◦C তাপমাত্রায় একটি বিবর্ণ শেকারে রাতারাতি ঝাঁকুনি দেওয়া হয়েছিল এবং সেদ্ধ করা হয়েছিল। দাগটি টিবিএসটি দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি [ছাগলের অ্যান্টি-র্যাবিট ইমিউনোগ্লোবুলিন জি (আইজিজি) এইচএন্ডএল (এইচআরপি) (1:10,000, বিড়াল। #ab6721, Abcam, Cambridge, UK)] দিয়ে 2 ঘণ্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। ধুয়ে ফেলার পর, ব্লটগুলিকে লুমিবেস্ট ইসিএল সাবস্ট্রেট সলিউশন কিট (বিড়াল #4AW011-100, 4A বায়োটেক) দিয়ে 1 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি ইমেজারে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
2.7। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স অ্যাস
HEK293 কোষগুলি (3 × 106/ওয়েল) 12-কূপ প্লেটে বীজ করা হয়েছিল। 48 ঘন্টা পরে, কোষগুলি S1 জিন (Ad-S1) ধারণকারী অ্যাডেনোভাইরাস দ্বারা সংক্রামিত হয়েছিল। 48 ঘন্টা পরে, মাঝারিটি উচ্চাকাঙ্খিত হয়েছিল, এবং কোষগুলি একবার 2% BSA ধারণকারী পিবিএস দিয়ে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল, এবং 15 মিনিটের জন্য −20 ◦C তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য প্রি-চিল করা মিথানল দিয়ে 15 মিনিটের জন্য স্থির করা হয়েছিল। পিবিএস-এ 2% BSA দিয়ে তিনটি ধোয়ার পর, 10 মিনিটের জন্য কোষগুলিকে 0.5% ট্রাইটন এক্স-100 দিয়ে প্রবেশ করানো হয়েছিল। তারপরে, কোষগুলিকে 2 mL 2% BSA দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য অবরুদ্ধ করা হয়েছিল, ব্লকিং দ্রবণটি বাতিল করা হয়েছিল এবং কোষগুলি পিবিএস দিয়ে তিনবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। পরবর্তীকালে, প্রতিটি কূপে 2 মিলি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি [SARS-CoV-2 (2019-nCoV) স্পাইক অ্যান্টিবডি (1:2000, বিড়াল। #40591-T62, সিনো বায়োলজিক্যাল)] যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা বা 4 ◦C রাতারাতি incubated। তারপরে, নমুনাটি প্রতি 5 মিনিটের জন্য 2% BSA দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। এরপরে, 2 mL সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি [ছাগল-বিরোধী খরগোশ IgG H&L (Alexa Fluor 488) (1:1000, cat. #550037, ZenBio)] প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, নমুনাগুলি প্রতি 5 মিনিটের জন্য 2% BSA দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। 40,6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিন্ডোল (DAPI) সমাধান (2 mL, 1 mg/mL) (1:400, cat. #S0001, Bioss, Woburn, MA, USA) প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল এবং অন্ধকারে 10 মিনিটের জন্য প্রতিক্রিয়া জানায়। বিশ্লেষণটি একটি EVOS™ M7000 ইমেজিং সিস্টেম (বিড়াল। #AMF7000, ইনভিট্রোজেন) দিয়ে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
2.8। এলিসা
SARS-CoV-2 S প্রোটিন (1 µg/mL) রাতারাতি 96-ওয়েল প্লেটে (100 µL/ওয়েল) 0 দিয়ে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। 05 M বাইকার্বোনেট বাফার। PBST দিয়ে ধোয়ার পর (0.2 g KH2PO4, 2.9 g Na2HPO4·12H2O, 8.0 g NaCl, 0.2 g KCl, 0.5 mL Tween-20, 1000 mL) পাঁচে জল যোগ করুন বার, ব্লকিং দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। সিরাম নমুনাটি পাতলা করা হয়েছিল এবং প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল (100 μL/ওয়েল)। 37 ◦C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, নমুনাগুলি পাঁচবার PBST দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। প্রাথমিক অ্যান্টিবডি [SARS-CoV-2 (2019-nCoV) স্পাইক অ্যান্টিবডি (1:2000, বিড়াল। #40591-T62, সিনো বায়োলজিক্যাল)] যোগ করা হয়েছিল এবং 1 ঘণ্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল, তারপর নমুনাগুলি পিবিএসটি দিয়ে পাঁচবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল, তারপরে হর্সরাডিশ পারক্সিডেস-কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি [ছাগল অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি এইচএন্ডএল (এইচআরপি) (1:10,000, বিড়াল। #ab6721, abcam)] এবং পাঁচটি 37 ◦C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা ইনকিউবেশন করা হয়েছিল। PBST দিয়ে ধৌত করে। 5 মিনিটের জন্য 3, 30, 5, এবং 50-টেট্রামিথাইল বাইফেনাইল অ্যানহাইড্রাইড যোগ করার পরে, 2 এম সালফিউরিক অ্যাসিডের সাথে প্রতিক্রিয়া বন্ধ করা হয়েছিল। অপটিক্যাল ঘনত্ব একটি এনজাইম-লেবেলিং যন্ত্র (আণবিক ডিভাইস, স্পেকট্রাম্যাক্স 190) দ্বারা 450 nm এবং 630 nm এ পরিমাপ করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি আদর্শ বক্ররেখায় লাগানো হয়েছিল।
cistanche tubulosa এর উপকারিতা- ইমিউন সিস্টেম শক্তিশালী করুন
2.9। সাইটোকাইন নির্ধারণ
