একটি নভেল নেট্রিন-1-উত্পন্ন পেপটাইড নিউরোনাল মৃত্যুর বিরুদ্ধে সুরক্ষা বাড়ায় এবং ইঁদুরের ইন্ট্রাসেরিব্রাল হেমোরেজকে প্রশমিত করে পার্ট 1

বিমূর্ত:

এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে নেট্রিন-1 কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের আঘাতের পরে নিউরোপ্রোটেকশনে জড়িত। যাইহোক, নেট্রিনের ন্যূনতম কার্যকরী ডোমেন-1 যা নিউরোপ্রোটেকশন রক্ষা করতে পারে কিন্তু নেট্রিনের প্রধান পার্শ্বপ্রতিক্রিয়াগুলি এড়াতে পারে তা অধরা থেকে যায়।

কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র মানব দেহের অন্যতম গুরুত্বপূর্ণ স্নায়ুতন্ত্র, যা মানুষের চিন্তাভাবনা, অনুভূতি এবং ক্রিয়াকলাপ নিয়ন্ত্রণ করে। কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র ক্ষতিগ্রস্ত হলে মানুষের স্মৃতিশক্তিও ক্ষতিগ্রস্ত হবে। কিন্তু চিন্তা করবেন না, স্মৃতি পুনরুদ্ধারে সাহায্য করার জন্য আমরা কিছু ইতিবাচক উপায় অবলম্বন করতে পারি।

প্রথমত, আপনাকে স্মৃতির ক্ষতির প্রভাব বুঝতে হবে। কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের ক্ষতি মানুষের জ্ঞানীয় ক্ষমতা, চিন্তাভাবনা প্রক্রিয়া এবং মনোযোগকে প্রভাবিত করতে পারে, যার সবই সরাসরি মানুষের স্মৃতিশক্তিকে প্রভাবিত করে। এছাড়াও, কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের ক্ষতিও মানসিক অস্থিরতার কারণ হতে পারে, যা মানুষকে আতঙ্ক, উদ্বেগ এবং বিষণ্নতার প্রবণ করে তোলে, যার ফলে স্মৃতি পুনরুদ্ধারকে প্রভাবিত করে।

যাইহোক, যদিও কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের ক্ষতি কিছু নেতিবাচক প্রভাব আনতে পারে, আমরা স্মৃতি পুনরুদ্ধারের প্রচারের জন্য কিছু ইতিবাচক ব্যবস্থা নিতে পারি। প্রথমত, আমরা কিছু জ্ঞানীয় প্রশিক্ষণ চেষ্টা করতে পারি, যেমন পড়া, লেখা এবং ধাঁধা সমাধান করা। এই ক্রিয়াকলাপগুলি মস্তিষ্ককে নতুন নিউরন তৈরি করতে উদ্দীপিত করতে পারে এবং মস্তিষ্ককে নতুন স্মৃতি এবং চিন্তাভাবনার উপায় তৈরি করতে সহায়তা করে।

দ্বিতীয়ত, আমরা কিছু শারীরিক ব্যায়ামের মাধ্যমে স্মৃতি পুনরুদ্ধারও করতে পারি। গবেষণায় দেখা গেছে যে সঠিক ব্যায়াম মস্তিষ্ককে নতুন নিউরন এবং নিউরোনাল সংযোগ তৈরি করতে উদ্দীপিত করতে পারে এবং মস্তিষ্কের নতুন তথ্য প্রক্রিয়াকরণকে উন্নীত করতে পারে। এ কারণেই দৌড়ে বা হাঁটতে হাঁটতে কেউ কেউ হঠাৎ করে ভালো ধারণা নিয়ে আসে বা কঠিন কোনো সমস্যার সমাধান করে।

অবশেষে, আমাদের মেমরিতে সঠিক পুষ্টি গ্রহণের ভূমিকার দিকে মনোযোগ দিতে হবে। মস্তিষ্কের স্বাভাবিক ক্রিয়াকলাপের জন্য কিছু প্রয়োজনীয় পুষ্টির প্রয়োজন, যেমন প্রোটিন, ভিটামিন এবং ট্রেস উপাদান। আমাদের খাবারে এই পুষ্টির অভাব থাকলে তা আমাদের স্মৃতিশক্তি এবং চিন্তা করার ক্ষমতাকে প্রভাবিত করবে। তাই আমাদের খাদ্যতালিকায় এই পুষ্টিগুণ সমৃদ্ধ কিছু খাবার বেছে নেওয়া উচিত, যেমন মাছ, চর্বিহীন মাংস, শাকসবজি এবং ফলমূল।

সংক্ষেপে, কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের ক্ষতি মানুষের স্মৃতিতে একটি নির্দিষ্ট প্রভাব ফেলবে, তবে আমরা সঠিক জ্ঞানীয় প্রশিক্ষণ, শারীরিক ব্যায়াম এবং খাদ্য নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে স্মৃতি পুনরুদ্ধারকে উন্নীত করতে পারি। আমি আশা করি প্রত্যেকে ইতিবাচকভাবে জীবনের চ্যালেঞ্জ মোকাবেলা করতে পারে, একটি আশাবাদী মনোভাব বজায় রাখতে পারে এবং একটি স্বাস্থ্যকর কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র এবং ভাল স্মৃতি পুনরুদ্ধার করার চেষ্টা করতে পারে। এটা দেখা যায় যে আমাদের মেমরির উন্নতি করতে হবে, এবং Cistanche উল্লেখযোগ্যভাবে স্মৃতিশক্তির উন্নতি করতে পারে কারণ Cistanche হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ যার অনেকগুলি অনন্য প্রভাব রয়েছে, যার মধ্যে একটি হল স্মৃতিশক্তি উন্নত করা। Cistanche এর কার্যকারিতা বিভিন্ন সক্রিয় উপাদান থেকে আসে যার মধ্যে রয়েছে ট্যানিক অ্যাসিড, পলিস্যাকারাইডস, ফ্ল্যাভোনয়েড গ্লাইকোসাইডস ইত্যাদি, যা মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যকে বিভিন্ন উপায়ে উন্নীত করতে পারে।

স্বল্পমেয়াদী মেমরি উন্নত করতে Know এ ক্লিক করুন

এখানে, আমরা নেট্রিনের EGF3 ডোমেন (অবশিষ্ট 407–422) থেকে প্রাপ্ত একটি পেপটাইড E1 এর নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবের তদন্ত করেছি। আমরা খুঁজে পেয়েছি যে এটি নিউরোপ্রোটেকশন প্রদর্শনকারী ফোকাল অ্যাডেসন কিনেস ফসফোরিলেশন সক্রিয় করতে মুছে ফেলা কোলোরেক্টাল কার্সিনোমা (ডিসিসি) এর সাথে যোগাযোগ করে।

