1. ভূমিকা

তাদের নিজ নিজ আণবিক লক্ষ্যগুলির সাথে ইমিউনোমোডুলেটরি বৈশিষ্ট্য সহ খাদ্য উপাদানগুলি সনাক্ত করা সাম্প্রতিক বছরগুলিতে আগ্রহ বাড়িয়েছে। তাদের উচ্চ লিগ্যান্ড বৈচিত্র্যের কারণে, আয়ন চ্যানেলের ক্ষণস্থায়ী রিসেপ্টর সম্ভাব্য সুপারফ্যামিলি (টিআরপি চ্যানেল) সম্ভাব্য লক্ষ্য কাঠামোর একটি খুব আকর্ষণীয় শ্রেণী প্রতিনিধিত্ব করে।

স্তন্যপায়ী টিআরপি চ্যানেল সুপারফ্যামিলিতে ছয়টি সম্পর্কিত প্রোটিন পরিবার অন্তর্ভুক্ত করে, যথা অ্যাঙ্কাইরিন (টিআরপিএ), ক্যানোনিকাল (টিআরপিসি), মেলাস্ট্যাটিন (টিআরপিএম), মিউকোলিপিন (টিআরপিএমএল), পলিসিস্টিন (টিআরপিপি), এবং ভ্যানিলোয়েড (টিআরপিভি) পরিবার, যার সবকটিই সাধারণত ছয়টি ট্রান্সমেমব্রেন সেগমেন্টকে ভাগ করে যা সিপারমেম্বল হিসাবে গঠন করতে পারে। পরিবর্তিত ক্যাটেশন সিলেক্টিভিটি। TRPV1 চ্যানেল হতে পারে, এখন পর্যন্ত, TRP অতিপরিবারের সবচেয়ে নিবিড়ভাবে তদন্ত করা সদস্য। TRPV1 প্রাথমিকভাবে ক্যাপসাইসিনের রিসেপ্টর হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল, মরিচের তীক্ষ্ণ উপাদান। পরবর্তীতে, এছাড়াও আদা থেকে তীক্ষ্ণ উপাদান, জিঞ্জেরল, TRPV1 সক্রিয় করতে দেখানো হয়েছে।

অ-নিউরোনাল কোষের প্রকারে TRPV1-এর জৈবিক ভূমিকা এখনও বিস্তৃত তদন্তের অধীনে রয়েছে, তবুও উপলব্ধ ফলাফলগুলি সংবেদনশীল এবং তাপীয় উপলব্ধির বাইরে কার্যকারিতা বোঝায়। উদাহরণস্বরূপ, একটি 12-সপ্তাহের হস্তক্ষেপ TRPV1 অ্যাগোনিস্ট ননিভামাইডের দৈনিক ডোজ 0.15 মিলিগ্রাম, একটি কাঠামোগত ক্যাপসাইসিন অ্যানালগ, শরীরের চর্বি ভরের একটি খাদ্যতালিকা-প্ররোচিত লাভ প্রতিরোধ করে এবং স্বাস্থ্যকর অতিরিক্ত ওজনের বিষয়গুলিতে প্লাজমা সেরোটোনিনের মাত্রা বৃদ্ধি করে।

3T3-L1 এডিপোসাইটস অ্যাক্টিভেশন TRPV1 ননিভামাইড দ্বারা PPAR𝛾 অভিব্যক্তিকে দমন করে পার্থক্য এবং পরিপক্কতার সময় লিপিড জমা কমে যায়। ম্যাক্রোফেজগুলিতে, ক্যাপসাইসিন এবং ননিভামাইড একটি TRPV1-নির্ভর পদ্ধতিতে IL6, CXCL8, এবং TNF-আলফা-এর মতো প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলির একটি LPS-প্ররোচিত মুক্তিকে হ্রাস করে। তবুও, মানুষের রক্তের লিউকোসাইটগুলিতে TRPV1 এর বিশেষ কার্যগুলি অস্পষ্ট থাকে। মানুষের এনকে কোষে, 10 এবং 50 μM ক্যাপসাইসিন অন্তঃকোষীয় Ca2+ ঘনত্বের বৃদ্ধি ঘটায়, যা একটি কার্যকরী TRPV1 চ্যানেল নির্দেশ করে।

যাইহোক, 10-100 μM ঘনত্বের পরিসরে 1 ঘন্টার জন্য ক্যাপসাইসিন সহ কোষের প্রাক-চিকিত্সা দ্বারা প্ররোচিত সাইটোটক্সিক ডিগ্র্যানুলেশন এবং সাইটোকাইন নিঃসরণের মতো স্যাঁতসেঁতে NK সেল ইফেক্টর ফাংশনগুলি মূলত TRPV1 স্বাধীন ছিল। টি কোষে, TRPV1 টি কোষ রিসেপ্টর সিগন্যালিং, টি কোষের বিস্তার এবং পার্থক্য, সেইসাথে সাইটোকাইন উৎপাদনের প্রক্রিয়াগুলিতে জড়িত থাকার জন্য নথিভুক্ত করা হয়েছিল। আমাদের গোষ্ঠীর পূর্ববর্তী কাজগুলি মানব প্রাথমিক টি কোষগুলিতে TRPV1 এর কার্যকরী অভিব্যক্তি প্রদর্শন করেছে। অধিকন্তু, ডোজ প্রতিক্রিয়া 0.03 থেকে 300 μmol L−1 পর্যন্ত ঘনত্বের বিশ্লেষণে প্রকাশ করা হয়েছে যে [6]-জিঞ্জেরল 82.2 μmol L−1 এর IC50 মান সহ প্রাথমিক মানব লিউকোসাইট দ্বারা সাইটোকাইন নিঃসরণকে বাধা দেয়।

