বিমূর্ত

উদ্দেশ্য: ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর- 2 (TGF- 2) এক্সপ্রেশন, স্ক্লেরাল রিমডেলিং, এবং ফরম-ডিপ্রিভেশন মায়োপিয়া (এফডিএম) ইঁদুরে ক্যাভেভ-সিএ 1-এর মাধ্যমে ট্র্যান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর (TGF- 2) একটি সিস্টানচে-ধারণকারী সূত্রের (মূল রক্ত-পুষ্টিকারী এবং কিডনি-টোনিফাইং ভেষজ প্রতিস্থাপন) এর প্রভাবগুলি তদন্ত করা। (AQP1) পথ।

পদ্ধতি: চল্লিশটি এসপিএফ-গ্রেড পুরুষ এসডি ইঁদুর নির্বাচন করা হয়েছিল, যার মধ্যে 30টি এফডিএম মডেল প্রতিষ্ঠা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সফল মডেলিংয়ের পরে, ইঁদুরগুলিকে এফডিএম গ্রুপ, পিরেনজেপাইন (পিআইআর) গ্রুপ এবং সিস্তানচে ফর্মুলা গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল, প্রতিটি গ্রুপে 10টি ইঁদুর রয়েছে। অবশিষ্ট 10টি নন-মডেল ইঁদুর সাধারণ গ্রুপ হিসাবে পরিবেশন করেছে। স্বাভাবিক গ্রুপ এবং FDM গ্রুপ কোন হস্তক্ষেপ পায়নি। পিআইআর গ্রুপকে দিনে দুবার (সকাল ও সন্ধ্যায়) পিআইআর চোখের ড্রপ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, যখন সিস্তানচে ফর্মুলা গ্রুপকে সিস্তানচে-যুক্ত সূত্রের ইন্ট্রাগাস্ট্রিক প্রশাসন দেওয়া হয়েছিল। রেটিনোস্কোপ এবং ডায়াগনস্টিক যন্ত্র ব্যবহার করে ইঁদুরের প্রতিসরণ ত্রুটি এবং অক্ষীয় দৈর্ঘ্য সনাক্ত করা হয়েছিল। এইচই স্টেনিং স্ক্লেরাল টিস্যুর আকারগত পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। স্ক্লেরাল টিস্যুতে TGF- 2 এর অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং নিযুক্ত করা হয়েছিল। ওয়েস্টার্ন ব্লটটি স্ক্লেরাল টিস্যুতে AQP1 এবং CAV1 প্রোটিনের আপেক্ষিক অভিব্যক্তি মাত্রা নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। RT-PCR স্ক্লেরাল টিস্যুতে গ্লুটামেট-অ্যাসপার্টেট ট্রান্সপোর্টার (GLAST) এবং গ্লুটামেট ট্রান্সপোর্টার 1 (GLT-1) mRNA এর আপেক্ষিক এক্সপ্রেশন মাত্রা পরিমাপ করার জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল। ফলাফল: সাধারণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, প্রতিসরণ ত্রুটি, TGF- 2 অভিব্যক্তি স্তর, এবং FDM গ্রুপ, Cistanche সূত্র গ্রুপ, এবং PIR গোষ্ঠীতে AQP1 এবং CAV1 প্রোটিনের আপেক্ষিক অভিব্যক্তির মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যখন GLAST mRNA এর অক্ষীয় দৈর্ঘ্য এবং আপেক্ষিক অভিব্যক্তি স্তরগুলি GLT-1 mR এবং GLT-1 সবগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে৷ এফডিএম গ্রুপের সাথে তুলনা করে, প্রতিসরাঙ্ক ত্রুটি, TGF- 2 এক্সপ্রেশন লেভেল, এবং Cistanche ফর্মুলা গ্রুপ এবং PIR গ্রুপে AQP1 এবং CAV1 প্রোটিনের আপেক্ষিক এক্সপ্রেশন লেভেল উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যখন GLAST mRNA এবং GLT-1 mRNA-এর অক্ষীয় দৈর্ঘ্য এবং আপেক্ষিক এক্সপ্রেশন লেভেল উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (সমস্ত P <0)। Cistanche সূত্র গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, প্রতিসরা ত্রুটি, TGF- 2 অভিব্যক্তি স্তর, এবং PIR গ্রুপে AQP1 এবং CAV1 প্রোটিনের আপেক্ষিক অভিব্যক্তির মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যখন GLAST mRNA এবং GLT-1 mRNA-এর অক্ষীয় দৈর্ঘ্য এবং আপেক্ষিক অভিব্যক্তির মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (সমস্ত P0 <5)। HE স্টেনিং ফলাফল দেখিয়েছে যে স্বাভাবিক গ্রুপে প্রতিটি রেটিনাল স্তরের গঠনে কোন অস্বাভাবিক পরিবর্তন হয়নি; এফডিএম গ্রুপের রেটিনা পাতলা হয়ে গিয়েছিল এবং গ্যাংলিয়ন কোষের স্তরে মারাত্মক ভ্যাকুয়ালার পরিবর্তন দেখা গিয়েছিল; সিস্তানচে ফর্মুলা গ্রুপ এবং পিআইআর গ্রুপের রেটিনার বেধ বৃদ্ধি করা হয়েছিল, কোষের বিন্যাসটি মূলত নিয়মিত ছিল, গ্যাংলিওন কোষের সংখ্যা বৃদ্ধি করা হয়েছিল এবং প্রতিটি স্তরের কোষগুলি ঘনভাবে সাজানো হয়েছিল, সিস্তানচে ফর্মুলা গ্রুপের সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য কর্মক্ষমতা সহ। উপসংহার: সিস্টানচে-ধারণকারী সূত্রটি FDM-এর চিকিত্সার উপর একটি নির্দিষ্ট ইতিবাচক প্রভাব ফেলে, এবং এর প্রক্রিয়াটি CAV1, AQP1, এবং TGF- 2-এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণের সাথে সাথে স্ক্লেরাল রিমডেলিং এবং জল পরিবহন ফাংশনগুলির ভারসাম্য এবং উন্নতির সাথে সম্পর্কিত হতে পারে।

