অতিবেগুনি রশ্মির তীব্র ত্বকের এক্সপোজার নিউট্রোফিল-মধ্যস্থ কিডনি প্রদাহকে ট্রিগার করে

আমরা এবং অন্যরা দেখিয়েছি যে UV আলো ত্বকে দ্রুত নিউট্রোফিল অনুপ্রবেশকে প্ররোচিত করে (6, 7)। যদিও নিউট্রোফিলগুলি স্থানীয় আঘাতের স্থানগুলিতে প্রদাহের প্রধান অবদানকারী, এটি সম্প্রতি স্বীকৃত হয়েছে যে নিউট্রোফিলগুলি প্রদাহের প্রাথমিক স্থান (8-10) থেকে দূরে অবস্থিত অঙ্গগুলিতেও থাকতে পারে, যেখানে তারা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন উত্পাদনের মাধ্যমে ফুসফুসের টিস্যুর আঘাতে অবদান রাখে। প্রজাতি (ROS) (11) বা লিম্ফ নোড এবং অস্থি মজ্জাতে অভিযোজিত প্রতিরোধ ব্যবস্থা সক্রিয় করে (9, 12)। SLE-তে, নিউট্রোফিলগুলি স্থানীয় এবং পদ্ধতিগত উভয় রোগে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে বলে মনে করা হয়। নিউট্রোফিল এসএলই রোগীদের (১৩, ১৪) ত্বকের ক্ষতগুলিতে উপস্থিত থাকে এবংকিডনিএলএন (15, 16) সহ রোগীদের টিস্যু। একটি নিউট্রোফিল জিন স্বাক্ষরের উচ্চ অভিব্যক্তি হল সক্রিয় রোগের একটি শক্তিশালী ভবিষ্যদ্বাণী, যার মধ্যে রয়েছে LN এবং ত্বকের শিখা (17, 18)। প্রোইনফ্ল্যামেটরি লো-ডেনসিটি গ্রানুলোসাইটস (LDGs) বিশেষ করে চর্মরোগ (19) রোগীদের মধ্যে বৃদ্ধি পায়। যদিও এই ফলাফলগুলি SLE-তে স্থানীয় টিস্যুর আঘাতে নিউট্রোফিলগুলিকে জড়িত করে, নিউট্রোফিলগুলি ত্বকের প্রদাহ এবং এর মধ্যে প্যাথোজেনিক লিঙ্ক সরবরাহ করে কিনাকিডনি আঘাতবোঝা যায় না।

UV আলোতে ত্বকের এক্সপোজার কীভাবে প্রভাবিত করে তা ব্যাখ্যা করার জন্যকিডনিএবং এই প্রক্রিয়াগুলিতে নিউট্রোফিলগুলি যে ভূমিকা পালন করে, আমরা পরিবর্তনগুলি মূল্যায়ন করেছিরেনালনিউট্রোফিল মাইগ্রেশনের সাথে কনসার্টে জিনের অভিব্যক্তি। আমরা দেখতে পেয়েছি যে অতিবেগুনী আলোর তীব্র ত্বকের সংস্পর্শে প্রদাহজনক প্রক্রিয়াগুলিকে উদ্দীপিত করেকিডনি,এন্ডোথেলিয়াল আঠালো অণু, প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী, আঘাতের চিহ্নিতকারী এবং ক্ষণস্থায়ী প্রোটিনুরিয়ার প্রকাশ সহ। উল্লেখযোগ্যভাবে, আমরা দেখতে পেয়েছি যে নিউট্রোফিলগুলি এখানে স্থানান্তরিত হয়েছেকিডনিএকটি IL-17A-নির্ভর পদ্ধতিতে UV আলোর এক্সপোজারের পরে, টিউবুলোইনটার্স্টিশিয়াল (TI) এলাকায় স্থানীয়করণ করে যেখানে তারা প্রোইনফ্ল্যামেটরি ফেনোটাইপগুলি প্রদর্শন করে। অ্যান্টি-জি-সিএসএফ ইমিউনোগ্লোবুলিন (আইজিজি) চিকিত্সা দ্বারা নিউট্রোফিল পাচারকে অবরুদ্ধ করারেনালটিউবুলার ইনজুরি মার্কারগুলির প্রদাহ এবং প্রতিরোধ করা আপ-নিয়ন্ত্রণ। একসাথে, এই ফলাফলগুলি দেখায় যে UV আলোর সাথে ত্বকের এক্সপোজার সাবক্লিনিকালকে ট্রিগার করেরেনালনিউট্রোফিলস দ্বারা মধ্যস্থতাকারী প্রদাহজনক এবং আঘাতের প্রক্রিয়া।

ফলাফল

UV আলোতে ত্বকের এক্সপোজার সাবক্লিনিকাল কিডনির আঘাতের কারণ হয়।সূর্যালোকের সংস্পর্শে নেফ্রাইটিস (2-4) সহ SLE রোগীদের মধ্যে সিস্টেমিক লক্ষণগুলির বৃদ্ধি এবং রোগের বিস্তারের সাথে যুক্ত করা হয়েছে। অতএব, আমরা প্রথমে জিজ্ঞাসা করেছি যে কালো 6 (B6) ইঁদুরে অতিবেগুনী বি (UVB) আলো (500 mJ/cm2 ) এর একক এক্সপোজার দ্বারা ত্বকে তীব্র জীবাণুমুক্ত প্রদাহ পরিবর্তনের দিকে পরিচালিত করে কিনা?কিডনি, প্রদাহ, আঘাত, এবং প্রোটিনুরিয়া সহ (চিত্র 1A)। ফুসফুসকে একটি নিয়ন্ত্রণ অঙ্গ হিসাবে বেছে নেওয়া হয়েছিল, কারণ SLE তে আলোক সংবেদনশীলতা এবং ক্লিনিকাল ফুসফুসের রোগের মধ্যে কোনও সম্পর্ক নেই। B6 ইঁদুরে মোট 500 mJ/cm2 UVB আলোকে দুটি ন্যূনতম erythematous ডোজ (20), মানুষের প্রতিবাদের জন্য ব্যবহৃত রেফারেন্স ডোজ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছে (21)। পারফিউজের জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণকিডনি tissues (Fig. 1A) revealed up-regulation in the gene expression of adhesion molecules vcam- 1 and e-selectin on days 1 and 2 after UVB light exposure (Fig. 1 B and C). In contrast, vcam-1 and e-selectin expression demonstrated a downward trend in the lung (SI Appendix, Fig. S1). We also observed a >10-ভাঁজরেনালs100A9-এ আনয়ন, এর সাথে যুক্ত একটি নিউট্রোফিলিক মধ্যস্থতাকারীকিডনি ক্ষতি(22), সেইসাথে s100A6 এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি, একটি ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং প্রোটিন টিউবুলার ইনজুরির সাথে যুক্ত (23) (চিত্র 1 ডি এবং ই)। যখন ফুসফুসে s100A9 আনয়ন সনাক্ত করা হয়েছিল, s100A6 জিনের অভিব্যক্তি ফুসফুসে অপরিবর্তিত ছিল (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S1)। মধ্যে প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াকিডনিil-1 এক্সপ্রেশনের প্রাথমিক বৃদ্ধির সাথেও যুক্ত ছিল (UV এর পরে 1 এবং 2 দিন), যেখানে tnf বা il-6 (চিত্র 1F) তে ন্যূনতম বা কোন পরিবর্তন ছিল না। UVB আলোতে ত্বকের এক্সপোজারের 6 দিন পর্যন্ত ফুসফুসে Il-1 এক্সপ্রেশন সনাক্ত করা যায়নি (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S1)। Cxcl12 এক্সপ্রেশনে দ্রুত আনয়ন, একটি কেমোকাইন যা গ্লোমেরুলি এবং টিউবুলস দ্বারা নিঃসৃত হয় এবং এতে জড়িত থাকেকিডনি আঘাত(24), এছাড়াও পাওয়া গেছেকিডনিকিন্তু ফুসফুস নয় (চিত্র 1G এবং SI পরিশিষ্ট, চিত্র S1)। অতএব, UVB আলো-উত্তেজক ত্বকের আঘাত দ্রুত উস্কে দেয়রেনালপ্রোইনফ্ল্যামেটরি প্রক্রিয়া, যখন ফুসফুসে কম পরিবর্তন পরিলক্ষিত হয়।

proinflammatory প্রতিক্রিয়া পরিলক্ষিত ছাড়াওকিডনি,UVB আলোর সংস্পর্শে আসার পর প্রথম কয়েকদিনে প্রোটিনুরিয়া এবং ইউরিনারি অ্যালবুমিন/ক্রিয়েটিনিন অনুপাত উভয়ই বৃদ্ধি পায় (চিত্র 1 H এবং I)। উপর এই দ্রুত প্রভাবকিডনি ফাংশনলিপোক্যালিনের অভিব্যক্তিতে আপ-নিয়ন্ত্রণের সাথে ছিল-2 এবংকিডনি আঘাতঅণু 1 (কিম-1) (চিত্র 1 জে এবং কে), নলাকার চিহ্নিতকারীকিডনি ক্ষতিযেগুলি এলএন (25, 26) এও পরিলক্ষিত হয়। প্রোটিনুরিয়ার ক্ষণস্থায়ী প্রকৃতির সত্ত্বেও, এইগুলির প্রকাশকিডনি আঘাতমার্কারগুলি 6 তম দিন পর্যন্ত টিকে থাকে (চিত্র 1 জে এবং কে), সম্ভবত টিস্যু মেরামত প্রতিফলিত করে।