পেপটাইড E1 এর প্রশাসন ইন্ট্রাসেরেব্রালহেমোরেজ (ICH) এর একটি পরীক্ষামূলক মুরিন মডেলে হ্রাসকৃত অ্যাপোপটোসিসের মাধ্যমে কার্যকরী পুনরুদ্ধারের উন্নতি করতে সক্ষম হয়েছিল।

সংক্ষেপে, আমরা নেট্রিন-1 এর একটি কার্যকরী ক্রম প্রকাশ করি যা ICH এর পরে পুনরুদ্ধার প্রক্রিয়ার সাথে জড়িত এবং ICH এর চিকিত্সার জন্য একজন প্রার্থী পেপটাইড সনাক্ত করে।

কীওয়ার্ড: ইন্ট্রাসেরিব্রাল হেমোরেজ; হেমিন; neuroprotection; নেট্রিন-1; পেপটাইড

1. ভূমিকা

ইন্ট্রাসেরিব্রাল হেমোরেজ (আইসিএইচ) হল একটি বিধ্বংসী স্ট্রোক সাব-টাইপ যার একটি উচ্চ মৃত্যু এবং অসুস্থতার হার [1-3] যা মস্তিষ্কের মধ্যে সেরিব্রাল রক্তনালীগুলির অস্বাভাবিক ফেটে জড়িত [4,5]।

হেমোস্ট্যাসিস অর্জন এবং ইন্ট্রাক্রানিয়াল চাপ উপশম করার জন্য হেমাটোমাসের অস্ত্রোপচার অপসারণ পছন্দ করা হয় [6]। যাইহোক, অবশিষ্ট হেম্যাটিক অবশিষ্টাংশ এবং ব্লাডব্রেকডাউন পণ্যগুলি এখনও আইসিএইচ অনুসরণ করে সেকেন্ডারি মস্তিষ্কের আঘাতকে উন্নীত করতে পারে, নিউরোনাল ক্ষতি প্ররোচিত করে এবং কার্যকরী পুনরুদ্ধারকে বিলম্বিত করে [7-9]।

এইভাবে, সেকেন্ডারি মস্তিষ্কের আঘাত-প্ররোচিত নিউরোনাল ক্ষতি লক্ষ্য করে কার্যকরী কৌশলগুলির বিকাশ স্ট্রোক চিকিত্সার জন্য উপকারী হবে৷ নেট্রিন-1 হল সবচেয়ে ভালভাবে অধ্যয়ন করা প্রোটিনগুলির মধ্যে একটি যা অ্যাক্সোনাল গাইডেন্স এবং সিনাপটোজেনেসিস [10-12] এর রিসেপ্টরগুলির সাথে মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে কোলোরেক্টাল ক্যান্সার (DCC)এবং UNC5H (unco-ordinated-5 homolog) এ মুছে ফেলা হয়েছে যাতে কোষের বেঁচে থাকা, পার্থক্য করা এবং বিস্তারকে সক্রিয় করা যায় [13–15]।

যখন নেট্রিন-1 অনুপস্থিত থাকে তখন রিসেপ্টরগুলি অ্যাপোপটোসিসের মধ্যস্থতা করার জন্য একটি মৃত্যুর সংকেত প্ররোচিত করে [১৬]। এটা জানা যায় যে DCC-এর সাথে Netrin-1 এর আবদ্ধতার ফলে DCC-এর ডাইমারাইজেশন হয় এবং নিউরাইট আউটগ্রোথ এবং অ্যাক্সোনাল গাইডেন্স [17,18] প্ররোচিত করতে ফোকাল অ্যাডেসনকিনেস (এফএকে) এর টাইরোসিন 861 ফসফোরিলেশন শুরু করে।

DCC এর সাথে নেট্রিন-1 বাঁধাই নেট্রিন-1 এর EGF3 ডোমেন এবং DCC-এর FN5 ডোমেন নেট্রিন-1 সিগন্যালিং পাথওয়ে [19,20] সক্রিয়করণে জড়িত। সম্প্রতি, নেট্রিন-1কে ইস্কেমিক অঞ্চলে নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব দেখানো হয়েছে [২১]।

নেট্রিন-1 এর সিরামের অভিব্যক্তি স্তর, যা কোষের অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দেয় এবং নিউরোনাল পুনর্জন্মকে উৎসাহিত করে, ইস্কেমিক স্ট্রোক [22,23] থেকে রোগীর পুনরুদ্ধারের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত।

মজার বিষয় হল, ক্ষতিগ্রস্থ ইঁদুরের সায়াটিক স্নায়ুর মধ্যে নেট্রিন-1 নিঃসরণকারী অস্থি মজ্জা মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলির প্রতিস্থাপন অ্যাক্সোনাল পুনর্জন্ম শুরু করে [২৪] এবং মোটর নিউরনের মৃত্যু [২৫] হ্রাস করে। ভেন্ট্রিক্সে নেট্রিন-1 প্রোটিনের স্টেরিওট্যাক্সিক ইনজেকশন DCC/APPL1/AKT সংকেত সক্রিয়করণের মাধ্যমে সাবরাচনয়েড হেমোরেজের পরে স্নায়ু কোষের মৃত্যু হ্রাস করে [26]।

নেট্রিন-1 (অ্যামিনো অ্যাসিড 423–433) এর EGF3 ডোমেন থেকে প্রাপ্ত একটি পলিপেপটাইড স্পষ্টভাবে ERK ফসফোরিলেশন সক্রিয় করে এবং NO-এর উত্পাদনকে প্রচার করে, যার কার্ডিওপ্রোটেক্টিভ প্রভাব রয়েছে [27,28]। যাইহোক, নেট্রিন-1 কে টিউমারিজেনেসিসের সম্ভাব্য বায়োমার্কার হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে [২৯-৩১] কারণ একাধিক টিস্যু থেকে প্রাপ্ত ক্যান্সারে নেট্রিন-1 স্থিতির নিয়ন্ত্রণ পাওয়া যায় [৩২]।