যাইহোক, স্বাস্থ্যকর বিষয়ের প্লাজমা নমুনায় [6]-জিঞ্জেরলের পরিমাণ নির্ণয় করে 1 লিটার আদা চা খাওয়ার পর প্লাজমায় গড় সর্বোচ্চ ঘনত্ব মাত্র 42.0 ± 16.3 nmol L−1 পাওয়া যায়। যেহেতু এই [6]- পূর্ববর্তী গবেষণায় সাইটোকাইন নিঃসরণে জিঞ্জেরল ঘনত্বের কোনো উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না,[9] এটা স্পষ্ট নয় যে, 50 nmol L−1 এর খাদ্যতালিকাগত প্রাসঙ্গিক ঘনত্ব, 1 L আদা চা খাওয়ার পরে রক্তের প্লাজমায় পৌঁছানো, অন্যান্য মানুষের প্রাথমিক কোষীয় রোগ প্রতিরোধক কোষের প্রতিক্রিয়া মডিউল করার জন্য যথেষ্ট।

মানুষের নিউট্রোফিলের জন্য, TRPV1 এর কার্যকরী ভূমিকা সম্পর্কে জ্ঞান সীমিত। যেখানে Köse এবং Nazıroglu˘ [10] TRPV1 বিরোধী ক্যাপসাজেপাইন দ্বারা 10 μM ক্যাপসাইসিনের প্রতিক্রিয়া হিসাবে নিউট্রোফিলের মধ্যে Ca2+-প্রবাহ দেখায়, অন্যান্য ফলাফলগুলি 010-10M পরিসরে একটি Ca2+ প্রবাহকে প্ররোচিত করতে ক্যাপসাইসিন প্রদর্শন করেনি, যদিও সনাক্তযোগ্য TRPV1 আরএনএ অভিব্যক্তি।

নিউট্রোফিলস হল মানুষের রক্তে সর্বাধিক প্রচুর পরিমাণে লিউকোসাইট, যা সমস্ত সঞ্চালিত শ্বেত রক্তকণিকার 60-70% জন্য দায়ী। তারাই প্রথম ইমিউন কোষ যা সংক্রমণের জায়গায় নিয়োগ করা হয়; তাই তারা প্রায়ই প্রতিরক্ষা প্রথম লাইন হিসাবে উল্লেখ করা হয়. অন্যান্যদের মধ্যে, ব্যাকটেরিয়া বা মাইটোকন্ড্রিয়া থেকে প্রাপ্ত পেপটাইড এন-ফরমিলিমেথিওনিন-লিউসিল-ফেনিল্যালানিন (fMLF) বা কেমোকাইন যেমন CXCL8 (IL-8) দ্বারা নিউট্রোফিলের নিয়োগ শুরু হয়।

নিউট্রোফিলের প্রতিরক্ষা ব্যবস্থার মধ্যে রয়েছে ফ্যাগোসাইটোসিস,[১৪] অ্যান্টি-মাইক্রোবিয়াল এনজাইম অবক্ষয়ের মাধ্যমে মুক্তি,[১৫] প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির (আরওএস),[১৬] এবং নিউট্রোফিল এক্সট্রা সেলুলার ফাঁদের গঠন। এই প্রত্যক্ষ প্রতিরক্ষা ব্যবস্থা ছাড়াও, নিউট্রোফিলগুলি বিভিন্ন সাইটোকাইন এবং কেমোকাইনের মুক্তির মাধ্যমে পরবর্তী প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়াগুলিতে আরও অবদান রাখে। এছাড়াও, নিউট্রোফিলস একটি প্রাথমিক প্রক্রিয়ার মধ্য দিয়ে যেতে পারে যা তাদের পরবর্তী পূর্ণ সক্রিয়করণে আরও জোরালোভাবে প্রতিক্রিয়া জানাতে সক্ষম করে।

সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, প্রমাণ বেড়েছে যে খাদ্য এবং বা ঔষধি গাছের উপাদানগুলি মানব নিউট্রোফিলের উল্লিখিত প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়াগুলির এক বা একাধিক পরিবর্তন করতে পারে। এই পরিবর্তনগুলির মধ্যে রয়েছে ফ্যাগোসাইটোটিক কার্যকলাপ বৃদ্ধি[19] এবং ROS জেনারেশন,[20] fMLF এর দিকে বর্ধিত কেমোট্যাক্সিস,[21] এবং নিউট্রোফিল এক্সট্রা সেলুলার ফাঁদ গঠন। যাইহোক, সক্রিয় যৌগ(গুলি) সনাক্ত করা যায়নি। Ferula akitschkensis (𝛽-pinene, sabinene, 𝛾-terpinene, geranylacetone, এবং isobornylacetate) এর উপাদানগুলি fMLF- এবং CXCL8- প্ররোচিত Ca2+ প্রবাহ এবং বাধা দেয় যেখানে fMLF-তে নিউট্রোফিলগুলিকে সংবেদনশীল করে তোলে geranylacetone-প্ররোচিত প্রভাব TRPV1 মাধ্যমে মধ্যস্থতা করা হয়েছিল।

উপলভ্য তথ্যের উপর ভিত্তি করে, আমরা অনুমান করেছি যে [6]-জিনজারোল দ্বারা TRPV1-এর সক্রিয়করণ লিগ্যান্ড প্ররোচিত হয়, সাধারণ নিউট্রোফিল ফাংশনগুলিকে প্রভাবিত করতে পারে, হয় সরাসরি বা উদ্দীপনা সক্রিয় করার জন্য তাদের প্রতিক্রিয়া বাড়ানোর মাধ্যমে। এই হাইপোথিসিসের সুযোগের মধ্যে, আমরা বিশেষ করে ব্যাখ্যা করার লক্ষ্য রেখেছি, লিউকোসাইট জনসংখ্যার অংশ হিসাবে মানুষের প্রাথমিক নিউট্রোফিলে সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলিকে সংশোধন করার জন্য একটি যাচাইকৃত পুষ্টিগতভাবে প্রাসঙ্গিক ঘনত্ব যথেষ্ট কিনা। '