প্লেট (বিড়াল। #T-k15048D-1, MSD) 150 μL/ওয়েল ওয়াশ বাফার দিয়ে তিনবার ধোয়া হয়েছিল এবং প্রতিটি কূপে একটি 50 μL প্রস্তুত নমুনা যোগ করা হয়েছিল। তারপরে, প্লেটটি একটি আঠালো প্লেট সীলমোহর দিয়ে সিল করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য ঝাঁকুনি দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। এরপরে, প্লেটটি 150 μL/ওয়েল ওয়াশ বাফার দিয়ে তিনবার ধোয়া হয়েছিল এবং প্রতিটি কূপে 25 μL সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল। প্লেটটি আবার সীলমোহর করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য ঝাঁকুনি দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। এর পরে, প্লেটটি কমপক্ষে 150 μL/ওয়েল ওয়াশ বাফার দিয়ে তিনবার ধোয়া হয়েছিল; 150 μL 2× রিড বাফার টি (MSD) প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল, এবং প্লেটটি একটি MSD যন্ত্রে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
2.10। অ্যান্টিবডি নিরপেক্ষ
2.10.1। সিউডোভাইরাস নিরপেক্ষকরণ অ্যাস
একটি ভেসিকুলার স্টোমাটাইটিস ভাইরাস সিউডোভাইরাল সিস্টেম (ভিএসভি) ব্যবহার করে মাউস সিরাম নিরপেক্ষকরণ কার্যকলাপ পরীক্ষা করা হয়েছিল। সিরামটি একটি জল স্নানে {{0}}.5 ঘণ্টার জন্য 56 ◦C তাপমাত্রায় নিষ্ক্রিয় করা হয়েছিল, এবং তারপরে প্রয়োজনীয় পরিসরে ক্রমিকভাবে পাতলা করা হয়েছিল৷ HEK293 কোষগুলি একটি 96-কূপ প্লেটে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল৷ মিশ্রিত সিরামটি 200 CCID50 (ভাইরাস ডোজ যা কোষের সংস্কৃতির 50% সংক্রামিত করতে পারে) / 1:1 অনুপাতে ভাইরাস সাসপেনশনের 100 μL এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং একটি CO2 ইনকিউবেটরে (37 ± 1 ◦C) রাখা হয়েছিল। 2 ঘন্টা। এর পরে, প্রতিটি কূপে 0.5% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন ডাবল অ্যান্টিবডি ধারণকারী 100 μL ভাইরাস রক্ষণাবেক্ষণ দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল, এবং নিরপেক্ষ মিশ্রণটি একটি কূপ প্রতি 100 μL হারে কোষ ধারণ করে একটি 96- কূপের মধ্যে টিকা দেওয়া হয়েছিল, যার জন্য দুটি পুনরাবৃত্তি কূপ রয়েছে। প্রতিটি পাতলা। একই সময়ে, একটি সাধারণ কোষ নিয়ন্ত্রণ সেট করা হয়েছিল, এবং কোষগুলি 96 ঘন্টার জন্য একটি CO2 ইনকিউবেটরে (37 ± 1 ◦C) ইনকিউবেট করা হয়েছিল। তারপর, 200 CCID50/100 μL ভাইরাস দ্রবণকে 10-1~10-3 এ পাতলা করা হয়েছিল। 96-ওয়েল প্লেটের সেল কালচার মাধ্যমটি বাতিল করা হয়েছিল, প্রতিটি কূপে 150 μL ভাইরাস রক্ষণাবেক্ষণ দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল, এবং ভাইরাস দ্রবণ তরলকে 10-1~{{33} ঘনত্বে টিকা দেওয়া হয়েছিল } কূপের মধ্যে 96-কূপ প্লেট (প্রতি কূপ 50 μL)। প্রতিটি তরলীকরণ 8 টি কূপে পুনরাবৃত্তি হয়েছিল; একই সময়ে একটি সাধারণ কোষ নিয়ন্ত্রণ সেট করা হয়েছিল, তারপরে 96 ঘন্টার জন্য সংস্কৃতি দ্বারা অনুসরণ করা হয়েছিল। সেল সিপিই-তে পরিবর্তনগুলি একটি উল্টানো মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। সাধারণ কোষ নিয়ন্ত্রণে কোনো সাইটোপ্যাথিক পরিবর্তন হওয়া উচিত নয় এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণে CPE পরিবর্তন হওয়া উচিত। নিরপেক্ষকরণ এন্ডপয়েন্ট (সিরাম ডাইলিউশনগুলি লগারিদমে রূপান্তরিত) CPE পর্যবেক্ষণ করে গণনা করা হয়েছিল। সেরোনেগেটিভ/ইতিবাচক মানদণ্ডটি ছিল 1:12 ইতিবাচক/নেতিবাচক মানদণ্ড হিসাবে,<1:12 was negative, and ≥1:12 was positive.
2.10.2। লাইভ নিরপেক্ষকরণ পরীক্ষা
মাউস সিরাম নিরপেক্ষকরণ কার্যকলাপ একটি লাইভ নিরপেক্ষকরণ পরীক্ষার দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। মিশ্রিত সিরামটি SARS-CoV-2 এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। ভেরো E6 কোষগুলিকে সংক্রমিত করার জন্য মিশ্রণটি একটি 96-ওয়েল প্লেটে যোগ করা হয়েছিল। 37 ◦C তাপমাত্রায় 72-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পর, ভাইরাস সাইটোপ্যাথিক প্রভাব (CPE) ×40 ম্যাগনিফিকেশনের অধীনে পরিলক্ষিত হয়েছিল এবং নিউট্রালাইজেশন টাইটার (ভাইরাস সংক্রমণকে নিরপেক্ষ করার জন্য প্রয়োজনীয় 50% সিরাম পাতলা করার পারস্পরিক সম্পর্ক) গণনা করা হয়েছিল। উপরোক্ত পদ্ধতিগুলি একটি জৈব নিরাপত্তা স্তর 3 পরিবেশে সম্পাদিত হয়েছিল।
2.11। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ
পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণগুলি SPSS 26 ব্যবহার করে একটি দুই-নমুনা টি-পরীক্ষা দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল৷ p-মানগুলি 0.05 এর চেয়ে কম বা সমান তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল৷ কেন্দ্রীয় প্রবণতা জ্যামিতিক গড় টাইটার (GMT) দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল।
3। ফলাফল
3.1। রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস নির্মাণ