যখন নেট্রিন-1 এর রিসেপ্টরDCC বা Unc5H এর সাথে আবদ্ধ থাকে, তখন রিসেপ্টরগুলি একটি ইতিবাচক সংকেত প্রেরণ করে যা বেঁচে থাকা, প্রদাহ, এনজিওজেনেসিস এবং অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোসিসের দিকে পরিচালিত করে, যা টিউমারিজেনেসিস নিয়ন্ত্রণ করে [৩১]।

তাই, নেট্রিনের ন্যূনতম কার্যকরী ডোমেন সনাক্ত করা খুবই গুরুত্বপূর্ণ-1 যা নিউরোপ্রোটেকশন সংরক্ষণ করতে পারে এবং নেট্রিনের প্রধান পার্শ্ব প্রতিক্রিয়াগুলি এড়াতে পারে যা নেট্রিন-1 এর EGF3 ডোমেইন থেকে প্রাপ্ত, হেমিন-প্ররোচিত বিষাক্ততা থেকে নিউরনকে রক্ষা করতে DCC-এর সাথে যোগাযোগ করে।

ICH ইঁদুরের ইনান পরীক্ষামূলক মডেল, পেপটাইড E1 এর প্রয়োগ কার্যকরী পুনরুদ্ধারের উন্নতি করেছে, যেমন আচরণগত পরীক্ষা দ্বারা নির্ধারিত হয়। তদ্ব্যতীত, পেপটাইড E1 আইসিএইচের পরে নিউরনগুলিকে অবক্ষয় থেকে রোধ করতে পারে।

এই ফলাফলগুলির উপর ভিত্তি করে, আমরা নেট্রিন-1 এর একটি কার্যকরী অনুক্রম সনাক্ত করেছি যা ICH এর পরে পুনরুদ্ধারের সাথে জড়িত এবং নির্ধারণ করেছি যে এই পেপটাইডটি ICH এর চিকিত্সার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

2. ফলাফল

2.1। EGF3 ডোমেন নেট্রিন-ডিসিসি ইন্টারঅ্যাকশনের জন্য গুরুত্বপূর্ণ

নেট্রিন-1 একটি VI ডোমেন, তিনটি EGF পুনরাবৃত্তি, এবং একটি C-টার্মিনাল ডোমেন [33] নিয়ে গঠিত। মানুষের নেট্রিন-1/DCC কমপ্লেক্সের ক্রিস্টাল গঠন প্রকাশ করে যে নেট্রিন-1 EGF3 ডোমেইন নেট্রিন-1/DCC মিথস্ক্রিয়া জন্য গুরুত্বপূর্ণ, কিন্তু EGF1 এবং EGF2 ডোমেন নয় [34]।

EGF3 ডোমেনে মূল অ্যামিনো অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশের মিউটাজেনেসিস (His407, Gln442, বা Gln443) সম্পূর্ণরূপে নেট্রিন-1/DCC বাইন্ডিং [19] ব্যাহত করে। EGF1/2 ডোমেনগুলি আকর্ষণীয় সংকেতকে বিকর্ষণমূলক সংকেতে পরিবর্তন করার জন্য প্রয়োজন যখন Unc5 DCC [20] এর সাথে সহাবস্থান করে।

এইভাবে, আমরা প্রথমে পূর্ণ-দৈর্ঘ্য তৈরি করেছি এবং EGF3-মুছে ফেলা (Netrin-1 ∆407–443) Netrin-1 গঠনগুলি (চিত্র 1A) এবং ক্ষণস্থায়ীভাবে GSTপুলডাউনের জন্য সংস্কৃতিযুক্ত HEK293T কোষগুলিতে এই গঠনগুলি প্রকাশ করেছি৷ .

নেট্রিন-1 প্রকাশ করে কিন্তু নেট্রিন-1(∆407–443) (চিত্র 1C) নয় এমন গঠনগুলির জন্য বাঁধাই পরিলক্ষিত হয়েছিল৷ এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে EGF3 এর ডোমেন যার মধ্যে অ্যামিনোঅ্যাসিড 407–443 রয়েছে DCC-এর সাথে নেট্রিন-1-এর মিথস্ক্রিয়ার জন্য দায়ী৷ নেট্রিন-ডিসিসিতে EGF3 ডোমেনের ভূমিকা তদন্ত করতে, আমরা প্রথমে myc-taggedNetrin{{12} শুদ্ধ করেছি }} বা কাটা নেট্রিন-1 (∆407–443) (চিত্র 1B)।

এরপরে, HEK293T কোষগুলিকে DCC cDNA বহনকারী প্লাজমিড দিয়ে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল এবং নেট্রিন-1 প্রোটিন দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল, এবং তারপর ইমিউনোস্টেইনিংয়ের মাধ্যমে নেট্রিন-1 বাইন্ডিং মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

আমরা দেখতে পেয়েছি যে পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের নেট্রিন-1, কিন্তু ছেঁটে দেওয়া নেট্রিন নয়-1, প্লাজমা ঝিল্লিতে (চিত্র 1D) DCC এর সাথে আবদ্ধ হতে সক্ষম। EGF3 ডোমেন DCC-এর সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করতে পারে কিনা তা নির্ধারণ করার জন্য, আমরা DCC ওভার এক্সপ্রেসিং lysed কোষগুলিকে টানতে একটি GST-EGF3 কনস্ট্রাক্ট তৈরি করেছি। আমরা GST-EGF3 (চিত্র 1E) এর সাথে DCC-এর নির্দিষ্ট বাঁধাই পর্যবেক্ষণ করেছি।

উপরন্তু, আমরা FITC-লেবেলযুক্ত পেপটাইডEGF3 সংশ্লেষিত করেছি এবং নিশ্চিত করেছি যে, পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের নেট্রিন-1 এর মতো, এটি প্লাজমা ঝিল্লিতে (চিত্র 1F) DCC-তে আবদ্ধ হতে সক্ষম হয়েছিল। একসাথে নেওয়া, আমাদের ডেটা নির্দেশ করে যে EGF3 ডোমেন DCC-এর সাথে নেট্রিন-1-এর মিথস্ক্রিয়ার জন্য দায়ী৷

2.2। EGF3 ডোমেন নেট্রিনের ডাউনস্ট্রিম পাথওয়ের ফসফোরিলেশনকে প্ররোচিত করে-1

নেট্রিন-1 এবং ডিসিসির মিথস্ক্রিয়া FAK, SFK, এবং ERK [16,35] সহ একাধিক সিগন্যালিং পথ সক্রিয় করে। ফোকাল অ্যাডেসন কিনেস (এফএকে) হল নেট্রিন-1/ডিসিসি সিগন্যালিং এর সাথে যুক্ত প্রধান টাইরোসিনফসফোরিলেশন কার্যক্রমগুলির মধ্যে একটি।