তদ্ব্যতীত, আমরা মানব লিউকোসাইটগুলিতে TRP চ্যানেল এক্সপ্রেশনের গুণগত এবং পরিমাণগতভাবে ব্যাপক ওভারভিউ পাওয়ার জন্য স্তন্যপায়ী টিআরপির সমস্ত সদস্যের আরএনএ এক্সপ্রেশন স্তরগুলিকে মানব রক্তের সবচেয়ে বিশিষ্ট কোষের পাঁচটিতে সুপারফ্যামিলিভাবে তুলনা করার চেষ্টা করেছি।

2. ফলাফল

2.1। মানুষের লিউকোসাইটের টিআরপি চ্যানেলের প্রাচুর্য এবং আপেক্ষিক প্রতিলিপি স্তর

রক্তের লিউকোসাইটগুলিতে টিআরপি চ্যানেল আরএনএ এক্সপ্রেশন মূল্যায়ন করার জন্য, পাঁচটি বিশিষ্ট লিউকোসাইট কোষের প্রকারকে সুস্থ দাতাদের রক্ত ​​থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং টিআরপি চ্যানেলগুলির আরএনএ এক্সপ্রেশন পরিমাণগত RT-PCR (চিত্র 1) এর মাধ্যমে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

TRPV এবং TRPM পরিবারের নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্টগুলি বিশ্লেষণ করা সমস্ত কোষের 75-100% উচ্চ ফ্রিকোয়েন্সি সহ সনাক্ত করা হয়েছিল। সমস্ত কোষের ধরন বিবেচনা করে গড় সামগ্রিক ফ্রিকোয়েন্সি ছিল TRPV পরিবারের জন্য 96% এবং TRPM পরিবারের জন্য 98%। TRPC-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্টগুলি অনেক কম প্রচুর ছিল, মনোসাইট, NK কোষ, T কোষ এবং B কোষে 0% থেকে NK কোষে 100% পর্যন্ত, এবং T কোষগুলির সামগ্রিক গড় ফ্রিকোয়েন্সি মাত্র 53% (চিত্র 1A)। TRPC5-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্ট শুধুমাত্র নিউট্রোফিলগুলিতে সনাক্ত করা হয়েছিল, যার ফ্রিকোয়েন্সি 70%।

এছাড়াও, TRPA1-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্ট সাধারণত নিউট্রোফিলের 100%, মনোসাইটের 25%, NK কোষে 80%, T কোষে 100%, এবং B কোষে 60% ফ্রিকোয়েন্সি সহ বিশ্লেষণ করা কোষের প্রকারের মধ্যে একটি বরং কম প্রাচুর্য প্রকাশ করে। একইভাবে, TRPML3-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্ট নিউট্রোফিল (50%), মনোসাইট (25%), NK কোষ (40%), এবং B কোষ (20%) কম ফ্রিকোয়েন্সি দেখায়, কিন্তু T কোষে 100% ফ্রিকোয়েন্সি। TRPV1- নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্টটি সমস্ত ধরণের কোষে সনাক্ত করা হয়েছিল, মনোসাইট, এনকে কোষ এবং টি কোষে 100% ফ্রিকোয়েন্সি এবং নিউট্রোফিলগুলিতে 90% এবং বি কোষে 80% ফ্রিকোয়েন্সি দেখায়।

আপেক্ষিক আরএনএ অভিব্যক্তি সম্পর্কে, সংশ্লিষ্ট ফ্রিকোয়েন্সির তুলনায়, টিআরপি চ্যানেলগুলি আরও সেল টাইপ-নির্দিষ্ট এক্সপ্রেশন প্যাটার্ন প্রকাশ করেছে, যা বিশ্লেষণ করা বিভিন্ন কোষের প্রকারের সংশ্লিষ্ট Δct মানগুলির তুলনা করে স্পষ্ট (চিত্র 1B)। উদাহরণস্বরূপ, টিআরপিপি 3 সমস্ত ধরণের কোষে 100% ফ্রিকোয়েন্সি সহ সনাক্ত করা হয়েছিল, তবে মনোসাইটের সর্বোচ্চ প্রকাশের স্তর স্পষ্টভাবে প্রকাশ করেছে।

বিপরীতে, TRPV2 চ্যানেলটি তদন্ত করা সমস্ত ধরণের কোষে সনাক্ত করা হয়েছিল, তুলনামূলকভাবে উচ্চ RNA-এক্সপ্রেশন স্তরের পাশাপাশি উচ্চ ফ্রিকোয়েন্সি সহ। একইভাবে, TRPV1 এর ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরগুলি পরীক্ষা করা সমস্ত কোষের মধ্যে একই রকম ছিল (চিত্র 1B)।

2.2। নিউট্রোফিলের উপর TRPV1 সারফেস এক্সপ্রেশন

মানুষের নিউট্রোফিলগুলিতে TRPV1 এর কার্যকারিতা সম্পর্কে বর্তমান জ্ঞান এখনও অস্পষ্ট। মানব নিউট্রোফিলগুলিতে TRPV1 এর ভূমিকাগুলি আরও অন্বেষণ করার জন্য, আমরা পরবর্তীতে তদন্ত করেছি যে TRPV1 চ্যানেলটি লাইভ সেল ফ্লো সাইটোমেট্রি (চিত্র 2) ব্যবহার করে প্রাথমিক মানব নিউট্রোফিলের পৃষ্ঠে প্রকাশ করা হয়েছে কিনা।

বিচ্ছিন্ন নিউট্রোফিলগুলিকে CD15 এর জন্য নিউট্রোফিলের পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী হিসাবে দাগ দেওয়া হয়েছিল (চিত্র 2A,B) এবং একই সাথে হয় TRPV1 প্রোটিনের প্রথম বহির্কোষী লুপে একটি এপিটোপের বিরুদ্ধে উত্থাপিত একটি অ্যান্টিবডি দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল (চিত্র 2B) বা সংশ্লিষ্ট আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি সারফেস টাইপ নিয়ন্ত্রণের জন্য, যা ল্যাপটপ নিয়ন্ত্রণের জন্য। বাঁধাই (চিত্র 2A)। CD15+ জনসংখ্যার মধ্যে, FITC-এর জন্য ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। টিআরপিভি 1 অ্যান্টিবডির সাথে নিউট্রোফিলের দাগ আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণের তুলনায় একটি স্পষ্টভাবে আলাদা করা ফ্লুরোসেন্স সিগন্যালের দিকে পরিচালিত করে, যার ফলে প্রাথমিক মানব নিউট্রোফিলগুলিতে (চিত্র 2C) TRPV1 এর পৃষ্ঠের অভিব্যক্তি নিশ্চিত হয়। চারটি পৃথক দাতা থেকে নিউট্রোফিল বিশ্লেষণ করে TRPV1 (চিত্র 2D) এর একটি তুলনীয় পৃষ্ঠ অভিব্যক্তি প্রকাশ করেছে।

