UPLC-এর উপর ভিত্তি করে দুই ধরনের সিস্তানচে ডেসার্টিকোলার কাঁচা এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত পণ্যের আটটি রাসায়নিক উপাদানের বিষয়বস্তুর পার্থক্যের তুলনা Ⅱ
Jun 16, 2025
2. পদ্ধতি এবং ফলাফল
2.1 ক্রোমাটোগ্রাফিক শর্তাবলী
UPLC বিশ্লেষণ একটি ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিলজলের অ্যাক্যুইটি UPLC™ BEH C18 কলাম (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm কণার আকার). মোবাইল ফেজ গঠিতমিথানল (A)এবং0.1% ফরমিক অ্যাসিড জলীয় দ্রবণ (B)নিম্নলিখিত গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন সহ:
0–4 মিনিট: 10% → 26% A
4-18 মিনিট: 26% → 40% A
18-20 মিনিট: 40% → 50% A
প্রবাহ হার:0.3 মিলি/মিনিট
ইনজেকশন ভলিউম:3 μL
কলাম তাপমাত্রা:35°C
সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য:330 nm
2.2 সমাধানের প্রস্তুতি
2.2.1 মিশ্র রেফারেন্স সমাধান
সঠিকভাবে নিম্নলিখিত মানক যৌগগুলি ওজন করুন:সিস্টানোসাইড এফ, echinacoside, সিস্টানোসাইড এ, verbascoside, টিউবুলসাইড এ, isoverbascoside, 2'-এসিটাইলভারবাসকোসাইড, এবংটিউবুলসাইড বি. নিম্নলিখিত ঘনত্ব (µg·mL⁻¹) সহ একটি রেফারেন্স মিশ্রণ প্রস্তুত করতে 50% মিথানলে দ্রবীভূত করুন:
সিস্টানোসাইড এফ: 32.7
ইচিনাকোসাইড: 102.4
সিস্টানোসাইড A: 50.2
Verbascoside: 80.6
টিউবুলসাইড এ: 25.6
Isoverbascoside: 86.3
2'-Acetylverbascoside: 77.3
টিউবুলসাইড বি: 60.8
2.2.2 নমুনা সমাধান
কাঁচা সিস্তানচে স্লাইসভেষজ নরম করে, টুকরো টুকরো করে এবং শুকিয়ে প্রস্তুত করা হয়।
ওয়াইন-স্টিমড সিস্তানচে30% রাইস ওয়াইনে কাঁচা টুকরা ভিজিয়ে, 12 ঘন্টার জন্য মিশ্রণটি বাষ্প করে, ঠান্ডা করে এবং আবার শুকানোর মাধ্যমে প্রস্তুত করা হয়েছিল।
প্রায়0.2 gশুকনো পাউডার (65-জালের চালনির মধ্য দিয়ে যাওয়া) একটি 50 মিলি অ্যাম্বার ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে ওজন করা হয়েছিল, 25 মিলি 50% মিথানল দিয়ে বের করা হয়েছিল, 40 মিনিটের জন্য (250 W, 35 kHz) সোনিকেট করা হয়েছিল এবং ওজনে ফিরিয়ে আনা হয়েছিল। সমাধানটি একটি মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল0.22 μm ঝিল্লি, এবং পরিস্রাবণ বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।
দ্রষ্টব্য: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; আরএইচ. Cistanche deserticola কাঁচা টুকরা; আরজি Cistanche tubulosa কাঁচা টুকরা; WH. Cistanche deserticola ওয়াইন সঙ্গে stewed; WG. Cistanche tubulosa ওয়াইন সঙ্গে stewed; চিত্র 4 থেকে 7 একই।
চিত্র 1 Cistanche deserticola এবং Cistanche tubulosa ঔষধি উপকরণ, কাঁচা টুকরা, এবং ওয়াইন দিয়ে স্টুড এর ছবি
চীনে বিক্রি হওয়া একটি বিখ্যাত সিস্তানচে ওয়াইন
Wecistanche-এর সহায়ক পরিষেবা- একটি নমুনা বা পাইকারি বিশদ পেতে আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন
ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com
হোয়াটসঅ্যাপ/টেল:+86 15292862950
2.3 কাঁচা এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত সিস্টাঞ্চে 8টি প্রধান যৌগের পরিমাণগত বিশ্লেষণ
2.3.1 সিস্টেমের উপযুক্ততা
বর্ণিত ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থার অধীনে, জন্য তাত্ত্বিক প্লেট নম্বরechinacoside exceeded 6000 with good resolution (>1.5)। মিশ্র মানের ক্রোমাটোগ্রাম, কাঁচা মরুভূমি সিস্তানচে, এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত নমুনাগুলি চিত্র 2-এ দেখানো হয়েছে।