ইউভি লাইট-কিডনিতে নিউট্রোফিল মাইগ্রেশনের ফলে ত্বকে প্রদাহজনিত প্রদাহ।নিউট্রোফিলগুলি UVB আলোতে সিস্টেমিক প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াতে অংশগ্রহণ করে কিনা তা তদন্ত করতে, আমরা UV আলো-বিকিরণযুক্ত ত্বকের পাশাপাশি প্লীহাতে নিউট্রোফিল জমা হওয়ার গতিবিদ্যা পরীক্ষা করেছি,কিডনি,এবং C57BL/6 J (B6) ইঁদুরের ফুসফুস, একটি স্ট্রেন যা মানুষের ত্বকে UVB আলোতে ত্বকের পরিবর্তনকে সবচেয়ে ভালোভাবে অনুকরণ করে (চিত্র 2A) (27)। UVB আলোর তীব্র ত্বকের সংস্পর্শে আসার পরে, ত্বকে নিউট্রোফিলের সংখ্যা 24 ঘন্টার মধ্যে সাতগুণ বেড়ে যায় এবং বেসলাইন প্রাক-ইউভি স্তর (D-1) ​​(চিত্র 2B) এর তুলনায় 6 ডি পর্যন্ত উন্নত থাকে। এটি অস্থি মজ্জাতে নিউট্রোফিলের সংখ্যা হ্রাস এবং 1 থেকে 6 দিনে (চিত্র 2 সি এবং ডি) রক্ত ​​​​নিউট্রোফিল সঞ্চালনে পাঁচগুণ বৃদ্ধির সাথে ছিল। আশ্চর্যজনকভাবে, একই সময়ের ফ্রেমে, প্লীহা, ফুসফুসে এবং নিউট্রোফিল বৃদ্ধি পায়।কিডনি(চিত্র 2 ই-জি এবং এসআই পরিশিষ্ট, চিত্র S2A)। সুনির্দিষ্ট গতিবিদ্যা অঙ্গগুলির মধ্যে পরিবর্তিত হয়, ফুসফুসে 1 দিন এবং 2 থেকে 6 দিনে শীর্ষে পৌঁছে।কিডনিএবং প্লীহা (চিত্র 2 ই-জি)। মধ্যেকিডনি, নিউট্রোফিলগুলি বেশিরভাগই ভাস্কুলেচার সহ টিউবুলোইনটার্স্টিশিয়াল এলাকায় স্থানীয়করণ করে, যেমনটি নিউট্রোফিল ইলাস্টেস (এনই) দাগ দ্বারা নির্দেশিত হয়, বা প্লেটলেট/এন্ডোথেলিয়াল কোষের আনুগত্য অণুর সাথে একত্রিত হয়-1 (PECAM-1/CD3 ) (চিত্র 2এইচ)। চিত্র 2H-এর প্রতিনিধি চিত্রগুলি আন্তঃস্থায়ী ভাস্কুলেচার (সম্পূর্ণ সাদা তীর) বা আশেপাশে নিউট্রোফিল দেখায় এবং ইন্টারস্টিশিয়ামে (বিন্দুযুক্ত সাদা তীর) মাঝে মাঝে নিউট্রোফিল সহ, গ্লোমেরুলি (হলুদ তীর) এও পাওয়া যায়। অ্যান্টি-Ly6G ইমিউনোফ্লোরেসেন্স (IF) স্টেনিং (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S2B) এর সাথে অনুরূপ স্থানীয়করণ সনাক্ত করা হয়েছিল।

অন্যান্য সহজাত ইমিউন কোষগুলি নিউট্রোফিলের মতো স্থানীয় এবং পদ্ধতিগত প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা UVB আলোর এক্সপোজারের পরে একই সময়ে মনোসাইট (CD11b প্লাস Ly6C প্লাস Ly6G−) বিতরণ পরীক্ষা করেছি। যখন মনোসাইটগুলিও ত্বকে নিয়োগ করা হয়েছিল, তখন কেবলমাত্র অল্প সংখ্যক অনুপ্রবেশকারী মনোসাইট সনাক্ত করা হয়েছিলকিডনিUVB এক্সপোজারের 6 তম দিনে (∼2-গুণ বনাম ∼10৷{3}}গুণ বৃদ্ধিকিডনিনিউট্রোফিলস) (চিত্র 2F এবং SI পরিশিষ্ট চিত্র, S3)। ফুসফুস বা প্লীহা (SI পরিশিষ্ট, Fig. S3) এ মনোসাইট সংখ্যার কোন বৃদ্ধি সনাক্ত করা যায়নি, যা পরামর্শ দেয় যে UV আঘাতের পদ্ধতিগত প্রতিক্রিয়া নিউট্রোফিলের জন্য অপেক্ষাকৃত নির্বাচনী ছিল।

ত্বকে নিউট্রোফিলের অনুপ্রবেশের সাথে হিস্টোলজিক পরিবর্তনগুলি ছিল, যার মধ্যে রয়েছে ডার্মিসের প্রারম্ভিক প্রদাহ এবং এপিডার্মাল কোষের মৃত্যু (দিন 1 এবং 2), তারপরে কিছু ক্ষেত্রে সেরোসেলুলার ক্রাস্ট গঠনের সাথে অ্যাক্যানথোসিস এবং হাইপারকেরাটোসিসের বিকাশ ঘটে (6 দিন) (SI) পরিশিষ্ট, চিত্র S4)। উল্লেখযোগ্যভাবে, UVB আলোর সংস্পর্শে আসার পরে কোনও খোলা ত্বকের ক্ষত দেখা দেয়নি, এটি পরামর্শ দেয় যে পর্যবেক্ষণ করা ইমিউন কোষের অনুপ্রবেশ জীবাণুমুক্ত পরিস্থিতিতে ঘটেছে, যদিও পরিবর্তিত ত্বকের মাইক্রোবায়োমের অবদানকে বাদ দেওয়া যায় না (20)।

একসাথে, এই ফলাফলগুলি প্রমাণ করে যে UVB আলোর একক ডোজে ত্বকের সংস্পর্শ নিউট্রোফিলগুলিকে প্রদাহের স্থানীয় স্থানের পাশাপাশি অভ্যন্তরীণ অঙ্গগুলির উভয় ক্ষেত্রেই সচল করে,কিডনি,রক্তের নিউট্রোফিলিয়া দ্বারা অনুষঙ্গী। পুরুষ এবং মহিলা উভয় ইঁদুরের মধ্যে সামগ্রিক পরিযায়ী প্যাটার্ন একই ছিল, পুরুষদের তুলনায় মহিলাদের ত্বকে নিউট্রোফিলের অনুপ্রবেশ বেশি দ্রুত হয়েছিল (চিত্র 2বি)। বিপরীতে, টেপ স্ট্রিপিং দ্বারা এপিডার্মাল আঘাতের ফলে নিউট্রোফিল স্থানান্তরিত হয় নাকিডনিনিউট্রোফিল অনুপ্রবেশ এবং প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া এবং টিস্যুর আঘাতের অনুরূপ স্তর থাকা সত্ত্বেও ইউভি আলোর এক্সপোজার (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S5) এর সাথে দেখা যায়, যা নির্দেশ করে যে সিস্টেমিক নিউট্রোফিল বিস্তার সমস্ত ধরণের জীবাণুমুক্ত ত্বকের আঘাতের জন্য সাধারণ নয়।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল রোগের উন্নতি ঘটাবে

IL-17একটি UV আলোতে ত্বকের এক্সপোজারের পরে নিউট্রোফিল নিয়োগের প্রচার করে।ত্বকে কেমোট্যাকটিক এবং প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারীদের একটি সমীক্ষায় ইউভি এক্সপোজারের পরে নিউট্রোফিল কেমোকাইনস এবং প্রদাহজনক সাইটোকাইন cxcl1, cxcl5/6, g-csf, এবং il-1 1 এর জিনের প্রকাশের উল্লেখযোগ্য আপ-নিয়ন্ত্রণ প্রকাশ করা হয়েছে (চিত্র 3 A-D)। S100A9 এর অভিব্যক্তিতে দ্রুত এবং অবিরাম বৃদ্ধি ত্বকে নিউট্রোফিল অনুপ্রবেশের গতিবিদ্যার সাথে মিলে যায় (চিত্র 2B এবং SI পরিশিষ্ট, চিত্র S6), যেখানে সাইটোকাইনগুলি il-6, tnf, এবং il-33 ক্ষণস্থায়ীভাবে বৃদ্ধি করা হয়েছিল এবং 6 দিনের মধ্যে বেসলাইন এক্সপ্রেশনে ফিরে এসেছে (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S6)। বিপরীতে, IL-36এ শুধুমাত্র 6 তম দিনে (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S6) উন্নীত হয়েছিল, সম্ভবত একটি প্রতিকারমূলক ফাংশন প্রতিফলিত করে। ত্বকে মনোসাইটের ক্ষণস্থায়ী (1 থেকে 2 ডি) উপস্থিতি (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S3) মনোসাইট-নির্দিষ্ট কেমোকাইন ccl4 এবং ccl2 (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S6) এর আপ-নিয়ন্ত্রণের সমান্তরাল। স্ত্রী ইঁদুরের ত্বকে নিউট্রোফিল জমে যাওয়ার মতো (চিত্র 2বি), ত্বকে মনোসাইট জমে পুরুষদের তুলনায় মহিলাদের আগেও ঘটেছিল (এসআই অ্যাপেন্ডিক্স, চিত্র S3)।

UV skin exposure was accompanied by rapid (6 h) 12-fold induction in il-17a gene expression in the skin (Fig. 3E) as well as >1,000-UV (চিত্র 3C) এর পরে 1 এবং 2 দিনে g-csf এক্সপ্রেশনে ভাঁজ ত্বকের আবেশ। এই সাইটোকাইনগুলির আনয়ন নিউট্রোফিল মোবিলাইজেশনের সাথে প্রাসঙ্গিক কিনা তা নির্ধারণ করার জন্য, আমরা প্রথমে রক্তে সাইটোকাইন প্রোটিনের ঘনত্বের পরিমাপ করেছিলাম, যা রক্তরসের ঘনত্বে একটি শক্তিশালী এবং টেকসই (10- থেকে 100-গুণ) বৃদ্ধি প্রকাশ করে। IL-176 থেকে 24 ঘন্টা পর UV আলোর সংস্পর্শে আসার পর (চিত্র 3F), একত্রে একটি ক্ষণস্থায়ী (6 ঘন্টার সর্বোচ্চ) IL-6 এবং IL-12, সাইটোকাইনগুলি বৃদ্ধি পায় IL-17A (28) (চিত্র 3 G এবং H) এর নিম্নধারা হতে পারে। IFN, GM-CSF, TNF , IL-10, IL-27, IL-23, বা IL1-এর প্লাজমা ঘনত্বের কোনও বৃদ্ধি পরিলক্ষিত হয়নি৷ UVB-প্ররোচিত নিউট্রোফিল নিয়োগের জন্য IL-17A প্রয়োজনীয় কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা UV এক্সপোজারের আগে একটি নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি দিয়ে IL-17A-এর প্রভাবকে অবরুদ্ধ করেছি (চিত্র 3I)৷ অ্যান্টি-IL-17একটি IgG রক্তের নিউট্রোফিলিয়াকে উল্লেখযোগ্যভাবে স্যাঁতসেঁতে করে (চিত্র 3J) এবং ত্বকের উদ্ভাসিত টিস্যুতে (চিত্র 3K এবং SI পরিশিষ্ট, চিত্র। S7A) এবং উভয়ের মধ্যে নিউট্রোফিল প্রবাহকে হ্রাস করেকিডনি(চিত্র 3L এবং SI পরিশিষ্ট, চিত্র S7B)। এই ফলাফলগুলি দেখায় যে UV আলোর প্রতিক্রিয়ায় নিউট্রোফিল নিয়োগের মধ্যস্থতা হয়, অন্তত আংশিকভাবে, IL-17A.

