লেট-অনসেট হাইপোগোনাডিজমের ইঁদুরের মডেলে চিরাচরিত চাইনিজ মেডিসিন মনোমারের থেরাপিউটিক প্রভাব এবং প্রক্রিয়ার উপর অধ্যয়ন

বিমূর্ত

উদ্দেশ্য
তিনটি ঐতিহ্যবাহী চাইনিজ মেডিসিন (TCM) মনোমারের থেরাপিউটিক প্রভাব এবং প্রক্রিয়া মূল্যায়ন করতে-icariin, verbascoside, এবংজিনসেনোসাইড আরজি 1-অনদেরীতে শুরু হওয়া হাইপোগোনাডিজম (LOH)একটি ইঁদুর মডেল, এবং হিসাবে তাদের সম্ভাব্য অন্বেষণবয়স-সম্পর্কিত টেস্টোস্টেরন হ্রাসের জন্য প্রাকৃতিক হস্তক্ষেপমধ্যবয়সী পুরুষদের মধ্যে।

পদ্ধতি
একটি দেরী-সূচনা হাইপোগোনাডিজম (LOH) মডেল বয়স্ক পুরুষদের মধ্যে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিলSprague-Dawley ইঁদুরএর ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমেসাইক্লোফসফামাইড, অনুকরণ এন্ড্রোজেনের অভাব। তিনটি টিসিএম মনোমার-icariin, verbascoside, এবংজিনসেনোসাইড আরজি 1- 60 দিনের জন্য মৌখিকভাবে পরিচালিত হয়েছিল।

চিকিত্সার শেষে, শরীরের ওজন এবং প্রজনন অঙ্গগুলির ওজন (টেস্টস, এপিডিডাইমিস, সেমিনাল ভেসিকল ইত্যাদি) পরিমাপ করা হয়েছিল।হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরিবর্তনটেস্টিকুলার টিস্যুতে ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিলহেমাটোক্সিলিন-ইওসিন (H&E) স্টেনিং. এর সিরাম মাত্রাFSH, এলএইচ, এবংটেস্টোস্টেরনমাধ্যমে পরীক্ষা করা হয়এলিসা. এর অভিব্যক্তিঅ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টর (এআর)প্রোটিন এবং এমআরএনএ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিলপশ্চিমী দাগএবংপরিমাণগত রিয়েল-টাইম PCR (qRT-PCR).

Cistanche tubulosa 1

ফলাফল

জিনসেনোসাইড আরজি 1সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য উন্নতি দেখিয়েছেশরীরের ওজনএবংপ্রজনন অঙ্গের ওজন(পি <0.01)।

ইকারিনউল্লেখযোগ্যভাবে ওজন বৃদ্ধিটেস্টিস, এপিডিডাইমিস, এবংসেমিনাল ভেসিকল(পি <0.01)।

Verbascosideমাঝারিভাবে উন্নত সেমিনাল ভেসিকল ওজন (P <0.05)।

তিনটি টিসিএম মনোমার কার্যকরভাবেবিপরীত টেস্টিকুলার অবক্ষয়LOH ইঁদুরের মধ্যে, সেমিনিফেরাস টিউবুলের গঠন পুনরুদ্ধার করে এবং এর সংখ্যা বৃদ্ধি করেস্পার্মাটোজেনিক কোষএবংপরিপক্ক শুক্রাণু.

সমস্ত মনোমার গ্রুপ ক্ষমতা প্রদর্শন করেছেনিম্ন সিরাম FSH এবং LH মাত্রাযখনসিরাম টেস্টোস্টেরন বৃদ্ধি. দআইকারিন গ্রুপসবচেয়ে উল্লেখযোগ্য অন্তঃস্রাব উন্নতি দেখিয়েছে (P <0.01)।

এর অভিব্যক্তি মাত্রাঅ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টর (এআর)প্রোটিন এবং এমআরএনএ উভয় ক্ষেত্রেই সমস্ত চিকিত্সা করা গোষ্ঠীতে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নীত করা হয়েছিল। এর প্রভাবicariinছিলটেস্টোস্টেরন প্রোপিওনেটের চেয়ে বেশি স্পষ্ট, ইঙ্গিত aএআর সিগন্যালিং এর উপর শক্তিশালী নিয়ন্ত্রক প্রভাব.