নেট্রিন-1 এফএকেফসফোরিলেশন এবং এসআরসি ফ্যামিলি প্রোটিন টাইরোসিন কাইনেস (এসএফকে) ফসফোরিলেশন সক্রিয় করে [১৭]। FAK এবং SFK সিগন্যালিং পথ উভয়ই স্নায়ুতন্ত্রের উন্নয়নমূলক পর্যায়ে এবং আঘাত মেরামতের ক্ষেত্রে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে [36,37]। তাছাড়া, নেট্রিন-1 এক্সট্রা সেলুলার সিগন্যাল-নিয়ন্ত্রিত কিনেস-1/2 (ERK1/2) সক্রিয় করতে পারে, যা মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিনকিনেস (MAPK) পাথওয়ে [38-40] এর ক্রিয়াকে মধ্যস্থতা করে।

EGF3 ডোমেনটি DCC-এর সাথে নেট্রিন-1 বাঁধাইয়ের মাধ্যমে ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিং পাথওয়ের সক্রিয়করণের জন্য গুরুত্বপূর্ণ কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা প্রথমে FAK এর টাইরোসিন 861 ফসফোরিলেশনের উপর EGF3 ডোমেনের প্রভাব পরীক্ষা করেছি (চিত্র 2A) . আমরা দেখতে পেয়েছি যে EGF3 মুছে ফেলার ফলে সংস্কৃতিগত কর্টিকাল নিউরনে FAK ফসফোরিলেশন বাধাপ্রাপ্ত হয় (চিত্র 2B, C), এইভাবে নেট্রিন-1 সিগন্যালিং পাথওয়েতে EGF3 এর জন্য একটি অপরিহার্য ভূমিকা নিশ্চিত করে।

এরপরে, কালচারড কর্টিকাল নিউরনগুলিকে 20 মিনিটের জন্য GST-EGF3ফিউশন প্রোটিন দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল, এবং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং আরও নিশ্চিত করেছে যে GST-EGF3 ফিউশন প্রোটিন প্ররোচিত FAK, ERK এবং SFK ফসফোরিলেশন (চিত্র 2D-G) এর সাথে চিকিত্সা।

এই ফলাফলগুলি সুপারিশ করে যে নেট্রিনের EGF3 ডোমেন-1 ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিং পাথওয়েগুলিকে সক্রিয় করতে একটি শক্তিশালী উদ্দীপক হিসাবে কাজ করে।

চিত্র 1. নেট্রিন-1 এর EGF3 ডোমেন হল নেট্রিন-1/DCC ইন্টারঅ্যাকশনের জন্য গুরুত্বপূর্ণ অঞ্চল। (ক) নেট্রিন-1নির্মাণের চিত্র। নেট্রিন-1 গঠনগুলি হল নেট্রিন-1 পূর্ণ-দৈর্ঘ্য, নেট্রিন-1-(∆407–443) এবং GST-EGF3। (B) বিশুদ্ধ নেট্রিন-1-(∆407–443)-Myc/His কে BSA স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের সাথে তুলনা করার মাধ্যমে পরিমাপ করা হয়েছিল। (C) GST-DCC FN5 ডোমেন ফিউশন প্রোটিন এবং GST দ্বারা পুল-ডাউন ভগ্নাংশের ইমিউনোব্লটিং। (D) ফ্ল্যাগ-ডিসিসি-এর ইমিউনোফ্লুরোসেন্স চিত্র যা নিয়ন্ত্রণ মাধ্যম, নেট্রিন-1-মাইসি/হিস এবং নেট্রিন-1-(∆407–443) -মাইসি/তার 30 মিনিটের জন্য, যথাক্রমে, এবং পরিমাণগত 293T কোষকে প্রকাশ করে বিশ্লেষণ স্কেল বার, 10 µm। (E) GST-EGF3 ফিউশন প্রোটিন এবং GST বরাবর পুল-ডাউন ভগ্নাংশের ইমিউনোব্লটিং। (এফ) ফ্ল্যাগ-ডিসিসির ইমিউনোফ্লুরোসেন্স চিত্রগুলি যথাক্রমে 30 মিনিটের জন্য নিয়ন্ত্রণ মাধ্যম এবং FITC লেবেলযুক্ত Pep EGF3 সহ 293T কোষ প্রকাশ করে এবং পরিমাণগত বিশ্লেষণ। স্কেল বার, 10 µm।

চিত্র 2. EGF3 ডোমেন নেট্রিন-1 এর ডাউনস্ট্রিম পথগুলিকে সক্রিয় করে। (ক) পরীক্ষামূলক পদ্ধতি। (B) কর্টিকাল নিউরন (E17 এবং DIV3) নেট্রিন-1, নেট্রিন-1-(∆407–443) বা 20 মিনিটের জন্য নিয়ন্ত্রণ মাধ্যম দিয়ে উদ্দীপিত হয়েছিল। নেট্রিন-1 কার্যকলাপ নিশ্চিত করার জন্য সেল লাইসেটগুলিকে একটি অ্যান্টি-পি-এফএকে-861 অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। (C) ওয়েস্টার্ন ব্লট ফলাফলের পরিমাণগত বিশ্লেষণ (B) এ দেখানো হয়েছে। n=3। (D) কর্টিকাল নিউরন (DIV3) 1.5 µM GST (+), 1.5 µM GST-EGF3 ফিউশন প্রোটিন (+), বা 1.5 µMNetrin-1 (+) মাধ্যমে 20 মিনিটের জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল। সেল লাইসেটগুলি অ্যান্টি-পি-এফএকে-861, অ্যান্টি-পি-এসএফকে-418 এবং অ্যান্টি-পি-ইআরকে-202/204 দিয়ে ইনকিউটেড করা হয়েছিল। (ই-জি) পশ্চিমের পরিমাণগত বিশ্লেষণ ব্লট ফলাফল (D) এ দেখানো হয়েছে। n=3। ডেটা ± SEM হিসাবে উপস্থাপিত হয়৷ এই চিত্রে দেখানো সমস্ত পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য একমুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল (* p < 0.05, ** p < 0.01; ns, উল্লেখযোগ্য নয়)। পরিপূরক সারণি S1-এ তথ্য বিশ্লেষণের বিশদ বিবরণ দেখা যায়।