নিউট্রোফিলগুলি UV-তে ত্বকের এক্সপোজারের পরে কিডনির প্রদাহের মধ্যস্থতা করেআলো.নিউট্রোফিলগুলি প্রদাহজনক পরিবর্তনের জন্য দায়ী কিনা তা নির্ধারণ করতেকিডনি following skin UVB light exposure, we blocked neutrophil recruitment prior to UV light exposure. Since cutaneous g-csf expression was up-regulated >1,000-UV এক্সপোজারের পরে ভাঁজ করে, UV আলোর প্রতিক্রিয়ায় নিউট্রোফিল নিয়োগে G-CSF-এর জন্য একটি কেমোট্যাকটিক ভূমিকার পরামর্শ দেয়, আমরা চিত্র 4A-এ বর্ণিত G-CSF ব্লক করে অস্থি মজ্জা থেকে নিউট্রোফিল মোবিলাইজেশনকে বাধা দিয়েছি। G-CSF নিরপেক্ষকরণ রক্তের নিউট্রোফিলিয়া এবং সেইসাথে নিউট্রোফিল নিয়োগ রোধ করেকিডনিUVB আলোতে ত্বকের সংস্পর্শে আসার পরে (চিত্র 4 বি এবং সি)। উল্লেখযোগ্যভাবে, যেমন পূর্বে বিভিন্ন মডেলে রিপোর্ট করা হয়েছে (29, 30), G-CSF ব্লক করার ফলে মনোসাইট সংখ্যার পরিবর্তন হয়নিকিডনি(চিত্র 4D)। কমে নিউট্রোফিল স্থানান্তরকিডনিএকটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস দ্বারা অনুষঙ্গী ছিলরেনালভিক্যাম-1 এবং ই-সিলেক্টিন (চিত্র 4 ই এবং এফ) এবং সেইসাথে ইউভিবি এক্সপোজারের পরে প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী s100A9 এবং il-1 1 d এর অভিব্যক্তি (চিত্র 4 জি এবং এইচ)। তদ্ব্যতীত, টিস্যু ইনজুরি মার্কার লিপোক্যালিন-2 এবং কিম-1কিডনিআইসোটাইপ-চিকিত্সা করা UV-উন্মুক্ত প্রাণীদের তুলনায় G-CSF ব্লকিং অ্যান্টিবডি দিয়ে চিকিত্সা করা অতিবেগুনী আলো-উন্মুক্ত ইঁদুরগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4 I এবং J)। যেমনটি আমরা পূর্বে রিপোর্ট করেছি (6), UVB আলোর তীব্র ত্বকের এক্সপোজার একটি টাইপ I ইন্টারফেরন প্রতিক্রিয়াকে ট্রিগার করেকিডনি(চিত্র 4K)। G-CSF ব্লক করা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, কিন্তু IFN স্কোর সম্পূর্ণভাবে বাতিল করেনি (চিত্র 4K)। যখন নিউট্রোফিলের উপস্থিতি থাকেকিডনিত্বকের UV আলোর এক্সপোজারের (চিত্র 4) পরে 1 দিন পর দেখা তীব্র প্রদাহজনক এবং আঘাতের প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য প্রয়োজন ছিল, এই সময়ে প্রোটিনুরিয়াতে কোনও পার্থক্য দেখা যায়নি, কারণ ইউভি এক্সপোজারের (চিত্র 1 এইচ এবং) পরে 4 দিনের মধ্যে সর্বোচ্চ প্রোটিনুরিয়া ঘটেছিল। আমি)। একসাথে, এই তথ্যগুলি নির্দেশ করে যে নিউট্রোফিলগুলি প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়ার জন্য দায়ী এবং প্রত্যক্ষ বা পরোক্ষভাবে, টাইপ I ইন্টারফেরন আনয়নে অবদান রাখে।কিডনিত্বকের অতিবেগুনী আলোর এক্সপোজার অনুসরণ করে। অ্যান্টি-জি-সিএসএফ আইজিজি-এর সাথে প্রাপ্ত ফলাফলের অনুরূপ, অ্যান্টি-আইএল-17 অ্যান্টিবডিকে আংশিকভাবে নিউট্রোফিল মাইগ্রেশনকে নিরপেক্ষ করার প্রশাসনকিডনিএবং এর ফলে জিনের প্রকাশ কমে গেছেকিডনিপ্রদাহজনিত (vcam-1 এবং s100A9) এবং আঘাতের চিহ্নিতকারী (লাইপোক্যালিন-2 এবং কিম-1), যদিও শুধুমাত্র কিম-1 অভিব্যক্তির হ্রাস পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ ছিল (এসআই পরিশিষ্ট, চিত্র S7 C–F)

কিডনি নিউট্রোফিলের একটি উপ-জনসংখ্যা বিপরীতভাবে স্থানান্তরিত হয়, একটি ফেনোটাইপও SLE রোগীদের রক্তে সনাক্ত করা হয়।যদিও এটি দীর্ঘদিন ধরে ধরে নেওয়া হয়েছে যে নিউট্রোফিলগুলি সংক্রমণ বা জীবাণুমুক্ত প্রদাহের জায়গায় প্রবেশ করে পরবর্তীতে অ্যাপোপটোসিস হয় এবং ম্যাক্রোফেজগুলির দ্বারা দ্রুত অপসারণ করা হয়, বেশ কয়েকটি গবেষণায় প্রকাশিত হয়েছে যে কিছু নিউট্রোফিল একটি দ্বিমুখী পদ্ধতিতে যাতায়াত করে, অর্থাৎ, একটি টিস্যুতে প্রবেশ করার পরে, তারা স্থানান্তরিত হয়। রক্তপ্রবাহে ফিরে যান এবং অন্য স্থানে অনুপ্রবেশ করুন, একটি প্রক্রিয়া যাকে বিপরীত স্থানান্তর (rTEM) (8, 10, 11, 31-34) হিসাবে উল্লেখ করা হয়। নিউট্রোফিল যে বাড়িতে বাস করে কিনা তা তদন্ত করতেকিডনিউন্মুক্ত ত্বকের মাধ্যমে UVB আলোর সংস্পর্শে আসার পরে, আমরা একটি ফটোঅ্যাক্টিভেটেবল B6 মাউস মডেলে নিউট্রোফিল মাইগ্রেশন অধ্যয়ন করেছি (হিউম্যান ইউবিকুইটিন সি [ইউবিসি]-ফটোঅ্যাক্টিভেটেড [পিএ]-সবুজ ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন [জিএফপি])।

পরীক্ষামূলক স্কিম চিত্র 5A এ চিত্রিত করা হয়েছে; UVB আলোর একক ডোজ ত্বকের সংস্পর্শে আসার 1 দিন পরে, ত্বকটি ভায়োলেট আলোর (405 এনএম) সংস্পর্শে আসে যাতে অনুপ্রবেশকারী ইমিউন কোষগুলি GFP-পজিটিভ কোষে ফটোকনভার্ট হয়। ফটোকনভার্টেড নিউট্রোফিল (GFP প্লাস Ly6G প্লাস ) তারপর পারফিউজে পরিমাপ করা হয়েছিলকিডনিপরের দিন. ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে কিডনি-অনুপ্রবেশকারী নিউট্রোফিলের ∼20 শতাংশ ব্যাকগ্রাউন্ড সিগন্যাল (∼10 শতাংশ) (চিত্র 5বি) বিয়োগের পরে জিএফপি পজিটিভ ছিল। লিভার বা ক্রেমাস্টার পেশীতে জীবাণুমুক্ত প্রদাহের মডেলগুলির বিপরীতে (8, 10), আমরা ফুসফুসে ফটোকনভার্টেড নিউট্রোফিল সনাক্ত করতে পারিনি, সম্ভবত কারণ 2 দিনে ফুসফুসে কিছু নিউট্রোফিল পাওয়া গেছে (চিত্র 2F)। GFP প্লাস নিউট্রোফিল আছে কিনা তা পরীক্ষা করতেকিডনিUVexposed ত্বকের টিস্যু থেকে এক্সট্রাভ্যাসটেড বা ইন্ট্রাভাসকুলারভাবে PA ছিল, আমরা GFP প্লাস নিউট্রোফিলের সংখ্যার পরিবর্তনের সাথে তুলনা করেছিকিডনিইঁদুরের যে ত্বকে UV আলোর সংস্পর্শে আসা একই ত্বক একদিন পরে বেগুনি আলোর সাথে PA ছিল (গ্রুপ I) বনাম ইঁদুরের যেটিতে UV আলোর সংস্পর্শে থাকা ত্বকটি একদিন পরে বেগুনি আলো সহ PA ছিল (গ্রুপ II, এসআই পরিশিষ্টে চিত্র, চিত্র S8A)। যদিও গ্রুপগুলির মধ্যে (SI পরিশিষ্ট, Fig. S8B) সঞ্চালনকারী নিউট্রোফিলের শতাংশে কোনও পার্থক্য ছিল না, তবে জিএফপি প্লাস নিউট্রোফিলের মধ্যে একটি বৃহত্তর বৃদ্ধি লক্ষ্য করা গেছে।কিডনিইঁদুরের যেখানে UV-উন্মুক্ত ত্বকও PA (গ্রুপ I) ছিল ইঁদুরের GFP প্লাস নিউট্রোফিলের অভাবের তুলনায় যেখানে অ-UV-উন্মুক্ত ত্বক ছিল PA (গ্রুপ II) (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S7B)। গ্রুপ II-তে, নিউট্রোফিল সংখ্যাগুলি চিত্র 5B (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S8B) এ দেখা GFP ইতিবাচকতার পটভূমির অনুরূপ ছিল।

জিএফপি প্লাস এর নিম্ন স্তরকিডনিগ্রুপ II-এর নিউট্রোফিলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে বেগুনি আলো নন-ইউভি-উন্মুক্ত ত্বকে কোষগুলিকে PA করে না, এটি সম্ভব ছিল যে UV আলোর সংস্পর্শে ত্বকের রক্তনালীগুলির সাথে নিউট্রোফিলের মিথস্ক্রিয়া পরিবর্তিত হয়, যা বৃহত্তর আলোক রূপান্তর এবং পরবর্তীকালে অনুমতি দেয়।কিডনিঅ্যাক্সেস TEM নিউট্রোফিলের আপেক্ষিক অনুপাত নির্ধারণ করতে, আমরা rTEM-এর মধ্য দিয়ে যাওয়া নিউট্রোফিলগুলিকে চিহ্নিত করতে ব্যবহৃত পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারীর অভিব্যক্তির পরিমাণ নির্ধারণ করেছি: CXCR4hi (8) এবং ICAM1hiCXCR1lo (11, 35)। প্রকৃতপক্ষে, GFP প্লাসকিডনিত্বকে GFP প্লাস নিউট্রোফিল বা GFP− নিউট্রোফিলের তুলনায় নিউট্রোফিলগুলি CXCR4 এর উচ্চ মাত্রা প্রকাশ করেকিডনি(চিত্র 5C)। এর