পিক আইডেন্টিফিকেশন:
সিস্টানোসাইড এফ
ইচিনাকোসাইড
সিস্টানোসাইড এ
Verbascoside
টিউবুলসাইড এ
Isoverbascoside
2'-এসিটাইলভারবাস্কোসাইড
টিউবুলসাইড বি
cistanche deserticola
cistanche tubulosa
2.3.2 রৈখিকতা এবং সনাক্তকরণ সীমা
0.1 থেকে 5.0 মিলি ঘনত্বে রেফারেন্স মিশ্রণের সিরিয়াল ডিলিউশন ব্যবহার করে স্ট্যান্ডার্ড ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা প্লট করে তৈরি করা হয়েছিলঘনত্ব (X)বনামপিক এলাকা (Y). সনাক্তকরণ সীমা (LOD, S/N=3) এবং পরিমাপ সীমা (LOQ, S/N=10) নির্ধারণ করা হয়েছে এবং পরীক্ষা করা পরিসীমা জুড়ে ভাল রৈখিকতা নিশ্চিত করা হয়েছে৷
2.3.3 নির্ভুলতা
মিশ্র রেফারেন্স সমাধানের ছয়টি প্রতিলিপি ইনজেকশন দেখানো হয়েছেআপেক্ষিক মান বিচ্যুতি (RSDs)থেকে সীমার শিখর এলাকায়0.48% থেকে 2.14%, চমৎকার যন্ত্র নির্ভুলতা নির্দেশ করে।
2.3.4 স্থিতিশীলতা
এর নমুনা সমাধানকাঁচা সিস্তানচে পাউডার (ব্যাচ নম্বর. 160901)0, 2, 4, 8, 12 এবং 24 ঘন্টা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। সমস্ত 8 যৌগের জন্য পিক এলাকার RSDs থেকে পরিসীমা0.71% থেকে 1.93%, নিশ্চিত করা24 ঘন্টার মধ্যে সমাধান স্থিতিশীলতা.
সারণী 1. সিস্টানচে উপকরণের নমুনা তথ্য
| উৎস প্রজাতি | নমুনা আইডি | উৎপত্তি | ব্যাচ নম্বর |
|---|---|---|---|
| Cistanche deserticola | H1 | অভ্যন্তরীণ মঙ্গোলিয়া | 160901 |
| H2 | জিনজিয়াং | 1712301 | |
| H3 | জিনজিয়াং | 1712305 | |
| H4 | জিনজিয়াং | 1712306 | |
| H5 | জিনজিয়াং | 1712307 | |
| H6 | অভ্যন্তরীণ মঙ্গোলিয়া | 1712308 | |
| H7 | জিনজিয়াং | 180710 | |
| H8 | জিনজিয়াং | 180710 | |
| H9 | জিনজিয়াং | 180710 | |
| H10 | জিনজিয়াং | 180711 | |
| Cistanche tubulosa | G1 | জিনজিয়াং | 151201 |
| G2 | জিনজিয়াং | 170301 | |
| G3 | জিনজিয়াং | 1709001 | |
| G4 | জিনজিয়াং | 170601 | |
| G5 | জিনজিয়াং | 1712302 | |
| G6 | জিনজিয়াং | 1712303 | |
| G7 | জিনজিয়াং | 1712304 | |
| G8 | জিনজিয়াং | 180710 | |
| G9 | জিনজিয়াং | 180710 | |
| G10 | জিনজিয়াং | 180712 |
| ইচিনাকোসাইড |
| সিস্টানোসাইড এ |
| Verbascoside |
2.3.5 পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা
একই Cistanche ব্যাচের ছয়টি স্বাধীনভাবে প্রস্তুতকৃত প্রতিলিপি ভাল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা দেখিয়েছে। গড় বিষয়বস্তু (mg·g⁻¹) এবং RSD নিম্নরূপ ছিল:
| যৌগ | গড় বিষয়বস্তু (mg/g) | RSD (%) |
|---|---|---|
| সিস্টানোসাইড এফ | 0.24 | 1.24% |
| ইচিনাকোসাইড | 4.49 | 0.25% |
| সিস্টানোসাইড এ | 0.56 | 1.93% |
| Verbascoside | 2.52 | 1.40% |
| টিউবুলসাইড এ | 0.59 | 1.15% |
| Isoverbascoside | 1.49 | 0.71% |
| 2'-এসিটাইলভারবাস্কোসাইড | 1.23 | 1.94% |
| টিউবুলসাইড বি | 0.86 | 1.02% |
2.3.6 পুনরুদ্ধার পরীক্ষা
পুনরুদ্ধার spiking দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিলসিস্টানচে পাউডারের ছয়টি প্রতিলিপি (0.1 গ্রাম)8টি রেফারেন্স যৌগের পরিচিত ঘনত্ব সহ। গড় পুনরুদ্ধার থেকে পরিসীমা95.56% থেকে 102.71%, মধ্যে RSD সহ1.44% এবং 2.97%, নির্দেশ করেচমৎকার নিষ্কাশন এবং পরিমাপ নির্ভরযোগ্যতা.