 

 

কিডনির কার্যকারিতা উন্নত করার জন্য CISTANCHE হার্ব সাপ্লিমেন্ট

 

 

কীওয়ার্ড

ফর্ম-বঞ্চনা মায়োপিয়া; Cistanche- ধারণকারী সূত্র; রূপান্তরকারী বৃদ্ধির ফ্যাক্টর- 2; অ্যাকোয়াপোরিন 1; ক্যাভিওলিন-১; স্ক্লেরাল রিমডেলিং; জল পরিবহন

 

সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, মানুষের জীবনধারার পরিবর্তন এবং ইলেকট্রনিক ডিভাইসের ক্রমাগত বিকাশের সাথে, মায়োপিয়ার ঘটনা বাড়ছে। একটি সাধারণ রোগ হিসাবে, এটি একটি বিশ্বব্যাপী স্বাস্থ্য সমস্যা হয়ে উঠেছে। ফর্ম-বঞ্চনা মায়োপিয়া (এফডিএম) হল একটি বিশেষ ধরনের মায়োপিয়া, যা সাধারণত চোখের বঞ্চনা বা চাক্ষুষ উদ্দীপনা হ্রাসের কারণে ঘটে। এফডিএম শুধুমাত্র স্ক্লেরাল রিমডেলিং প্রক্রিয়ায় হস্তক্ষেপ করে না বরং চোখের গোলার আকারে অস্বাভাবিক পরিবর্তন এবং জল পরিবহন ফাংশনের ব্যাঘাত ঘটায়, যা স্ক্লেরাল টিস্যুর ক্ষতি এবং বিকৃতিকে আরও বাড়িয়ে তুলতে পারে। অ্যাকোয়াপোরিন 1 (AQP1) একটি ব্যাপকভাবে বিদ্যমান প্রোটিন যার প্রধান কাজ হল কোষের ঝিল্লি জুড়ে জলের অণুগুলির দ্রুত পরিবহন প্রচার করা। চোখে, AQP1 এর বন্টন এবং ফাংশন ইন্ট্রাওকুলার ফ্লুইডের গতিশীল ভারসাম্যের সাথে সম্পর্কিত। Caveolin-1 (CAV1) হল একটি প্রোটিন যা কোষের ঝিল্লির মাইক্রোস্ট্রাকচার এবং সিগন্যাল ট্রান্সডাকশন গঠনে জড়িত। চোখের মধ্যে, CAV1 প্রধানত রেটিনাল পিগমেন্ট এপিথেলিয়াল কোষ এবং ফটোরিসেপ্টর কোষে উপস্থিত থাকে এবং এটি ভিজ্যুয়াল সিগন্যাল এবং ইন্ট্রাওকুলার পরিবেশের স্থিতিশীলতার সাথে সম্পর্কিত। ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর- 2 (TGF- 2) হল একটি প্লিওট্রপিক সাইটোকাইন যার একাধিক জৈবিক প্রভাব রয়েছে যেমন কোষের বিস্তার, পার্থক্য, এবং স্থানান্তর প্রচার করা। ইন্ট্রাওকুলার পরিবেশে, TGF- 2 কর্নিয়া এবং স্ক্লেরার বিকাশ এবং রক্ষণাবেক্ষণে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। বর্তমানে, FDM-এর প্রধান চিকিৎসা হচ্ছে ড্রাগ থেরাপি।

চিরাচরিত চাইনিজ মেডিসিনে (TCM), মায়োপিয়ার গঠন অপর্যাপ্ত কিউই এবং রক্ত ​​এবং কিডনি এসেন্সের ঘাটতির মতো কারণগুলির সাথে সম্পর্কিত বলে মনে করা হয়। কিডনিকে "জন্মগত ভিত্তি" হিসাবে বিবেচনা করা হয় এবং এটি চোখের কাজের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। টিসিএম মনে করে যে "কিডনি সারাংশ নিয়ন্ত্রণ করে, এবং সারাংশ চোখকে পুষ্টি দেয়; লিভার চোখের মধ্যে খোলে এবং যকৃতের পর্যাপ্ত রক্ত ​​পরিষ্কার দৃষ্টি নিশ্চিত করে"। তাই, টিসিএম-এর অভাবজনিত সিনড্রোম দ্বারা সৃষ্ট চোখের রোগের জন্য কিডনিকে টোনিফাই করা এবং রক্তকে পুষ্টিকর করা সবসময়ই একটি গুরুত্বপূর্ণ থেরাপিউটিক নীতি।

সিস্তানচে, "মরুভূমি জিনসেং" নামে পরিচিত এবং টিসিএম-এর "নয়টি অমর ওষুধ" এর মধ্যে একটি, ঔষধি উপাদান হিসাবে 2,000 বছরেরও বেশি ইতিহাস রয়েছে। প্রাচীন টিসিএম ক্লাসিকগুলিতে একটি শীর্ষ-গ্রেডের পুষ্টিকর ঔষধি উপাদান হিসাবে নথিভুক্ত, কিডনিকে টোনিফাই করার, সারাংশ পূরণ করা, রক্তকে পুষ্ট করা এবং শুষ্কতাকে আর্দ্র করার প্রভাবের জন্য সিস্তানচে অত্যন্ত মূল্যবান। অন্যান্য অনেক টিসিএম ভেষজ থেকে ভিন্ন, সিস্তানচে একচেটিয়াভাবে মরুভূমিতে জন্মায়, প্রধানত চীনের জিনজিয়াং, ইনার মঙ্গোলিয়া এবং গানসুর মতো অঞ্চলে ট্যামারিকস রামোসিসিমার শিকড়ে পরজীবী। অনন্য মরুভূমির পরিবেশ এটিকে সমৃদ্ধ সক্রিয় উপাদানের সাথে সমৃদ্ধ করে, যার মধ্যে রয়েছে ইচিনাকোসাইড, ভার্বাস্কোসাইড এবং ফ্ল্যাভোনয়েড, যা বৈজ্ঞানিকভাবে প্রমাণিত হয়েছে যে শক্তিশালী অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য রয়েছে, কোষের অ্যাপোপটোসিস হ্রাস করে এবং কোষের বিস্তারকে উন্নীত করে।