সঠিক সন্নিবেশ সহ রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস শাটল প্লাজমিড pAdeno-CMV-S1 প্রাপ্ত হয়েছিল; এর গঠন চিত্রটি চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে। রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাসে HAdV-C5 জিনোম রয়েছে যার E1/E3 অঞ্চলের অভাব রয়েছে। HEK293 কোষে শাটল প্লাজমিড এবং সাইটোস্কেলটন প্লাজমিড ট্রান্সফেকশন দ্বারা প্রাপ্ত রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টরের একটি পরিকল্পিত চিত্র চিত্র 1 এ দেখানো হয়েছে।
3.2। রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাসের বৈশিষ্ট্য
লক্ষ্য জিন ধারণকারী রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড PCR দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল (জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ফলাফলের জন্য চিত্র 2A দেখুন)। এটি একটি পুনরাবৃত্তি পরীক্ষা ছিল. প্রাইমার সিকোয়েন্সগুলি হল MCMV-F ggtataagaggcgcgaccag এবং S1-R acaataagtagggactgggtc, এবং সিকোয়েন্সিং নিশ্চিত করেছে যে ক্রমটি ডিজাইনের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। কোষে SARS-CoV-2 S1 এক্সপ্রেশন ওয়েস্টার্ন ব্লটিং (চিত্র 2B) এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্স (চিত্র 2C) দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। ব্যান্ডের রঙ (~75 kDa) ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল এবং প্রত্যাশিত ব্যান্ড অবস্থানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। ট্রান্সক্রিপশনাল স্তরে, এস 1 এর ইন ভিট্রো এক্সপ্রেশনটি PT-PCR দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি দেখায় যে HEK-293 কোষে S1 mRNA এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল।
চিত্র 1. রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিন এবং পরীক্ষামূলক কৌশল নির্মাণ। (A) pAdeno-CMV-S1 হল একটি রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস শাটল প্লাজমিড যাতে লক্ষ্য জিন S1 থাকে। pBHGlox∆E1,3Cre হল অ্যাডেনোভাইরাস কঙ্কাল প্লাজমিড। pBHGlox∆E1,3Cre এবং pAdeno-CMV-S1 একটি QIAGEN প্লাজমিড নিষ্কাশন কিট (Beijing North Yitao Trading Co., LTD., Beijing, China) দিয়ে বের করা হয়েছিল। স্থানান্তরের একদিন আগে, HEK293 কোষগুলি একটি 25 সেমি 2 সেল কালচার ফ্লাস্কে পাস করা হয়েছিল। সংস্কৃতির মাধ্যমটি ছিল DMEM যাতে অ্যান্টিবায়োটিক ছাড়াই 5% FBS থাকে। দ্বিতীয় দিনে, কোষগুলির 60-80% নির্বাচন করা হয়েছিল এবং কোষগুলিতে স্থানান্তর সমাধান যুক্ত করা হয়েছিল। ট্রান্সফেকশনের 7 দিন পরে, কোষগুলিকে স্ক্র্যাপ করা হয়েছিল, সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, সুপারনাট্যান্ট বাদ দেওয়া হয়েছিল এবং কোষগুলিকে পিবিএস দিয়ে পুনরুজ্জীবিত করা হয়েছিল। কোষগুলি −80 ◦C এবং 37 ◦C তাপমাত্রায় বারবার জমাট-গলানো হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, সুপারনাট্যান্টে প্রাথমিক ভাইরাস দ্রবণ থাকে। রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস স্ট্রেনটি আরও প্রক্রিয়াকরণের পরে শুদ্ধ, পরিবর্ধিত এবং প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং অ্যাড-এস 1 মনোনীত হয়েছিল। ফলো-আপ স্টাডির জন্য ভ্যাকসিনটি ইঁদুরের মধ্যে ইন্ট্রামাসকুলারভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। (বি) টিকাদান এবং রক্ত প্রত্যাহারের চিত্রিত সময় স্কেল।
3.3। অ্যাডেনোভাইরাস টাইটার
এই পরীক্ষায়, পাঁচটি মাইক্রোস্কোপিক ক্ষেত্রে গড়ে ছয়টি ইতিবাচক কোষ গণনা করা হয়েছিল এবং কূপের মধ্যে থাকা ভাইরাসটি 108 বার পাতলা করা হয়েছিল। উপাদান এবং পদ্ধতি বিভাগে বর্ণিত সূত্রের উপর ভিত্তি করে, অ্যাডেনোভাইরাস টাইটার ছিল 4.74 × 1011 প্লেক-ফর্মিং ইউনিট (pfu)/mL (চিত্র 2D)।
3.4। টিকা পরবর্তী সেলুলার ইমিউনিটি
পরীক্ষার সময়কালে, সিরাম সাইটোকাইনে পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন ছিল (p 0.05 এর চেয়ে কম বা সমান), যা প্রধানত দেখায় যে কেরাটিনোসাইট কেমোঅ্যাট্রাক্ট্যান্ট/মানব বৃদ্ধি-নিয়ন্ত্রিত অনকোজিন (কেসি/জিআরও) এর ঘনত্ব ছিল হ্রাস পেয়েছে, এবং IFN- , IL-10, IL-12p70, IL-1 , IL-2, IL-4, IL{{10}-এর ঘনত্ব } এবং TNF- বৃদ্ধি করা হয়েছিল, যখন IL-6 এর ঘনত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়নি (চিত্র 3)।
চিত্র 2. রিকম্বিন্যান্ট HAdV-C5–SARS-CoV-2 S1 প্রোটিনের সনাক্তকরণ এবং অ্যাডেনোভাইরাস টাইটার নির্ধারণ। (A) লক্ষ্য জিন S1 সহ রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিডের পিসিআর সনাক্তকরণ। (B) SARS-CoV-2 এর পশ্চিমী দাগ সনাক্তকরণ। সূচকীয়-বৃদ্ধি HEK293 কোষগুলি SARS-CoV-2 দ্বারা 48 ঘন্টার জন্য সংক্রামিত হয়েছিল, তারপর সেলুলার প্রোটিন বের করা হয়েছিল এবং SDS-PAGE দ্বারা আলাদা করা হয়েছিল। SARS-CoV-2 অভিব্যক্তিটি ছাগল-বিরোধী খরগোশ IgG দিয়ে ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছে। (C) Ad-S1 (সবুজ) দ্বারা সংক্রমিত HEK-293 কোষের ইমিউনোফ্লোরেসেন্স মাইক্রোস্কোপি। নিউক্লিয়াসকে দাগ দেওয়ার জন্য কোষগুলিকে 40, 6-ডায়ামিডিনো- 2-ফেনিলিন্ডোল (DAPI) দিয়ে কাউন্টারস্টেইন করা হয়েছিল। স্কেল বার 1000 µm। (D) পরিমাপের জন্য প্লেক অ্যাস ব্যবহার করা হয়েছিল। মাইক্রোগ্রাফগুলি 10-5, 10-6, 10-7, এবং 10-8 ডিলিউশন (বাম থেকে ডানে) চিত্রিত করে।