2.3পেপটাইড E1 এবং E2 নেট্রিনের ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিং পাথওয়ে সক্রিয় করতে DCC এর সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করে-1

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে, নেট্রিনের EGF3 ডোমেন থেকে প্রাপ্ত একটি ছোট পেপটাইড-1(অ্যামিনো অ্যাসিড 423–433) ইআরকে ফসফোরিলেশন [২৭] প্ররোচিত করে। আমরা পেপটাইড E1 (অবশিষ্ট 407–422) এবং E2 (অবশিষ্ট 423–433) সংশ্লেষিত করেছি যেগুলি নেট্রিন-1 (চিত্র 3A) এর EGF3 ডোমেন থেকে প্রাপ্ত।

আমরা দেখতে পেলাম যে পেপটাইড E1 এর ইনকিউবেশন ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে সংস্কৃতি কোষে ফসফরিলেটেড FAK এবং SFK (চিত্র 3B, D, E) এর মাত্রা বাড়িয়েছে কিন্তু ফসফরিলেটেড ERK (চিত্র 3B, F) এর মাত্রা পরিবর্তন করেনি।

পেপটাইডE1 এর বিপরীতে, পেপটাইড E2 শুধুমাত্র FAK (চিত্র 3C, G) এর টাইরোসিন ফসফোরিলেশন এবং SFK (চিত্র 3C, H) এর টাইরোসিন ফসফোরিলেশনকে প্ররোচিত করে না বরং ERK (চিত্র 3C) এর টাইরোসিন ফসফোরিলেশনকেও প্ররোচিত করে (চিত্র 3C, সংস্কৃতিতে)।

FAK, SFK, এবং ERK (চিত্র S1) এর টাইরোসিন ফসফোরিলেশনের উপর নিয়ন্ত্রণ পেপটাইড (Pep Ctrl) কোন সনাক্তযোগ্য প্রভাব ফেলেনি। উপরন্তু, আমরা লক্ষ্য করেছি যে পেপটাইড E1 দ্বারা প্ররোচিত FAK সিগন্যালিংপথের উপাদানগুলির ফসফোরিলেশন সময়-নির্ভর ছিল (চিত্র। S2)। এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে E1 এবং E2 হল নেট্রিনের ন্যূনতম কার্যকরী পেপটাইড-1।

চিত্র 3. EGF3 ডোমেনের ন্যূনতম ক্রমগুলি নেট্রিনের নিচের দিকের পথগুলিকে সক্রিয় করে-1৷ (ক) পেপটাইডের চিত্র। (বি) কর্টিকাল নিউরন (DIV3) পেপটাইড E1 এর গ্রেডিয়েন্ট ঘনত্বের সাথে উদ্দীপিত হয়েছিল। সেল লাইসেটগুলিকে অ্যান্টি-পি-এফএকে-861, অ্যান্টি-পি-এসএফকে-418 এবং অ্যান্টি-পি-ইআরকে-202/204 দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল৷ (সি) সভ্য কর্টিকাল নিউরনগুলিকে পেপটাইড E2 এর গ্রেডিয়েন্ট ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল।

FAK, SFK, এবং ERK-এর ফসফোরিলেশন পরিমাপ করার জন্য নির্দেশিত অ্যান্টিবডিগুলির সাথে লাইসেটগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং ইনকিউব করা হয়েছিল। (D–F) নিউরনে পেপটাইড E1 দ্বারা প্ররোচিত FAK, SFK এবং ERK ফসফোরিলেশনের পরিমাণের পরিমাপ (B) এ দেখানো হয়েছে। n=3। (G-I) পেপটাইড E2 দ্বারা প্ররোচিত FAK, SFK এবং ERK ফসফোরিলেশনের পরিমাণের পরিমাণ (C) এ দেখানো হয়েছে। n=3। (J) ডিসিসি ওয়াইল্ড-টাইপ এবং হোমোজাইগোট মিউট্যান্টেম্ব্রিও থেকে প্রাপ্ত কর্টিকাল নিউরনগুলিকে নেট্রিন-1 বা নেট্রিন-1-উত্পন্ন পেপটাইড দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল এবং লাইজ করা হয়েছিল।

ফলস্বরূপ লাইসেটগুলি ইমিউনোব্লটিংয়ের শিকার হয়েছিল। (K) DCC মিউট্যান্ট নিউরনে FAK PY{{0}} এবং DCC স্তরের পরিমাণ (J) দেখানো হয়েছে৷ n=3। ডেটা ± SEM হিসাবে উপস্থাপিত হয়। এই চিত্রে দেখানো সমস্ত পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য একমুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল (* p <0.05;ns, উল্লেখযোগ্য নয়)। পরিপূরক সারণি S1-এ তথ্য বিশ্লেষণের বিশদ বিবরণ দেখা যায়।

FAK সিগন্যালিং পাথওয়ের সক্রিয়করণ DCC-নির্ভর কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা DCC+/+ এবং DCC−/- নিউরনে এই পেপটাইডগুলি দ্বারা প্ররোচিত FAK-এর টাইরোসিন ফসফোরিলেশনের পরিমাণ পরিমাপ করেছি। আমরা দেখতে পেয়েছি যে উভয় পেপটাইড E1 এবং E2 ডিসিসি-/- নিউরনে FAK এর ফসফোরিলেশন প্ররোচিত করতে ব্যর্থ হয়েছে (চিত্র 3J, K)।

আমরা আরও দেখতে পেয়েছি যে সংশ্লেষিত এন-টার্মিনাল ফ্ল্যাগ-ট্যাগযুক্ত পেপটাইড E1 এবং E2 (ফ্ল্যাগ-E1 এবং পতাকা-E2) সরাসরি DCCFN5 ডোমেনের (চিত্র S3) সাথে আবদ্ধ।

2.4। পেপটাইড E1 ভিট্রোতে হেমিন-প্ররোচিত কোষের মৃত্যু থেকে নিউরনকে রক্ষা করে

পেপটাইড E1 এর নিউরোনাল আঘাতের বিরুদ্ধে সুরক্ষা প্রদর্শনের জন্য, আমরা ইন্ট্রাসেরেব্রালহেমোরেজ [41,42] এর পরে সেকেন্ডারি মস্তিষ্কের আঘাতের অনুকরণ করার জন্য হেমিন ইনডিসিবল বিষাক্ত প্রতিক্রিয়া নিযুক্ত করেছি।