স্বার্থ,রেনালCXCR4 ligand-এর প্রকাশ, cxcl12, 1 থেকে 2 d পরে UVB আলোতে ত্বকের সংস্পর্শে আসা CXCR4hi নিউট্রোফিলের উপস্থিতির সাথে সমসাময়িক ছিলকিডনি(চিত্র 1G), সম্ভবত কিডনিতে এই নিউট্রোফিলগুলি নিয়োগের জন্য কেমোট্যাকটিক উদ্দীপনা প্রদান করে। আগ্রহের বিষয়, আমরা UV এক্সপো নিশ্চিত হওয়ার দেরিতে অস্থি মজ্জাতে CXCR4hi এবং ICAM1- hiCXCR1lo নিউট্রোফিল শনাক্ত করেছি (দিন 6, SI পরিশিষ্ট, চিত্র S9 B এবং C), এই পরামর্শ দেয় যে এই নিউট্রোফিলগুলির মধ্যে কিছু আবার ফিরে আসে। লিভারের আঘাত বা ত্বকের ভাইরাস সংক্রমণের পরে আরটিইএম-এর জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে এমন অস্থি মজ্জা (12, 36)। এই পর্যবেক্ষণগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, আমরা UV এক্সপোজারের পরে 2 দিনে রক্তের নিউট্রোফিলগুলিতে উচ্চতর CXCR4 এক্সপ্রেশন সনাক্ত করেছি, সম্ভবত কোষগুলিকে ক্যাপচার করার পথে।কিডনিএবং অস্থি মজ্জা (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S9D)। একইভাবে, GFP প্লাস নিউট্রোফিলের মধ্যে ICAM1hiCXCR1lo কোষের উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি শতাংশ সনাক্ত করা হয়েছিল।কিডনিত্বকে জিএফপি প্লাস নিউট্রোফিল এবং জিএফপি− নিউট্রোফিলের তুলনায়কিডনি(চিত্র 5D)। ICAM1hiCXCR1lo ফেনোটাইপ ∼20 থেকে 35 শতাংশ GFP প্লাস নিউট্রোফিলের উপর সনাক্ত করা হয়েছিলকিডনি(চিত্র 5D), পরামর্শ দেয় যে নিউট্রোফিলের একটি উপসেট যা মাইগ্রেট করেকিডনিUV-উন্মুক্ত ত্বকের মাধ্যমে বিপরীত স্থানান্তর দ্বারা তা করে, যেখানে অবশিষ্টাংশকিডনিস্ফীত UV-উন্মুক্ত ত্বকের মধ্য দিয়ে সঞ্চালনের সময় নিউট্রোফিলগুলি সক্রিয় হয়। ICAM1- hiCXCR1lo নিউট্রোফিল উপ-জনসংখ্যাও সনাক্ত করা হয়েছিলকিডনিসাধারণ B6 ইঁদুরের UV আলোর সংস্পর্শে আসা যা PA পায়নি (SI পরিশিষ্ট, চিত্র S9A)।

যদিও CXCR4hi এবং ICAM1hiCXCR1lo নিউট্রোফিল ফেনোটাইপ উভয়ই বিভিন্ন মুরিন মডেলের (11, 31, 37) মধ্যে প্রদাহজনক ফাংশন এবং টিস্যুর আঘাতের সাথে যুক্ত হয়েছে, মানুষের রোগে এই কোষের জনসংখ্যার উপর কিছু গবেষণা করা হয়েছে। এসএলই (13, 17, 18) এবং তাদের আপাত ভিন্নতা (19) তে নিউট্রোফিলের উদীয়মান ভূমিকার পরিপ্রেক্ষিতে, আমরা এসএলই রোগীদের কাছ থেকে স্বাভাবিক-ঘনত্ব পলিমারফোনিউক্লিয়ার কোষ (পিএমএন) বা এলডিজি কিনা তা তদন্ত করেছি।

বিপরীত মাইগ্রেটিং ফিনোটাইপগুলি প্রদর্শন করেছে: CXCR4hi (37, 38) এবং ICAM1hiCXCR1lo। PMN এবং LDG-এর ফ্লো সাইটোমেট্রি প্রোফাইলিং স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের তুলনায় SLE রোগীদের এই কোষগুলির পৃষ্ঠে উচ্চতর CXCR4 অভিব্যক্তি প্রকাশ করেছে (চিত্র 6 এ এবং সি)। অধিকন্তু, আমরা সুস্থ নিয়ন্ত্রণের তুলনায় SLE রক্তে ICAM1hiCXCR1lo PMN-এর একটি ছোট কিন্তু উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চ শতাংশ পেয়েছি (মানে, 3.5 শতাংশ) (মানে, 1.4 শতাংশ) (চিত্র 6B)। মজার বিষয় হল, LDG নিউট্রোফিল জনসংখ্যা (CD15 প্লাস CD14loCD10 প্লাস পেরিফেরাল ব্লাড মনোনিউক্লিয়ার সেল [PBMCs]) স্বাস্থ্যকর (গড়, 7.1 শতাংশ) এবং SLE রক্ত ​​(গড়, 4 শতাংশ) উভয় ক্ষেত্রেই PMN-এর তুলনায় ICAM1hiCXCR1lo কোষের বেশি শতাংশ রয়েছে। 6 B এবং D)। স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের (চিত্র 6D) সাপেক্ষে SLE রোগীদের থেকে LDG-তে জনসংখ্যার মতো rTEM উল্লেখযোগ্যভাবে আরও বেশি প্রতিনিধিত্ব করেছে। এই ডেটাগুলি পিএমএনগুলিতে rTEM-এর মতো নিউট্রোফিল ফেনোটাইপগুলির উপস্থিতি সনাক্ত করে এবং বিশেষত SLE রোগীদের মধ্যে LDGs।

আলোচনা

UV আলোতে ত্বকের এক্সপোজারের সিস্টেমিক প্রভাবগুলি খুব কম বোঝা যায়। স্বাভাবিক বেসলাইন অবস্থায় এই পথগুলি সনাক্ত করা SLE (2-4) এর মতো রোগে সূর্যের এক্সপোজারের পরে সিস্টেমিক টিস্যু জড়িত হওয়ার প্রক্রিয়াগুলিকে অবহিত করতে পারে। এখানে, আমরা সূর্যালোকের এক্সপোজার কীভাবে কিডনির উপর প্রভাব ফেলে সে সম্পর্কে বেশ কয়েকটি ফলাফলের প্রতিবেদন করি। প্রথমত, আমরা দেখিয়েছি যে ইউভিবি আলোর তীব্র ত্বকের সংস্পর্শে প্রদাহজনক এবং আঘাতের প্রতিক্রিয়া সৃষ্টি করেকিডনি,সাবক্লিনিকাল প্রোটিনুরিয়া সহ। চমকপ্রদভাবে, এইরেনালUVB হালকা-মধ্যস্থ ত্বকের প্রদাহের পরে কিডনিতে নিউট্রোফিল অনুপ্রবেশের সাথে পরিবর্তনগুলি হয়েছিল। নিউট্রোফিল প্রতিক্রিয়া IL-17A এবং G-CSF-এর উপর নির্ভরশীল ছিল। কিডনিতে নিউট্রোফিলগুলির প্রোইনফ্ল্যামেটরি ফেনোটাইপ ছিল, যা NE এর বহির্মুখী স্থানীয়করণ দ্বারা প্রমাণিত, rTEM (CXCR4hi) এর একটি উচ্চ অনুপাত যা "বয়স্ক" এবং ICAM1hiCXCR1lo কোষ নামেও পরিচিত। নিউট্রোফিলগুলি সরাসরি সাবক্লিনিক্যালে জড়িত ছিলকিডনি আঘাত,নিউট্রোফিল হ্রাসের ফলে ত্বকের UV এক্সপোজারের পরে আনুগত্য অণু, প্রদাহজনক সাইটোকাইনস, IFN-I স্বাক্ষর এবং কিডনি আঘাত চিহ্নিতকারীর প্রকাশে উল্লেখযোগ্য হ্রাস ঘটে।

অন্যান্য ধরনের ত্বকের আঘাত, যেমন টেপ স্ট্রিপিং এবং একটি TLR7 অ্যাগোনিস্টের সাময়িক প্রয়োগ, বৃদ্ধির জন্য রিপোর্ট করা হয়েছেকিডনি আঘাতকিছু কিছু লুপাস মডেলে, যদিও রোগের বৃদ্ধিকে নিউট্রোফিলের পরিবর্তে ম্যাক্রোফেজ এবং ডেনড্রাইটিক কোষ দ্বারা মধ্যস্থতা বলে মনে করা হয়েছিল (39, 40)। টেপ স্ট্রিপিং এর জন্য নিউট্রোফিল নিয়োগের দিকে পরিচালিত করেনিকিডনি, আমরা প্রস্তাব করি যে UV আলোর এক্সপোজার অন্যান্য ধরণের জীবাণুমুক্ত ত্বকের প্রদাহ থেকে আলাদা। এটি ইউভি আঘাতের পরে ফটোপ্রোডাক্ট বা অনন্য প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারীদের দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে যা প্রদাহের জন্য কিডনিকে প্রাইম করে, টেপ স্ট্রিপিংয়ের তুলনায় ইউভির পরে নিউট্রোফিল অপসারণের পার্থক্য দ্বারা বা অন্যান্য কারণগুলির দ্বারা। আমরা লক্ষ্য করেছি যে UV আলো ত্বকে IL-17একটি মেসেঞ্জার RNA (mRNA) এর দ্রুত এবং শক্তিশালী আনয়নকে ট্রিগার করে এবং উচ্চ সঞ্চালনশীল IL-17একটি প্রোটিনের মাত্রা (∼100-গুণ বৃদ্ধি) , যা UV আলোর সংস্পর্শে আসার পরে নিউট্রোফিল নিয়োগের জন্য প্রয়োজনীয় ছিল। সমসাময়িক 100- থেকে 1,000-ত্বকের জি-সিএসএফ এক্সপ্রেশনে ভাঁজ আনয়ন প্রস্তাব করে যে IL-17A/G-CSF অক্ষ হল নিউট্রোফিলিয়া এবং নিউট্রোফিল টিস্যু হোমিং এর জন্য দায়ী সম্ভাব্য প্রক্রিয়া UV আলোর প্রতিক্রিয়ায়। G-CSF আনয়নের মাধ্যমে গ্রানুলোপয়েসিস এবং নিউট্রোফিল নিয়োগ নিয়ন্ত্রণে IL{{9}A-এর ভূমিকা হোমিওস্ট্যাটিক অবস্থার অধীনে ভালভাবে স্বীকৃত এবং কিছু গবেষণায় IL-17A কে নিউট্রোফিল নিয়োগের জন্য গুরুত্বপূর্ণ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে জীবাণুমুক্ত প্রদাহ (41, 42)। লুপাসে, উন্নত IL-17একটি অভিব্যক্তি ত্বকের ক্ষতগুলিতে পাওয়া যায় (43), এবং বর্ধিত সঞ্চালনশীল IL-17এ স্তরগুলি আরও খারাপ রোগের প্রকাশের সাথে যুক্ত করা হয়েছে (44), যদিও নিউট্রোফিলের সাথে নির্দিষ্ট সম্পর্ক, এই রোগের একটি প্যাথোজেনিক জনসংখ্যা (13, 17, 18), অনাবিষ্কৃত রয়ে গেছে। G-CSF- অস্থি মজ্জা থেকে নিউট্রোফিলের মধ্যস্থতামূলক গতিবিধির উপর সরাসরি প্রভাব ছাড়াও, IL- 17A নিউট্রোফিল হোমিংয়েও অবদান রাখতে পারেকিডনিআঠালো অণুর অভিব্যক্তিকে উদ্দীপিত করে (যেমন, VCAM-1 এবং ই-সিলেক্টিন)রেনালএন্ডোথেলিয়াম (45, 46)।