2.3। [৬]-জিঞ্জেরল ইনট্রাসেলুলার সিএ-তে প্ররোচিত বৃদ্ধি2+

যেহেতু TRPV1-এর লিগ্যান্ড-প্ররোচিত অ্যাক্টিভেশনের ফলে Ca2+, [23] নিউট্রোফিলের আন্তঃকোষীয় Ca2+ ঘনত্ব Ca2+-সংবেদনশীল রঞ্জক ফুরা-2-এর মাধ্যমে নির্ধারিত হয়েছিল। আমাদের পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের উপর ভিত্তি করে, [9] সুপরিচিত TRPV1 লিগান্ডের 50 nM ঘনত্ব [6]-জিঞ্জেরল এবং 2 ঘন্টার একটি ইনকিউবেশন সময় বেছে নেওয়া হয়েছিল। বিশ্লেষণগুলি দেখায় যে 50 nM [6]-জিঞ্জেরোল সহ নিউট্রোফিলগুলির ইনকিউবেশনের ফলে অন্তঃকোষীয় Ca2+ ঘনত্ব বৃদ্ধি পায় যা গড়ে সর্বোচ্চ মানের 18.4% ± 1.0% ছিল, যা আয়নোফোর আয়নোমাইসিনের 1 μM প্রয়োগ করে নির্ধারিত হয়। DMSO দ্বারা প্ররোচিত বৃদ্ধি ছিল 4.7% ± 1.2% (চিত্র 3)।

2.4। TRPV1 এক্সপ্রেশনে [6]-জিঞ্জেরলের প্রভাব

এরপরে, আমরা কিউ-আরটিপিসিআর এর মাধ্যমে ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরের পাশাপাশি লাইভ সেল স্টেনিংয়ের মাধ্যমে পৃষ্ঠের প্রোটিন স্তরে TRPV1 এক্সপ্রেশনে [6]-জিনজারোল দ্বারা TRPV1 উদ্দীপনার প্রভাব বিশ্লেষণ করার লক্ষ্য রেখেছিলাম। এই উদ্দেশ্যে, মানুষের নিউট্রোফিলগুলিকে 50 nM [6] - 2 ঘন্টার জন্য জিঞ্জেরল দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং সংশ্লিষ্ট এক্সপ্রেশনের মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছিল।

এই 2 ঘন্টা ইনকিউবেশন TRPV1 ট্রান্সক্রিপ্ট বা প্রোটিন স্তর (চিত্র 4) উভয়কেই প্রভাবিত করেনি, এবং IL6, IL17A, IL24, C5, এবং GDF5 ব্যতীত, সাধারণ সাইটোকাইন এবং কেমোকাইন জিনের RNA এক্সপ্রেশন তদন্ত করেও পরিবর্তন হয়নি (চিত্র S1, টেবিল S2 তথ্য, সারণি S2)।

2.5। নিউট্রোফিল সারফেস মার্কারগুলির প্রকাশের উপর জিঞ্জেরল-এর প্রভাব

1. ভূমিকা

তাদের নিজ নিজ আণবিক লক্ষ্যগুলির সাথে ইমিউনোমোডুলেটরি বৈশিষ্ট্য সহ খাদ্য উপাদানগুলি সনাক্ত করা সাম্প্রতিক বছরগুলিতে আগ্রহ বাড়িয়েছে। তাদের উচ্চ লিগ্যান্ড বৈচিত্র্যের কারণে, আয়ন চ্যানেলের ক্ষণস্থায়ী রিসেপ্টর সম্ভাব্য সুপারফ্যামিলি (টিআরপি চ্যানেল) সম্ভাব্য লক্ষ্য কাঠামোর একটি খুব আকর্ষণীয় শ্রেণী প্রতিনিধিত্ব করে।

স্তন্যপায়ী টিআরপি চ্যানেল সুপারফ্যামিলিতে ছয়টি সম্পর্কিত প্রোটিন পরিবার অন্তর্ভুক্ত করে, যথা অ্যাঙ্কাইরিন (টিআরপিএ), ক্যানোনিকাল (টিআরপিসি), মেলাস্ট্যাটিন (টিআরপিএম), মিউকোলিপিন (টিআরপিএমএল), পলিসিস্টিন (টিআরপিপি), এবং ভ্যানিলোয়েড (টিআরপিভি) পরিবার, যার সবকটিই সাধারণত ছয়টি ট্রান্সমেমব্রেন সেগমেন্টকে ভাগ করে যা সিপারমেম্বল হিসাবে গঠন করতে পারে। পরিবর্তিত ক্যাটেশন সিলেক্টিভিটি। TRPV1 চ্যানেল হতে পারে, এখন পর্যন্ত, TRP অতিপরিবারের সবচেয়ে নিবিড়ভাবে তদন্ত করা সদস্য। TRPV1 প্রাথমিকভাবে ক্যাপসাইসিনের রিসেপ্টর হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল, মরিচের তীক্ষ্ণ উপাদান। পরবর্তীতে, এছাড়াও আদা থেকে তীক্ষ্ণ উপাদান, জিঞ্জেরল, TRPV1 সক্রিয় করতে দেখানো হয়েছে।