চিত্র 3. Ad-S1 টাইপ 1/2 সাইটোকাইনস, টাইপ 1 ইন্টারফেরন এবং অন্যান্য সাইটোকাইনের প্লাজমা মাত্রা পরিবর্তিত করে। প্রথম টিকা দেওয়ার 7 দিন পরে ইঁদুর থেকে রক্ত আঁকিয়ে ফলাফলগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল। ডেটা বাক্স এবং হুইস্কর স্ক্যাটারপ্লট হিসাবে উপস্থাপিত হয়। প্রতিটি বৃত্ত একক ব্যক্তি প্রতিনিধিত্ব করে। পি-মান দুটি-নমুনা টি-পরীক্ষা ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল।
3.5। অ্যান্টি-SARS-CoV-2 S1 অ্যান্টিবডির সনাক্তকরণ পোস্ট-ইমিউনাইজেশন
ELISA প্রকাশ করেছে যে SARS-CoV-2-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডিগুলি প্রথম এবং দ্বিতীয় Ad-S1 দিয়ে ইনজেকশন করা ইঁদুরগুলিতে উপস্থিত ছিল, কিন্তু নিয়ন্ত্রণ অ্যাডেনোভাইরাস ক্যাপসিড বা PBS সলিউশন (Ad/PBS) (চিত্র 4A) দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়নি৷ 1:210 এবং 1:212 এর IgG টাইটারগুলি যথাক্রমে প্রথম এবং দ্বিতীয় টিকা দেওয়ার দুই সপ্তাহ পরে Ad-S{10}}টিকা দেওয়া ইঁদুরগুলিতে সনাক্ত করা হয়েছিল। টিকা দেওয়ার 28 দিনের পরে (D28, GMT 2297.4) ডিলিউশন টাইটার ছিল 6৷{17}}D14 (GMT 378.9) এর চেয়ে গুণ বেশি৷
চিত্র 4. Ad-S1 ইঁদুরে অ্যান্টিবডির উচ্চ টাইটার (A) এবং নিরপেক্ষকরণ কার্যকলাপ (B, C) প্ররোচিত করে। (A) SARS-CoV-2-নির্দিষ্ট সিরাম IgG-এর ELISA Ad-S1- টিকা দেওয়া ইঁদুর থেকে। (B) Ad-S1-ইমিউনাইজড ইঁদুর থেকে সিরামের সিউডোভাইরাস কার্যকলাপের বিশ্লেষণ। (C) Ad-S{10}}ইমিউনাইজড ইঁদুর থেকে সিরামের নিরপেক্ষ কার্যকলাপের বিশ্লেষণ
3.6। নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি অ্যাস
Vero E6 কোষের SARS-CoV-2 চ্যালেঞ্জ ইমিউনাইজড মাউস সিরামে (চিত্র 4B, C) নিরপেক্ষ কার্যকলাপ সনাক্ত করতে সক্ষম করেছে। ভিট্রোতে SARS-CoV{{10}} লাইভ ভাইরাস চ্যালেঞ্জের বিরুদ্ধে Ad-S1-ইমিউনাইজড ভেরো E6 কোষের D14 এবং D28 নিউট্রালাইজেশন টাইটারগুলি যথাক্রমে 1:24.3 এবং 1:26.3 ছিল। সিউডোভাইরাস অ্যাস লাইভ ভাইরাস অ্যাসের মতোই ফলাফল দিয়েছে, যথাক্রমে D14 এবং D28-এ 1:28.1 এবং 1:29.6 পর্যন্ত নিরপেক্ষকরণ টাইটার রয়েছে। D28 সিউডোভাইরাস নিউট্রালাইজিং টাইটার (GMT 769.0) ছিল 2৷{29}}D14 (GMT 283.7) এর থেকে গুণ বেশি৷
4। আলোচনা
We have been working to develop vaccines to stop the COVID-19 pandemic and its rapid spread. The hunt for an effective vaccination against SARS-CoV-2 continues and existing vaccine development strategies include whole virus particle vaccines, live attenuated virus vaccines, purified virus subunit vaccines, and genetic vaccines [13–17]. The epitopes on spike proteins detected in infected serum are highly antigenic, with the ability to induce a strong humoral immune response and neutralize antibodies in individuals infected with SARS-CoV-2 and recovered from COVID-19 [18,19]. The S protein appears to be an ideal target for vaccination against SARS-CoV-2 infection [20]. The S protein S1 subunit induced effective immunity against SARS-CoV-2 and protected against SARS-CoV-2 in animal models [21,22]. The SARS-CoV-2 truncated N protein has a better expression effect than the N protein [23]. Based on this, we selected the truncated S1 protein in this experiment. In other studies, more than 90% of the neutralization activity of the Moderna mRNA vaccine was caused by the RBD antibody, and the neutralization titer directly decreased from >1000 থেকে<25 after the RBD antibody had been eliminated [24]. Higher levels of RBD-specific IgG were associated with increased serum neutralization [25]. Evidently, the S protein demonstrates a greater immune response to the RBD region, and the S1 protein containing RBD can induce neutralizing antibodies with a higher titer than the S protein [26]. Antigens delivered by adenovirus vectors induce strong cellular and humoral immunity after a single immunization, making them useful as an emergency prevention tool in a pandemic [27]. Adenovirus-based vaccine strategies are therefore an important part of the fight against SARS-CoV-2 infection.