আধুনিক গবেষণায় দেখানো হয়েছে যে সিস্তানচে উল্লেখযোগ্য কিডনি-পুষ্টিকর প্রভাব রয়েছে। এটি কিডনি কোষের অ্যাপোপটোসিস কমাতে পারে, কিডনি কোষের বিস্তারকে উন্নীত করতে পারে, ক্ষতিগ্রস্ত কিডনি কোষ মেরামত করতে পারে এবং রেনাল রক্তনালীগুলিকে প্রসারিত করতে পারে, যার ফলে কিডনির কার্যকারিতা উন্নত হয়। এছাড়াও, সিস্টানচে লিম্ফোসাইটের বিস্তারকে প্রচার করে অনাক্রম্যতা বাড়াতে পারে, লিভারের গ্লাইকোজেন উৎপাদন বাড়িয়ে ক্লান্তি প্রতিরোধ করতে পারে এবং ফ্রি র‌্যাডিকেল মেশানোর মাধ্যমে বার্ধক্য বিরোধী প্রভাব প্রয়োগ করতে পারে। এই জৈবিক ক্রিয়াকলাপগুলি "কিডনিকে টোনিফাই করা এবং পুষ্টিকর সারাংশ" এর TCM তত্ত্বের সাথে অত্যন্ত সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং চোখের রোগের চিকিত্সায় এর প্রয়োগের জন্য একটি বৈজ্ঞানিক ভিত্তিও প্রদান করে। কিডনি এবং রক্তকে পুষ্টিকর করার TCM থেরাপিউটিক নীতির উপর ভিত্তি করে, এবং Cistanche-এর আধুনিক ফার্মাকোলজিকাল বৈশিষ্ট্যগুলিকে একত্রিত করে, এই গবেষণাটি মূল রক্ত-পুষ্টিকর এবং কিডনি-টোনিফাইং ভেষজগুলিকে Cistanche-এর সাথে প্রতিস্থাপিত করে একটি নতুন Cistanche-ধারণকারী সূত্র তৈরি করে, এবং এর কার্যকারিতা আবিষ্কার করে, FDM-এর চিকিত্সার একটি নতুন ধারণা প্রদান করে। মায়োপিয়ার জন্য প্রাকৃতিক ভেষজ-ভিত্তিক থেরাপির বিকাশ।

1 উপাদান এবং পদ্ধতি

1.1 পরীক্ষামূলক প্রাণী

180-200 গ্রাম ওজনের এবং 6-8 সপ্তাহের বয়সী চল্লিশটি এসপিএফ-গ্রেডের পুরুষ এসডি ইঁদুর, বেইজিং কেইউ প্রাণী প্রজনন কেন্দ্র [লাইসেন্স নং: SCXK (জিং) 2022-0004] থেকে কেনা হয়েছিল এবং চীনের চক্ষু বিজ্ঞান একাডেমি হাসপাতালের এনিম্যাল ল্যাবরেটরিতে নিয়মিতভাবে লালন-পালন করা হয়েছিল। এই পরীক্ষাটি "পরীক্ষামূলক প্রাণীদের প্রশাসনের প্রবিধান" এর প্রাসঙ্গিক বিধানগুলি মেনে চলে এবং চায়না একাডেমি অফ চাইনিজ মেডিকেল সায়েন্সেসের চক্ষু হাসপাতালের মেডিকেল এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল (ব্যাচ নং: YKEC-KT-2024-017-P001)৷