তীব্র UV এক্সপোজারের একই মডেল ব্যবহার করে, আমরা সম্প্রতি রিপোর্ট করেছি যে UV আলোর একক ডোজ একটি স্থানীয় এবং সিস্টেমিক IFN-I প্রতিক্রিয়া ট্রিগার করেছে, যা ত্বকে দক্ষ নিউট্রোফিল নিয়োগের জন্য প্রয়োজনীয় ছিল (6)। যেহেতু IFN-I-কে IL-17এ প্রোডাকশন (47) প্ররোচিত করতে দেখানো হয়েছে, তাই এটা বিশ্বাসযোগ্য যে এই পথগুলি হয় স্বাধীনভাবে বা কনসার্টে UV আলো-মধ্যস্থ নিউট্রোফিল নিয়োগ এবং মাইগ্রেশনের দিকে নিয়ে যায় যা আমরা এখানে রিপোর্ট করছি। যদিও আমাদের অনুসন্ধানগুলি IL- 17A-এর জন্য একটি প্রদাহজনক ভূমিকার পরামর্শ দেয়, IL এর উপর UVB আলোর দমনমূলক প্রভাব-17একটি সংকেত পূর্বে সোরিয়াসিসে রিপোর্ট করা হয়েছে, যেখানে UVB আলোতে সোরিয়াটিক ত্বকের এক্সপোজার প্যাথোজেনিক টি কোষগুলিকে দূর করে এবং মাইলয়েড প্রদাহজনক ডেনড্রিক কোষ (48, 49)। যেহেতু সোরিয়াটিক, স্বাস্থ্যকর থেকে ভিন্ন, ত্বক IL-17–উৎপাদনকারী এবং প্রতিক্রিয়াশীল T কোষে সমৃদ্ধ, তাই সেলুলার গঠনের পার্থক্যটি UVB আলোর প্রতিক্রিয়া নির্ধারণ করতে পারে, যার মধ্যে IL-এর UVB আলো-মধ্যস্থতা দমনের পরিমাণও অন্তর্ভুক্ত। -17একটি রিসেপ্টর এক্সপ্রেশন (50)। UV ডোজ প্রদাহজনক বা থেরাপিউটিক প্রভাব ঘটছে কিনা তাও নির্ধারণ করতে পারে: কম ডোজ প্রদাহবিরোধী এবং ইমিউনোসপ্রেসিভ পরিণতির সাথে যুক্ত (51), সম্ভবত CD8 T কোষের প্রতিক্রিয়াগুলিকে বাধা দিয়ে (52)।

টিস্যু প্রদাহের সময় নিউট্রোফিলগুলি একাধিক ভূমিকা পালন করে। প্যাথোজেন-সম্পর্কিত আণবিক নিদর্শন এবং ক্ষতি-সম্পর্কিত আণবিক প্যাটার্ন (DAMPS) বা রিসেপ্টর এনগেজমেন্ট দ্বারা সক্রিয় হলে, নিউট্রোফিলগুলি প্রোটিস, ROS, এবং নিউট্রোফিল এক্সট্রা সেলুলার ফাঁদ (NETs) এর এক্সট্রুশন (54,5) ছেড়ে দিয়ে টিস্যুর আঘাতে সরাসরি অবদান রাখে। নিউট্রোফিলস কোষীয় ধ্বংসাবশেষের ফ্যাগোসাইটোসিস এবং টিস্যু রিভাসকুলারাইজেশন (8) সক্ষম করে টিস্যু মেরামতকেও উৎসাহিত করতে পারে। এসএলই-তে, একটি নিউট্রোফিল জিনের স্বাক্ষর হল এলএন এবং ত্বকের লুপাস (17, 18) সহ সক্রিয় রোগের একটি শক্তিশালী ভবিষ্যদ্বাণী। নিউট্রোফিলগুলি ত্বকের ক্ষতগুলিতে (13, 14) পাশাপাশি পাওয়া যায়কিডনিএসএলই রোগীদের বায়োপসি নমুনা (15, 16), এবং তাদের প্রদাহজনক বৈশিষ্ট্যগুলি আংশিকভাবে নেট গঠনের (16) জন্য দায়ী করা হয়েছে। এই প্রক্রিয়ার মধ্যে রয়েছে ROS (55), মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিএনএ রিলিজ (55), এবং s100A9 (56), IL-1b (57), এবং টাইপ I ইন্টারফেরন (55) এর মতো প্রদাহজনক প্রোটিনের বর্ধিত উত্পাদন , 58)। আমাদের অনুসন্ধানগুলি যে কিডনিতে নিউট্রোফিল স্থানান্তরকে বাধা দেয় তা s100A9 বাতিল করে এবং উল্লেখযোগ্যভাবে IL-1বি প্রকাশকে হ্রাস করে এবংকিডনিIFN স্কোর পরামর্শ দেয় যে অনুরূপ প্রদাহজনক ফাংশন খেলার মধ্যে থাকতে পারে। এসএলই-তে কিডনি রোগের সাথে প্রাসঙ্গিক, নিউট্রোফিলগুলি প্রধানত টিআই এন্ডোথেলিয়ামে স্থানীয়করণ করা হয়, এর বর্ধিত প্রকাশের স্থানকিডনি আঘাতLN কিডনি টিস্যুতে কিম-1 এবং লিপোক্যালিন-2 চিহ্নিতকারী (59,60)। প্রোটিনুরিয়া ঘটতে পারে প্রোটিনের গ্লোমেরুলার বাধার অত্যধিক ব্যাপ্তিযোগ্যতার কারণে টিউবুল দ্বারা প্রোটিনের প্রতিবন্ধী পুনঃশোষণ বা এই প্রক্রিয়াগুলির সংমিশ্রণের কারণে (61)। এসএলই রোগীদের মধ্যে টিআই ইনজুরি হল এলএন কিডনিতে ঘন ঘন প্যাথলজিক আবিষ্কার, যার মধ্যে হালকা গ্লোমেরুলার ইনজুরি রয়েছে (61, 62)। টিআই আঘাতটি এলএন (63, 64) এর তীব্রতার পূর্বাভাস দেখানো হয়েছে, তবুও এটিকে ট্রিগার করার প্রক্রিয়াগুলি অজানা। যেহেতু এলিভেটেড কিম-1 এবং লিপোক্যালিন-2 এসএলই (26, 65) তে টিআই আঘাতের চিহ্নিতকারী এবং নিউট্রোফিল স্থানান্তরকে বাধা দেয়কিডনিতাদের অভিব্যক্তিকে বাধা দেয়, আমরা প্রস্তাব করি যে UV এক্সপোজারের পরে পরিলক্ষিত ক্ষণস্থায়ী প্রোটিনুরিয়া নিউট্রোফিল-মধ্যস্থিত সাবক্লিনিকাল টিআই প্রদাহ (65) এর পরিণতি। বর্ধিত কিডনি vcam-1 এক্সপ্রেশন, SLE (66) তে টিআই আঘাতের আরেকটি চিহ্নিতকারী, এই মডেলটিকে আরও সমর্থন করে।

জীবাণুমুক্ত বা সংক্রামক আঘাতের স্থানীয় সাইটগুলিতে প্রদাহ প্রচার করার পাশাপাশি, নিউট্রোফিলগুলিকে দূরবর্তী অঙ্গগুলিতে (8-10) বাড়িতে দেখানো হয়েছে, যেখানে, প্রেক্ষাপটের উপর নির্ভর করে, তারা ROS উৎপাদনের মাধ্যমে টিস্যু আঘাতে অবদান রাখে (11) বা সক্রিয় করে। লিম্ফ নোড এবং অস্থি মজ্জার অভিযোজিত প্রতিরোধ ব্যবস্থা (9, 12)। এই নিউট্রোফিলগুলির প্রদাহজনক প্রকৃতি আঘাতের প্রাথমিক সাইট থেকে প্রস্থান করার এবং গৌণ সাইটগুলিতে স্থানান্তরিত করার ক্ষমতার জন্য দায়ী করা হয়েছে, অর্থাৎ, আরটিইএম (9-11, 31-34)। আমাদের অনুসন্ধানে দেখা গেছে যে UV এক্সপোজারের পরে ত্বকে GFP-যুক্ত কোষগুলির PA এর ফলে GFP প্লাস নিউট্রোফিল সনাক্ত করা যায়।কিডনিrTEM এর ফেনোটাইপের সাথে উপ-জনসংখ্যার পরামর্শ দেয়রেনালনিউট্রোফিল বিপরীতমুখী UV-উন্মুক্ত ত্বক থেকে স্থানান্তরিত হয় (GFP প্লাস নিউট্রোফিলের ∼20 শতাংশকিডনিনিউট্রোফিল এবং এর মধ্যে 20 থেকে 35 শতাংশ হল rTEM; সুতরাং, rTEM মোটের 4 থেকে 7 শতাংশ তৈরি করেকিডনিনিউট্রোফিল). rTEM-এর এই অনুপাত জীবাণুমুক্ত লিভারের আঘাত (∼9 শতাংশ) (36) এবং ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন আঘাত (∼8 শতাংশ) (11) এর পরে রিপোর্ট করা অনুপাতের সাথে তুলনীয়। rTEM-কে অন্যান্য পরিস্থিতিতে প্রদাহজনিত (10, 11) এবং প্রতিবন্ধী অ্যাপোপটোসিস (35) হিসাবে দেখানো হয়েছে, যার ফলে তারা UV-প্ররোচিত ক্ষেত্রে ভূমিকা পালন করে।কিডনি আঘাত।এই নিউট্রোফিলগুলিতে উন্নত CXCR4 অভিব্যক্তি বিশেষভাবে প্রাসঙ্গিক, একটি কাকতালীয় হিসাবেরেনালcxcl12 এর অভিব্যক্তি, একটি CXCR4 লিগ্যান্ড যা পডোসাইট এবং টিউবুলস (24) দ্বারা প্রকাশ করা হয়েছে, পরিলক্ষিত হয়েছিল, সম্ভবত এই নিউট্রোফিল জনসংখ্যার জন্য একটি কেমোট্যাকটিক সংকেত প্রদান করে। উচ্চ মাত্রার সঙ্গে মিলিত ইমিউন কোষের উপর CXCR4 এক্সপ্রেশন বৃদ্ধিরেনালLN (67) সহ SLE রোগীদের মধ্যে CXCL12 সনাক্ত করা হয়েছে, এবং এই পথটি লুপাসের পাশাপাশি ইসকেমিয়া-রিপারফিউশনে জড়িত ছিলকিডনি আঘাতইঁদুরের মধ্যে (24, 68)। rTEM-এর চিহ্নিতকারী হওয়ার পাশাপাশি, বর্ধিত CXCR4 এক্সপ্রেশন "বয়স্ক" নিউট্রোফিলের একটি সূচক, যা টিস্যু-ক্ষতিকর প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যস্থতা করতে পারে (38)। নিউট্রোফিল নিয়োগে CXCR4 এর সুনির্দিষ্ট ভূমিকাকিডনিCXCR4 বিরোধীতা দ্বারা তদন্ত করা যেতে পারে যেমনটি পূর্বে নির্বীজ আঘাতের অন্যান্য মডেলগুলিতে করা হয়েছিল (38)।