অ-নিউরোনাল কোষের প্রকারে TRPV1-এর জৈবিক ভূমিকা এখনও বিস্তৃত তদন্তের অধীনে রয়েছে, তবুও উপলব্ধ ফলাফলগুলি সংবেদনশীল এবং তাপীয় উপলব্ধির বাইরে কার্যকারিতা বোঝায়। উদাহরণস্বরূপ, একটি 12-সপ্তাহের হস্তক্ষেপ TRPV1 অ্যাগোনিস্ট ননিভামাইডের দৈনিক ডোজ 0.15 মিলিগ্রাম, একটি কাঠামোগত ক্যাপসাইসিন অ্যানালগ, শরীরের চর্বি ভরের একটি খাদ্যতালিকা-প্ররোচিত লাভ প্রতিরোধ করে এবং স্বাস্থ্যকর অতিরিক্ত ওজনের বিষয়গুলিতে প্লাজমা সেরোটোনিনের মাত্রা বৃদ্ধি করে।

3T3-L1 এডিপোসাইটস অ্যাক্টিভেশন TRPV1 ননিভামাইড দ্বারা PPAR𝛾 অভিব্যক্তিকে দমন করে পার্থক্য এবং পরিপক্কতার সময় লিপিড জমা কমে যায়। ম্যাক্রোফেজগুলিতে, ক্যাপসাইসিন এবং ননিভামাইড একটি TRPV1-নির্ভর পদ্ধতিতে IL6, CXCL8, এবং TNF-আলফা-এর মতো প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলির একটি LPS-প্ররোচিত মুক্তিকে হ্রাস করে। তবুও, মানুষের রক্তের লিউকোসাইটগুলিতে TRPV1 এর বিশেষ কার্যগুলি অস্পষ্ট থাকে। মানুষের এনকে কোষে, 10 এবং 50 μM ক্যাপসাইসিন অন্তঃকোষীয় Ca2+ ঘনত্বের বৃদ্ধি ঘটায়, যা একটি কার্যকরী TRPV1 চ্যানেল নির্দেশ করে।

যাইহোক, 10-100 μM ঘনত্বের পরিসরে 1 ঘন্টার জন্য ক্যাপসাইসিন সহ কোষের প্রাক-চিকিত্সা দ্বারা প্ররোচিত সাইটোটক্সিক ডিগ্র্যানুলেশন এবং সাইটোকাইন নিঃসরণের মতো স্যাঁতসেঁতে NK সেল ইফেক্টর ফাংশনগুলি মূলত TRPV1 স্বাধীন ছিল। টি কোষে, TRPV1 টি কোষ রিসেপ্টর সিগন্যালিং, টি কোষের বিস্তার এবং পার্থক্য, সেইসাথে সাইটোকাইন উৎপাদনের প্রক্রিয়াগুলিতে জড়িত থাকার জন্য নথিভুক্ত করা হয়েছিল। আমাদের গোষ্ঠীর পূর্ববর্তী কাজগুলি মানব প্রাথমিক টি কোষগুলিতে TRPV1 এর কার্যকরী অভিব্যক্তি প্রদর্শন করেছে। অধিকন্তু, ডোজ প্রতিক্রিয়া 0.03 থেকে 300 μmol L−1 পর্যন্ত ঘনত্বের বিশ্লেষণে প্রকাশ করা হয়েছে যে [6]-জিঞ্জেরল 82.2 μmol L−1 এর IC50 মান সহ প্রাথমিক মানব লিউকোসাইট দ্বারা সাইটোকাইন নিঃসরণকে বাধা দেয়।

যাইহোক, স্বাস্থ্যকর বিষয়ের প্লাজমা নমুনায় [6]-জিঞ্জেরলের পরিমাণ নির্ণয় করে 1 লিটার আদা চা খাওয়ার পর প্লাজমায় গড় সর্বোচ্চ ঘনত্ব মাত্র 42.0 ± 16.3 nmol L−1 পাওয়া যায়। যেহেতু এই [6]- পূর্ববর্তী গবেষণায় সাইটোকাইন নিঃসরণে জিঞ্জেরল ঘনত্বের কোনো উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না,[9] এটা স্পষ্ট নয় যে, 50 nmol L−1 এর খাদ্যতালিকাগত প্রাসঙ্গিক ঘনত্ব, 1 L আদা চা খাওয়ার পরে রক্তের প্লাজমায় পৌঁছানো, অন্যান্য মানুষের প্রাথমিক কোষীয় রোগ প্রতিরোধক কোষের প্রতিক্রিয়া মডিউল করার জন্য যথেষ্ট।

মানুষের নিউট্রোফিলের জন্য, TRPV1 এর কার্যকরী ভূমিকা সম্পর্কে জ্ঞান সীমিত। যেখানে Köse এবং Nazıroglu˘ [10] TRPV1 বিরোধী ক্যাপসাজেপাইন দ্বারা 10 μM ক্যাপসাইসিনের প্রতিক্রিয়া হিসাবে নিউট্রোফিলের মধ্যে Ca2+-প্রবাহ দেখায়, অন্যান্য ফলাফলগুলি 010-10M পরিসরে একটি Ca2+ প্রবাহকে প্ররোচিত করতে ক্যাপসাইসিন প্রদর্শন করেনি, যদিও সনাক্তযোগ্য TRPV1 আরএনএ অভিব্যক্তি।

নিউট্রোফিলস হল মানুষের রক্তে সর্বাধিক প্রচুর পরিমাণে লিউকোসাইট, যা সমস্ত সঞ্চালিত শ্বেত রক্তকণিকার 60-70% জন্য দায়ী। তারাই প্রথম ইমিউন কোষ যা সংক্রমণের জায়গায় নিয়োগ করা হয়; তাই তারা প্রায়ই প্রতিরক্ষা প্রথম লাইন হিসাবে উল্লেখ করা হয়. অন্যান্যদের মধ্যে, ব্যাকটেরিয়া বা মাইটোকন্ড্রিয়া থেকে প্রাপ্ত পেপটাইড এন-ফরমিলিমেথিওনিন-লিউসিল-ফেনিল্যালানিন (fMLF) বা কেমোকাইন যেমন CXCL8 (IL-8) দ্বারা নিউট্রোফিলের নিয়োগ শুরু হয়।