দ্রষ্টব্য: A. মিশ্র রেফারেন্স; B. Raw Cistanche deserticola; সি. মদের মধ্যে স্টিউড সিস্তানচে মরুভূমি; 1. সিস্টানচেসাইড এফ; 2. ইচিনাকোসাইড; 3. সিস্টানচেসাইড এ; 4. Verbascoside; 5. টিউবুলসাইড এ; 6. Isoverbascoside; 7. 2΄-অ্যাসিটিলভারবাস্কোসাইড; 8. টিউবুলসাইড বি.
2.3.7 কাঁচা বনাম ওয়াইন-প্রসেসড সিস্টানচে সক্রিয় যৌগের পরিমাণ নির্ধারণ
প্রতিটি নমুনা ডুপ্লিকেট পরীক্ষা করা হয়েছিল। 8 টার্গেট যৌগ পরিমাপ করা হয়েছিলCistanche deserticola এর 10 ব্যাচ(কাঁচা এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত) এবংCistanche tubulosa এর 10 ব্যাচ. ফলাফলগুলি সারণী 3 এ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে, এতে অন্তর্দৃষ্টি দেওয়া হয়েছে:
রচনায় প্রজাতি-নির্দিষ্ট পার্থক্য
ওয়াইন প্রক্রিয়াকরণের পরে ফাইটোকেমিক্যাল সামগ্রীতে পরিবর্তন
Cistanche মান নিয়ন্ত্রণের জন্য বিশ্লেষণাত্মক আঙ্গুলের ছাপ
সারণি 2. ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা, পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ (r), রৈখিক রেঞ্জ, LOD এবং LOQ আটটি যৌগের জন্য
| যৌগ | ক্রমাঙ্কন সমীকরণ | r | লিনিয়ার রেঞ্জ (µg·mL⁻¹) | LOD (µg·mL⁻¹) | LOQ (µg·mL⁻¹) |
|---|---|---|---|---|---|
| সিস্টানোসাইড এফ | Y=4.89 × 10⁹X + 3.31 × 10³ | 0.9999 | 0.327-32.700 | 0.0521 | 0.1300 |
| ইচিনাকোসাইড | Y=3.88 × 10⁹X + 1.71 × 10⁴ | 0.9999 | 1.024-102.400 | 0.0422 | 0.1339 |
| সিস্টানোসাইড এ | Y=5.08 × 10⁹X + 3.45 × 10³ | 0.9999 | 0.502-50.600 | 0.1006 | 0.4035 |
| Verbascoside | Y=3.88 × 10⁹X + 3.43 × 10³ | 0.9999 | 0.806–80.600 | 0.0732 | 0.1871 |
| টিউবুলসাইড এ | Y=4.42 × 10⁹X + 1.07 × 10³ | 0.9999 | 0.256-25.600 | 0.0865 | 0.2876 |
| Isoverbascoside | Y=4.81 × 10⁹X + 5.29 × 10³ | 0.9999 | 0.863–86.300 | 0.0242 | 0.0734 |
| 2'-এসিটাইলভারবাস্কোসাইড | Y=5.30 × 10⁹X + 2.99 × 10³ | 0.9999 | 0.773–77.300 | 0.0317 | 0.1024 |
| টিউবুলসাইড বি | Y=5.17 × 10⁹X + 3.39 × 10³ | 0.9999 | 0.608-60.800 | 0.1794 | 0.3876 |
2.4 সিস্টানচে প্রজাতির মধ্যে রাসায়নিক রচনার তুলনামূলক বিশ্লেষণ
তদন্ত করতেফাইটোকেমিক্যাল পার্থক্যমধ্যেCistanche deserticolaএবংCistanche tubulosa, আট কী এর ঘনত্বphenylethanoid glycosidesথেকেকাঁচা এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত নমুনার 10 ব্যাচপ্রতিটি প্রজাতির ব্যবহার করে কল্পনা করা হয়েছিলবক্স প্লট (চিত্র 3). পরিসংখ্যান বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে, ছাড়া2'-এসিটাইলভারবাসকোসাইডএবংটিউবুলসাইড বি, অধিকাংশ অন্যান্য যৌগ দেখিয়েছেনউল্লেখযোগ্য পার্থক্য (P <0.05)দুটি প্রজাতির মধ্যে কাঁচা এবং প্রক্রিয়াজাত উভয় আকারে।
বিশেষভাবে:
ইনকাঁচা সিস্তানচে, এর বিষয়বস্তুcistanoside F, echinacoside, isoverbascoside, tubuloside A, এবং verbascosideছিলউল্লেখযোগ্যভাবে কমমধ্যেগ. মরুভূমিতুলনায়গ. টিউবুলোসা(পি <0.05)।
দওয়াইন প্রক্রিয়াজাত নমুনাঅনুরূপ প্রবণতা প্রতিফলিত.