টিস্যু-নির্দিষ্ট নিউট্রোফিল মাইগ্রেশন এবং বিভিন্ন অঙ্গে আনুগত্য অণুর ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশনের জন্য দায়ী প্রক্রিয়াগুলি ভালভাবে বোঝা যায় না (69)। কেমোকাইন cxcl12 এর প্রকাশের উচ্চ স্তরকিডনিকিন্তু ফুসফুস কিডনিতে CXCR4hi নিউট্রোফিলের অগ্রাধিকারমূলক উপস্থিতি ব্যাখ্যা করতে পারে না। উপরন্তু, ফুসফুসের অভিব্যক্তিতে কোন পরিবর্তন না হওয়ার তুলনায় কিডনিতে vcam-1 এবং ই-সিলেক্টিনের অভিব্যক্তির আবেশ, সম্ভবত কিডনিতে অগ্রাধিকারমূলক নিউট্রোফিল নিয়োগ এবং ধারণে অবদান রাখে। ফুসফুসে s100A9 এক্সপ্রেশনে 5- থেকে 6-গুণ বৃদ্ধি কিডনিতে 30- থেকে 60-গুণ বৃদ্ধির পাশাপাশি 6-গুণ বৃদ্ধির তুলনায় কিডনিতে 16-গুণ বৃদ্ধির তুলনায় ফুসফুসে IL{10}}বি প্রকাশ আরও প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াতে টিস্যুর পার্থক্য নির্দেশ করে। G-CSF নিরপেক্ষকরণের পরে কিডনিতে নিউট্রোফিল অনুপ্রবেশের হ্রাসের জন্য সঞ্চালন সংখ্যা হ্রাস এবং নিউট্রোফিল সক্রিয়করণের পাশাপাশি vcam-1 এবং ই-সিলেক্টিনের স্থানীয় প্রকাশের হ্রাস উভয়কেই দায়ী করা যেতে পারে। যাইহোক, আমরা নিশ্চিত হতে পারি না যে ত্বকের UV এক্সপোজারের পরে এই আনুগত্যের অণুগুলির প্রাথমিক আপ-নিয়ন্ত্রণটি ত্বক থেকে প্রাপ্ত সাইটোকাইনস/ডিএএমপিএসের জন্য দায়ী কিনা বা নিউট্রোফিলগুলি, সেরিন প্রোটিস নিঃসরণের মাধ্যমে, তাদের অভিব্যক্তিতে সরাসরি অবদান রাখে যেমনটি অন্যান্য হিসাবে দেখানো হয়েছে। প্রসঙ্গ (70)। প্রক্রিয়া নির্বিশেষে, এবং উল্লেখ্য যে আমরা সমস্ত টিস্যুগুলির একটি বিস্তৃত বিশ্লেষণ করিনি, আমাদের অধ্যয়নগুলি UV আলো-মধ্যস্থ পদ্ধতিগত প্রভাবগুলিতে কিছু অঙ্গ নির্বাচনের প্রমাণ দেয়। ভবিষ্যত অধ্যয়নগুলি সিস্টেমিক নিউট্রোফিল বিস্তারের টিস্যু-নির্দিষ্ট কার্যকরী ফলাফলগুলিকে সম্বোধন করবে, উদাহরণস্বরূপ, ভাস্কুলার অ্যালবুমিন ফুটো এবং ফুসফুসে শোথ গঠন (11, 36)।

এসএলই রোগীদের ক্ষেত্রে, দ্ব্যর্থহীনভাবে ত্বকের অতিবেগুনী রশ্মির সংস্পর্শকে সিস্টেমিক রোগের তীব্রতার সাথে সম্পর্কিত করা কঠিন, কারণ বিভিন্ন ব্যক্তির মধ্যে দৃশ্যমান আলোক সংবেদনশীলতার প্রতিক্রিয়ার মধ্যে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন (1 থেকে 3 সপ্তাহ) রয়েছে (21)। উপরন্তু, সাবক্লিনিকালকিডনি আঘাতঅতিবেগুনী আলোর যৌগিক প্রভাবের পরপর এক্সপোজার না হওয়া পর্যন্ত সহজেই মিস করা যেতে পারে। আমরা যে নিউট্রোফিল-মধ্যস্থতা পাওয়া গেছেকিডনি প্রদাহUV আলোর প্রতিক্রিয়ায় সুস্থ ইঁদুরের ক্লিনিকাল রোগের কারণ হয় না, এই ধরনের একটি প্রক্রিয়া একাধিক উপায়ে আলোক সংবেদনশীল লুপাস রোগীদের LN ফ্লেয়ারে অবদান রাখতে পারে। ইমিউন কমপ্লেক্স দ্বারা এফসি রিসেপ্টর জড়িত থাকার ফলে নিউট্রোফিল নিয়োগ বৃদ্ধি পায়, যার ফলে ROS এবং প্রোটিজ মুক্তি (71); নেট তৈরির জন্য লুপাস নিউট্রোফিল এবং এলডিজিগুলির উচ্চ ক্ষমতা, যা, এসএলই রোগীদের ক্ষেত্রে, দক্ষতার সাথে পরিষ্কার করা হয় না (72), টিস্যু-ক্ষতিকারী প্রোটিস (73), IFN-I প্রতিক্রিয়ার প্রচার (58) হতে পারে। , বা সরাসরি ক্ষতিকিডনিভাস্কুলার ক্ষতি এবং ফুটো তৈরি করে এন্ডোথেলিয়াম (16)। অধিকন্তু, লুপাস ত্বকের অন্তর্নিহিত পার্থক্য, যেমন বর্ধিত IFN-I সংকেত (5, 74) এবং প্রতিরক্ষামূলক ল্যাঙ্গারহ্যান্স কোষের জনসংখ্যার ত্রুটিগুলি (75), নিউট্রোফিল-মধ্যস্থ পদ্ধতিগত প্রতিক্রিয়াগুলির মাত্রা এবং প্রকৃতিকে অবহিত করতে পারে। নিউট্রোফিল মাইগ্রেশন ট্র্যাকিং এবং অটোঅ্যান্টিবডির জিজ্ঞাসাবাদ, অ্যাপোপটোটিক কোষের সঞ্চয় এবং নিম্ন পরিপূরক স্তরগুলি লুপাসের অভিনব মডেলগুলি ব্যবহার করে সমাধান করা যেতে পারে, যেমন জেনেটিকালি সংজ্ঞায়িত ট্রিপল মিউট্যান্ট (Sle1.Mfge8−/− C1q−/− এবং Sle1.Mfge8) /−C3−/−) (76) বা UV আলোর সংস্পর্শে আসার পরে অন্যান্য লুপাস স্ট্রেন।

এসএলই-তে প্রদাহের সাথে নিউট্রোফিলগুলিকে যুক্ত করার সঠিক প্রক্রিয়াগুলি, এছাড়াও, নিউট্রোফিল/এলডিজি ফেনোটাইপ দ্বারা প্রভাবিত হতে পারে, কারণ এই জনসংখ্যার মধ্যে ভিন্নতা আরও স্পষ্ট হয়ে উঠেছে (77)। উন্নত CXCR4 এবং ICAM1hiCXCR1lo (rTEM) জনসংখ্যা, বিশেষত SLE LDG-তে আমাদের অনুসন্ধানগুলি এই ভিন্নতাকে আরও যোগ করে এবং পরামর্শ দেয় যে রক্তে আরও কিছু প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি গ্রানুলোসাইটের পূর্বে "টিস্যু অভিজ্ঞতা" থাকতে পারে, অর্থাৎ, বাসস্থান প্রভাবিত অঙ্গ টিস্যু, যেমন ত্বক, পদ্ধতিগত বিস্তারের আগে। আরটিইএম ফেনোটাইপগুলি পূর্বে রিউমাটয়েড আর্থ্রাইটিস রোগীদের সাইনোভিয়াল ফ্লুইড এবং সঞ্চালনকারী নিউট্রোফিলগুলিতে রিপোর্ট করা হয়েছে (35, 78) এবং তীব্র প্যানক্রিয়াটাইটিস-সম্পর্কিত ফুসফুসের আঘাতে (79)। এসএলইতে তাদের ভূমিকা আরও তদন্তের নির্দেশ দেয়।

CISTANCHE কিডনি/রেনাল ব্যথার উন্নতি ঘটাবে

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

ইঁদুর।সমস্ত প্রাণী পরীক্ষাগুলি সিয়াটেলের ওয়াশিংটন বিশ্ববিদ্যালয়ের ইনস্টিটিউশনাল অ্যানিমাল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। প্রাথমিক পরীক্ষাগুলি পুরুষ এবং মহিলা উভয় C57BL/6J ইঁদুর ব্যবহার করে পরিচালিত হয়েছিল (জ্যাকসন ল্যাবরেটরি, 3 থেকে 4 মাস বয়সী, ডুমুর। 1 এবং 2)। মহিলা ইঁদুরগুলি পরবর্তী সমস্ত পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। পিএ অধ্যয়নগুলি B6 এ সম্পাদিত হয়েছিল। Cg-Ptprc Tg(UBC-PA-GFP)1Mnz/J মহিলা ইঁদুর (জ্যাকসন ল্যাবরেটরি, 3 থেকে 4 মাস বয়সী)। এই ইঁদুরগুলি C57BL/6 ভ্রূণে মানব ubiquitin C প্রোমোটারের ট্রান্সক্রিপশনাল নিয়ন্ত্রণের অধীনে PAGFP (T203H ভেরিয়েন্ট) বহনকারী একটি ট্রান্সজেনিক ভেক্টরের ইনজেকশন দ্বারা উত্পন্ন হয়েছিল। প্রাণীগুলিকে প্যাথোজেন-মুক্ত অবস্থায় রাখা হয়েছিল এবং 12 ঘন্টার হালকা-অন্ধকার চক্রে খাদ্য ও জলের অ্যাড লিবিটাম অ্যাক্সেস সহ রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল। নিউট্রোফিল মাইগ্রেশন (38) এর উপর সার্কাডিয়ান ছন্দের প্রভাব এড়াতে সমস্ত প্রাণীর উপর পরীক্ষাগুলি দিনের একই সময়ে সঞ্চালিত হয়েছিল।