এই সমীক্ষায়, আমরা SARS-CoV-2 S1 সাবইউনিট ধারণকারী একটি রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস SARS-CoV-2 ভ্যাকসিন তৈরি করেছি এবং এটিকে Ad-S1 মনোনীত করেছি। CanSinoBIO-এর মতো, যা বিপণনের জন্য অনুমোদিত হয়েছে [28], আমরা এই ভ্যাকসিনে HAdV-C5 ব্যবহার করেছি। অ্যাডেনোভাইরাস রিকম্বিন্যান্ট জিন থেরাপিতে এবং ভ্যাকসিন ভেক্টর হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। যাইহোক, HAdV-C5 এর সেরোপজিটিভ হার স্বাভাবিক জনসংখ্যার মধ্যে 75-80% পর্যন্ত বেশি [২৯]। এটি বোঝায় যে HAdV-C5 ভেক্টরের বিরুদ্ধে প্রাক-সঞ্চয়স্থান প্রতিরোধ ক্ষমতা উল্লেখযোগ্যভাবে ভ্যাকসিন-প্ররোচিত অনাক্রম্যতা হ্রাস করে। ইউনাইটেড কিংডমের অক্সফোর্ড বিশ্ববিদ্যালয়ে বিকশিত, ChAdOx1 nCoV-19 একটি শিম্পাঞ্জি অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টর ব্যবহার করে যার বিপরীতে, মানুষের মধ্যে সেরোপজিটিভ রেট কম থাকে এবং যখন ইতিবাচক হয়, তখন সাধারণত নিম্ন সিরাম অ্যান্টিবডি টাইটার উপস্থাপন করে [30] . অতএব, অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকর যেগুলি পূর্ব-বিদ্যমান অনাক্রম্যতা এড়াতে পারে সেগুলি অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিনের প্রতিরক্ষামূলক কার্যকারিতা বাড়ানোর জন্য অনুসন্ধান করা যেতে পারে। বর্তমান গবেষণায়, টিকা দেওয়ার আগে এবং পরে ইঁদুরের সিরামের অবস্থা ELISA এবং নিরপেক্ষকরণ পরীক্ষা দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল এবং ভ্যাকসিন প্রার্থীদের জন্য হিউমারাল অনাক্রম্যতার প্রমাণ পাওয়া গেছে। ইঁদুরে ভ্যাকসিনের ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশনের পরে উৎপাদিত সিরাম কার্যকরভাবে ভিট্রোতে SARS-CoV-2 সংক্রমণ থেকে ভেরো E6 কোষকে রক্ষা করে (চিত্র 4)। আমরা দ্বিতীয় টিকাদানের পরে ইঁদুরের মধ্যে একটি শক্তিশালী ইমিউন প্রতিক্রিয়া এবং আরও ভাল সুরক্ষা সনাক্ত করেছি (চিত্র 4)। আমাদের পরীক্ষামূলক ফলাফল মূলধারার পরীক্ষামূলক ফলাফলের অনুরূপ।
যেহেতু SARS-CoV-2 গবেষণা অব্যাহত রয়েছে, বেশ কয়েকটি গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে SARS-CoV-2 সংক্রমণের সেকেন্ডারি সাইটোকাইন ঝড় টি-কোষের উৎপাদনকে প্রভাবিত করতে পারে, যা রোগীদের দীর্ঘমেয়াদী রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা বজায় রাখা কঠিন করে তোলে SARS-CoV-2 [৩১]। অতএব, অ্যাড-এস 1 ইঁদুরের টি-সেল-মধ্যস্থতা প্রতিরোধ ক্ষমতা প্ররোচিত করতে পারে কিনা তা নির্ধারণ করা প্রয়োজন। আমাদের ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে IFN- এবং IL-12 ঘনত্ব বৃদ্ধি পেয়েছে, এবং Ad-S1 গ্রুপে IL-4 ঘনত্ব হ্রাস পেয়েছে, যা ইঙ্গিত করে যে ভ্যাকসিন-প্ররোচিত Th1 কোষের বেঁচে থাকা এবং ইঁদুরের বৃদ্ধি। পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীতে Th1 কোষ দ্বারা IL-12, IL-10, এবং TNF- নিঃসরণ কিছুটা বেড়েছে৷ এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে Ad-S1 কার্যকরভাবে ইঁদুরগুলিতে একটি Th1-পক্ষপাতমূলক টি-সেল প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করেছে [32]। বর্ধিত IL-5 নির্দেশ করে যে Th2 কোষগুলিও ইমিউন প্রতিক্রিয়াতে অংশগ্রহণ করে এবং নির্দিষ্ট প্রভাব তৈরি করে। পরীক্ষামূলক গ্রুপে কেসি/জিআরও ঘনত্ব পিবিএস কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যা নিউট্রোফিল কেমোট্যাক্সিস হ্রাসের কারণে হতে পারে যা প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াকে দমন করে এবং ভ্যাকসিনের পার্শ্ব প্রতিক্রিয়াগুলিকে কিছুটা নিয়ন্ত্রণ করতে দেয়। এটি ইমিউনোকম্প্রোমাইজড লোকেদের জন্য আরও বেশি উপকারী হবে, যেমন বয়স্ক বা কেমোথেরাপি নেওয়া রোগীদের জন্য। লি এম, এট আল। [২৯] একটি ভেক্টর হিসাবে Ad68 ব্যবহার করে একটি অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিন তৈরি করেছে। ফলাফলগুলি দেখায় যে ভিভোতে SARS-CoV-2 এর নিরপেক্ষ কার্যকলাপ BALB/c ইঁদুরের ইন্ট্রামাসকুলার ইমিউনাইজেশনের পরে দুই সপ্তাহের মধ্যে সনাক্ত করা যেতে পারে এবং তারপরে বাড়তে থাকে এবং নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি টাইটার (PRNT ID50) আটটায় 957.3 এ পৌঁছে যায়। সপ্তাহ এদিকে, লিউ জে এর গবেষণায়, এট আল। [৩৩], ভেক্টর হিসাবে AdC6 এবং AdC68 ব্যবহার করে ভ্যাকসিন তৈরি করা হয়েছিল; 7108 (জ্যামিতিক গড় টাইটার, GMT; AdC6) এবং 5489 (GMT, AdC68) এর IgG টাইটার সহ, টিকা দেওয়ার পরে বাইন্ডিং এবং নিরপেক্ষ উভয় অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া ডোজ দেওয়ার 14 দিন পরে তৈরি হয়েছিল। সিউডোভাইরাস নিউট্রালাইজেশন অ্যাসের নিরপেক্ষকরণ টাইটার 50 (NT50) ছিল 125 (GMT, AdC6) এবং 67 (GMT, AdC68)।
cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত
বর্তমান সমীক্ষায়, Ad-S1 দিয়ে টিকা দেওয়া ইঁদুরের IgG টাইটার ছিল যথাক্রমে 1:1010 এবং 1:122 ELISA দ্বারা প্রথম এবং দ্বিতীয় টিকা দেওয়ার দুই সপ্তাহ পরে। ইনোকুলেশনের 14 দিনে ad-s1-এর পাতলা টাইটার ছিল 378.9 (GMT) এবং ইনোকুলেশনের 28 দিনে 2297.4 (GMT)। নিরপেক্ষকরণ অ্যান্টিবডি পরীক্ষায়, Ad-S1 দিয়ে ইমিউন করা ভেরো E6 কোষগুলি ভিট্রোতে লাইভ SARS-CoV-2 ভাইরাস চ্যালেঞ্জের বিরুদ্ধে D14 এবং D28-এ যথাক্রমে 1:24.3 এবং 1:26.3 নিরপেক্ষতা দেখায়। D14 এবং D28 এ সিউডোভাইরাসের নিরপেক্ষকরণ টাইটারগুলি যথাক্রমে 283.7 (GMT) এবং 769.0 (GMT) ছিল। এইভাবে, এই গবেষণায় ভ্যাকসিনটি মাউস মডেলের ইমিউন প্রতিক্রিয়ার ক্ষেত্রে আরও কার্যকর ছিল।
পরীক্ষামূলক অবস্থার সীমাবদ্ধতার কারণে, আমরা পরীক্ষামূলক ইঁদুরের প্লীহা ইমিউন কোষগুলির এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট স্পট (ELISpot) বিশ্লেষণ করিনি। অধিকন্তু, শারীরিক সুরক্ষা পরীক্ষাগারের সীমাবদ্ধতার কারণে ইঁদুরের উপর SARS-CoV-2 এর আক্রমণ সুরক্ষা পরীক্ষা করা যায়নি। যাইহোক, আমরা নির্ধারণ করেছি যে মাউস মডেলগুলিতে ভ্যাকসিনটির উচ্চ কার্যকারিতা ছিল এবং এটি একটি আদর্শ রিজার্ভ ভ্যাকসিন স্ট্রেন হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। এছাড়াও, সম্ভাব্য SARS-CoV-2 ভ্যাকসিন প্রার্থীদের ইমিউনোজেনিসিটি, নিরাপত্তা এবং কার্যকারিতা অতিরিক্ত প্রাণীর মডেলগুলিতে পরীক্ষা করা উচিত (যেমন, খরগোশ, প্রাইমেট, র্যাকুন, কুকুর), কারণ মাউস মডেলগুলি সম্পূর্ণরূপে মানুষের ইমিউনোলজিকাল নকল নাও করতে পারে। বৈশিষ্ট্য
cistanche উদ্ভিদ-বৃদ্ধি প্রতিরোধ ক্ষমতা
5। উপসংহার
অ্যাডেনোভাইরাস ভ্যাকসিনের আমাদের প্রাক-ক্লিনিকাল গবেষণা থেকে প্রাপ্ত তথ্য প্রমাণ করে যে ভ্যাকসিনের যথেষ্ট নিরাপত্তা এবং কার্যকারিতা রয়েছে। অতএব, এটি SARS-CoV-2 সংক্রমণের বিরুদ্ধে একটি প্রতিশ্রুতিবদ্ধ এবং সম্ভাব্য প্রতিরোধমূলক ভ্যাকসিন হতে পারে।
তথ্যসূত্র
1. ট্রুগাকোস, আইপি; Stamatelopoulos, K.; Terpos, E.; Tsitsilonis, OE; অ্যাভালিওটি, ই.; প্যারাস্কেভিস, ডি.; ক্যাস্ট্রাইটিস, ই।; পাভলাকিস, জিএন; Dimopoulos, MA ইনসাইটস টু SARS-CoV-2 লাইফ সাইকেল, প্যাথোফিজিওলজি, এবং যৌক্তিক চিকিত্সা যা কোভিড-19 ক্লিনিকাল জটিলতাগুলিকে লক্ষ্য করে। J. বায়োমেড। বিজ্ঞান 2021, 28, 9। [ক্রসরেফ]
2. পিলে, মাসের TS জিন: 2019-nCoV/SARS-CoV-2 নভেল করোনাভাইরাস স্পাইক প্রোটিন। জে ক্লিন। পথোল। 2020, 73, 366–369। [ক্রসরেফ]
3. শিনিন, এম।; জিওং, বি.; পাইদি, আরকে; পাহান, কে. SARS-CoV-2 স্পাইক S1 এর ইন্ট্রানাসাল অ্যাডমিনিস্ট্রেশন দ্বারা ইঁদুরের ফুসফুসের ক্যান্সারের রিগ্রেশন। ক্যান্সার 2022, 14, 5648। [ক্রসরেফ]
4. কদম, এসবি; সুখরামনি, জিএস; বিষ্ণোই, পি.; Pable, AA; বারভকার, VT SARS-CoV-2, মহামারী করোনাভাইরাস: আণবিক এবং কাঠামোগত অন্তর্দৃষ্টি। জে বেসিক মাইক্রোবায়োল। 2021, 61, 180-202। [ক্রসরেফ]
5. স্টার্নবার্গ, এ.; নওজোকট, সি. করোনাভাইরাস SARS-CoV-2 স্পাইক প্রোটিনের কাঠামোগত বৈশিষ্ট্য: টিকা দেওয়ার লক্ষ্য। জীবন বিজ্ঞান. 2020, 257, 118056। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
6. দেয়াল, এসি; টর্টোরিসি, এমএ; ফ্রেঞ্জ, বি.; স্নিজদার, জে.; লি, ডব্লিউ; রে, এফএ; DiMaio, F.; বোশ, বিজে; ভিসলার, ডি. গ্লাইকান শিল্ড এবং একটি করোনাভাইরাস স্পাইক প্রোটিনের এপিটোপ মাস্কিং ক্রায়ো-ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে। নাট। গঠন. মোল। বায়োল 2016, 23, 899-905। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
7. ওয়াং, ওয়াই.; ওয়াং, এল.; কাও, এইচ.; লিউ, সি. SARS-CoV-2 S1 একটি COVID-19 সাবইউনিট ভ্যাকসিন অ্যান্টিজেন হিসাবে RBD-এর থেকে উচ্চতর। জে মেড. ভাইরল। 2021, 93, 892-898। [ক্রসরেফ]
8. থিওহরাইডস, টিসি; কন্টি, পি. SARS-CoV-2 স্পাইক প্রোটিন সম্পর্কে সচেতন হোন: চোখের দেখা মেলে আরও অনেক কিছু আছে৷ জে. বিওল। রেগুল। হোমিস্ট। এজেন্ট 2021, 35, 833–838। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