উল্লেখযোগ্যভাবে,সিস্টানোসাইড এএ পাওয়া গেছেউচ্চ স্তরেগ. মরুভূমিএবং ছিলসনাক্ত করা যায় নামধ্যেগ. টিউবুলোসা, এটি একটি হিসাবে পরিবেশন করতে পারে প্রস্তাবসম্ভাব্য মার্কার যৌগপ্রজাতির পার্থক্যের জন্য।
Cistanche প্রজাতির PLS-DA কেমোমেট্রিক বিশ্লেষণ
A আংশিক ন্যূনতম বর্গক্ষেত্র বৈষম্যমূলক বিশ্লেষণ (PLS-DA)আটটি যৌগের ঘনত্বের ডেটা ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। ফলেস্কোর প্লট (চিত্র 4A)দেখিয়েছে যে উভয় প্রজাতির কাঁচা এবং প্রক্রিয়াজাত নমুনাগুলি করেছেপরিষ্কারভাবে বিভক্ত গ্রুপে ক্লাস্টার না.
তবে,এলোমেলো স্থানান্তর পরীক্ষা (চিত্র 4B)যে মডেল ছিলওভারফিটেড না, এর প্রকৃত মান হিসাবেR²Y এবং Q²পারমিউট মডেলের তুলনায় বেশি ছিল। তুলনামূলকভাবেকম Q² মানপরামর্শসীমিত পূর্বাভাসযোগ্যতা, সম্ভবত কারণেঅন্তর্-গোষ্ঠী পরিবর্তনশীলতাএবংওভারল্যাপিং যৌগ পরিসীমাকাঁচা এবং প্রক্রিয়াজাত ফর্মের মধ্যে।
আরও পিএলএস-ডিএ মডেলিং এবং ভিআইপি বিশ্লেষণ
অন্বেষণের জন্য উভয় প্রজাতির কাঁচা এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত নমুনার জন্য পৃথক PLS-DA মডেলগুলি তৈরি করা হয়েছিলপ্রজাতি-নির্দিষ্ট রাসায়নিক পার্থক্য. নিম্নলিখিতগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল:
স্কোর প্লট (চিত্র 5A এবং 5C)দেখিয়েছেস্বতন্ত্র ক্লাস্টারিংমধ্যেগ. মরুভূমিএবংগ. টিউবুলোসাউভয় কাঁচা এবং প্রক্রিয়াজাত ফর্ম.
মডেল যাচাইকরণ (চিত্র 5B এবং 5D)ওভারফিটিং ছাড়াই ভাল ভবিষ্যদ্বাণী করার ক্ষমতা নিশ্চিত করেছে।
প্রজেকশন (ভিআইপি) প্লটে পরিবর্তনশীল গুরুত্ব (চিত্র 6A এবং 6B)চিহ্নিত মূল যৌগগুলি প্রজাতি বৈষম্যে অবদান রাখে:
জন্যকাঁচা নমুনা: সিস্টানোসাইড এ, সিস্টানোসাইড এফ, echinacoside, এবংverbascosideসবচেয়ে তথ্যপূর্ণ ছিল।
জন্যওয়াইন প্রক্রিয়াজাত নমুনা: সিস্টানোসাইড এএবংটিউবুলসাইড বিপ্রভাবশালী ভূমিকা পালন করেছে।
2.5 সিস্টানচে ফাইটোকেমিস্ট্রির উপর ওয়াইন প্রক্রিয়াকরণের প্রভাব
ব্যাচ জুড়ে যৌগিক সামগ্রীতে যথেষ্ট তারতম্যের কারণে,জোড়া তুলনাএর কাঁচা এবং ওয়াইন-প্রক্রিয়াজাত নমুনার মধ্যে তৈরি করা হয়েছিলএকই ব্যাচ. ফলাফল, ব্যবহার করে visualizedবেহালা প্লট (চিত্র 7), নিম্নলিখিত প্রকাশ করেছে:
ইনগ. মরুভূমি, এর মাত্রা2'-অ্যাসিটাইলভারবাস্কোসাইড, সিস্টানোসাইড এ, সিস্টানোসাইড এফ, ইচিনাকোসাইড, টিউবুলসাইড এ, এবং ভার্বাস্কোসাইড উল্লেখযোগ্যভাবে কমে গেছেপোস্ট-প্রসেসিং (P <0.05), যখনটিউবুলসাইড বি বৃদ্ধি.