নিউট্রোফিলের প্রতিরক্ষা ব্যবস্থার মধ্যে রয়েছে ফ্যাগোসাইটোসিস,[১৪] অ্যান্টি-মাইক্রোবিয়াল এনজাইম অবক্ষয়ের মাধ্যমে মুক্তি,[১৫] প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির (আরওএস),[১৬] এবং নিউট্রোফিল এক্সট্রা সেলুলার ফাঁদের গঠন। এই প্রত্যক্ষ প্রতিরক্ষা ব্যবস্থা ছাড়াও, নিউট্রোফিলগুলি বিভিন্ন সাইটোকাইন এবং কেমোকাইনের মুক্তির মাধ্যমে পরবর্তী প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়াগুলিতে আরও অবদান রাখে। এছাড়াও, নিউট্রোফিলস একটি প্রাথমিক প্রক্রিয়ার মধ্য দিয়ে যেতে পারে যা তাদের পরবর্তী পূর্ণ সক্রিয়করণে আরও জোরালোভাবে প্রতিক্রিয়া জানাতে সক্ষম করে।

সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, প্রমাণ বেড়েছে যে খাদ্য এবং বা ঔষধি গাছের উপাদানগুলি মানব নিউট্রোফিলের উল্লিখিত প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়াগুলির এক বা একাধিক পরিবর্তন করতে পারে। এই পরিবর্তনগুলির মধ্যে রয়েছে ফ্যাগোসাইটোটিক কার্যকলাপ বৃদ্ধি[19] এবং ROS জেনারেশন,[20] fMLF এর দিকে বর্ধিত কেমোট্যাক্সিস,[21] এবং নিউট্রোফিল এক্সট্রা সেলুলার ফাঁদ গঠন। যাইহোক, সক্রিয় যৌগ(গুলি) সনাক্ত করা যায়নি। Ferula akitschkensis (𝛽-pinene, sabinene, 𝛾-terpinene, geranylacetone, এবং isobornylacetate) এর উপাদানগুলি fMLF- এবং CXCL8- প্ররোচিত Ca2+ প্রবাহ এবং বাধা দেয় যেখানে fMLF-তে নিউট্রোফিলগুলিকে সংবেদনশীল করে তোলে geranylacetone-প্ররোচিত প্রভাব TRPV1 মাধ্যমে মধ্যস্থতা করা হয়েছিল।

উপলভ্য তথ্যের উপর ভিত্তি করে, আমরা অনুমান করেছি যে [6]-জিনজারোল দ্বারা TRPV1-এর সক্রিয়করণ লিগ্যান্ড প্ররোচিত হয়, সাধারণ নিউট্রোফিল ফাংশনগুলিকে প্রভাবিত করতে পারে, হয় সরাসরি বা উদ্দীপনা সক্রিয় করার জন্য তাদের প্রতিক্রিয়া বাড়ানোর মাধ্যমে। এই হাইপোথিসিসের সুযোগের মধ্যে, আমরা বিশেষ করে ব্যাখ্যা করার লক্ষ্য রেখেছি, লিউকোসাইট জনসংখ্যার অংশ হিসাবে মানুষের প্রাথমিক নিউট্রোফিলে সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলিকে সংশোধন করার জন্য একটি যাচাইকৃত পুষ্টিগতভাবে প্রাসঙ্গিক ঘনত্ব যথেষ্ট কিনা। '

তদ্ব্যতীত, আমরা মানব লিউকোসাইটগুলিতে TRP চ্যানেল এক্সপ্রেশনের গুণগত এবং পরিমাণগতভাবে ব্যাপক ওভারভিউ পাওয়ার জন্য স্তন্যপায়ী টিআরপির সমস্ত সদস্যের আরএনএ এক্সপ্রেশন স্তরগুলিকে মানব রক্তের সবচেয়ে বিশিষ্ট কোষের পাঁচটিতে সুপারফ্যামিলিভাবে তুলনা করার চেষ্টা করেছি।

2. ফলাফল

2.1। মানুষের লিউকোসাইটের টিআরপি চ্যানেলের প্রাচুর্য এবং আপেক্ষিক প্রতিলিপি স্তর

রক্তের লিউকোসাইটগুলিতে টিআরপি চ্যানেল আরএনএ এক্সপ্রেশন মূল্যায়ন করার জন্য, পাঁচটি বিশিষ্ট লিউকোসাইট কোষের প্রকারকে সুস্থ দাতাদের রক্ত ​​থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং টিআরপি চ্যানেলগুলির আরএনএ এক্সপ্রেশন পরিমাণগত RT-PCR (চিত্র 1) এর মাধ্যমে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

TRPV এবং TRPM পরিবারের নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্টগুলি বিশ্লেষণ করা সমস্ত কোষের 75-100% উচ্চ ফ্রিকোয়েন্সি সহ সনাক্ত করা হয়েছিল। সমস্ত কোষের ধরন বিবেচনা করে গড় সামগ্রিক ফ্রিকোয়েন্সি ছিল TRPV পরিবারের জন্য 96% এবং TRPM পরিবারের জন্য 98%। TRPC-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্টগুলি অনেক কম প্রচুর ছিল, মনোসাইট, NK কোষ, T কোষ এবং B কোষে 0% থেকে NK কোষে 100% পর্যন্ত, এবং T কোষগুলির সামগ্রিক গড় ফ্রিকোয়েন্সি মাত্র 53% (চিত্র 1A)। TRPC5-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্ট শুধুমাত্র নিউট্রোফিলগুলিতে সনাক্ত করা হয়েছিল, যার ফ্রিকোয়েন্সি 70%।