Cistanche tubulosa 2

উপসংহার

এই গবেষণা যে পরামর্শ দেয়জিনসেনোসাইড আরজি 1উন্নতিতে সবচেয়ে কার্যকরশরীর এবং অঙ্গের ওজনLOH ইঁদুর, যখনicariinমধ্যে শক্তিশালী প্রভাব দেখায়টেস্টোস্টেরন উত্পাদন বৃদ্ধিএবংএআর এক্সপ্রেশন উন্নত করা. তিনজনই মনোমার-icariin, verbascoside, এবংজিনসেনোসাইড আরজি 1-প্রদর্শিতটেস্টিকুলার অবক্ষয়ের বিরুদ্ধে প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবএবংপুরুষ প্রজনন এন্ডোক্রাইন ফাংশন সমর্থন করে, পরিচালনার জন্য প্রতিশ্রুতিবদ্ধ প্রাকৃতিক বিকল্প প্রস্তাববয়স সম্পর্কিত হাইপোগোনাডিজম.

কীওয়ার্ড

দেরীতে শুরু হওয়া হাইপোগোনাডিজম (LOH); ইকারিন; Verbascoside; জিনসেনোসাইড আরজি 1; ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধ; প্রাকৃতিক টেস্টোস্টেরন বুস্টার; বার্ধক্য পুরুষ সিন্ড্রোম; এন্ড্রোজেন রিসেপ্টর এক্সপ্রেশন; পুরুষ স্বাস্থ্যের জন্য ভেষজ থেরাপি

যৌন স্বাস্থ্যের জন্য TCM ভেষজ সম্পর্কে আরও জানতে ছবিতে ক্লিক করুন

পটভূমি

দেরীতে শুরু হওয়া হাইপোগোনাডিজম (LOH)মধ্যবয়সী এবং বয়স্ক পুরুষদের মধ্যে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িতএন্ড্রোজেনের মাত্রায় বয়স-সম্পর্কিত পতন, বিশেষ করে টেস্টোস্টেরন। একটি 2021 জনসংখ্যা-ভিত্তিক মহামারী সংক্রান্ত গবেষণা চীনের ছয়টি প্রতিনিধি প্রদেশ জুড়ে পরিচালিত হয়েছে, এতে জড়িত40-79 বছর বয়সী 6,296 জন পুরুষ, LOH এর নিম্নোক্ত বিস্তারের হার প্রকাশ করেছে:

3.2%তাদের 50s মধ্যে পুরুষদের মধ্যে

11.2%তাদের 60 এর দশকে

24.0%তাদের 70 এর দশকে [1]

LOH দ্বারা চিহ্নিত করা হয়সিরাম টেস্টোস্টেরন হ্রাসএর একটি নক্ষত্রমন্ডল সহঅ্যান্ড্রোজেনের অভাবের লক্ষণযেমন:

কম লিবিডো

ইরেক্টাইল ডিসফাংশন

বিষণ্ণতা এবং বিরক্তি

জ্ঞানীয় হ্রাস এবং স্মৃতিশক্তি হ্রাস

এই লক্ষণগুলি হতে পারেউল্লেখযোগ্যভাবে শারীরিক এবং মানসিক সুস্থতা নষ্ট করে, সেইসাথেজীবনের মান [2–3].

বর্তমানে,টেস্টোস্টেরন প্রতিস্থাপন থেরাপি (টিআরটি)এটি LOH এর মূলধারার চিকিত্সা এবং অস্থায়ীভাবে উপসর্গগুলি উপশম করতে পারে। যাইহোক, সম্পর্কে উদ্বেগকার্ডিওভাসকুলার ঝুঁকি, প্রোস্টেট স্বাস্থ্য, এবংদীর্ঘমেয়াদী নিরাপত্তাথাকে [4]। তাই অনুসন্ধানে আগ্রহ বাড়ছেপ্রাকৃতিক, নিরাপদ বিকল্প, বিশেষ করে থেকেট্র্যাডিশনাল চাইনিজ মেডিসিন (TCM).