UVB লাইট এবং টেপ স্ট্রিপিংয়ের এক্সপোজার।পুরুষ এবং মহিলা C57BL/6 ইঁদুরের পৃষ্ঠীয় দিকটি UVB আলোর সাথে বিকিরণ করার কমপক্ষে 24 ঘন্টা আগে শেভ করা হয়েছিল এবং পরীক্ষায় শুধুমাত্র পিগমেন্টহীন ত্বকযুক্ত ইঁদুরগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। ইঁদুরগুলিকে আইসোফ্লুরেন দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং FS40T12/UVB বাল্ব (ন্যাশনাল বায়োলজিক্যাল কর্পোরেশন) ব্যবহার করে UVB আলোর এক ডোজ (500 mJ/cm2) এর সংস্পর্শে আনা হয়েছিল, যার সর্বোচ্চ নির্গমন 300 থেকে 315 nm এর মধ্যে ছিল। পৃষ্ঠীয় পৃষ্ঠের UVB আলোক শক্তি একটি SEL240/UVB ডিটেক্টর (আন্তর্জাতিক আলো প্রযুক্তি) দিয়ে সজ্জিত একটি ফটো লাইট IL1400A রেডিওমিটার দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল। UVB আলোর সংস্পর্শে আসার পর ইঁদুরগুলিকে 1, 2, বা 6 দিন পর euthanized করা হয়েছিল, এবং অ-বিকিরণিত ইঁদুরগুলি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল (D-1) (চিত্র 2A)। এপিডার্মাল টেপ স্ট্রিপিং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল (7), এবং ত্বক এবংকিডনিআঘাতের 24 ঘন্টা পরে মূল্যায়ন করা হয়েছিল

আইএল-17এ এবং জি-সিএসএফের বাধা।UV আলো (1 × 500 mJ/cm2) (চিত্র 3I) এর সংস্পর্শে আসার 3 ঘন্টা আগে 100 ug বিশুদ্ধ ইঁদুর-বিরোধী ইঁদুর IL-17A IgG (BioLegend) বা আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ দিয়ে ইঁদুরগুলিকে শিরায় চিকিত্সা করা হয়েছিল। রক্ত, ত্বক এবং স্যালাইন-পারফিউজে নিউট্রোফিলের উপস্থিতিকিডনিনীচে বর্ণিত হিসাবে UV এক্সপোজারের 24 ঘন্টা পরে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা টিস্যু মূল্যায়ন করা হয়েছিল। UV আলোর প্রতিক্রিয়ায় নিউট্রোফিল স্থানান্তরকে 50 ug অ্যান্টি-মাউস G-CSF মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি বা মাউস IgG আইসোটাইপ কন্ট্রোল (R&D সিস্টেম) 24 ঘন্টা এবং 3 ঘন্টা আগে UVB আলোর ত্বকের সংস্পর্শে আসার আগে (1 × 500 mJ) দিয়ে ইঁদুরের ইন্ট্রাপেরিটোন্যালি চিকিত্সা করে বাধা দেওয়া হয়েছিল। /cm2) (চিত্র 4A)। কার্ডিয়াক পারফিউশন, নিউট্রোফিল এবং মনোসাইট সংখ্যা অনুসরণ করেকিডনিকিউপিসিআর দ্বারা ফ্লো সাইটোমেট্রি এবং জিন এক্সপ্রেশন দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যেমন নীচে বর্ণিত হয়েছে। UVB আলোর সংস্পর্শে না আসা ইঁদুরগুলি একটি অতিরিক্ত নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

বিভিন্ন অঙ্গ থেকে কোষের বিচ্ছিন্নতা।CO2 ইনহেলেশনের সাথে ইউথানেশিয়ার পরে, পৃষ্ঠীয় ত্বকের একটি টুকরো সরানো হয়েছিল এবং প্রক্রিয়াকরণ না হওয়া পর্যন্ত বরফের উপর RPMI (রসওয়েল পার্ক মেমোরিয়াল ইনস্টিটিউট) দ্রবণে রাখা হয়েছিল। ইথিলেনেডিয়ামিনেটেট্রাসেটিক অ্যাসিড-প্রলিপ্ত সিরিঞ্জে কার্ডিয়াক পাংচারের মাধ্যমে রক্ত ​​সংগ্রহ করা হয়েছিল। কার্ডিয়াক পারফিউশন পরবর্তীকালে ফসফেট-বাফার স্যালাইন (PBS) (∼60 mL) ব্যবহার করে বাম ভেন্ট্রিকলের মাধ্যমে ডান অলিন্দ কেটে ফেলা হয়। সম্পূর্ণ পর্যবেক্ষণ করে সফল পারফিউশন নির্ধারণ করা হয়েছিলকিডনিএবং ফুসফুস ফ্যাকাশে। ফুসফুস, কিডনি, প্লীহা এবং উভয় ফিমার সাবধানে সরানো হয়েছিল এবং নমুনা প্রক্রিয়াকরণ না হওয়া পর্যন্ত বরফের উপর RPMI দ্রবণে স্থাপন করা হয়েছিল। কোষগুলিকে ত্বকের টিস্যুর সমতুল্য অঞ্চল (∼30 mm2) থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল টিস্যুকে কিমা এবং হজম করার মাধ্যমে 0.28 ইউনিট/mL Liberase TM (Roche) এবং 0.1 mg/mL Deoxyribonuclease I ( ওয়ার্থিংটন) পিবিএস-এ Ca plus 2 এবং Mg plus 2 সহ 60 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রি কাঁপুনি সহ। কোষগুলি একটি থেকে বিচ্ছিন্ন ছিলকিডনিপশু প্রতি;কিডনিপ্রকাশিত প্রোটোকল অনুসারে 37 ডিগ্রিতে 30 মিনিটের জন্য 2 মিলিগ্রাম/মিলি কোলাজেনেস টাইপ I (ওয়ার্থিংটন) তে টিস্যুগুলি কিমা এবং হজম করা হয়েছিল। PBS (Ca plus 2 এবং Mg plus 2) তে 1 mg/mL collagenase টাইপ 1 এবং 60 U Deoxyribonuclease I দিয়ে ফুসফুসের কোষগুলি হজমকারী টিস্যু দ্বারা সংগ্রহ করা হয়েছিল। পুরো প্লীহাগুলিকে 40 μm সেল স্ট্রেনারে চূর্ণ করা হয়েছিল এবং RPMI দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। প্লীহা, অস্থি মজ্জা, কিডনি এবং ফুসফুসের সম্পূর্ণ রক্ত ​​এবং কোষগুলিকে 1X রেড ব্লাড সেল (আরবিসি) লাইসিস বাফার (বিডি বায়োসায়েন্স) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। বিচ্ছিন্নতা/হজমের পরে, সমস্ত টিস্যু থেকে কোষগুলি ফিল্টার করা হয়েছিল (40 μm), পিবিএস দিয়ে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল এবং গণনার আগে RPMI দ্রবণে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল।

ফ্লো সাইটোমেট্রি স্টেনিং এবং বিশ্লেষণ।সেলগুলিকে এফসি ব্লক ট্রুস্টেইন এফসিএক্স (বায়োলজেন্ড) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং বিক্রেতার সুপারিশ অনুসারে জম্বি অ্যাকোয়া ভাইবিলিটি ডাই (বায়োলজেন্ড) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। বায়োলেজেন্ড থেকে কেনা মাউস-নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্ট অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে কোষগুলি ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং পৃষ্ঠের দাগ দেওয়া হয়েছিল। লাইভ ইমিউন সেল (জম্বি অ্যাকোয়া-সিডি 45 প্লাস) গেটে বিভিন্ন মাইলয়েড কোষের জনসংখ্যা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। নিউট্রোফিলের শতাংশ এবং সংখ্যা (Ly6CintLy6Ghi) এবং মনোসাইট (Ly6C প্লাস Ly6G−) পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রতিনিধি প্রবাহ সাইটোমেট্রি গেটিং SI পরিশিষ্ট, চিত্র S10 এ উপস্থাপিত হয়েছে। PA মডেলে (CXCR4, ICAM1, এবং CXCR1) পৃষ্ঠ মার্কারগুলির শতাংশের অভিব্যক্তি এবং গড় ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা নিউট্রোফিল গেটে (Ly6Ghi) ফ্লুরোসেন্স মাইনাস ওয়ান (FMO) স্টেনিং নিয়ন্ত্রণ ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। সমস্ত নমুনা সাইটোফ্লেক্স ফ্লো সাইটোমিটার (বেকম্যান কুল্টার) ব্যবহার করে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল এবং ফ্লোজো সফ্টওয়্যার সংস্করণ 10 (ট্রি স্টার) দিয়ে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

ফটোঅ্যাক্টিভেশন (পিএ) স্টাডিজ।UBC-PA-GFP ইঁদুরগুলিকে শেভ করা হয়েছিল এবং পিছনের একটি অংশ উপরের মতো এক ডোজ UVB আলো (500 mJ/cm2) দিয়ে বিকিরণ করা হয়েছিল। শুধুমাত্র যে ত্বকের অংশটি ফটোকনভার্ট করা হবে তা UVB আলোর সংস্পর্শে এসেছিল, বাকি ত্বক অ্যালুমিনিয়াম ফয়েল দিয়ে আবৃত ছিল। UVB প্ররোচিত জীবাণুমুক্ত আঘাতের 24 ঘন্টা পরে, শক্তিতে 0.37 সংখ্যাসূচক অ্যাপারচার (NA) ফাইবার (Mightex) সহ একটি 50 W আলো-নিঃসরণকারী ডায়োড বাতি ব্যবহার করে সম্পূর্ণ UVB-বিকিরণযুক্ত ত্বক অঞ্চলটি বেগুনি আলোর (405 nm) শিকার হয়েছিল। 100 মেগাওয়াট (প্রতি এলাকায় 15 মিনিট এক্সপোজার)। এই পদ্ধতিটি ত্বক-নির্দিষ্ট ফটোকনভারশন (80) এর একটি প্রকাশিত প্রোটোকলের ভিত্তিতে অপ্টিমাইজ করা হয়েছিল।কিডনিএবং উপরে বর্ণিত হিসাবে PA এর 24 ঘন্টা পরে ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের জন্য ফুসফুস সংগ্রহ এবং প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। পদ্ধতি এবং সময়রেখা চিত্র 5A-এর চিত্রে বর্ণিত হয়েছে। GFP প্লাস নিউট্রোফিলের শতাংশকিডনিতিনটি নিয়ন্ত্রণের অবস্থার অধীনে ইঁদুরের মধ্যে পাওয়া যেটির সাথে তুলনা করা হয়েছিল: 1) কোন UV এবং PA নেই, 2) UV কিন্তু PA নেই এবং 3) UV কিন্তু PA নেই। CXCR4 এক্সপ্রেশন লেভেল এবং ICAM1hiCXCR1lo ফেনোটাইপ GFP প্লাসের মধ্যে এবং GFP− ত্বকে নিউট্রোফিল এবংকিডনিবায়োলেজেন্ড থেকে কেনা মাউস-নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। GFP প্লাস নিউট্রোফিল কিনা তা নির্ধারণ করতেকিডনিত্বক থেকে উদ্ভূত এবং রক্ত ​​নয়, ইঁদুরের একটি গ্রুপের ত্বক উপরে বর্ণিত হিসাবে UV আলো এবং PA এর সংস্পর্শে এসেছিল (গ্রুপ I), অন্য গ্রুপে, ত্বক UV আলোর সংস্পর্শে এসেছিল কিন্তু PA সংলগ্ন ত্বকের এলাকায় সঞ্চালিত হয়েছিল UV আলোর সংস্পর্শে আসে না (গ্রুপ II) (SI পরিশিষ্টে চিত্র, S7A)।কিডনিউপরে বর্ণিত হিসাবে প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের জন্য সংগ্রহ এবং প্রক্রিয়া করা হয়েছিল।