1.2 প্রধান বিকারক এবং যন্ত্র

Cistanche tubulosa (Chengdu WeCistanche Bio-Tech. Co., Ltd. থেকে ক্রয়কৃত, সক্রিয় উপাদান সহ ইচিনাকোসাইড 30.0% এর চেয়ে বড় বা সমান, ভার্বাস্কোসাইড 12.0% এর চেয়ে বড় বা সমান, এবং মোট ফেনিথাইল অ্যালকোহল গ্লাইকোসাইড 75.0% এর থেকে বেশি বা সমান উপাদান হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল)। Pirenzepine (PIR, Suzhou Hongsen Pharmaceutical Co., Ltd.); যৌগিক ট্রপিকামাইড আই ড্রপস (হেবেই জিনিয়াও ইয়ংগুয়াং ফার্মাসিউটিক্যাল কোং, লিমিটেড, স্পেসিফিকেশন 5 এমএল); 4 g·L⁻¹ অক্সিবুপ্রোকেইন হাইড্রোক্লোরাইড আই ড্রপস (শানডং বাউশ অ্যান্ড লম্ব ফ্রেদা ফার্মাসিউটিক্যাল কো., লিমিটেড); AQP1 অ্যান্টিবডি (উহান ফাইন বায়োটেক কোং লিমিটেড); CAV1 অ্যান্টিবডি (উহান বোটু বায়োটেকনোলজি কোং লিমিটেড); -অ্যাক্টিন অ্যান্টিবডি (সাংহাই জিংকে কেমিক্যাল টেকনোলজি কোং লিমিটেড); ছাগল বিরোধী খরগোশ আইজিজি (ওয়েনঝো কেমিয়াও বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড); HE স্টেনিং কিট (Shanghai Zeye Biotechnology Co., Ltd.)।

1.3 মডেলিং পদ্ধতি এবং গ্রুপিং

FDM মডেল প্রতিষ্ঠা করতে ত্রিশটি ইঁদুর ব্যবহার করা হয়েছিল। পেন্টোবারবিটাল সোডিয়াম (30 mg·kg⁻¹) এর ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দ্বারা ইঁদুরকে চেতনানাশক করা হয়েছিল। পোভিডোন-আয়োডিন দিয়ে ডান চোখ পরিষ্কার এবং জীবাণুমুক্ত করার পরে, একটি অস্বচ্ছ চোখের মাস্ক ডান চোখে আঠালো ছিল। চোখের মাস্কটি বিচ্ছিন্ন বা হালকা ফুটো হওয়ার জন্য প্রতিদিন পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং আলগা হলে পুনরায় আঠালো করা হয়েছিল। বাম চোখটি চিকিৎসাবিহীন অবস্থায় পড়ে ছিল। মনোকুলার ফর্ম বঞ্চনার 4 সপ্তাহ পরে, ইঁদুরের উপর বাইনোকুলার রেটিনোস্কোপি এবং অক্ষীয় দৈর্ঘ্য পরিমাপ করা হয়েছিল। মডেলিংয়ের সাফল্যের মাপকাঠি: সাইক্লোপ্লেজিয়ার পরে, প্রতিসরণ ত্রুটি একটি রেটিনোস্কোপ বা স্বয়ংক্রিয় প্রতিসরণ মিটার দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল, এবং বঞ্চিত চোখ প্রতিসরা অবস্থাতে একটি উল্লেখযোগ্য মায়োপিক পরিবর্তন দেখায় [অর্থাৎ, বাইনোকুলার প্রতিসরণ ত্রুটির পার্থক্যটি 2 ডি-এর চেয়ে বেশি বা সমান সফল মডেলিং হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল, এবং চোখের নিয়ন্ত্রনের গড় তুলনা করা হয়েছিল। (-4.5 ± 1.2) D]। সমস্ত 30 টি ইঁদুর সফলভাবে মডেল করা হয়েছিল এবং প্রতিটি গ্রুপে 10 টি ইঁদুর সহ FDM গ্রুপ, PIR গ্রুপ এবং Cistanche ফর্মুলা গ্রুপে বিভক্ত হয়েছিল। অবশিষ্ট 10টি নন-মডেল ইঁদুর সাধারণ গ্রুপ হিসাবে পরিবেশন করেছে।