ইনগ. টিউবুলোসা, এর মাত্রা2'-অ্যাসিটাইলভারবাস্কোসাইড, ইচিনাকোসাইড এবং ভার্বাস্কোসাইডএছাড়াওকমেছে, যখনisoverbascoside এবং tubuloside B বৃদ্ধিউল্লেখযোগ্যভাবে (P <0.05)।
এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ওয়াইন প্রক্রিয়াকরণ হতে পারেহাইড্রোলাইসিস, আইসোমারাইজেশন, বারাসায়নিক রূপান্তরসক্রিয় উপাদানের।
3. আলোচনা
অনুযায়ীচাইনিজ ফার্মাকোপিয়ার 2020 সংস্করণ, Cistanche deserticolaএর কম না থাকা আবশ্যক0.3%এর সম্মিলিত বিষয়বস্তুরechinacoside এবং verbascoside, যেখানেCistanche tubulosaএর কম না থাকা আবশ্যক1.5%এই দুটি যৌগের। এই গবেষণায়, সমস্ত কাঁচা এবং প্রক্রিয়াজাত নমুনা-একটি ব্যাচ (180710) ব্যতীত-এই মানগুলি পূরণ করেছে।
সত্ত্বেওব্যাচ থেকে ব্যাচ পরিবর্তনশীলতাপ্রতিটি প্রজাতির মধ্যে (কিছু যৌগ 10-গুণ পর্যন্ত আলাদা, যেমন টিউবুলসাইড এ এবং আইসোভারবাস্কোসাইড), যৌগিক উপাদানের পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দুটি প্রজাতির মধ্যে ধারাবাহিকভাবে পরিলক্ষিত হয়েছে। এটি নিশ্চিত করেপ্রজাতির উৎপত্তি একটি প্রধান কারণফাইটোকেমিক্যাল রচনাকে প্রভাবিত করে।
উপরন্তু,সিস্টানোসাইড এছিলশুধুমাত্র মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছেগ. মরুভূমিএবং অনুপস্থিতগ. টিউবুলোসা, এটি তৈরি করা একটিপ্রজাতির প্রমাণীকরণের জন্য মূল্যবান চিহ্নিতকারী, বিশেষ করে ফার্মাকগনোস্টিক বা মান নিয়ন্ত্রণ সেটিংসে।
🔬 রাসায়নিক রচনায় ওয়াইন প্রক্রিয়াকরণের প্রভাব
ওয়াইন প্রক্রিয়াকরণের পরে, উভয় প্রজাতি একটি সামঞ্জস্যপূর্ণ প্রবণতা দেখিয়েছে:
মাত্রা কমে গেছেএর:
Cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubuloside A, এবং 2'-acetylverbascoside
বর্ধিত মাত্রাএর:
টিউবুলসাইড বি এবং আইসোভারবাসকোসাইড
এই প্রবণতা থেকে হতে পারেরাসায়নিক হাইড্রোলাইসিস, অধঃপতন, বাকাঠামোগত পুনর্বিন্যাসস্টিমিং প্রক্রিয়া চলাকালীন। মজার ব্যাপার হল, দব্যাচ জুড়ে পরিবর্তনের মাত্রা এবং দিক ভিন্ন, সম্ভবত পার্থক্যের কারণে:
প্রাথমিক যৌগিক ঘনত্ব
ভেষজ রূপবিদ্যা (আকার, বেধ)
প্রক্রিয়াকরণ অবস্থার সংবেদনশীলতা
এর গুরুত্ব তুলে ধরেপ্রমিতকরণ প্রক্রিয়াকরণ পরামিতিএবং পরিচালনাব্যাচ-নির্দিষ্ট মানের মূল্যায়নভেষজ প্রস্তুতির সময়।