এছাড়াও, TRPA1-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্ট সাধারণত নিউট্রোফিলের 100%, মনোসাইটের 25%, NK কোষে 80%, T কোষে 100%, এবং B কোষে 60% ফ্রিকোয়েন্সি সহ বিশ্লেষণ করা কোষের প্রকারের মধ্যে একটি বরং কম প্রাচুর্য প্রকাশ করে। একইভাবে, TRPML3-নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্ট নিউট্রোফিল (50%), মনোসাইট (25%), NK কোষ (40%), এবং B কোষ (20%) কম ফ্রিকোয়েন্সি দেখায়, কিন্তু T কোষে 100% ফ্রিকোয়েন্সি। TRPV1- নির্দিষ্ট ট্রান্সক্রিপ্টটি সমস্ত ধরণের কোষে সনাক্ত করা হয়েছিল, মনোসাইট, এনকে কোষ এবং টি কোষে 100% ফ্রিকোয়েন্সি এবং নিউট্রোফিলগুলিতে 90% এবং বি কোষে 80% ফ্রিকোয়েন্সি দেখায়।

আপেক্ষিক আরএনএ অভিব্যক্তি সম্পর্কে, সংশ্লিষ্ট ফ্রিকোয়েন্সির তুলনায়, টিআরপি চ্যানেলগুলি আরও সেল টাইপ-নির্দিষ্ট এক্সপ্রেশন প্যাটার্ন প্রকাশ করেছে, যা বিশ্লেষণ করা বিভিন্ন কোষের প্রকারের সংশ্লিষ্ট Δct মানগুলির তুলনা করে স্পষ্ট (চিত্র 1B)। উদাহরণস্বরূপ, টিআরপিপি 3 সমস্ত ধরণের কোষে 100% ফ্রিকোয়েন্সি সহ সনাক্ত করা হয়েছিল, তবে মনোসাইটের সর্বোচ্চ প্রকাশের স্তর স্পষ্টভাবে প্রকাশ করেছে।

বিপরীতে, TRPV2 চ্যানেলটি তদন্ত করা সমস্ত ধরণের কোষে সনাক্ত করা হয়েছিল, তুলনামূলকভাবে উচ্চ RNA-এক্সপ্রেশন স্তরের পাশাপাশি উচ্চ ফ্রিকোয়েন্সি সহ। একইভাবে, TRPV1 এর ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরগুলি পরীক্ষা করা সমস্ত কোষের মধ্যে একই রকম ছিল (চিত্র 1B)।

2.2। নিউট্রোফিলের উপর TRPV1 সারফেস এক্সপ্রেশন

মানুষের নিউট্রোফিলগুলিতে TRPV1 এর কার্যকারিতা সম্পর্কে বর্তমান জ্ঞান এখনও অস্পষ্ট। মানব নিউট্রোফিলগুলিতে TRPV1 এর ভূমিকাগুলি আরও অন্বেষণ করার জন্য, আমরা পরবর্তীতে তদন্ত করেছি যে TRPV1 চ্যানেলটি লাইভ সেল ফ্লো সাইটোমেট্রি (চিত্র 2) ব্যবহার করে প্রাথমিক মানব নিউট্রোফিলের পৃষ্ঠে প্রকাশ করা হয়েছে কিনা।

বিচ্ছিন্ন নিউট্রোফিলগুলিকে CD15 এর জন্য নিউট্রোফিলের পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী হিসাবে দাগ দেওয়া হয়েছিল (চিত্র 2A,B) এবং একই সাথে হয় TRPV1 প্রোটিনের প্রথম বহির্কোষী লুপে একটি এপিটোপের বিরুদ্ধে উত্থাপিত একটি অ্যান্টিবডি দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল (চিত্র 2B) বা সংশ্লিষ্ট আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি সারফেস টাইপ নিয়ন্ত্রণের জন্য, যা ল্যাপটপ নিয়ন্ত্রণের জন্য। বাঁধাই (চিত্র 2A)। CD15+ জনসংখ্যার মধ্যে, FITC-এর জন্য ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। টিআরপিভি 1 অ্যান্টিবডির সাথে নিউট্রোফিলের দাগ আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণের তুলনায় একটি স্পষ্টভাবে আলাদা করা ফ্লুরোসেন্স সিগন্যালের দিকে পরিচালিত করে, যার ফলে প্রাথমিক মানব নিউট্রোফিলগুলিতে (চিত্র 2C) TRPV1 এর পৃষ্ঠের অভিব্যক্তি নিশ্চিত হয়। চারটি পৃথক দাতা থেকে নিউট্রোফিল বিশ্লেষণ করে TRPV1 (চিত্র 2D) এর একটি তুলনীয় পৃষ্ঠ অভিব্যক্তি প্রকাশ করেছে।

2.3। [৬]-জিঞ্জেরল ইনট্রাসেলুলার সিএ-তে প্ররোচিত বৃদ্ধি2+

যেহেতু TRPV1-এর লিগ্যান্ড-প্ররোচিত অ্যাক্টিভেশনের ফলে Ca2+, [23] নিউট্রোফিলের আন্তঃকোষীয় Ca2+ ঘনত্ব Ca2+-সংবেদনশীল রঞ্জক ফুরা-2-এর মাধ্যমে নির্ধারিত হয়েছিল। আমাদের পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের উপর ভিত্তি করে, [9] সুপরিচিত TRPV1 লিগান্ডের 50 nM ঘনত্ব [6]-জিঞ্জেরল এবং 2 ঘন্টার একটি ইনকিউবেশন সময় বেছে নেওয়া হয়েছিল। বিশ্লেষণগুলি দেখায় যে 50 nM [6]-জিঞ্জেরোল সহ নিউট্রোফিলগুলির ইনকিউবেশনের ফলে অন্তঃকোষীয় Ca2+ ঘনত্ব বৃদ্ধি পায় যা গড়ে সর্বোচ্চ মানের 18.4% ± 1.0% ছিল, যা আয়নোফোর আয়নোমাইসিনের 1 μM প্রয়োগ করে নির্ধারিত হয়। DMSO দ্বারা প্ররোচিত বৃদ্ধি ছিল 4.7% ± 1.2% (চিত্র 3)।