9. গুও, এক্স।; ডেং, ওয়াই.; চেন, এইচ.; ল্যান, জে.; ওয়াং, ডব্লিউ; Zou, X.; হাং, টি.; লু, জেড.; ট্যান, ডব্লিউ. মিডল ইস্ট রেসপিরেটরি সিন্ড্রোম করোনাভাইরাসের স্পাইক প্রোটিন বহনকারী মানব এডিনোভাইরাস টাইপ 5 বা 41টি ভেক্টর-ভিত্তিক ভ্যাকসিনের সাথে একক ইমিউনাইজেশন দ্বারা ইঁদুরের সিস্টেমিক এবং মিউকোসাল অনাক্রম্যতা। ইমিউনোলজি 2015, 145, 476–484। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
10. গাও, জে.; মেসে, কে.; বুঞ্জ, ও.; Ehrhardt, A. থেরাপিউটিক পদ্ধতির জন্য অত্যাধুনিক মানব অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টরোলজি। FEBS Lett. 2019, 593, 3609–3622। [ক্রসরেফ]
11. জিং, কে.; Tu, XY; লিউ, এম.; লিয়াং, জেডডব্লিউ; চেন, জেএন; লি, জেজে; জিয়াং, এলজি; জিং, এফকিউ; জিয়াং, ওয়াই. COVID-19 ভ্যাকসিনের কার্যকারিতা এবং নিরাপত্তা: একটি পদ্ধতিগত পর্যালোচনা। ঝোংগুও ডাং দাই এর কে জা ঝি 2021, 23, 221–228। [ক্রসরেফ]
12. ভয়েসি, এম.; Clemens, SAC; মাঝি, এস.এ; Weckx, LY; ফোলেগাট্টি, পিএম; আলে, পিকে; অ্যাঙ্গাস, বি.; বেলি, ভিএল; বার্নাবাস, এসএল; ভরাট, কিউই; ইত্যাদি SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে ChAdOx1 nCoV-19 ভ্যাকসিনের (AZD1222) সুরক্ষা এবং কার্যকারিতা: ব্রাজিল, দক্ষিণ আফ্রিকা এবং যুক্তরাজ্যে চারটি এলোমেলোভাবে নিয়ন্ত্রিত পরীক্ষার একটি অন্তর্বর্তী বিশ্লেষণ। ল্যানসেট 2021, 397, 99-111। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
13. লি, সি.; গুও, ওয়াই.; ফ্যাং, জেড.; ঝাং, এইচ.; ঝাং, ওয়াই.; চেন, কে. বিভিন্ন মিউট্যান্টের বিরুদ্ধে অনুমোদিত COVID{1}} ভ্যাকসিনের প্রতিরক্ষামূলক কার্যকারিতার বিশ্লেষণ। সামনে। ইমিউনল। 2022, 13, 804945। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
14. ট্যানরিওভার, এমডি; Do ˘ganay, HL; আকোভা, এম.; গুনার, এইচআর; আজাপ, এ.; আখান, এস.; Köse, ¸S.; Erdinç, F.; আকালিন, ইএইচ; তাবাক, Ö.F.; ইত্যাদি একটি নিষ্ক্রিয় সম্পূর্ণ-ভিরিওন SARS-CoV-2 ভ্যাকসিনের কার্যকারিতা এবং নিরাপত্তা (করোনাভ্যাক): তুরস্কে একটি ডাবল-ব্লাইন্ড, এলোমেলো, প্লেসবো-নিয়ন্ত্রিত, ফেজ 3 ট্রায়ালের অন্তর্বর্তী ফলাফল। ল্যানসেট 2021, 398, 213-222। [ক্রসরেফ]
15. জিয়া, এস.; ঝাং, ওয়াই.; ওয়াং, ওয়াই.; ওয়াং, এইচ.; ইয়াং, ওয়াই।; গাও, জিএফ; ট্যান, ডব্লিউ; উ, জি.; জু, এম.; Lou, Z. একটি নিষ্ক্রিয় SARS-CoV-2 ভ্যাকসিনের নিরাপত্তা এবং ইমিউনোজেনিসিটি, BBIBP-CorV: একটি এলোমেলো, ডাবল-ব্লাইন্ড, প্লেসবো-নিয়ন্ত্রিত, ফেজ 1/2 ট্রায়াল। ল্যানসেট ইনফেক্ট। ডিস. 2021, 21, 39-51। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
16. ইয়াং, এস.; লি, ওয়াই.; দাই, এল.; ওয়াং, জে.; তিনি, পি.; লি, সি.; ফ্যাং, এক্স।; ওয়াং, সি.; ঝাও, এক্স।; হুয়াং, ই.; ইত্যাদি প্রাপ্তবয়স্কদের মধ্যে COVID-19 এর বিরুদ্ধে একটি রিকম্বিন্যান্ট ট্যান্ডেম-রিপিট ডাইমেরিক RBD-ভিত্তিক প্রোটিন সাবুনিট ভ্যাকসিন (ZF2001) এর সুরক্ষা এবং ইমিউনোজেনিসিটি: দুটি এলোমেলো, ডাবল-ব্লাইন্ড, প্লেসবো-নিয়ন্ত্রিত, ফেজ 1 এবং 2 ট্রায়াল। ল্যানসেট ইনফেক্ট। ডিস. 2021, 21, 1107-1119। [ক্রসরেফ]
17. মাল্লাপাটি, এস. ভারতের ডিএনএ কোভিড ভ্যাকসিন বিশ্বে প্রথম-আরো আসছে। প্রকৃতি 2021, 597, 161–162। [ক্রসরেফ]
18. গ্রিফোনি, এ.; উইস্কোপফ, ডি.; রামিরেজ, এসআই; Mateus, J.; ড্যান, জেএম; মডারবাচার, সিআর; Rawlings, SA; সাদারল্যান্ড, এ.; প্রেমকুমার, এল.; জাদি, আরএস; ইত্যাদি SARS-CoV-2 কোভিড-19 রোগের সাথে মানুষের মধ্যে করোনাভাইরাস এবং অপ্রকাশিত ব্যক্তিদের জন্য টি কোষের প্রতিক্রিয়ার লক্ষ্য। সেল 2020, 181, 1489–1501.e1415। [ক্রসরেফ]
19. Cao, Y.; সু, বি.; গুও, এক্স।; সান, ডব্লিউ; ডেং, ওয়াই.; বাও, এল.; ঝু, প্র.; ঝাং, এক্স।; ঝেং, ওয়াই.; গেং, সি.; ইত্যাদি SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে শক্তিশালী নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডিগুলি সুস্থ রোগীদের বি কোষগুলির উচ্চ-থ্রুপুট সিঙ্গেল-সেল সিকোয়েন্সিং দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। সেল 2020, 182, 73–84.e16। [ক্রসরেফ]
20. আমানত, এফ.; ক্র্যামার, এফ. SARS-CoV-2 ভ্যাকসিন: স্ট্যাটাস রিপোর্ট। অনাক্রম্যতা 2020, 52, 583–589। [ক্রসরেফ]