কালচারড GnRH-এক্সপ্রেসিং নিউরোনাল সেল (NLT) [43-45] হেমিনের সাথে বিভিন্ন ঘনত্ব এবং সময়কালের মধ্যে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। মধ্যম প্রাণঘাতী ডোজ (60 µM) এ হেমিনের সাথে এনএলটি কোষের ইনকিউবেশনের ফলে কোষের বেঁচে থাকার হার একটি সময়-নির্ভর হ্রাস পায়, যা নির্দেশ করে যে হেমিনকে নিউরন দ্বারা গ্রহণ করা হয়েছিল এবং বিপাক করা হয়েছিল (চিত্র S4)।

নেট্রিন-1 এবং ডিসিসির অভিব্যক্তি হেমিন-প্ররোচিত নিউরোনাল কোষের মৃত্যুতে সাড়া দিয়েছিল কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য, সংষ্কৃত NLT কোষগুলি হেমিনের জন্য বিভিন্ন সময়কালের সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল। ওয়েস্টার্ন ব্লট ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে নেট্রিন-1 এবং ডিসিসি-এর এক্সপ্রেশন লেভেলগুলি হেমিন ইনকিউবেশনের 6 ঘন্টা পরে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং ধীরে ধীরে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4A, B)।

পেপটাইড E1 এবং E2 হেমিন-প্ররোচিত নিউরোনাল মৃত্যুকে কমাতে সক্ষম কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা নেট্রিন-1, PepCtrl, পেপটাইড E1 এবং পেপটাইড E2 এর সাথে একটি CCK-8 অ্যাস করেছি।

আমরা দেখতে পেয়েছি যে এই পেপটাইডগুলির কোষের কার্যক্ষমতার উপর কোনও সনাক্তযোগ্য প্রভাব নেই (চিত্র 4C এবং চিত্র S5)। Pep Ctrl এবং peptideE2 এর সাথে ইনকিউবেশনের তুলনায়, পেপটাইড E1 এবং নেট্রিন-1 হেমিন দ্বারা প্ররোচিত নিউরোনাল ডেথ কমিয়েছে (চিত্র 4D)। জীবিত এবং মৃত কোষের পার্থক্য করার জন্য আমরা ক্যালসিন-এএম এবং পিআই দিয়েও দাগ দিয়েছি।

ফলাফলগুলি দেখায় যে নেট্রিন-1 এবং পেপটাইড E1 উভয়ই ভিট্রোতে হেমিন-প্ররোচিত মৃত্যুর বিরুদ্ধে সুরক্ষিত (চিত্র 4E-G)। তদ্ব্যতীত, 1.5 µM পেপটাইড E1 প্রাথমিক সংস্কৃতিযুক্ত নিউরনে হেমিন-প্ররোচিত মৃত্যুকে হ্রাস করেছে (চিত্র 4H, I)। সামগ্রিকভাবে, এই ফলাফলগুলি দেখায় যে পেপটাইড E1 হেমিন-প্ররোচিত কোষের মৃত্যু থেকে নিউরনকে রক্ষা করে।

2.5। নেট্রিন-1-উত্পন্ন পেপটাইড E1 ICH এর পরে কার্যকরী পুনরুদ্ধারের প্রচার করে

নেট্রিন-1 থেকে প্রাপ্ত পেপটাইড E1 রক্তক্ষরণ স্ট্রোকের পরে কার্যকরী পুনরুদ্ধারের ক্ষেত্রে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে কিনা তা তদন্ত করতে, আমরা স্ট্রাইটামে (চিত্র S6A) কালি মিশ্রিত কোলাজেনেস ইনজেকশনের মাধ্যমে একটি পরীক্ষামূলক ICH মডেল ইনমাইস স্থাপন করেছি।

তিনদিন পর, কালি দিয়ে ইনজেকশনের অবস্থান এবং কোলাজেনসেভলিউম (চিত্র S6B, C) ট্র্যাক করতে মস্তিষ্কের স্লাইসের চিত্রগুলি দেখানো হয়েছিল। স্ট্রাইটাল হেমোরেজ সহ ইঁদুর মস্তিষ্কের আঘাতের কারণে ipsilateral দিকে দুর্বলতা প্রদর্শন করেছে (চিত্র S7A–C)।

স্যালাইন ইনজেকশন (চিত্র S7D) এর সাথে তুলনা করে স্ট্রিয়াটাম অনুসরণকারী আইসিএইচ-এ হেমাটোমা দৃশ্যমান ছিল। পেরিহেম্যাটোমাল কর্টেক্সে নেট্রিন-1 এবং ডিসিসি-এর আপেক্ষিক প্রোটিনের মাত্রা ২য় দিনে নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের তুলনায় আইসিএইচ ইঁদুরের মধ্যে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং নেট্রিন-1 এখনও ৩য় দিনে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, যা নির্দেশ করে যে নেট্রিন-1 মস্তিষ্কের আঘাত পুনরুদ্ধারের জন্য গুরুত্বপূর্ণ (চিত্র S7E, F)।

এর পরে, FITC-লেবেলযুক্ত TAT-পেপটাইড E1 (FITC-Pep TE1), যা পেপটাইড E1-এর N-টার্মিনাসের একটি TAT ক্রম যুক্ত করেছে, ICH ইঁদুরের মধ্যে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং FITC-Pep TE1 কে রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করতে দেখানো হয়েছিল ( চিত্র S8)।

আইসিএইচ এবং কন্ট্রোল মাউসকে প্রতিদিন পেপটাইড (12 মিলিগ্রাম/কেজি) বা সমান পরিমাণ স্যালাইন (চিত্র 5A) দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোন ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। আমরা দেখতে পেয়েছি যে পেপটাইড TE1 এর সাথে প্রশাসন বেঁচে থাকার হারকে উন্নত করেছে এবং ICH (চিত্র 5B, C) এর পরে শরীরের ওজনে ত্রুটিগুলি উদ্ধার করেছে।

আমরা প্রতিটি গ্রুপে কালির সমান অনুপাতের সাথে চিহ্নিত কোলাজেনসেভলিউমও একই রকম দেখতে পেয়েছি, কোলাজেনেসের এই স্ট্যান্ডার্ডআইসিএইচ মডেলটি নিশ্চিত করে যার ফলে প্রজননযোগ্য ইন্ট্রাস্ট্রিয়াটাল হেমাটোমাস (চিত্র 5D) হয়েছে। পেপটাইড TE1 টেপ রিমুভাল্টেস্টে ICH ইঁদুরের আচরণগত স্কোর উন্নত করেছে (Figure5D)। ) এবং সিলিন্ডার পরীক্ষা (চিত্র 5F)।