1.4 হস্তক্ষেপের পদ্ধতি

স্বাভাবিক গ্রুপ এবং FDM গ্রুপ কোন হস্তক্ষেপ পায়নি। পিআইআর গ্রুপকে 15 দিনের জন্য 2 মিনিটের ব্যবধানে দিনে দুবার (সকাল এবং সন্ধ্যায়) ডান চোখে 5 ফোঁটা পিআইআর আই ড্রপ দেওয়া হয়েছিল। সিস্তানচে ফর্মুলা গ্রুপ সিস্তানচে-ধারণকারী সূত্রের সাথে হস্তক্ষেপ করা হয়েছিল। সিস্টানচে টিউবুলোসা (50 গ্রাম, মূল উপাদান) জল দিয়ে ডিকোকট করা হয়েছিল এবং 1000 গ্রাম·এল⁻¹ এর ঘনত্বের সাথে একটি ঔষধি দ্রবণে ঘনীভূত হয়েছিল। ইঁদুরকে 15 দিনের জন্য দিনে একবার 12.70 g·kg⁻¹ মাত্রায় ইন্ট্রাগাস্ট্রিক প্রশাসন দেওয়া হয়েছিল। Cistanche এর ডোজ নির্ধারণ করা হয়েছিল তার ক্লিনিকাল প্রয়োগের অভিজ্ঞতা এবং আধুনিক ফার্মাকোলজিক্যাল গবেষণার উপর ভিত্তি করে, ইচিনাকোসাইড এবং ভার্বাসকোসাইডের মতো সক্রিয় উপাদানগুলির কার্যকর ঘনত্ব নিশ্চিত করে।

1.5 সনাক্তকরণ পদ্ধতি

1.5.1 প্রতিসরাঙ্ক ত্রুটি এবং অক্ষীয় দৈর্ঘ্য পরিবর্তনের মূল্যায়ন

রূপগত এবং প্রতিসরণ ত্রুটি সনাক্তকরণ: ফর্ম বঞ্চনা শেষ হওয়ার চব্বিশ ঘন্টা পরে, সনাক্তকরণের জন্য প্রতিটি গ্রুপ থেকে 3টি ইঁদুর এলোমেলোভাবে নির্বাচন করা হয়েছিল। পরীক্ষার আগে, ইঁদুরগুলিকে 30 মিনিটের জন্য একটি অন্ধকার-অভিযোজিত পরিবেশে রাখা হয়েছিল, তারপরে আইসোফ্লুরেন ইনহেলেশনের মাধ্যমে চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং একটি বিশেষ প্রাণী বন্ধনীতে স্থির করা হয়েছিল। চোখের বলের প্যানোরামিক স্ক্যানিংয়ের জন্য একটি উচ্চ-রেজোলিউশন ওসিটি ইমেজিং সিস্টেম ব্যবহার করা হয়েছিল। স্ক্যান করার সময়, রেটিনা এবং লেন্সের স্পষ্ট ক্রস-বিভাগীয় চিত্রগুলি পেতে প্রোবটিকে কর্নিয়ার লম্বভাবে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। প্রতিটি চোখ পরপর 3 বার স্ক্যান করা হয়েছিল, এবং গোলাকার সমতুল্য প্রতিসরাঙ্ক ত্রুটি গণনা করতে সিস্টেমের অন্তর্নির্মিত সফ্টওয়্যার দ্বারা রেটিনাল পিগমেন্ট এপিথেলিয়াম স্তর (অর্থাৎ, অক্ষীয় দৈর্ঘ্য) অগ্রবর্তী কর্নিয়া পৃষ্ঠ থেকে অক্ষীয় দূরত্ব স্বয়ংক্রিয়ভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। তথ্যের নির্ভুলতা নিশ্চিত করার জন্য, পেশাদারভাবে প্রশিক্ষিত দুজন গবেষক অন্ধভাবে ছবিগুলিকে স্বাধীনভাবে বিশ্লেষণ করেছেন। যদি দুটি পরিমাপের ফলাফলের মধ্যে পার্থক্য 0.50 D-এর বেশি হয় তবে ডেটা বাতিল করা হয়েছিল এবং পুনরায় পরিমাপ করা হয়েছিল। অক্ষীয় দৈর্ঘ্যের নিশ্চিতকরণ সনাক্তকরণ: OCT পরিমাপের ফলাফল যাচাই করতে, A-স্ক্যান আল্ট্রাসাউন্ড ডায়াগনস্টিক যন্ত্রও ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রথমে অক্সিবুপ্রোকেন হাইড্রোক্লোরাইড চোখের ড্রপগুলি ইঁদুরের উভয় চোখে টপিকাল অ্যানেস্থেশিয়ার জন্য প্রবেশ করানো হয়েছিল এবং তারপরে এ-স্ক্যান প্রোবটি কর্নিয়ার সংস্পর্শে আলতোভাবে স্থাপন করা হয়েছিল। যন্ত্রটিকে ম্যানুয়াল মোডে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল, এবং সঠিক অতিস্বনক প্রচারের গতি ইন্ট্রাওকুলার মিডিয়া অনুসারে সেট করা হয়েছিল: 1540 m·s⁻¹ পূর্ববর্তী চেম্বার এবং ভিট্রিয়াসের জন্য। অপারেশন চলাকালীন, প্রতিটি ইন্টারফেস ম্যানুয়াল মার্কিং দ্বারা অবস্থিত ছিল, এবং গড় মান নিতে প্রতিটি চোখ 3 বার বারবার পরিমাপ করা হয়েছিল। এই পরীক্ষাটি অন্ধভাবে সম্পাদিত হয়েছিল, এবং সমস্ত অপারেটর সামঞ্জস্যপূর্ণ পরিমাপ কৌশলগুলি নিশ্চিত করার জন্য একীভূত প্রশিক্ষণ পেয়েছে। পরিমাপের আগে যন্ত্রটি ক্রমাঙ্কিত করা হয়েছিল, এবং কিছু নমুনা এলোমেলোভাবে আন্তঃশ্রেণী এবং আন্তঃশ্রেণীর পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ (ICC) মূল্যায়ন করার জন্য পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা পরীক্ষার জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল। ডেটার বৈজ্ঞানিকতা এবং নির্ভরযোগ্যতা নিশ্চিত করার জন্য পরীক্ষার সময় কঠোর প্রমিত অপারেটিং পদ্ধতি অনুসরণ করা হয়েছিল।