21. লি, ওয়াই; Bi, Y.; জিয়াও, এইচ.; ইয়াও, ওয়াই।; লিউ, এক্স।; হু, জেড.; ডুয়ান, জে.; ইয়াং, ওয়াই।; লি, জেড.; লি, ওয়াই.; ইত্যাদি একটি অভিনব ডিএনএ এবং প্রোটিন সংমিশ্রণ কোভিড-19 ভ্যাকসিন ফর্মুলেশন রিসাস ম্যাকাকে SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে সম্পূর্ণ সুরক্ষা প্রদান করে। এমার্জ জীবাণু সংক্রমিত করে। 2021, 10, 342-355। [ক্রসরেফ]
22. ডু, এল.; তিনি, Y.; Zhou, Y.; লিউ, এস.; ঝেং, বিজে; জিয়াং, এস. SARS-CoV-এর স্পাইক প্রোটিন – ভ্যাকসিন এবং থেরাপিউটিক উন্নয়নের লক্ষ্য। নাট। রেভ. মাইক্রোবায়োল। 2009, 7, 226-236। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
23. ইউ, এল.; কাও, এইচ.; Xie, T.; লং, আর.; লি, এইচ.; ইয়াং, টি.; ইয়ান, এম.; Xie, Z. নিষ্ক্রিয় SARS-CoV-2 এর ইমিউনোজেনিসিটি মূল্যায়নে পুরো নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিনের চেয়ে ভাল সেরোলজিক্যাল মার্কার হিসাবে SARS-CoV-2-এর এন-টার্মিনালভাবে ছেঁটে যাওয়া নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিন। জে মেড. ভাইরল। 2021, 93, 1732-1738। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
24. গ্রেনি, এজে; Loes, AN; ভদ্রলোক, এলই; ক্রফোর্ড, KHD; তারকা, TN; ম্যালোন, কেডি; চু, এইচওয়াই; ব্লুম, জেডি SARS-CoV-2 mRNA-1273 ভ্যাকসিনটি আরও RBD-কেন্দ্রিক নিরপেক্ষকরণের উদ্রেক করে কিন্তু RBD-এর মধ্যে বিস্তৃত অ্যান্টিবডি বাইন্ডিং সহ। bioRxiv 2021। [CrossRef]
25. মান্টাস, জি.; Nyhoff, LE; কফম্যান, আরসি; এদারা, ভিভি; লাই, এল.; ফ্লয়েড, কে.; শি, পিওয়াই; মেনাচারি, ভিডি; এদুপুগান্তি, এস.; Scherer, EM; ইত্যাদি তীব্র SARS-CoV-2 সংক্রমণের সেলুলার এবং সেরোলজিক্যাল প্রতিক্রিয়াগুলির মূল্যায়ন রিসেপ্টর-বাইন্ডিং ডোমেনের কার্যকরী গুরুত্ব প্রদর্শন করে। জে. ইমিউনল। 2021, 206, 2605–2613। [ক্রসরেফ]
26. He, Y.; Zhou, Y.; লিউ, এস.; কাউ, জেড.; লি, ডব্লিউ; ফারজান, এম.; জিয়াং, এস. SARS-CoV স্পাইক প্রোটিনের রিসেপ্টর-বাইন্ডিং ডোমেন অত্যন্ত শক্তিশালী নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডিগুলিকে প্ররোচিত করে: সাবুনিট ভ্যাকসিন বিকাশের জন্য প্রভাব। বায়োকেম। বায়োফিস। Res. কমুন 2004, 324, 773-781। [ক্রসরেফ]
27. ডেং, এস.; লিয়াং, এইচ.; চেন, পি.; লি, ওয়াই.; লি, জেড.; ফ্যান, এস.; উ, কে.; লি, এক্স।; চেন, ডব্লিউ; কিন, ওয়াই।; ইত্যাদি কোভিড-19 মহামারীর সময় ভাইরাল ভেক্টর ভ্যাকসিনের বিকাশ এবং প্রয়োগ। অণুজীব 2022, 10, 1450। [CrossRef]
28. ঝু, এফসি; গুয়ান, এক্সএইচ; লি, ওয়াইএইচ; হুয়াং, জেওয়াই; জিয়াং, টি.; হাউ, এলএইচ; লি, জেএক্স; ইয়াং, বিএফ; ওয়াং, এল.; ওয়াং, ডব্লিউজে; ইত্যাদি 18 বছর বা তার বেশি বয়সী সুস্থ প্রাপ্তবয়স্কদের মধ্যে একটি রিকম্বিন্যান্ট অ্যাডেনোভাইরাস টাইপের-5-ভেক্টরযুক্ত COVID-19 ভ্যাকসিনের ইমিউনোজেনিসিটি এবং নিরাপত্তা: একটি এলোমেলো, ডাবল-ব্লাইন্ড, প্লেসিবো-নিয়ন্ত্রিত, ফেজ 2 ট্রায়াল। ল্যানসেট 2020, 396, 479–488। [ক্রসরেফ]
29. লি, এম; গুও, জে.; লু, এস.; Zhou, R.; শি, এইচ.; শি, এক্স।; চেং, এল.; লিয়াং, প্র.; লিউ, এইচ.; ওয়াং, পি.; ইত্যাদি একটি শিম্পাঞ্জি অ্যাডেনোভাইরাস-ভিত্তিক ভ্যাকসিনের সাথে একক ডোজ ইমিউনাইজেশন SARS-CoV-2 সংক্রমণের বিরুদ্ধে টেকসই এবং সুরক্ষামূলক অনাক্রম্যতা তৈরি করে। সামনে। ইমিউনল। 2021, 12, 697074। [ক্রসরেফ]
30. গুও, জে.; মন্ডল, এম.; Zhou, D. অভিনব ভ্যাকসিন ভেক্টরের বিকাশ: শিম্পাঞ্জি অ্যাডেনোভাইরাল ভেক্টর। হুম। ইমিউনোথার ভ্যাকসিন। 2018, 14, 1679–1685। [ক্রসরেফ]
31. কানেকো, এন.; কুও, এইচএইচ; বোকাউ, জে.; কৃষক, জেআর; অ্যালার্ড-চামার্ড, এইচ.; মহাজন, VS; Piechocka-Trocha, A.; লেফটেরি, কে.; ওসবর্ন, এম.; বলস, জে.; ইত্যাদি Bcl এর ক্ষতি সেল 2020, 183, 143–157.e113। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
32. লেক্সবার্গ, এমএইচ; টবনার, এ.; আলব্রেখট, আই.; লেপেনিস, আই.; রিখটার, এ.; কামরাড্ট, টি.; Radbruch, A.; চ্যাং, এইচডি IFN- এবং IL-12 ভিভো জেনারেট করা Th17-কে Th1/Th17 কোষে রূপান্তর করতে সমন্বয় করে। ইউরো. জে. ইমিউনল। 2010, 40, 3017–3027। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]
33. লিউ, জে.; জু, কে.; জিং, এম.; Zhuo, Y.; গুও, জে.; ডু, এম.; ওয়াং, প্র.; An, Y.; লি, জে.; গাও, পি.; ইত্যাদি শিম্পাঞ্জির অ্যাডেনোভাইরাল ভেক্টরের সাথে হেটেরোলগাস প্রাইম-বুস্ট ইমিউনাইজেশন SARS-CoV-2 সংক্রমণের বিরুদ্ধে শক্তিশালী এবং প্রতিরক্ষামূলক অনাক্রম্যতা তৈরি করে। সেল ডিসকভ। 2021, 7, 123। [CrossRef] [PubMed]