প্রত্যাশিত হিসাবে, পেপটাইড TE1 ICH (চিত্র 5G, H) এর পরে ইনফার্কট ভলিউম হ্রাস করেছে। একসাথে নেওয়া, এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে পেপটাইড E1 হেমাটোমা ভলিউম কমাতে এবং ICH এর একটি মাউস মডেলে কার্যকরী পুনরুদ্ধারের উন্নতি করতে সক্ষম।

চিত্র 4. পেপটাইড E1 ভিট্রোতে হেমিন-প্ররোচিত কোষের মৃত্যুকে কমিয়ে দেয়। (A) হেমিন (60 µM) এর সংস্পর্শে থাকা সংস্কৃতিযুক্ত NLT কোষে নেট্রিন-1 এবং ডিসিসির ওয়েস্টার্ন ব্লট। (B) পশ্চিমা ব্লট্রেস্টের পরিমাণগত বিশ্লেষণ (A) এ দেখানো হয়েছে। n=3। (C) CCK-8 অ্যাসেস দেখায় যে সিরিজের পেপটাইডগুলি কোষীয়তা পরিবর্তন করে না। n=4। (D) 1.5 µM Pep E1 সংরক্ষিত এনএলটি কোষের কার্যকারিতা যখন এক্সপোজারটো হেমিন (60 µM) পরে ভালভাবে যোগ করা হয়। n=4। (ই) হেমিনের সংস্পর্শে আসা NLT কোষের জীবন্ত (সবুজ)/মৃত (লাল) অ্যাস (60 µM,6 h)। স্কেল বার, 50 µm। (F, G) (E) তে জীবিত/মৃত অ্যাসের পরিমাণগত বিশ্লেষণ। n=9। (H) CCK-8অ্যাসেস দেখিয়েছে যে Pep E1 প্রাথমিক কালচার নিউরনে হেমিন-প্ররোচিত কোষের মৃত্যু কমাতে পারে। n=8।(I) প্রাইমারি কালচার নিউরনের লাইভ/ডেড অ্যাস ইমেজিং (50 µM, 6 h)। স্কেল বার, 50 µm। ডেটা ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। এই চিত্রে দেখানো সমস্ত পরিসংখ্যান বিশ্লেষণের জন্য একমুখী ANOVA বা দ্বি-মুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল (* p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001; ns, উল্লেখযোগ্য নয়)। উপাত্ত বিশ্লেষণের বিশদ পরিপূরক সারণী S1 এ দেখা যায়।

চিত্র 5. নেট্রিন-1-প্রাপ্ত পেপটাইড E1 ICH এর পরে পুনরুদ্ধার প্রক্রিয়াকে প্রচার করে। (A) ইঁদুরের ICH মডেলিং-এ পেপটাইড TE1 এর পরীক্ষামূলক প্যারাডিগমোফ ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল (আইপি) ইনজেকশনের পরিকল্পিত। (বি) প্রতিটি গ্রুপের আইসিএইচ-এর পরে বেঁচে থাকার অনুপাত রেকর্ড করা হয়েছিল এবং কাপলান-মেয়ার পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। n=10। (C) ICH এর 5 দিন পর শরীরের ওজন পরিবর্তন হয়। n=6.(D) C57 ইঁদুরের স্ট্রাইটামে ইনজেকশনের সমান অনুপাতের কালি (মোট 0.6 μL) সহ কোলাজ/স্যালাইন মিশ্রণ, প্রতিনিধি চিত্রগুলি দেখানো ইঁদুরের ক্ষেত্রে একই রকম ছিল/ পেপটাইড ছাড়া TE1 5 দিন ICH পরে। (E, F) পেপটাইড TE1 (12 mg/kg) এর IP ইনজেকশন কিন্তু TAT (12 mg/kg) নিয়ন্ত্রণ নয়, টেপ অপসারণের কাজ (E) বা একটি কর্নার টাস্ক (F) দ্বারা নিরীক্ষণের মতো উন্নত আচরণ।

স্যালাইন, n=10 পৃথক প্রাণী; ICH, n=6 পৃথক প্রাণী; ICH + TAT, n=6 পৃথক প্রাণী; ICH + TE1, n=8 পৃথক প্রাণী। (G) ইঁদুরের প্রতিনিধি হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন-দাগযুক্ত বিভাগগুলিকে পেপটাইড TE1 5 দিন পরে/বিহীন চিকিত্সা করা হয়। স্কেল বার, 1 মিমি। (H) মস্তিষ্কের অংশে রক্তক্ষরণের পরিমাণ (G) দেখানো হয়েছে।

স্যালাইন, n {{0}} individualanimals; ICH, n=6 পৃথক প্রাণী; ICH + TAT, n=6 পৃথক প্রাণী; ICH + TE1, n=8 পৃথক প্রাণী। ডেটা ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। এই চিত্রে দেখানো সমস্ত পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য একমুখী ANOVA বা দ্বিমুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল (* p < 0৷{13}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.001; ns, উল্লেখযোগ্য নয়)। পরিপূরক সারণি S1-এ তথ্য বিশ্লেষণের বিশদ বিবরণ দেখা যায়।

2.6। নেট্রিন-1-উত্পন্ন পেপটাইড E1 ICH এর পরে নিউরোনাল অ্যাপোপটোসিস হ্রাস করে

ICH এর কার্যকরী পুনরুদ্ধারের প্রক্রিয়াতে পেপটাইড E1 এর অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলি অন্বেষণ করা। আমরা ফ্লুরো-জেড সি (এফজেসি) স্টেনিং দ্বারা পেরিহেম্যাটোমাল অঞ্চলে নিউরোনাল অবক্ষয় সনাক্ত করেছি।

আমরা দেখতে পেলাম যে পেপটাইড টিই 1 এর প্রশাসন পেরিহেমাটোমা অঞ্চলে এফজেসি-পজিটিভ কোষের সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, যা ইঙ্গিত করে যে পেপ টিই 1 আইসিএইচ (চিত্র 6এ, বি) এর পরে নিউরোনাল অবক্ষয়কে বাধা দেয়। আমরা TUNEL স্টেনিং করেছি এবং দেখতে পেয়েছি যে পেপটাইড TE1 TUNEL-পজিটিভ নিউরনের সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (চিত্র 6C, D)।