1.5.2 HE স্টেনিং

প্রতিসরণ ত্রুটি এবং অক্ষীয় দৈর্ঘ্য সনাক্ত করার পরে, ইঁদুরগুলিকে অত্যধিক অবেদন দিয়ে বলি দেওয়া হয়েছিল। উভয় চোখের চোখের পাতা এবং আশেপাশের টিস্যুগুলি জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল এবং কর্নিয়ার মধ্যবিন্দুতে ঋজু নাসিক এবং টেম্পোরাল লিম্বাস চিহ্নিত করা হয়েছিল। চিহ্ন অনুসারে কনজেক্টিভা ছেদ করা হয়েছিল এবং চোখের গোলাটি ছিদ্র করা হয়েছিল। অগ্রভাগের টিস্যু এবং ভিট্রিয়াস অপসারণের জন্য লিম্বাসকে ছেদ করা হয়েছিল এবং স্ক্লেরাল টিস্যু ধরে রাখা হয়েছিল। স্ক্লেরাল টিস্যু 40 g·L⁻¹ প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে 24 ঘন্টার জন্য স্থির করা হয়েছিল, গ্রেডিয়েন্ট ইথানল দিয়ে ডিহাইড্রেট করা হয়েছিল, নিয়মিতভাবে প্যারাফিনে এমবেড করা হয়েছিল, জাইলিন দিয়ে পরিষ্কার করা হয়েছিল, নিরপেক্ষ বালসাম দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছিল, 5 μm এ সেকশন করা হয়েছিল, HE দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল, এবং স্কলারোলজিকাল পরিবর্তনের জন্য স্কলারোলজিকাল পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

1.5.3 স্ক্লেরাল টিস্যুতে TGF- 2 প্রকাশের জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং

প্রতিটি গ্রুপ থেকে দুটি ইঁদুর নির্বাচন করা হয়েছিল। স্ক্লেরাল টিস্যু বিভাগগুলিকে অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার এবং ব্লক করা হয়েছিল, মাউস অ্যান্টি-টিজিএফ- 2 (1:3000) দিয়ে 24 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল, ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল, 1 ঘন্টার জন্য সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (1:2000) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল, নিয়মিতভাবে বিকশিত এবং কাউন্টারস্টেইন করা হয়েছিল, একটি বাল-সামগ্রীর নীচে মাউন্ট করা হয়েছিল, এবং 3-এর অধীনে একটি বালিকা তোলা হয়েছিল। অনুবীক্ষণ যন্ত্র টিস্যুর পরিবর্তন পর্যবেক্ষণ করতে। ইতিবাচক অংশের ধূসর মান একটি চিত্র বিশ্লেষণ সিস্টেম দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল।

1.5.4 স্ক্লেরাল টিস্যুতে AQP1 এবং CAV1 প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তরের ওয়েস্টার্ন ব্লট সনাক্তকরণ

প্রতিটি গ্রুপ থেকে দুটি ইঁদুর নির্বাচন করা হয়েছিল। স্ক্লেরাল টিস্যু এক্সাইজ করা হয়েছিল, একজাত করা হয়েছিল এবং RIPA লাইসিস বাফার যোগ করে মোট প্রোটিন বের করা হয়েছিল। প্রোটিন বিকৃতকরণ, পরিমাণ নির্ধারণ, ইলেক্ট্রোফোরেসিস, ঝিল্লি স্থানান্তর এবং ব্লকিং সঞ্চালিত হয়েছিল। প্রাথমিক অ্যান্টিবডি AQP1 (1:1000), CAV-1 (1:3000), এবং -actin অ্যান্টিবডি (1:2000) যোগ করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (1:2000) যোগ করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। ইসিএল বিকারক যোগ করা হয়েছিল, এবং প্রোটিন ধূসর মান চিত্র ল্যাব সফ্টওয়্যার দিয়ে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। লক্ষ্য ব্যান্ডের ধূসর মানের অনুপাত -অ্যাক্টিন এর আপেক্ষিক অভিব্যক্তি স্তর।

1.5.5 স্ক্লেরাল টিস্যুতে GLAST এবং GLT-1 mRNA এক্সপ্রেশনের RT-PCR সনাক্তকরণ

ইঁদুরের অবশিষ্ট স্ক্লেরাল টিস্যু নেওয়া হয়েছিল এবং ট্রিজল পদ্ধতি অনুসারে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল। মোট আরএনএ একটি স্পেকট্রোফটোমিটার দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং কিট নির্দেশাবলী অনুসারে সিডিএনএ বিপরীত-লিপি করা হয়েছিল। আরটি-পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া শর্তগুলির সাথে প্রস্তুত করা হয়েছিল: 30 সেকেন্ডের জন্য 75 ডিগ্রি, 60 সেকেন্ডের জন্য 85 ডিগ্রি, 30 সেকেন্ডের জন্য অ্যানিলিংয়ের জন্য 80 ডিগ্রি, 30 সেকেন্ডের জন্য এক্সটেনশনের জন্য 65 ডিগ্রি, মোট 40টি চক্র। অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স হিসাবে -অ্যাক্টিন সহ, গ্লুটামেট-অ্যাসপার্টেট ট্রান্সপোর্টার (GLAST) এবং গ্লুটামেট ট্রান্সপোর্টার 1 (GLT-1) এর আপেক্ষিক এক্সপ্রেশন স্তরগুলি 2⁻ΔΔCt পদ্ধতি দ্বারা গণনা করা হয়েছিল। প্রাইমার সিকোয়েন্সগুলি সারণি 1-এ দেখানো হয়েছে। গ্রুপগুলির মধ্যে তুলনা করার জন্য বৈচিত্র্যের একমুখী বিশ্লেষণ ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং LSD-t পরীক্ষাটি গোষ্ঠীর মধ্যে যুগ্মভাবে তুলনা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। পরীক্ষার স্তর:=0.05.