এই গবেষণা মূল্যায়ন লক্ষ্যথেরাপিউটিক প্রভাব এবং প্রক্রিয়াতিনটি টিসিএম মনোমারের-icariin, verbascoside, এবংজিনসেনোসাইড আরজি 1-ব্যবহার করে aLOH এর ইঁদুর মডেল.

1. উপকরণ এবং পদ্ধতি

1.1 পরীক্ষামূলক প্রাণী

ষাট15 মাস বয়সী পুরুষ Sprague-Dawley (SD) ইঁদুর(700-800g) 2022 সালের জানুয়ারিতে চায়না থ্রি গর্জেস ইউনিভার্সিটির অ্যানিমেল এক্সপেরিমেন্টাল সেন্টার থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। লাইসেন্স নম্বর:

পশু সার্টিফিকেট: না. 42010200007997

উৎপাদন লাইসেন্স: SCXK (E) 2022-0012

ইঁদুরগুলিকে একটি নিয়ন্ত্রিত পরিবেশে (তাপমাত্রা: 19-23 ডিগ্রি, আপেক্ষিক আর্দ্রতা: 55%-65%) রাখা হয়েছিল, একটি প্রাকৃতিক আলো-অন্ধকার চক্র এবং খাদ্য ও জলের অবাধ অ্যাক্সেস সহ। পরে1 সপ্তাহ খাপ খাইয়ে নেওয়া, পরীক্ষা শুরু হয়.

Cistanche tubulosa 3

1.2 বিকারক এবং যন্ত্র

সাইক্লোফসফামাইড(নানজিং জিয়ানচেং)

ইকারিন(নানজিং গুয়াংরুন বায়োটেক)

জিনসেনোসাইড আরজি 1(সাংহাই ম্যাকলিন)

Verbascoside(সাংহাই ঝেনঝুন বায়োটেক)

এআর অ্যান্টিবডি(সান্তা ক্রুজ, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)

- অ্যাক্টিন অ্যান্টিবডি(সিগমা, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)

H&E স্টেনিং কিটস(সাংহাই ইজি ইন্ডাস্ট্রিয়াল)

সিরাম FSH, LH, টেস্টোস্টেরনের জন্য ELISA কিট(সাংহাই মেলিয়ান)

qRT-PCR রিএজেন্ট (SYBR সবুজ I)(সাংহাই জুলু বায়োটেক)

যন্ত্র: থার্মো মাইক্রোপ্লেট রিডার, অলিম্পাস অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ, LI-COR ওডিসি ইমেজিং সিস্টেম, ABI qRT-PCR মেশিন

1.3 পশু গ্রুপিং এবং LOH মডেল আনয়ন

ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে বরাদ্দ করা হয়েছিল৬টি গ্রুপ (প্রতি গ্রুপে n=10):

কন্ট্রোল গ্রুপ:

ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল (আইপি) 0.9% স্যালাইনের ইনজেকশন 5 দিনের জন্য

ওরাল স্যালাইন (1 mL/100g) 60 দিনের জন্য

মডেল গ্রুপ:

আইপি সাইক্লোফসফামাইড 20 মিগ্রা/কেজি/দিন 5 দিনের জন্য

60 দিনের জন্য মৌখিক স্যালাইন দ্বারা অনুসরণ

টেস্টোস্টেরন প্রোপিওনেট (ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ):

আইপি সাইক্লোফসফামাইড (উপরের মতই)

টেস্টোস্টেরন প্রোপিওনেট 5 মিলিগ্রাম/কেজি/দিনের সাবকুটেনিয়াস ইনজেকশন 7 দিনের জন্য

ইকারিন গ্রুপ:

আইপি সাইক্লোফসফামাইড (একই)

ওরাল আইকারিন 200 মিলিগ্রাম/কেজি/দিন 60 দিনের জন্য

Verbascoside গ্রুপ:

আইপি সাইক্লোফসফামাইড (একই)

ওরাল ভার্বাস্কোসাইড 200 মিলিগ্রাম/কেজি/দিন 60 দিনের জন্য

জিনসেনোসাইড আরজি 1 গ্রুপ:

আইপি সাইক্লোফসফামাইড (একই)

ওরাল জিনসেনোসাইড Rg1 200 মিগ্রা/কেজি/দিন 60 দিনের জন্য

সমস্ত চিকিত্সা মধ্যে পরিচালিত হয়8:00-11:30 AM. মূল্যায়ন সঞ্চালিত হয়চূড়ান্ত ডোজ পরে 24 ঘন্টা.

1.4 শরীরের ওজন এবং প্রজনন অঙ্গ সূচক

ওজন করার পরে, ইঁদুরগুলি সার্ভিকাল স্থানচ্যুতি দ্বারা euthanized হয়েছিল। দটেস্টিস, এপিডিডাইমিস এবং সেমিনাল ভেসিকলবিচ্ছিন্ন এবং ওজন করা হয়েছিল।

একপ্রতিটি ইঁদুর থেকে টেস্টিসমধ্যে স্থির করা হয়েছিল4% প্যারাফর্মালডিহাইড72 ঘন্টার জন্য, গ্রেডেড অ্যালকোহল দিয়ে ডিহাইড্রেটেড, প্যারাফিন-এম্বেডেড, বিভাগযুক্ত (5 μm), এবং দাগযুক্তহেমাটোক্সিলিন-ইওসিন (H&E). রূপগত পরিবর্তনগুলি হালকা মাইক্রোস্কোপির অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

1.5 সিরাম হরমোন অ্যাসেস

ইঁদুর দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল3% পেন্টোবারবিটাল সোডিয়াম, এবং রক্তের মাধ্যমে সংগ্রহ করা হয়েছিলকার্ডিয়াক পাংচার. সিরাম দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল4 ডিগ্রীতে 10 মিনিটের জন্য 3000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউগেশন. পরিমাপের জন্য ELISA কিট ব্যবহার করা হয়েছিলএফএসএইচ, এলএইচ এবং টেস্টোস্টেরনপ্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুযায়ী স্তর।

1.6 AR প্রোটিন এক্সপ্রেশন (ওয়েস্টার্ন ব্লট)

টেস্টিকুলার টিস্যু লাইস করা হয়েছিল এবং প্রোটিনের ঘনত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রোটিন সমান পরিমাণ দ্বারা সমাধান করা হয়10% SDS-পৃষ্ঠা, PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়, এবং প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির বিরুদ্ধে incubated হয়এআরএবং-অ্যাক্টিন (1:1000)রাতারাতি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি ইনকিউবেশন কেমিলুমিনেসেন্ট সনাক্তকরণ দ্বারা অনুসরণ করা হয়েছিল।ইমেজজেবিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

1.7 AR mRNA এক্সপ্রেশন (qRT-PCR)

টেস্টিকুলার টিস্যু থেকে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল। সিডিএনএ বিপরীত প্রতিলিপির মাধ্যমে সংশ্লেষিত হয়েছিল। কিউআরটি-পিসিআর এসওয়াইবিআর গ্রিন পদ্ধতি ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল।

এআর প্রাইমার:

ফরোয়ার্ড: 5′-CAGGGACCA CGTTTTTACCCA-3′

বিপরীত: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-অ্যাক্টিন প্রাইমার (অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ):

ফরোয়ার্ড: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

বিপরীত: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

থার্মাল সাইক্লিং: 15 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রি (প্রি-ডেনেচুরেশন), তারপর 15 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রির 40টি চক্র এবং 1 মিনিটের জন্য 60 ডিগ্রি। ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল2^-ΔΔCtপদ্ধতি