TUNEL-পজিটিভ অ্যাস্ট্রোসাইটের সংখ্যা পেপটাইড TE1 চিকিত্সার পরে সনাক্তযোগ্য পরিবর্তন ছিল না (চিত্র 6E, F)। উপরন্তু, রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা (BBB) ​​এর ব্যাপ্তিযোগ্যতা নির্দেশ করার জন্য FITC-লেবেলযুক্ত 4 kDa dextran ব্যবহার করে, আমরা দেখতে পেলাম যে পেপটাইড TE1 BBB ব্যাপ্তিযোগ্যতার পুনরুদ্ধারকে প্রভাবিত করেনি (চিত্র S9A, B)।

সিরাম কাঁচা ফ্লুরোসেন্সিউনিটস (RFUs) স্তরগুলি একই রকম ছিল, যা সমস্ত প্রাণীর বিশ্লেষণে (চিত্র S9C) ইনজেকশনযুক্ত ট্রেসারের উপস্থিতি নিশ্চিত করে। আমরা মাইক্রোভেসেলগুলিকে লেবেল করার জন্য ফ্লুরোসেসিন-লেবেলযুক্ত লেকটিন ব্যবহার করেছি কিন্তু TE1 চিকিত্সার পরে কোনও উন্নতি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যর্থ হয়েছি (চিত্র S9D, E)। সর্বোপরি, এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে পেপটাইড E1 নিউরোনাল অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দিয়ে আইসিএইচ-এর পরে নিউরোনাল পুনরুদ্ধারের প্রচার করে।

চিত্র 6. নেট্রিন-1-প্রাপ্ত পেপটাইড E1 নিউরোনাল মৃত্যু এবং অবক্ষয় থেকে রক্ষা করতে পারে, কিন্তু ICH-এর পরে অ্যাস্ট্রোসাইট নয়। (A) ICH এর 5 দিন পরে TE1 দিয়ে/ছাড়া ইঁদুরের প্রতিনিধি ফ্লুরো-জেড সি-দাগযুক্ত বিভাগগুলি। স্কেল বার, যথাক্রমে 50 µm এবং 10 µm। (খ) পেরিহেম্যাটোমাল অঞ্চলে ফ্লুরো-জেড সি পজিটিভ কোষের পরিমাণ (n=4)। (C) TUNELstaining ICH শুরু হওয়ার 5 দিন পরে সেকেন্ডারি ব্রেন ইনজুরিতে (SBI) TE1 এর প্রভাব দেখাচ্ছে। স্যালাইন, ICH, ICH + TAT, এবং ICH + TE1 গ্রুপের প্রতিনিধি ছবি।

স্যালাইন গ্রুপ ব্যতীত প্রতিটি গ্রুপ আইসিএইচের শিকার হয়েছিল। স্কেল বার, যথাক্রমে 50 µm, এবং 10 µm। (D) TUNEL-পজিটিভ নিউরনের শতাংশের জন্য পরিমাণগত বিশ্লেষণগুলি (C) এ দেখানো হয়েছে। n=4। (ই) ICH এর 5 দিন পর GFAP-এর সাথে TUNEL-এর সমষ্টিকরণ। স্যালাইন, ICH, ICH + TAT, এবং ICH + TE1 গ্রুপের প্রতিনিধিত্বমূলক ছবি। স্কেল বার, যথাক্রমে 50 µm এবং 10 µm। (F) TUNEL-পজিটিভ অ্যাস্ট্রোসাইটের শতাংশের জন্য পরিমাণগত বিশ্লেষণগুলি (E) এ দেখানো হয়েছে। n=4। তথ্য ± SEM হিসাবে উপস্থাপন করা হয়.

এই চিত্রে দেখানো সমস্ত পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য একমুখী আনোভা ব্যবহার করা হয়েছিল (* p < 0৷{3}}5, ** p < 0৷{7}}1, *** p < 0.001, **** p < 0.0001 ns, উল্লেখযোগ্য নয়)। পরিপূরক সারণি S1-এ তথ্য বিশ্লেষণের বিশদ বিবরণ দেখা যায়।

3. আলোচনা

আমাদের গবেষণায় নেট্রিন-1 এর একটি মূল পেপটাইড ক্রম চিহ্নিত করা হয়েছে যা ICH এর পরে কার্যকরী পুনরুদ্ধারের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। DCC-এর সাথে মিথস্ক্রিয়া করে, এই নেট্রিন-1-আইসিএইচ-এর পরে সেকেন্ডারি ক্ষতির কারণে নিউরোনাল মৃত্যুর বিরুদ্ধে সুরক্ষা দেয় এবং এইভাবে আইসিএইচ-এর জন্য একটি আশাব্যঞ্জক চিকিত্সা।

নেট্রিন-1, একটি উচ্চ-আণবিক-ওজন প্রোটিনের থেরাপিউটিক প্রয়োগের জন্য নেট্রিন-1-এর ন্যূনতম কার্যকরী ক্রম সনাক্তকরণের প্রয়োজন হয় যা ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিংকে প্রচার করে। আমাদের গবেষণায়, পেপটাইড E1 (অবশিষ্ট 407–422) এবং E2 (অবশিষ্ট 423–433), যা যথাক্রমে নেট্রিন-1 এর EGF3 ডোমেন থেকে প্রাপ্ত। আমরা পেয়েছি যে পেপটাইড E1 (অবশিষ্ট 407-422) ICH এর পরে নিউরোনাল মৃত্যুর বিরুদ্ধে সুরক্ষিত।

আমরা দেখেছি যে NLT কোষে নেট্রিন-1 এবং DCC এক্সপ্রেশন মাত্রা বৃদ্ধি পেয়েছে হেমিন চিকিত্সার পরে। হেমিন আইসিএইচ-এর পরে হিমোগ্লোবিন থেকে মুক্তি পায় এবং গ্লিয়া এবং নিউরোনাল কোষ উভয়েই সেকেন্ডারি ইনজুরি প্ররোচিত করে [46-48]।

উপরন্তু, আমরা পরীক্ষামূলক ICH অনুসরণ করে নেট্রিন-1 এবং DCC-এর প্রোটিনের মাত্রা বৃদ্ধিও লক্ষ্য করেছি। উপরন্তু, আমরা পরীক্ষামূলক ICH অনুসরণ করে নেট্রিন-1 এবং DCC-এর প্রোটিনের মাত্রা বৃদ্ধিও লক্ষ্য করেছি।

এই ফলাফলগুলি পূর্ববর্তী ফলাফলগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে দেখায় যে নেট্রিন-1 ICH [49] এর পরে পুনরুদ্ধারের ক্ষেত্রে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।

For more information:1950477648nn@gmail.com