2.4। TRPV1 এক্সপ্রেশনে [6]-জিঞ্জেরলের প্রভাব

এরপরে, আমরা কিউ-আরটিপিসিআর এর মাধ্যমে ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরের পাশাপাশি লাইভ সেল স্টেনিংয়ের মাধ্যমে পৃষ্ঠের প্রোটিন স্তরে TRPV1 এক্সপ্রেশনে [6]-জিনজারোল দ্বারা TRPV1 উদ্দীপনার প্রভাব বিশ্লেষণ করার লক্ষ্য রেখেছিলাম। এই উদ্দেশ্যে, মানুষের নিউট্রোফিলগুলিকে 50 nM [6] - 2 ঘন্টার জন্য জিঞ্জেরল দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং সংশ্লিষ্ট এক্সপ্রেশনের মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছিল।

এই 2 ঘন্টা ইনকিউবেশন TRPV1 ট্রান্সক্রিপ্ট বা প্রোটিন স্তর (চিত্র 4) উভয়কেই প্রভাবিত করেনি, এবং IL6, IL17A, IL24, C5, এবং GDF5 ব্যতীত, সাধারণ সাইটোকাইন এবং কেমোকাইন জিনের RNA এক্সপ্রেশন তদন্ত করেও পরিবর্তন হয়নি (চিত্র S1, টেবিল S2 তথ্য, সারণি S2)।

2.5। নিউট্রোফিল সারফেস মার্কারগুলির প্রকাশের উপর জিঞ্জেরল-এর প্রভাব

জিনকুই শেনকি বড়িগুলিকে টুকরো টুকরো করে কেটে নিন, সঠিকভাবে নমুনার প্রায় 2.0 গ্রাম ওজন করুন এবং এটি একটি স্টপারড শঙ্কু ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন। 70% মিথানলের 25 এমএল যোগ করুন, মোট ভর ওজন করুন এবং 35 মিনিটের জন্য অতিস্বনক নিষ্কাশন (300 W, 40 kHz) সঞ্চালন করুন। ঘরের তাপমাত্রায় ঠাণ্ডা করার পরে, হারানো ওজন 70% মিথানল দিয়ে পুনরায় পূরণ করুন এবং ভালভাবে ঝাঁকান। পরীক্ষার সমাধান পেতে 0.45 μm মাইক্রোপোরাস ঝিল্লির মাধ্যমে সমাধানটি ফিল্টার করুন।

 

সম্পূর্ণ-তরঙ্গদৈর্ঘ্য স্ক্যানিং (190-400 এনএম) সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্বাচন করার জন্য পরিচালিত হয়েছিল। যদিও মরোনিসাইড এবং লগানিনের সর্বাধিক শোষণ 230-240 এনএম, এই তরঙ্গদৈর্ঘ্য উচ্চ বেসলাইন শব্দে ভুগছে। 254 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্য স্থিতিশীল প্রতিক্রিয়া এবং কম পটভূমি হস্তক্ষেপ নিশ্চিত করে। পেওনল, সিনামিক অ্যাসিড, অ্যাক্টিওসাইড এবং 7-হাইড্রোক্সিকোমারিন সবগুলি 254 এনএম-এ স্থিতিশীল অতিবেগুনী শোষণ উত্পাদন করে। অতএব, মাল্টি-কম্পোনেন্ট সিঙ্ক্রোনাস বিশ্লেষণের জন্য 254 এনএম ইউনিফাইড সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল।

 

সমস্ত প্রাকৃতিক ভেষজ কাঁচামালের মধ্যে,Cistanche tubulosa (মরুভূমিতে বসবাসকারী Cistanche)সঙ্গে ভেষজ হিসাবে দাঁড়িয়েছেসর্বোচ্চ অ্যাক্টিওসাইড সামগ্রীবিশ্বব্যাপী একটি মূল ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড হিসাবে, অ্যাক্টিওসাইড প্রদাহ বিরোধী, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, নিউরোপ্রোটেকশন এবং ইমিউন নিয়ন্ত্রণের জন্য বিখ্যাত। আমাদের কারখানা উচ্চ-বিশুদ্ধতা সিস্টানচে টিউবুলোসা নির্যাস, যা সাধারণ ভেষজ উপকরণগুলির তুলনায় অনেক বেশি মাত্রার অ্যাক্টিওসাইড এবং অন্যান্য সক্রিয় উপাদান ধারণ করে, এটিকে প্রিমিয়াম খাদ্যতালিকাগত পরিপূরক, কার্যকরী খাবার, ভেষজ পানীয় এবং ইউরোপীয় এবং আমেরিকান বাজারের জন্য ত্বকের যত্নের পণ্য তৈরির জন্য একটি আদর্শ কাঁচামাল করে তোলে।

 

 

Acteoside, আমাদের Cistanche tubulosa নির্যাসের স্বাক্ষর উপাদান, ইউরোপীয় এবং আমেরিকান ভোক্তাদের স্বাস্থ্য চাহিদার সাথে মিলে একাধিক মূল সুবিধা প্রদান করে: অ্যান্টি-ইনফ্লেমেশন, ইমিউন এনহান্সমেন্ট, অ্যান্টি-হাইপক্সিয়া, ফ্রি র‌্যাডিক্যাল স্ক্যাভেঞ্জিং, ডিএনএ মেরামত এবং লিভার সুরক্ষা। ইচিনাকোসাইড (অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, নিউরোপ্রোটেকশন, কার্ডিওভাসকুলার সুরক্ষা) এবং পলিস্যাকারাইড (ইমিউন রেগুলেশন) এর সাথে মিলিত, আমাদের নির্যাস উপরে উল্লিখিত প্রিমিয়াম ভেষজ উপাদানগুলির মূলধারার সমস্ত কার্যকারিতাকে একীভূত করে, যার মধ্যে রয়েছেঅ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি, অ্যান্টিব্যাকটেরিয়াল, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, ইমিউন রেগুলেশন এবং কার্ডিওভাসকুলার সুরক্ষা.