জিন এক্সপ্রেশন এবং প্রোটোমিক বিশ্লেষণ।চামড়া,কিডনি,এবং ফুসফুসের নমুনাগুলি RNAlater সলিউশনে (QIAGEN) সংরক্ষণ করা হয়েছিল। QIAGEN থেকে RNeasy কিট দ্বারা RNA বের করা হয়েছিল এবং উচ্চ ক্ষমতার cDNA সংশ্লেষণ কিট (অ্যাপ্লাইড বায়োসিস্টেম) ব্যবহার করে পরিপূরক DNA (cDNA) সংশ্লেষিত হয়েছিল। প্রদাহজনক কেমোকাইনস, সাইটোকাইনস, এবং আঠালো অণুগুলির প্রতিলিপিগুলি SI পরিশিষ্ট, টেবিল S1-এ তালিকাভুক্ত প্রাইমারগুলি ব্যবহার করে রিয়েল-টাইম qPCR দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল এবং 18S ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরের গড় স্বাভাবিক করা হয়েছিল। ব্যবহৃত UVB আলোর ডোজ কোন অঙ্গে 18S অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করেনি। mRNA লক্ষ্যগুলির আপেক্ষিক অভিব্যক্তি স্ট্যান্ডার্ড সূত্র 2^(−Ct) × সহগ ব্যবহার করে নির্ধারিত হয়েছিল। IFN স্কোরগুলি 10 প্রতিনিধি ইন্টারফেরন-উদ্দীপিত জিনের অভিব্যক্তি থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল (ISG; Mx1, Irf7, Isg15, Isg20, Ifi44, ifit1, ifit3, oasl1, usp18, এবং ifi27l2a) পূর্বে বর্ণিত হিসাবে (6)। প্রতিটি ISG-এর আপেক্ষিক অভিব্যক্তির গড় এবং SD তে নির্ধারিত হয়েছিলকিডনিUV আলোর সংস্পর্শে না আসা ইঁদুরের (মানে ইউভি এবং এসডিনোইউভি)। এগুলি তারপরে চিকিত্সা করা ইঁদুরের কিডনিতে প্রতিটি আইএসজির অভিব্যক্তির মাত্রা মানক করতে ব্যবহৃত হয়েছিল (আইজিজি আইসোটাইপ প্লাস ইউভিবি বা এ-জিসিএসএফ প্লাস ইউভিবি)। IFN এক্সপ্রেশন স্কোর অর্জনের জন্য প্রতিটি মাউসের জন্য স্ট্যান্ডার্ডাইজড এক্সপ্রেশন লেভেলগুলিকে যোগ করা হয়েছিল; i=প্রতিটি ISG-এর অভিব্যক্তি; জিন চিকিত্সা=চিকিত্সার পরে আপেক্ষিক জিনের প্রকাশের স্তর; এবং জিন inoUV=ইঁদুরের আপেক্ষিক জিন এক্সপ্রেশন স্তর UVB আলোর সংস্পর্শে আসে না। ∑ 10 i=1=জেনেইট্রিটমেন্ট−মান জিনিনোইউভি এসডি(জেনিনোইউভি)। প্লাজমা এবং ত্বকের টিস্যু প্রোটিন নির্যাসে প্রোটিনের মাত্রা সংজ্ঞায়িত অ্যানালাইট প্যানেল লেজেন্ডপ্লেক্স মাউস ইনফ্লামেশন প্যানেল এবং ইনফ্ল্যামেটরি কেমোকাইন প্যানেল (বায়োলজেন্ড) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।

যদি হিমায়িত কিডনি টিস্যুতে দাগ পড়ে।স্যালাইন-পারফিউজডকিডনিঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল এবং 30 শতাংশ সুক্রোজে নিমজ্জিত করার পরে, সর্বোত্তম কাটিং মিডিয়াম (সাকুরা ফিনেটেক) হিমায়িত করা হয়েছিল। IF স্টেনিংয়ের আগে 5-μm টিস্যু বিভাগগুলি PBS-এ রিহাইড্রেট করা হয়েছিল। টিস্যুগুলি পিবিএস-এ 0.1 শতাংশ ট্রাইটন এক্স-100 দিয়ে প্রবেশ করানো হয়েছিল এবং পরবর্তীতে পিবিএস প্লাস 0.1 শতাংশ ট্রাইটন এক্স-100/5 শতাংশ বিএসএ (বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন)/5 শতাংশ খরগোশের সিরামে ব্লক করা হয়েছিল . NE এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলি যথাক্রমে 4 ডিগ্রী রাতারাতি অ্যান্টি-মাউস NE Cy5 (1:100, Bioss) এবং অ্যান্টি-মাউস PECAM-1/CD31 Al488 (1:100, Biolegend) দিয়ে দাগ দিয়ে সনাক্ত করা হয়েছিল। নিউট্রোফিলের উপস্থিতিকিডনিঅ্যান্টি-মাউস Ly6G Al647 (1:100, Biolegend) দিয়ে দাগ দিয়ে নিশ্চিত করা হয়েছিল। 4′,6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিন্ডোল (DAPI) মাউন্টিং মিডিয়াম (ইনভিট্রোজেন) সহ প্রোলং গোল্ড ব্যবহার করে টিস্যুগুলি মাউন্ট করা হয়েছিল এবং Nikon Eclipse 90i ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ (হিস্টোলজি এবং ইমেজিং কোর, ওয়াশিংটন বিশ্ববিদ্যালয়) দিয়ে চিত্রিত করা হয়েছিল।

ত্বকের হিস্টোলজিক মূল্যায়ন।ইউনিভার্সিটি অফ ওয়াশিংটন হিস্টোলজি অ্যান্ড ইমেজিং কোরে ফরমালিন-স্থির, প্যারাফিন-এম্বেডেড ত্বকের টিস্যু বিভাগগুলি (4 থেকে 5μm) হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল UV এর আগে, দিন 1, দিন 2 এবং 6 তম দিন UVB বিকিরণ (n {{) 7}} মহিলা)। নিম্নলিখিত পরামিতিগুলির জন্য ত্বক একটি অন্ধ ফ্যাশনে স্কোর করা হয়েছিল: ডার্মিস/সাবকুটিসের প্রদাহ, এপিডার্মাল কোষের মৃত্যু, অ্যাক্যানথোসিস, হাইপারকেরাটোসিস, সেরোসেলুলার ক্রাস্ট গঠন এবং ক্ষয়/আলসারেশন। এই প্যারামিটারগুলি 0 থেকে 4 এর স্কেলে স্কোর করা হয়েছিল ক্ষয়/ক্ষত ব্যতীত তীব্রতা এবং ব্যাপ্তির উপর নির্ভর করে, যা উপস্থিত (1) বা অনুপস্থিত (0) হিসাবে স্কোর করা হয়েছিল। NIS-Elements BR 3 ব্যবহার করে রিপ্রেজেন্টেটিভ ছবি তোলা হয়েছে।{14}}বিট এবং Adobe Photoshop-এ প্রলেপ করা হয়েছে আলোর সামঞ্জস্য সহ সমগ্র ছবিতে প্রয়োগ করা হয়েছে। মূল বিবর্ধন বলা হয়.

প্রস্রাব পরিমাপ.ব্র্যাডফোর্ড প্রোটিন অ্যাস (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) দ্বারা প্রস্রাবের প্রোটিনের মাত্রা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। প্রস্রাবের নমুনাগুলি পিবিএস-এ 1:40 ডিলিউশনে পরীক্ষা করা হয়েছিল, এবং প্রস্রাবে প্রোটিনের ঘনত্ব BSA-এর পরিচিত ঘনত্বের সিরিয়াল পাতলাকরণের উপর ভিত্তি করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে অ্যালবুওয়েল অ্যালবুমিন অ্যাস এবং ক্রিয়েটিনাইন কম্প্যানিয়ন কিট (এক্সোসেল) ব্যবহার করে প্রস্রাবের অ্যালবুমিন/ক্রিয়েটিনিন অনুপাত মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

মানুষের নমুনা সংগ্রহ এবং প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ।এই গবেষণাটি ইউনিভার্সিটি অফ ওয়াশিংটন ইনস্টিটিউশন রিভিউ বোর্ড (STUDY00001145) দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। অবহিত সম্মতির পরে সুস্থ স্বেচ্ছাসেবক এবং এসএলই রোগীদের কাছ থেকে হেপারিনাইজড টিউবে পুরো রক্ত ​​সংগ্রহ করা হয়েছিল। নিউট্রোফিলস (PMNs) এবং PBMC গুলিকে Ficoll-Paque discontinuous gradient separation (GE Healthcare) দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। পিএমএনগুলি এরিথ্রোসাইট পেলেট থেকে 5 শতাংশ ডেক্সট্রান সেডিমেন্টেশন দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। RBC lysis এর পরে, কোষগুলিকে বায়োলেজেন্ড থেকে কেনা ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত অ্যান্টিবডি দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল, এবং CXCR4 এক্সপ্রেশন এবং শতাংশ ICAM1hiCXCR1lo কোষগুলি PMNs (CD66b প্লাস) এবং LDGs (CD15 প্লাস, CD14lo, এবং CDB10) (CDB10) এ মূল্যায়ন করা হয়েছিল। FMO এর উপর ভিত্তি করে LDGs এবং ICAM1hiCXCR1lo স্টেনিং এর গেটিং কৌশল এসআই পরিশিষ্ট, চিত্র S11-এ দেখানো হয়েছে। সাইটোফ্লেক্স ফ্লো সাইটোমিটার (বেকম্যান কুল্টার) ব্যবহার করে নমুনাগুলি প্রক্রিয়া করা হয়েছিল এবং ফ্লোজো সফ্টওয়্যার সংস্করণ 10 (ট্রি স্টার) দিয়ে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যানিক বিশ্লেষণ.গ্রাফপ্যাড প্রিজম 7 সফ্টওয়্যার (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার ইনক.) ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল। দুটি ডেটা গোষ্ঠীর মধ্যে পরিসংখ্যানগত পার্থক্য ছাত্রদের পরীক্ষা ব্যবহার করে অ-বিকিরণিত নিয়ন্ত্রণ (D-1) এর সাপেক্ষে নির্ধারণ করা হয়েছিল। একাধিক তুলনা সহ একমুখী ANOVA এবং Tukey post hoc তিনটি দলের মধ্যে পরিসংখ্যানগত তাৎপর্য নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।